Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Структурные эквиваленты инвазии вируса клещевого энцефалита в лимфоидных органах

;9 Г; '.4 3 2« .

V/ '

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

РЫЧКОВ

Александр Александрович

СТРУКТУРНЫЕ ЭКВИВАЛЕНТЫ ИНВАЗИИ ВИРУСА КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА В ЛИМФОИДНЫХ ОРГАНАХ

14.00.15 — патологическая анатомия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ъ,-) Л о А:>

у у/ л ^

ЧЕЛЯБИНСК 191)2

Работа наполнена litt ка^одро патологической анатомии 0ы~ ского государственного модицинского института и в лаборатории иммунологии и патогенеза iuiemenoro энцефалита Омского НИ1 природноочагог;'х ишТокцкй.

Научные руководители:

заслуженный деятель науки РСФ0Р, доктор медицинских наук, профессор A.C. ЗИНОВЬЕВ

доктор медицинских наук, стара, науч. сотрудник Э.А. КВЕТКОВА

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Б.А. ЕШАН . '

доктор медицинских ноу к, профессор ILA. САЫОХИН

Ведущее учреждение: Первый Свнкт-Потербургокий

медицинский институт им. И.П. Павлова

Зощито состоится "3 £ " ¿а 1992 г. в JjO час

на заседании Специализированного совете К.084.0-5.04 при Челябинском государственном медицинском института по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Боровского, 64.

О диссертацией мокко ознакомиться в библиотеке института.

Автореферат разослан " 3 11 Jy_e ¡j ^ 199^ г<

Учений секретарь

Спсциялиз и ро в i' и; ого с о ве то

кандидат мед. ипук Л.М. Синолышкою

:ертаций

ВВЕДЕНИЕ

| ;

| Актуальность проблемы. За более ¡чем 50-летний период изучения клещевого энцефалита (КЭ) па- ! •'коплен большой фактический материал, касающийся эпидемиоло- ! 1Гии, клиники и диагностики этой инфекции. Но, как показйва- \ |ют наблюдения последних лет, заболеваемость КЭ не снижает- ' |ся, что можно объяснить отсутствием этиотропных средств I ¡специфического лечения и профилактики. В настоящее время 'существует необходимость дальнейшего изучения патогенеза болезни о позиций новых методических подходов. Перспектив-,ным в этом плане считается изучение миграции вируса КЭ в ! организме и определение роли вирусной ШК, антигена и эре- ! лых вирионов в повреждении отдельных видов клеток и некле- I точных структур инфицированного организма. Раскрытию меха- | низмов распространения инфекции и повреждения тканей и ор- | ганов способствует прогресс молекулярной вирусологии и на- | метившиеся проникновение методов молекулярной биологии и ' •иммунологии в вирусологию и патоморфологию. В этой связи I ;важным является изучение морфогенеза болезни не уроЕне кле- { ток-мишеней для вирусной инфекции с позиций общепатологи- | ческой оценки характера их повроздения (Угрюмов М.В.,1991). ! Работа морфологов в рамках указанных проблем КЭ ранее каса- | лись различных элементов нервной системы (Авцын А.П.,Ерман I Б.А., 1984, Ерман Б.А., 1984). При этом была определена ди- ! наиика развития изменений в ОНС при острой и хронической формах болезни, обозначены общие закономерности расселения вируса в мозге. !

В последние 10 лет установлена важная роль именных реакций в пато- к морфогенезе КЭ, в частности, повреждающего | действия клеточных реакций иммунитета п начальном периоде | болезни (Кр.рткоаа Э.А., 1979-1989 гг., Погодина В.В. ,1981- | 1989 ). Иммунитет, регистрируемый в дриеь-ине ррзеп'гия ин-фогатонною п;» »несся, ппязкгяют с гшл«р<т»'иг<ш1: ч ипмонгния- ; ми п л;'| 1:!гр|ич!-:':;'1-,х лиЯпрлпну органах, я которых труса-'о-

■ гическилш методами установлено накопление вируса. Однако, : КЛ0ТКИ-Ы1ЧП01Ш для .чируса в лим^оидных органах до послед- ; чего времени не определены. Мало известны и корреляции ре- ; акций со стороны тимуса, селезенки и лимфоузлов на этапах развития острого и хронического КЗ. В литературе отсутствуют такт данные о расселении вируса в различных структурных зонах и клеточных*элементах органов иммуногенеза.

Учитывал ограниченность сведений о патоморфологии лимфо- • адннх органов при КЗ, мы предприняли экспериментальное ис- • следование, в котором на стандартных моделях острого и хро- ! ничзского II!, помимо общепринятых морфологических методов, для выявлении вирусной Н1К в лимфоидных органах и Ц110 использовали метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот ШГНК) ж , предварительно адаптировав его к условиям работы с вирусом КЭ в срезах. Индикация РНК вируса КЭ с помощью этого метода позволяэт с высокой степенью объективно- • сти выявлять клетки с реплицирующимся вирусом, который выявляется методами М£А и электронной микроскопии. Вахчо подчеркнуть, что вирусная НДС регистрируется даже в клетках, где дистрофические изменения еще отсутствуют. Комплексное «оследогание, направленное на выявление в клетках вирусного антигена, зрелых вирионов и вирусной РНК, позволило судить о роли лямфовдных органов в морфогенезе болезни, а также : говорить о возможности прижизненной диагностики нейровирус- ; ных инфекций, теоретически обосновать подходы к иммунокор- ' ротирующей терапии заболевания.

Цель и задачи исследования. Целью работы явилась расшифровка патогенетически значимых изменений в ликвидных органах и их роли в реакции'организ- ■ мо в целом на расселение вируса КЭ.

Для достижения указанной цели основными задачами исследования билу, следующие:

1. Морфологическая оценка изменений и лиыфоидних органах.' при остром к хроническом КЗ.

2. Оп1одслони0 клеток-мишеней для вируса КЭ в центральных и периферических лшфоидных органах и общопатологичес-к.чд расшифровка их изучений.

*

i 3. Выявление корреляционных связей мевду реакциями лш-¡фоидных органов на вирус КЭ и расселением в них вируса при 'остром и хроническом течении КЭ.

I 4. Разработка метода прижизненной морфологической диагностики 'заболевания с помощью МГНК in Situ на основе изучения реакций лимфоидных органов и определение клеток-мишеней . 'для вируса в них.

Основные положения, вин ос и мыв i ,на защиту.

; I. При остром и хроническом КЭ происходит расселение и [репликация вируса, в клетках синусов, Т-зависимых зон лш.;|ъ-идних органов одновременно с развитием в них реакций, отражающих становление иммунного ответа.

! 2. Клетками-мишенямн в лимфоидных органах для вируса КЭ являются свободные и фиксированные макрофаги, Î-лимфоциты, i | 3. Метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот in situ _ является высокосдецифичним маркером патологоанато-мичеокой диагностики вирусных инфекций. Он позволяет при световой микроскопии одновременно выявлять вирусную FHK и оценивать состояние окружающих клеток и тканей.

Научная к о в н з н а . Использование в работе комплекса морфологических методов: световой и электронной ; микроскопии, ЫФА, МГНК in iiÎu , позволил" дать общепатоло- ; гическую оценку изменений структурно-функциональных зон ; лимфоидных органов в связи с расселением и репродукцией в ! них вируса. В работе впервые применен и адаптирочан для мо- . реологического анализа и оценки морфогенеза КЭ ЫПЖ 'm Situ . ! С помощью высокоспецифического метода в лимфоузлах при ос- ' тром и хроническом КЭ определены клетки, в которых происходит репликация вируса КЭ. Гипотетически обоснована точка зрения о нонрездении Т-зависимих зон лимфоидных органон при остром КЭ ч результате цитотоксического действия вируса. Обоснована возможность прижизненной морфологической диагностики КЭ с помощью пос.чедо1<лш1!1 t. aie риала дш^оузлов МГНК

in situ .

II р а к т и ч е с : а я Ц ч и ii о а т ь . Адаптлрыч.н к условиям работы с вирусом Ю ÎJlliK ht s) ÎU , ос'-есночипяю-ir.i.ii iioumomiujt.s »¡«льлсшш ftiK вируса Ю n ojwuax лм^иоша

¡органов и мозга. Этим открываются новые возможности для вы- : 'сокоспецифической и быстрой прижизненной диагностики КЗ. J Установлена закономерность рвепределения вируса в лимфо- ■ видных органах инфицированного организма позволяет ставить ' .вопрос о расширении возможностей диагностики острого' и хро- : ¡нического КЗ за счет разработки перспективных диагностичес- ; ;ких приемов, связанных с пункциями и биопсиями лимфоузлов, ¡последующим использованием методов индикации вируса в клет- I ¡ках.

i 3 и е д р е н и е . Но материалам работы представлены в Министерство здравоохранения Российской Федерации методине- ; |ские рекомендации "Гибридизация нуклеиновых кислот как ме- 1 !тод быстрой диагностики клещевого энцефалита". (Утвервдены , Советом Омского НИШИ - 1990, апрель). '

1 Результаты работы используются в учебном процессё кафед- , ;ры патологической анатомии ОШИ - освещаются в лекционном ;курое, проводятся демонстрации на практических занятиях. ' | Апробация работы. Материала диссертации доложены на регионарных конференциях Омского НИИПИ в 1987, 1988, I9b9 гг., республиканских конференциях по природной ^очаговости болезнен человека в г. Свердловске в 1988, 1990 гг., Всесоюзном симпозиуме "Современные проблемы эпвдемио- | логии, диагностики и профилактики клещевого энцефалита" в : г. Иркутске в 1990 г., I межрегиональной конференции пато- ; логоанатоков "Актуальные вопросы патологической анатомии .заболеваний населения Урала и Западной Сибири" в г. Тюмени в 1991 г., заседаниях Омского отделения Всесоюзного общее- j тва патологоанатомов в 1987, 1988, 1989 гг. и секции виру- ^ ;сологки Омского отделения Всесоюзного общества шкробиоло- 1 гов, эпидемиологов и вирусологов в 1989 г. ' ;

! Публикации. Материалы диссертации опубликоваг I ны в 12 печатных работах.

; Объем 'и структура работы. Работа-1 изложена на 189 страницах машинописного текста и состоит из I введения, обзора литературы, 4 глав собственных исследований, заключения и выводов. Иллюстрации составляют 20 таблиц 67 рисунков и фотографии. Указатель литературы включает 229 источников - 130 отечественных и 99 зарубежных авторов.

! МАТЕРШ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

| Острую инфекцию моделировали на беспородных белы/ мышах ¡массой 9-10,0 приблизительно одного возраста. Нивотныв по-;род поступлением в эксперимент проходили соответствующие !контроли. Идя моделирования хронической инфекции использо-1 вали половозрелых золотистых хомячков массой 130-150,0 . , ! Для шфщировапия животных бил использован штамм вируса ^ ¡КЗ "Софыш", идентичный эталону. Вирус животным вводился в ; культуральной форме. Был избран подкожнай путь заражения, ;как наиболее полно обеспечивающий естественные условия раз- ; :вития инфекционного процесса. Доза введенного вируса в обе- ; 'их сериях составляла 1000 1Д/50. У мышей эта доза вызывает : острую форму КЭ с летальным исходом в финале на 10-12 сутки | ; течения инфекции.

С х е ¡л а опытов. При моделировании острого КЭ ;наблюдение за животными проводилось с 1-х по 12-е сутки ; опыта. Ежедневно для исследования брали по 10 мышей, испо-, льзуя принцип случайного отбора животных. Общее число мышей; : которое было использовано в опытах, составляет 140 особей. < I Хроническая инфекция моделировалась на золотистых хомя- | : чках. Наблюдение за животными проводили ежедневно. Для ис- , следования производили забор органов животных на 2-е, 4-е, ! 6-э, 8-е, 10-е, 21-е сутки с момента заражения в остром пе-| 'риоде болезни и на 30-е, 60-е, 90-е сутки в периоде хрони- ! .ческого течения. I

1 Секционные наблюдения. Были изуче- | ны в течение эпидсезонов 1985-198Э гг. 8 секционных случа- ; ев острого клещевого энцефалита. Больные курировались в ра-: | зличных лечебных учреждениях г. Омска и Омской области. В ;части наблюдений вскрытия проводились в ранние сроки ( в : ' пределах 30 мин - 2 ч 20 мин с момента смерти ), что поз-'полило применить широкий спектр морфологических методов ис-! следования, включая электронную микроскопию, МГЙК »и ЧлЫ, имму н огистох имгао.

В и р у с о л о г ¡г ч о с 1С н е и и м м у н о л о -г и ч а ч к п <"■' и о с л е д о в н н н я . Опроднлял.

о

1 титр вируса в мозге il крови с расчетом средних показателей > швдсеглии. Состояние клеточного иммунитета у животных в эк- , 'сдерименте и у больных оценивалось методом торможения миг- ' радии лимфоцитов в геле с расчетом показателя торможения ; -миграции сплсноцигов (Г1Ш). Гуморальный иммунный ответ оце- ■ ;пивали но основании постановки РИГА. ! II ато морф, о" логические методы. Для световой микроскопии материал (лимфатические узлы раз- ; ¡личной локализации, кусочки мозга, селезенки к тимуса) фик--, ¡сировали в IO/u-ном нейтральном буферном по Лилли формалине. •Парафиновые, целлоидиновые и криостатные срезы окрашивали в зависимости от целей исследования гематоксилин-эозином, ;азур-П-эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону. Ставилась ШИК- , ¡реакция, срозы лимфатических" узлов, селезенки и тимуса ок-'рэшпвали пиронином и метиловым зеленым по Браше. Срёзы го- i ;ловвого и спинного мозга, окраиивали по Нисслю, импрегниро- | вали по Бильшовскому -Гроссу, по ¡Лийагава-Александровской. • ¡Миелин выявлялся методом СпильмвЗеро.

Электронная микроскопия применялась с цельи поиска виру- : енцх частиц в цктошшзмо отдельных клоток определенных зон головного и спинного мозга. Для электронной микроскопия ку-' сочки-мозга величиной 1x1 км из кори головного мозга, под- j корковых ядер, мозжечка, шейных сегментов спинного мозга | фиксировали в 4,1-ном параформе и заливали в эпон. По опало- , гичиой методике материал забирался для' электронной микроскопии в секционных наблюдениях. Ультратонкие срази проема- . тривали с помощью электронного микроскопа ЭМ-ЮОС'с увели- ' ченшгми в 15000, 30000, SOOuO. I

. И м к у н о г и с т о х и м и я . Для индикации вирусно- : го антигена п глеткях и структурах головного и спинного мозга, лимфатических узлов, селезенки и тимуса применялся прямой метод иммунолишнесценции. Наслоение сыворотки производилось на криостатнио срезы, инкубированные и просмотр иронят-атов ироиги-одплнсь по стандартной методике.

!.i о т о д г к б р и д и з о ц и и н j к л е и и о -г. « х к и с л о т in situ применялся с целью индикации вирусной Km и кл'-ткпх головного и спинного мозга и лиыфо-IUIHUX омт.н'Ф, Lij't'-uKve гозмокности катила позволили и?!з:.с-

| нить его для решения основной задачи исследования - выявле-

j ния клеток-мишеней для вируса КЗ в лимфоидных органах. .

| Морфометрические и статисти - ■

j ч в о к и е методы применялись для объективизации ;

! результатов исследования лимфоидных органов в связи с их j

j г опальной структурой, а также для оценки состояния основ- ! ! ных нейроэктодермальных и сосудистых элементов в мозге .Для

j гистопланиметрии применялась точечная окулярная сетка Ав- | I тандилова Г.Г. (1973), Полученные результаты обрабатывали

| методами вариационной статистики. !

: РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОЕСУЦЩНИЕ '

i В соответствии с поставленными задачами для оценки пе- ; ! риодоз болезни мы предприняли исследование мозга с всполь- ; ' зовением комплекса информативных методов. При этом в тече-| нии острого КЗ было условно выделено 3 периода: латентный, . клинической манифестации и терминальный. Какдый из перио- ■ дов ы,юл соответствующие качественные маркеры. Исследование мозга золотистых хомячков позволило такле подразделить , все точение инфекции на три периода: латентный, острый и 1 ! собственно хронический. ;

; I. Динамика морфологических изменений и расселения j ! вируса КЗ в лимфоидных органах

Лимфоузлы. Установлено, что уже на 2-е сутки ; развития острого инфекционного процесса у животных в кор- ■ ' тикальной зоне лимфатических узлов светлые центры фоллику- | ; лов практически отсутствуют, определяются участки лизиса и j

рексиса ядер малых лимфоцитов. Паракортикальная зона, на' против, увеличивалась в размерах. Здесь обнаружквались оча-' , говые скопления крупных меток с гиперхрпмными яд[)ами и ■ ииронинофилышй цитоплазмой. Вирусный антиген в клетках лимфоузлов в этот период выявлен не был. Вигусная РНК бы> ла зарегистрирована МГНК in iilu в ¡ишаках краевого сину- , са в виде единичных меток нш( питоилазмоН.

К 3-м суткам из кортик; лыюи зоны лиы^атиче ¡кого узла исчезали фолликулярные структуры. В иКЗ нередко возникали аокрозц. Вокруг зон не1:розоп скяплшялись н-ифофагглыша

iэлемент» и бласттрансформирозанные лимфоциты. Посткапилляр-!ные венулы были расширены, окружены большим числом бласт-, трансформированных лимфоцитов. Гомогенные стенки венул были iкак правило, инфильтрированы метками лимфоидного типа. Не- i кротические очаги локализовались у истоков посткапиллярных !венул. Наряду с некротическим процессом в паракортикальной ; зоне нарастало число бластных клеток, что обусловливало увеличение объемной плотности пвракортикальной зоны. ' ! Краевые синусы на 3-4-е сутки после заражения били расширены, береговые синусы выглядели значительно отечными, i Исследование лимфатических узлов методом ишлунолюминес-,ценцки позволило в указанный срок выявить специфическое свечение вирусного антигена в клетках синусов в диффузной и частично дискретной $ормв. А единичные клетки паракорти- ' ' калъной зоны давали слабое и средней интенсивности свечение. На замороженных сре.зах лимфатических узлов, обработан- ' :ных Ш1К i п iit« , радиометки вирусной IHK чаще выявлялись над цитоплазмой макрофагов краевых и увке медуллярных сину- . сов, а также над цитоплазмой клеток, окружающих посткапил-ллрлце венулы в ПКЗ. Единичные матки попадались и над цито-• плазмой крупных клоток какрофагальной природы в различных участках паракортикальной зоны.

Таким образом, в начал; ном периоде инфекции до начала клинических проявлений в лимфатических узлах происходила структурная перестройка, соответствующая становлению кммун-' ного ответа клеточного типа. Параллельно с этил в лимфоузлах происходило размножение вируса КЭ.

К 5-6-м суткам развития инфекционного процесса (начало клинических проявлений КЭ) в лимфатических узлах происходила смена реакции клеточного типа на гуморальный. Краевые синусы постепенно расширялись. Однако, клеточность их при этом падала. К 7--8-м суткам радиометки были единичными над .цитоплазмой макрофагов, лежащих в краевых синусах. Встречались гигантские форма с уродливыми ядрами и пиронинофиль-ной цитоплазмой. Методом кммунолюминесценшш в краевых ,ин-термедилрних и медуллярных синусах выявлялось слабое и непостоянное свечение вирусного антигена.

Кортикальные зоны лимфоузлов с Ь~х по 8-е сутки были

| инфильтрированы большим числом макроф.агов, причем у части ! этих клеток ядра выглядели уродливыми, а цитоплазма - рез-| ко оксифильной. Светлые центры, по-прежнему, не выявлялись. ( Несколько иной была динамика изменений ПКЗ. Здесь выяв- ' ; лялись некрозы, а при визуальной опенке отмечалось значите-; | льное расширение за счет бласттрансформированных клеток. ! • Над цитоплазмой бластннх форм мы обнаруживали грубые радио- | [ метки в виде гранул. К 7-8-м суткам клеточность ПКЗ начала | резко снижаться. По периферии посткапиллярных венул клетки , ,; практически отсутствовали, то есть началось постепенное ; ( "обтаивание" фолликулов, что в общем соответствовало сниже-! ; нию напряженности клеточного шлмунитета. Параллельно с ин- 1 ; волюцией ПКЗ началось увеличение числа пиронинофильннх кле-, : ток в медуллярных тяжах. ;

' В финале инфекции на 9-12-е сутки мы наблюдали постепен-: ; ное истощение лимфатического узла. Зто выражалось в расти- !

рении всех синусов, в них встречались лишь единичные клет-; ки. Специфическое свечение вирусного антигена и радиометки ; : вирусной ШК не выявлялись. В ПКЗ происходило постепенное j снижение клеточностн, в отдельных участках оголялась рети- I : куля риал строма. Посткапиллярные венулы в истоках выгляде- '> ли расширенными и лежали свободно, в отдельных из них на- ; бл'Адались стазы. Участки некрозов определялись лишь в еди- 1 ничных лимфоузлах,регионарных по отношению к месту введения! вируса. ,

Таким образом, при остром КЭ в лимфоузлах животных в ин—| кубационним периоде происходило формирование клеточного им—) муштго ответа, а в периоде развернутого клинического тече-' ния, на фоне некротической реакши нарастал иммунодефицит. 1 : Вирусная РНК выявлялась в свободных и фиксированных макро- ; : фагах и клетках Т-эавиоимих зон параллельно с нарастанием ' . титров вируса.

1 У всех мивотных о хроническим КЗ, исследованных в ^ик- | ' сиронанные сроки (2-, 4-, 6-, У-, 10-е сутки), в лимфати- ; ческих узлах отмечалась выраженная реакция на антигенный стимул. Причем, различия в лимфатических узлах,регионарных • и отд;икпних к месту ¡дарения вируса, по характеру реакции , выннпию нч было.

В щеевых синусах разной локализации отмечалось набуха- ! !нке береговых клеток, перинолезис. В синусах скапливались в ; ;большом количестве свободные и фиксированные макрофаги с | ¡¡КИК-нозитивяоЯ цитоплазмой. -На б-8-о сутки в лимфоузлах бы- ; ;ли впервые выявлены раднометки вирусной НЖ на уровне (++). ; :Они располагались над цитоплазмой макрофагов синусов. |

! В дальнейшем (10-е сутки) после выявления вируса в' кор- > шкальном слое лимфатических узлов отмечено расширение све- I !тлых центров лтфоидных фолликулов при высокой активности • .клеток. По периферии светлых центров был виден небольшой ; ■ободок из гиперхромных лимфоцитов. В паракортмкальной зоне ! отмечена бластная трансформация лимфоцитов. Посткапиллярныо ; '; вену ли были паретически расширены. Стенки их инфильтрирова- ! 'лиоь лимфоцитами. Исследование срезов лимфатических узлов ' | МГНК>Л5|/н было обусловлено тем, что в бласттрансформиро- : :ванных клетках по периферии венул выявляется вирусная ГИК . | ,на уровне (++}, при этом в структурах лимфатического узла отсутствуют зоны деструкции клеток. В медуллярных тяжах 'выявлялись лишь единичные плазматические клэтки.

К 21-м суткам течения инфекции при небольших клиничес- ! ¡них проявлениях болезни в лимфатических узлах различных зон ; ¡мы обнаружили изменения, количественно отличающиеся от опи- | санных у животных первых 10 суток наблюдения. Оставался ак- ! тивным периполезис, однако, кле'точность синусов оказалась > значительно сниженной. В них, по-прежнему, регистрировались | радкометки вирусной ГНК на уровне (+ или ++). Светлые цент- : ,ги в динамике с 10-х по 21-о сутки практически не увеличи- | .' вались. ;

1 В ПКЗ лимфатических узлов обращало внимание уменьшение ' клеточностк. Етасттрансформированныа элементы рогиотриро-вались по периферии посткапиллярных венул. Радиометкн вирусной РНК были видны над цитоплазмой бласхных клеток и ма-.крофагов, а таю&е по периферии посткапилляриых веиул. В ме-, дуллирной зоне появлялись большие скопления плазматических ; клеток с ияронинофильной цитоплазмой.

У кпвитних, исследование на 31-е сутки опчта, в лимфатических у?лпх отмечено значительное уу-еньвенко клеточнос-ти краевых сн!;усон. С сикртпценпсм числа свободных пекрофа-

!гов периполезкс стал умеренным," "а береговые клетки "синусов :были, по-прежнему, отечны и гиперхромны. ; При исследовании срезов ликфоузлов методом МГНК)Л 311 и !радиометкн вирусной РНК выявлялись над цитоплазмой макрсфа-¡гальных элементов и были единичными (+). В коре лимфатических узлов в этом сроке обращало на себя внимание заметное 'уменьшение светлых центров. Митотическая активность клеток ! 'в светлых центрах била значительно снижена по сравнению с начальными сроками. Вирусная ШК выявлена не была. ■ Происходила и дальнейшая инволюция ПКЗ. Посткапиллярные венулы били резко расширены, стенки их линь изредка инфильтрированы лимфоцитами. Скопления лимфобластов наблюдались только вокруг отдельных венул. В остальных участках ПКЗ наблюдалось оголение ретикулярной стромы, прикрытой единичными лимфоцитам. Радиометки вирусной ШК были единичны и определялись над цитоплазмой бластных ¡слеток в инфильтратах | по периферии венул. В мякотних тяжах в этот срок наблвда- 1 лось значительное накопление плазматических клеток.

Эксперимент по моделированию хронического КЭ был завершен на 91-е сутки с момента заражения животных. Картина-из- | менений в лимфатических узлах в этом сроке мало отличалась I по характеру от. описанной в предшедствующие сроки хроничес- } кого периода. Лишь у одного животного рядом с посткапилляр- | но]'! веиулой мы регистрировали единичную метку вирусной РНК. , В то же время в ПКЗ лимфоузлов у отдельных животных мы выявляли метки вирусной ШК, что свидетельствовало о скрытом хроническом течении инфекционного процесса.

Таким образом, в начальном периоде инфекции (в первые ! ■10 дней) происходит активное заселение лимфоузлов вирусом I КЭ. Вирусная РНК обнаруживалась во всех зонах лимфоузла, а ; начиная с 21-х суток, идет процесс инволюции Т- и В-зависи- • иих зон, параллельно со снижением напряженности иммунного ответа. Вирусная ШК при этом выявлялась только в ПКЗ и ос- ; тавплась там у отдельных животных до конца эксперимента. | Это позволяет утверждать, что зоной наиболее постоянной фи-[ ксашш вируса являются клетки Т-зависимой зоны. Этот факт, вероятно, и определяет раннюю быструю реакцию к атомного ишугнпею при Ю в целом. Наличие зм вирусной НЖ у инфи-

!цированпых золотистых хомячков только в Т-зависимоЙ зоне и > 'макрофагах, видимо, следует признать характерным именно для ; .иронического КЗ, ■

Селезенка .Б инкубационном периоде с 1-х по 4-е : сутки опыта в спезенке белых мышей быстро нарастает бласт-i ная трансформация лимфоцитов, составляющих периартериоляр-ные футляры. ' ,

! В период от 3-х до 4-х суток у большинства животных по- , , явились некротические очах'и преимущественно в Т-зависимых -! зонах селезенки. Поля некрозов были окружены бласттрансфор- I | мированными клетками и единичными макрофагами. В В-зависи- ' мых зонах светлые центры лимфоидных фолликулов не определялись, а по периферии лимфоидных образований отмечались об- j ~ ■ ширные скопления миелоидной ткани с гигантскими клетками ' ) типа мегакариобластов. Исследование методом флуоресцирующих ! антител позволило в указанный, срок выявить непостоянное, слабое свечение в зонах лимфоидных скоплений и в миалоидной ткани. На замороженных срезах, обработанных МГНКin S if tf,бы-, ли видны матки вирусной РНК не только в лимфоидных образо- I , ваниях органа, но и над цитоплазмой клеток миелоидкого ти- j

па. i

; i I Таким образом, в инкубационном периоде инфекции селезен-j

! ка также подвергается иммунной перестройке клеточного типа.:

Некрозы л Т-зевисимой зоне имеют, по-видимому, ту же приро-,

ду, что и в лимфатических узлах. !

С появлением первых клинических симптомов болезни (5-6-е!

. сутки) селезенка у всех забитых животных выглядит резко ; < i

увеличенной. В ней появляются некротические и некробиотиче-', ; ские изменения, приуроченные, в основном, к перлартериоляр-! ным футлярам. Однако, б некоторых участках некрозы захватывают и зону лимфоидных фолликулов. Периартериодярниз лнмфо-' шише футляры выглядят резко увеличенными ва счет блветтра-. нсформааии составляющих их клеток. Миеловднэя ткань нодвер-' гяется повсеместно пролиферации, видна многочисленные митозы, число мегакгриоблостов возрастает в пол» зрения. Встречается больное число активных макрофагов, которые верифицируются по Нерлс-лозитпчюй цитоплазме. В зоне скоплении миелоидной и лпмфоиднпй ткани и'лгются небольшие учютги сво-

! чения вирусного антигена на уровне (+). На криостатных сре-! зах, обработанных MfliK in situ с докраской азур-П-эозином, . I отчетливо выявляются единичные радиометки вирусной РНК над I цитоплазмой лимфоидных клеток. Грубые метки гранулярного i i типа были видны и над макросагальными элементами и гигант-I сккми клетками. Имгдунолюминеоцентное исследование селезенки ; ! выявило лишь единичные скопления вирусного антигена на уровне (+). На криостатных срезах, обработанных МПЖ in Situ мы j ; находили единичные радиометки вирусной РНК над цитоплазмой j (Многочисленных макрофагельных элементов, иногда появлялись j j и грубогрэнулярные метки. j

! Таким образом, в финале инфекции (8-12-е сутки) из селе-( '! зенки постепенно исчезает вирусный антиген и активной ре- ; I пликации в ней уже не происходит. Это согласуется со сниже-j

t s

: нием уровня вирусемии в этом периоде. Параллельно происхо- ! ¡дит истощение лиыф'ошшых элементов в структурах селезенки. !

Оценивая динамику морфологических изменений в селезенке ! ;при остром КЭ в целом, можно отметить, что в ней происходит; '.репликация вируса еще в начальных периодах процесса. Но ва-; : жно подчеркнуть, что репликация его идет активно весь пери-1 ! од накопления титров вирусемии. В дальнейшем этот процесс •' I приостанавливается. Как и в лимфоузлах, в селезенке разви-' ;

I

• Баются реакции, связанные со становлением специфического .клеточного иммунитета. !

В эксперименте по моделированию хронического КЭ со 2-х |по 10-е сутки после заражения животных в селезенке стабилизируются значительные структурные изменения. Это выраженная' ' бластпая трансформация лимфоцитов периартериолярных лгалфо- i ;идгшх футляров, объемная плотность которых особенно возрастала к 10-м суткам. В В-завлсимых зснах определялось расши-'рвпие светлых центров, хохорне достигали максимальной объ- : ¡емной плотности к 8-10-м суткам течения инфекция. В красной, пульт наблюдалось резкое погашение активности макрофагаль-.' Пых элпмпнтов, причем при реакции Перлса число этих макро- ' фягов в первые 10 дней достоверно аозрооло. Определение вирусной ШК в органе позволило установить наличке ее со 2-3-х суток в лимфоцитах Т--зависимой зонч и макрофагах кра-очо'И ¡¡ул-.пч. Нп нреп-зрлтях, обработанных методом Кунсп, ми

i наблюдали слабое свечение вирусного антигена (+) в зонах j

лимфоидных скоплений и макрофагах. Электронная микроскопия |

макрофагов позв^чила установить их дистрофические и некро- ;

биотические из1. ения, хотя зрелые вирионы в этих метках • j не выяг иялись.

Таким образом, в начальном периоде инфекции мы наблвда- j

; ли перестройку селезенки, соответствующую клеточному и за- j

! тем гуморальному иммунному ответу. Отмечено отсутствие не- I | крозов в органе у большинства животных. Однако, дистрофи-j чеокиа и некробиотическиа изменения в клетках селезенки бы-j

I ли четко выражены, что, вероятно, является отражением .реп- ! i ликации вируса в них. Ul'IIK ¡я S//u подтверждает факт наличия;

вирусной ШК в клетках с четкой локализацией его в органе. !

I

На 21-е сутки .точения инфекции все показатели объемной j j плотности структурно-ф.ункциональных зон и макрофагальной ! j активности селезенки достигали максимальных цифр. Селезен- j I ка у всех 1-5 забитых животных выглядела резко увеличенной. : S Периартериолярние лкмфощщые футляры были увеличенными и j | светлыми за счет бластной трансформации лимфоцитов. Б В-за-; , висимых зонах лиыфоццяые фолликулы достигали максимальных | j размеров и были окружены небольшим воротничком из пшерхро-1 j мных лимфоидных клеток. В красной пульпе четко определялась' ! инфильтрация макрофагалышми элементами. В препаратах, об- ! , рабэтанаих MIHK in Situ , мы находили радиометки вирусной ; j ГНК в зонах периартериолярной лимфоидной ткани над цито- ! j плазмой оластных клеток, вблизи сосудов, над цитоплазмой j j крупных макроф-агальних зло ментов. Метки гранулярного типа ( j регистрировались над цитоплазмой макрофагов красной пульпы.) I Слабое свечение вирусного антигена отмечалось только в зо- 1 ! нах лимфоидных скоплений. :

| В дальнейшем, в сроки от ЗО-х ,цо УО-х суток после заро- j | жени«'животных, то есть 1з периоде собственно хронического j j течения инфекции мы наблюдали динамику инволюции Т- и В- j ■ зависимых зон органа. Начиная о ЭО-х суток опыта, резко j ! уменьшалась объемная плотность 'Г-зависимой wmj органа, и ' это связано о i<m, ч-iо к 30-40-м суткам шпК-кции ;

у бг.Л1 СНШСТРЧ №'r H:lfW4 «нигютки ппцряжачцооть К )1;>Т ОЧНОГО Ш УШПЙТП R НИ'-СИЫ-Ч1 lOrcilOfVIIIPn ':Т!-;Г17Р Opivili'i, .!J(.|-

I занная с элиминацией вирусного антигена. Радиометки ви^уо-! ной РНК в этом сроке определялись над цитоплазмой меток в Т-зависимой зоне, однако, число этих меток значительно сократилось. В.В-зависимнх зонах были видни только единичные ; ¡метки, а на 61-91-е сутки они не выявлялись совсем.'Важно : подчеркнуть, что к 90-м суткам опыта метки были единичные и' над лимфоидными скоплениями селезенки. Значительно сократи-[ \ лось в этот срок и число меток вирусной РНК над цитоплазмой; | макрофагов красней пулыш,' а на 90-е сутки метки оыли еди- | ! ничнами в препаратах у отдельных яизотных. Специфического | | свечения вирусного антигена мы но наблкщали, |

; Таким образом, в хроническом периоде КЗ происходила эли-. ! минация вируса из лимфопдной ткани селезенки, я активной ! 1 репродукции вируса в органе не наблюдалось. Оценивая дина- | ' мику морфологических изменений в селезенке при хроническом | ¡КЗ, необходимо презде всего указать на значительное отличие) ' ее от таковой у белой мыши. Это, прежде всего, доминирующее! ; развитие в ходе инфекции В-системы иммунного ответа, чтэ : : позволяет считать иммунный ответ на вирус КЭ у золотистого . • хомячка смешенным. •

Т и му с . Инициальные изменения в тимусэ животных(при | ! остром КЗ были выявлены уже через сутки с момента, заражения.; ; В наружном слое коркового вещества сосуды были паретически ' расширены. По периферии сосудистых стенок были видны много' численные гинерхромные -лимфоциты с узким ободком цитоплаз-! мы. Корковое вещество в целом было несколько расширено, ин-: 1 фильтрировано лимфоидними элементами, причем во внутреннем ; ' слое коры были видны не только мелкио гиперхромные лимфоиц-] ! ного типа клетки, но и йласттронсф-ормировакныа элементы,му-| крофаги. В медуллярном вещество тимуса отмечалось побольнее; , накопление лимфоидных элементов. Исследование срезов тимуса, ЖАК ¡п уу.е на 2-е сутки течения инфекции позволило гы-; яви-ь единичные мзтки по периферии сосудов нарукяого слоя ] коры. Ывтспсп ин'туио^луогеспсивря в этих :тя зонах отмача- | лись небол'.пне участки специфического свечения, которые на-: редко били приурочены к зонпм пОврездения клеток. С момента мшг'фютацип болезни в норуг.пем слое коры 'П'пугч ргт!г.7толх.чо сч.тиоттс* содпрж'ниа л^дЬяттов', почп-

| ллются стазы, диаподез эритроцитов. Внутренний слой кори ! I тимуса при постепенном уменьшении числа лимфоцитов заселя- ! ется макрофагами. Граница коркового и мозгового вещества > постепенно стиралась. В мозговом слое тимуса наметилась ин-1 фильтрация лимфоцдныыи элементами. Тимоциты выглядели дис- | | трофичными, тельца Гассалл резко увеличивались в размерах ; ! с нарушением формы и появлением мелких кист. Во многих кле-' | тках наружного слоя кори были видны метки вирусной РНК. В | | период с 6-х до 7-х суток метки группировались над цито-

I *

: плазмой клеток, располагающихся по периферии сосудов. В ; 1 этом ке сроке прослеживалось слабое свечение вирусного ан- } | тигена (+ и +) в наружном слое коры. ;

! Таким образом, в период становления клиники КЗ на пике | | вирусемии в типу се содеется значительное количество виру-; 1 са. При этом, важно подчеркнуть, что вирус содержится в зо-! нах, граничащих с сосудистым руслом, что указывает на воз; можную связь накопления его в органе с рециркуляцией Т-лим-; фоцитов.

В терминальном периоде острий формы КЭ (с 5-х по 12-е , сутки после заражения) титры вируса в крови животных про, грессиьно падали, а напряженность клеточного иммунитета : пришла к полному нивелированию. В этом периоде в тимусе . ! продолжался процесс регрессивных изменений. В корковом слои' продолжалось снижение числа лимфоцитов, в наружном слое ко—' I ры они лежали лишь небольшими группами. Сосуды наружного : ; слоя кори были значительно расширены, четко выступала ого-- | 1 ленная строма. Из мозгового вещества также исчезали лкмфо-- '' , вдные элементы.

: В отдельных дольках в мозговом веществе на ГО-П-е сут-; ки инфекции ми наблюдали небольшие очаговые некрозы. Тими-; ческие тельца при этом чощэ и в большом количестве встреча™ | лись вблизи границы коры и мозгового вещества. Дегенератии-' них ф.оцл даже при обзорном исследовании стало ишчи'гезшно ' больше. Отмечалось снижение числа моток нгц цитоплазмой '■ лимфоидных и макроф. тлышх элементов, которые чаще нотре -| челись вокруг сосудов коры, а в единичных случаях и в мозговом слое, Гпеиифичеокор онемение -?ч< •!. п ^нинкчигк ¡оюткях кори и миаг1'(!01'0 шестик

{ Таким образом, исследование тимуса у белых мытей,.инфицированных вирусом КЗ, позволило констатировать, что а летент-, 'ном периоде инфекции в органе возникали изменения, отражающие активацию его фушашонального состояния. С появлением 'клинических признаков инфекции четко проявляется акцидента-¡льная трансформация тимуса П-Ш степени. Вирус расселяется в 'наружном слое коры по периферии сосудов в лимфоидных и мак-,рофагальных элементах, а затем проникает и з мозговой слой. I В первые 10 суток хронической инфекции отмечалось увеличение числа лимф.оидных клеток п коре и мозговом слое. Б мо- . 'зговом слое в этот период открывались многочисленные сосуды. ,В цитоплазма эпителиальных клеток выявлялась отчетливая пи-ронинофплия. Количество тимических телец земетно нарастало, I отдельные из них увеличивались в объеме и имели неправильную форму. Единичные радиометки вирусной НЖ обнаруживались над ¡цитоплазмой лимфоидных клеток, лежащих в проекции сосудистых стенок. Исследование всего массива материала показало, что единичные метки появились в тимусе, начиная с 4-х суток течения инфекции, лишь на 10-е сутки у единичных животных мы определяли но 2-3 метки к только в отдельных дольках органа . /

В последующие сроки (с 10-х по 21-е сутки опыта) в ткну- ; се происходили дальнейшие изменения, связанные с его перес- ! тройкой на этапах становления имлунного ответа. В коре уси- | ливалось митотическая активность, увеличивалась плотность 'лимф.оидных меток, а сами лимфоциты лежали достаточно ком- : пактно. С 21-х суток опыта в корковом слое постепенно снижалась плотность клеток, а в мозговом слое происходило увеличение числа ТЕмичеоких телец, пр;г?ем плотность их возрастала ближе к границе кори и мозгового вещества. В строке . органа определялись скопления лш.'.фощшнх клеток. Радиометки вирусной РНК выявлялись в корковом слое з небольшом количестве, причем в гранулярной строме. К 21-м суткам число ме- , ток здесь значительно уменьшалось.

Таким образом, в перяод с 10-х по 21-е сутки течения га-' фргдчн, клеточный и?.ыунный отхят"у животных, инфицированных вирусом В, достигал пика. Этому соответствовало максимально«» пгцл^.тпкпе ьирусной НЖ в клетках органа.

j В периоде с 30-х по SO-е сутки происходило нивелирование ¡клеточного иммунитета, который полностью терял напряженность, ¡к исходу 45-х суток. Именно в этот срок отмечались и более j 'значительные изменения в тимусе. Начиная с ЗО-х суток, доль-; |ки органа теряли свою клеточьость. Число лимфоцитов в коре |и мозговом веществе снижалось. В мозговом слое отмечались Дистрофические изменения тимоцитов, которые выглядели нес- , ¡колько увеличенными и имели неправильную форму. С 60-х су- ; |ток происходила репаративная регенерация долек тимуса. В ко-! !рковом слое органа постепенно увеличивалось количество лим- > ¡фоцитов, хотя дольки оставались менее клеточными, чем,в контроле; в меадольковоп соединительной ткани появлялись киро- ; ;вые клетки, а в мозговом слое отмечалась умеренная пролифе- : ;'рацпя рзтикуло-элигелиошлшх элементов. Тимические тельца ¡были правильной и неправильной овальной формы. На срезах органа радиометки вирусной Н1К были единичными нйд цитоплазмой 'лимфоцитов в корковом веществе. Важно подчеркнуть, что они встречалась в единичных дольках, а у части животных вовсе отсутствовали.

i Таким образом, в тимусо животных происходил процесс ак- : ;тианой репликации вируса, который сопровождался, с одной 'стороны, нитопстическш эффектом, а с другой - развитием ¡иммунного ответа.

i Подводя итог исследованиям лимфоидных органов при остром и хроническом КЗ, следует констатировать, что, начиная с :ранних сроков латентного периода, в лимфоузлах инфицированных животных накапливается вирус КЗ. Причем накопление его 'происходит избирательно в клетках, имеющих макрофагальную функцию, и лимфоцитах Т-зависимых зон. Параллельно с накоплением вируса наступает u некротическая реакция. Размножение вируса во всех л№(}ои,шшх органах сопровождается становлением ишу иного отвзта по неточному типу с последующим разви-¡'•гием гуморального, на фоне иммунодефицита. Применение ЫГНК" in situ позволяет считать свободные и фиксированные макрофа-Х'И и Т~лимфопиты, над которыми гияплялксь рядномоткк, клет-кгми-милеклми для вируса КЗ.

2. Патомэрфология и локализация вируса в лимфоиднйх органах лиц, умерших от клещевого энцефалита

I Исследование ликфоидних органов у лиц, умерших от КЗ, ми . ;проводили согласно принятому в работе алгоритму. У всех О |больных в латентном периоде после укуса клеща наблюдалась : ;лимфодонопатия (увеличение лимфоузлов в 2-3 зонах). Этот 'феномен мч сочли водным й потому особое внимание по секционному материалу уделили исследованию лимфоузлов. ; J У всех умерших в первые 2-7 суток болезни л и м ф о у з -' |л ы были повсеместно увеличены. В краевых синусах их наблв-,¡далось скопление свободных и фиксирован>шх макрофагов, лим- ' ¡фоцитов, над цитоплазмой которых выявлялись' радиометки ви- j jpycHoii ГНК, причегл в большом количестве. Светлые центры бы-j :ли неширокими. В ПКЗ посткапиллярные венулч были расширены, ' :лимфоциты вокруг них бласттрннсф-ормированы, однако, в отде-.льных лг.мроузлэх наблвдолись участки оголения ретикулярной стромц. Особенно подчеркнуто истощение ПКЗ было у лиц,умер- ■ . ших после 7-х сут_чк болезни. Однако, у всех больных над ци- , топлазмои блястных меток ПКЗ наблюдались радиометки вирусной HIK. В мякотних тяхизх встречались группы пиронинофилъ-,ных плазматических клеток. • ■ • Тактам образом, в лимфоузлах умерших от ID в сроки от 2 ; ;до 30 суток течения болезни определялась вирусная ГИК, локл--| .лизованнал в клетках свободных и фиксированных макрофагов и :Т-лимфо1штах на фоне развивающегося у этих больных истощения .Т-зазисимой зоны лшфовдных органов, что, вероятно, являет-' ся структурным эквирэлентом иммунодефицита.

Селезенка. Средняя масса селезенки у всех 8 умерших составила 325+25,0 , что несколько выше, чем средние возрастите показатели. В периарториоляряой лимфошшоЗ ткечи определялись многочисленные блчетн в виде групп, встречались и зоны рпзретсния клеток. Ляь^эидрне фолликулы

БУГЛЯЛЧЛЧ ОКру ГЛ1."»П, С^ЧТЛКО ПОНТрЧ ИХ бЫЛН рЕСШМрСНЫ. Вирусная ГНК появлялась в блрцтннх клетках Т-завксимой зопч, а о-шлин«:-» ряЕРР-тетУП регистрировались и нат ютоплязг.оЯ г,"ч?(.}!.,г<' пуляш. Вирусиий антиген выявлялся р з>>-

ч-.v.;?v;r,?iH клеток « виде елннп^нчх тонете ч ,

|красной пульпе (++1. .....;

■ Приведенные данные позволяют утверждать, что при КЗ воз- • цшкаьт изменения органа, соответствующие фазе шмунодефици- : : та разгара болезни, причем клетками-мишенями для вируса КЗ | являются,-как и у экспериментальных животных, макрофагалъ-ные элементы красной пульпы и клетки периартериолярного лимфоидного Футляра.

I Т к ы у с . Изменения, связанные с вирусной инфекцией в ¡тимусе, мы наблюдали на фоне выраженных возрастных процессов. ¡У пожилых больных тимус состоял, в основном, из жировой тка-• ни с единичными мелкими дольками паренхимы. Но и в сохранив-| шихся дольках коркового слоя содержалось большое число лим- ■ ;ф;оцитов, среди ник встречались и бластнце формы. Во внутреннем слое коры накапливались в значительном числе макрофа-^ гальныв элементы. В мозговом веществе телец Гассаля было | больше, чем обычно, причем они были крупными, часто непра-' вильной дорш с кистообразог.анием. У 4 умерших в сроках те; чения болезни с 7 до 30 суток наблюдался коллапс долек, ин-' версия слоев, деструктивные изменения. Вирусная' Н1К выявля-; лась в клетках краевой зоны кори, иногда метки были видны . и в других отделах долек. В целом в тимусе мы не выявили : значительных скоплений вирусной РЛК, что соответствовало терминальному периоду болезни. Специфическое свечение вирусного антигена соответствовало сосудистым стенкам и было нестабильным.

Таким образом, у умерших от КЗ, выявлялись изменения типа акцвдентйльноЦ трансформации Ш-1У степени, а параллельно с втим происходило развитие вторичного иммунодефицита, зарегистрированного и в клинике. Клетки-мишени для вируса КЗ в тимусе человека соответствуют выявленным в эксперименте, иллюстрируя общие закономерности репликации вируса.

выводи

' I. Вирус клещевого -нцеф лита (штамм Софьин) при моде- : ; лированни острой и хронической форм инфекции у эксперимен-талышх животных различных ввдоп расселяется и репчицирует-ся во всех лш.;фоидных орггшах,

2. В лимфоузлах при остром клещ-эвом энцефалите на фона

|гипертрофии паракортикальной зоны, обусловленной иммунным ■ Iответом на вирус, возникают некрозы, которые связаны с реп- . ¡ликацией вируса в бласттрансформированных лимфоцитах, при

¡этом вирус обнаруживается в макрофагах синусов и клетках

1

светлых центров фолликулов.

3. -Деструкция паракортикальной зоны лимфоузлов, наступа- ; ¡ицая в периоде развернутого клинического течения острого КЭ,, ¡коррелирует с инфильтрацией мозгового слоя тимуса лимфоцитами и истощением его корн, что является отражением развивающегося иммунодефицита по клеточному типу.

4. При хронической форме КЭ у золотистых хомячков в рен- < нем периоде инфекции вирус расселяется в макрофагах краевых ; синусов и Т-зависимой зоне лимфоузлов, а в собственно хрп- | ннческом периоде выявляется и п лимфоцитах по периферии пос-: ткапиллярных венул, при этом иммунная реакция не сопровождав ется значительной гипертрофией Т-зависимых зон, а некрозы > полностью отсутствуют.

5. В селезенке при острой форме инфекции, на фоне .гипер- ! трофии Т-зависимой зоны и гиперплазии миелоидной ткани, про-1 исходит расселение вируса как в метках перкартериолярного лимфондного футляра, так и в макрофпгальных элементах (кра-\ сная пульпа) с развитием в них некрозоз. ' ,

6. Экспрессия вирусной ИЖ з ранние сроки течения острой ■ формы КЭ выявляется в наружном слое коры тимуса, а в терми- ! нальной фазе радиометки'вирусной ШК появляются и в корко- ' вом слое на фоне инфильтрации его лимфоцитами.- • ;

7. Оценка системы расселения вируса КЭ в организме поз- | воляет предположить, что первичное размножение его происхо-! дит в периферических лимфовдных органах, а затем он посту- ! пает в мозг вместе с Т-лимфоцитами и будучи адсорбированным| на других клетках крови. '

В. Деструктивные процессы в клетках Т-зависимых зон лгал-! ¡фоцд.шх органов следует в большей степени отнести к непос- I родственному действию вируса, верифицированному по экспрес-' сии вирусной ШК и в меньшей с.тепени к аутоиммунным процес-! .сам.

9. 1]сслг';!оррние закономерности реакции периферических и , и<:г'п,):лчп.'х г»рп"гон гкмуногенеза у человеку на вирус КЭ по-'

,.;a:iwio полную идентичность клеток-мишеней в лимфоузлах, се- ; ¡леиенке и тимусе, выявленным в эксперименте, причем у всех вольных, умерших от острого КЗ, наблюдалась альтерация имзн-; • но в Т-зависимых зонах. '

j 10. Метод молекулярной гибридизации нуклеиновых кислот ; i jг» situ , адаптированный для работы с вирусом КЗ, поэволя- i ет шавлять возбудителя инфекции в клетках и тканевых структурах, и тем самым патогенетически оценивать происходящие в.' чшх патологические процессы. В прикладном плане },;етод гиб-j рцдизации in iitu может использоваться для диагностики КЗ в ' ¡ранние сроки и по материалам, полученным из периферических ' .лимфоузлов.

' ' ' ! ; прлкпм.сгаш] ЖОЩВДАЦШ

I. Адаптированный в работе метод гибридизации нуклеиновых кислот in situ для работы с вирусом клещевого энцефалита может быть использован как вцсокоспецифический маркер для диагностики острой и хронической форм инфекции на секционном и биопсийном материале.

1 2. Выявленные в работе закономерности распределения вируса в лимфоидных органах позволяют считать перспективной возможность диагностики болезни в инкубационном периоде по материалу, полученной из лимфатических узлов методом гибридизации нуклеиновых кислот in i'itu .

3. Установленное в работе повхкждешю лимф.оидных органов :нри остром.и хроническом клещевом энцефалите позволяет рекомендовать использование иммуностииулятсцэп в лечении и реабилитации больных клещевым энцефалитом с целью усиления регенерации лимфоидных органов.

j СПИСОК РАБОТ, ОПУЩЖСВАНШХ ПО ТЫ,Ж ДИССЕРТАЦИИ

' I. Рычков A.A., Кветкова Э.А., Шаманин В.А., Конев В.П., I Костерина Л.Д., Пиценко II.Д., Полищук Т.Н. Применение j метода молекулярной гибридизации для исследований повреждений мозга при клещевом энцефалите.// Природноочаговые ! болезни человека.- Омск,- 1987.- С. 40-44. | 2. Конев В.П., Кветкова Э.А., Костернна Л.Д., Рычков A.A., j Полгацук Т.П., Пиценко II.Д. Глпальныо реакции в морфоге-j кезе хронического клещевого энцефалита // Природаоочаго--j вые болезни челолека.- Омск,- 1988.- С. 76-79. ; 3. Ры люв A.A. Лимфоидная ткань в морфогенезе острых и хро-; нических форм экспериментального клещевого энцефалита// 1 Там же.- С. 80-84.

i 4. Конев В.П., Костерина Л.Д., Кветкова Э.А., Рычков A.A., Поливок Т.И. Иммунсдофиниты в морфогенезе нейровирусннх инфекций// УШ Всес. съезд патологоанатомов, 17-20 октября 1989, г.Тбилиси.- М., 1989.- С. 208-209. ! 5. Конев B.J1., Костерина Л.Д., Рычков A.A., Шаманин В.А., Белявская H.A., Полипу к Т.И. Регенераторные процессы в ' мозге после острой нейровирусной инфекции: пути рэзви-' тия, патогенетическая опенка // Структурное обеспечение и стимуляция компенсртсрно-восстаиовптельнкх реакций.-Омск.- 1989.- С. 47-ЬО.

6. Гычкоб A.A., Зиновьев A.C., КветкоЕа Э.А., Конев В.П., Костерина Л.Д. Регенерация лимфоидных органов при хроническом клещевом эппофалитз // Там яа,- С. 51-53.

7. Зиновьев A.C., Рычков A.A., Конов В.П., Костерина Л.Д., ; Полгацук Т.Н. Методы индикации вируса и сцепка морфогенеза кл-эаевого эшгзфплгта // Актуальные вопросы патологической анатомии,- Харьков,- 19Ш.~ С. 111-114,

В, 11i4Kon Л.А., Конйв В.П., Квоткора З.А., Мшанкн В.А. Дн-.'фомд'лич органы прп острой я хроническом клеиегсм зшюфогщо: ваярлеипе с:*!уеп?Я ИIX. мрр1оСук>тпоиальч«ч 'üvirrr .'/ Ь'.'ПП'.;::.' эпяяздппл.! иммупол. дтагостикн зп-pvc'cr - Сверилорек,- ГССО.- 0. 42-46.

9. Конев Б.П., Кветкова Э.А., Полшцук Т.И., Рычков A.A., ; Пиценко Н.Д. Изучение морфогенеза клещевого энцефалита ; методом гибридизации нуклеинових кислот // Современные j

I проблемы эпвдемиол., диагностики и профилактики клеще- I вого энцефалита: тез. докл. Всео. симпозиума, 18-20 се- \ йтября 1990.- Иркутск.- 1990.- С. II4-II5. j

10. Конев В.П., Рычков A.A., Полшцук Т.И., Кветкова O.A. : Критерии патологоанатомической диагностики клещевого '• энцефалита П Ириродноочаговые болезни человека.-Омск,- ! 1990.- С. S4-Ü7. |

11. Полшцук Т.И., Шаманил В.А., Рычков A.A., Конев В.П. Взаимосвязи морфологических изменений в мозге и лимфо- ;>

i идных органах при клещевом энцефалите // Здоровье чело- j ! века в Сибири. Тез. докл. У науч.-практ. конф. "Моло- j ; дые ученые - практическому здравоохранению", 29 октяб-j ря - 2 ноября 19Э0.- Красноярск.- 1990.- С. 104-105. | 12. Рычков A.A., Конев В.П., Полшцук Т.И., Тулгкина Л.Г. | Этиологическая диагностика клещевого энцефалита // Ак-i туальные вопросы патологической анатомии заболеваний ; населения Урала и Зап. Сиб., тез. докл. I межрегион. ! конференции патологоанатомов.- Тюмень.- 1991,- С. 28-S 29.

• ;Сдано в почать 30.03.9„\ Формат 6üxb4 I/IS. ¿ум.тип. !< 3.

офсетная. Печ.л. 1.00. Тираж lüO. Заказ 29iJ. _

Кар тол и то гр ар и я Омского СХИ им. С. М. Кирова, Омсж-Н, Сибаковская, 4