Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:Совершенствование фармацевтического анализа лекарственных средств ряда кислот и солей с помощью гальваностатической кулонометрии

4852282

ЛИРА ОЛЬГА АНДРЕЕВНА

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ЛЕКАРСТВЕННЫХ СРЕДСТВ РЯДА КИСЛОТ И СОЛЕЙ С ПОМОЩЬЮ ГАЛЬВАНОСТАТИЧЕСКОЙ КУЛОНОМЕТРИИ

14.04.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

2 5 АВГ 2011

Москва-2011

4852282

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации на кафедре фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии

Научный руководитель: кандидат химических наук, доцент

Абдуллина Светлана Геннадиевна

Официальные оппоненты: доктор химических наук, профессор

Толкачев Олег Никифорович

доктор фармацевтических наук, профессор Боковикова Татьяна Николаевна

Ведущая организация:

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации

Защита диссертации состоится « 12 » сентября 2011 г. в 14 часов на заседании диссертационного совета Д 006.070.01 во Всероссийском научно-исследовательском институте лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН (117216, г. Москва, ул. Грина, 7) по адресу: 123056, г. Москва, ул. Красина, д.2.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВИЛАР по адресу: 117216, г. Москва, ул. Грина, 7.

Автореферат разослан: « 2 » су^я_-у-усЗ д. 2011 г.

Г

Ученый секретарь диссертационного совета Д 006.070.01,

доктор фармацевтических наук ^ А. И. Громакова

и

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Фармацевтический анализ осуществляется на всех этапах получения лекарственных средств. Выход и качество конечного продукта зависят не только от строгого соблюдения технологического регламента, но и от применения надежных аналитических способов постадийного контроля и оценки качества сырья и готовой продукции. Немаловажное значение имеет и соблюдение условий хранения препаратов, так как нарушение режима хранения может привести к таким нежелательным последствиям, как разложение действующего вещества, гидролиз, выветривание кристаллизационной воды в кристаллогидрате, что, неизменно, приведёт к снижению качества. В связи с введением на фармацевтических предприятиях России правил надлежащей производственной и лабораторной практик (ГОСТ Р 52249-2004) изменяются и подходы к контролю качества фармацевтических субстанций и лекарственных препаратов. Повышенные требования к чувствительности, правильности, воспроизводимости и продолжительности анализа заставляют совершенствовать имеющиеся и разрабатывать новые методы и методики контроля качества лекарственных средств. В связи с этим, всё шире внедряются в практику фармацевтического анализа хромагографические, оптические и электрохимические методы анализа.

Для определения содержания воды в фармацевтических субстанциях рекомендуется волюмометрическое титрование по методу Фишера, которое включено в отечественную фармакопею и ведущие зарубежные фармакопеи. Метод волюмометрического титрования трудоемок и длителен, требует предварительной стандартизации титранта. В настоящее время все большую популярность приобретает кулонометрический метод определения воды, который включен в Европейскую фармакопею, а также в ряд национальных фармакопей: Британскую, Американскую и Японскую. Основными контролируемыми параметрами при кулонометрическом титровании являются время и сила тока. Имеющиеся в настоящее время приборы и устройства позволяют автоматически измерять эти параметры с очень высокой точностью. Помимо определения содержания воды в фармацевтических субстанциях, метод может использоваться для количественного определения действующего вещества на основе кислотно-основных, окислительно-восстановительных и других типов реакций. Метод гальваностатической кулонометрии актуален для анализа фармацевтических субстанций и отличается высокой точностью, экспрессностью, простотой проведения эксперимента, не требует предварительной стандартизации титранта, применения стандартных образцов (за исключением определения содержания воды) и построения градуировочных графиков.

Цель исследования. Совершенствование фармацевтического анализа лекарственных средств ряда кислот и солей органической и неорганической природы методом гальваностатической кулонометрии.

Задачи исследования:

1. Провести сравнительный анализ методов, рекомендуемых отечественной и зарубежной нормативной документацией, для определения содержания воды и количественного определения фармацевтических субстанций ряда кислот и солей.

2. Разработать методики определения воды в фармацевтических субстанциях никотиновой кислоты, дибазола, дротаверина гидрохлорида и тиамина хлорида с помощью электрогенерированного в неводной среде йода с бипотенциометрической индикацией конечной точки титрования. Подготовить проект дополнения «Кулонометрическое определение воды», гармонизированный с требованиями зарубежных фармакопей, для включения в Государственную Фармакопею XII издания.

3. Разработать кулонометрические методики количественного определения фармацевтических субстанций никотиновой, бензойной, салициловой, глутаминовой кислот, натрия хлорида, натрия цитрата, натрия бензоата и натрия салицилата с помощью электрогенерированиых гидроксид-ионов с рН-метрической индикацией конечной точки титрования для включения в нормативную документацию.

4. Разработать кулонометрические методики количественного определения фармацевтических субстанций калия иодида, метионина, аскорбиновой кислоты, липоевой кислоты, аминокапроновой кислоты, глицина и перекиси водорода с помощью электрогенерированиых галогенов в кислой и щелочной средах с биамперометрической индикацией конечной точки титрования для включения в нормативную документацию.

Научная новизна. Предложены усовершенствованные методики кулонометрического определения воды в фармацевтических субстанциях тиамина хлорида, дротаверина гидрохлорида, дибазола, никотиновой кислоты для включения в НД, Разработан проект дополнения «Кулонометрическое определение воды» к ОФС «Определение летучих веществ и воды», гармонизированный с требованиями зарубежных фармакопей, для включения в Государственную Фармакопею XII издания.

Впервые предложены усовершенствованные методики количественного определения никотиновой, бензойной, салициловой, глутаминовой, липоевой, аминокапроновой, аскорбиновой кислот, калия иодида, метионина, глицина и перекиси водорода в субстанции и лекарственных формах методом гальваностатической кулонометрии. Для чего были определены стехиометрические коэффициенты в окислительно-восстановительных реакциях глутаминовой, аминокапроновой, аспарагиновой кислот, метионина, глицина и перекиси водорода с электрогенерированным в щелочной среде бромом; калия иодида с электрогенерированным бромом в кислой среде. Разработанные методики отличаются экспрессиостыо и простотой, при этом анализ значительно удешевляется за счет сокращения числа используемых реактивов. Разработана усовершенствованная методика проведения «Испытание однородности дозирования» на таблетки, содержащие калия иодид. Найдены стандартные условия получения электрогенерированиых

гидроксид-ионов, брома и гипобромит-ионов, примененных в качестве кулонометрических титрантов

Впервые предложены усовершенствованные методики количественного определения натрия хлорида, натрия цитрата, натрия бензоата и натрия салицилата методом гальваностатической кулонометрии в сочетании с ионообменной хроматографией.

Практическая значимость. Разработаны усовершенствованные методики кулонометрического определения воды в фармацевтических субстанциях тиамина хлорида, дротаверина гидрохлорида, дибазола, никотиновой кислоты на отечественном кулонометре «Эксперт-007» (ООО «Эконикс-эксперт»). Разработан и предложен проект дополнения «Кулонометрическое определение воды» к ОФС «Определение летучих веществ и воды» для включения в Государственную Фармакопею XII издания.

Разработаны усовершенствованные методики количественного определения никотиновой, бензойной, салициловой, глутаминовой, липоевой, аминокапроновой, аскорбиновой кислот, калия иодида, метионина, глицина и перекиси водорода, натрия хлорида, натрия цитрата, натрия бензоата и натрия салицилата методом гальваностатической кулонометрии, в том числе и в сочетании с методом ионообменной хроматографии, на отечественном кулонометре «Эксперт-006» (ООО «Эконикс-эксперт»), а также методика проведения «Испытание однородности дозирования».

Предложенные методики позволяют исключить расход дорогостоящих и труднодоступных реагентов, не требуют применения стандартных образцов (за исключением определения содержания воды), построения градуйровочных графиков, отличаются простотой проведения эксперимента, точностью и экспрессностью.

Внедрение в практику. Материалы о практической значимости подтверждены актами о внедрении в учебный процесс Казанского государственного медицинского университета на кафедре фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии в виде учебно-методической разработки для студентов фармацевтического факультета дневного отделения «Гальваностатическая кулонометрия в анализе лекарственных средств» («Казанский государственный медицинский университет», - 2011 г. - 62 е.); актами о внедрении в практику работы ОАО «Татхимфармпрепараты» и ГУ «Центр контроля качества и сертификации лекарственных средств Республики Татарстан».

Апробация. Основные положения работы доложены и обобщены: на 82-й и 83-й Всероссийских студенческих научных конференциях (Казань, 20082009), 1-ой Всероссийской конференции «Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции» (Москва, 2009), X Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке: Инновационные технологии в биологии и медицине» (Москва, 2009), 65-ой ежегодной межрегиональной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2010), 3-й ежегодной конференции «Фармация и общественное здоровье» (Екатеринбург,

2010), III Всероссийской научно-практической конференции «Биотехнология и биомедицинская инженерия» (Курск, 2010), Республиканской научно-практической конференции «Актуальные вопросы повышения качества последипломной подготовки фармацевтических кадров» (Казань, 2010), 15-й Всероссийской научно-практической конференции «Молодые учёные в медицине» (Казань,2010), XI Международном конгрессе «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2010).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 18 печатных работ, в том числе 5 статей в журналах, рекомендуемых ВАК и 9 тезисов на международных и всероссийских конференциях, издано методическое пособие.

Автор благодарит профессора кафедры аналитической химии Химического института им. Бутлерова Казанского (Приволжского) федерального университета, академика РАЕН Будникова Г.К. за научные консультации и ценные советы на различных этапах выполнения данного исследования.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в рамках комплексной темы кафедры фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии ГОУ ВПО «Казанский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации «Применение кулонометрического титрования в фармацевтическом анализе лекарственных средств и лекарственного растительного сырья» (№ гос. регистрации 0120.0 805877).

Основные положения, выносимые на защиту. Проект дополнения «Кулонометрическое определение воды» к ОФС «Определение летучих веществ и воды». Методики контроля качества (вода, количественное определение, испытание однородности дозирования) для 18 лекарственных веществ методом гальваностатической кулонометрии с помощью электрогенерированных титрантов.

Результаты изучения взаимодействия электрогенерированных гидроксид-ионов, галогенов в кислой и щелочной средах с лекарственными веществами ряда кислот и солей.

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 153 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, трёх глав экспериментальных исследований и выводов, содержит 30 таблиц, 22 рисунка. Список литературы включает 204 источника, в том числе, 111 иностранных авторов.

ЭКСПЕРЕМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Кулонометрическое определение воды в фармацевтических субстанциях проводили на кулонометре «Эксперт-007» («Эконикс-Эксперт», Россия) при силе тока 50 мА. Генераторный и вспомогательный электроды представляли собой платиновые спирали. Рабочими растворами служили КФИ-Анод и КФИ-Катод («Акваметрия», Россия). Конечную точку титрования определяли бипотенциометрически с поляризующим током 2 мкА. Постоянство потенциала

в конечной точке титрования достигалось учетом дрейфа, который не превышал 0,4 мкг П20/с. Ввод пробы проводили с помощью шприца через силиконовую прокладку порта ввода. Правильность определения воды проверяли по стандартному раствору HYDRANAL®-Check Solution 1.00 с содержанием воды (1,00±0,03) мг Н20/г («Riedel-de Наёп», Германия).

Исследования методом гальваностатической кулонометрии лекарственных веществ в субстанции и лекарственных формах проводили на кулонометре «Эксперт-006» («Эконикс-Эксперт», Россия) при силе тока 5 мА. Генераторный и вспомогательный электроды представляли собой платиновые спирали. Встроенный в кулонометр рН-метр калибровался по буферным растворам с рН 4 и 9 («Метром», Швейцария). Электрогенерация гидроксид-ионов осуществлялась из насыщенного водного раствора K2S04, смешанного с водой очищенной в соотношении 1:7, конечную точку титрования определяли рН-метрически с помощью лабораторного комбинированного «полумикро»-рН-электрода ЭСК-10614 («Измерительная техника», Россия). Генерацию брома проводили из водного 0,2 М раствора КВг в 0,1 М растворе H2S04. Электрогенерированный йод получали из 0,1 М раствора KI в хлористоводородном буферном растворе (рН 1,2). Гипогалогенит-ионы получали из 0,1 М раствора КВг в фосфатном буферном растворе (рН 8,8). Конечную точку титрования определяли амперометрически с двумя поляризованными платиновыми электродами (ДЕ=300 мВ).

Используемые реактивы имели марки х.ч. или ч.д.а. Для проведения ионного обмена использовался катионит КУ-2-8. В качестве растворителя использовалась вода очищенная. Объектами служили образцы фармацевтических субстанций и лекарственных форм, отвечающие требованиям нормативной документации. Статистическая обработка полученных результатов проводилась по ГФ XI с использованием листа Microsoft Exel.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Определение воды в фармацевтических субстанциях

Отечественная и зарубежная нормативная документация рекомендуют для определения воды в фармацевтических субстанциях метод высушивания, волюмометрическое титрование по Фишеру и кулонометрическое титрование по Фишеру. Существенным недостатком метода высушивания является его неселективность, т.к. наряду с водой определяются и летучие вещества. К тому же метод трудоемок и требует значительных затрат времени. Методы определениг воды по Фишеру отличаются специфичностью и высокой чувствительностью. Отличие волюмометрического и кулонометрического титрований заключается в следующем: при волюмометрическом титровании проба с субстанцией титруется из бюретки реактивом Фишера. Содержание воды рассчитавается по объему, затраченному на титрование; при кулонометрическом определении воды проба с субстанцией вводится в фоновый электролит, содержащий те же компоненты, что и реактив Фишера, но вместо йода используется К1 или органический иодид (например, СН31). При

анодном окислении йодид-ионов образуется йод по схеме: 2Г - 2ё 12, который и вступает в реакцию Фишера. Содержание воды рассчитывается по количеству электричества, затраченному на генерацию йода. Показано, что кулонометрическое определение воды отличается меньшим расходом токсичного реактива Фишера, экспрессностью, точностью и был сделан вывод о необходимости совершенствования методик определения содержания воды в фармацевтических субстанциях с помощью кулонометрического титрования.

Изучена возможность кулонометрического определения воды в дибазоле, дротаверина гидрохлориде, тиамина хлориде и никотиновой кислоте. Отечественная и зарубежная нормативная документация регламентирует содержание воды в тиамина хлориде не более 5,0% (метод высушивания, титрование реактивом Фишера), в дротаверина гидрохлориде не более 3,0% (титрование реативом Фишера), дибазоле не более 1,5 % (метод высушивания) и никотиновой кислоте не более 0,5% (метод высушивания).

На основании литературных и экспериментальных данных для растворения субстанций был предложен растворитель, состоящий из смеси пиридина, содержащего S02 и метанола (1:1). Эксперимент показал, что в данных условиях можно проанализировать около 150 проб объемом 1 мл без замены титранта с хорошей воспроизводимостью результатов. Содержание воды определяли на трёх уровнях концентрации в диапазоне 70-130% от уровня концентрации, принятого за 100% (Табл. 1), и в пяти навесках на среднем уровне концентрации (Табл. 2). Навеску препарата подбирали таким образом, чтобы содержание воды в ней составляло приблизительно 1 мг.

Таблица 1

Кулонометрическое определение воды на трёх уровнях концентрации в

диапазоне 70-130% от уровня, принятого за 100% (п-5, Р=95%)

Фармацевтическая субстанция Содержание вещества в пробе, % Найдено воды, % £ Допустимый интервал

Никотиновая кислота 4,06 5,34 7,39 0,160±0,004 0,160+0,002 0,162±0,004 0,020 0,011 0,019 0,155 - 0,163

Дибазол 8,23 12,06 16,14 1,322+0,008 1,310±0,004 1,310±0,006 0,010 0,002 0,004 1,280- 1,346

Дротоверина гидрохлорид 2,87 4,42 5,90 1,81+0,03 1,80±0,02 1,78±0,01 0,015 0,010 0,006 1,751 - 1,840

Тиамина хлорид 2,10 3,01 3,93 4,43±0,08 4,46+0,04 4,48+0,05 0,015 0,007 0,010 4,368 - 4,592

Найденные значения содержания воды в пробе входят в допустимый интервал от 97,5% до 102,5%, рекомендуемый Европейской и Британской фармакопеями.

Таблица 2

Метрологические характеристики методики кулонометрического определения

Фармацевтическая субстанция Содержание вещества в пробе, % Найдено воды, % Метрологические характеристики Допустимый интервал

5,27 0,159±0,003 Хср~ 0,159

Никотиновая кислота 5,34 5,80 5,85 0,160±0,002 0,161+0,003 0,160±0,003 АХс!Г- 0,002 0,0009 £,.= 0,012 0,1550,163

6,63 0,156±0,002 еС[г 1,50%

9,60 1,312+0,005 Хср= 1,313

Дибазол 9,10 10,89 11,32 12,06 1,313+0,005 1,318±0,007 1,314±0,005 1,310±0,004 АХср= 0,004 5Л= 0,0013 5",= 0,002 еср= 0,28% 1,2801,346

3,72 1,82±0,02 Хср^ 1,80

Дротаверина гидрохлорид 4,53 4,42 4,62 3,82 1,78±0,03 1,80+0,02 1,79±0,02 1,80±0,03 ЛХср~ 0,02 5,= 0,0148 5,= 0,008 £Ср~ 1,03% 1,751 -1,840

3,00 4,46+0,04 ХСр~ 4,47

Тиамина хлорид 3,14 3,29 3,26 3,49 4,44+0,03 4,54±0,05 4,49±0,03 4,45±0,04 ЛХср= 0,05 5,= 0,0181 0,009 еср= 1,12% 4,368 -4,592

На основании полученных результатов и методик определения воды в фармацевтических субстанциях, разработанных на кафедре фармацевтической химии Казанского ГМУ, был предложен проект дополнения «Кулонометрическое определение воды» к ОФС «Определение летучих веществ и воды».

Применение гальваностатической кулонометрии для анализа лекарственных средств ряда кислот и солей

Отечественная и зарубежная нормативная документация для количественного определения фармацевтических субстанций ряда кислот и солей рекомендуют титриметрические методы в водной и неводной среде с визуальной или нотенциометрической индикацией конечной точкой титрования, и метод ВЭЖХ. Титриметрические методы просты в исполнении, но длительны и трудоемки, требуют предварительной стандартизации титранта, а в неводном титровании — использования токсичных растворителей. При этом вузуальная индикация значительно снижает точность анализа. Метод ВЭЖХ позволяет проводить анализ лекарственных веществ в субстанции и

лекарственных формах сразу по нескольким показателям: подлинность, доброкачественность и количественное определение, что ставит его на первое место среди физико-химических методов. Однако, для количественного определения фармацевтических субстанций, межстадийного и конечного контроля при производстве лекарственных форм, перспективна разработка экспресс-методик методом гальваностатической кулонометрии. Отсутствие необходимости предварительной стандартизации титранта или построения градуировочных графиков сокращают время анализа. Недорогие приборы и реактивы для приготовления фонового электролита, отсутствие необходимости использования стандартных образцов делают его экономически выгодным и доступным для проведения рутинных измерений на фармацевтических предприятиях. На основании таких характеристик метода, как экспрессность, высокая чувствительность и точность, нетоксичность используемых реагентов и возможность применения инструментальных методов для индикации конечной точки титрования, простота проведения эксперимента, был сделан вывод о необходимости совершенствования методик количественного определения фармацевтических субстанций с помощью метода гальваностатической кулонометрии.

Количественное определение лекарственных средств кулонометрическим титрованием электрогенерированными гидроксид-ионами

Гидроксид-ионы образуются при электролизе воды на катоде по схеме: 2Н20 + 25 20Н" + H2t, в присутствии сульфата калия, как переносчика электронов. Эффективность кулонометрического титрования предложено проверять по стандарт-титру «Кислота соляная 0,1 моль/л», которая составила 99,9±0,2%. Установлено, что электрогенерированные гидроксид-ионы быстро и в стехиометрических количествах взаимодействуют с одно- и многоосновными кислотами с pK<f>,AQ. Проведено количественное определение бензойной, салициловой, глутаминовой, никотиновой и аскорбиновой кислот в субстанции и лекарственных формах. Количественное определение действующего вещества (%) в субстанции проведено методами, рекомендуемыми нормативной документацией и по разработанной методике (табл.3). Результаты статистической обработки показали, что различие между дисперсиями статистически не значимо (Fpscc4 <РТабл~ 15,98 при Р=99%), причем воспроизводимость метода кулонометрического титрования несколько лучше метода алкалиметрического титрования. Сравнивая рассчитанные значения критерия Стьюдента с табличным при Р=99% и/=8 (?рассч<гтабл=3,50), очевидно, что различие между средними статистически не значимо. Метод кулонометрического титрования не содержит систематической ошибки.

Изучена возможность проведения формольного титрования глутаминовой, аспарагиновой кислот и метионина. Установлено, что формольное титрование электрогенерированными гидроксид-ионами количественно идет очень медленно, что, вероятно, связано с пространственными затруднениями нейтрализации метиленового производного

аминокислоты. В связи с этим оттитровать кулонометрически такие аминокислоты не представляется возможным.

Таблица 3

Результаты определения субстанций методами кулонометрического и _ алкалиметрического титрований (Р=95%)______

Фармацевтическая субстанция Найдено кулонометрически, % Метрологические характеристики Найдено алкалимет- рически, % Метрологические характеристики •^рассч ¿рассч

Кислота бензойная 99,87 99,98 100,04 100,16 99,96 Хс/= 100,0 ЛХС1г 0,1 5*= 0,0483 5,= 0,0011 £-ср=0,13% 100,31 99,74 99,78 99,90 99,84 Хер- 99,9 АХср= 0,3 0,1026 0,023 сс,г 0,29% 4,57 0,88

Кислота глутаминовая 99.93 99,91 99.94 100,03 99.95 Хср= 99,97 АХср= 0,08 0,0294 5,= 0,0006 еср= 0,08% 100,01 99,54 99,75 100,28 99,85 Хс!г 99,89 ЛХср= 0,35 0,1245 0,0028 еср= 0,35%) 2,91 0,92

Кислота никотиновая 99,98 100,04 100,06 100,14 100,28 Хср= 100,1 ЛХср= од 0,0518 5,= 0,0012 еср= 0,14% 100.03 99,77 100,17 100.04 99,99 Хср= 100,0 АХср= 0,2 5,= 0,0650 0,0015 £СТГ 0,18% 1,57 1,70

Кислота салициловая 99,87 99.91 99.92 100,02 99,75 99,9 Жег 0,12 5,= 0,0437 5>=0,001 еср= 0,12% 99,92 99,79 99,68 99,96 99,84 Хср= 99,8 ЛХср= 0,14 0,0494 0,0011 £ср= 0,14% 1,28 0,62

Кислота аскорбиновая 100,03 99,53 99,81 100,30 99,98 Хср= 99,9 ДХср= 0,4 5,= 0,1272 0,003 еср= 0,35% 99,64* 100,35* 100,44* 99,45* 99,45* Хср= 99,9 АХср= 0,6 0,2192 0,005 £Гс/,= 0,61% 2,97 0,12

*Найдено йодатометрически.

Полученные результаты позволили предложить методики определения кислот в лекарственных формах. Установлено, что вспомогательные вещества таблеточной массы, мазевой основы, растворы спирта не взаимодействуют с электрогенерированными гидроксид-ионами и не мешают определению действующих веществ. Полученные данные не выходят за рамки норм допустимых отклонений содержания действующего вещества в различных лекарственных формах: таблетках глутаминовой кислоты по 0,25 г,

никотиновой кислоты по 0,05 г, салициловой мази 2%, спиртовых растворах салициловой кислоты 1% и 2% различных производителей.

Проведена валидационная оценка методики количественного определения кислоты никотиновой. ОФС «Валидация фармакопейных методов» рекомендует проводить валидационную оценку методики количественного определения по показателям: специфичность, линейность и аналитическая область методики, правильность, воспроизводимость. Специфичность оценивалась по способу «введено-найдено». Величины относительного стандартного отклонения меньше 0,010 (табл. 4).

Таблица 4

Результаты кулонометрического определения кислоты никотиновой по реакции с электрогенерированными гидроксид-ионами (и=5, Р=95%)

Фармацевтическая субстанция Введено, мкг Найдено, мкг 5,

107 107,2±0,4 0,003

Кислота никотиновая 206 206,0±0,3 0,001

302 301,8±0,9 0,003

Линейность и аналитическая область методики подтверждается анализом 7 проб на 7 уровнях концентрации в диапазоне от 70 до 130% от уровня концентрации, принятого за 100% (200 мкг в пробе). Сравнение зависимости массы кислоты от количества электричества показало, что она имеет линейный характер и рассчитанное значение коэффициента линейной корреляции составляет 0,9999; з>=(0,800±0,006)х-(3±1) (рис. 1).

Рис. 1 Зависимость между массой (те, мкг) кислоты никотиновой и количеством электричества ((), Ки).

ОФС «Валидация фармакопейных методов» рекомендует оценивать правильность и воспроизводимость на примере 3 проб на 3 уровнях концентрации или на одном уровне с использованием не менее 6 проб. Нами правильность и воспроизводимость оценивались по сравнению с прямой алкалиметрией на уровне 100% концентрации с использованием 12 проб (табл. 5).

Используя критерий Фишера сравнивали воспроизводимость и выяснили, что различия между дисперсиями статистически не значимы. Значения рассчитанного критерия Стьюдента меньше табличного, следовательно, метод кулонометрического титрования валиден по показателям правильность и воспроизводимость.

Учитывая, что титрованные растворы хлористоводородной и серной кислот широко применяются при проведении фармацевтического анализа,

предложено проводить стандартизацию 0,01 н., 0,1 н., 0,5 н. и 1 н. растворов хлористоводородной кислоты и 0,05 н., 0,5 н. растворов серной кислоты с помощью электрогенерированных гидроксид-ионов.

Таблица 5

Метрологические характеристики методик количественного определения

кислоты никотиновой (Р=95%)

Параметр Метод кулонометрического титрования Метод прямой алкалиметрии

Среднее значение выборки, Хср 100,02 100,1

Относительное стандартное отклонение, Бг 0,001 0,002

Стандартное отклонение среднего результата, 0,031 0,056

Полуширина доверительного интервала, ЛХсп 0,07 0,1

Относительная ошибка, е, % 0,07 0,12

Коэффициент Фишера: /грассч=3,16< ^табл=4,47 при Р=99%

Коэффициент Стьюдента: ?рассч=1,39< гТабл=2583 при Р=99% и/-22

Количественное определение солей, образованных сильным основанием и сильной кислотой, предложено проводить электрогенерированными гидроксид-ионами после пропускания через колонку с катионитом. Полученные результаты представлены в таблицах 6 и 7. Методики просты по исполнению, относительное стандартное отклонение составляет 0,004 - 0,015.

Таблица 6

Определение солей методом гальваностатической кулонометрии в сочетании с

ионообменной хроматографией (п=5, Р=95%)

Фармацевтическая субстанция Введено, мкг Найдено, мкг &

136 134+4 0,013

Натрия хлорид 211 212±3 0,010

286 285±2 0,011

203 202±2 0,007

Калия хлорид 320 321±6 0,015

419 421 ±6 0,012

237 236±3 0,012

Калия бромид 372 373±3 0,006

511 512±3 0,005

294 295+5 0,015

Калия йодид 424 426+4 0,008

577 578+3 0,004

Таблица 7

Метрологические характеристики методики количественного

Найдено Метрологи- Найдено Метрологи-

кулоно- ческие аргенто- ческие р * рассч

метрически, % характеристики метрически, % характеристики 'рассч

100,00 Хс = 100,09 99,93 Хср= 100,23

100,07 АЖсР= 0,0761 100,14 АХср= 0,26

100,09 0,02739 100,26 8Х= 0,09397 11,77 0,57

100,13 5Г= 0,0006 100,33 8Г= 0,0021

100,16 £*Ср~ 0,08% 100,49 бср= 0,26%

Рргс^таб^ 15,98 (Р=99%), ^,<^.,=3,50 (Р=99%,/=8)

Кулоиометрическое титрование солей, образованных сильным основанием и слабой кислотой. Для количественного определения натрия цитрата нормативная документация рекомендует кислотно-основное титрование после пропускания соли через колонку с катеонитом. Этот же приём можно использовать для количественного определения натрия бензоата и натрия салицилата. После пропускания через колонку с катеонитом выделившиеся кислоты титруются электрогенерированными гидроксид-ионами. Полученные результаты представлены в таблицах 8 и 9.

Таблица 8

Определение солей методом гальваностатической кулонометрии в сочетании с

ионообменной хроматографией (п-5, Р=95%)

Фармацевтическая субстанция Введено, мкг Найдено, мкг

216 217±2 0,007

Натрия цитрат 179 180±4 0,017

100 101±2 0,012

107 106±3 0,020

Натрия салицилат 157 157±3 0,013

218 218+2 0,010

102 101+2 0,012

Натрия бензоат 151 150+4 0,020

202 202±1 0,005

Кулоиометрическое титрование солей, образованных слабым основанием и сильной кислотой. Установлено, что титрование новокаина, дибазола, папаверина гидрохлорида, димедрола, в целом, даёт завышенные результаты. Наблюдается низкая воспроизводимость. Вероятно, это связано с плохой растворимостью образующихся оснований в воде. Добавление органических растворителей сказывается на работе системы индикаторных электродов. Таким образом, результаты кулонометрического титрования солей

Таблица 9

Метрологические характеристики методик количественного определения _солей в субстанции (Р = 95%)_

Фармацевтическая субстанция Найдено кулонометрически, % Метрологические характеристики

Натрия бензоат 99,70 99,80 99,91 99,55 100,02 Хср= 99,8 AXcf-0,2 Sx~ 0,8152 Sr= 0,002 есгг 0,23 %

Натрия салицилат 99,60 99,64 99,98 100,00 100,00 Хср= 99,8 ЛХср= 0,3 Sx= 0,917 S,~ 0,002 сс,г 0,26 %

Натрия цитрат 100,42 100,27 100,13 100,47 100,50 Хср= 100,36 /11-^=0,19 5,= 0,0694 Sr= 0,002 ecv= 0,19%

образованных слабым основанием и сильной кислотой не позволяют нам предложить унифицированные методики их определения.

Кулонометрическое титрование электрогенерированным йодом

При электролизе калия иодида в кислой среде йод образуется на аноде по схеме: 2Г - 2ё -» 12. Эффективность кулонометрического титрования проверяли по стандарт-титру «Натрий серноватистокислый 5-водный 0,1 моль/л», которая составила 100,0±0,2%. Проведено количественное определение аскорбиновой кислоты электрогенерированным йодом в субстации (табл. 10,11) и таблетках с глюкозой. Окисление аскорбиновой кислоты электрогенерированным йодом протекает в одну ступень (Рис. 2,1) в соотношении 1:1.

электрогенерированным йодом, II - калия иодида электрогенерированным бромом, III - липоевой кислоты электрогенерированным бромом, IV -метионина электрогенерированным бромом; АВ - предэлектролиз; В - ввод пробы.

Вспомогательные компоненты таблеточной массы и глюкоза не мешают определению аскорбиновой кислоты. Относительная ошибка титрования элегарогенерированным йодом, равная 0,23%, меньше ошибки титрования электрогенерированными гидроксид-ионами - 0,35%. В связи с этим рекомендуется проводить количественное определение аскорбиновой кислоты в субстанции и таблетках с помощью электрогенерированного йода.

Таблица 10

Определение аскорбиновой кислоты в субстанции (и=5, Р=95%)

Введено, мкг Найдено, мкг

103 103+1 0,007

183,0 183,3±0,7 0,003

228 230±4 0,014

Таблица 11

Метрологические характеристики методики кулонометрического определения _аскорбиновой кислоты в субстанции (Р=95%)_

Фармацевтическая субстанция Найдено, % Метрологические характеристики

Аскорбиновая кислота 99,7 99,8 100,0 100,1 100,1 Хср= 99,9 ДХсР= 0,2 Sx= 0,0812 Sr= 0,002 eCD= 0,23%

Кулонометрическое титрование электрогенерированным бромом

Элекгрогенерированный бром образуется на аноде при электролизе калия бромида по схеме: 2ВГ - 2ё Вг2. Эффективность кулонометрического титрования предложено проверять по стандарт-титру «Натрий серноватистокислый 5-водный 0,1 моль/л», которая составила 99,9±0,2%.

Изучено взаимодействие электрогенерированного брома с калия иодидом, липоевой кислотой и метионином. Установлено, что калия иодид взаимодействует с электрогенерированным бромом в соотношении 1:1. Вероятно, окисление протекает по схеме: KI + Br2 -> IBr + КВг. Окисление иодид-иона до иодмонобромида, в отличие от известной реакции окисления иодид-ионов до йода, можно связать с большей реакционной способностью электрогенерированного брома по сравнению с бромом, образующимся из бромат-бромидной смеси. Разработаны методики количественного определения калия иодида в субстанции и лекарственных формах. Предложено также проводить контроль качества йодсодержащих таблеток по показателю «Однородность дозирования». Установлено, что вспомогательные вещества таблеточной массы не мешают определению калия иодида. Результаты представлены в таблицах 12 и 13.

Липоевая кислота и метионин окисляются электрогенерированным бромом быстро и количественно в соотношении 1:2 и 1:1, соответственно. Окисление протекает в одну ступень (рис. 2, III и 2, IV). Полученные

результаты согласуются с литературными данными и схемами окисления липоевой кислоты и метионина: СН2—СН2—СНМСН^—СООН +2Вг2 + 2Н20-- СН2-СН2~ СН~(СН2) ~СООН + 4 НВг

о О

/О .о

НзС—3—СН,—СН^-СН— + Вг2 + Н^О-► НС— Б-Ои-СН,—СН—С^ +2 НВг

| ^он II I ОН ми

МЫ, О

Предложены методики определения липоевой кислоты и метионина в субстанции и таблетках. Вспомогательные вещества таблеточной массы не мешают определению действующего вещества. Полученные результаты представлены в таблицах 12 и 13.

Таблица 12

Результаты кулонометрического определения субстанций _электрогенерированным бромом (п=5, Р=95%)_

Фармацевтическая субстанция Введено, мкг Найдено, мкг

63,5 64±1 0,017

Калия иодид 87,3 87,2+0,7 0,006

127,0 127,0±0,9 0,006

99 99±2 0,010

Липоевая кислота 154 153±2 0,010

197 197±1 0,005

161 161±0,3 0,002

Метионин 200 200±0,4 0,002

245 245±0,8 0,003

Таблица 13

Метрологические характеристики методики кулонометрического определения калия иодида, липоевой кислоты и метионина в субстанции (Р—95%)

Фармацевтическая субстанция Найдено, % Метрологические характеристики

Калия иодид 100,04 99,90 99,76 99,57 99,83 Хср= 99,8 АХср~- 0,2 0,1739 Бг= 0,002 еср= 0,22%

Липоевая кислота 99,88 99,71 99,71 99,79 100,00 Хср= 99,82 АХср= 0,2 $,= 0,1236 £,.= 0,001 Всц- 0,15%

Метионин 100,38 100,10 100,02 99,98 100,06 Хср- 100,108 А¥ср= 0,2 5,= 0,07 5,.= 0,001 еср= 0,19%

Проведена валидационная оценка методики количественного определения метионина электрогенерированным бромом. Специфичность

оценивалась по способу «введено-найдено». Величины относительного стандартного отклонения не превышают 0,010 (табл. 14).

Таблица 14

Кулонометрическое определение метионина электрогенерированным

Фармацевтическая субстанция Введено, мкг Найдено, мкг &

162 162±0,5 0,002

Метионин 196 196+0,3 0,001

242 242±0,9 0,003

Линейность и аналитическая область методики подтверждается анализом 7 проб на 7 уровнях концентрации от 70 до 130%. Сравнение зависимости массы кислоты от количества электричества показало, что она имеет линейный характер и рассчитанное значение коэффициента линейной корреляции составляет 0,9999; ^=(1±3)-10~6+(1290,00±0,01)Т0~блг (рис. 3).

0.35 т 0 84 •

».зз ¿г

0.30 ^ У

Рис. 3. Зависимость между массой (т, мкг) метионина и количеством электричества (ЙКл)

Правильность и восгфоизводимость оценивались на трёх уровнях концентрации с использованием трёх навесок на каждом уровне в сравнении с обратным йодиметрическим титрованием, рекомендуемым нормативной документацией. Используя критерий Фишера сравнивали воспроизводимость и установили, что различие между дисперсиями статистически не значимо. Рассчитанное значение критерия Стьюдента меньше табличного и метод кулонометрического титрования валиден по показателям правильность и воспроизводимость (табл.15).

Таблица 15

Результаты анализа субстанции метионина методами кулонометрического

титрования и иодиметрического титрования (Р-95%)

Найдено кулонометрически, % Метрологические характеристики Найдено иодометрически, % Метрологические характеристики

100,38 100,10 100,02 99,98 100,06 99,95 99,95 100,01 99,78 Х= 100,0 =0,002 = 0,05 АХср = 0,1 е— 0,13 99,58 99,63 100,09 99,58 100,48 100,19 100,48 100,27 99,89 Х= 100,0 =0,004 5, = 0,12 АХ,Р = 0,3 е= 0,29

200 220 240

т, мкг

Fpacm-~- 5,21 </w,= 6,03 (Р=99%), tpacc4= 0,033<W,= 2,93 (Р=99%,/=16)

Кулонометрическое тнтрование гипобромит-ионами

Гипобромит-ионы образуются при электролизе калия бромида в щелочной среде, вследствие диспропорциоиирования образующегося брома: Вг2 + 20Н~ ВГ + BrO~ + Н2О. Эффективность кулонометрического титрования предложено проверять по стандарт-титру «Калий йодистый 0,1 моль/л», которая составила 100,0±0,2%.

Изучены реакции взаимодействия электрогенерированного гипобромит-иона с аминокислотами (глицин, глутатаминовая, аспарагиновая и аминокапроновая кислоты, метионин) и перекисью водорода, которая в химическом отношении представляет собой очень слабую кислоту. Установлено, что аминокислоты окисляются гипобромит-ионами быстро и количественно в следующих соотношениях: глицин, глутаминовая, аспарагиновая и аминокапроновая кислоты 1:5, а метионин 1:7. Кривые титрования представлены на рис. 4.

Рис. 4. Кривые кулонометрического титрования гипобромит-ионами: I - глутаминовая кислота, II - глицин, III - аминокапроновая кислота, IV - метионин; AB - предэлектролиз; В - ввод пробы.

Как видно из рисунка 4 (I, II, III), не содержащие серу аминокислоты окисляются в одну ступень, а метионин (IV) в две ступени. Исходя из структуры аминокислот и литературных данных, можно предположить, что аминокислоты окисляются до кетокислот. По видимому, аналогичным образом окисляются глутаминовая, аспарагиновая и аминокапроновая кислоты.

Вероятно, окисление протекает по схемам:

-

2 H,N— СНу—C^f + 5ВгО --2 0=СН -С+ 5 Br + N2 + 3 Н20

2 2 ОН ОН

глицин глиоксиловая кислота

2 /С—СН,—СН2—СН—СС +5 ВгО --

НО | ОН

NH,

глутаминовая кислота 2 ^.С—СН,—СН,-С-С^ + 5Br~ + N,+ 3H,0

НО II он

о

а -кетоглутаровая кислота

Образование а-кетоглутаровой кислоты при окислении глутаминовой кислоты электрогенерированными гипобромит-ионами подтверждено

нингидриновой реакцией. Реакция проводилась с раствором глутаминовой кислоты, продуктом её окисления гипобромит-ионами, а также с раствором а-кетоглутаровой кислоты. Установлено, что глутаминова кислота даёт фиолетовую окраску, а продукт окисления и а-кетоглутаровая кислота дают с нингидрином одинаковую оранжевую окраску.

2H2N—СН2-

"(СНг);

-С^г +5ВгО ОН

аыинокшроновая кислота

2 0= СН—(СН2)4-

+5ВГ + N. + 3 Н20

ОН

Аспарагиновая кислота окисляется аналогично глутаминовой кислоте. Метионин в своей структуре содержит атом серы, который может окисляться либо до сульфоксида, либо до сульфона:

н,с—s—сн,—сн?

н.с—s—сн,—СНу

метионин

NH,

Г

NH,

,ОН -О

сульфоксид метионина

н,с-

-сн,-

,ОН =0

Возможность окисления диметилсульф оксиде:

-сн?— сн—с:

' II ■ I

о nh2

супьфон метнонина

серы до сульфона была проверена на

-сн,

сн,-

-s-

II о

Оказалось, что в данных условиях диметилсульфоксид не окисляется до сульфона, поэтому можно предположить, что сера в метионине окисляется только до сульфоксида. Таким образом, учитывая, что при окислении метионин теряет 7 электронов, можно предположить, что по первой ступени (рис. 4, IV) сера окисляется до сульфоксида (отдаёт 2 электрона), а по второй ступени аминогруппа окисляется до кетогруппы (отдаёт еще 5 электронов). Вероятно, окисление протекает по схеме:

^он

2 Н,С—S—СН,-

=0

+ 7 ВЮ

NH,

-сн,—сн,— с— с:

.ОН

ап + 7 Вг + N2+ 3 Н О

^О ^ 2

О

При изучении окисления перекиси водорода гипобромит-ионами, установлено, что реакция протекает в соотношении 1:1, т.е. 1 молекула

перекиси водорода теряет 2 электрона. Можно предположить, что окисление

протекает по схеме: Н202 + ВгСГ В Г + 02Т + Н20.

Таблица 16

Результаты кулонометрического определения аминокислот (и=5, Р=95%)

Фармацевтическая субстанция Введено, мкг Найдено,мкг 5Г

97 98±2 0,019

Глицин 153 153±2 0,011

204 203±4 0,015

Кислота глутаминовая 71 205 301 71±3 205±6 301±9 0,020 0,020 0,020

Кислота аминокапроновая 112 210 308 112±1 210±4 308±4 0,005 0,020 0,010

104 103±3 0,020

Метионин 148 147±2 0,018

186 185±2 0,010

На основании полученных результатов предложены методики количественного определения глицина и аминокапроновой кислоты с помощью шпобромит-ионов в субстанции (табл. 17) и лекарственных формах: растворах кислоты аминокапроновой 5%, таблетках глицина по 0,1 г.

Таблица 17

Метрологические характеристики методики кулонометрического определения глицина и аминокапроновой кислоты в субстанции (Р~95%)

Фармацевтическая субстанция Найдено, % Метрологические характеристики

Глицин 100,29 99,94 100,14 100,02 99,72 Хср= 100,02 АХср= 0,27 5,= 0,096 5,= 0,002 £ср= 0,27%

Аминокапроновая кислота 99,88 99,71 99,71 99,79 100,00 Хср= 99,82 ЛХср= 0,2 0,1236 0,001 Еср— 0,15%

Предложена методика кулонометрического определения перекиси водорода 3%. Величины относительного стандартного отклонения не превышают 0,020. Разработанная методика сравнивалась с методикой, рекомендуемой нормативной документацией. С помощью критериев Фишера и Стьюдента показано, что правильность и воспроизводимость методики кулонометрического титрования перекиси водорода несколько лучше методики перманганотометрического титрования.

ВЫВОДЫ

1. Проведен сравнительный анализ методов определения содержания воды и количественного определения фармацевтических субстанций ряда кислот и солей, включенных в отечественную и зарубежную нормативную документацию. Определена необходимость совершенствования методик с помощью кулонометрического титрования.

2. Разработанные усовершенствованные методики кулонометрического определения содержания воды в субстанциях тиамина хлорида, дротаверина гидрохлорида, дибазола и никотиновой кислоты с помощью электрогенерированного йода в неводной среде предложены для включения в раздел нормативной документации «Вода». Методики кулонометрического титрования отличаются точностью, экспрессностъю, простотой проведения эксперимента и требуют меньшего расхода токсичного реактива Фишера по сравнению с волюмометрическим титрованием.

3. Разработанный проект дополнения «Кулонометрическое определение воды», гармонизированный с требованиями зарубежных фармакопей, предложен для включения в Государственную Фармакопею Российской Федерации XII издания. Показана целесообразность кулонометрического титрования с содержанием воды в пробе от 0,5 мг до 5 мг, что согласуется с фармакопеей США; найденные значения содержания воды в пробе должны входить в интервал от 97,5% до 102,5%, что согласуется с Европейской фармакопеей.

4. Предложенные усовершенствованные методики определения содержания никотиновой, глутаминовой, салициловой и бензойной кислот в субстанциии и лекарственных формах с помощью электрогенерированных из насыщенного раствора КгБО^.НгО (1:7) гидроксид-ионов могут быть использованы в разделе нормативной документации «Количественное определение». Относительная ошибка не превышает 0,2%.

5. Предложенные усовершенствованные методики определения содержания натрия цитрата, натрия бензоата, натрия салицилата и натрия хлорида в субстанциии и лекарственных формах с помощью электрогенерированных из насыщенного раствора К^О^НгО (1:7) гидроксид-ионов в сочетании с ионообменной хроматографией могут быть использованы в разделе нормативной документации «Количественное определение». Относительная ошибка не превышает 0,3%.

6. Установлено, что аскорбиновая кислота взаимодействует с электрогенерированным из 0,1 М раствора К1 в хлороводородном буферном растворе (рН 1,2) йодом быстро и количественно, в соотношении 1:1. Усовершенствованные методики определения содержания аскорбиновой кислоты в субстанции и таблетках предложены для использования в разделе нормативной документации «Количественное определение». Относительная ошибка не превышает 0,3%.

7. Показано, что калия иодид, метионин и липоевая кислота взаимодействуют с электрогенерированным из 0,2 М раствора КВг в 0,1 М раствора серной кислоты бромом быстро и количественно, в соотношении 3:1 (калия иодид, метионин) и 1:2 (липоевая кислота). Усовершественные методики

определения содержания калия иодида, метионина и липоевой кислоты в субстанции и лекарственных формах предложены для использования в разделах нормативной документации «Количественное определение» и «Однородность дозирования». Относительная ошибка не превышает 0,3%.

8. Установлено, что глицин, аминокапроновая кислота и перекись водорода взаимодействуют с гипобромит-ионами, образующимися при генерации брома из 0,1 М раствора КВг в фосфатном буферном растворе (pH 8,8), быстро и количественно, в соотношении 2:5 (глицин, аминокапроновая кислота) и 1:1 (перекись водорода). Усовершенствованные методики определения содержания глицина, аминокапроновой кислоты и перекиси водорода в субстанции и лекарственных формах предложены для использования в разделе нормативной документации «Количественное определение». Относительная ошибка не превышает 0,3%. Методики кулонометрического титрования отличаются точностью, экспрессностью, простотой проведения эксперимента, не требуют предварительной стандартизации титранта, использования стандартных образцов или построения градуировочных графиков.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Лира, O.A. Гальваностатическая кулонометрия в анализе лекарственных средств производных карбоновых кислот/ O.A. Лира// Материалы 82-й Всерос. студ. науч. конф. - Казань, 2008. - С. 201.

2. Валидационная оценка методики анализа кислоты никотиновой/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира, Г.К. Зиятдинова, Г.К. Будников// Фармация. - 2008. - №8.-С. 11 - 13.

3. Лира, O.A. Количественное определение аминокислот методом гальваностатической кулонометрии/ O.A. Лира// Материалы 83-й Всерос. студ. науч. конф. - Казань, 2009. - С. 261.

4. Применение гальваностатическая кулонометрия для анализа карбоновых кислот/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира, Г.К. Зиятдинова и др.// Химико-фармацевтический журнал - 2009. -№6. - С. 54 — 56.

5. Абдуллина, С.Г. Кулонометрическое определение аминокапроновой кислоты/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира, С.А. Сидуллина// Современные методы химико-аналитического контроля фармацевтической продукции: Материалы первой Всеросс, конф. - М., 2009. - С.3-4.

6. Абдуллина, С.Г. Гальваностатическая кулонометрия в анализе водорода пероксида/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира// Здоровье и образование в XXI веке: Инновационные технологии в биологии и медицине: Сб. научи, трудов X междунар. конгресса. - М., 2009. - С. 16-17.

7. Лира, O.A. Кулонометрическое определение липоевой кислоты/ O.A. Лира, С.Г.Абдуллина, С. А. Сидуллина// Биотехнология и биомедицинская инженерия: Сб. тр. III Всероссийской научн.-практ. конф. с междунар. участием. - Курск, 2010. - С.284-286.

8. Лира, O.A. Применение гальваностатической кулонометрии для анализа солей галогенводородных кислот/ O.A. Лира, С.Г. Абдуллина// Актуальные

вопросы повышения качества последипломной подготовки

фармацевтических кадров: Материалы Респ. научн.-практ. Конф. - Казань, 2010.-С.97- 100.

9. Лира, O.A. Контроль качества йодсодержащих препаратов с помощью гальваностатической кулонометрии/ O.A. Лира// Молодые ученые в медицине: Материалы XV Всероссийской научн.-практ. конф. - Казань,

2010.-С. 256.

10.Абдуллина, С.Г. Количественное определение натрия хлорида методом гальваностатической кулонометрии/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира// Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: Сб. науч. тр. - Пятигорск, 2010. - С. 258 - 259.

11. Лира, O.A. Гальваностатическая кулонометрия в анализе солей ароматических кислот/ O.A. Лира, С.Г. Абдуллина// Фармация и общественное здоровье: Материалы ежег. конф. — Екатеринбург, 2010. - С. 182-184.

12.Кулонометрическое определение глутаминовой кислоты/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира, И.К. Петрова и др.//Фармация. - 2009. - №5. - С. 5-7.

13.Лира, O.A. Гальваностатическая кулонометрия в анализе глицина /O.A. Лира, С.Г. Абдуллина// Здоровье и образование в XXI веке: Научные и пикладные аспекты концепции здоровья и здорового образа жизни: Сб. научн. трудов X междунар. конгресса. - М., 2010. - С.114-115.

14.Абдуллина С.Г. Кулонометрическое определение воды по методу Карла Фишера в дротаверина гидрохлориде / С.Г. Абдуллина, O.A. Лира, И.К. Петрова// Здоровье и образование в XXI веке: Научные и пикладные аспекты концепции здоровья и здорового образа жизни: Сб. научн. трудов X междунар. конгресса. - М., 2010. - С.45.

15.Лира, O.A. Кулонометрическое определение аскорбиновой кислоты /O.A. Лира, С.Г. Абдуллина// Здоровье и образование в XXI веке: Научные и прикладные аспекты концепции здоровья и здорового образа жизни: Сб. научн. трудов X междунар. конгресса. - М., 2010. - С.528.

16.Кулонометрическое определение калия иодида в лекарственных средствах/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира, С.А. Сидуллина, С.Н. Егорова//Фармация. -

2011,-№4.-С. 8-10.

17.Кулонометрическое определение натрия хлорида в стерильных растворах/ С.Г. Абдуллина, O.A. Лира, P.P. Сабиржан, С.Н. Егорова//Научные ведомости БелГУ - 2011. - №4. - Вып.№13/2. - С. 182-185.

18.Абдуллина, С.Г. Гальваностатическая кулонометрия в анализе лекарственных средств. Учебно-методическое пособие для студентов фармацевтического факультета /С.Г. Абдуллина, И.К. Петрова, O.A. Лира/ Казань: КГМУ, 2011- 62 с.

Заказ 198. Тираж 100 экз. ГУП. «Типография на Люсиновской» г. Москва.