Роль рецептора факторов роста эндотелия сосудов VEGFR3 и его лигандов VEGE-C и VEGE-D в прогрессии множественной миеломы

Калитин, Николай Николаевич

Диссертации по медицине → Онкология

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.12) на тему:Роль рецептора факторов роста эндотелия сосудов VEGFR3 и его лигандов VEGE-C и VEGE-D в прогрессии множественной миеломы

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Калитин, Николай Николаевич Москва 2012 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.01.12

Автореферат диссертации по медицине на тему Роль рецептора факторов роста эндотелия сосудов VEGFR3 и его лигандов VEGE-C и VEGE-D в прогрессии множественной миеломы

На правах рукописи

Калитин Николай Николаевич

РОЛЬ РЕЦЕПТОРА ФАКТОРОВ РОСТА ЭНДОТЕЛИЯ СОСУДОВ УЕСГЮ И ЕГО ЛИГАНДОВ УЕвЕ-С И УЕвЕ-Б В ПРОГРЕССИИ МНОЖЕСТВЕННОЙ МИЕЛОМЫ

14.01.12 — онкология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

005050604

Москва - 2012

005050604

Работа выполнена в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» Российской академии медицинских наук

Директор

академик РАН и РАМН, профессор Давыдов Михаил Иванович

Научный руководитель

доктор биологических наук Карамышева Аида Фуадовна

Официальные оппоненты

Герштейн Елена Сергеевна доктор биологических наук, профессор, НИИ

Клинической онкологии, ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» РАМН, ведущий научный сотрудник лаборатории Клинической биохимии

Карпухин Александр Васильевич доктор биологических наук, профессор, ФГБУ

«Медико-генетический научный центр» РАМН, заведующий лабораторией Молекулярной генетики сложно наследуемых заболеваний

Ведущая организация

«Московский научно-исследовательский онкологический институт

имени П.А. Герцена» Федерального Медико-Биологического Агентства РФ

Защита диссертации состоится « м » ¿рх^ЛЛЛ 2013 г. в « » часов на заседании диссертационного совета в Федеральном государственном бюджетном учреждении «Российский онкологический научный центр имени Н.Н.Блохина» Российской академии медицинских наук по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 23.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» РАМН по адресу: 115478, Москва, Каширское шоссе, 24.

Автореферат разослан « » «Щ^ 2012 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

д.м.н., профессор I ^ Барсуков Юрий Андреевич

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы

Множественная миелома - злокачественное лимфопролиферативное заболевание из группы гемобластозов, основным патогномоничньм признаком которого является синтез и секреция трансформированными плазматическими клетками патологического иммуноглобулина ( ^ ), как правило одного из двух типов, - ^О или ^А. Этот моноклональный парапротеин обнаруживается в сыворотке крови и моче у больных множественной миеломой в виде белка Бенс-Джонса, который вместе с остеолитическими поражениями и инфильтрацией костного мозга плазмоцитами, по сути, формирует характерную клиническую картину, наблюдаемую у больных.

Несмотря на диффузную природу множественной миеломы (ММ), благодаря которой трансформированные плазмоциты, являющиеся морфологическим субстратом опухоли, фактически оказываются гетерогенно распределенными в костном мозге и, кроме того, образуют метастатические отсевы в некоторых тканях организма, для их нормальной жизнедеятельности, как и в случае солидных опухолей, крайне важен адекватный уровень оксигенации и метаболизма. Новообразованные кровеносные и лимфатические сосуды обеспечивают эти процессы соответствующим структурным компонентом, создавая необходимые и достаточные условия для прогрессии ММ.

Известно, что контроль тканевого гомеостаза определяется совокупностью аутокринных и паракринных реакций, в которых паренхиматозные клетки функционально сопрягаются со стромальными. При ММ имеют место те же закономерности тканевой регуляции на уровне факторов роста и их рецепторов из семейства УЕвР, что и в случае солидных опухолей. По сути, баланс аутокринных и паракринных реакций, обусловливающих экспрессию компонентов УБвР-ассоциированных сигнальных систем, определяет вклад этих ангиогенных факторов в патогенез ММ, т.е. ангиогенный статус каждого конкретного больного.

Очевидно, что ангиогенный статус больных не только ММ, но и многими другими злокачественными опухолями человека, равно как и его изменения в течение заболевания, детерминирует терапевтическую стратегию, основанную на инактивации лиганда или рецептора в УБСРЯ-ассоциированных сигнальных системах, представляя достаточно новую, но крайне продуктивную линию в лечении онкологических больных, обогащающую традиционные схемы новыми лекарственными препаратами и простирающая вдаль горизонты таргентной терапии онкологических больных.

тенденции может служить синтез и внедрение в ряде стран мира в клиническую практику моноклональных антител к ключевому индуктору ангиогенеза - фактору УЕСР-А. Этот препарат, зарегистрированный под торговым названием Авастин™, продемонстрировал достаточно высокую эффективность в ингибировании роста миеломных клеток как в монорежиме, так и в комбинации, например, с иммуномодуляторными цитостатиками.

Помимо «выключения» самого верхнего этажа сигнальных каскадов, идущих от интегральных рецепторов УЕОИКэ, все активнее изучаются препараты, имеющие ингибиторные потенции в отношении самих рецепторных тирозинкиназ - рецепторов УБОРЯя. Вещества этой группы способны блокировать димеризацию и аутофосфорилирование молекул рецептора, таким образом предотвращая трансляцию сигналов к многочисленным внутриклеточным эффекторам.

Понимание механизмов, лежащих в основе модуляции экспрессии факторов роста и их рецепторов из семейства УБвР" в течение ММ, исследование корреляций между молекулярными изменениями и клиническими характеристиками у больных ММ и в культурах клеток ММ человека, а также сопоставление и обобщение фактического материала этих двух групп, безусловно, будет способствовать детализации и более глубокому пониманию одной из основополагающих сторон процесса канцерогенеза.

Цели исследования

1. Изучить роль факторов роста эндотелия сосудов УЕОР-С, УЕОР-О и их рецептора УЕОРЯЗ в злокачественной эволюции множественной миеломы.

2. Определить вклад функциональных изменений их экспрессии в прогностическом плане и разработке концепции УЕОР-ассоциированного патогенеза течения данного заболевания.

Задачи исследования

1. Исследовать экспрессию мРНК факторов роста эндотелия сосудов УЕОР-С, УЕвР-О и их рецептора УБОРЫ у больных ММ до и после проведенного курса лечения.

2. Сравнить экспрессию мРНК УЕОР-С, УЕОР-О/ УЕвРЮ с экспрессией мРНК УЕОР-А/УЕОРШ, УЕСРЯ2 у этих же больных.

3. Сопоставить данные по экспрессии мРНК с некоторыми цитологическими показателями больных ММ.

4. Исследовать экспрессию мРНК факторов роста УЕвР и их рецепторов на моделях культур клеток множественной миеломы человека линий КРМП640, КРМ18226 и 1М9.

5. Исследовать изменения экспрессии мРНК в клетках культур ММ под действием транс-ретиноевой кислоты (atRA).

6. Исследовать влияние протеасомного ингибитора «бортезомиб», или «вилкейд» (Vic) на выживаемость клеток ММ с помощью МТТ-теста.

7. Исследовать экспрессию рецептора VEGFR3 в плазматических клетках больных множественной миеломой с помощью проточной цитометрии.

Научная новизна и практическая значимость исследования

В результате проведенных исследований были получены некоторые принципиально новые результаты, детализировавшие и углубившие представления о вкладе факторов роста и их рецепторов из семейства VEGF в патогенез множественной миеломы.

Во-первых, было установлено существование двух независимых сигнальных систем у больных ММ - VEGFR1-ассоциированной и УЕОРКЗ-ассоциированной. Функционирование этих систем осуществляется в пределах двух самостоятельных сигнальных каскадов, без наличия лигандного перекрывания через рецептор VEGFR2. Это обстоятельство может иметь практическое применение при разработке подходов таргетной терапии в случае превалирования сигналинга по VEGFR1- или VEGFR3-nyra.

Во-вторых, выявлена корреляция между рядом базовых цитологических показателей и уровнем экспрессии мРНК генов VEGFR1- и УЕОРЯЗ-ассоциированных сигнальных систем у больных ММ.

В-третьих, впервые показано, что разнонаправленные изменения цитологических показателей и уровней экспрессии генов VEGFR1- и VEGFR3-ассоциированных сигнальных систем у больных ММ свидетельствуют об инактивации соответствующих сигнальных систем по мере эволюции патологического процесса.

В-четвертых, отмечены конкордатные изменения экспрессии гена рецептора ретиноевой кислоты RARa и генов VEGFR1- и УЕОРЯЗ-ассоциированных сигнальных систем, что свидетельствует о потенциальной регулируемости экспрессии соответствующих факторов роста и их рецепторов VEGFR1- и VEGFR3-acco4HHpoBaHHbix сигнальных систем трансфактором RARa.

В-пятых, в экспериментах на культурах клеток ММ человека было впервые обнаружено, что в зависимости от аберрантного иммунофенотипа, главным образом по антигенам CD45 и CD56, наблюдается принципиальное различие в экспрессии генов семейства VEGF, чувствительности к препарату нового поколения бортезомибу, а также транс-ретиноевой кислоте (atRA).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Установлено, что в мононуклеарной фракции аспиратов костного мозга больных множественной миеломой отсутствует экспрессия гена УЕОРЯ2 и обнаруживается экспрессия мРНК генов УЕвР-А/УЕвРЮ и УЕвР-С, УЕвР-ШЕвРЯЗ, формирующих, таким образом, две независимые сигнальные системы.

2. Выявлена корреляция между коэкспрессией генов сигнальных систем F£GF-А!УЕОРЩ, УЕвР-С, УЕОР-Б/УЕОРЯЗ и уровнем плазмоцитоза у больных ММ.

3. Обнаружена определенная корреляция между экспрессией гена рецептора ретиноевой кислоты ЯАЯа и экспрессией генов УЕвР-С, УЕйР-И и их рецептора УЕвРЯЗ.

4. Исследование клеточных линий ММ человека КРМ1 1640, ЯРМ1 8226 и 1М 9 показало зависимость экспрессии гена рецептора УЕвРЮ от аберрантного иммунофенотипа по антигенам С045 и С056, но не лигандов УЕвР-А и УЕйР-Д экспрессия которых определялась в клетках всех 3 линий.

Апробация работы

Диссертация апробирована и рекомендована к защите на совместной научной конференции лабораторий генетики опухолевых клеток, молекулярной эндокринологии и онкогеномики НИИ Канцерогенеза и лаборатории клинической биохимии НИИ Клинической онкологии ФГБУ "РОНЦ им. Н. Н. Блохина" РАМН от 29 февраля 2012 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ, в том числе 3 статьи опубликованы в журналах, рекомендованных ВАК МОН РФ соискателям ученой степени кандидата биологических наук.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 117 страницах машинописного текста, содержит 19 рисунков и 6 таблиц. Состоит из глав: «Введение», «Обзор литературы», «Материалы и методы», «Результаты исследования», «Обсуждение», «Выводы», «Список литературы». Список литературы содержит 354 источника.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

В качестве материалов исследования были использованы аспираты костного мозга, полученные от 33 больных ММ (клинический материал был предоставлен И.В. Буравцовой, отд. клинической гематологии и иммунотерапии ГУ МОНИКИ им. М.Ф. Владимирского, Москва,

рук. - проф. А.К. Голенков), а также культуры клеток ММ человека линий ЯРМ1 1640, ЯРМ1 8226 и 1М 9.

В работе использованы следующие методы исследования: получение мононуклеарной фракции из аспиратов костного мозга больных множественной миеломой, полимеразная цепная реакция с обратной транскрипцией (ОТ-ПЦР), выделение РНК из аспиратов костного мозга больных ММ и культур клеток, электрофорез РНК и продуктов ПЦР, анализ пролиферативной активности клеточных культур множественной миеломы человека, оценка влияния а1КА на изменение экспрессии генов семейства УЕвР, оценка цитотоксического эффекта колориметрическим методом (МТТ-тест), проточная цитофлуориметрия и статистическая обработка данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ 1. Роль изменений экспрессии генов факторов роста семейства УЕвЕ и их рецепторов у больных множественной миеломой 1.1. Экспрессия мРНК генов семейства УЕСГ у больных множественной миеломой

На первом этапе исследования мы проанализировали характер экспрессии мРНК генов семейства УЕОР в группе из 33 больных множественной миеломой с помощью полуколичественного метода ОТ-ПЦР. Содержание мРНК каждого из исследованных генов колебалось у разных больных в широких пределах, в то время как мРНК гена FEGFЛ2 была выявлена только у 3 из 33 (9%) больных.

Отсутствие детектируемой мРНК гена рецептора УЕОР112 в мононуклеарной фракции клеток костного мозга большей части больных ММ указывает на то, что у этих больных сигнальные системы УЕОР-А/УЕОРШ и УЕОР-С,УЕОР-Б/УЕОРМ являются независимыми. Рецептор УЕСРЯ2 является единственным общим рецептором для всех трех факторов роста -УЕйР-А, УЕвР-С и УЕОР-Ц, и в отсутствие этого рецептора фактор роста УРЮР-А специфически связывается только с рецептором УЕОРШ, а факторы роста УЕОР-С и УЕОР-Э взаимодействуют только с рецептором УБвРЮ.

Таким образом, из полученных на данном этапе результатов исследования нами была высказана гипотеза о существовании двух независимых УЕОР-ассоциированных сигнальных систем, УЕОР-А/УЕСРШ и УЕСР-С, УЕСР-О/УЕОРИЗ, что позволяет отдельно оценивать роль каждой из этих систем в размножении клеток, входящих в мононуклеарную фракцию, и в развитии заболевания.

1.2. Сопоставление экспрессии мРНК генов семейства УЕСК с некоторыми цитологическими характеристиками аспиратов костного мозга больных множественной

миеломой

В качестве цитологических характеристик, с помощью которых оценивалось состояние больных, были выбраны такие показатели, как количество плазматических клеток в мононуклеарной фракции аспиратов костного мозга и соотношение количества лимфоцитов и плазматических клеток. Численные значения выбранных характеристик колебались в значительных пределах. Так, количество плазматических клеток у различных больных составляло от 12% до 88% (Рис.1), а соотношение количества лимфоцитов и плазматических клеток - от 0,03 до 0,8 (Рис.2).

Рис.1. Распределение больных по количеству плазматических клеток

100

£ 80

5 70

? 60

ГС га 50

с 40

ш 30

с; о 20

ю см см СО со 5

Ч Р) П (О N СО СМ -г- "> 12 2 2 §| 2

Номера образцов ММ

Рис.2. Распределение больных по соотношению лимфоциты/плазматические клетки

£ 5

ц г

о п

¡е ш

® 5

э о £ Ь О О

0,90 0,80 0,70 0,60 0,50 0,40 0,30 0,20 0,10 0,00

п П П II П П 1

с» Г- со 00 г- ю СО ю ю СП

см чг ю ч— т— со ■г— см см ч—

5 2 2

2 2 2 2 2 2 2 2

Номера образцов ММ

Для сопоставления данных по экспрессии мРНК генов семейства УЕОБ с цитологическими показателями нами были сформированы 4 группы больных, которые компоновались, исходя из принципа наличия или отсутствия коэкспрессии генов двух вышеназванных УЕОР-ассоциированных сигнальных систем.

Так, в группу I вошли больные с высоким содержанием мРНК УЕСЕК1 и УЕвЕ-А (рис. 3). Рис.3 Больные с высоким уровнем коэкспрессии генов УЕйЕ-А, УЕОЕШ и УЕОЕКИ.

Группа I.

ММ15 ММ5 ММб ММ1 ММ34 ММ35 ММ52 ММ25 ММЗб ММ37

« ; »ич. ■ ттщтт \ штт' ; [йй,»*' УВОР-А

ШШШ шшт, лишь ' - , . . ; ^ : ' ______ЕГГ^Ч

ЩШЯШшШШШ] «ии»)^^™. увоин

..... ...

Я^ННКИ »-

В то время как в группу II вошли больные, у которых мРНК рецептора УЕОЕШ отсутствовала или ее количество было очень невелико (рис. 4).

Рис.4 Больные с невысоким уровнем или с полным отсутствием коэкспрессии генов УЕСЕ-А, УЕОЕШ и УЕвРШя

Группа II.

ММ62 ММ 64 ММ19 ММ2Р ММ17 ММ38

; у....... * уеср-а

УЕОМк

г--ггл^гга: чт Шк. «* ¡ ^■ЛЦЗ,^.-,'-¿л ■ПКВИЭЯ1 ШШ' ИЩЗИЯЯм ••Ш

ЯН шнЩйР ■МпИ* »ж««»

Сопоставив характер экспрессии генов УЕОР-А/УЕОРК1 -ассоциированной системы с цитологическими показателями, была выявлена следующая закономерность: экспрессия генов УЕОР-А/УЕОРШ-ассоциированной системы, то есть функциональная активность данной системы, коррелирует с более низким уровнем плазмоцитоза и повышенным соотношением лимфоциты/плазматические клетки у больных - группа I - в сравнении с больными, у которых эта система инактивирована - группа II (табл. 1, рис. 5).

Таблица 1. Сопоставление коэкспрессии генов УЕвГ-А, УЕОРЩ и УЕвПиз с клиническими характеристиками больных ММ.

Группа I. Больные с высоким уровнем коэкспрессии генов

Пациенты Кол-во пл.кл.(%) Лимфоциты(%) Соотношение лимф./пл.кл.

1. ММ 1 23,3 - -

2. ММ5 22,2 12,0 0,54

3. ММ 6 34,5 - -

4. ММ15 51,2 17,0 0,33 с;

5. ММ25 23,0 11,2 0,49

6. ММ34 25,0 20,0 0,80

7. ММ35 12,0 5,0 0,42

8. ММ36 50,8 25,0 0,49

9. ММ37 31,4 9,5 0,30

10 ММ52 37,0 - -

Группа II. Больные, у которых коэкспрессия отсутствует или уровень ее очень низкий

Пациенты Кол-во пл.кл.(%) Лимфоциты(%) Соотношение лимф./пл.кл.

1. ММ17 60,6 5,4 0,09

2. ММ19 24,4 15,6 0,64

3. ММ29 85,0 2,2 0,03

4. ММ38 53,4 6,0 0,12

5. ММ62 22,0 - -

6. ММ64 87,8 5,0 0,06

Средние значения цитологических показателей больных ММ в группах I и II

Количество плазматических клеток Количество лимфоцитов Соотношение количества лимф./пл.кл.

Группа I 31,04 ±12,68 14,24 ± 6,82 0,48 ±0,17

Группа П 55,53 ± 28,40 6,84 ±5,11 0,19 ±0,25

р < 0,05 р < 0,05

Таблица 2. Сопоставление коэкспрессии генов УЕСР-С, УЕСР-И и УЕвРЛЗ с клиническими характеристиками больных ММ.

Группа III. Больные с высоким уровнем коэкспрессии генов

Пациенты Кол-во пл.кл.(%) Лимфоциты(%) Соотношение

1 ММ5 22,2 12,0 0,54

2. ММ11 56,6 8,8 0,16

3 ММ12 39,6 15,4 0,39

4 ММ13 34,0 - -

5 ММ18 56,0 10,2 0,18

6 ММ37 31,4 9,5 0,30

7 ММ38 53,4 6,0 0,12

8 ММ40 25,2 8,1 0,32

9 ММ44 43,6 9,4 0,22

Группа ГУ. Больные, у которых коэкспрессия отсутствует

Нет экспрессии Пациенты Кол-во пл.кл.(%) Лимфоциты(%) Соотношение

УЕОРЯЗ ММ8 85,6 8,6 0,10

ММ17 60,6 5,4 0,09

ММ58 69,0 5,9 0,09

ММ57 69,0 6,2 0,10

УЕвЕ-С УЕвР-О ММ23 31,0 12,6 0,41

ММ64 87,8 5,0 0,06

Средние значения цитологических показателей больных ММ в группах Ш и ГУ

Количество плазматических клеток Количество лимфоцитов Соотношение количества лимф./пл.кл.

Группа Ш 40,22 ±13,08 9,93 + 2,80 0,28 ± 0,14

Группа IV 67,17 ±20,61 7,28 ± 2,89 0,14 ±0,13

р < 0,05 р < 0,05 р < 0,05

Рис.5 А-Б. Цитологические показатели в группах больных ММ, различающихся по уровню

коэкспрессии мРНК УЕйР-А и УЕОРШ.

На рисунках приведены значения количества плазматических клеток (А) и соотношения количества лимфоциты/ плазматические клетки (Б) у отдельных больных, медианы распределений и среднеквадратичные отклонения.

5 0,8 -

Группа! Группа II

Группы больных

тг

Группа! Группам

Группы больных

При сопоставлении цитологических показателей количества плазматических клеток и соотношения лимфоциты/плазматические клетки были обнаружены закономерности, тождественные тем, что выявились при анализе групп I и II: коэкспрессия генов VEGF-C,VEGF-D и VEGFR3 регистрировалась у больных с низким количеством плазматических клеток (<25) и высоким соотношением лимфоциты/плазматические клетки (>0,49) - группа III. Отсутствие

коэкспрессии указанных генов - группа IV - коррелировало с процентом плазматических клеток более 60% и показателем соотношения лимфоциты/плазматические клетки менее 0,1 (табл. 3,4).

Таблица 3. Группы больных с наиболее высокими и низкими показателями количества плазматических клеток.

Количество плазматических клеток (%)

№ п/п >60 <25

Пациент Группа Кол-во пл.кл. Пациент Группа Кол-во пл.кл.

1. ММ8 IV 85,8 ММ1 I 23,3

2. ММ10 - 88,0 ММ2 - 22,8

3. ММ17 II, IV 60,6 ММ4 - 13,4

4. ММ29 II 85,0 ММ5 III 22,2

5. ММ41 - 69,2 ММ13 III 24,0

6. ММ57 IV 69,0 ММ19 И 24,4

7. ММ58 IV 69,0 ММ25 I 23,0

8. ММ64 II, IV 87,8 ММ34 I 25,0

9. ММ35 I 12,0

10. ММ62 II 22,0

Таблица 4. Группы больных с наиболее высокими и низкими показателями соотношения количества лимфоцитов и плазматических клеток.

Соотношение количества лимфоцитов и плазматических клеток

№ п/п <0,10 >0,50

Пациент Группа Кол-во лимф./пл.кл. Пациент Группа Кол-во лимф./пл.кл.

1. ММ8 IV 0,10 ММ4 - 0,61

2. ММ17 II, IV 0,09 ММ5 III 0,54

3. ММ29 II 0,03 ММ15 I 0,52

4. ММ41 - 0,08 ММ19 II 0,64

5. ММ57 IV 0,10 ММ23 IV 0,55

6. ММ58 IV 0,09 ММ25 I 0,52

7. ММ64 II, IV 0,06 ММ34 I 0,80

8. ММ36 I 0,49

Определение экспрссии белка рецептора VEGFR3 у больных множественной миеломой с помощью проточной цитометрии1

Получив предварительные данные, указывающие на верифицированную корреляцию между экспрессией компонентов VEGFR1- и УЕОРЯЗ-ассоциированных сигнальных систем и количеством плазмоцитов в мононуклеарной фракции аспиратов костного мозга больных ММ, мы постарались избирательно определить, какова экспрессия этих компонентов именно в популяции плазматических клеток.

С этой целью в группе из 14 больных с помощью проточной цитофлуориметрии оценивалась экспрессия одного из исследованных ранее рецепторов - VEGFR3. Необходимо сразу отметить, что ни у одного из исследованных нами 14 больных уровень плазмоцитоза не превышал 60%: он колебался в пределах 5,2 - 49%. Таким образом, исследованная группа включала больных с a priori высокой экспрессированностыо VEGF-сигнапьных систем. Несмотря на это, при сравнении уровня экспрессии белка VEGFR3 у больного с максимальным для нашей группы уровнем плазмоцитоза - 49% с больным, у которого был отмечен один из наиболее низких уровней плазмоцитоза - 10,4%, была выявлена та же корреляция, что и ранее. Именно: увеличение количества плазматических клеток сопровождалось ингибированием экспрессии компонентов VEGF-ассоциированных сигнальных систем, в данном случае ключевого компонента системы VEGF-C,VEGF-D/VEGFR3 рецептора VEGFR3 ( рис. 6А/Б). Рисунок 6 А. Уровень экспрессии белка VEGFR3 на гейтированном пуле плазматических клеток у больной И. с плазмоцитозом 10,4%.

10° 10' 10г 10J 10'

' Совместно с лабораторией иммунологии гемопоэза НИИ Клинической онкологии РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН

Рисунок 6 Б. Уровень экспрессии белка УЕОРЯЗ на гейгированном пуле плазматических клеток у больного К. с плазмоцитозом 49%.

Учитывая все вышеприведенные данные, нами была высказана, ad hoc, гипотеза, согласно которой, существует определенная корреляция между экспрессией генов факторов роста эндотелия сосудов семейства VEGF и их рецепторов и такими цитологическими параметрами, как количество плазматических клеток и соотношение лимфоциты/плазматические клетки. В самом деле, инактивация экспрессии компонентов как VEGFR1-, так и УЕОРЮ-связанных сигнальных систем сопровождалась гомологичными цитологическими флуктуациями, при чем для некоторых больных сопровождавшихся инактивацией обеих систем.

1.4. Исследование участия рецептора ретиноевой кислоты RARa в регуляции экспрессии генов VEGFR3-acc<muiiponaiiiioii сигнальной системы

Известно, что в лечении ряда гемобластозов, в частности острого промиелоцитарного лейкоза, atRA и ее гомологи являются препаратами выбора. Несмотря на это, существуют и альтернативные точки приложения биотерапевтической активности ретиноидов. Так, недавно [Sanda Т. et al, 2005] показали способность синтетического агониста рецепторов RARa,[3 тамибаротена (Аш80) индуцировать антимиеломный эффект через ингибирование ангиогенеза.

С этой целыо на следующем этапе мы исследовали гипотетическую корреляцию между экспрессией мРНК генов системы VEGF-C,VEGF-D/VEGFR3 и экспрессией гена RARa в группе из 17 больных множественной миеломой. Оказалось, что у 13 из 17 больных ( 76,5%) отмечалось изменение экспрессии гена RARa в ответ на лечение ( рис. 7 А/Б). Интересно, что, как и в случае с корреляцией экспрессии компонентов VEGF-ассоциированных систем и

цитологическими характеристиками (количеством плазматических клеток и соотношением лимфоциты/плазматические клетки), изменения экспрессии RARa были конкордантны с изменениями экспрессии гена VEGFR3 (у 12 из 13 больных - 92,3%). Следует отметить, что аналогичная закономерность прослеживается и в группе, в которой собраны больные без визуально определяемых изменений экспрессии гена RARa ( рис. 7 В).

Рисунок 7 А-В. Изменения экспрессии мРНК генов VEGF-С, VEGF-D, их рецептора VEGFR3, а также гена RARa у больных ММ до и после проведенного лечения

Группа 1. Включает больных, у которых в ответ на лечение уровень экспрессии мРНК

RARa понизился

ММ1 ММЗ ММ 4 ММ 6 ММ 7

R,4ia YEGF-C vnai'-n VßGritJ

BZin

1-до лечения

2-llllCJlt лечения

1 2 1 2 1 2 1 2 1 г 3

-— AHB n*®?^ i . J; -- • • яяЩ&Ш ■

BUS Инг мшамм 1Ш KMRBflKSl SffiiwrT 1 ) 48М8МЯ1 ШШШ'......j düs^l

X : . -. i Ш] штяшттт ннинл ими янн НВНВВ ■'

«Ш НШЯKm ЩШ1 NHg | }1ргггЯ__ ®Яя»ЯавЯ? .г м >- »"««и 1 и • к •' I . j рщщ шмши

ffieüS ******* i штт': 1 f-M-......1

Группа 2. Включает больных, у которых в ответ на лечение уровень экспрессии мРНК

RARa повысился

ММ16

ММ 11

ММ12

1- ;н> .1№'<ении

2- 1С лечения

УШшЯВВНН^Н

BSaSHSMi [-\ !Н

■R'mrnmt

3 RARa VEGF-C VEGF-D VEGFR3 B2m

Группа 3. Включает больных, у которых в ответ на лечение уровень экспрессии мРНК

RARa не изменился

М >12 MIVIS VIМ К VI VI13

12 12 1 2 1 2

\тЛяеЩ [«-*»! jf^i^ [W.,...«] .....i Г"'""-1} VEGF-C

■».] |Ч I ГII i.| .«штамп»! I III |}iiiii............ ; I 11 II iww» ы™*ттшт VEGFR3

. МММ» ^ ЩЯ I ^ ' \ fellWH^j f ■ «HI B2m

1- до лечения

HOC № JILMIl'IIIIH

2. Изменения экспрессии генов факторов роста семейства VEGF и их рецепторов в клеточных культурах множественной миеломы человека 2.1. Характеристика клеточных культур но экспрессии дифференцировочных

маркеров2

Поскольку аспираты костного мозга исследованных нами больных ММ представляют собой своеобразные клеточные ансамбли, далее в нашей работе мы хотели дифференцированно подойти к изучению ранее выявленных коррелятивных закономерностей, сфокусировав внимание на источнике патологических трансформаций, коим при множественной миеломе являются плазматические клетки.

С этой целью нами были исследованы 3 клеточные линии ММ человека: RPMI 1640, RPMI 8226 и IM 9. Из таблицы 5 видно, что клетки всех трех линий гистогенетически относятся к лимфоидному ряду гемопоэза и имеют плазматическую природу, поскольку экспрессируют антигены CD138 и CD38.

Таблица 5. Экспрессия ряда дифференцировочных маркеров клетками культур ММ человека RPMI 1640, RPMI 8226 и IM9

Клетки CD138 CD 38 CD45 CD56 CD19

RPMI 1640 + + - +/- -

RPMI 8226 + + - +/- -

IM 9 + — + — +

Кроме того, оказалось, что клетки линий RPMI и линии IM9 различаются по экспрессии маркеров CD45 и CD56: клетки линий RPMI 1640 и RPMI 8226 не экспрессируют маркер CD45

2 Совместно с лабораторией иммунологии гемопоэза НИИ Клинической онкологии РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН

и частично экспрессируют маркер С056, тогда как клетки линии 1М9, напротив, тотально экспрессируют антиген СЭ45 и не несут на своей поверхности антиген СБ56. Следовательно, клетки линий 1640 и КРМ1 8226 имеют аберрантный фенотип СВ457С05б+/~, а линии 1М9 -С045+/СБ56_.

2.2. Исследование пролиферативной активности клеток культур ММ человека 2.2.1. Определение скорости роста линий ЯРМ11640, 1УРМ18226 и 1М 9

Получив данные о различной экспрессии дифферекцировочных маркеров, формирующих аберрантные фенотипы плазматических клеток 3 исследуемых культур, следующий вопрос, на который нам предстояло ответить, формулировался следующим образом: различаются ли по скорости роста клетки ММ человека линий ИРМ11640, КРМ1 8226 и 1М9?

Мы исследовали пролиферативную активность клеток всех трех линий (рис.8). Рисунок 8. Кинетические кривые роста клеточных культур ММ человека. Каждая точка кривой — средние величины для 3-х лунок. РСБ — фетальная телячья сыворотка.

Количество клеток(%)

700 т 600 500 400 300 200 100 0

---

Засев

24 час

48 час

72 час

96 час

-RPMI 1640 -RPMI 8226 -1М9

Время (час)

Из рис. 8 видно, что клетки линий RPMI 1640 и RPMI 8226 пролиферируют интенсивнее клеток линии IM 9, давая почти четырехкратное увеличение плотности популяции уже ко вторым суткам культивирования. В то же время, достигнув пика пролиферации к 24 ч, клетки линии IM 9 демонстрировали торможение скорости роста. Это, в общем, достаточно типично, поскольку, по данным [Mahmoud, M.S. et al, 1998], наиболее чувствительными к дефициту сыворотки в среде являются клетки, экспрессирующие антиген CD45+++.

2.2.2,Определение чувствительности клеточных культур RPM11640, RPMI 8226 и IM

9 к протеасомному ингибитору бортезомиб (Velcade) Следующей нашей задачей было определить степень чувствительности клеток исследуемых линий к препарату бортезомиб, или вилкейд. Этот цитостатик относится к

равнительно новой группе препаратов ингибиторов протеасом и является весьма эффективным пациентов с укорочением периода ремиссии или рефрактерностью к стандартной ерапевтической схеме.

'исунок 9. МТТ-тест. Оценка цитотоксического эффекта бортезомиба на клетки ММ человека иний ЯРМ1 1640, КРМ1 8226 и 1М9.

Представлены данные одного из шести экспериментов. Каждая точка кривой - средняя

величина для трех лунок.

Видно, что наименьшей чувствительностью к действию препарата обладают клетки линии М 9, имеющие аберрантный фенотип CD45+/CD56~ и обладающие невысокой пролиферативной наивностью в стандартных условиях культивирования (рис. 8 В). В то же время клетки двух (ругих линий с аберрантным фенотипом CD457CD56+'~, RPMI1640 и RPMI8226, были более 1увствительны к бортезомибу и демонстрировали выраженный цитоцидный эффект при сонцентрациях цитостатика 8,6x10"' и 6,1х10"9 соответственно.

Влияние ATRA на изменение экспрессии генов семейства VEGF в клеточных культурах ММ человека Учитывая ранее полученные нами данные на группе больных множественной миеломой о наличии некой гипотетической корреляции между экспрессией гена RARa и экспрессией генов VEGFR3-acco4HnpoBaHHofl сигнальной системы, представлялось небезынтересным оценить возможный вклад естественного лиганда рецептора RARa - atRA (all-trans retinoic acid) на экспрессию не только компонентов системы VEGFR3 - VEGF-C/VEGF-D, но и системы VEGFR1 - VEGF-A.

Прежде чем приступить к исследованию влияния транс-ретиноевой кислоты (atRA) hi экспрессию генов семейства VEGF, мы оценили цитотоксический эффект этого вещества hi клетки трех линий ММ человека (рис. 10).

Рисунок 10. МТТ-тест. Оценка цитотоксического эффекта atRA на клетки ММ человека линш RPMI 1640, RPMI8226 и IM9.

180,00 -160,00 -140,00 -120,00 : 100,00 i 80,00 ^ 60,00 -40,00 -20,00 ■ 0,00 -

1- - L.

з з s 3 S

5 я S 5 1

im9

- -m — rpmi

1640

—A— rpmi

8226

Дозы

Из данного графика видно, что ретиноевая кислота практически не оказывав! ингибирующего влияния на рост культур ИРМ11640 и 11РМ18226, между тем как пр! добавлении к среде с клетками линии 1М 9 отмечается приблизительно полуторакратно< увеличение пролиферации.

Далее мы определили базальные уровни экспрессии мРНК генов семейства УЕСР I клетках трех исследуемых линий (рис. 11).

Рисунок 11. Экспрессия мРНК факторов роста эндотелия сосудов и их рецепторов в клетках ММ человека (М - маркер. ИРМ! 1640, КРМ18226 и 1М 9 - линии клеток ММ человека).

RPMI RPMI IIV19 iVI 1640 8226

i-r-r—i ет шш

T^ECil^-iy

[НИ 1-ШЭД i^e-c^ray

ШШ 1ШШ ^сатаз

клетках этой линии наблюдалась коэкспрессия генов фактора роста УЕвЕ-А и рецептора У ЕС ЕЯ 1.

Таким образом, можно говорить о функционировании УЕОРШ -ассоциированной сигнальной системы лишь в клетках линии 1М 9, в то время как в двух других клетках экспрессируется только мРНК лигандов УЕвГ-А и УЕОР-О.

Затем мы определили непосредственно влияние аША на экспрессию генов семейства УЕвР в трех этих культурах. Ретиноевая кислота добавлялась до конечной концентрации 5x10"6. Оценка индуцирующего влияния проводилась спустя 6 ч (рис. 12 ).

Рисунок 12. Влияние а111А на изменение экспрессии мРНК генов факторов роста эндотелия сосудов и их рецепторов в клеточных культурах линий 11РМП640, 11РМ18226 и 1М 9 (М -маркер. ИА~ - без добавления аИ1Л. 1*А+ - добавление 5 мкМоль/л аИ1А. К+, 1С -положительный/отрицательный контроли).

1М9

КРМ11640

ЯРМ! 8226

аИО\+ аИ^А- аИ1А+ аИ1Л- а1ЯА+

ЯАЯа УБСР-А УЕвР-С УБвР-О ] КБСГЛ/ I УЕвРЯЗ

I СЛРШГ

Из рисунка 12 видно, что добавление ретиноевой кислоты индуцирует снижение экспрессии генов семейства УЕОИ в клетках ЯРМ1 1640 и 1М 9, причем параллельно со снижением экспрессии мРНК гена КЛКа. Напротив, в клетках линии ЛРМ1 8226 наблюдается увеличение экспрессии генов УЕвЕ-А и УЕйЕ-й, также связанное с изменением экспрессии КЛКа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В работе исследована роль факторов роста эндотелия сосудов УЕОР-С, УЕОР-О и их рецептора УЕОРЮ при множественной миеломе на клиническом материале, полученном от больных ММ, а также на клеточных культурах множественной миеломы человека линий ИРМ1 1640, КРМ1 8226 и 1М 9. Кроме того, исследовано участие рецептора ретиноевой кислоты ЯАЯа в регуляции экспрессии факторов роста и их рецепторов семейства УЕвР в мононуклеарной фракции из аспиратов костного мозга больных ММ и трех вышеназванных клеточных культурах.

Показано, что у больных множественной миеломой отсутствует экспрессия мРНК рецептора УЕСРН2. Это обстоятельство дает основание говорить о существовании двух независимых сигнальных систем - УЕОРШ -ассоциированной и УЕСРЯЗ-ассоцированной, функционирующих, таким образом, без феномена лигандного перекрывания через рецептор УЕСРК2.

Обнаружена корреляция между такими цитологическими показателями, как количество плазматических клеток и соотношение лимфоциты/плазматические клетки и экспрессией компонентов УЕОРШ-ассоциированной и УЕОРЮ-ассоцированной сигнальных систем: высокий плазмоцитоз и, соответственно, низкое значение соотношения лимфоциты/плазматические клетки сопровождалось ингибированием экспрессии лигандов и/или рецепторов УЕОРЯЛ- и УЕОРЮ-ассоцированных сигнальных систем, то есть их инактивацией.

На группе из 18 больных множественной миеломой определены конкордантные изменения экспрессии генов КАка, УЕОР-С, УЕОР-В и их рецептора ^/£GF^JЗ, свидетельствующие о потенциальной вовлеченности трансфактора ЯА11а в регуляцию их экспрессии.

В опытах на клеточных культурах ММ человека линий КРМ1 1640, ЯРМ1 8226 и 1М 9 были выявлены принципиальные отличия клеток трех культур по экспрессии на их поверхности маркеров аберрантного фенотипа - молекул С045 и С056, характеризующего злокачественный статус и имеющего важное практическое применение в онкологической практике. Клетки линий ЯРМ1 1640 и КРМ1 8226 с аберрантным фенотипом С0457С056+/~ демонстрировали более высокие показатели пролиферативной активности в стандартных условиях культивирования в сравнении с клетками линии 1М 9, имеющими аберрантный фенотип С045+/С056~. Также наблюдались различия по чувствительности клеток линий КРМ1 и линии 1М 9 к протеасомному ингибитору бортезомибу: наибольшей толерантностью к этому цитостатику обладали клетки линии 1М 9, что, по-видимому, можно объяснить их меньшей пролиферативной активностью и,

следовательно, меньшей нагрузкой на протеасомную систему процессинга и деградации белков по сравнению с клетками ЯРМ1 1640 и ЛРМ1 8226.

Анализ экспрессии генов семейства УЕйр в клетках всех трех культур показал, что лишь в пинии 1М 9 с аберрантным фенотипом С045+/С056~ наблюдается экспрессия и лиганда, и рецептора - УЕвР-А и УЕОРШ, - тогда как в линиях ЯРМ1 1640 и 11РМ1 8226 экспрессируются только факторы роста. Эти данные отчасти коррелируют с ранее обнаруженными закономерностями между уровнем плазмоцитоза у больных ММ и экспрессией компонентов УЕОЕШ -ассоциированной и УЕОРЮ-ассоцированной сигнальных систем.

ВЫВОДЫ

1. В аспиратах костного мозга большинства исследованных больных ММ (30/33) наблюдалась экспрессия рецепторов УЕвЕШ и УЕвЕЯЗ, но не и следовательно, у них активны 2 независимые сигнальные системы: УЕвЕ-А/ УЕОРШ и УЕйР-С, УЕОР-О/УЕОЕКЗ.

2. Обнаружена корреляция между коэкспрессией генов сигнальных систем УЕвЕ-Л/УЕОЕЯ], УЕОЕ-С, УЕвЕ-О/УЕвЕЯЗ и уровнем плазмоцитоза у больных ММ: при увеличении количества плазмоцитов наблюдается снижение или инактивация экспрессии компонентов одной или обеих вышеназванных систем. Данные проточной цитометрии также указывают на снижение экспрессии белка УЕвЕЯЗ на поверхности плазматических клеток при повышенном плазмоцитозе.

3. Показано, что у больных ММ наблюдается определенная корреляция между экспрессией гена рецептора ретиноевой кислоты ЯАЯа и экспрессией генов УЕОЕ-С, УЕОЕ-О и их рецептора УЕОЕЯЗ.

4. Исследование 3 клеточных линий ММ человека ЙРМ1 1640,11РМ1 8226 и 1М 9 показало, что в них экспрессируются гены факторов роста УЕвЕ-А и РЖУ^-Д. Экспрессия гена рецептора УЕОЕЯ] была обнаружена в линии 1М 9 (С045+, С056-), но не в линиях ЛРМ1 1640 и 11РМ1 8226 (С045-, СП56+), что указывает на возможность существования корреляции между экспрессией рецепторов УЕвРЯ и антигенов аберрантного фенотипа С045, СВ56 и СО 19.

5. Исследование с помощью теста МТТ показало, что клетки 1М 9 наиболее устойчивы к действию химиопрепарата велкейд (бортезомиб). Ретиноевая кислота стимулировала пролиферацию клеток 1М 9, в отличие от слабо ингибирующего воздействия на клетки ИРМ!.

Список работ по теме диссертации

1. Капитан, H.H. Экспрессия рецептора факторов роста эндотелия сосудов VEGFR1 в культурах клеток множественной миеломы (ММ): корреляция с иммунофенотипом и лекарствнной устойчивость. / H.H. Калитин, М.Н. Костюкова, Е.С. Какпакова, H.H. Тупицын, А.Ф. Карамышева // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. -2012 - Т. 153, №6. - С. 865 - 869.

2. Калитин, H.H. Влияние ретиноевой кислоты на экспрессию мРНК генов факторов роста эндотелия создав VEGF и рецептора VEGFR1 в культурах клеток множественной миеломы человека. / H.H. Калитин, Е.С. Какпакова, А.Ф. Карамышева II Вопросы биологической, медицинской и фармацевтической химии. - 2012, №10, С. 64 - 68.

3. Буравцова, И.В. Экспрессия мРНК генов факторов роста семейства VEGF и их рецепторов у больных множественной миеломой: сопоставление с цитологическими характеристиками костного мозга. / И.В. Буравцова, H.H. Калитин, Ю.А. Саблина, Е.С. Какпакова, А.Ф. Карамышева, A.A. Ставровская, А.К. Голенков // Российский биотерапевтический журнал. - 2011 - Т. 8, №4, С. 17-24.

4. Калитин, H.H. Исследование участия рецептора ретиноевой кислоты RARa в регуляции генов факторов роста эндотелия сосудов VEGF-C и VEGF-D и их рецептора VEGFR3. / H.H. Калитин, И.В. Буравцова, Е.С. Какпакова, А.Ф. Карамышева // VII Международная конференция «Молекулярная генетика соматических клеток». - 2009. 22-25 Октября - С. 24-25.

5. Карамышева, А.Ф. Изменения VEGF-зависимых сигнальных систем в процессе злокачественной трансформации. / А.Ф. Карамышева, H.H. Калитин, М.Н. Костюкова, H.H. Тупицын // VIII Международная конференция «Молекулярная генетика соматических клеток». -2011. 6-9 Декабря - С. 50.

6. Kalitin, N.N. Vascular endothelial growth factor receptor 1 (VEGFR1) gene expression depends on immunophenotype of human multiple myeloma (MM) cells. / N.N. Kalitin, M.N. Kostjukova, E.S. Kakpakova, N.N. Tupitsyn, A.F. Karamysheva // Eur J Cancer. - 2011 - 47 (1), S. 644.

Подписано в печать 09711.12 Формат 60x84/16. Бумага офисная «8уе1оСору». Тираж 100 экз. Заказ № 1172. Отпечатано на участке множительной техники ФГБУ «РОНЦ им. Н.Н.Блохина» РАМН 115478, г. Москва, Каширское ш., 24

Оглавление диссертации Калитин, Николай Николаевич :: 2012 :: Москва

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Множественная миелома как злокачественное заболевание системы крови

1.1.1 .Общая характеристика и основы патогенеза данной нозологии.

1.1.2. Структурно-функциональные особенности главных антигенов суперсемейства СО, участвующих в В-клеточной дифференцировке.

1.1.3. Антигены СЭ45 и СЭ56 - связь с неопластической трансформацией.

1.2. Семейство факторов роста эндотелия сосудов и их рецепторов УЕСЕ: фундаментальные и прикладные аспекты.

1.2.1. Структурно-функциональные характеристики важнейших факторов роста УЕОРэ .21 1.2.1.2. Факторы роста эндотелия сосудов УЕОБ-С и УБвР-О.

1.2.2. Сигнальные каскады, запускаемые важнейшими факторами роста семейства УЕОИ в миеломных клетках.

1.2.2.1. УЕОРШ -связанные сигнальные процессы.

1.2.2.2. УЕОР112-связанные сигнальные процессы.

1.2.2.3. УЕОБЯЗ-связанные сигнальные процессы.

1.2.3. Антиангиогенная терапия.

1.3. Суперсемейство ядерных рецепторов ретиноевой кислоты: функциональный контроль экспрессии в норме и при патологии.

1.3.1. Рецепторы ЯАЯэ и ЮЖз: принципы регуляции экспрессии таргетных генов.

1.3.2. Неканонические модели КАЯ-опосредованного контроля транскрипции генов.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1. Клеточные культуры множественной миеломы (ММ) человека.

2.2. Опыты на клеточных культурах ММ человека.

Анализ пролиферативной активности клеточных культур ММ.

Оценка влияния а!ИА на изменение экспрессии генов семейства УЕОР.

Оценка цитотоксического эффекта колориметрическим методом (МТТ-тест).

2.3. Анализ экспрессии мРНК генов.

Выделение РНК из эукариотических клеток ММ.

Реакция обратной транскрипции.

Полимеразная цепная реакция.

2.4. Исследование клинического материала больных ММ.

Получение мононуклеарной фракции.

Проточная цитофлуориметрия.

Статистическая обработка данных.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3.1. Роль изменений экспрессии генов факторов роста семейства УЕСЕ и их рецепторов у больных множественной миеломой.

3.1.1. Экспрессия мРНК генов семейства УЕвР у больных множественной миеломой.

3.1.2. Сопоставление экспрессии мРНК генов семейства УЕОБ с некоторыми цитологическими характеристиками аспиратов костного мозга больных множественной миеломой.

3.1.3. Определение экспресии белка рецептора УЕОРЯЗ у больных множественной миеломой с помощью проточной цитометрии.

3.1.4. Исследование участия рецептора ретиноевой кислоты ЯАЯа в регуляции экспрессии генов УЕОБЯЗ-ассоциированной сигнальной системы.

3.2. Изменения экспрессии генов факторов роста семейства УЕСЕ и их рецепторов в клеточных культурах множественной миеломы человека.

3.2.1. Характеристика клеточных культур по экспрессии дифференцировочных маркеров

3.2.2. Исследование пролиферативной активности клеток культур ММ человека.

3.2.2.1. Определение скорости роста линий 11РМ1 1640,11РМ1 8226 и 1М 9.

3.2.2.2.Определение чувствительности клеточных культур ЯРМ1 1640,11РМ1 8226 и 1М 9 к протеасомному ингибитору бортезомиб (Уе1сас1е).

3.2.3. Роль АТЯА на изменение экспрессии генов семейства УЕОБ в клеточных культурах ММ человека.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

4.1. Корреляция цитологических показателей и экспрессии компонентов УЕОР-ассоциированных сигнальных систем у больных множественной миеломой.

4.2. Экспрессия мРНК генов УЕОРЯЗ-ассоциированной сигнальной системы, гена ИАКа и характеристика клеточных культур ММ человека.

4.3. Иммунофенотипический профиль плазматических клеток как гипотетический маркер: популяционная гетерогенность и гетерогенность свойств.

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации по теме "Онкология", Калитин, Николай Николаевич, автореферат

Актуальность проблемы

Как непреложный факт в системе фундаментальных представлений о сущности и этологии злокачественных нозологий различного генеза в настоящее время преобладает четкое понимание ключевой роли экспрессии факторов роста эндотелия сосудов УБОРя и их рецепторов УЕОРКб в процессах неоангиогенеза. Именно эти реакции и сопряженные с ними события формируют селективные условия для неограниченной пролиферации иммортализованных клеток, их клоногенной экспансии перитуморально и экстратуморально. Несмотря на диффузную природу множественной миеломы (ММ), благодаря которой трансформированные плазмоциты, являющиеся морфологическим субстратом опухоли, фактически оказываются гетерогенно распределеными в костном мозге и, кроме того, образуют метастатические отсевы в некоторых тканях организма, для их нормальной жизнедеятельности, как и в случае солидных опухолей, крайне важен адекватный уровень оксигенации и метаболизма. Новообразованные кровеносные и лимфатические сосуды обеспечивают эти процессы соответствующим структурным компонентом, создавая необходимые и достаточные условия для прогрессии ММ.

Известно, что контроль тканевого гомеостаза определяется совокупностью аутокринных и паракринных реакций, в которых паренхиматозные клетки функционально сопрягаются со стромальными. При ММ имеют место те же закономерности тканевой регуляции на уровне факоров роста и их рецепторов из семейства УЕОБ, что и в случае солидных опухолей. По сути, баланс аутокринных и паракринных реакций, обусловливающих экспрессию компонентов УЕОР-ассоциированных сигнальных систем, определяет вклад этих ангиогенных факторов в патогенез ММ, т.е. ангиогенный статус каждого конкретного больного.

Очевидно, что ангиогенный статус больных не только ММ, но и многими другими злокачественными опухолями человека, равно как и его изменения в течение заболевания, детерминирует терапевтическую стратегию, основанную на инактивации лиганда или рецептора в УБОРЛ-ассоциированных сигнальных системах, представляя достаточно новую, но крайне продуктивную линию в лечении онкологических больных, обогащающую традиционные схемы новыми лекарственными препаратами и простирающая вдаль горизонты таргентной терапии онкологических больных.

В последние годы все большее внимание исследователей по всему миру привлекают многогранные процессы неоваскулогенеза, причем вектор этих работ имеет как сугубо теоретическую, так и чисто практическую направленность. Одним из подтверждений подобной тенденции может служить синтез и внедрение в ряде стран мира в клиническую практику моноклональных антител к ключевому индуктору ангиогенеза -фактору УЕОР-А. Этот препарат, зарегистрированный под торговым названием Авастин™, продемонстрировал достаточно высокую эффективность в ингибировании роста миеломных клеток как в монорежиме, так и в комбинации, например, с иммуномодуляторными цитостатиками.

Помимо «выключения» самого верхнего этажа сигнальных каскадов, идущих от интегральных рецепторов УЕОРИб, все активнее изучаются препараты, имеющие ингибиторные потенции в отношении самих рецепторных тирозинкиназ - рецепторов УЕОРЛз. Вещества этой группы способны блокировать димеризацию и аутофосфорилирование молекул рецептора, таким образом предотвращая трансляцию сигналов к многочисленным внутриклеточным эффекторам.

Понимание механизмов, лежащих в основе модуляции экспрессии факторов роста и их рецепторов из семейства УЕОР в течение ММ, исследование корреляций между молекулярными изменениями и клиническими характеристиками у больных ММ и в культурах клеток ММ человека, а также сопоставление и обобщение фактического материала этих двух групп, безусловно, будет способствовать детализации и более глубокому пониманию одной из основополагающих сторон процесса канцерогенеза.

Цели и задачи исследования Цель настоящей работы состояла в изучении роли факторов роста эндотелия сосудов УЕОР-С, УЕОР-Б и их рецептора УЕвРЯЗ в злокачественной эволюции множественной миеломы, определении вклада функциональных аберраций их экспрессии в прогностическом плане и разработке концепции УЕОР-ассоциированного патогенеза течения данного заболевания.

Учитывая вышеназванные цели исследования, были выработаны следующие задачи:

1. Исследовать экспрессию мРНК факторов роста эндотелия сосудов УЕОР-С, УЕОР-Б и их рецептора УЕОРЛЗ у больных ММ до и после проведенного курса лечения.

2. Сравнить экспрессию мРНК УЕОР-С, УЕОР-Э/ УЕОтЗ с экспрессией мРНК УЕОР-А/УЕОРЮ, УЕОРЯ2 у этих же больных.

3. Сопоставить данные по экспрессии мРНК с некоторыми цитологическими показателями больных ММ.

4. Исследовать экспрессию мРНК факторов роста VEGF и их рецепторов на моделях культур клеток множественной миеломы человека линий RPMI1640, RPMI8226 и IM9.

5. Исследовать изменения экспрессии мРНК в клетках культур ММ под действием транс-ретиноевой кислоты (atRA).

Научная новизна и практическая значимость исследования

Во-первых, было установлено существование двух независимых сигнальных систем у больных ММ - VEGFR1-ассоциированной и VEGFR3-ассоциированной. Функционирование этих систем осуществляется в пределах двух самостоятельных сигнальных каскадов, без наличия лигандного перекрывания через рецептор VEGFR2. Это обстоятельство может иметь практическое применение при разработке подходов таргетной терапии в случае превалирования сигналинга по VEGFR1- или VEGFR3-nym.

Во-вторых, выявлена корреляция между рядом базовых цитологических показателей и уровнем экспрессии мРНК генов VEGFR1/VEGFR3-ассоциированных сигнальных систем у больных ММ.

В-третьих, впервые показано, что разнонаправленные изменения цитологических показателей и уровней экспрессии генов VEGFR1/VEGFR3-ассоциированных сигнальных систем у больных ММ свидетельствуют об инактивации соответствующих сигнальных систем по мере эволюции патологического процесса.

В-четвертых, отмечены конкордантные изменения экспрессии гена рецептора ретиноевой кислоты RARa и генов VEGFR1/VEGFR3-ассоциированных сигнальных систем, что свидетельствует о потенциальной регулируемости экспрессии соответствующих факторов роста и их рецепторов VEGFR1/VEGFR3-ассоциированных сигнальных систем трансфактором RARa.

В-пятых, в экспериментах на культурах клеток ММ человека было впервые обнаружено, что в зависимости от аберрантного иммунофенотипа, главным образом по антигенам СБ45 и СБ56, наблюдается принципиальное различие в экспрессии генов семейства УЕОР, чувствительности к препарату нового поколения бортезомибу, а также транс-ретиноевой кислоте (а111А).

Заключение диссертационного исследования на тему "Роль рецептора факторов роста эндотелия сосудов VEGFR3 и его лигандов VEGE-C и VEGE-D в прогрессии множественной миеломы"

Выводы

1. В аспиратах костного мозга большинства исследованных больных ММ (30/33) наблюдалась экспрессия рецепторов УЕСЕЯ1 и УЕСЕЯЗ, но не УЕСЕЯ2, и следовательно, у них активны 2 независимые сигнальные системы: УЕОР-А/ УЕОРШ и УЕвР-С, УЕОР-Б/УЕОРКЗ.

2. Обнаружена корреляция между коэкспрессией генов сигнальных систем А/УЕСЕЯ1, УЕСЕ-С, УЕСР-В/УЕСРЯЗ и уровнем плазмоцитоза у больных ММ: при увеличении количества плазмоцитов наблюдается снижение или инактивация экспрессии компонентов одной или обеих вышеназванных систем. Данные проточной цитометрии также указывают на снижение экспрессии белка УЕОРЯЗ на поверхности плазматических клеток при повышенном плазмоцитозе.

3. Показано, что у больных ММ наблюдается определенная корреляция между экспрессией гена рецептора ретиноевой кислоты ЯАЯа и экспрессией генов УЕСЕ-С, УЕСР-В и их рецептора УЕСРЯЗ.

4. Исследование 3 клеточных линий ММ человека 11РМ1 1640, ИРМ1 8226 и 1М 9 показало, что в них экспрессируются гены факторов роста УЕСР-А и УЕСР-В. Экспрессия гена рецептора УЕСЕЯ1 была обнаружена в линии 1М 9 (СБ45+, С056-), но не в линиях ЯРМ1 1640 и ЯРМ1 8226 (СБ45-, СБ56+), что указывает на возможность существования корреляции между экспрессией рецепторов УЕОРЯ и антигенов аберрантного фенотипа СБ45, СБ56 и СБ 19.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Калитин, Николай Николаевич

1. Adams, J. Development of the proteasome inhibitor PS-34H Adams J// Oncologist, 2002; 7: 9-16.

2. Akahane, M. Vascular endothelial growth factor-D is a survival factor for human breast carcinoma cells/ Akahane M, Akahane T, Matheny SL, Shah A, Okajima E, Thorgeirsson UP// Int. J. Cancer, 2006; 118: 841-849.

3. Alexander, C.M. Syndecan-1 is required for Wnt-1 -induced mammary tumorigenesis in mice! C.M. Alexander, F. Reichsman, M.T. Hinkes, J. Lincecum, K.A. Becker, S. Cumberledge, M. Bemfield//Nat. Genet., 2000; 25: 329-332.

4. Alsayed, Y. Activation of Racl and the p38 mitogen-activatedprotein kinase pathway in response to all-trans-retinoic acid/ Alsayed Y, Uddin S, Mahmud N, Lekmine F, Kalvakolanu DV, Minucci S, Bokoch G, Platanias LC// J. Biol. Chem., 2001; 276: 40124019.

5. Alt, F.W. Regulation of genome rearrangement events during lymphocyte differentiation/ F.W. Alt, Т.К. Blackwell, R.A. DePinho, M.G. Reth, G.D. Yancopoulos// Immunol. Rev.,1986; 89: 5-30.

6. Altin, J.G. The role of CD45 and CD45-associated molecules in T cell activation/ Altin JG, Sloan EK// Immunol. Cell Biol., 1997; 75: 430-445.

7. Anand, A.R. HIV-1 gpl20-mediated apoptosis ofT cells is regulated by the membrane tyrosine phosphatase CD45I Anand AR, Ganju RKII J. Biol. Chem., 2006; 281: 1228912299.

8. Anargyrou, K. Novel anti-myeloma agents and angiogenesisl Anargyrou K, Dimopoulos MA, Sezer O, Terpos E// Leuk. Lymph., 2008; 49: 677-689.

9. Angel, P. Phorbol ester-inducible genes contain a common cis element recognized by a TPA-modulated trans-acting factor/ Angel P, Imagawa M, Chiu R, Stein B, Imbra RJ, Rahmsdorf HJ, Jonat C, Herrlich P, Karin Mil Cell, 1987; 49: 729-739.

10. Aprelikova, O. FLT4, a novel class III receptor tyrosine kinase in chromosome 5q33-qterl Aprelikova O, Pajusola K, Partanen J, Armstrong E, Alitalo R, Bailey SK, McMahon J, Wasmuth J, Huebner K, Alitalo KII Cancer Res., 1992; 52: 746-748.

11. Aranda, A. and Pascual, A. Nuclear hormone receptors and gene expression! Aranda A, Pascual AII Physiol. Rev., 2001; 81: 1269-304.

12. Bankovich, A.J. Structural insight into pre-B cell receptor function/ A.J. Bankovich, S. Raunser, Z.S. Juo, T. Walz, M.M. Davis, K.C. Garcia // Science, 2007;316:291-294

13. Bannister, A. J. Stimulation of c-Jun activity by CBP: c-Jun residues Ser63/73 are required for CBP induced stimulation in vivo and CBP binding in vitro/ Bannister AJ, Oehler T, Wilhelm D, Angel P, Kouzarides Til Oncogene, 1995; 11: 2509-2514.

14. Barlogie, B. High-dose chemoradiotherapy and autologous bone marrow transplantation for resistant multiple myeloma! Barlogie B, Alexanian R, Dicke KA, Zagars G, Spitzer G, Jagannath S, Horwitz L// Blood, 1987; 70: 869-872.

15. Barlogie, B. High-dose melphalan with autologous bone marrow transplantation for multiple myeloma! Barlogie B, Hall R, Zander A, Dicke K, Alexanian RII Blood, 1986; 67: 1298-1301.

16. Bastien, J. TFIIH interacts with the retinoic acid receptor gamma andphosphorylates its AF-1-activating domain through cdk7/ Bastien J, Adam-Stitah S, Riedl T, Egly JM, Chambon P, Rochette-Egly C// J. Biol. Chem., 2000; 275: 21896-21904.

17. Bastien, J. and Rochette-Egly, C. Nuclear retinoid receptors and the transcription of retinoid-target genes/ Bastien J, Rochette-Egly C// Gene, 2004; 328: 1-16.

18. Bastien, J. The phosphoinositide 3-kinase/Akt pathway is essential for the retinoic acid-induced differentiation of F9 cells/ Bastien J, Plassat JL, Payrastre B, Rochette-Egly C// Oncogene, 2006; 25: 2040-2047.

19. Bataille, R. Serum beta2 microglobulin and survival duration in multiple myeloma: a simple reliable marker for stagingI Bataille R, Durie BG, Grenier J// Brit. J. Haemat., 1983;55:439-447.

20. Bates, D.O. Regulation of microvascular permeability by vascular endothelial growth factors/ Bates DO, Hillman NJ, Williams B, Neal CR, Pocock TM// J. Anat., 2002, 200, 581-97.

21. Beauvais, D.M. Syndecan-1 -mediated cell spreading requires signaling by alphavbeta3 integrins in human breast carcinoma cells/ D.M. Beauvais, A.C. Rapraeger// Exp. Cell. Res., 2003 ; 286 : 219-232.

22. Beauvais, D.M. The syndecan-1 ectodomain regulates alphavbeta3 integrin activity in human mammary carcinoma cells/ D.M. Beauvais, B.J. Burbach, A.C. Rapraeger// J. Cell. Biol., 2004 ; 167 : 171-181.

23. Becker, J. Neuroblastoma progression correlates with downregulation of the lymphangiogenes is inhibitor sVEGFR-2/ Becker J, Pavlakovic H, Ludewig F, Wilting F, Weich HA, Albuquerque R, Ambati J, Wilting J// Clin. Cancer Res., 2010; 16: 14311441.

24. Becker, R.S. Somatic diversification of immunoglobulin heavy chain VDJ genes: evidence for somatic gene conversion in rabbits/ R.S. Becker and K.L. Knight// Cell, 1990; 63: 987-997.

25. Bènè, M.C. CD 10 in acute leukemias. GEIL (Groupe d'Etude Immunologique des Leucémies)/ U.C. Bènè, G.C. Faure//Haematologica, 1997; 82: 205-210.

26. Bhardwaj, S. VEGF-A, VEGF-D and VEGF-D(DeltaNDeltaC) induced intimai hyperplasia in carotid arteries! Bhardwaj S, Roy H, Heikura T, Ylà-Herttuala S// Eur. J. Clin. Invest., 2005; 35: 669-676.

27. Bijian, K. Collagen-mediated survival signaling is modulated by CD45 in Jurkat T cells! Bijian K, Zhang L, Shen SH// Mol. Immunol., 2007; 44: 3682-3690.

28. Bladé, J. Bortezomib: a valuable new antineoplastic strategy in multiple myeloma! Bladé J, Cibeira MT, Rosinol L// Acta Oncol., 2005; 44: 440-448.

29. Bour, G. Protein kinases and the proteasome join in the combinatorial control of transcription by nuclear retinoic acid receptors! Bour G, Lalevee S, Rochette-Egly C// Trends Cell Biol., 2007; 17: 302-309.

30. Bruck, N. A coordinated phosphorylation cascade initiated by p38MAPK/MSKl directs RARalpha to target promoters! Bruck N, Vitoux D, Ferry C, Duong V, Bauer A, de Thé H, Rochette-Egly C// EMBO J., 2009; 28: 34^17.

31. Bushue, N. and Wan, Y.J. Retinoid pathway and cancer therapeutics! Bushue N, Wan YJ// Adv. Drug Deliv. Rev., 2010; 62: 1285-1298.

32. Cabebe, E. and Wakelee, H. Sunitinib: a newly approved small-molecule inhibitor of angiogenesis! Cabebe E, Wakelee HII Drugs Today, 2006; 42: 387-398.

33. Carey, D.J. Syndecans: multifunctional cell-surface co-receptors! D.J. Carey// Biochem. J., 1997; 327: 1-16.

34. Carmeliet, P. Angiogenesis in life, disease and medicine/ Carmeliet P// Nature, 2005; 438: 932-936.

35. Carmeliet, P. Branching morphogenesis and antiangiogenesis candidates: tip cells lead the way/ Carmeliet P, De Smet F, Loges S, Mazzone Mil Nat. Rev. Clin. Oncol., 2009; 6: 315-326.

36. Chamhon, P. A decade of molecular biology of retinoic acid receptors/ Chambon P// FASEB J., 1996; 10: 940-954.

37. Chang, D.H. Enhancement of ligand-dependent activation of human natural killer T cells by lenalidomide: therapeutic implications/ Chang DH, Liu N, Klimek V, Hassoun H, Mazumder A, Nimer SD, Jagannath S, Dhodapkar MV// Blood, 2006; 108: 618-621.

38. Chauhan, D. Proteasome inhibitor therapy in multiple myeloma/ Chauhan D, Hideshima T, Mitsiades C, Richardson P, Anderson KC// Mol. Cancer Ther., 2005; 4: 686-92.

39. Chen, H. Neuropilin-2, a novel member of the neuropilin family, is a high affinity receptor for the semaphorins Sema E and Sema IV but not Sema //// H. Chen, A. Chedotal, Z. He, C.S. Goodman, M. Tessier-Lavigne// Neuron, 1997; 19: 547- 59.

40. Chen, I.J. Lateral compartmentalization of T cell receptor versus CD45 by galectin-N-glycan binding and microfilaments coordinate basal and activation signaling/ Chen IJ, Chen HL, Demetriou Mil J. Biol. Chem., 2007; 282: 35361-35372.

41. Chilov, D. Genomic organization of human and mouse genes for vascular endothelial growth factor C/ Chilov D, Kukk E, Taira S, Jeltsch M, Kaukonen J, Palotie A, Joukov V, Alitalo YJ/ J. Biol. Chem., 1997; 272: 25176-25183.

42. Chini, E. N. CD38 as a regulator of cellular NAD: a novel potential pharmacological target for metabolic conditions/ E.N. Chini// Curr. Pharm. Des., 2009; 15: 57-63.

43. Clezardin, P. The antitumor potential of bisphosphonates/ Clezardin P// Semin. Oncol., 2002; 29:33-42.

44. Collette, M. Crucial role of phosphatase CD45 in determining signaling and proliferation of human myeloma cells! Collette M, Descamps G, Pellat-Deceunynck C, Bataille R, Amiot Mil Eur. Cytokine Netw., 2007; 18: 120-126.

45. Collins, C.D. Multiple myeloma/ C.D. Collins// Cancer Imaging , 2004; 4: 47-53.

46. Cook, S. J. The repertoire of fos and jun proteins expressed during the G1 phase of the cell cycle is determined by the duration of mitogen-activated protein kinase activation! Cook SJ, Aziz N, McMahon M//Mol. Cell. Biol., 1999; 19:330-341.

47. Cook, S. J. Regulation of cell cycle re-entry by growth, survival and stress signalling pathways/ Cook SJ, Balmanno K, Garner A, Millar T, Taverner C, Todd D// Biochem Soc Trans., 2000; 28: 233-240.

48. Cunningham, S. A. Interactions of FLT-1 and KDR with phospholipase C gamma: identification of the phosphotyrosine binding sites/ Cunningham SA, Arrate MP, Brock TA, Waxham MN// Biochem. Biophys. Res. Commun., 1997; 240: 635-639.

49. D'Amato, R.J. Thalidomide is an inhibitor of angiogenesis! D'Amato RJ, Loughnan MS, Flynn E, Folkman J// Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1994; 91: 4082^1085.

50. Dankbar, B. Vascular endothelial growth factor and interleukin-6 in paracrine tumor-stromal cell interactions in multiple myeloma! Dankbar B, Padro T, Leo R, Feldmann B, Kropff M, Mesters RM, Serve H, Berdel WE, Kienast J// Blood, 2000; 95: 2630-2636.

51. Datta, S. R. Cellular survival: a play in three Aktsl Datta SR, Brunet A, Greenberg ME// Genes Dev., 1999; 13: 2905-2927.

52. Desharnais, P. Involvement of CD45 in DNA fragmentation in apoptosis induced by mitochondrial perturbing agents! Desharnais P, Dupéré-Minier G, Hamelin C, Devine P, Bernier J//Apoptosis, 2008; 13: 197-212.

53. Dey, N. CSK controls retinoic acid receptor (RAR) signaling: a RAR-c-SRC signaling axis is required for neuritogenic differentiation! Dey N, De PK, Wang M, Zhang H, Dobrota EA, Robertson KA, Durden DL// Mol. Cell. Biol., 2007; 27: 4179^4197.

54. Diaz, B. Regulation of vascular endothelial growth factor expression in human keratinocytes by retinoids! Diaz BV, Lenoir MC, Ladoux A, Freiin C, Démarchez M, Michel S// J. Biol. Chem, 2000; 275: 642-650.

55. Dilworth, F.J. and Chambon, P. Nuclear receptors coordinate the activities of chromatin remodeling complexes and coactivators to facilitate initiation of transcription! Dilworth FJ, Chambon P// Oncogene, 2001; 20: 3047-3054.

56. Dolle, P. Developmental expression of retinoic acid receptors (RARs)l Dolle P// Nucl. Recept. Signal., 2009; 7: e006.

57. Dosch, D. D. and Ballmer-Hofer, K. Transmembrane domain-mediated orientation of receptor monomers in active VEGFR-2 dimers! Dosch DD, Ballmer-Hofer K// FASEB J., 2010; 24: 32-38.

58. Drexler, H.C. Inhibition of proteasome function induces programmed cell death in proliferating endothelial cells! Drexler HC, Risau W, Konerding MAII FASEB J., 2000; 14: 65-77.

59. Dumont, D. J. Cardiovascular failure in mouse embryos deficient in VEGF receptor-3/ Dumont DJ, Jussila L, Taipale J, Lymboussaki A, Mustonen T, Pajusola K, Breitman M, Alitalo KII Science, 1998; 282: 946-949.

60. Duong, V. and Rochette-Egly, C. The molecular physiology of nuclear retinoic acid receptors. From health to disease! Duong V, Rochette-Egly C// Biochim. Biophys. Acta, 2011; 1812: 1023-1031.

61. Earl, L.A. CD45 glycosylation controls T-cell life and death! Earl LA, Baum LG// Immunol. Cell Biol., 2008; 86: 608-615.

62. Efimova, T. Regulation of human involucrin promoter activity by a protein kinase C, Ras, MEKK1, MEK3, p38/RK, API signal transduction pathway/ Efimova T, LaCelle P, Welter JF, Eckert RL// J. Biol. Chem., 1998; 273: 24387-24395.

63. Egea, P.F. Effects of ligand binding on the association properties and conformation in solution of retinoic acid receptors RXR and RAR! Egea PF, Rochel N, Birck C, Vachette P, Timmins PA, Moras D// J. Mol. Biol., 2001; 307: 557-576.

64. Eifert, C. Global gene expression profiles associated with retinoic acid-induced differentiation of embryonal carcinoma cells/ Eifert C, Sangster-Guity N, Yu LM, Chittur SV, Perez AV, Tine JA, McCormick PJ// Mol. Reprod. Dev., 2006; 73: 796-824.

65. Endo, K. Cleavage of syndecan-1 by membrane type matrix metalloproteinase-1 stimulates cell migration! K. Endo, T. Takino, H. Miyamori, H. Kinsen, T. Yoshizaki, M. Furukawa, H. Sato// J. Biol. Chem., 2003; 278: 40764-40770.

66. Enholm, B. Adenoviral expression of vascular endothelial growth factor-C induces lymphangiogenesis in the skin! Enholm B, Karpanen T, Jeltsch M, Kubo H, Stenback F, Prevo R, Jackson DG, Yla-Herttuala S, Alitalo K// Circ. Res., 2001; 88: 623-629.

67. Eswarakumar, V.P. Cellular signaling by fibroblast growth factor receptors! Eswarakumar VP, Lax I, Schlessinger J// Cytokine Growth Factor Rev., 2005; 16: 139— 149.

68. Farnebo, F. Restricted expression pattern of vegf-d in the adult and fetal mouse: high expression in the embryonic lung! Farnebo F, Piehl F, Lagercrantz J// Biochem. Biophys. Res. Commun, 1999; 257: 891-894.

69. Fearon, D.T. The CD19/CR2/TAPA-1 complex of B lymphocytes: linking natural to acquired immunity! D.T. Fearon, R.H. Carter// Ann. Rev. Immunol., 1995; 13: 127-149.

70. Felberg, J. Stable interdomain interaction within the cytoplasmic domain of CD45 increases enzyme stability! Felberg J, Johnson P// Biochem. Biophys. Res. Commun., 2000; 271:292-298.

71. Ferrara, N. The biology ofVEGF and its receptors! N. Ferrara, H.P. Gerber, J. LeCouter// Nat. Med. 2003; 9: 669-676.

72. Ferrara, N. Vascular endothelial growth factor: basic science and clinical progress / Ferrara N// Endocr. Rev., 2004; 25: 581-611.

73. Ferrara, N. VEGF-A: a critical regulator of blood vessel growth! N. Ferrara// Eur. Cytokine Netw., 2009; 20: 158-63.

74. Fey, M. F. Normal and malignant hematopoiesis! M. F. Fey// Annals of Oncology, 2007; 18: 9-13.

75. Fina, L. Expression of the CD34 gene in vascular endothelial cells! L. Fina, H.V. Molgaard, D. Robertson, N.J. Bradley, P. Monaghan, D. Delia, D.R. Sutherland, M.A. Baker, M.F. Greaves// Blood, 1990; 75:2417-2426.

76. Flajollet, S. Distinct roles of the steroid receptor coactivator 1 and of MED1 in retinoid-induced transcription and cellular differentiation! Flajollet S, Lefebvre B, Rachez C, Lefebvre P// J. Biol. Chem., 2006; 281: 20338-20348.

77. Fong, G. H. Role of the Flt-1 receptor tyrosine kinase in regulating the assembly of vascular endothelium/ Fong GH, Rossant J, Gertsenstein M, Breitman ML// Nature, 1995; 376: 66-70.

78. Francavilla, C. Neural cell adhesion molecule regulates the cellular response to fibroblast growth factor! Francavilla C, Loeffler S, Piccini D, Kren A, Christofori G, Cavallaro U// J. Cell Sci., 2007; 120: 4388-4394.

79. Francavilla, C. The binding of NCAM to FGFR1 induces a specific cellular response mediated by receptor trafficking! Francavilla C, Cattaneo P, Berezin V, Bock E, Ami D, de Marco A, Christofori G, Cavallaro U// J. Cell Biol., 2009; 187: 1101-1116.

80. Fuh, G. Requirements for binding and signaling of the kinase domain receptor for vascular endothelial growth factor! Fuh G, Li B, Crowley C, Cunningham B, Wells JA// J. Biol. Chem., 1998; 273: 11197-11204.

81. Funa, N. Dysfunctional microvasculature as a consequence of shb gene inactivation causes impaired tumor growth! Funa NS, Kriz V, Zang G, Calounova G, Akerblom B, Mares J, Larsson E, Sun Y, Betsholtz C, Welsh M// Cancer Res., 2009; 69: 2141-2148.

82. Gerber, H.P. Vascular endothelial growth factor induces expression of the antiapoptotic proteins Bcl-2 and A1 in vascular endothelial cells! Gerber HP, Dixit V, FerraraN//J. Biol. Chem., 1998; 273: 13313-13316.

83. Gerber, H.P. VEGF regulates haematopoietic stem cell survival by an internal autocrine loop mechanism! Gerber HP, Malik AK, Solar GP, Sherman D, Liang XH, Meng G, Hong K, Marsters JC, Ferrara N// Nature, 2002; 417: 954-958.

84. Germain, P. Co-regulator recruitment and the mechanism of retinoic acid receptor synergy! Germain P, Iyer J, Zechel C, Gronemeyer H// Nature, 2002; 415: 187— 192.

85. Germain, P. International Union of Pharmacology. LX. Retinole acid receptors/ Germain P, Chambon P, Eichele G, Evans RM, Lazar MA, Leid M, De Lera AR, Lotan R, Mangelsdorf DJ, Gronemeyer H// Pharmacol. Rev., 2006; 58: 712-725.

86. Germain, P. Overview of nomenclature of nuclear receptors/ Germain P, Staels B, Dacquet C, Spedding M, Laudet VII Pharmacol. Rev., 2006; 58: 685-704.

87. German, Z. Molecular basis of cell-specific endothelial nitric-oxide synthase expression in airway epithelium/ German Z, Chambliss KL, Pace MC, Arnet UA, Lowenstein CJ, Shaul PW// J. Biol. Chem., 2000; 275: 8183-8189.

88. Gianni, M. P38MAPK-dependent phosphorylation and degradation of SRC-3/AIBI and RARalpha-mediated transcription/ Gianni M, Parrella E, Raska I Jr, Gaillard E, Nigro EA, Gaudon C, Garattini E, Rochette-Egly C/l EMBO J., 2006; 25: 739-751.

89. Grosskreutz, C. L. Vascular endothelial growth factor-induced migration of vascular smooth muscle cells in vitro! Grosskreutz CL, Anand-Apte B, Dupläa C, Quinn TP, Terman BI, Zetter B, D'Amore PAII Microvasc. Res., 1999; 58: 128-136.

90. Himadri, R. Biology of vascular endothelial growth factors/ Roy H, Bhardwaj S, Ylä-Herttuala S// FEBS Let., 2006; 580: 2879-2887.

91. Hirabayashi, K. Altered proliferative and metastatic potential associated with increased expression of syndecan-I! K. Hirabayashi, F. Numa, Y. Suminami, A. Murakami, T. Murakami, H. Kato// Tumour. Biol., 1998; 19: 454^63.

92. Hiratsuka, S. Flt-1 lacking the tyrosine kinase domain is sufficient for normal development and angiogenesis in mice! Hiratsuka S, Minowa O, Kuno J, Noda T, Shibuya Mil Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1998; 95: 9349-9354.

93. Holen, I. Evidence of a role for a non-matrix-type metalloproteinase activity in the shedding of syndecan-1 from human myeloma cells/ I. Holen, N.L. Drury, P.G. Hargreaves, P.I. Croucher// Br. J. Haematol., 2001; 114: 414-421.

94. Holmes, N. CD45: all is not yet crystal clear/ Holmes N// Immunology, 2005; 117:145-155.

95. Holmqvist, K. The Shb adaptor protein causes Src-dependent cell spreading and activation of focal adhesion kinase in murine brain endothelial cells! Holmqvist K, Cross M, Riley D, Welsh M// Cell Signal., 2003; 15: 171-179.

96. Hood, J.D. VEGF upregulates ecNOS message, protein, and NO production in human endothelial cells/ Hood JD, Meininger CJ, Ziche M, Granger HJ// Am. J. Physiol., 1998;274: 1054-1058.

97. Imai, K. and Takaoka, A. Comparing antibody and small-molecule therapies for cancer! Imai K, Takaoka A!! Nat. Rev. Cancer, 2006; 6: 714-727.

98. Ito, N. Identification of vascular endothelial growth factor receptor-1 tyrosine phosphorylation sites and binding of SH2 domain-containing molecules! Ito N, Wernstedt C, Engstrom U, Claesson-Welsh L//J. Biol. Chem., 1998; 273: 23410-23418.

99. Jeltsch, M. Hyperplasia of lymphatic vessels in VEGF-C transgenic mice! Jeltsch M, Kaipainen A, Joukov V, Meng X, Lakso M, Rauvala H, Swartz M, Fukumura D, Jain RK, Alitalo YJ! Science, 1997; 276: 1423-1425.

100. Joukov, V. Proteolytic processing regulates receptor specificity and activity of VEGF-CI Joukov V, Sorsa T, Kumar V, Jeltsch M, Claesson-Welsh L, Cao Y, Saksela O, Kalkkinen N, Alitalo Kll EMBO J., 1997; 16: 3898-3911.

101. Joukov, V. Vascular endothelial growth factors VEGF-B and VEGF-CI Joukov V, Kaipainen A, Jeltsch M, Pajusola K, Olofsson B, Kumar V, Eriksson U, Alitalo YJ!J Cell Physiol., 1997; 173: 211-215.

102. Kamei, Y. A CBP integrator complex mediates transcriptional activation and AP-1 inhibition by nuclear receptors/ Kamei Y, Xu L, Heinzel T, Torchia J, Kurokawa R, Gloss B, Lin SC, Heyman RA, Rose DW, Glass CK, Rosenfeld MG// Cell, 1996; 85: 403^414.

103. Kappas, N. C. The VEGF receptor Flt-1 spatially modulates Flk-1 signaling and blood vessel branching! Kappas NC, Zeng G, Chappell JC, Kearney JB, Hazarika S, Kallianos KG, Patterson C, Annex BH, Bautch VL// J. Cell Biol., 2008; 181: 847-858.

104. Kappel, A. Role of SCL/Tal-1, GATA, and ets transcription factor binding sites for the regulation of flk-l expression during murine vascular development! Kappel A, Schlaeger TM, Flamme I, Orkin SH, Risau W, Breier G// Blood, 2000; 96: 3078-3085.

105. Kappert, K. Tyrosine phosphatases in vessel wall signaling! Kappert K, Peters KG, Böhmer FD, Ostman A!! Cardiovasc. Res., 2005; 65: 587-598.

106. Karkkainen, M.J. Vascular endothelial growth factor receptors in the regulation of angiogenesis and lymphangiogenesis/ Karkkainen MJ, Petrova TV// Oncogene, 2000; 19:5598-5605.

107. Karpanen, T. Lymphatic vessels as targets of tumor therapy?! Karpanen T, Alitalo KII J. Exp. Med., 2001; 194: 37^12.

108. Kendall, R. L. and Thomas, K. A. Inhibition of vascular endothelial cell growth factor activity by an endogenously encoded soluble receptor! Kendall RL, Thomas KAII Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1993; 90: 10705-10709.

109. Kendall, R. L. Specificity of vascular endothelial cell growth factor receptor ligand binding domains/ Kendall RL, Wang G, DiSalvo J, Thomas KAII Biochem. Biophys. Res. Comraun, 1994; 201: 326-330.

110. Keriel, A. XPD mutations prevent TFIIH-dependent transactivation by nuclear receptors and phosphorylation of RARalphal Keriel A, Stary A, Sarasin A, Rochette-Egly C, Egly JM// Cell, 2002; 109: 125-135.

111. Khandekar, M. A Gata2 intronic enhancer confers its pan-endothelia-specific regulation/ Khandekar M, Brandt W, Zhou Y, Dagenais S, Glover TW, Suzuki N, Shimizu R, Yamamoto M, Lim KC, Engel JD// Development, 2007; 134: 1703-1712.

112. Kim, C.W. Members of the syndecan family of heparan sulfate proteoglycans are expressed in distinct cell-, tissue-, and development-specific patterns/ C.W. Kim, O.A. Goldberger, R.L. Gallo, M. Bernfield// Mol. Biol. Cell, 1994; 5: 797-805.

113. Kimlinger, T. Differential expression of vascular endothelial growth factors and their receptors in multiple myeloma/ T. Kimlinger, M. Kline, S. Kumar, J. Lust, T. Witzig, S. V. Rajkumar// Haematologica, 2006; 98: 1033-1040.

114. Kiselyov, V. Structural biology of NCAM homophilic binding and activation of FGFRI Kiselyov VV, Soroka V, Berezin V, Bock Ell J. Neurochem., 2005; 94: 11691179.

115. Kisselev, A.F. and Goldberg, A.L. Proteasome inhibitors: from research tools to drug candidates/ Kisselev AF, Goldberg ALII Chem. Biol., 2001; 8: 739-758.

116. Kitajima, K. GATA-2 and GATA-2/ER display opposing activities in the development and differentiation of blood progenitors! Kitajima K, Masuhara M, Era T, Enver T, Nakano T/l EMBO J., 2002; 21: 3060-3069.

117. Kobayashi, S. The c-Cbl/CD2AP complex regulates VEGF-induced endocytosis and degradation of Flt-1 (VEGFR-1)l Kobayashi S, Sawano A, Nojima Y, Shibuya M, Maru Yll FASEB J., 2004; 18: 929-931.

118. Kolodkin, A.L. Neuropilin is a semaphorin III receptor! A.L. Kolodkin, D.V. Levengood, E.G. Rowe, Y.T. Tai, R.J. Giger, D.D. Ginty// Cell, 1997; 90: 753- 62.

119. Krause, D.S. CD34: structure, biology, and clinical utility! D.S. Krause, M.J. Fackler, C.I. Civin, W.S. May// Blood, 1996; 87: 1-13.

120. Kroll, J. A novel function ofVEGF receptor-2 (KDR): rapid release of nitric oxide in response to VEGF-A stimulation in endothelial cells! Kroll J, Waltenberger J// Biochem. Biophys. Res. Commun, 1999; 265: 636-639.

121. Kroll, J. and Waltenberger, J. The vascular endothelial growth factor receptor KDR activates multiple signal transduction pathways in porcine aortic endothelial cells! Kroll J, Waltenberger ill J. Biol. Chem., 1997; 272: 32521-32527.

122. Kuiper, G.G. Cloning of a novel receptor expressed in rat prostate and ovary/ Kuiper GG, Enmark E, Pelto-Huikko M, Nilsson S, Gustafsson JAII Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 1996; 93: 5925 5930.

123. Kukk, E. VEGF-C receptor binding and pattern of expression with VEGFR-3 suggests a role in lymphatic vascular development! Kukk E, Lymboussaki A, Taira S, Kaipainen A, Jeltsch M, Joukov V, Alitalo Kll Development, 1996; 122: 3829-3838.

124. Kumagai, M. Ligation of CD38 suppresses human B lymphopoiesis! M. Kumagai, E. Coustan-Smith, D.J. Murray, O. Silvennoinen, K.G. Murti, W.E. Evans, F. Malavasi, D.Campana J.Exp.Med., 1995; 181: 1001-1010.

125. Lam, K.P. In vivo ablation of surface immunoglobulin on mature B cells by inducible gene targeting results in rapid cell death/ K.P. Lam, R. Kuhn, K. Rajewsky// Cell, 1997; 90: 1073-1083.

126. Lamalice, L. Phosphorylation of tyrosine 1214 on VEGFR2 is required for VEGF-induced activation of Cdc42 upstream of SAPK2/p38! Lamalice L, Houle F, Jourdan G, Huot J// Oncogene, 2004; 23: 434-445.

127. LeBien, T.W. B lymphocytes: how they develop and function! T.W. LeBien, T.F. Tedder//Blood, 2008; 112: 1570-1580.

128. LeBien, T.W. Fates of human B-cell precursors/ T.W. LeBien/// Blood, 2000; 96: 9-23.

129. Lefebvre, P. Transcriptional activities of retinoic acid receptors! Lefebvre P, Martin PJ, Flajollet S, Dedieu S, Billaut X, Lefebvre B// Vitam. Horm., 2005; 70: 199264.

130. Leid, M. Multiplicity generates diversity in the retinoic acid signalling pathways/ Leid M, Kastner P, Chambon VII Trends Biochem. Sci., 1992; 17: 427^133.

131. Lemmon, M. A. and Schlessinger, J. Cell signaling by receptor tyrosine kinases! Lemmon MA, Schlessinger J// Cell, 2010; 141: 1117-1134.

132. Leppa, S. Differential regulation of c-Jun by ERK and JNK during PCI2 cell differentiation! Leppa S, Saffrich R, Ansorge W, Bohmann D// EMBO J., 1998; 17: 4404-4413.

133. Leshchyns'ka, I. Neural cell adhesion molecule (NCAM) association with PKCbeta2 via betal spectrin is implicated in NCAM-mediated neurite outgrowth! Leshchyns'ka I, Sytnyk V, Morrow JS, Schachner Ml! J. Cell. Biol., 2003; 161: 625-639.

134. Li, W.W. Antiangiogenesis in haematological malignancies! Li WW, Hutnik M, Gehr Gil Brit. J. Haemat., 2008; 143: 622-631.

135. Liao, H. J. Absence of erythrogenesis and vasculogenesis in Plcgl-deficient mice! Liao HJ, Kume T, McKay C, Xu MJ, Ihle JN, Carpenter Gil J. Biol. Chem., 2002; 277: 9335-9341.

136. Liu, W. Heparan sulfate proteoglycans as adhesive and anti-invasive molecules. Syndecans and glypican have distinct functions/ W. Liu, E.D. Litwack, M.J. Stanley, J.K. Langford, A.D. Lander, R.D. Sanderson// J. Biol. Chem., 1998; 273: 22825-22832.

137. Lohela, M. VEGFs and receptors involved in angiogenesis versus lymphangiogenesis/ Lohela M, Bry M, Tammela T, Alitalo YJ! Current Opinion in Cell Biology, 2009; 21: 154-165.

138. Lorquet, S. Soluble forms of VEGF receptor-1 and -2 promote vascular maturation via mural cell recruitmentI Lorquet S, Berndt S, Blacher S, Gengoux E, Peulen O, Maquoi E, Noel A, Foidart JM, Munaut C, Pequeux C// FASEB J., 2010; 24: 3782-3795.

139. Los, M. Apoptin, a tumor-selective killer/ Los M, Panigrahi S, Rashedi I, Mandal S, Stetefeld J, Essmann F, Schulze-Osthoff K// Biochim. Biophys. Acta, 2009; 1793: 1335-1342.

140. Maecker, H.D. The tetraspanin superfamily: molecular facilitators/ H.T. Maecker, S.C. Todd, S. Levy// FASEB J., 1997; 11: 428-442.

141. Mahmoud, M.S. Induction of CD45 expression and proliferation in U-266 myeloma cell line by interleukin-6! Mahmoud MS, Ishikawa H, Fujii R, Kawano MM// Blood, 1998; 92: 3887-3897.

142. Makinen, T. Isolated lymphatic endothelial cells transduce growth, survival and migratory signals via the VEGF-C/D receptor VEGFR-3/ Mäkinen T, Veikkola T,

143. Mustjoki S, Karpanen T, Catimel B, Nice EC, Wise L, Mercer A, Kowalski H, Kerjaschki D, Stacker SA, Achen MG, Alitalo K// EMBO J., 2001; 20: 4762-4773.

144. Malavasi, F. Evolution and function of the ADP ribosyl cyclase/CD38 gene family in physiology and pathology/ F. Malavasi, S. Deaglio, A. Funaro, E. Ferrero, A.L. Horenstein, E. Ortolan, T. Vaisitti, S.Aydin// Physiol. Rev., 2008; 88: 841-886.

145. Mangelsdorf, D.J. and Evans, R.M. The RXR heterodimers and orphan receptors/ Mangelsdorf DJ, Evans RM// Cell, 1995; 83: 841-850.

146. Mark, M. Function of retinoic acid receptors during embryonic development! Mark M, Ghyselinck NB, Chambon P// Nucl. Recept. Signal., 2009; 7: e002.

147. Masia, S. Rapid, nongenomic actions of retinoic acid on phosphatidylinositol-3-kinase signaling pathway mediated by the retinoic acid receptor! Masia S, Alvarez S, de Lera AR, Barettino D// Mol. Endocrinol., 2007; 21: 2391-2402.

148. McBride, K. and Nemer, M. The C-terminal domain of c-fos is required for activation of an AP-1 site specific for jun-fos heterodimers! McBride K, Nemer MH Mol. Cell. Biol., 1998; 18: 5073-5081.

149. McColl, B. K. Plasmin activates the lymphangiogenie growth factors VEGF-C and VEGF-DI McColl BK, Baldwin ME, Roufail S, Freeman C, Moritz RL, Simpson RJ, Alitalo K, Stacker SA, Achen MG// J. Exp. Med., 2003; 198: 863-868.

150. McKenna, N.J. and O'Malley, B.W. Combinatorial control of gene expression by nuclear receptors and coregulators/ McKenna NJ, O'Malley BW// Cell, 2002; 108: 465474.

151. McNamara, S. Topoisomerase Ilbeta negatively modulates retinoic acid receptor alpha function: a novel mechanism of retinoic acid resistance! McNamara S, Wang H, Hanna N, Miller WH Jr// Mol. Cell Biol., 2008; 28: 2066-2077.

152. Meadows, K. N. Vascular endothelial growth factor induction of the angiogenic phenotype requires Ras activation! Meadows KN, Bryant P, Pumiglia KII J. Biol. Chem., 2001;276:49289-49298.

153. Mehta, K. Human CD38, a cell-surface protein with multiple functions! K. Mehta, U. Shahid, F. Malavasi// FASEB J., 1996; 10: 1408-1417.

154. Merchiers, P. Involvement of Spl in basal and retinoic acid induced transcription of the human tissue-type plasminogen activator gene! Merchiers P, Bui ens F, De Vriese A, Collen D, Belayew AIIFEBS Lett., 1999; 456: 149-154.

155. Metz, R. A C-terminal domain in FosB, absent in FosB/SF and Fra-I, which is able to interact with the TATA binding protein, is required for altered cell growth! Metz R, Kouzarides T, Bravo R7/ EMBO J., 1994; 13: 3832-3842.

156. Meyer, R. D. IQGAP1 -dependent signaling pathway regulates endothelial cell proliferation and angiogenesis! Meyer RD, Sacks DB, Rahimi N// PLoS ONE, 2008; 3: e3848.

157. Millauer, B. Glioblastoma growth inhibited in vivo by a dominant-negative Flk-1 mutant! Millauer B, Shawver LK, Plate KH, Risau W, Ullrich A// Nature, 1994; 367: 576-579.

158. Miller, K. Paclitaxel plus bevacizumab versus paclitaxel alone for metastatic breast cancer! Miller K, Wang M, Gralow J, Dickler M, Cobleigh M, Perez EA, Shenkier T, Cella D, Davidson NE// N. Engl. J. Med., 2007; 357: 2666-2676.

159. Mole, D.R. Regulation of HIP by the von Hippel-Lindau tumour suppressor: implications for cellular oxygen sensing! D.R. Mole, P.H. Maxwell, C.W. Pugh, P.J. Ratcliffe// IUBMB Life, 2001; 52: 43-47.

160. Mosselman, S. ER beta: identification and characterization of a novel human estrogen receptor! Mosselman S, Polman J, Dijkema R// FEBS Lett., 1996; 392: 49-53.

161. Multhaupt, H.A. Syndecan signaling: when, where and why?! H.A. Multhaupt, A. Yoneda, J.R. Whiteford, E.S. Oh, W. Lee, Couchman JR// Journal of physiology and pharmacology, 2009; 60: 31-38.

162. Nadav, L. The generation and regulation of functional diversity of malignant plasma cells! Nadav L, Katz BZ, Baron S, Cohen N, Naparstek E, Geiger B// Cancer Res., 2006; 66: 8608-8616.

163. Nagpal, S. Separation of transactivation and API antagonism functions of retinoic acid receptor alpha! Nagpal S, Athanikar J, Chandraratna RA// J. Biol. Chem., 1995;270: 923-927.

164. Neufeld, G. Vascular endothelial growth factor (VEGF) and its receptors! G. Neufeld, T. Cohen, S. Gengrinovitch, Z. Poltorak// FASEB J., 1999; 13: 9-22.

165. Nicholson, R.C. Negative regulation of the rat stromelysin gene promoter by retinoic acid is mediated by an API binding site! Nicholson RC, Mader S, Nagpal S, Leid M, Rochette-Egly C, Chambon ?!! EMBO J., 1990; 9: 4443-4454.

166. Niederreither, K. and Dolle, P. Retinoic acid in development: towards an integrated view! Niederreither K, Dolle P//Nat. Rev. Genet., 2008; 9: 541-553.

167. Nielsen, C.H. The role of complement in the acquired immune response! C.H. Nielsen, E.M. Fischer, R.G. Leslie//Immunology, 2000; 100: 4-12.

168. Nielsen, J.S. and McNagny, K.M. Novel functions of the CD34 family/ J.S. Nielsen, K.M. McNagny// J. Cell Sei., 2008;121: 3683-3692.

169. Niethammer, P. Cosignaling of NCAM via lipid rafts and the FGF receptor is required for neurogenesis/ Niethammer P, Delling M, Sytnyk V, Dityatev A, Fukami K, Schachner M// J. Cell. Biol., 2002; 157: 521-532.

170. Nilsson, I. Vascular endothelial growth factor receptor-3 in hypoxia-induced vascular development! Nilsson I, Rolny C, Wu Y, Pytowski B, Hicklin D, Alitalo K, Claesson-Welsh L, Wennström S// FASEB J., 2004; 18: 1507-1515.

171. Nilsson, S. Mechanisms of estrogen action! Nilsson S, Mäkelä S, Treuter E, Tujague M, Thomsen J, Andersson G, Enmark E, Pettersson K, Warner M, Gustafsson JA// Physiol. Rev., 2001; 81: 1535 1565.

172. Pajusola, K. Two human FLT4 receptor tyrosine kinase isoforms with distinct carboxy terminal tails are produced by alternative processing of primary transcripts!

173. Pajusola K, Aprelikova O, Armstrong E, Morris S, Alitalo K// Oncogene, 1993; 8: 29312937.

174. Pascual, V. Analysis of somatic mutation in five B cell subsets of human tonsil! V. Pascual, Y.J. Liu, A. Magalski, O. de Bouteiller, J. Banchereau, J.D. Capra// J. Exp. Med., 1994; 180: 329-339.

175. Pavlakovic, H. Soluble VEGFR-2: an antilymphangiogenic variant of VEGF receptors! Pavlakovic H, Becker J, Albuquerque R, Wilting J, Ambati J// Ann. N.Y. Acad. Sci., 2010; 1207: 7-15.

176. Pavri, R. PARP-1 determines specificity in a retinoid signaling pathway via direct modulation of mediator/ Pavri R, Lewis B, Kim TK, Dilworth FJ, Erdjument-Bromage H, Tempst P, de Murcia G, Evans R, Chambon P, Reinberg D// Mol. Cell, 2005; 18: 83-96.

177. Perissi, V. Deconstructing repression: evolving models of co-repressor action! Perissi V, Jepsen K, Glass CK, Rosenfeld MG// Nat. Rev. Genet., 2010; 11: 109-123.

178. Perissi, V. TBL1 and TBLR1 phosphorylation on regulated gene promoters overcomes dual CtBP and NCoR/SMRT transcriptional repression checkpoints! Perissi V, Scafoglio C, Zhang J, Ohgi KA, Rose DW, Glass CK, Rosenfeld MG// Mol. Cell, 2008, 29, 755-766.

179. Periyasamy, S. Repression of transforming growth factor-beta receptor type I promoter expression by Spl deficiency! Periyasamy S, Ammanamanchi S, Tillekeratne MP, Brattain MG// Oncogene, 2000; 19: 4660-4667.

180. Pfahl, M. Nuclear receptor/AP-1 interaction! Pfahl M// Endocrin. Rev., 1993; 14: 651-658.

181. Plate, K. H. Up-regulation of vascular endothelial growth factor and its cognate receptors in a rat glioma model of tumor angiogenesis/ Plate KH, Breier G, Millauer B, Ullrich A, Risau W// Cancer Res., 1993; 53: 5822-5827.

182. Praq, S. NCAM regulates cell motility/ Prag S, Lepekhin EA, Kolkova K, Hartmann-Petersen R, Kawa A, Walmod PS, Belman V, Gallagher HC, Berezin V, Bock E, Pedersen N// J Cell Sei., 2002; 115: 283-292.

183. Privalsky, M. L. The role of corepressors in transcriptional regulation by nuclear hormone receptors! Privalsky ML// Annu. Rev. Physiol., 2004; 66: 315-60.

184. Prosper, F. and Verfaillie, C.M. Regulation of hematopoiesis through adhesion receptors! F. Prosper, C.M. Verfaillie// J. Leukoc., Biol., 2001; 69: 307-316:

185. Pugh, C.W. and Ratcliffe, P. J. Regulation of angiogenesis by hypoxia: role of the HIFsystem! C.W. Pugh, P.J. Ratcliffe//Nat. Med., 2003; 9: 677-684.

186. Rahimi, N. Receptor chimeras indicate that the vascular endothelial growth factor receptor-1 (VEGFR-1) modulates mitogenic activity of VEGFR-2 in endothelial cells! Rahimi N, Dayanir V, Lashkari KH J. Biol. Chem., 2000; 275: 16986-16992.

187. Rajkumar, S.V. Prognostic value of bone marrow angiogenesis in multiple myeloma! Rajkumar SV, Leong T, Roche PC, Fonseca R, Dispenzieri A, Lacy MQ, Lust JA, Witzig TE, Kyle RA, Gertz MA, Greipp PR// Clin. Cancer Res., 2000; 6: 3111-3116.

188. Ristimaki, A. Proinflammatory cytokines regulate expression of the lymphatic endothelial mitogen vascular endothelial growth factor-C! Ristimäki A, Narko K, Enholm B, Joukov V, Alitalo KJ! J. Biol. Chem., 1998; 273: 8413-8418.

189. Robinson, C.J. The splice variants of vascular endothelial growth factor (VEGF) and their receptors! Robinson CJ, Stringer SE// J. Cell Sei., 2001; 114: 853-65.

190. Rochette-Egly, C. Dynamic combinatorial networks in nuclear receptor-mediated transcription! Rochette-Egly CH J. Biol. Chem., 2005; 280: 32565-32568.

191. Rosenfeld, M.G. Sensors and signals: a coactivator/corepressor/epigenetic code for integrating signal-dependent programs of transcriptional response! Rosenfeld MG, Lunyak VV, Glass CK// Genes Dev., 2006; 20: 1405-1428.

192. Rousseau, C. ERbeta sensitizes breast cancer cells to retinoic acid: evidence of transcriptional crosstalkI Rousseau C, Nichol JN, Pettersson F, Couture MC, Miller WH Jr// Mol. Cancer Res., 2004; 2: 523-531.

193. Ruch, C. Structure of a VEGF-VEGF receptor complex determined by electron microscopy/ Ruch C, Skiniotis G, Steinmetz MO, Walz T, Ballmer-Hofer K// Nat. Struct. Mol. Biol., 2007; 14: 249-250.

194. Sadofsky, M.J. The RAG proteins inV(D)J recombination: more than just a nuclease/ Sadofsky MJ//Nucl. Acids Res., 2001; 29: 1399-1499.

195. Saharinen, P. Lymphatic vasculature: development, molecular regulation and role in tumor metastasis and inflammation/ Saharinen P, Tammela T, Karkkainen MJ, Alitalo KII Trends. Immunol., 2004; 25: 387-395.

196. Sakurai, T. and Kudo, M. Signaling pathways governing tumor angiogenesis/ Sakurai T, Kudo Mil Oncology, 2011; 81: 24-29.

197. Sakurai, Y. Essential role of Flk-1 (VEGF receptor 2) tyrosine residue 1173 in vasculogenesis in mice! Sakurai Y, Ohgimoto K, Kataoka Y, Yoshida N, Shibuya M// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2005; 102: 1076-1081.

198. Sanderson, R.D. Syndecan-1 in B lymphoid malignancies/ R.D. Sanderson, M. B0rset// Ann. Hematol., 2002; 81: 125-135.

199. Sandler, A. Paclitaxel-carboplatin alone or with bevacizumab for non-small-cell lung cancer! Sandler A, Gray R, Perry MC, Brahmer J, Schiller JH, Dowlati A, Lilenbaum R, Johnson DH//N. Engl. J. Med., 2006; 355: 2542-2550.

200. Sawano, A. Flt-1, vascular endothelial growth factor receptor 1, is a novel cell surface marker for the lineage of monocyte-macrophages in humans! Sawano A, Iwai S, Sakurai Y, Ito M, Shitara K, Nakahata T, Shibuya Mil Blood, 2001; 97: 785-791.

201. Sawano, A. The phosphorylated 1169-tyrosine containing region of flt-1 kinase (VEGFR-1) is a major binding site for PLCgamma/ Sawano A, Takahashi T, Yamaguchi S, Shibuya Ml! Biochem. Biophys. Res. Commun, 1997; 238: 487-491.

202. Schmeisser, A. Apoptosis of human macrophages by Flt-4 signaling: implications for atherosclerotic plaque pathology! Schmeisser A, Christoph M, Augstein A, Marquetant R, Kasper M, Braun-Dullaeus RC, Strasser RH// Cardiovasc. Res., 2006; 71: 774-784.

203. Schneider, S.M. Activation of retinoic acid receptor alpha is sufficient for full induction of retinoid responses in SK-BR-3 and T47D human breast cancer cells! Schneider SM, Offterdinger M, Huber H, Grunt TW// Cancer Res., 2000; 60: 5479 -5487.

204. Schug, T. T. Overcoming retinoic acid-resistance of mammary carcinomas by diverting retinoic acid from PPARbeta/delta to RAR! Schug TT, Berry DC, Toshkov IA, Cheng L, Nikitin AY, Noy N// Proc. Natl. Acad. Sci, USA, 2008; 105: 7546-7551.

205. Schug, T.T. Opposing effects of retinoic acid on cell growth result from alternate activation of two different nuclear receptors! Schug TT, Berry DC, Shaw NS, Travis SN, Noy N// Cell, 2007; 129: 723-733.

206. Sezer, O. Bone marrow microvessel density is a prognostic factor for survival in patients with multiple myeloma! Sezer O, Niemoller K, Eucker J, Jakob C, Kaufmann O, Zavrski I, Dietel M, Possinger YJI Ann. Hematol., 2000; 79: 574-577.

207. Shalaby, F. Failure of blood-island formation and vasculogenesis in Flk-1-deficient mice! Shalaby F, Rossant J, Yamaguchi TP, Gertsenstein M, Wu XF, Breitman ML, Schuh AC//Nature, 1995; 376: 62-66.

208. Shibuya, M. Nucleotide sequence and expression of a novel human receptor-type tyrosine kinase gene (fit) closely related to the fms family! Shibuya M, Yamaguchi S, Yamane A, Ikeda T, Tojo A, Matsushime H, Sato M// Oncogene, 1990; 5: 519-524.

209. Shibuya, M. Signal transduction by VEGF receptors in regulation of angiogenesis and lymphangiogenesis/ Shibuya M, Claesson-Welsh L// Exp. Cell Res., 2006; 312: 549560.

210. Shmid, R.S. and Manes, P.F. LI and NCAM adhesion molecules as signaling coreceptors in neuronal migration and process outgrowth/ Schmid RS, Maness PF// Curr. Opin. Neurobiol., 2008; 18: 245-250.

211. Si, J. CaMKII regulates retinoic acid receptor transcriptional activity and the differentiation of myeloid leukemia cells/ Si J, Mueller L, Collins SJ// J. Clin. Invest., 2007;117: 1412-1421.

212. Siegfried, G. The secretory proprotein convertases furin, PC5, and PC7 activate VEGF-C to induce tumorigenesisl Siegfried G, Basak A, Cromlish JA, Benjannet S, Marcinkiewicz J, Chrétien M, Seidah NG, Khatib AM// J. Clin. Invest., 2003; 111: 17231732.

213. Skobe, M. Induction of tumor lymphangiogenesis by VEGF-C promotes breast cancer metastasis/ Skobe M, Hawighorst T, Jackson DG, Prevo R, Janes L, Velasco P, Riccardi L, Alitalo K, Claffey K, Detmar Mil Nat. Med., 2001; 7: 192-198.

214. Soroka, V. Structural biology of NCAMI Soroka V, Kasper C, Poulsen FM// Adv. Exp. Med. Biol., 2010; 663: 3-22.

215. Speirs, V. Coexpression of estrogen receptor alpha and beta: poor prognostic factors in human breast cancer?/ Speirs V, Parkes AT, Kerin MJ, Walton DS, Carleton PJ, Fox JN, Atkin SL// Cancer Res., 1999; 59: 525 528.

216. Stacker, S.A. VEGF-D promotes the metastatic spread of tumor cells via the lymphatics/ Stacker SA, Caesar C, Baldwin ME, Thornton GE, Williams RA, Prevo R, Jackson DG, Nishikawa S, Kubo H, Achen MG// Nat. Med. 2001; 7: 186-191.

217. Steinmetz, A.C. Binding of ligands and activation of transcription by nuclear receptors/ Steinmetz AC, Renaud JP, Moras D// Annu. Rev. Biophys. Biomol. Struct., 2001; 30: 329-359.

218. Sun, S.Y. Evidence that retinoic acid receptor beta induction by retinoids is important for tumor cell growth inhibition/ Sun SY, Wan H, Yue P, Hong WK, Lotan RII J. Biol. Chem., 2000; 275: 17149 17153.

219. Suzuki, Y. Physical interaction between retinoic acid receptor and Spl: mechanism for induction of urokinase by retinoic acid! Suzuki Y, Shimada J, Shudo K, Matsumura M, Crippa MP, Kojima S// Blood, 1999; 93: 4264 4276.

220. Takahashi, H. and Shibuya, M. The vascular endothelial growth factor (VEGF)ZVEGF receptor system and its role under physiological and pathological conditions! Takahashi H, Shibuya Mil Clin. Sci., 2005; 109: 227-241.

221. Takahashi, T. A single autophosphorylation site on KDR/Flk-1 is essential for VEGF-A-dependent activation of PLC-gamma and DNA synthesis in vascular endothelial cells! Takahashi T, Yamaguchi S, Chida K, Shibuya M// EMBO J., 2001; 20: 2768-2778.

222. Takahashi, T. VEGF activates protein kinase C-dependent, but Ras-independent Raf-MEK-MAP kinase pathway for DNA synthesis in primary endothelial cells! Takahashi T, Ueno H, Shibuya M// Oncogene, 1999; 18: 2221-2230.

223. Tedder, T.F. CD19 and CD22 regulate a B lymphocyte signal transduction pathway that contributes to autoimmunity! T.F. Tedder, S. Sato, J.C. Poe, M. Fujimoto// Keio J. Med., 2000; 49: 1-13.

224. Tipping, A.J. High GATA-2 expression inhibits human hematopoietic stem and progenitor cell function by effects on cell cycle! Tipping AJ, Pina C, Castor A, Hong D, Rodrigues NP, Lazzari L, May GE, Jacobsen SE, Enver T// Blood, 2009; 113: 26612672.

225. Tkachenko, E. Syndecans: new kids on the signaling block! E. Tkachenko, J.M. Rhodes, M. Simons// Circulation Research, 2005; 96: 488-500.

226. Trowbridge, I.S. CD45. A prototype for transmembrane protein tyrosine phosphatases! Trowbridge IS// J. Biol. Chem., 1991; 266: 23517-23520.

227. Tsai, F. Y. An early haematopoietic defect in mice lacking the transcription factor GATA-2! Tsai FY, Keller G, Kuo FC, Weiss M, Chen J, Rosenblatt M, Alt FW, Orkin SH// Nature, 1994; 371: 221-226.

228. Tsuzuki, S. Cross talk between retinoic acid signaling and transcription factor GATA-2/ Tsuzuki S, Kitajima K, Nakano T, Glasow A, Zelent A, Enver T// Mol. Cell Biol., 2002; 24: 6824-6836.

229. Unemori, E.N. Vascular endothelial growth factor induces interstitial collagenase expression in human endothelial cells! E.N. Unemori, N. Ferrara, E.A. Bauer, E.P. Amento//J. Cell Physiol., 1992; 153: 557-562.

230. Vacca, A. Bone marrow angiogenesis and progression in multiple myeloma! Vacca A, Ribatti D, Roncali L, Ranieri G, Serio G, Silvestris F, Dammacco F// Brit. J. Haematol., 1994; 87: 503-508.

231. Waltenberger, J. Different signal transduction properties of KDR and Fltl, two receptors for vascular endothelial growth factor! Waltenberger J, Claesson-Welsh L, Siegbahn A, Shibuya M, Heldin CH// J. Biol. Chem., 1994; 269: 26988-26995.

232. Wang, F. RACK1 regulates VEGF/Fltl-mediated cell migration via activation of a PI3K/Akt pathway! Wang F, Yamauchi M, Muramatsu M, Osawa T, Tsuchida R, Shibuya Ml! J. Biol. Chem., 2011; 286: 9097-9106.

233. Wang, L.D. and Clark, M.R. B-cell antigen-receptor signalling in lymphocyte development/ Wang LD, Clark MR// Immunology, 2003; 110: 411-420.

234. Wang, S. Control of endothelial cell proliferation and migration by VEGF signaling to histone deacetylase 7/ Wang S, Li X, Parra M, Verdin E, Bassel-Duby R, Olson EN// Proc. Natl. Acad. Sei. USA, 2008; 105: 7738-7743.

235. Wang, Y. Phosphorylation of CD45 by casein kinase 2. Modulation of activity and mutational analysis! Wang Y, Guo W, Liang L, Esselman WJ// J. Biol. Chem., 1999; 274: 7454-7461.

236. Warner, A. J. The She-related adaptor protein, Sek, forms a complex with the vascular-endothelial-growth-factor receptor KDR in transfected cells/ Warner AJ, Lopez-Dee J, Knight EL, Feramisco JR, Prigent SAII Biochem. J., 2000; 347: 501-509.

237. Weninger, W. Retinoids downregulate vascular endothelial growth factor/vascular permeability factor production by normal human keratinocytesl Weninger W, Rendl M, Mildner M, Tschachler Ell J. Invest. Dermatol., 1998; 111: 907911.

238. Westin, S. Interactions controlling the assembly of nuclear-receptor heterodimers and co-activators/ Westin S, Kurokawa R, Nolte RT, Wisely GB, Melnerney EM, Rose DW, Milburn MV, Rosenfeld MG, Glass CK//Nature, 1998; 395: 199-202.

239. Wiesmann, C. Crystal structure at 1.7 A resolution of VEGF in complex with domain 2 of the Flt-1 receptor! Wiesmann C, Fuh G, Christinger HW, Eigenbrot C, Wells JA, de Vos AM// Cell, 1997; 91: 695-704.

240. Wiesmann, C. Ligand-binding sites in Ig-like domains of receptor tyrosine kinases! Wiesmann C, Muller YA, de Vos AM// J. Mol. Med., 2000; 78: 247-260.

241. Wong, A. FRS2 alpha attenuates FGF receptor signaling by Grb2-mediated recruitment of the ubiquitin ligase Cbl! Wong A, Lamothe B, Lee A, Schlessinger J, Lax I// Proc. Natl. Acad. Sci. USA., 2002; 99: 6684-6689.

242. Yang, Y. Direct contacts between extracellular membrane-proximal domains are required for VEGF receptor activation and cell signaling! Yang Y, Xie P, Opatowsky Y, Schlessinger J// Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 2010; 107: 1906-1911.

243. Young, M. R. Transgenic mice demonstrate AP-1 (activator protein-1) transactivation is required for tumor promotion! Young MR, Li JJ, Rincón M, Flavell RA, Sathyanarayana BK, Hunziker R, ColburnN// Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1999; 96: 9827-9832.

244. Zachary, I. Signaling mechanisms mediating vascular protective actions of vascular endothelial growth factor! Zachary I// Am. J. Physiol., 2001; 280: 1375-1386.

245. Zhang, L. VEGFR-3 ligand-binding and kinase activity are required for lymphangiogenesis but not for angiogenesis/ Zhang L, Zhou F, Han W, Shen B, Luo J, Shibuya M, He Y// Cell Res., 2010; 20: 1319-1331.

Автореферат диссертации по медицине на тему Роль рецептора факторов роста эндотелия сосудов VEGFR3 и его лигандов VEGE-C и VEGE-D в прогрессии множественной миеломы

Оглавление диссертации Калитин, Николай Николаевич :: 2012 :: Москва

Введение диссертации по теме "Онкология", Калитин, Николай Николаевич, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2012 года, Калитин, Николай Николаевич

Похожие научные работы

Каталог диссертаций