Автореферат и диссертация по медицине (14.00.23) на тему:Роль апоптотической гибели лейкоцитов периферической крови в процессах мутагенеза и карцерогенеза

На пряпаа ру-.гоппсл

Имнчук Игорь Ивановна

РГБ ОД

/4 ОКТ 1333

РОЛЬ АПОПТОТИЧЕСКОЙ ГИБЕЛИ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ В ПРОЦЕССАХ МУТАГЕНЕЗ/ И КАНЦЕРОГЕНЕЗА

14.00.23 - гистология, цитология, эмбриология -14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат —

диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

ТОМСК-1999

*\.!х!тг ьыпогшсцг в Сибирском ыгдацшском укиверетггсте

Научный руководитель:

Официальные ошюнезты:

доктор биолошчесшх наук профессор Н.Н. Илышсшх

доктор медицинских наук профессор Пулнков А.С. кандидат ыедязивских ваук доцент Чернова ЕЛ

Ведущая срлшизгаия - Тюыгвст ыгдндавсхая екадаиня (г. Тюмень)

Заншта состоится ш.4/?т _ 1999т.ъ^ часов

на засгдашш диссертационного соагга К 08428.01 прв Сибирском ысдвдив-стам укнЕсрсктстс (634050, г. Томск, Московский траст, 2). С дкссгрггацисй можно ознакомиться о научной библиотеке Сибирского ме-дкщшского ушп^рентето (г. Томск, пр. Ленина, 107)

Акторофсрат разослан'

1999 г

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат медицинских. наук, доцент

, О

Герасимов АЗ.

BBEfíEHK!

Актуальность проблеме. Сущестеуст два типа гибели клгтск глоптс: (часто называемой тасхс програш.<лфуемсй п-'.белыо) , и нектсз (насильстаеннгя гибель) (Нозикоз B.C., 1996). Апоптотячесхш? тип гибели клеток обнаружен практически у всех многоклеточных сргзикшоз (Тгигср B.F., 197S; HoTvitz H.R., 1992; Boise L.H., 1995). Это активный, гсяепткс^-регулируемый процесс, участвующий з диффгреяшфоакг, мор^гскшс, также г» поддержании клеточного гомеостазз (Saunders R.A., 1966; Sr~.ri--: H.S., 1995). Апоптоз играет огромную роль в реалшашш мехстяшз адаптации организма к воздействию высокой температуры (Teodorczy'c-lajcysn J.A... 1995) и ионизирующего облучения (Eastman А., 1592). Некоторые лекарственные препараты (ингибиторы пролиферация клеток) такам деР.стеугат через индукцию апоптоза (Samaba H.S., 1995; Умгнсхяй С.Р., 1996). Кроме го-го, этот механизм гибели клеток имеет значение з раззитки аутоиммугешх (Oka М„ 1996), инфекционных (Handerson S. 1993; Clcm R.J., 1994), кйродг-геиеративных заболеваний (Нал D.K., 1995; Нсзивоз B.C., 1996). В работа-; некоторых авторов (Frankfurt O.S., 1994; Payrs СМ., 1995; Asachi M., зысказысается гипотеза о значении ыехашпмоз епогпозз а ге-

нетического гомеосгаза и оихогеиезе.

В настоящее время приоритетным направлением в исследования патогенеза онкологических заболеваний является изучешк взаимодействия процесса апоптоткчзской гибели с механизмами мутагенеза и канцерогенеза. Н> зсстко, что хромосомная нестабильность но:"ет являться причиной возкш-¡зовения ках функциональных, так и патоморфолсгичсских нарушений ка Ессх уровнях организации живых систем (Бочкоз Н.П., 1971; Herrlich P., 1982, Morris S.M., 1995). Одним из примеров реализации генетической нестабильности является иммертализащ¡я клеток и раззнтае опухоли (Lciem J., 1991; Rosseíli F, 1995;ТапшгаТ., 1995).

Однако на сегодняшний день существует незначительное количество работ посвященных изучению места апоптоткческой гибели клеток в механизмах мутагенеза и канцерогенеза. Большинство зтах работ выполнены в условиях in vitro с использованием различных клеточных линий (Samaba H.S., 1995; Camplejohn R.S., 1995; Schwartz J.L., 1995). Поэтому, до настоящего зремеки нет единого мнения о значении процесса апоптотаческой гибели з хеопластяческой трансформации клеток.

Таким образом, едкой из актуальнейших задач з биологии я медицине гвляется выявление аполтоз-ассоциированных патологий и установление рота апоптотаческой гибели з инициации н прогрессировав;«!* опухолевых про-хессов у человека и животных. Решение этих задач позволит о предел: ггь вопле подходы и направления s профилактике, диагностике и лечении онкологических заболеваний.

Цель» иаэтэдшсгс всскадованшг являлось изучение роли гпоптотнче сажй таозлк кшфа&пш к кгйтрофшюе периферической кроеи в процесса мутагенеза и кшщероггнгзз у челозгга и экспериментальных валютных. Дл ссузасстЕЛсояа указа:яой цели были сформулироааны следующие задачи:

1. Ousííhts. содержание генсток с цотогенетнчеенши нарушениями и актив кость слошогическоЯ гибели лньгфашпоз я иейтрефнлов пернферг "icck'c; Epe Dil у ЗДОрОЗЫХ С£рОНеГСП:2ньгх и СгрОБОЗИТИВКЫХ к ВЭБ доноров.

2. Изучить показатели ашштогачсской гибели лимфоцитов перкфернчесш креш у больных ршш лгпсого и рекой ыолочной железы.

3. В ycaoaasx эпеперюгеыта иссхедоБСТЬ уровень цетогекгтическв шыенен шж клггог ti атпзшостъ апсототачеекой гибели лейкоцитов перифериче спой креги азотных ера аоэдсйстаип вашскругсщей радазшш, кшцеро гепа 12-0 тсрэдс»шоилфорбат-13-£агтатШ1 и на фоне опуг-олевего про esees, вызванного перепягаэдой сдепо^арцлноазй Эрлиха.

4. Сменить дклзшду поазагсяз "УО-сенсибилизашш мембран лкзоссы ней трофплоз" у чеяезгяа а зксЕерыиезтсльиых гапюпак, имеющих вязкую i пасоку» сзгппшость ssoxrnmrasssoä шбелн лимфоцитов псрнфернческо* крот.

Научэга в;:дг.г В результате прейденного комплексного исслсдо Z3s¡v¡ с еспользс£2пзсм согреыегшых нетодов впервые установлено, чтх большее с окюлогпчесасдз ззбачевшшямн выеят сталонеши от норы&ль шгх значений показателя шоптотгческой гнбела лкяфоцнтоз перифернче cjx-íi Eposa. Выявлено, что донндегппм здоптстгчесхгя активность лиыфоци тоз кгблодаетса орезиуществсшго у лиц згболгшпкх раком в молодой боэ picre. Поятаво, то прв высокой уровне персЕсгенцни вируса Эшптейна Бгрра в организм; человека, апоптотнчесаи активность дныфоцкгоа первфе рнческой крова cssJsssTca.

Впсргыг позучгши значения границ вариабельности для показателе anoirroni'itCKofi гибели лихфоцптоа периферической крови ыышей и «¡слове ка. Изучены пгрз&етрн популяционного распределения особей с отклонена ем от нормальных заачсанй по показателю апоптотаческой гибели лнифоцн

TOE.

Разработал в применен петсд фушогзонадьной оцггаэз лабильности ыеабргш лезосом. Применение этого метода позволило установить относ» тельную независимость процессов кембранной деструкции и ДНК' фрагментации при апопкггичзской гибели лейкоцитоз периферической крова.

В результата проведенного ксследоогния в работе получены коаые знания фундаментального характера о 'значении ai: o.tíot; г-: ее коп гкбели лейкоцитоз периферической кропи в возникновении онкологических заболеваний г в ферыпровашш гснгтаческого гомеостаз орпшкзма человека и кашотных.

Практкчесааз®с«1амосп». Вагя:осгь исглс^ззж« ложностью раннего еыязлеккя н прогнозяроеаягз! > "ззн-пи опухййвсь« пг дессоз. Предложгшый и впервые кспслдеоодшыЗ а работе метод окекгг />,;-Знлытосга мембран лизосом может иметь зазное аналитическое зля изучения риска возникновения онкологических згба^гчгимй. Разработа--шй метод может быть рекомендован дня шшгеадуалыюй оценка ш»оптст:>-ксхой активности клеток периферической крозн, kss наиболее бкегеый жономичный способ по сравнению с существующими.

Полученные результата позволят усовершенствовать метода! радиаки-)ннсй биодозиметрии и дополнить кргггерин оценки р:гс:са здоросью лиц рг-'отающнх с радиоактивными источниками н хникч сстами мутагена?«?.

Оснозиые пологтг::::з» аыкоекздые на защгяу.

1. У человека и эксперимеэталькых животных при ннзкоП активнее гт апоптотической гибели лейкощггез периферической крова наблюдается высокое содержание клеток с цитогепетачесхимн нарушенщщя.

2. При высоком титре аитетел к юпендаоиу антаге-гу л-фуса Эп-аггейна-Бзрр у здоровых доноров наблюдается aaosatae актигносг.г лоп.-готической гибели лейкоцитоз периферической крови и узетчвнк« vzzzp-¡накия лимфоцитов с цитогенетнчест.ми взруа/енядон.

3. Высокая ахпганссть апототнчесхой гибели лгйкощегоз и^риф^рч-теской крози у мышей сопровождается увеличением числа иидуцнроганнш зпухолей кожи и торможением роста перевиваемой. асщгпюй аетютарци-юмы Эрлнха.

Апробация работы. Основные положения работы доложена н обсуж-:ны на III Международной радиологической конференции «Судьба отрабо-вшего ядерного топлипа: проблемы и реальность» (Красноярск, 1996); II ¡ждународной научно-практической конференции «Безопасность жизнедег-льности в Сибири и на Крайнем Сегзере (Тюмень, V997); Юбилейной кок-¡ренцни - Медико-биологические аспекты нейро-гумеральиой регуляшга омск, 1997); 7th International conference «Radiation safety aftd scciai-scoiorricrd DblemsofKazakstan», (Karaganda, 1998).

Публикации. По теме диссертации опубликозано 9 печатных работ.

Объем и структура рабаты Диссертация изложена на 130 стратшзх п л-оит из введения, 4 глаз, зыводоз, списка литературы. Работа иллхзстрп-зана 20 рисунками и 21 таблицей. Библиографический указатель включает 3 источников, из них 23 отечественных и 91 иностранный.

МАТЕРИАЛ II МЕТОДЫ ЯССЛЕДОЙШКЙ

Объектами исследования в кзстоянкй .работ? являлись дснссы->роволыта и белые беспородные мыши. Всего изучено 3 [4 мшгск. з ^ те 3-12 недель. Все исследования просодилясь в осенкс-зимнкЗ песко..

Сргдг. üüw-;cs3EüKi£bix дазэров были -как клинически здоровые так и Ьзльюгг розгам легких и ракоы полочкой железы. Цнтолопгческнй и шгтоге-нгтнчгмаш еклез ирозгдев у 450 челогек - зпггелей г. Томска и Томской об-jacTK. Возраст доноров от 23 до 64 лет. Онкологические больные являлись гзцюентзш: rjirjü'js! КИИ овхслопш СО АМН РФ (г. Томск). Обследовано 3" человек с спухсянэ ыалочкой ;келезы и 28 человек с опухолью легких. Возраст балышх от 25 до 65 лет.

05scs£ cxcüs apocarais гаеследсвгшгп представлена на рис. 1.

Мггэда. Икдуздкю глоятотаческой гибели лимфоцитов проводили по игтоду С. Jisng (1993). Лаафоаяты помешали в буфер Дульбекко без добав-fissus сдаорепхн и культивдрогелн в течение 12 ч при 37 °С. Изучение со-дерхгaims аяоятотачгсазх згстогс проводили сразу после выделения лнмфо-дтхзз в затем через 3,6,9,12 чгсоз после начала культизированкя.

Изозяши ядер в щыеренке фрагыентшгяи ДНК проводили по стан-дзргыой методике (Sua D. У.,1993) с незк^шггельнымн модификациями. Со-дер'-кшке ДНК оценивали дкфгккламнноша методом:

Выделение ДНК для электрофореза проводили по методу Мгрыурз с кодфигаляей (Mermar J.,1961). Электрофорез ДНК проведали в 1,5 % агв-рсхсом resé. Гель спасала, а затем фопярзфзроваяв сод УФ-вампой. По ашш Хфогодваа хаясспесвую сценку гпбедн «легок (ьповтга шш некроз).

Одassy шгшеспособностц клеток в культуре, орозодили с помощью люминесцентной шофоскошш. Перед вссдсдоелвием клепш пнгубнрозали с щфйдлнааьш оранзеаьш я ювю красным. Клетки с зрюй флюоресценцией ядра б уксньшенного размера считались погибшими (Song Q., 1990). Нсобра-•пилые погреадення шшкагшчеасой иембракы выявляли по юс оарзтнватпо тргпзго&ыы синим (Laborea С., 1980).

Препараты хроыосоы лгыфоцнтог периферической крови человека го-тоашш по общепринятому ыасромстоду с незначительными модификациями ÍEvi2i3& H..J., 1975). Хромосомные препараты экспериментальных зекестнье; гогсдоян ш отсток костного мозга, полученного из бедренных костей иеот-шлх. От кагдзго андаьздуука псспедсвалп 100 метвфаз.

Оценку содержащая бинукяеарных шшфоиктоз с иякрохарзия (тест с хщтохь-дззевоы-В) проводила по стандартной методике с незначительными модифааидаши (Lmdholm С.,1991).

Морфологический анализ апоптотической гибели клеток проводили кг препаратах приготовленных ю культуралькой клеточной суспензии. Мззк* окрзхпикпЕ по Нсхта-Максимоау (азур Б-эозин). Анализ препаратов пропо дился ва микроскопе «REICHERT» (Австрия) iip-j угеличекиг об. SO х ок. 10 Прп анализе непользоагиш критерии, характеризующие каркопатояогинесик и щгго1»атологячесззе изменения клеток.

MUS MUSCULUS (fdbum)

HOMO SAPIENS

Рис. 1, Общая схеш исследования (группы, количественное распределению но груплзд иаириал н методы нсследонлинл). Примечание: '-Оценкауроаля хромосомны* аберраций у ыыш£Й проводнлкь «л полного кола.

••»л^яку У-Ф-сс* лкзосоы нейтрсфалзз выполняли по ор?*«

г».гйл:ксй илодкхг, ссьаванной на лизосомотропкых ссобгтеих красители* .кгрздпия сраажгвого (АО). Исследуемый клеточный материал, содержащий :иагрофнли, пегл? опргдгяешгых срокоз инкубации смешксали в соотношг-ит 1:1 с растворсм, содзр:.,гииш 1:10000 годного раствора АО и ннкубирс-в т-л:лотг при коапгтаой тампсратург & течение 1-2 шш. Микроскопи-рссл-к й кгпсрс Горггаг. (мкхросизп МЛ-2Б) с увеличением об. 60 х ок. 10. Ризригс на'.брш: лкзосом фиксировали по исчезноеешао грануляции с цкто-.шзхс (сплошная орадаксвзя о;гргска) и появлению крхо-зслеиого сгсчения ядра клетки. Для каждого образца проводили анализ 50 мейтрсфкпоз.

Изучение парау.строз опухолевого рост проводили на модели асщгг-.40й аденокаршшомы Эрлнха у мышей. Акткгаосгь опухолевого роста оцени-пали по следующим параметрам: объем гешгта опухоли, число опухолевых ¡¿теток, соотношение живых и псгнбшг» клеток опухоли, шггогоческий ин-клеток опухоли, прсдолллтеликхпъ жизни мышей с опухолью. Индукцию одухолсаого роста с помощью ТФА (12-0-тсрадех2Ноилфсрбол-13-ацетат) проводили согласно методическим рекомек-.•„цля.'.; Борзонн (Воггопуг М, 1984) с незначительными модификация:.«?. В подопытных группах 3 раза в неделю в течение 20 недель на предварительно застриженный уча.то:: кс>:сл мезклопатсчиой области с помощью инсулнно-зого шприца наносили 6,15 дг:сг ТФА растворенного в 0,1 мл ацетона. Б кон-тродшоП группе на ко;::у наносили только 0,1 мл ацетона. Локализацию я размеры обягрузигт&к опухолей гогж регистрировали по специальной схема (Воггопу! М., 1984). .

Тнтр кзруссспзшфдегск ахтатгл к антигенам вируса Этте&га-Бсрр (ЕЭВ) звргдггяла гласдаи испряглоП »щыуеофлюореецгкщш по кодкфицн-роззинолу методу-Хеите (Неп!е V/., 1979). Б сывсрогсе периферической кропи обследусмых доноров определяли уросень сг.ецкфстееких О- к А-гнтител ' к таруекэтсад::ому спхитс:-зу и С-аиппсл к комплексу ранних антигенов ЕЭБ.

Эгсасри&яяздянх жглэтных подагргапи общему однократному то-тельноыу о5зучзашэ-г дклх 2 Гр и 10 Гр. РсиггеиоЕСкое облучение пр^изго-дтелк иг аппарата- РУМ-17 в стандартных условиях: 250 кВ, 15аА, фильтры 0,5 иь: Сп+1,0 ?.ш А1, кэяшо-фохуснос расстояние 40 см, мощность дозы 0,5 Гр/мин. ,

Определение значений границ вариабельности для показателей '.одеркганис лимфоцитов-с аберрациями хрсыосом" и "содержание йрагмен-'"•I данной ДНК лимфоцитов" проводили согласно рекомендациям данным в -\т--;.Ь:.ш "По:-азатгли кормы у..." (1978). Для данных показателей за зна-- ■ * .мы приняты дозгритгдьныо границы вариабельности средней пока-:атгля пр.: уесгше значимости (?-=0,001).

Ляя ассх веберох полученных данных прозеэсяп гипотезу нерыальао-~тт ^«ппедслеиия ко зеяичнке колффиаивнта ассздюпиш и эксцесса. Ппо-

верка гипотезы о раюгкггав срегзгнх преясдид^сь с критерия Стьюдента, прн заданном уровне значимости P=0,Q5. Kr.vc. для отдельных выборок с за ой целью нспользоаалч яепараметрччеехкй ?сп ■> терий Вилкоксона-Манна-Унтни. Данные представлены в табл-лаах кох Х±г (средняя ± среднеквадратичная ошибка), на рисунках отменен доз.ер;гге;:ыгы: шггервал при Р=0,05.

Автор вырастает признательность с.н.с лаборатория онкошфусолсгн: НИИ Онкологии СО АМН РФ (г.Томска) Исаевой Т.М. -за помощь в прозслс-hiih работы.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

!. Анализ апоптотической гибели лнифашггеа и пгнгрофялез перяфгрг -ческой крови доноров нмешокх различное ездгржягше цятгта!е"г;сс.п: измененных лимфоцитов

В результате анализа апоптотичссхой гибели лнмфоиятоз пгскфг^иче-ской крови здоровых доноров рандомизированных со содержанию аа<|в;';> тов с онтогенетическими нарушениями устаиоэлено сладуюшез (тайл. I). У доноров с низким содержанием клеток с аберрациями хромосом (группа Ш через 3 ч инкубации лимфоцитов содержание фрагментнрсгзкноЯ ДНТС (фДНК) достоверно увеличивалось до 50,0±3,1 %, при значении з кезлраль-ной группе 39,3±2,2 % (Р< 0,0,5). Через 6 и 9 ч инкубация з этой группе отмечалось также высокое содержание фДНК (Р< 0,05).

В группе доноров с высоким содержанием клеток с зберрацк^и хромосом (группа I) отмечалось достоверно низкое содержание фДНК через б, 9 и 12 ч инкубации, соответственно 55,0±3,2,69,2+3,8 и 78,3±3,1 % (Р< 0,05).

- » - - Таблица 1

Содержание фрагмеитированной ДНК лимфошпоз периферической креэт? здоровых доноров с различным уровнем нестабильности хромсссн (%), Х±т

Группа Клетки с аберрадиями Время инкубации, час j

хромосом, % 0 3 6 5 ! 12 ;

I 9,34±0,10 14,5+1,4 37,3±3,9 55,0±3,2 бз,:±з,з ! Ч4.Ч 1 ( •

n=ll ?< 0,05 Р>0,05 Р>0,05 Р<0,05 Р< С,05 j Р<0.05

II 0,32+0,06 15,0+1.0 50,0±3,1 85,1±4,4 9S, 1+2.5 !

п=15 Р< 0,05 Р> 0,05 Р< 0,05 Р.< 0,05 Р< 0,05 i

га 1,б1±0,08 14,8+1,2 39,3±2.2 67,5±3.4 85.0+3.5

п=89 i :

Группа I - высокое содержание клеток с аберрациями хроьи'сом. Группа] содержание клеток с аберрациями хромосом. Группа !а - кс.лроль.

Электрофорешчкжпй шлю ДНК погибших лимфоцитов у всех об-сгссдовгшшх доноров свидетельствовал о наличии регулярных фрагментов ДНК, характерных для апоптотического тала гибели клеток.

Анализ показателей клеточной гибели лимфоцитов периферической креац здоровых доноров с различным уровнем хромосомной нестабильности выявил схоже» с показателями ДНК фрагментации динамику гибели лимфоцитов. Тек, к группе I содержание погибших лимфоцитов в культуре через 6 ч инкубация было достоверно виз» контрольных значений и составляло 25,3± 3,2 з в группе П выше - 57,} ±3,1 %, при значениях в контроле 38,5±3,0 % (Р< 0,05). Через 9 и 12 ч вяхубгцив лимфоцитов показатели в труппах I в П таксе достоверно отличались от контрольных значений (Р< 0,05).

На рнс. 2 представлены данные о содергаяие иейтрофнлов периферической крови без морфологических признаков апопготической гибели у доноров с различным уровнем нестабильности хромосом. В ходе исследования было установлено, что через 48 ч инкубации в 1-ой группе доноров содержание интактиых нейтрофилов превышало значения в контроле (в 4 раза, Р< 0,05). Во Н-ой груше доноров, налрегтав, выявлено значительное увеличение дннамюси гг. бели нейтрофилов через 24,36 н 48 ч инкубирования (Р<0,05).

Таким обргзом, установлено, что в группе догорав, имеющих высокое содерззняс клгтог с аберрациями хромосом отмечалось значительное енн-глолгсгпгчгскоЗ гибели лимфецнтоз н вейтрофшюв периферической кроьа, в то время вгх в группе доноров с низким содержанием клеток с абер-рацшшЕ хромосом наблюдалось пешшеше апоятотачгской гибели лимфоцитов в Еейтрофндрв.

Ркг. 2. Содсрззике кктгггтых кг&трефшев псрпфсримссой крови злорзсых дсифоа. Группа I - высоко: согвраание каепис с аберрациями хромосом. Груша П - шзкое содержание клеток с &5грр2щш&к хромосом. Группа Ш - го!гграпь.

Известно, что лимфоциты относятся к типу клеток особенно воспршш-чнзых к повреждениям ДНК. Некоторые авторы (Татша Т., 1995; Бйт-аЛг Л., 1995) высказывают предпадоиение, что апоптогический ответ иогст

. г

представлять собой форму "альтруистического самоубийства", направлегшиг:-на противостояние высокому мутационному потенциалу лимфоцитов и дальнейшей клональной экспансии мутантов. В ряде работ (ЬЫЬага М., 1995, БсЬн'аПг 1995), проведенных на клеточных линиях АНН-1, ТК6 и \V1-L2-НБ, показана связь между уровнем мутаций и активностью апоптотической гибели клеток. В наших исследованиях также была выявлена обратная зависимость между показателями апоптотической гибели лимфоцитов и содеряса-нпем клеток с аберрациями хромосом у человека, причем максимальный коэффициент корреляции был получен на 6 ч инкубации лимфоцитов (г= -0,97, Р<0,05). Тахкм образом, низкое содержание клеток с аберрациями хромсссм у донсроз группы П кокет быть следствен псзншгнноЗ -чголтстнчгсксй ги-бгян лкыфошзтов с цтоггЕэтячссхямн взрупепяггля.

Рве. 3. У0-сс:гг:г5<ипп2пкя кгмбрзн якзссом кг5трсфкаоп а^пфгрзг-'.жкой крови доноров с ргзлнчньм уровнем иэст^балькоста хромосом. Группа I - высокое содержание клеток с с.бгр?щшшн хромосом. Группа П - гаогое содержгине глсгоЕ'с аберрациями гро-иосои. Группа Ш - контроль.

В результате оценки УФ-сенсибшппащш мембран лнзосом кеетрофн-лоз периферической крови у доноров с различным уровнем нестабильности хромосом установлено, что в контрольной группе .происходит постепенное увеличение продолжительности реакции УФ сенсибилизации (Рес.З). В 1-ой группе доноров показатели УФ-сенсибшппащш приближаются к контрольным значениям лишь через 24 ч шкубащш пейтрсфилов, а в группе П, напротив, узя через 12 ч анкубзцни отмечалось значительное повышение этого по:зззтгля (?< 0,05). Через 24 ч з группе П время УФ сенсибклюацнп лизо-сои достигает максимума а ЕоззргздЕзтся к исходным зжяензям через 36 ч инкубации.

Тагам образом, у доноров с зысокпм содсргганЕем цнтсгенетячески измененных лимфецэтов установлено енгокешге апоггготгггесгсой габеля лкмфошпоз и пеГпрофилоз периферической крови я уменьшение времени рзззвтга реакции УФ-сезсибидягадая мембран яззосом аейхрофилоз.

2. Лг.?Л'и £П9шот5Г-:ес:ий пнбе.та лнмфсшгогз периферической хрти я «гггогснеггечсскиз; нарушений у доиорсо с различным» тиграми аггпггег; и аиткгекам вируса ЭгиягеГит-Барр

Анализ среднегеометрических титроа IgG, IgA к вирус-капсидному антигену (BKA) и IgG к комплексу ранних антигеноз (Р+Д) в двух группах до-ксроз выявил, что -ппгр IgG к (Р+Д) so П-ой группе доноров был достоверно зыше и составлял 23,5 +3,3/-4,1, при значениях в группе I 2,7 +0,3/-0,3 (Р< 0,05). Титры IrG и IgA к ВКА ВЭБ в группе П также значительно превышали аналогичные показателя в фуппе I (соответственно 512,3 +41,6/-39,8, и 8,5 -1,2/-1,6), а группе И - 74,3 +9,1/-9,5 и 2,2 +0,2/-0,3, соответственно (Р< 0,05).

Оценка фрагментации ДНК лимфоцитов периферической крови доно-роз показала, что содер;:сание фДНК в группе с высокими титрами антител к ЗКА ВЭБ (группа И) было значительно ниже и составляло через б ч инкубации 51,2±2,7 %. а через 12 ч - 73,3+3,1 %, в то время как в контрольной группе доноров (группа Г) б эти же сроки - 66,7±3,1 н 95,8±3,7 % (Р< 0,05), соот-сетственно (Рис. 4).

В результате исследования числа погибших лимфоцитов установлено, что в группе I содержанке погибших клеток через б н 12 ч инкубации составляло соответственно 43,2±2,2 в 93,4x5^ %, Что сущсстаешю впш; значений в группе П - 25,3±1,6 и 59,3£3,1 %, соответственно (ь обоих случаях Р< 0,05) {Рис. 4). ' .

4 Содержание фрегмеятирозанадй ДНК и погибших лимфоцитов периферической ■ доноров с различными титрами IgG к антигенам вируса Эпштейна-Барр в разлчч-

а.: ■лякуоации лимфоцитов

~ "'.як. .• ■ голь. Группа Н-высоккй тиггр AT класса G к ВКА ВЭБ.

лсрреляшюпнсго анализа между показателями апоптотической гибели .¿.-¡¿тек ;; титоом антител к антигенам ВЭБ позволит аыянить значимые коэф-

фицненты корреляции во П-ой группы доноров для IgG st ВКА (г™ -0.S7); для IgA к ВКА (г» -0,75); и для IgG к (Р+Д) (г» -0,93) во всех случаях Р< 0.05, в то время как в группе I не отмечалось связи между изучаемыми показателям::.

Известно, что гены некоторых вирусов, такие как ген р35 бахулсзкрусг (Clem R.J. et а!., 1994), гены латентного вируса Эпштейна-Барр Вс1-2, СеЬ-5, BHRF1 (Har.derscn S., 1993) кодируют белки, которые могут ингибирозэть разв5ггие апоптоза клеток вызванного вирусной инфекцией. Эта гены обеспечивают внутриклеточную персистенцию вируса и способствуют его репликации вместе с инфицированной клеткой (White Е. et al., 1992). Возможно, установленное нами снижение динамики гибели лимфоцитов периферической крови у доноров с высскими ти-фйми антктсл к аоткгеиам ВЭБ является следствием активации вирусных антиапогггатнческих генов (типа Bcl-2, СеЬ-9) в инфицированных клетках.

Также известно, что потенциально онкогешшй вирус ЭпштеЛна-Езпс вызывает специфическое поражение определенных локусов хсомсссн, приводя к нгрушению их структуры (flyinskikh N.N. et al., 1996). В связи с тли; нами проведено исследование содержания лимфошггоо с шггогенгтчеезешк нарушенной в периферической крови доноров с раалгпзшмн титргмк антител к ВКА ВЗБ (Рис. 5). В ходе этого исследования- было установлено, что з группе П содержите лккфощ-гхоз. с гберрацкжш хрсиоссм в 4 разе, превышало значения в группе I (Р<0,05).

Содержать бннуклегрных лнмфощггоа с михрондрако в группе П так эх в 4 para было выше зяачгякй в группе I (Р< 0,05) (Рис. 5).

□ Группа!

-Г— 0 Группа II

!■;•• -----------

* f

г.

1 ч-i

f; ■ 1 j .... Г .....

' i. " !

______i—=—{■' Г

1 Г

1 i -¿1—,—

EsKiT^ieftpHwe яд«фе*ппги с кзкроздряма

Ламфогогты с K&ppeiresifr

хромосом

Рис. 5. Содержанке лимфоцитов с щггопенетическимя нарушениями у доноров с низкими [группа I) и высокими (группа П) титрами к антигенам ВЭБ.

Таким образом, у доноров имеющих высокие титры антител к антиге-чам ВЭБ существенно снижена активность апоптогической гибели лнмфеии-гов. Кроме того, при низкой активности апоптогической гибели лимфоците* териферической крови выявлено высокое содержание клеток с шгтогенегпг; >

.-.¿^хг :сс>ш»г1хиг. ' е.'яав доноров видящих в группу с низким:

•п.л«^ с..;тггсл к ВЭ1-. та-лсг астрсчаяиеь днш с шсокой ргйкстектностыс к гаовхоэт. Данный факт шшгт свидетельствовать о том, чп ..круг 'н-тагс&о-Барр г.елястск не едкнстаешо»; причиной, приводящей к по £доатсгшчвс5Я>8 резистентности лзшфоснтог.

Лзгг;?££&схь пйаш якглфсцзтсз перкфернчесггой ер»

у кдь-пых ргхом ксло'шой заягзы а рззэдз лгпгого

3 ¿--«зудлнгтг англкза ¿зшз&воа ДНК-фрагуеетащш лимфоцитов перп фграчеаа>3 ером онхолсш<ггс!за бслькых раг-^ситпировсыиых по активно ста гасатоткхой п&гвд якафоцатаз получены следу-ляке даяше (Рнс 53). У ггезрсв с |дшх>2 глсдтсгсчссхгЛ гибелью лхшфсщггсз (группа I) че б ч киаугтяи содержание фДНК достоверно сшге2ло;ь до 56,1 ±2,5 % ::ра гсачгяшх г шлрольвоа групаг 67,5±3,4 % (Р< 0,05). Через § а 12 ч за ^уезезз с гтой группе стисчгяось шпг.сг сэдсрзханис фДНК (Р< 0,05).

В группе докеров с еасолгЗ сдсптогаческой пгбелдо лимфоцита 0 рутца Я), Еапрэтка, стшгя&кзсь доекггруог соз ишгзпе содержание фДШ ч^рез 3, б н 9 ч сшубзщш (Р< 0,05).

>. .- i ф ■ я —ссжрга

2

73 СО

53 «

3> хг

/Г

//

-

Врага 1азгу5анаи.ч

« 5 12

сз-

сз-

тэ

а

а

а

гз

гэ

М

о

Врглз 1мкубйшзг,ч

6. Сеетрггнае всгаЕетк хжфещгтвз (е) ;б) кро&а ¿снороз б группах i (шпезз асга&ностъ

кдэтэя), П (£&сэ=ах вггсавосхь гпзятотичс^гзн гг£егя гшгток) н Ш (контраль).

При Егсяадетгнна содгркгкаа погибших л-шфошггоз а культуре'^ста д&стсверное енпгекие данного показателя е группе 1 через 6, 9 и Г ч (?< 0,05), а в группе П, папраета - умгшчешгг через 3, 6 ы 9 ч цнкубгшг лимосазлой (?< 0,05) (Рис. 6а).

Интересно ошепга, что у 87 % екаяогдчсских больших с шлю! «шсэтэгачжкоЗ габйяко гпкфошяоз, 1лгрзсг нг прзшиап 37 лет и з ергв

нем составлял 35,5±3,2 года, а то время как у банных с высокой лкпзккксГ апоптотической гибели среднее значение возраста было 55,6±4,7 года.

Вероятно, низкая апоптотическая гибсть лимфоцитов является щмгек-ной накопления существенного числа цктогеиетических нарушений, тем самым значительно повышая рнск злогачественной трансформации клеток уже в молодом возрасте. С другой стороны, высокая активность клеточной гибели может являться основой для негативной селекции апоптоз-резистектных клопов клеток (Frankfint O.S., 1994; Рауле СМ., 1995), также призодз к их неопластическому перерождению..

4, Анализ содеркашш клеток с ситогенсшческпггл парус-егзшаш у мышей, пиекнцпх различную зэтнвдаегь г-оптотггчгсгсй гибели лимфоцп-тов я пейтрэфнлов периферической крзвя

В начале экспериментального исследования на мышах, зеивопше были рандомизнрозанны на группы по показателю "активность аяоптоппеской гибели лимфоцитов периферической кровч". В первую группу (группа 1) вогплп животные с зысокой актизиостък» апоптотнчесгсой гибели лимфоиятоз л кей-трофилоз периферической крови, ео вторую группу (группа II) - жгаотные с такой активностью апоптотической гибели лимфоцитов а пе!профилов н в третыо группу (группа Ш) - мыши с контрольными значениями данного показателя.

В результате анализа содержания клеток костного мозга с аберрациями хромосом у белых беспородных мышей установлено, что в группах 1 и П значения данного показателя не отличались от контрольных (Р>0,05).

Однако спонтанный уровень клеток с аберрациями хромосом складывается ез нескольких факторов, основными из которых являются доза мутагенного воздействия и время ее экспозиции. Таким образом, содержание клеток с шггогенетическнми нарушениями увеличивается смеете с возрастом организма (Бочков Н.П., 1971). В вашем эксперименте возраст мышей составлял 2-3 месяца. Очевидно, этого времени недостаточно дня проявления межгрупповых различий по данному показателю. Однако после облучения ен-аеггаьгх з дозе 2 Гр содержание клеток костного мозга с цптсгенетическими нарушениями у мышей в группах I и П достоверно отличалось от значений в контрольной группе (Р<0,05). Так, в группе I отмечалось достоверно низкое содержание клеток с аберрациями хромосом, примем аберрзтпй хре? юсомко го типа било меньше чем хромзтпдного, соотзетстзенно 2,S±Q,09 и 14,510,9 %, в то время, как в группе котроля содер;гание хромосомных и хроматяд-ных аберраций было соответственно 6,¡±0,5 и 18,7+1,0 % (Р<0,05). В группе П дашгый показатель бьш достоверно выпи (хроиатидЕше 19,9±1,0 % и хро-моссмгне 8,6±0,4 %, Р<0,05).

Таким образом, у мьплсй с высокой активностью алоптотнческсй гибели клеток, снижение содержания клеток с аберрантными хромосомами происходит, в основном, за счет уменьшения доли аберраций хромосомного типа. ,

Изгестпо, что аберрации хромосомного типа возникают вследствие разрыва ДНК в Gi, г хроматидного - в Go, Gj и S - периоды клеточного цикла (Бочков Н.П., 1971). Скорее всего, низкое содержание клеток с цитогенетиче-скими нарушениями в группе мышей имеющих высокую апоптотическую активность лимфоцитов является следствием экспрессии апоптотических генов (например р53, р21). Это приводит к увеличению времени репарации ДНК, за счет удлинения фазы Gi и эффективной элиминации клеток с цнтогенетиче-скими нарушениями.

Проведение корреляционного анализа выявило обратную зависимость между показателями фДНК лимфоцитов и содержанием клеток костного мозга с аберрациями хромосом во всех группах подопытных животных (Р< 0,05).

Анализ продолжительности жизни мышей после тотального ионизирующего облучения в дозе 10 Гр позволил установить существенное увеличение этого показателя в группе мышей с низкой апоптотической гибелью лимфоцитов до 9,4±1,5 сут, при значении в контрольной группе - 6,1 ±1,0 сут (Р< 0,05). Основной причиной гибели облученных животных, как известий, является развитие постлучевого костномозгового синдрома (Ярмоненко С.П., 1988). Вероятно у животных с низкой апоптотической активностью, клетки костного мозга более резистентны к ионизирующему воздействию. Это позволяет им дольше сохранять жизнеспособность н функциональную активность, тем самым, поддерживая гомеостаз организма.

В группе мышей с высокой апоптотической гибелью клеток отмечалась тенденция к сокращению средней продолжительности жизни, однако различия с контролем оказались не достоверны (Р>0,05).

5. Показатели опухолевого роста у мышей с различной шгтизностью апоптотической гииелл клеток периферической крови

В результате исследования активности опухолевого роста, индуцированного 12-0-терадеканоилфорбол-13-ацетатом (ТФА) в группах мышей с различной апоптотической гибелью лимфоцитов установлено следующие. В группе мышей с высокой апоптотической гибелью клеток у 53,3 % животных наблюдалось образование папиллом кожи, причем их значительная часть не регрессировала через 2 нед после завершения аппликации ТФА, в то время как в контрольной группе количество мышей с опухолью составляло 33,3 % (Р<0,05). Минимальное число опухолей наблюдалось в группе мышей с низкой апоптотической гибелью лимфоцитов - 20 % мышей с опухолью ГР>0.05 ,

о

Изсество, что ТФА является сшюгашьш прсмогсрол a saaysivrcn злоггтсггической п;5ел;! клеток (Новиков B.C., 1956). Поскольку механизм канцерогенного действия ТФА до конца неизвестен, мочаге ггредпелс.тагт::. что а его основе леяагг индукция апсгггоза. Таким сбразом, при г.озлс'.'сгг.:;.: ТФА на кожу мышей имеющих высокую зпоптотнческую активиосгг. усяяк-гастся эффект негативной селекции апоптоз-резистсктанх rj-.етск, что нз йг» üe мутагенного действия ТФА посышсет вероятность позникнсяеинч ншюс-ташсосанных клонов клеток. Отсутствие различий меясду числом опухолей а группе мышей с низкой апоптоглческой гибелью клеток я контполем лог.гч-нее acero объяснить апогттоз-нидушфующими свойствами TOA.

Несколько иные результаты были получены при исследовании позезг-телей опухолегого роста у мышей с привитой аленсклршшсмсЯ Эрлнхз. Taj¿ з группе животных с высокой апоптотической актизисстыо клеток устгкоз-леио уменьшение объема асцктной :хндхости в 1,5 раза, снижение клеточно-сти опухоли в 2 раза и значительное увеличение продолжитзльксстп мышей (Р<0,05) (табл. 3).

Таблица

Показатели активности опухолевого роста у мьспей с аденокараинсмсй Эрлиха на 10 сутки эксперимента, Х±ш

Группе Продолжительность жад- Объем ьсцяти, Клггсчнэсть, |

ин. суг мл xlC ¡КГ. !

Í(п-10) 19,7±1,4 Р< 0,05 4,3±0,3 Р<0.05 3,3±!,¡ ! Р< 0,05 {

¡I (п-10) 12,3±0,8 Р>0,05 5,8tl,l Р>0,05 17,4±1.7 | Г> 0,05 j

III (п» 16) 14,6±1,1 ■ б,2±0,6 1б,7±1,5 I Í

Группа 1-е высокой ахтигнзегыо гпоптотичгсетЛ гибгтп: лкмфощтгое. Групп! П - с шо xüí1 «ТНг.ЧОСТЫЮ зпсггготичсской пз5сл!т лимфоцитов. Группа UI - контроль.

Исследование показателей митотической активности и содержания по-п;бш5гх клеток асщтшой опухоли Эрлиха показало, что в группе мышей с высокой апоптотической гибелью лимфоцитов митогическая атпизность опухолевых клеток была б 2 раза к-пке значений контрольной группы (1-<0,05). Содержание погибших опухолевых клеток в этой группе также в два раза превышало значения в контроле (Р<0,05).

Значения изучаемых показателей з группе мышей с низкой апоптстачг-екой активностью лимфоцитов не отлггчались от контпслы:ых (Р>0,05) (табл.

4).

На основании имеющихся литературных данных и результатов собственного исследования можно сделать предположение, что угнетение актип-яоети роста опухоли в группе животных с высокой апоптотической пгсглкс лимфоцитов происходит за счет повышенной кенцентрагаш наауятовол хлегггоза, которые, в свою очередь мс-гут являться ингибиторами поодшпе?:.*.-пии хлетох (8сЬ\уаЛнпап К..А. г! а!., 1993). В тс::се время в гр«лшг млад«: -

•. .oí. /.аиотйчгскс^ в&яхяеяи опухолевой ахпашост

-;:л зinsuma в хмгхрзае, чта свидетельствует о фкзиолошчг

и,.*»!'. юкссаф&шш кшжороз гпоэтоза.

Таблица

:>кгг5»;«скй£ «ядс;^ чкслс погкб^лгс клетох адакжгрцлномы Эрянха и 1? суп® эксперимента, Х±п. ___

! Гrvraa I -Мягетачгсгай тщясс, S» Погибших клеток опухоли, %

Р< 0,05 4,§±0,5 1 Р< 0,05

I IS íft-Í0) í 21Д±!.7 Р> 0,05 1,Е±0,7 Р> 0,05

{ Ш (fi-JCO I 15.312,3 2.2Ю.З 1

Групга 1-е kucoecS астиздостью йпоптатечеггой гибели яиифоцктое. Группе П - с тв ti-JuwuKTi:» ¡шэптстачсгЕгй гагсди гпгкфошпов. Груша Ш - KOi.-тролъ.

EqjasTiiO, сш&кпнгя гсоягопгсссгая пгбгяь лимфоцитов и игГпрсфн периферической iqxüJ! в этой группе зкказгньпе связана с нарушение) ржища медклтореж апептезг кдн с анутргжяеточной нкгнбнцкей мехзнкэ кои Епситшгачгекоа габсяа. Kocossaoie догззгтелылаа этому предполо« па» {íjíth паяучган при оценке содсрзказня фДКК лиыфоцнтоз зерифгркче •«.•ей i^osa у мишгГг до а чгрез 10 дней после еркзшиз; адгаохгрцкноиы Эр .-.'..je. tax, уетгвоелгко достокрвэе ухляачгнзе содержания фДНК лпыфоцк тог чгргз 10 вгей пагяз npissssa опухоли только в контрольной группе (Р-0,05). Б зтой группе швесй содержание фДНК книфошлоз через 6 ч инку га upaaassai спухола согтазягло 55,Ш,5 54, а после привязки пош пкдэсь до 60,7±1Д, Р<0,05.

Тагкм образл;.;.. б ходе кзлггго ссследованад было установлено, что npi высагоЗ апоптогпяое^й отаиноста raeros заачгггеяыю уснлкзается каше рагекный зффгэт TOA, но в то se время сшшгггог активность опухолевой роста срнЕгтсй едгЕоггрипнаны Зрянхг (табл. 3). При пониженной гпопто тнчесЕэй клетох наблюдается сшгагекке риска возникногекня пл

шипом коза ирн гшдликацаз ТФА, однако, ке изменяется активность рост; привитой сшухаял. Полуденные результаты указывают на рзатачкые меха нззмъг етблю^кашх эффалос в группах мышей с различной гаоотшнчест гибелью слетов

Анализ данных литературы с учетом полученных экспгржентальньи результстоз позволяет предположить, что у животных с еысокой апототичс-сксй активностью клеток повышена концентрация медиаторов апоптоза, х счет этого происходвт а^станацкя процессов апоптотнческой гибели как соо-етьгнных клеток периферической крови, так н привитых клеток с п}-холи. Однако у жкеотных с пониженной клеточкой гибелью при нормальном уровне медиаторов апоптоза собственные клетки оказываются толерантными к н> дсйстоию, а привитые опухолевые клетки адекзатно отвечают гпоптотичс-

16

аюЯ габсяыо. Данное ппедполог-ек!*.; £к»ят5ср-ддггп:<'. результата-д;- к-.-г; . -покатая дннампкн УФ-сексибялюация мембран д«з©гам нгЯгр-'фклов гк» ферической крсвн ?л*а>ей до, н посте прививки аденокзрциномы Эрлиха.

Динамика времени УФ-сенскбилкззнии мембран лизосом негётрофнл.'-:' з интактяом контроле характеризовалась плавным повышением значении от Л,0±1,3 усл.сд. сразу после выделения клеток до 47,3±1,8 усл.ед. ^ерзз -15 ч инкубирования (Рис.7а). 3 группе мышей с шсоксЯ ппоггшппесксЯ гибелью клеток продолжительность УФ-сенсийиякззхеи мембран лизосом через 12 к 24 ч инкубирования достоверно превысила значения в контроле (Р<0,05). Через 36 ч отмечалась ивг^рекг дзднего показателя, пра этом гремя УФ-сексибшгазгции было достоверно ншес хоггтрс,—гп.:х зпачешгЗ (?< 0,05).

В групп; ишвей с низкой гхгнвзовгыо ггсоптспсчгсхой гябелл ср-^у после выделения клетох огаечалзгъ «пленила к з'мгныпеншо гремгтэт разгп-гея реахцнл УФ-сгяснбшшзащга. Через 12 ч инкубиревзнкя кабгаодзег/.сг сняжегше оказалось достсзгрнкм (Р<0,05). Однако тергз 24 ч показателя г.ь> разнявались с контролем, а через 36 и 43 ч значения УФ-сгнсабяшггзгсга а этой группе значительно превышали показателя в ко&треле (Р<0.05).

Рнс. 7. Поггззтслн УФ-сгиагёилкзгциа ыгмбргн л1сгосоы пе^гтрофнясв першЬгрг^ггкэ;; фовн ннтаггнъсс кыш ей («) а ьгысей с адгиекгракномой Эрлдаз нл 10 супси после г.су-.-с;гвп5 (б).

Грутга I - с ак-»к>й гяипостяо шоптопмгеои гкОегм ятяфггх'тез. Груши П - с иг>-ггЗ активностью гпоптотичгской гнифегктоа. Трутт Ш - «го»ггр~ть.

В результате исследовании УФ-сеискбшшззшгаг мембран лизссох язн-•рофиноз периферической крови мышей с .гдепокгршшомой Эвкнха на 10 су-пси после прививки опухоли достоверные отличия ;рп»ачихи этого пехазгте-хч были устаноЕле!ш только з контрольной групп г. Так, через 24 ч жкуба-щш нейтрофияов продолзегтедьяоеть У Ф~сс:<; сибклизгщ; повышалось до 50,§±1,5 усл.ед., пря зааченкях в группе тшштюго контроля 45Д±1.,3

усл.ед., а через 48 ч этот показатель снижался до 44,3±1,1 усл.ед., при значе-кеп з группе пнтаеттгаго контроля 47,3±!,8 усл.ед. (Р<0,05) (см. Рис. 7а к 7б\

Тая:м образен, увеличение времени УФ-сенсибилизацин мембран лизосом пгйтрофилов и повышение содержания фДНК лимфоцитоз периферической креви через 10 дней после прививки опухоли у ханзотных контрольной группы является примером адекватной реакции организма на рост опухоли. Увеличение этих показателей, вероятно, происходит вследствие повышения концс:гтргцни медкЕтороз ал о птоза как в крови шшотных, так и в асците опухоли.

Исходя из полученных нами результатов исследования динамики УФ-сенсибилизации мембран лнзосом нейтрофилов периферической крови очевидно, что в группах доноров-добровольцев и экспериментальных животных с высокой активностью апоптотнческой гибели лимфоцитов, время развития реакции УФ-сгнсибилизацин нейтрофилов через 12 и 24 ч инкубации значительно превышает показатели в контрольных группах. В группах с низкой апоптотнческой активностью лимфоцитов, напротив, установлено снижение зре.мени развития реакции. Данные наблюдения возможно свидетельствуют об увеличении лабильности ("текучести") мембран лизосом в группах с высокой апоптотнческой активностью и, наоборот, о повышении ригидности мембран в группах с низкой апоптотнческой активностью. В то же время известно, что при клеточной малигнизацнн, как правило, увеличивается микровязкость мембран, что может быть связано с концентрацией сфингомиелина в плазматических мембранах (ТакаШ М.,1995). Так, установлено, что микровязкость лшшдного бислоя внутриклеточных мембран гепзтомы крыс, в которой содержанке сфингомиелина выше, чем в норме, увеличивается по сравнению с микрозязкостью соответствующих мембран клеток печени (Дятловицкая Э.Б., 1995). Таким образом, высокая ригидность бнлипидного слоя клеток в группах с низкой апоптогшческей активностью, свидетельствует о том, что мембраны нейтрофилов в этих группах находятся в таком же фазовом со-стояжш, что н мембраны малигнизированных клеток

Следует отметить, что клеточная малигнизацая не всегда сопровождается повышением микровязкбсти мембран. Так, в работе Э.М. Халилова (1987) показано, что при лимфолейкозе у человека и крупного рогатого скота в плазматических мембранах лимфоцитов снижено содержанке сфингомиелина, при этом существенно уменьшается их микровязкость. В ходе нашего исследования было установлено, что в группах с высокой апоптешпеской активностью клеток отмечалось снижение микровязкости мембран лизосом.

Анализ полученных нами результатов с учетом данных литературы по-ззоляет сделать заключение, что при низкой и высокой апоптотнческой активности лейкахпггов периферической крови существенно повышается риск развития осггуходевого процесса.

выводы

1. Показатели активности апопготнческнй гибели лейкоцитов периферической крови являются биомаркерами хромосомной нестабильности и риска развития опухолевого процесса.

2. У здоровых доноров с высоким титром антител к капсидному шггн-гену вируса Эпштейна-Барр понижена активность апоятотической.гибели лейкоцитов периферической крови и увеличено содержание лимфоцитов с шггогекетичеасшп нарушениями.

3. У здоровых доноров с гпгхей активность» аноптотической гибели ле&гоцятса периферической крезн позыгаено содержяие лимфоцитов с дн-тогенетнчеспзги нарушениями.

4. Большинство больных раком. молочной зкдезы и раком легкого имеют позкшеиную или иошЕ«пнук> активность гясптсппесксй гибели лимфоцитов периферической срозн.

5. У мышей с высокой шптзностья) гпоптстпчеспсй гибели лимфоцитов периферической '.фони уменьшается содержание сягогенеглческн кт-гг-вгнных клеток костного ьгозгз, пндудггрс ванных чонззпругошей радиацией, позышается чувствительность к кгнцерогяипсиу дгйстзяю 12-0-терздеканонлфорбол-13-гцсппа и сиясггтся здтнзпостъ опухолевого роста перевиваемой аденокарцнксмы Эрлиха.

6. У здоровых доноров и экспериментальных гзгвотпых, имеющих высокую шш низкую активность ппопгоютеской гнбела клеток, изменяется дн-иамика реакции УФ-сенснбалнзащш мембран лпзосом вейтрофилов периферической кревв. - .

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Dyinskikh N.N., Novitskyi V.V., Vasilyeva О.А., Ivanchuk I. L, Naidyonova N.N., Dyinskikh E.N. Interferonogenesis, DNA repair and cytogenetic alterations in the blood of people exposed to radiation as a result of the accident at Hie Siberian chemical plant (April 6, 1993) / In: 5th International Conference on Mechanisms of Antimutagenesis and Anticarcinogenesis (5îh ICMAA). -Okayama, 1996.-P.I41.

2. Ильинских H.H., Байксз A_R, Hsainyx ИЛ., Ильинских E.HL Патогенетические последстзия длительного радиационного загрязнения некоторых регионов Сибири / Ш Всероссийская научно-практическая "онференцня "Антропогенное воздействие а здоровье человека". - Калуга, 1996. -€.103-105.

3. Dyinskikh N.N., Dyin S.Y., Ivanch.uk I. I. Comparative genetic analysis of blood cells of the residents in some villages situated on the banks of the Yenisei,

19

Tom snd ТесЬд rivers in the area of radiaiional discharges of huclear plants in Siberia and Urals / Ш Международна! радиологическая конференция "Судьба и работавшего ядерного топлива: проблемы и реальность". - Красноярск, 1956.-С. 108-112.

4. Ilyinskikh N.N., Ivanchuk I. I., Isaeva T.M. Breaks of ciiromosomes in the region of oncogenes and circulation of Epstein-Вахт vims among the local population that had teen subjected to the aficcts of radiating deposits II Journal of EUON. -1996. -№. - P.101-104.

5. Ilyinskikh N.N., Ivanchuk I. I., Kolomiyets L.A. Chromosome fragility in the site of oncogenes in the population of the area polluted with radionuclides due to the radiation accident at the Siberian chemical plant // Journal of BUON. -1997.-V 2.-№1.-P. 47-51.

6. Иванчук И.И., Юркин АЛО, Комплексная оценка доз радиации у людей длительное время проживающих на радиационно-загрязненных территориях / 2-ая международная научно-практическая конференция "Безопасность жизнедеятельности в Сибири и на Крайнем Севере". - Тюмень, -1997. -С.53-

7. Иванчук И.И., Ильинских Н.Н., Иванова Н.В. Роль апоптотической гибели клеток в механизмах мутагенеза и канцерогенеза / Материалы юбилейной конференции - Медико-биологические аспекты. нейро-гуморальной регуляции: Труды конфер. посвещ. 35-летию ЦНИЛ. - Томск: СГМУ, 1998. -С.280-282. . •

8. Ilyinskikh N.N., Ivanchuk I. I., Isaeva T.M. Frequencies of Micronucleated Lymphocytes and Epstein-Barr Virus Contamination in Altai Region Residents Living Near the Seniipalatmsk Atomic Testing Ground // Environmental and Molecular Mutagenesis. -1998. -V.31.-Ka 1. -P.ll-17.

9. Dyinskikli N.N., Ivanchuk 1.1., Isaeva T.M. Long-duration effect of small-dose radiation on the human organism / In: 7th International conference «Radiation safety and social-ecological problems of Kazakstan». - Karaganda, 1998. -P. 117-

54.

120.