"Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого при алкогольной интоксикации

Воронова, Алла Вадимовна

Диссертации по медицине → Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Автореферат и диссертация по медицине (14.04.02) на тему:"Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого при алкогольной интоксикации

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Воронова, Алла Вадимовна Улан-Удэ 2011 г.

Ученая степень: кандидата фармацевтических наук

ВАК РФ: 14.04.02

Автореферат диссертации по медицине на тему "Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого при алкогольной интоксикации

На правах рукописи

ВОРОНОВА Алла Вадимовна

РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ КОМПЛЕКСНОГО РАСТИТЕЛЬНОГО СРЕДСТВА, РЕКОМЕНДУЕМОГО ПРИ АЛКОГОЛЬНОЙ ИНТОКСИКАЦИИ

14.04.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Улан-Удэ-2011

3 1 [;1Д? 2011

4841828

Диссертационная работа выполнена в Государственном образовательном учреждении «Московский медицинский университет имени И.М. Сеченова»

Научный руководитель:

доктор фармацевтических наук, МаркарянАртемАлександрович профессор

Официальные оппоненты:

доктор фармацевтических наук, Николаева Галина Григорьевна профессор

кандидат фармацевтических наук Гармаева Елена Анатольевна

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (ВИЛАР) РАСХН

Защита состоится «И» апреля 2011 г. в 16 00 на заседании диссертационного совета ДМ 003.028.02 при Институте общей и экспериментальной биологии СО РАН по адресу: 670047, г. Улан-Удэ, ул. Сахья-новой 6.

С диссертацией можно ознакомиться в Центральной научной библиотеке Бурятского научного центра СО РАН

Автореферат разослан: «14 » марта 2011 г.

Ученый секретарь диссертационного совета ДМ 003.028.02

кандидат биологических наук

Хобракова В.Б.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы. Алкоголизм относится к одной из наиболее распространенных токсикоманий и по данным ВОЗ занимает одно из первых мест, уступая только сердечно-сосудистым и злокачественным новообразованиям. Общие признаки токсического действия этанола и этанолсодержащих напитков - жировая дистрофия печени, цирроз печени и другие заболевания желудочно-кишечного тракта, что приводит к нарушению тканевого и клеточного метаболизма, подавляя систему иммунитета (Бровкина И.Л., Быстрова Н.А., 2007), функций органов дыхания и кровообращения, печени, почек, водно-электролитного обмена с развитием токсической энцефалопатии и др. (Билибин Д.П., Дворкин В.Е.,1990; Ливанов Г.А., Бонитенко Е.Ю. и др., 2010). Недостаточная эффективность используемых при алкогольной интоксикации лекарственных средств, наличие побочного действия у ряда препаратов при отягощенном состоянии гепатобилиарной системы определяют актуальность поиска нетоксичных гепатозащитных средств. В этой связи востребована разработка лекарственных средств и нутрицевтиков растительного происхождения, способствующих восстановлению организма при алкогольных интоксикациях (Белоусов Ю.Б., Гуревич Г.Г, 2006). Фитопрепараты обладают многогранным, эффективным и, в тоже время, физиологическим действием на организм. Наиболее распространенной формой их применения являются сборы (фиточаи) из лекарственных растений, а также на их основе сухие экстракты, преимуществом которых является удобство применения, унификация методик стандартизации и стойкость при их хранении. Многокомпонентные лекарственные средства и биологически активные добавки (БАД) к пище на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС), благодаря наличию комплекса биологически активных веществ (БАВ) оказывают профилактическое и терапевтическое влияние на организм человека. Несмотря на их высокую эффективность, в настоящее время применяется ограниченный набор лекарственных средств растительного происхождения, который не удовлетворяет возросшим потребностям населения.

В связи с этим, является актуальной разработка БАД к пище и экстракта сухого на основе растительной композиции гепатопротекторно-го, иммуностимулирующего и детоксицирующего действия, улучшающего функции обмена веществ и являющийся профилактическим и терапевтическим средством при алкогольной интоксикации.

Цель и задачи исследования

Целью настоящей работы является разработка способа получения и стандартизация биологически активной добавки к пище Фиточай «Стопал-БИО» и экстракта сухого на его основе, рекомендуемых для профилактики и лечения алкогольной интоксикации.

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

- обосновать выбор состава многокомпонентной растительной композиции для разработки биологически активной добавки к пище;

- провести фармакогностическое изучение БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО», определить критерии подлинности и показатели его качества;

- провести изучение по выбору оптимальных факторов экстракции для разработки способа получения экстракта сухого на основе БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО»;

- провести фитохимические исследования на содержание основных групп биологически активных веществ в БАД к пище «Стопал-БИО» и экстракте сухом;

- разработать методики стандартизации БАД к пище «Стопал-БИО» и экстрактф сухого;

- разработать нормативные документы: Технические условия (ТУ), Технологическую инструкцию (ТИ), рецептуру на БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО» и внедрить в производство.

Научная новизна работы

На основании исследований по фармакологической активности, обоснован рациональный состав и соотношение ингредиентов многокомпонентной растительной композиции, рекомендуемого при алкогольной интоксикации.

Проведен товароведческий анализ БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО». Макро- и микроскопическими методами анализа определены основные диагностические признаки цельного и измельченного сырья, установлены критерии подлинности и числовые показатели, которые включены в нормативные документы.

С учетом вклада каждого компонента в растительной композиции разработаны методы качественного и количественного анализа, подтверждающие наличие основных групп БАВ, характерных для каждого вида сырья.

Оптимизированы условия экстракции БАВ из растительной композиции: оптимизированы условия экстракции: тип экстрагента -горячая вода (Т 80-90 °С), соотношение сырья и экстрагента 1:(10-12); время экстракции - по 2 часа. Рациональность технологии получения экстрак-

та сухого подтверждено количественной оценкой БАВ в растительной композиции и экстракте сухом.

Разработаны методики качественного и количественного анализа основных БАВ в БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО» и экстракте сухом. Методики валидированы.

Разработаны и внедрены нормативные документы: ТИ, ТУ и рецептура на Фиточай «Стопал-БИО»

Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

- Технические условия (ТУ-9373-003-33691551-07); технологическая инструкция на БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО», внесенные в Государственный реестр БАД к пище: РУ № 77.99.23.3.У.2144.3.07. от 30.03.2007.

- Методика количественного определения суммы полисахаридов в пересчете на глюкозу в экстракте сухом используется ГБУЗ «ЦСиККЛДЗ г. Москвы, как метод контроля качества экстракта сухого;

- Технические условия на экстракт сухой.

Связь задач исследования с проблемным планом НИР

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ГОУ ВПО «Московский медицинский университет им. И.М. Сеченова по теме: «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (per. номер 01.2.006 06.352) и является фрагментом исследований кафедры фармации с курсом социальной фармации ФППОП.

Апробация работы

Основные положения и выводы диссертационной работы доложены на: VII Международной специализированной выставке «Аптека-2007» (Москва, 2007); V Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (Уфа, 2008), IX Международном конгрессе «Здоровье и Образование в XXI веке» (Москва, 2008), XVI Российском Национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2009), VII международном симпозиуме по фенольным соединениям (Москва, 2009).

Публикации

Основное содержание диссертации опубликовано в 7 научных работах, из них 1 статья - в периодическом издании, рекомендованном ВАК МО и науки РФ.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- обоснование выбора рационального состава и соотношения входящих компонентов растительной композиции;

- результаты фармакогностических и фотохимических исследований растительной композиции и экстракта сухого;

- результаты изучения по выбору оптимальных факторов экстракции для разработки способа получения экстракта сухого;

- результаты исследований по стандартизации БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО».

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 159 страницах, содержит 47 таблиц, 26 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, трех глав экспериментальной части, библиографии из 238 источников литературы, из которых 133 на иностранных языках, и приложений.

Во введении обоснована актуальность темы, сформулированы цель и задачи исследования, представлена научная новизна и практическая значимость работы.

В первой главе на основании обзора данных литературы изложено современное состояние вопроса профилактики и комплексного лечения алкоголизма и алкогольной интоксикации с использованием лекарственных растительных средств, проанализированы и обобщены сведения о лекарственных препаратах растительного происхождения, биологически активных добавках к пище, применяемых при заболеваниях указанной патологии, состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья, включенного в фитокомпозицию.

В разделе: Материалы и методы исследования приведены сведения об объектах и методах исследований, характеристике используемых при выполнении работы приборов, хроматографических систем, сорбентов и реактивов.

Во второй главе приведены результаты экспериментальных исследований по фармакогностическому и фитохимическому изучению БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО». Предложены критерии подлинности и нормы содержания биологически активных веществ, а также результаты исследований основных групп БАВ - фенольных соединений, органических кислот, терпеноидов, гиперицина, полисахаридов, свободных Сахаров и экдистерона.

Третья глава посвящена разработке методик количественного анализа БАВ: флавоноидов, экдистерона, органических кислот, эфирного масла, дубильных веществ, полисахаридов с использованием со-

временных физико-химических методов с валидацией методов количественного определения.

В четвертой главе изложены результаты исследований по разработке способа получения экстракта сухого, его стандартизации, описаны условия получения водных извлечений из растительной композиции с учетом влияния различных факторов экстракции. Предложены критерии подлинности и нормы содержания биологически активных веществ, включенные в нормативную документацию.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Объекты н методы исследования

Объектом исследования служило стандартное лекарственное растительное и пищевое сырье, из которого составлены прописи многокомпонентного фиточая.

- трава зверобоя продырявленного (ГФ XI, вып.2, ст.52) - Hypericum perforatum L., сем. зверобойные - Hypericaceae\

- трава чабреца обыкновенного (ГФ XI, вып. 2, ст. 60) - Thymus serpyl-lum L., сем. яснотковые - Lamiaceae;

- корневище с корнями рапонтикума сафлоровидного (ФС 42-2707-90) -Rhaponticum carthamoides L., сем. астровые - Asteraceae\

-трава полыни обыкновенной (ФС 42-2094-83) - Artemisia vulgaris L., сем. астровые - Asteraceae\

-цветки пижмы обыкновенной (ГФ XI, вып. 2, ст. 11) - Tanacetum vulgare L., сем. астровые - Asteraceae;

- листья толокнянки обыкновенной (ГФ XI, вып.2, ст. 26) - Arctostaphy-los uva ursi L., сем. вересковые - Ericaceae;

- трава золототысячника обыкновенного (ГФ XI, вып.2, ст. 48) - Сеп-taurium erythraea L., сем. горечавковые- Centianaceae;

- корни сельдерея (ГОСТ РСТ РСФСР 749-88) - Apium graveolens, сем. зонтичные - Umbeffiferae, или сельдерейные -Apiaceae.

Измельчение воздушно-сухого сырья с содержанием влаги от 9,0 до 12,0 %, отбор средней и аналитических проб проводили согласно ГФ XI изд., вып.1; масса пробы для определения подлинности, измель-ченности и содержания примесей - 100 г, влажности - 10 г, действующих веществ и золы - 40 г.

Макроскопические признаки растительной композиции определяли в соответствии с требованиями ГФ XI изд., вып.1, с. 266-267. Микроскопические исследования сырья и растительной композиции проводили по методике ГФ XI изд., вып.1., с. 277 с помощью микроскопа Ломо, МИКМЕД-1» с бинокуляром АУ-12-1,5х. Микрофотосъемка проведена

с помощью цифровой камеры Canon PowerShot, микрофотографии отредактированы в программе Adode Photoshop SC.

Сгущение полученных извлечений проводили на вакуум-выпарном ротационном испарителе марки ИРМ-1.

Исследование качественного состава объектов проводили методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) на пластинах «Сорбфил УФ-254» или «Кизельгель УФ-254» в следующих системах растворителей (соотношение растворителей приведено в объемных частях): 1. гексан - этил-ацетат (85:15).

2. этилацетат - уксусная кислота - вода (25:5:5)

3. муравьиная кислота - вода - этилацетат (6:6:88).

4. н-бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5)

5. этилацетат - муравьиная кислота - уксусная кислота - вода (100:11: 11:27)

Хроматографирование осуществляли в соответствующей системе растворителей при температуре 19-23°С в герметически закрыты): стеклянных хроматографических камерах. Нанесение исследуемых растворов на хроматографические пластины осуществляли при помощи микрошприцов. Растворители для хроматографии и реактивы для получения производных использовали марки ХЧ или ЧДА. Детекция зон адсорбции в УФ -свете при длине, волны 365 нм. Электронные спектры соединений в УФ - и видимой областях записывали на приборе Helios (США) в кюветах с толщиной поглощающего слоя 1 см. Для регистрации УФ - спектров исследуемых веществ готовили 0,05-10% растворы в абсолютном метаноле и абсолютном спирте этиловом, а также в 70 % спирте этиловом.

ВЭЖХ проведено на хроматографе «Gilston», модель 305 (Франция); инжектор ручной модель Rheodyne 7125 USA с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для Windows. Неподвижная фаза - металлическая колонка размером 4,6x250 мм Platinum EPS С 18 100 с размером частиц сорбента 5 мкм. Подвижная фаза - смесь метанол - вода - фосфорная кислота концентрированная (400:600:5). Детектор УФ - при длине волны 254 нм; объем вводимой пробы -20 мкл.

Исследование состава Сахаров проведено, после гидролиза полисахаридов, методом ВЭЖХ на колонке ALTECH OA-1000 Organic Acids размером 6.5x300 мм; подвижная фаза 0,01М раствор серной кислоты, скорость подачи элюента 0,7 мл/мин, температура колонки - 65°С; детектор рефрактометр модель 131 "GILSTON"; объем вводимой пробы -20 мкл.

При разработке методик качественного и количественного определения БАВ использованы хроматографически чистые вещества и стандарты: арбутин - Fluka, кат. №10960, СО ВИЛАР (ТУ 9363-133-04866844-01), галловая кислота - Fluka, кат. №48630, кофейная кислота -Sigma, кат. № 0625, хлорогеновая кислота - Sigma, кат. №3378, феру-ловая кислота СО - ТУ 9369-143-0486244-01, апигенин - Fluka, кат. №10748, гесперидин - Sigma, кат. № 04125, лютеолин ГСО - ФС 423130-95, лютеолин-7-гликозид ГСО - ФС 42-3130-95, кверцетин ГСО -ФС 42-290-79, ВИЛАР ТУ 9369-128-04868244-03, рутин ГСО - ФС 422508-87, ВИЛАР ТУ 9369-141-048668244-02, гиперозид ГСО - ФС 420106-03, кемпферол - Fluka, кат. №60010, экдистен (гексагидроксихо-лестен, экдистерон) СО - ВФС 42-1713-87.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Разработка способа получения биологически активной добавки к пище Фиточай «Стоиал-БИО» и установление показателей его подлинности

Проведенный анализ данных литературы о химическом составе выбранных лекарственных растений, их активности, позволил обосновать рациональность выбора растительных компонентов. При этом учтены все правила, принятые в РФ при разработке БАД к пище, основными критериями которых являются: официнальность лекарственных растений; отсутствие их токсического воздействия; сырьевые запасы на территории РФ. Растительными компонентами являются восемь видов лекарственного и пищевого сырья. С целью выбора оптимального соотношения входящих ингредиентов были изучены несколько вариантов растительной композиции, которые оценивались по количественному содержанию БАВ. На основании фармакологического и фитохи-мического скрининга и сравнений полученных результатов, выбрана композиция следующего состава (из расчета 1,2 кг): зверобоя трава 400,0 г; чабреца трава 300,0 г; сельдерея пахучего корни 230,0 г; пижмы цветки 80,0 г; полыни обыкновенной трава 70,0 г; рапонтикума сафлоровндного корневища с корнями 50,0 г; золототысячника трава 50,0 г; толокнянки листья 20,0 г.

Разработана схема получения БАД к пище, включающая основные стадии технологического процесса:

ТП 1. Измельчение и просеивание растительного сырья;

ТП.2. Получение готового продукта;

УМО.1. Фасовка и упаковка.

Согласно технологической схеме производства наработано 5 серий.

Проведен товароведческий анализ на пяти сериях Фиточай «Сто-пал-БИО». Установлены следующие нормы по показателям (в %): содержание общей золы не более 10; золы нерастворимой в 10 % кислоте хлористоводородной - не более 4; массовая доля влаги - не более 14; степень измельчения: частиц, не проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм - не более 5; частиц, проходящей сквозь сито с диаметром отверстий 0,18 мм - не более 10; органической примеси - не более 3, минеральной примеси - не более 2; массовая доля металломагнитной примеси - не более 0,0005. Зараженность амбарными вредителями, плесень, затхлость, посторонние запахи и привкусы не допускаются.

Изучены показатели подлинности. Органолептические показатели: смесь неоднородных частиц измельченного растительного сырья, проходящих сквозь сито по ТУ 23.2.2068-89 с отверстиями диаметром Змм. Цвет серовато-зеленый с бурыми, желтыми и желтовато-белыми вкраплениями. Запах ароматный, вкус водного извлечения пряно-горький. Диагностические признаки сырья установлены методами макро- и микроскопии.

При просмотре смеси под стереомикроскопом или лупой видны кусочки плотных, кожистых, ломких листьев. С одной стороны, темно-зеленые, блестящие с ясно заметными вдавленными жилками, с другой стороны немного светлее матовые, голые (толокнянки листья)-, кусочки цилиндрических стеблей, часто расщепленных вдоль зеленовато-желтого и серовато-зеленого цвета, иногда с фиолетовым оттенком, кусочки листьев серовато-зеленого цвета со светлыми или темными точками (вместилищами), кусочки желтых цветков {зверобоя трава)', -кусочки деревянистых корневищ и корней от бледно-желтого до буровато-коричневого или черного цвета (рапонтикума сафлоровидного корневища и корни); кусочки листьев зеленого или серовато-зеленого цвета с выступающими жилками с одной стороны, кусочки четырехгранных опушенных стеблей, часто расщепленных вдоль, желтовато-бурого, реже зеленовато-коричневого цвета, обрывки цветков буровато-красного или синевато-фиолетового цвета (чабреца трава)-, кусочки голых четырехгранных стеблей, расщепленных вдоль, желтовато-зеленого цвета, кусочки желтовато-зеленых листьев и чашечки, кусочки желтовато-розового или желтого венчика (золототысячника трава)-, -кусочки листьев и кусочки неодревесневших стеблей, стебли ребристые, слабоопушенные, буровато-зеленые, корзинки мелкие, продолговатые, серого цвета, цветки трубчатые, красновато-бурые {полыни обыкновенной трава); кусочки цветочных корзинок, трубчатых цветов,

цветоложа цветоносов (пижмы цветки);-кусочки корней бледно-желтого цвета (сельдерея пахучего корни).

В связи с отсутствием в доступной литературе микроскопического исследования корней сельдерея пахучего, полыни обыкновенной и корней рапонтикума сафлоровидного нами проведено их детальное изучение в цельном и измельченном сырье.

Микроскопия корней сельдерея.

При исследовании микропрепаратов под стереомикроскопом или лупой видны: в измельченной смеси: обрывки паренхимы с округлыми клетками, фрагменты сосудов древесины, наличие секреторных вместилищ, фрагменты покровной ткани (сельдерея пахучего корни).

Микроскопия корневищ и корней рапонтикума сафлоровидного (цельных). К диагностическим признакам корневищ и корней рапонтикума сафлоровидного можно отнести: наличие покровной ткани в виде многослойной перидермы, клетки которой окрашены в темно-коричневый цвет; узкую кору, в которой находятся, образуя два-три прерывистых кольца из крупных секреторных вместилищ иногда с содержимым оранжевого цвета, более часто располагающиеся к периферии коры и реже на границе с области вторичной коры, измельченном сырье видны: обрывки паренхимы коры с округло-угловатьми клетками и иногда с секеторными каналами, содержащими красно-бурое содержимое; фрагментами слоев перидермы корневищ и корней в плане, полигональные клетки которых имеют толстые одревесневшие стенки и окрашены в красно-бурый цвет (рапонтикума сафлоровидного корневища с корнями

Микроскопия травы полыни

В действующей НД на траву полыни обыкновенной (чернобыльника) [ФС 42-2093-83] в разделе «Микроскопия» проведено описание диагностических признаков только листовой пластинки этого растения. В соответствии с новыми требованиями, кроме признаков в анатомическом строении листовой пластинки для сырья, относящегося к морфологической группе «НегЬа - трава», следует дополнить указания об особенностях анатомии стеблей и цветков. Вышеуказанные обстоятельства вызвали необходимость в уточнении особенностей анатомического строения листовой пластинки полыни обыкновенной, в изучении диагностических признаков сырья. В цельном сырье полыни обыкновенной видны: обрывки пористых и сетчатых сосудов, состоящих из очень коротких члеников, обычно слегка смешанных по отношению друг к другу, иногда спиральных и лестничных сосудов, состоящих из коротких члеников; обрывки трахеид с очень толстой обо-

лочкой и древесные волокна, короткие, веретеновидные, резко сужающиеся на концах, многочисленные косые поры; обрывки верхней стороны эпидермиса листа из угловатых клеток с малоизвилистыми клетками; фрагменты нижней стороны листа с густым опушением, состоящим из Т-образных волосков и их многоклеточных оснований, имеющих очень длинную поперечную апикальную клетку; с крупными устьицами, окруженными 3-5 клетками эпидермиса (анамоцитный тип) и извилистыми стенками, волоски имеют очень длинную поперечную апикальную клетку. Обрывки эпидермы стебля, стеблевых трихом, проводящих пучков (полыни обыкновенной трава).

Фитохимическое изучение Фиточай «Стопал-БИО»

Для подтверждения основных групп БАВ были проведены качественные реакции с водным и спирто-водными извлечениями: на арбутин, дубильные вещества, флавоноиды, полисахариды. Осуществлена регистрация спектра метанольного извлечения из фиточая в УФ-области. Спектр поглощения полученного извлечения в области от 210 нм до 450 нм приведен на рис. 1 и имеет максимумы при длине волны

. .»а г» ::: я» : :ма-■: /.;**)... ..к».

Рис. 1. Спектры поглощения (МеОН) в УФ-области Проведено изучение фенольных соединений методом ТСХ в смеси растворителей (система 2) На хроматограмме из спиртового извлечения обнаружены шесть зон адсорбции: желтовато-коричневая с ЯГ около 0,28 (рутин); коричневая с около 0,48 (гиперозид); коричневая с ЯГ около 0,54 (лютеолин-7-гликозид); серо-голубая с КГ около 0,56 (хлорогеновая кислота); желтоватая с ЯГ около 0,98 (кверцетин). Обнаружение арбутина и гидрохинона осуществляли в смеси растворителей 3. Визуализация зон адсорбции проведена 1% раствором дихлор-хинонахлоримида в метаноле и затем 2 % раствором натрия карбоната

безводного. На хроматограмме извлечения из сбора обнаружены две зоны адсорбции голубого цвета с Ш1 около 0,20 (арбутин), около 0,85 (гидрохинон) и зона коричневого цвета с ЯГ около 0,67 (галловая кислота). Изучение состава фенольных соединений проведено методом ВЭЖХ. Результаты исследований приведены на рисунке 2 и в табл.Л.

Таблица 1

Хроматографические ха эактеристики веществ фенольной природы

№ Компонент Время удержив, сек Площадь пика, шУ-сек Содержание,%

1 Арбутин 359,3 541,60 3,26

2 Галловая кислота 387 907,03 5,47

3 Хлорогеновая кислота 417,6 1013,27 6,11

4 Эпикатехин 476,4 3633.51 21,90

5 Цикориевая кислота 555,3 6835.26 41.20

6 Лютеолин-7-гл. 879 879.70 5.30

7 апигенин 973,2 768.50 4.63

8 гиперозид 1203 1086.11 6.55

9 Рутин 1406 777.85 4,69

10 Кверцетин 3175 146.80 0,88

| 3577 100

Рис. 2. ВЭЖХ фенольных веществ до кислотного гидролиза: 1-арбутин, 2-галловая кислота, 3-хлорогеновая кислота, 4-эпикатехин, 5-цикориевая кислота, 6-лютеолин-7-гликозид, 7-алигенин, 8-гиперозид, 9-рутин, 10-кверцетин

Идентифицированы арбутин, флавоноиды как свободные так и гликозидированные - апигенин, кверцетин, лютеолин-7-гликозид, рутин, гиперозид, суммарное содержание флавоноидов составляет более 22 %; фенолкарбоновые кислоты представлены хлорогеновой и цико-риевой кислотами; дубильные вещества - галловой кислотой и эпика-

техином, определено содержание арбутина - 3 %. Преобладают по содержанию цикориевая кислота и эпикатехин. Нами проведена попытка исследования состава фенольных веществ после их кислотного гидролиза. Результаты проведенных исследований приведены на рис.3 таблице 2.

Рис. 3. ВЭЖХ веществ фенольной природы после гидролиза: 1-лютеолин, 2-кверцегин, 3-апигенин, 4- кемпферол.

Таблица 2

Хроматографические характеристики флавоноидов (после гидролиза)

№ Компонент, Время Высота Содержание

кислота удерживания, пика %(метод

мин mvmin нормализации)

1 Лютеолин 4,39 60,37 13,76

2 Кверцетин 5,93 360,75 82,23

3 Апигенин 8,44 7,34 1,67

4 Кемпферол 9,31 10.26 2,34

Сумма 438,72 100

В анализируемой пробе идентифицированы агликоны флавоноидов: это флавонолы: кверцетин и кемпферол и флавоны: лютеолин, апигенин, преимущественно превалируют кверцетин (82,2%) и лютеолин (13,7%).

Для идентификации гиперицина исследуемый спирто-водный раствор хроматографировали на пластинках «КлеБе^е! 40 Р254» в системе 5. На хроматограмме испытуемого раствора в УФ-свете проявлена зона красного цвета (Rf около 0,90), что соответствует стандартному образцу.

Терпеновые соединения, содержащиеся в фиточае, анализировали методами ТСХ и ГЖХ в образце эфирного масла, полученного путем перегонки с водяным паром. В качестве растворов сравнения исполь-

зовали 0,05% растворы туйона, тимола, лимонена, а-пинена в спирте метиловом. Хроматографирование осуществляли в системе 1, обнаружение зон адсорбции проведено анисовым альдегидом. В испытуемом растворе проявлены зоны на уровне растворов сравнения, кроме этого на хроматограмме испытуемого раствора наблюдается до 10 и более зон, дающих окраску с раствором анисового альдегида.

Качественную и количественную оценку терпеноидов проводили методом ГЖХ. Результаты проведенных исследований представлены на рисунке 4 и таблице 3.

х.)

Рис. 4. ГЖХ терпеноидов : 1-туйон, 3-лимонен, 4-тимол, 6-пинен

Таблица 3

Хроматографические характеристики эфирного масла

№ Компонент Время Высота Площадь Высота Содержание,

удерживания пика, мв мвмин пика мв-мин %, с учетом (1)и без растворителя (2)

1 2

1 Туйон 2.450 1.48 0.028 0,014 0,01 0,15

2 - 2.492 0.99 0.012 0,0092 0,01 0,10

3 Лимонен 2.538 15.48 0.791 0,143 0,14 1,55

4 Тимол 2.595 929.58 37.542 8,6 8,69 93,40

5 Хлороформ 2.724 9706.28 794.896 89,792 90,70 -

6 Пинен 2.908 2.61 0.059 0,024 0,02 0,26

7 - 3.286 45.21 1.598 0,418 0,42 4,54

Сумма 10701.66 834.929 99,000 100 100

В выделенном эфирном масле идентифицированы по временам удерживания четыре соединения - туйон, лимонен, тимол и а-пинен, которые являются веществами - маркерами чабреца, полыни и пижмы в растительной композиции и их обнаружение может служить критерием подлинности. Максимальное содержание в пробе, определенное

методом нормализации площадей пиков, имеет тимол - более 90 %, -лимонен- 1,55 %, остальных компонентов, туйона и пинена, суммарно меньше, около 1,0%.

Анализ органических кислот проводили методом ВЭЖХ двумя способами.

Способ 1: Колонка: металлическая колонка ALTECH OA-1000 Organic Acids размером 6.5x300 мм; подвижная фаза 0,01М раствор серной кислоты, скорость подачи элюента 0,7 мл/мин, температура колонки 65°С; детектор УФ при длине волны 190 нм; объем вводимой пробы - 50 мкл. Продолжительность анализа - 20 минут. Способ 2. Колонка металлическая Kromasil размером 4,6x250 мм; подвижная фаза 0,2М фосфатный буфер с pH 2,6; скорость подачи элюента 1 мл/мин; детектор УФ при длине волны 190 нм; объем вводимой пробы 50 мкл. Продолжительность анализа 46 мин.

В композиции найдено 16 веществ, из них идентифицированы щавелевая, яблочная, лимонная, янтарная, хинная и фумаровая кислоты, причем яблочная и хинная имеют наибольшее содержание - 51,6 и 19,1 % соответственно. В водном извлечении после проведенного гидролиза обнаружены сахара - фруктоза и глюкоза, среди которых превалирует глюкоза (86 % от суммы).

Методом ВЭЖХ по времени удерживания и сравнение с раствором PCO идентифицирован экдистерон (рис.5).

Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов

При разработке методики учитывались оптимальные условия экстракции. Наибольший выход флавоноидов наблюдается при экстрагировании 70 % спиртом этиловым в аппарате Сокслета и на кипящей водяной бане. Время экстракции составляет 4-5 часов (20-25 сливов),

оптимальной степенью измельчения является 1-2 мм, соотношение сырья и экстрагента 1:20.

В качестве стандарта выбран рутин, в качестве аналитической выбрана длина волны 415 ±3 нм, которая совпадает с максимумом поглощения рутина-стандарта (рис. 6). Изучение зависимости оптической плотности от концентрации раствора показало, что поглощение света раствором рутина и спиртового извлечения подчиняется закону Бугера-Ламберта-Бера. Воспроизводимость методики была установлена на примере одного образца сырья в 5 независимых повторностях. Относительная ошибка методики количественного определения суммы флаво-ноидов в пересчете на рутин-стандарт с 95% вероятностью составляет ± 1,75% (табл. 4)

Рис.6 Спектры поглощения

(1)- Комплекса извлечения с раствором алюминия хлорида

(2)- Комплекса рутина СО с раствором алюминия хлорида

Таблица 4

Метрологические характеристики методики количественного определения флавоноидов в пересчете на рутин

í Р (%) Т(Р,0 Х% Б Эх дх ДХ Ёср%

4 95 2,78 0,54 0,00055 0,023 0,011 0,064 0,029 ±1,75

Методика валидирована - подтверждена специфичность,прецизин-ность.Содержание суммы флавоноидов в фиточае «Стопал-БИО», пересчёте на рутин-стандарт, установлено не менее 0,5 %. Относительная погрешность опытов с добавками находится в пределах случайной ошибки

Разработка методики количественного определения экдистерона

Определение эвдистерона проводили методом спектрофотометрии. Установленная норма содержания экдистерона - не менее 0,05%.(табл. 5).

Таблица 5

Метрологические характеристики методики количественного определения

экдистерона

f Р (%) Т (P,f) Х% S2 S Sx дх ДХ Ёср %

4 95 2,78 0,050 0, 59-10"6 0,00077 0,0003611 0,0022 0,00096 3,26

Методика валидирована - подтверждена специфичность, прецизионность, правильность и соответствие тесту пригодности хроматогра-фической системы. Метрологические характеристики приведены в табл. 5. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 3,2%.

Разработка методики количественного определения суммы полисахаридов

Количественную оценку полисахаридов осуществляли методом спектрофотометрии. Результаты проведенных исследований приведены на рис. 7.Спектры комплексов глюкозы и гидролизата полисахаридов из фиточая с пикриновой кислотой совпадают и имеют общий максимум при 460 нм.

Рис.7 Спектры поглощения комплекса гидролизата полисахаридов фиточая (1) и PCO глюкозы (2) с пикриновой кислотой

Методика валидирована - подтверждена специфичность, прецизионность и правильность. Метрологические характеристики методики количественного определения полисахаридов приведены в табл. 6. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 2,4%.

Таблица 6

Метрологические характеристики методики количественного определения полисахаридов в пересчете на глюкозу

п { Р(%) Т(Р,0 Х% Б2 Б 8* ДХ Е%

5 4 95 2,78 8,3 0,025 0,158 0,07 0,196 2,36

Норма содержания полисахаридов в пересчете на глюкозу в Фиточае «Стопал-БИО» должно быть не менее 7,0 %. Содержание эфирного масла (ГФ XI изд. вып. 1, стр. 290, метод 1) - не менее 0,05%;

суммы органических кислот в пересчёте на яблочную кислоту (тит-риметрически) - не менее 3,0 %; дубильных веществ (ГФ XI, вып.1, стр. 286) - не менее 4.0 %.

Срок годности - 2 года. Разработанные показатели использованы при составлении ТУ на БАД Фиточай «Стопал-БИО».

Оптимизация условий получения водных извлечений. Разработка способа получения экстракта сухого и его стандартизация

Экспериментально установлено, что для приготовления водного извлечения оптимальным является режим настоя, что соответствует требованиям ГФ для приготовления водных извлечений из эфирномасличного сырья.

Оптимальными экстрагентами являются горячая вода (80°С) и 30 % спирт этиловый. Одновременно, фармакологическими исследованиями установлено, что сухой экстракт, полученный экстракцией горячей водой, обладает более выраженной активностью. Установлено оптимальное соотношение фаз, соответствующее 1:10 (сырье-экстрагент), коэффициент водопоглощения: Кв=2,0±0,07. Трехкратная экстракция обеспечивает истощение сырья в среднем на 85-90 % от исходного содержания в сырье.

Способ получения экстракта сухого включает основные стадии технологического процесса: получение водного экстракта, его упаривания, сепарирования, сушки.

СЫРЬЕ

Рис. 8 Технологическая схема получения экстракта сухого Экстракт сухой представляет собой аморфный порошок от светло-коричневого до коричневого цвета со специфическим запахом. Гигроскопичен. Комкуется. Насыпная масса при свободном падении — 0,48 г/см3, при-уплотнении — 0,76 г/см3. Сыпучесть — 1,90 г/сек, угол естественного откоса -35-37°. Потеря в массе при высушивании при 100105° С до постоянной массы установлена в соответствии с ГФ XI изд. и не превышает 5 %. Растворим в горячей воде, водно-спиртовых смесях (20, 40, 50, 60 %). Сульфатная зола из 1,0 г сухого экстракта должна выдерживать испытания на тяжелые металлы — не более 0,001 %. Разработка показателей качества экстракта сухого Для проведения качественных реакций экстракта сухого готовили спиртовое, водное и спиртоводные извлечения и проводили скрининг на наличие основных БАВ. Установлены положительные качественные реакции на фенольные соединения, восстанавливающие сахара. Обнаружение фенольных соединений в извлечении осуществляли методом ТСХ и ВЭЖХ. В спиртовых извлечениях из экстракта сухого обнаружены флавоноиды (рутин, кемпферол, лютеолин-7-гликозид,.

Содержание других БАВ, содержащихся в извлечениях в экстракте сухом, было подтверждено с помощью метода ВЭЖХ: обнаружены флавоноиды, органические кислоты, моно- и дисахариды, арбутин. Все методики качественного обнаружения веществ идентичны использованным методикам для анализа извлечения из Фиточай «Стопал-БИО».

Разработка методик количественного определения суммы фла-воноидов в экстракте сухом

Для количественной оценки содержания БАВ в экстракте сухом, предложена методика количественного определения по содержанию суммы флавоноидов и суммы моносахаридов методом спектрофото-метрии, при этом учтена разработка данной методики для растительной композиции.

В качестве стандартного образца выбран рутин, аналитическая длина волны - 413±3 нм, которая совпадает с максимумом поглощения рутина - стандарта.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин должно быть не менее 1,20 %. Воспроизводимость методики количественного определения суммы флавоноидов была установлена на примере одного образца экстракта сухого в 5 независимых повторностях.

Относительная ошибка методики количественного определения суммы флавоноидов в пересчете на рутин с 95 % вероятностью не превышает 5 % (табл. 7).

Таблица 7

Метрологические характеристики методики количественного определения

суммы флавоноидов

Г Хер Б2 Р,% »(Р. 9 АХср £ср> %

4 1,274 0,00068 0,0167 95 2,78 0,0324 ±2,54

Методика валидирована - подтверждена специфичность, прецизионность и правильность. Ошибка единичного определения с 95% вероятностью не превышает 2,54%.

Разработка методики количественного определения суммы моносахаридов в экстракте сухом Определение содержания суммы моносахаридов в пересчете на глюкозу проводили после кислотного гидролиза полисахаридов спек-трофотометрическим методом - измеряли поглощение продукта реакции углеводов с пикриновой кислотой, максимум поглощения при 455±5 нм. Содержание суммы моносахаридов после гидролиза в пересчете на глюкозу и абсолютно сухое сырье в извлечениях экстракта сухого чая должно быть не менее 8,0 %. Воспроизводимость методики количественного определения суммы моносахаридов была установлена на примере одного образца экстракта сухого в 5 независимых повторностях.

Метрологические характеристики методики количественного определения суммы моносахаридов после гидролиза в экстракте сухом представлены в табл. 8.

Таблица 8

Метрологические характеристики методики количественного определения моноса-

харидов в экстракте сухом

f Р (%) Т(Р, 0 Х% 82 5 ДХ ДХ £ср %

4 95 2,78 20,56 0,458 0,677 0,11 0,840 ±4,09

Относительная ошибка методики количественного определения суммы моносахаридов после гидролиза в пересчете на глюкозу в экстракте сухом с 95 % вероятностью не превышает 5 %. Методика вали-дирована - подтверждена специфичность, прецизионность и правильность.

Проведены исследования по установлению предварительного срока годности экстракта сухого, который составляет 2 года. Разработанные методики и показатели качества введены в нормативные документы -ТУ на экстракт сухой.

ВЫВОДЫ

1. На основании данных литературы, фармакологического скрининга, фитохимических исследований обоснован состав и соотношение ингредиентов Фиточай «Стопал-БИО».

2. Установлены диагностически значимые признаки и товароведческие характеристики компонентов растительной композиции, идентифицированы: флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, сахара, терпе-ноиды, дубильные вещества, экдистерон, арбутин.

3. Определены критерии подлинности и требования к качеству Фиточай «Стопал-БИО», разработаны и валидированы методики количественной оценки БАВ - суммы флавоноидов в пересчете на рутин, суммы полисахаридов в пересчете на глюкозу, экдистерона, суммы органических кислот, дубильных веществ, эфирного масла, позволяющие проводить сквозную стандартизацию от сырья к экстракту; установлен срок годности - 2 года.

4. Изучены закономерности влияния основных факторов на процессы одновременного экстрагирования БАВ, оптимизированы условия экстракции: тип экстрагента -горячая вода (Т 80-90 °С), соотношение сырья и экстрагента 1:(10-12); время экстракции - по 2 часа, составлена технологическая схема получения экстракта сухого

5. Разработанные показатели качества Фиточай «Стопал-БИО и экстракта сухого включены в нормативные документы, установлен срок годности экстракта сухого - 2 года.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Воронова А.В Разработка биологически активной добавки к пище Фиточай «Стопал-БИО» для профилактики алкогольной интоксикации / А.В.Воронова, А.А.Маркарян, В.А. Садоян //Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов. - Пятигорск, 2008. вып. 63. - С. 133- 136.

2. Воронова А. В. Стандартизация индикаторных компонентов зверобоя продырявленного (Hypericum perforatum, L.) в БАД к пище, используемой для профилактики алкогольной интоксикации / А. В. Воронова, А.А. Маркарян, В.А. Садоян //Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции. Сборник научных трудов. - Пятигорск, 2008. - вып. 63. - С. 228-231.

3. Воронова А.В. Изучение дубильных веществ многокомпонентного растительного сбора «Стопал-БИО». / А.В.Воронова, А.А. Маркарян, В.А. Садоян //V Всероссийская научная конференция «Химия и технология растительных веществ» тезисы докладов. - Уфа, 2008. - С. 101.

4. Воронова А.В. Исследование фенольных соединений многокомпонентного растительного сбора «Стопал-БИО» //IX международный конгресс «Здоровье и образование в XXI веке», «Влияние космической погоды на биологические системы в свете учения А.Л. Чижевского». Вестник РУДН, М., 2008. С. 471-472.

5. Воронова А.В. Аминокислотный состав биологически активной добавки к пище Фиточай «Стопал-БИО» для профилактики алкогольной интоксикации // XVI Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Сборник материалов конгресса. - Москва, 2009.-С. 635.

6. Воронова А.В. Стандартизация биологически активной добавки к пище «Фиточай «Стопал-БИО» для профилактики алкогольной интоксикации./ А.В. Воронова, А.А. Маркарян //Вестник Российской военно-медицинской академии. -2009. -№1. -С. 108-110.

7. Воронова А.В Разработка сухого экстракта на основе сбора «Стопал-БИО». / А.В.Воролова, А.А Маркарян, В.А. Садоян // VII Международный симпозиум по фенольным соединениям: Фундаментальные и прикладные аспекты. Материалы симпозиума.- Москва, 2009,- С. 64.

Подписано в печать 14.03.2011 г. формат 60x84 1/16. Бумага офсетная. Объем 1,5 печ. л. Тираж 100. Заказ № 14.

Отпечатано в типографии Изд-ва БНЦ СО РАН. 670047 г. Улан-Удэ ул. Сахъяновой, 6.

Оглавление диссертации Воронова, Алла Вадимовна :: 2011 :: Улан-Удэ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА Ii ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. АЛКОГОЛЬНАЯ 10 ИНТОКСИКАЦИЯ, СРЕДСТВА ПРОФИЛАКТИКИ И

КОРРЕКЦИИ

1.1. Токсическое действие этанола-на организм, человека Ю

1.2. Лекарственные препараты и биологически активные добавки к 13 пище, применяемые для профилактики и лечения алкоголизма и алкогольной интоксикации

1.3: Биологически активные вещества растений и их влияние на . 18 иммунитет при алкогольной интоксикации

1.4. Краткая характеристика лекарственных и пищевых растений 22: входящих в композицию

1.4.1. Чабрец, тимьян ползучий {Thymus serpyllumL., Lamiaceäe)

1.4.2.Толокнянка обыкновенная (Arctostaphylos uva-ursi, Ericaceae)

1.4.3. Золототысячник обыкновенный (Centaurium erythraea L., 24' Gentianaceae)

1.4.4. Пижма обыкновенная {Tanacetiim vulgare L., Asteraceaé)

1.4.5. Полынь обыкновенная {Artemisia vulgaris, Asteraceae)

1.4.6. Сельдерей пахучий {Apium graveolens, Apiaceac)

1.4.7. Зверобой продырявленный {Hypericum perforatum, Hypericaceae)

1.4.8. Рапонтикум сафлоровидный {Rhaponticum carthamoides, . 33 Asteraceae)

1.4.9. Методы стандартизации лекарственных растений

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ I

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 2. СОСТАВ И ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ 45 ФИТОЧАЙ «СТОПАЛ-БИО»

2.1. Обоснование выбора растений лекарственных растений 44 применяемых при алкогольной интоксикации

2.2. Товароведческий анализ лекарственного растительного сырья 50 2.2.1 Макроскопический анализ растений 49 2.2.2. Изучение лекарственных растений методом микроскопии

2.3. Фотохимическое исследование основных групп БАВ

2.3.1. Обнаружение биологически активных веществ с помощью 54 качественных реакций

2.3.2. Изучение веществ фенольной природы

2.3.2.1. Исследование фенольных соединений методом ТСХ

2.3.2.2. Обнаружение арбутина, гидрохинона и дубильных веществ

2.3.2.3. Изучение фенольных соединений методом ВЭЖХ

2.3.2.4. Изучение ксантоновых соединений

2.3.3. Определение гиперицина

2.3.4. Исследование состава терпеноидов 73 2.3.4.1. Исследование состава терпеноидов методом ГЖХ 74 2.3.5 Обнаружение органических кислот методом ВЭЖХ 75 2.3.6. Идентификация Сахаров и экдистерона 81 2.3.7.Обнаружение и идентификация аминокислот 83 2.3.8. Изучение состава эфирных масел 84 ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 3. СТАНДАРТИЗАЦИЯ ФИТОЧАЙ « СТОПАЛ-БИО»

3.1. Разработка критериев подлинности

3.2. Разработка методики количественного определения суммы • 87 флавоноидов

3.3. Разработка методики количественного определения экдистерона 93 методом ВЭЖХ

3.4. Количественное определение содержания эфирного масла

3.5. Количественное определение суммы органических кислот

3.6. Количественное определение дубильных веществ

3.7. Разработка методики количественного определения полисахаридов

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

4. ГЛАВА 4. ОПТИМИЗАЦИЯ ПОЛУЧЕНИЯ ВОДНЫХ 107 ИЗВЛЕЧЕНИЙ. РАЗРАБОТКА СПОСОБА ПОЛУЧЕНИЯ ЭКСТРАКТА СУХОГО И ЕГО СТАНДАРТИЗАЦИЯ

4.1. Определение коэффициента водопоглощения

4.2. Оценка качества водных извлечений

4.2.1. Количественное определение содержания суммы 110 флавоноидов в водных извлечениях

4.2.2. Количественное определение органических кислот

4.2.3. Количественное определение содержания полисахаридов

4.3. Изучение влияния измельченности и параметров технологического 112 режима на качество водных извлечений

4.4. Разработка способа получения экстракта сухого

4.4.1 Оптимизация условий экстракции биологически активных 114 веществ

4.4.2. Технологическая схема и изложение технологического процесса 118 получения экстракта сухого

4.4.3.Технологические характеристики сухого экстракта

4.5. Стандартизация экстракта сухого

4.5.1. Разработка методики количественного определения суммы 125 флавоноидов в экстракте сухом

4.5.2 Разработка методики количественного определения суммы 126 полисахаридов

4.5.3. Разработка методики количественного определения экдистерона

4.5.4. Разработка методики количественного определения 129 органических кислот

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Воронова, Алла Вадимовна, автореферат

Актуальность темы. Алкоголизм относится к одной из наиболее распространенных токсикоманий и по данным ВОЗ занимает одно из первых мест, уступая только сердечно-сосудистым и злокачественным новообразованиям. Общие признаки токсического действия этанола и этанолсодержащих напитков - жировая дистрофия печени, цирроз печени и другие заболевания желудочно-кишечного тракта, что приводит к нарушению тканевого и клеточного метаболизма, подавляя систему иммунитета, функций органов дыхания и кровообращения, печени, почек, водно-электролитного обмена с развитием токсической энцефалопатии и др. Недостаточная эффективность используемых при алкогольной рштоксикации лекарственных средств, наличие побочного действия у ряда препаратов при отягощенном состоянии гепатобилиарной системы определяют актуальность поиска нетоксичных гепатозащитных средств. В этой связи востребована разработка лекарственных средств и нутрицевтиков растительного происхождения, способствующих восстановлению организма при алкогольных интоксикациях. Фитопрепараты обладают многогранным, эффективным и, в тоже время, физиологическим действием на организм. Наиболее распространенной формой их применения являются сборы (фиточаи) из лекарственных растений, а также на их основе сухие экстракты, преимуществом которых является удобство применения, унификация методик стандартизации и стойкость при их хранении. Многокомпонентные лекарственные средства и биологически активные добавки (БАД) к пище на основе лекарственного растительного сырья (ЛРС), благодаря наличию комплекса биологически активных веществ (БАВ) оказывают профилактическое и терапевтическое влияние на организм человека. Несмотря на их высокую эффективность, в настоящее время применяется ограниченный набор лекарственных средств растительного происхождения, который не удовлетворяет возросшим потребностям населения.

В связи с этим, является актуальной разработка БАД к пище и экстракта сухого на основе растительной композиции гепатопротекторного, иммуностимулирующего и детоксицирующего действия, улучшающего функции обмена веществ и являющиеся профилактическим и терапевтическим средством при алкогольной интоксикации.

Цель и задачи исследования

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие основные задачи:

- изучить и установить режимы оптимальных условий экстракции, разработать способ получения экстракта сухого на основе БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО»;

- разработать методики стандартизации БАД к пище «Стопал-БИО» и экстракта сухого;

Научная новизна работы

Разработаны и валидированы методики количественной оценки БАВ -суммы флавоноидов в пересчете на рутин, суммы полисахаридов в пересчете на глюкозу, экдистерона, суммы органических кислот, дубильных веществ, эфирного масла, позволяющие проводить сквозную стандартизацию от сырья к экстракту; установлен срок годности - 2 года.

Оптимизированы условия ■ экстракции БАВ из растительной композиции: тип экстрагента - горячая вода (Т 80-90 °С), соотношение сырья и экстрагента 1:(10-12); время экстракции - по 2 часа. Рациональность технологии получения экстракта сухого подтверждено количественной оценкой БАВ в растительной композиции и экстракте сухом.

Разработаны и внедрены нормативные документы: ТИ, ТУ и рецептура на Фиточай «Стопал-БИО»

Практическая значимость работы

На основании проведенных исследований разработаны и внедрены:

-Технические условия (ТУ-9373-003-33691551-07); технологическая инструкция на БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО», внесенные в Государственный реестр БАД к пище: РУ № 77.99.23.3.У.2144.3.07. от 30.03.2007.

-Методика количественного определения суммы полисахаридов в пересчете на глюкозу в экстракте сухом используется ГБУЗ «ЦСиККЛДЗ г. Москвы, как метод контроля качества экстракта сухого;

-Технические условия на экстракт сухой.

Связь задач исследования с проблемным планом НИР

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научных исследований ГОУ ВПО «Первый Московский Государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова» по теме: «Разработка современных технологий подготовки специалистов с высшим медицинским и фармацевтическим образованием на основе достижений медико-биологических исследований» (per. номер 01.2.006 06.352) и является фрагментом исследований кафедры фармации с курсом социальной фармации ФППОП.

Апробация работы

Публикации

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

- обоснование выбора рационального состава и соотношения входящих компонентов растительной композиции;

- результаты фармакогностических и фитохимических исследований растительной композиции и экстракта сухого;

- результаты исследований по стандартизации БАД к пище Фиточай «Стопал-БИО».

Объем и структура диссертации. Работа изложена на 158 страницах, содержит 48 таблиц, 26 рисунков и состоит из введения, обзора литературы, трех глав экспериментальной части, библиографии из 238 источников литературы, из которых 133 на иностранных языках, и приложений.

Заключение диссертационного исследования на тему ""Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого при алкогольной интоксикации"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

2. Установлены диагностически значимые признаки и товароведческие характеристики компонентов растительной композиции, идентифицированы: флавоноиды, фенолкарбоновые кислоты, сахара, терпеноиды, дубильные вещества, экдистерон, арбутин.

4. Изучены закономерности влияния основных факторов на процессы одновременного экстрагирования БАВ, оптимизированы условия экстракции: тип экстрагента -горячая вода (Т 80-90 °С), соотношение сырья и экстрагента 1 ©10-12); время экстракции - по 2 часа, составлена технологическая схема получения экстракта сухого

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Воронова, Алла Вадимовна

1. Адекенов С.М. Направленный поиск цитопротекторов растительного происхождения // Фармация Казахстана, спец. вып. — 2004. С. 4-9.

2. Адекенов С.М. Перспективы производства и применения новых оригинальных отечественных фитопрепаратов // Материалы международной научно-практической конференции «Побочные действия лекарственных средств, мониторинг, фармаконадзор». Алматы. 2004.- С. 15-21.

3. Ажунова Т. А., Самбуева 3. Г., Николаев С. М., Матханов Э. И. Влияние экстракта Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng, на содержание и скорость инактивации цитохрома Р-450. // Растит, ресурсы.- 1987.- Т. 23, № 2.- С. 259-26.

4. Ажунова Т. А., Самбуева 3. Г., Николев С. М., Маханов Э. И., Нагаслаева JI. А. Желчегонное действие экстракта толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva-ursi L.) // Фармация.- 1988.- № 2.- С.41-43.

5. Айнабаева Ш.К. Исследование специфической активности комбинированного лекарственного препарата корня солодки при хроническом токсическом гепатите // Вестник ЮКМА. 2005.-№1-2.-С. 181182.

6. Артемчук А.Ф. Распространенность сердечно-сосудистой патологии у больных алкоголизмом // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С.Корсакова. -2000. Т. 100.- №9. - С. 21-25.

7. Атлас лекарственных растений России. Москва.- 2006. -420 с.

8. Балтаев У. А., Абубакиров Н. К. Фитоэкдистероиды Rhaponticum cartamoides. // Химия Природных Соединений. — 1987. № 5. - С. 681-684.

9. Барабой В.А. Перекисное окисление и стресс / В.А. Барабой, И.И. Брехман, В.Г. Глотан // Сибирская наука.- 1992. 148 с.

10. Барбье М. Введение в химическую экологию. М.: Мир.- 1978.- 232 с.

11. Башмурин А. Ф. Фармакологическое исследование галеновых и новогаленовых препаратов толокнянки: Автореф. Дисс. . канд. Шоми. наук., 1951.

12. Беликов В.В., Точкова Т.В. Реакции комплексообразования в анализе флавоноидов. // Фенольные соединения и их физиологические свойства. Алма-Ата. 1973. - с. 168-172.

13. Белоусов Ю.Б., Гуревич К.Г. Фитопрепараты и печень // Фарматека. 2006.-№1.-С. 85-88.

14. Билибин Д.П., Дворников В.Е. Патофизиология алкогольной болезни и наркоманий. Москва, Университет дружбы народов. — 1990. — 104 с.

15. Божко Г.Х., Волошин П.В. Этанол и биосинтез белков в печени животных // Вопросы медицинской химии. 1990. - Т.36.- №4. — С. 2-6.

16. Венгеровский АИ. Влияние гепатопротекторов, содержащих полифенолы, на течение экспериментального хронического гепатита // Хим.-фарм. журнал. 1996. - Т. 30, №2. - С. 13-14.

17. Виноградова Л.Ф. Теоретические и экспериментальные основы применения антиоксидантов при токсических и аллергических поражениях печени // Тезисы докладов IV Рос. нац. Конгресса «Человек и лекарство». -М.- 1997.-С. 200.

18. Вислобоков А.И., Прошева В.И., Мельников К.Н., йоми А.Я., Гюнтер Е.А. Неспецифическая активация ионных каналов нейронов полисахаридами из Tanacetum vulgare и Oberna behen.// Психофармакол. биол. наркол.— 2006.- Т.6.- №1-2.- С.1171-1175

19. Вислобоков А.И., Прошева В.И., Шоми А.Я. Активирующее влияние пектинового полисахарида из пижмы обыкновенной Tanacetum vulgare L. на ионные каналы нейрональной мембраны.// Бюл. эксперим.биол. и мед.- 2004.-Т.138.- №10.- С.439-441

20. Влияние корня солодки голой на показатели периферической крови в динамике вибрационного воздействия /Адамян Ц.И., Геворкян Э.С., Минасян С.М., Оганесян K.P., Киракосян К.А. // Бюлл. эксп. биол. мед. 2005.- т.140.-№8. -С. 164-168.

21. Воскресенский О.Н. О связях адаптогенного и антиоксидантного действия // Адаптация и адаптогены. Владивосток. - 1977. - С. 92-96

22. Георгиевский В. П., Иомисаренко Н. Ф., Дмитрук С. Е. Биологически активные вещества лекарственных растений.- М.: Наука. — 1990.- 333 с.

23. Гигиенические требования к организации производства и оборота биологически активных добавок к пище (БАД). Санитарно-эпидемиологические правила и нормативы. СанПиН 2.3.2.1290-03, Минздрав России, Москва, 2003.

24. Государственная фармакопея XI изд. Вып.1 и 2. Государственная фармакопея СССР. Выпуск 2. Машковский М.Д.,.Бабаян Э.А. , Обоймакова А.Н. и др. М.: Медицинаю- 1990.

25. Громов В.Л., Балкаров И.М., Лопаткина Т.Н. Алкогольная артериальная гипертония // Терапевтический архив. 1996. - Т.68. - №6. - С. 75-77.

26. Добродеева Л.К., Добродеев К.Г. Иммуномодуляторы растительного и водорослевого происхождения // Архангельск, Архан.гос.техн.ун-т. — 2008.

27. Дудченко Л. Г., Козьяков А. С., Кривенко В. В. Пряно-ароматические и пряно-вкусовые растения. // К.: Наукова думка, 1989. 304 с.

28. Дудченко Л.Г., Кривенко В.В. Пищевые растения-целители. // Изд-во: Киев Наукова Думка, 1985 .- 312 с.

29. Ефремов А.П., Нужный В.П., Рожанец В.В. Лекарственные растения и фитокомпозиции в наркологии. Комкнига, 2006, - 512 с.

30. Жаров С.Н. Применение глицирризиновой кислоты в терапии больных хроническим гепатитом С. // Фарматека. — 2006. №1.- С. 72-74.

31. Жаугашева С.К., Шнаукшта B.C. Гепатопротекторные свойства фитопрепаратов // Вестник ЮКМА.- 2003. №12-13.- С. 179-183.

32. Желчегонное действие экстракта толокнянки обыкновенной (Arctostaphylos uva-ursi L.). / Ажунова Т. А., Самбуева 3. Г., Николев С. М., Маханов Э. И., Нагаслаева Л. А. // Фармация.- 1988.-№ 2.- С.41-43.

33. Зайц К. А., Зозуля Р. Н., Зайцева Л. А. О жидком концентрате толокнянки обыкновенной // Фармация.- 1974.- № 3.- С. 40-42.

34. Запесочная Г.Г., Куркин В.А. и др. Флавоноиды как гепатопротекторы и антиоксиданты // Тезисы доклада IX Росс.нац.конгресса, Человек и лекарство».- М., 2002.- С. 164.

35. Зейтц Г. Алкогольная болезнь печени //Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. 2001. - Т. 11, №4. - С. 62-63.

36. Ибатов А.Н. // Вопросы наркологии. М.: Медицина, 1992. - С. 61-62.

37. Иммунометаболические нарушения в условиях экспериментальной этанольной интокцикации. / Бровкина И.Л., Быстрова H.A., Гаврилюк В.П.,. Павлова М.В // Вестник новых медицинских технологий 2007. - т. 14.- № 2 -с. 10.

38. Киселева Т.Л., Смирнова Ю.А. Лекарственные растения в мировой медицинской практике: государственное регулирование номенклатуры и качества. -М. Издательство ассоциации натуротерапевтов, 2009.- 295 е., с ил.

39. Кириллова Е.С., Хамаев Б.И. Фитотерапия заболеваний мочевыводящего тракта // Практич. фитотерапия.- 1999.-№ 1.- С.67-68.

40. Китанов Г. М., Генова Е. М., Руменин В. М. Содержание арбутина в Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng, из разных районов Народной Республики Болгарии //Растит, ресурсы.- 1986.- Вып. 3.- С. 425-431.

41. Ковалев В.Н., Журавлев Н.С., Хованская П., Ильина Т.В. Совершенствование методов количественной оценки природных веществ в растительном сырье и препаратах // Фармацевтический журнал.- 1991.- №4.-С.11-15.

42. Королева Л.Р. Современные гепатопротекторы //Российский медицинский журнал.- 2005.- №2,- С. 35-37.

43. Косенко Е.А., Каминский Ю.Г. Углеводный обмен, печень и алкоголь. -Пущино. 1988.- 148 с.

44. Космагамбетов А.Ж., Калиева К.Д. Антиоксидантные свойства масла солодки // Медицина.- 2000.- №4.- С. 57-58.

45. Краснов Е. А., Саратиков А. С., Якунина Г. Д. Действующие вещества Левзеи сафлоровидной. /Изв. СО АН СССР, сер. биол. н,- 1977. № 5. - С. 93 -95.

46. Кукес В.Г. Фитотерапия с основами фармакологии. Медицина, Москва. 1999.-192 с.

47. Куркин В.А., Запесочная Г.Г., Лебедев A.A. и др. Флавоноиды как государственные стандартные образцы и их значение для целей стандартизации сырья и препаратов //X Рос.нац.конгр."Человек и лекарство": Тез. докл.- М.- 2003.- С.728

48. Курпатов В.И., Курпатова Н.П. Применение антидепрессантов в общемедицинской практике. // Terra Medica.- 2000.- №3.- С. 23-25.

49. Лавренов, Г.В. Лавренова В.К. //Энциклопедия пищевых лекарственных растений. Издательство «Сталкер». — 2001.- 480 с.

50. Лекарственные растения в гепатологии / В.Ф. Корсун и др.. М.: Русский врач.- 2005. - 274 с.

51. Лекарственные растения. / Лебеда А.Ф., Джуренко Н.И., Исайкина А.П., Собко В.Г. // Москва Аст-пресс книга- 2004. -. 912 с.

52. Леонова Н.С. Система иммунитета и влияние на нее биологически активных веществ растений // Новая Аптека 2001. - №2 .

53. Липченко М.Ю. Вирусное и токсическое поражение печени и их коррекция препаратами растительного происхождения: Автореф. дис. докт. мед. наук.- 1992.- 41с

54. Литвиненко В.И. Флавоноиды и лекарственные препараты на их основе // Фармация Казахстана, специальный выпуск. 2004.-С. 16-19.

55. Литвинов В.Л., Ветров П.П. Взаимосвязь основных технологических параметров при экстракции растительного сырья.// Хим.-фарм. журнал.-1982.- т. 16.- №4.- С.465-466.

56. Маевская М.В. Патогенез алкогольной болезни печени и роль генетической предрасположенности в ее развитии //Клинические перспективы гастроэнтерологии, гепатологии. 2004. -№5. - С. 2-10.

57. Макаренко С.П., Коненкина Т.А., Дударева Л.В. Жирные кислоты липидов вакуолей корнеплодов растений. //Биологические мембраны: Журнал мембранной и клеточной биологии.- 2007.-т.24.- №5.- с.363-369.

58. Маренко В.Ф., Москвина И.В. Особенности поражения коры головного мозга при остром отравлении этанолом и ишемической болезни сердца //Метаболические, морфологические и психосоциальные аспекты алкоголизма: Сб. науч. тр. — Омск, 1991. — С. 63-65.

59. Махов В.М., Галлемова С.А., Юраж М.В. Желудочно-кишечный тракт при острой и хронической алкогольной интоксикации //Российский медицинский журнал. 2000. - №2. - С. 3-10.

60. Мельников Ю.Л., Ольховик В.П. Некоторые аспекты метаболизма этанола при алкогольной интоксикации //Судебно-медицинская экспертиза. -1990.-№3.-С. 37-39.

61. Моисеев B.C. Алкогольная болезнь. Поражения внутренних органов при алкоголизме. М.: Б.и., 1990. - С. 3-129.

62. Муханова Ю.И., Хомякова Е.М. Пряная зелень на грядках.-Московский рабочий.- 1991.- 208 с.

63. Нешта Н. М., Глызин В. И. Фитохимическое изучение растений рода золототысячник //Акт. пробл. фармации Западной Сибири и Урала.-Свердловск, 1989.- С. 60-63.

64. Нешта Н. М., Глызин В. П., Патудин А. В. Новое ксантоновое соединение из Centaurium erythraea. IV //Химия природн. соедин.- 1984.- № 1.-С. 110-110.

65. Нешта Н. М., Нешта И. Д., Рыбка А. Г. Сравнительное изучение секоиридоидов растений рода золототысячник // Нов. лекарств, препараты из растений Сибири и Дальнего Востока.- Томск, 1989.- С. 121-122.

66. Нужный В.П. Механизмы и клинические проявления токсического действия алкоголя // Руководство по наркологии / Под ред. чл.-корр. РАМН проф. Н.Н.Иванца. М.: Медпрактика, 2002. - Т.1. - С. 74-93.

67. Оводов Ю.С. Полисахариды цветковых растений: структура и физиологическая активность //Биоорган, химия,- 1998.- Т.24.- №7.- С.483-501.

68. Оковитый С. В. Клиническая фармакология гепатопротекторов //ФАРМидекс Практик.- 2002.- №3.

69. Подымова С.Д. Патогенетическая роль эссенциальных фосфолипидов в терапии алкогольной болезни печени // Consilium medicum. 2001. - Т.З, №3. -С. 11-15.

70. Полифитохол при функциональной дисфункции билиарного тракта /Бутов М, Корсун В., Корсун Е., Александров Ю. // Врач. 2005. - №1.- С. 60.

71. Пилат Т.Л., A.A. Иванов. Биологически активные добавки к пище (теория, производство, применение).- М.: Авваллон, 2002. 710 е.: ил

72. Руководство по валидации методик анализа лекарственных средств (Методические рекомендации) Ред. Юргель Н.В. и др. М.: Издательство «Спорт и Культура - 2000».- 2007.- 192 с.

73. Руководство по методам контроля качества и безопасности биологически активных добавок к пище (Р 4.1.1672-03)- Минздрав России-Москва- 2004.

74. Рекомендуемые уровни потребления пищевых и биологически активных веществ. Методические рекомендации MP 2.3.1.1915-04, Миндрав России, Москва, 2004.

75. Самылина И. А., Ермакова В. А. Современное состояние и перспективы стандартизации лекарственного растительного сырья //Химико-фармацевтический вестник. М: Информация. - 1996. - № 6. - С. 19-22.

76. Саратиков A.C., Краснов Е.А." Родиола розовая ценное лекарственное растение (золотой корень). Томск Томский университет.-1987.- 254 с.

77. Селезнёв А.Г. // Основы траволечения. Донецк: Доктор Селезнёв, 2000.-С. 122-124.

78. Семина И., Файзуллин Д., Ступишина Е. Антиалкогольная активность ноотропных препаратов и физические свойства биомембран //Структура и динамика молекулярных систем. 2003. — Вып.Х, 4.2. - С. 246-249.

79. Соколов С.Я. Фитотерапия и фитофармакология. Медицинско-информационное агентство МИА, Москва.- 2000. 210с.

80. Сокольская Т.А. Давыдова В.Н., Пинеев С.А. Методы стандартизации сухих экстрактов. М.-Новая аптека.- 2002. вып.4.- С.69-71.

81. Состав эфирных масел травы чабреца /Сур СВ., Тулюпа Ф.М., Толок А.Я., Пересыпкина Т.Н. //Химико-фармацевтический журнал.- М- 1988.-№11.- С. 1361-1366.

82. Сур C.B., Толок А.Я., Пересыпкина Т.Н. Диагностика распределения основных действующих веществ по отдельным органам в траве чабреца // Диагностика- 89.- Куйбышев,- 1989.- С. 35-36.

83. Сыров В.И., Куркумов А.Г. О тонизирующих свойствах экдистерона, выделенного из левзеи сафлоровидной // Доклад АН УзССР. 1977. - № 12.-С. 27-30.

84. Тайжанова Д.Ж. Влияние масляного экстракта солодки на состояние иммунной системы у наркоманов с хроническим бронхитом //Астана медициналык; журналы. 2001.- №1.- С. 86-89.

85. Тимофеев Н.П. Достижения и проблемы в области изучения, использования и прогнозирования биологической активности экдистероидов. Обзор. Бутлеровские сообщения.- 2006.- Т. 8.- № 2. - С. 7-34.

86. Тимофеев Н.П., Лапин A.A., Зеленков В.Н. Оценка качества лекарственного сырья левзеи сафлоровидной методом бромной антиокислительной емкости (БАОЕ). Бутлеровские сообщения.- 2006.- Т. 8.-№ 2. - С. 35-40.

87. Турищев С. Лекарственные растения при заболеваниях печени //Врач.-2003.- №12.- С. 58-59.

88. Турищев С.Н. Фитотерапия. «Академия». Москва.- 2003. 390с.

89. Успенский А.Е. Токсикологическая характеристика этанола. // Итоги науки и техники. Сер. Токсикол. ВИНИТИ. - М, 1984. - Т. 13. - С. 6-56.

90. Халматов Х.Х., Харламов И.А., Алимбаева П.К. и др. л Основные лекарственные растения Средней Азии. Ташкент.- Медицина.- 1984.- 195 с.

91. Холматов Х.Х., Харламов И.А., Мавлянкулова З.И. Лекарственные растения Центральной Азии // Т., 1998- 401 с.

92. Хроматоспектрофотометрический метод определения экдистерона в растительном сырье / Якубова М. Р., Генкина Г. А., Шакиров Т. Т., Абубакиров Н. К. // Химия Природных Соединений. 1978. № 6. - С. 737-740

93. Чупахина Г.Н. Система аскорбиновой кислоты растений: Монография. Калинингр. ун-т. - Калининград.- 1997. - 120 с.

94. Шимкунайте Е. П. Биологические основы рационального использования толокнянки //Растительные ресурсы Сибири, Урала и Дальнего Востока.- Новосибирск: Наука.- 1965.- С. 47-49.

95. Шмерко Е. П., МазанИ. Ф. Практическая фитотерапия. — Минск: Лечприрода, 1996. Травоцелительство /Под ред. А.Катина. — М.: ACT, 2000.

96. Энциклопедия лекарств и товаров аптечного ассортимента. Энциклопедия БАД. http://www.iisnet.ru/

97. Якубова М.З., Сахарова H.A. Динамика содержания экдистерона в подземных органах Rhaponticum cartamoides (Wild.) Iljin. //Растительные ресурсы.- 1980.- t.XVI.- вып. 1.-е. 98-100.

98. Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве". Пущино. 1997. С.217-219

99. Volchegorskii IA, Mester KM. Effects of 3-hydroxypyridine and succinic acid derivatives on the dynamics of dorsalgia and affective disorders after surgical treatment of disc herniation // Eksp Klin Farmakol.- 2010.- Vol.73.-Nl.- p.33-39.

100. Толокнянка обыкновенная Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. Куцик P. В., Зузук Б. M., Недоступ А. Т., Пецко Т. // Провизор- 2003- №18-19-С.35.

101. Чекман I.C. Флавонощи: юишко-фармаколопчний аспект //Фгготерашя в Украйи. 2000. - №2. - С. 3-5.

102. A hypericum extract in the treatment of depressive symptoms in outpatients: an open study./ Melzer J., Brignoli R., Keck M.E., Sailer R. // Forsch Komplementmed. -2010.- Vol. 17.- N1. -p.7-14.

103. A systematic review of newer pharmacotherapies for depression in adults: evidence report summary.// Ann Intern Med.- 2000. -Vol. 132.- N 9,- p. 743-756.

104. Antibacterial activity of some Artemisia species extract. / Poiata A., Tuchilu§ C., Ivanescu B., Ionescu A., Lazar M.I. // Rev. Med. Chir. Soc. Med. Nat. Iasi. 2009.- Vol. 113.- N 3.- p. 911-914.

105. Antimicrobial action of arbutin and the extract from the leaves of Arctostaphylos uva-ursi in vitro. Jahodar L., Jilek P., Patkova M., Dvorakova V. // Cesk Farm. 1985.- Vol.34.- P.174-178.

106. Antimicrobial activity in some Finnish Ericaceous plants. Holopainen M., Jahodar L., Seppanen-Laakso T., Laakso I., Kauppinen V. // Acta Pharm Fenn. -1988.- Vol.9.- P. 197-202.

107. Antioxidant principles of Tanacetum vulgare L. aerial parts. / Juan-Badaturuge M., Habtemariam S., Jackson C., Thomas M. // J.Nat. Prod. Commun. 2009.- Vol. 4.- N 11p. 1561 -1564.

108. Application and exploration of fast gas chromatography-surface acoustic wave sensor to the analysis of thymus species. / Oh S.Y., Ko J.W., Jeong S.Y., Hong J. // J Chromatogr A.- 2008. Sep 26.- Vol. 1205.- N(1-2).- p: 117-127.

109. Barney J.N., Hay A.G., Weston L.A, Isolation and characterization of allelopathic volatiles from mugwort (Artemisia vulgaris).// J. Chem. Ecol. 2005.-Vol. 31.- N 2.- p. 247-265.

110. Bioactivity of secoiridoid glycosides from Centaurium erythraea. / Kumarasamy Y., Nahar L., Cox P.J., Jaspars M., Sarker S.D. // Phytomedicine.2003.- Vol.10.- N(4).- p.344-347.'

111. Bravo L. Poliphenols, chemistry, dietary, sources, metabolism and nutritional significance //Nutr. Rev. 1998. - Vol. 56. - p. 317-333.

112. Butterweck V. Mechanism of action of St John's wort in depression : what is known?"'// CNS Drugs.- 2003.- Vol.17.- N (8).- p. 539-562.

113. Caccia S., Gobbi M. St. John's wort components and the brain: uptake, concentrations reached and the mechanisms underlying pharmacological effects.// Curr Drug Metab.- 2009.- Vol. 10.- N(9).- p.1055-1065.

114. Chakraborty A. K., Funasaka Y., Komoto M., Ichihashi M. Effect of arbutin on melanogenic proteins in' human melanocytes // Pigment Cell. Res.-1998.-Vol. 11, 4.-P. 206-212.

115. Chami N., Chami F., Bennis S. et al. Antifungal treatment with carvacrol and eugenol of oral candidiasis in immunosuppressed rats. // Braz. J. Infect. Dis.2004.- Vol. 8 (3).- p. 217-226.

116. Characterization of structures and antiviral effects of polysaccharides from Porlulaca oleracea L. / Dong C.X., Hayashi K., Lee J.B., Hayashi T. // Chem Pharm. Bull. (Tokyo). 2010.- Vol.58.- N(4).- p. 507-510.

117. Chemical constituents of fresh celery. / Zhou K., Wu B., Zhuang Y., Ding L., Liu Z., Qiu F. // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2009. - Vol.34.- N(12).-p. 1512-115.

118. Community code relating to medicinal products for human use Directive 2001/83/EC of the European Parliament and of the council of 6 November 2001 // Official journal.- 2001 .-L311.-Vol. 11.-P. 67-128.

119. Davis J.M., Fellman J.K., Loescher W.H. Biosynthesis of Sucrose and Mannitol as a Function of Leaf Age in Celery (Apium graveolens L.). // Plant Physiol. 1988.- Vol. 86.- N(l).- P.129-133.

120. Dekermendjan K., Kahnuberg P., Witt M. R. et al. Structure activity relationship and molecular modeling analysis of flavonoids binding to the benzodiazepine site of the rat brain GABA receptor complex // J. Med. Chem. -1999. -Vol. 42. P. 4343- 4350.

121. Dhiman R.K. Herbal medicines for liver diseases / R.K. Dhiman, Y.K. Chawla // Dig. Dis. Sci. 2005 Oct. - Vol. 50.- N (10). - P. 1807-1812.

122. Dombrowicz E., Zadernowski R., Swiatek L. Phenolic acids in leaves of Arctostaphylos uva ursi L., Vaccinium vitis idaea L. and Vaccinium myrtillus L. // Pharmazie .1991.- Bd.46.- S.680-681.

123. Duskova J., Dusek J., Opantrna J. Effect of the organ origin of the explant and the degree of differentiation of the tissue culture of Arctostaphylos uva-ursi. // Cesk Farm.- 1991.- Vol. 40.- P.83-85.

124. Essential oil composition of Tanacetum vulgare subsp. siculum (Guss.) Raimondo et Spadaro (Asteraceae) from Sicily. / Formisano C., Senatore F., Bruno M., Rosselli S., Bellone G., Spadaro V. // Nat. Prod. Commun. 2009.- Vol. 4.-N(4).-P,567-570.

125. Estrogenic Flavonoids from Artemisia vulgaris L. / Lee S.-J., Chung H.Y., Maier C. G.-A., Wood A. R., Dixon R. A., Mabry T. J. // J. Agric. Food Chem. 1998.- Vol.46.- N (8).- P. 3325-3329.

126. Ethanol-induced changes in neuronal membrane order. An NMR study. / Hitzemann R.J., Schueler H.E., Graham-Brittain C., Kreishman G.P. // Biochim. Biophys. Acta. 1986. - Vol.859. - P. 189-197.

127. European Pharmacopoeia 6. European Directorate for the Quality of Medicines & HealthCare.- PDF.- 2005-2007.

128. Experimental diuretic effects of Rosmarinus officinalis and Centaurium erythraea. / Haloui M., Louedec L., Michel J.B., Lyoussi B. // J. Ethnopharmacol. 2000.- Vol. 71. N(3).- P.465-472.

129. External leaf flavonoids of Thymus species from Macedonia. / Marinb P.D., Grayer R. J:, Kitea G.C., Matevskic V. // Biochem. System. Ecol. 2003,-Vol.31.-N 11.- P 1291-1307.

130. Firestone G.L., Sundar S.N. Anticancer activities of artemisinin and its bioactive derivatives. // Expert Rev. Mol. Med. 2009.- Oct 30.- N11.- P. 32.

131. Frohne D. The urinary disinfectant effect of extract from leaves uva ursi. // Planta Med . 1970.- Vol.18.- P. 1-25.

132. Grases F., Melero G., Costa-Bauza A., Prieto R., March J.G. Urolithiasis and phytotherapy. // Int. Urol. Nephrol. 1994.- Vol. 26.- P.507-511.

133. Gunter E.A., Ovodov Y.S. Changes in cell wall polysaccharides of Silene vulgaris callus during culture. // Phytochemistry. 2002. - Vol.59. - P.703-708.

134. Hamza A.A., Amin A. Apium graveolens modulates sodium valproate-induced reproductive toxicity in rats. // J. Exp. Zool. A Ecol. Genet. Physiol. — 2007.- Vol. 307.- N(4).- P. 199-206.

135. Hamza A.A., Amin A. Apium graveolens modulates sodium valproate-induced reproductive toxicity in rats. // J. Exp. Zool. Part A Ecol. Genet. Physiol. — 2007.- Vol.307.- N(4).- P.199-206.

136. Herbal remedies for alcoholism: promises and possible pitfalls. / Overstreet D.H., Keung W.M., Rezvani A.H., Massi M., Lee D.Y. // Alcohol Clin. Exp. Res. 2003.- Vol. 27.- N(2).- P. 177-185.

137. High-performance liquid chromatography analysis of four Leuzea carthamoides flavonoids. / Stodulka P., Koleckar V., Jun D., Kuca K., Rehakova Z., Kubikova K., Jahodar L., Kunes J., Opletal L. // J. Chromatogr Sei. 2008,-Vol. 46.- N(2).- P.162-164.

138. Hincha D. K., Oliver A. E., Crowe J. H. Lipid composition determines the effects of arbutin on the stability of membranes // Biophys. J.- 1999.- Vol. 77.- N 4.- P. 2024-2034.

139. Hong J., Ryu S., Kin H. et al. Protective effect of green tea extract on ischemia reperfusion-induced brain injury in Mongolian gerbils // Brain Res. -2001.-Vol. 888.-P. 11-18.

140. Houghton P. Herbal products. Part 9. Bearberry, dandelion and celery. // Pharm J.- 1995.- Vol.255.- P.272-273.

141. Hyperforin -a key constituent of St. John's wort specifically activates TRPC6 channels. / Leuner K., Kazanski V., Müller M., Essin K., Henke B., Gollasch M., Harteneck C., Müller W.E. // FASEB J. 2007.- Vol.21.- N (14).- P. 4101-4111.

142. Hyperforin is a modulator of inducible nitric oxide synthase and phagocytosis in microglia and macrophages. / Kraus B., Wolff H., Elstner E.F., ileilmann J. // Naunyn Schmiedebergs Arch. Pharmacol. 2010.- Vol. Apr 6. Epub ahead of print.

143. In vitro and in vivo analysis of fatty acid effects on metabolism of 17beta-estradiol and progesterone in dairy cows. / Piccinato C.A., Sartori R.,

144. Sangsritavong S., Souza A.H., Grummer R.R., Luchini D., Wiltbank M.C. // J. Dairy. Sci. 2010.- Vol.93.- N(5).- P. 1934-1943.

145. Ishige K., Schubert D., Sagara Y. Flavonoids protect neuronal cells from oxidative stress by three distinct mechanisms // Free Radic. Biol. Med. 2001. -Vol. 30. - P. 433 - 446.

146. Isolation and structural elucidation of 5-formyl-2,3-dihydroisocoumarin from Centaurium erythraea aerial parts. // Valentao P., Andradea P.B., Silva A.M., Moreira M.M., Seabra R.M. //Nat. Prod. Res. 2003,- Vol.17.- N(5).- P.361-364.

147. Jahodar L., Grygarova V., Budesinsky M. Triterpenoids of Arctostaphylos uva-ursi roots. // Pharmazie 1988.- Bd.43.- S.442-443.

148. Jahodar L., Grygarova V., Budesinsky M. Triterpenoids of Arctostaphylos uva-ursi roots. // Pharmazie.- 1988.- Vol.43.- N 6.- P.442-443.

149. Jahodar L., Jilek P., Paktova M., Dvorakova V. Antimicrobialni pusobeni arbutinu a extraktu z listu medvedice lecive in vitro // Cesk. Farm.- 1985.- Vol.34.-N5,- P. 174-178.

150. Jahodar L., Leifertova I., Lisa M. Elimination of arbutin from the organism //Pharmazie.- 1983.-Bd. 38.-N 11.-P. 780-781.

151. Jahodar L., Leifertova I., Lisa M. Investigation of iridoid substances in Arctostaphylos uva-ursi // Pharmazie.- 1978.- Bd. 33.- N 8.- P. 536-537.

152. Karioti A, Bilia AR. Flypericins as potential leads for new therapeutics.// Int J Mol Sci. 20101- Vol.11N(2).- P.562-594.

153. Karlson PI, Koolman J. Ecdysone: mode of action, inactivation and elimination // Actualities sur les hormones d'invertebres / Ed. M.M. Durchon. Paris, 1976,- P. 403-412.

154. Keung W.M. Anti-dipsotropic isoflavones: the potential therapeutic agents for alcohol dependence. // Med. Res. Rev. 2003.- Vol. 23.- N(6).- P.669-696.

155. Khan A.U., Gilani A.H. Antispasmodic and bronchodilator activities of Artemisia vulgaris are mediated through dual blockade of muscarinic receptors and calcium influx. // J. Ethnopharmacol. 2009.- Vol.126.- N(3).- P.480-486.

156. Kokoska L., Janovska D. Chemistry and pharmacology of Rhaponticum carthamoides: a review. // Phytochemistry. 2009.- Vol. 70.- N(7).- P.842-855.

157. Lee S., Suh S., and Kim S. Protective effects of green tea polyphenol (-) epigallocatechin gallate against hippocampal neuronal damage after transient global ischemia in gerbils // Neurosci. Lett. 2000. - Vol. 287. - P. 191- 194.

158. Leifertova I., Jahodar J. Study of free and bonded saccharides in the leaves of Arctostaphylos uva-ursi. // Farmaceut Obzor . 1989.- Vol.58.- P.507-511.

159. Lin L.Z., Lu S., Harnly J.M. Detection and quantification of glycosylated flavonoid malonates in celery, Chinese celery, and celery seed by LC-DAD-ESI/MS. // J. Agric. Food. Chem. -2007.- Vol.55.-N(4).- P. 1321-1326.

160. Linde K., Mulrow C.D. St John's wort for depression. / The Cochrane Library. Issue 3, 2000. Oxford: Update Software. The Cochrane Library: http://www.cochrane.co.uk.

161. Maternal essential fatty acid deficiency depresses serum leptin levels in suckling rat pups. / Korotkova M, Gabrielsson B, Hanson LA, Strandvik B. // J. Lipid. Res. -2001.- Vol.42.-N(3).- P.359-365.

162. Matsuda H., Nakata H., Tanaka T., Kubo M. Pharmacological study on Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. II. Combined effects of arbutin and prednisolone or dexamethasone on immuno-inflammation. // Yakugaku Zasshi. — 1990.- Vol.110.- P.68-76.

163. Matsuda H., Tanaka T., Kubo M. Pharmacological studies on leaf of Arctostaphylos uva-ursi (L.) Spreng. III. Combined effect of arbutin and indomethacin on immuno-inflammation. // Yakugaku Zasshi. — 1991.- Vol.111.-P.253-258.

164. Medina J.H., Viola H., Wolfman C. et al. Neuroactive flavonoids: new ligands for the benzodiazepine receptor // Phytomedicine. 1998. - Vol. 5. - P. 235- 243.

165. Middleton E., Kandaswami C., Theoharides T. The effects of plant flavonoids on mammalian cells: implications for inflammation, heart diseases and cancer // Pharmacol. Rev.- 2000. Vol. 52. - P. 673- 751.

166. Momin R.A., Nair M.G. Antioxidant, cyclooxygenase and topoisomerase inhibitory compounds from Apium graveolens Linn, seeds. // Phytomedicine. -2002.- Vol. 9.- N(4).- P.312-318.

167. Momin R.A., Ramsewak R.S., Nair M.G. Bioactive compounds and 1,3-Di(cis)-9-octadecenoyl.-2-[(cis,cis)-9, 12-octadecadienoyl]glycerol from Apium graveolens L. seeds. // J. Agric. Food Chem. 2000.- Vol.48.- N(9).- P.3785-3788.

168. Moro S., van Rhee A.M., Sanders L. et al. Flavonoid derivatives as adenosine receptor antagonists: a comparison of the hypothetical receptor binding site based on a comparative field analysis model // J. Med. Chem. 1998. - Vol. 41.-P. 46-52.

169. Mroueh M., Saab Y., Rizkallah R. Hepatoprotective activity of Centaurium erythraea on acetaminophen-induced hepatotoxicity in rats. // Phytother Res. -2004.- Vol.18.-N(5).-P.431-433.

170. Nahrstedt A., Butterweck V. Biologically active and other chemical constituents of the herb of Hypericum perforatum L". Pharmacopsychiatry.- 1997.-Vol.30.- Suppl 2.- P. 129-134.

171. New antioxidant flavonoid isolated from Leuzea carthamoides./ Koleckar V., Opletal L., Macakova K., Jahodar L., Jun D., Kunes J., Kuca K. // J. Enzyme. Inhib. Med. Chem. 2010.- Vol. 25.- N(l).- P.143-145.

172. Okushio K., Suzuki M., Matsumoto N. at al. Identification of epicatechin metabolites and their metabolic fate in the rat // Drug. Metab. Dispos. 1999. -Vol. 27.-P. 309-316.

173. Ostrowska B., Gorecki P. Investigations on possibility of utilization of Bergenia leaves to therapeutics in place of arbutin and tannin raw materials deficiency. Part 1. Phytochemical investigations. // Herba Polonica . 1988.-Vol.34.- P.21—25.

174. Panossian A, Wikman G. Pharmacology of Schisandra chinensis Bail.: an overview of Russian research and uses in medicine. // Ethnopharmacol.- 2008.-Vol. 118.- N(2).-P. 183-212.

175. Partial purification of cytotoxic substances from moxa extract. / Hatsukari I., Hitosugi N., Ohno R., Nakamura S., Mizukami S., Nagasaka H., Matsumoto I., Kikuchi H. // Anticancer Res. 2002.- Vol.22.- N(5).- P.2777-2782.

176. Peng H.W., Cheng F.C. Huang Y.T. et al. Determination of naringenin and its glucuronide conjugate in rat plasma and brain tissue by hight-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1998. -Vol. 714. - P. 369-374.

177. Phytochemical analysis of the essential oil of Thymus serpyllum L. growing wild in Estonia. / Paaver U., Orav A., Arak E., Maeorg U., Raal A. // Nat. Prod. Res. 2008.- Vol. 22.- N(2).- P.108-115.

178. Piovan A., Filippini R., Caniato R. A semi-quantitative FIA-ESI-MS method for the rapid screening of Hypericum perforatum crude extracts. // Nat Prod. Commun. 2010.- Vol.5.- N(3).- P.431-434.

179. Quantification of parthenolide in Tanacetum species by LC-UV/LC-MS and microscopic comparison of Mexican/US feverfew samples. / Avula B., Navarrete A., Joshi V.C., Khan I.A. // Pharmazie. 2006.- Bd.61.- N(7).- S.590-594.

180. Rasooli I., Mirmostafa S.A. Antibacterial properties of Thymus pubescens and Thymus serpyllum essential oils.// Fitoterapia. 2002.- Vol.73.- N(3).-P.244-250.

181. Rice-Evans C., Spencer J., Schroeter H. et al. Bioavailably of flavonoids and potential bioactive forms in vivo. // Drug Metab. Drug. Interact. -2001. Vol. 17.-P. 291-310.

182. Rice-Evans C.A. Parker L. (Eds. ) Flavonoids in Health and Diseases. -Marccl Dekker, New York 1997.

183. Schier W., Schultza W. Actual adulteration of medicinal crude drugs: bearberry leaves and sorrel herbs. // Dtsch Apoth Zeitung.- 1990.- Vol.130.-P.463-465.

184. Schwob I., Bessiere J.M., Viano J. Composition of the essential oils of Hypericum perforatum L. from southeastern France. // C R Biol. 2002. -Vol.325.-P.781-785.

185. Shapiro S., Guggenheim B. The action of thymol on oral bacteria // Oral Microbiol Immunol. -1995.- Vol.10.- N (4). P. 241-246.

186. Shimoi K., Okada H., Furugori M. et al. Intestinal absorption of luteolin and luteolin-7-0-b-glucoside in rats and humans // FEBS Lett. 1998. - Vol. 438. -P. 220-224.

187. Singh A., Handa S.S. Hepatoprotective activity of Apium graveolens and Hygrophila auriculata against paracetamol and thioacetamide intoxication in rats.// J Ethnopharmacol. 1995.- Vol. 49.- N(3).- P.l 19-126.

188. Singh S., Rana S.V. Ascorbic acid improves mitochondrial function in liver of arsenic-treated rat. // Toxicol Ind Health. 2010 Mar 31. Epub ahead of print.

189. Sohini, Rana S.V. Protective effect of ascorbic acid against oxidative stress induced by inorganic arsenic in liver and kidney of rat. // Indian J. Exp. Biol. -2007.- Vol. 45.- N(4).- P.371-375.

190. Some structural features of pectic polysaccharide from tansy Tanacetum vulgare L. / Polle A. Y., Ovodova R.G., Shashkov A.S., Ovodov Y.S. // Carbohydrate Polymers.- 2002.- Vol.49.- P. 337-344.

191. Stambergova A., Supcikova M., Leifertova I. Evaluation of phenolic substances in Arctostaphylos uva-ursi. Part 4. Determination of arbutin, methylarbutin and hydroquinone in the leaves by HPLC. // Cesk Farm . 1985.-Vol.34.- P. 179-182.

192. Structure of daidzin, a naturally occurring anti-alcohol-addiction agent, in complex with human mitochondrial aldehyde dehydrogenase. // Lowe E.D., Gao G.Y., Johnson L.N., Keung W.M. // J. Med. Chem. 2008.-Vol.51.- N(15).-P.4482-4487.

193. Suganuma M., Okabe S., Oniyama M. et al. Wide distribution of (H)-epigallocatechin gullate, a cancer preventive ten polyphenol, in mouse tissue // Carcinogenesis. 1998. - Vol. 19. - P. 1771-1776.

194. Supercritical fluid extraction of cynaropicrin and 20-hydroxyecdysone from Leuzea carthamoides DC. / Sovova H., Opletal L., Sajfrtova M., Bartlova M. // J Sep Sci. 2008.- Vol.31.- N(8).- P.1387-1392.

195. Tanacetum vulgare: antiherpes virus activity of crude extract and the purified compound parthenolide ./ Onozato T., Nakamura C.V., Cortez D.A, Dias Filho B.P., Ueda-Nakamura T. // Phytother Res. 2009.- Vol.23.- N(6).- P.791-796.

196. The cyanogenic glucoside, prunasin (D-mandelonitrile-beta-D-glucoside), is a novel inhibitor of DNA polymerase beta. / Mizushina Y., Takahashi N., Ogawa A., Tsurugaya K., Koshino H., Takemura M., Yoshida S., Matsukage A.,

197. Sugawara F., Sakaguchi K. // J. Biochem. (Tokyo) 1999- Vol.126.- N(2).- P.430-436.

198. The essential oil of. Apium graveolens var. secalinum and its cercaricidal activity. / Saleh M.M., Zwaving J.H., Malingr T.M, Bos R. // Pharm. Weekbl. Sci. 1985.- Vol.7.- N(6).- P.277-279.

199. The Rules Governing Medicinal Products in the European Union. EU Guidelines to Good Manufacturing Practice. Brussels, Eudralex. 2006.- Vol. 4.-P.16.

200. The use of an infusion of St.-John's-wort in the combined treatment of alcoholics with peptic ulcer and chronic gastritis. / Krylov A.A., Ibatov,A.N. // Lik Sprava. 1993.- N(2-3).- P. 146-148.

201. Tigno X.T., de Guzman F., Flora A.M. Phytochemical analysis and hemodynamic actions of Artemisia vulgaris L. // Clinical Hemorheology and Microcirculation.-2000.- Vol.23.- N 2-4.-P. 167-217.

202. Tigno X.T., Gumila E. In vivo microvascular actions of Artemisia vulgaris L. in a model of ischemia-reperfusion injury in the rat intestinal mesentery // Clinical Hemorheology and Microcirculation.- 2000.- Vol. 23, N 2-4/.- p 159-165.

203. Traditional medicine in the treatment of drug addiction. / Lu L., Liu Y., Zhu W., Shi J., Liu Y., Ling W., Kosten T.R. // Am. J. Drug. Alcohol. Abuse. -2009:- Vol.35.-N(l).- P.1-1L

204. Triterpenoids and flavonoids from celery (Apium graveolens). / Zhou K., Zhao F., Liu Z., Zhuang Y., Chen L., Qiu F. // J. Nat. Prod. 2009.- Vol. 72.-P.1563.

205. Validation of a quantitative assay of arbutin using gas chromatography in Origanum majorana and Arctostaphylos uva-ursi extracts. / Lamien-Meda A., Lukas B., Schmiderer C., Franz C., Novak C. // J. Phytochem. Anal. 2009.-Vol.20.- N(5).- P.416-420.

206. Vanhaelen M., Vahnaelen-Fastre R. High-performance liquid, gas-liquid, and thin-lauer chromatography of naturalle curung flavonoids, phenolic and related compounds // J. Chromatogr. 1980. - Vol. 18. - P. 255-260.

207. Vascular effects of Tanacetum vulgare L. leaf extract: in vitro pharmacological study. / Lahlou S., Tangi K.C., Lyoussi B., Morel N. // J. Ethnopharmacol. 2008.- Vol.120.- N(1).- P.98-102.

208. Wang Y., Shi X., Qi Z. Hypericin prolongs action potential duration in hippocampal neurons by acting on K+ channels. // Br. J. Pharmacol. 2010.-Vol.159.- N(7).- P.1402-1407.

209. Wörner M., Pflaum M., Schreier P. Additional volatile constituents of Artemisia vulgaris 1. herb. // Flavour and Fragrance Journal.- 2006.- Vol. 6.- N 4.-P. 257 260.

210. Xie G., Schepetkin I.A., Quinn M.T. Immunomodulatory activity of acidic polysaccharides isolated from Tanacetum vulgare L.// Int .Immunopharmacol. — 2007.- Vol.7.- N(13).- P.1639-1650.

211. Xu B.J., Zheng Y.N., Sung C.K. Natural medicines for alcoholism treatment: a review. // Drug Alcohol Rev. 2005.- Vol.24.- N(6).- P.525-536.

212. Yagar H. Some biochemical properties of polyphenol oxidase from celery. // Prep. Biochem. Biotechnol. 2004.- Vol.34.- N(4).- P.387-397.

213. Zaits K.A., Zozulya R.N., Zaitseva L.A. Liquid concentration of Uva ursi. // Farmatsiia. 1975.- Vol.24.- P.40^2.

Автореферат диссертации по медицине на тему "Разработка и стандартизация комплексного растительного средства, рекомендуемого при алкогольной интоксикации

Оглавление диссертации Воронова, Алла Вадимовна :: 2011 :: Улан-Удэ

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия, фармакогнозия", Воронова, Алла Вадимовна, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Воронова, Алла Вадимовна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций