Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Ранние постреанимационные изменения процессов липопероксидации в почках и способы их коррекции

На правах рукописи

ПЕГАНОВА Юлия Александровна

РАННИЕ ПОСТРЕАНИМАЦИОННЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ПРОЦЕССОВ Л И ГГОПЕРОКСИДАЦИИ В ПОЧКАХ И СПОСОБЫ ИХ КОРРЕКЦИИ

(экспериментальное исследование)

14.00.16 - патологическая физиология

I

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

НОВОСИБИРСК 2003

Работа выполнена в Кемеровской государственной медицинской академии Министерства здравоохранения Российской Федерации (г. Кемерово)

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор

Евтушенко Александр Яковлевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук

Хаснулин Вячеслав Иванович Колпаков Михаил Аркадьевич

Ведущая организация:

Омская государственная медицинская академия Министерства здравоохранения Российской Федерации (г. Омск)

ционного совета Д 001.048.01 в Научном ценгре клинической и экспериментальной медицины Сибирского отделения Российской академии медицинских наук по адресу: ул. Академика Тимакова, 2, г. Новосибирск. 630117 Тед/факс 8 (3832) 33-64-56.

С диссертацией можно ознакомиться в бчблио1ске Научного центра клинической и экспериментальной медицины СО РАМН.

Автореферат разослан - 2003 г.

Защита состоится М.об 2003 г. в

часов на заседании диссер га-

Ученый секретарь диссертационного совета д.б.н.

С.Н. Кутина

g-goJ-A \o22.J

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В результате многочисленных клинических и экспериментальных исследований убедительно доказана роль активации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в развитии ишемических и реперфузионных повреждений органов и тканей (Биленко М.В., 1989; Семченко В.В. и соавг., 1999; Разумов А.С., 2001; Willmore LJ. et al., 1991; Steltren H.G. et al., 1999). При этом традиционными объектами изучения процессов липопероксидации при различных формах нарушения кровообращения были и остаются сердце и головкой мозг (Долгих В .Т. и соавт., 1983-2002; Грибанов Г. А., Ильященко Д.В., 1994; Ерин А.Н. и соавт., 1994; Кожура Л.В., 2000; Семченко В.В. и соавт., 19862002; Safar Р., 1981; Smit S.L. et Hall E.D., 1998; Slezak J. et al, 1999). Вместе с тем, имеются органы и ткани, в частности почки, которые не менее уязвимы, для повреждающих факторов ишемии и реперфузии, а нарушение их функций лежит в основе вторичных нарушений кровообращения, водно-солевого обмена и интоксикации организма, перенесшего терминальное состояние.

Кроме того, особая актуальность данной проблемы определяется широким распространением почечной трасплакталогии, в связи с чем, возникает острая необходимость разработки эффективных способов защиты почек и отдельных почечных структур от ишемических и реперфузионных повреждений. Вместе с тем информация об изменениях процессов ПОЛ в различных отделах почек при терминальных состояниях, необходимости и эффективности применения ингибиторов свободнорадикаль-ных реакций, особенно нового поколения, недостаточна и весьма противоречива. Од и н из антиоксидантов нового поколения — фридокс хорошо зарекомендовал себя как эффективное средство защиты мозга при ишемии и реперфузии (Разумов А.С., 1999-2001; Kassell N.F et al.,1998-1999).

Не исключено, что он может быть эффективным средством и для защиты почек.

Таким образом, отсутствие достаточно ясного представления о закономерностях и патогенетической значимости ишемических и реперфузи-онных изменений процессов ПОЛ в почках и возможности их коррекции послужило основанием для выполнения, данного исследования.

Цель исследования. Провести оценку ранних постреанимационных изменений процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек и обосновать принципы их коррекции.

Задачи исследования.

1. Изучить особенности процессов перекисного окисления липидов в корковом и мозговом веществе почек кошек при умирании от пролонгированной кровопотери и в раннем постреанимационном периоде (3 часа).

2. Оценить в сравнительном аспекте влияние фридокса и эмоксипина на ранние постреанимационные изменения процессов перекисного окисления липидов в корковом и мозговом веществе почек.

3. Оценить влияние ограничения реперфузии на ранние постреанимационные изменения процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек.

4. Изучить в сравнительном аспекте влияние коррекции ранних постреанимационных изменений процессов липопероксидации в почках с помощью антиоксидантных препаратов и ограничения реперфузии на процессы восстановления жизнедеятельности и выживаемость животных, перенесших терминальное состояние.

Научная новизна исследования.

Впервые изучены в корковом и мозговом веществе почек изменения процессов липопероксидации при умирании от кровопотери и в раннем постреанимационном периоде. Установлено, что при умирании и последую-

щем оживлении в почках, происходит чрезмерная активация прооксидант-ных систем. Показано, что происходящие изменения выявляются только при инкубации гомогенатов, особенно в условиях индукции ПОЛ in vitro -изменяется динамика и увеличивается скорость накопления продуктов ли-попероксидации.

Впервые произведена оценка дозозависимых эффектов фридокса (3; 6 и 9 мг/кг) in vitro на ишемические и ранние постреанимационные изменения процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек. Установлено, что в дозе 6 мг/кг фридокс эффективно ограничивает ишеми-ческую и реперфузионную активацию процессов ПОЛ в почках. Увеличение дозы до 9 мг/кг не сопровождается сколько-нибудь значимым увеличением продолжительности и эффективности действия препарата.

Впервые изучено в сравнительном аспекте влияние фридокса и эмок-сипина и ограничения реперфузии на ранние постреанимационные изменения процессов ПОЛ в корковом и мозговом веществе почек. Показано, что ограничение реперфузии предупреждает, а антиоксидантные препараты эффективно уменьшают чрезмерную активацию прооксидантных систем в почках в первые минуты после оживления и истощение систем антиокси-дантной защиты в динамике иостреанимационного периода.

Показано, что ранняя коррекция постреанимационных изменений процессов липопероксидации в почках с помощью ограничения реперфузии и применения антиоксидантных препаратов достоверно улучшает показатели раннего восстановления жизнедеятельности и видимого неврологического статуса. Выживаемость животных увеличивается в среднем в 1,5-2 раза.

Теоретическая и практическая значимость.

Показано значение изменений процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек при умирании и последующем оживлении в развитии постреанимационной патологии.

Показано, что дополнительное определение динамических показателей липопероксидации in vitro при инкубации гомогенатов, позволяет повысить информативность и объективность оценки изменений про- и антиоксидант-ной активности в тканях при быстро изменяющихся параметрах гемодинамики, оксигенации и метаболизма.

Положительные результаты коррекции постреанимационных изменений процессов липопероксидации в почках с помощью антиоксидантных препаратов и ограничения реперфузии могут быть использованы для разработки патогенетически обоснованных способов повышения эффективности реанимационных мероприятий, а также антиоксидантной защиты почечного трансплантата.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В корковом и мозговом веществе почек при умирании и в раннем постреанимационном периоде происходит активация процессов перекис-ного окисления липидов.

2. При умирании и последующем оживлении в корковом и мозговом веществе почек имеются существенные отличия процессов липопероксидации: преобладание прооксидантной активности в мозговом веществе наблюдается при умирании и последующем оживлении, а в корковом - только в первые минуты после оживления.

3. Использование антиоксидантных препаратов (фридокс, эмоксипин) и ограничение интенсивности реперфузии предупреждают чрезмерную активацию прооксидантных систем, достоверно улучшают восстановление процессов жизнедеятельности и выживаемость животных, перенесших терминальное состояние.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедр биохимии и патофизиологии, в научно-исследовательскую практику ЦНИЛ, кафедр биохимии, патофизиологии, травматологии, анестезиологии и реаниматологии, урологии, гигиены труда

и питания Кемеровской государственной медицинской академии. Оптимизированный способ выявления скрытых изменений соотношения про- и ан-тиоксидантной активности был использован при выполнении диссертационного исследования «Влияние биологических добавок на липопероксида-ционный статус урологических больных» (Маликов Д.И., 2001-2002; Областная клиническая больница г. Кемерова).

Апробация материалов диссертации. Результаты исследования доложены и обсуждены на: 1-ом и 2-ом Всероссийском конгрессе по патофизиологии «Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы» (Москва, 1996, 2000); Всероссийских паучно-практических конференциях «Проблемы медицины и биологии» (Кемерово, 1998, 1999, 2001, 2002); Всероссийской конференции «Актуальные проблемы здравоохранения Сибири» (Ленинск-Кузнецкий, 1998); Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 1999); Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2002); X Российском национальном кошрессе « Человек и лекарство» (Москва, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ, из них 7 в центральной печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на _

страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, главы результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, включающего 135 отечественных и 103 зарубежных

источников. Диссертация содержит _таблиц, иллюстрирована

_рисунками.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Экспериментальное исследование выполнено на 224 беспородных кошках обоего пола массой 2,2 - 4,1 кг. Общая характеристика распределения экспериментального материала представлена в таблице 1. Наркотизированное животное (этаминал натрия, 45 мг/кг внутрибрюшинно) фиксировали на операционном столе, интубировали трахею, выделяли и катетеризировали левую бедренную артерию (кровопускание и реинфузия, регистрация системного артериального давления) и вену (регистрация центрального венозного давления), правую бедренную вену (введение гепарина 500 ед/кг).

Таблица 1

Распределение экспериментального материала в соответствии с изучаемыми показателями липопероксидации__

Раздел исследования Количество животных Количество определений

Опыт Контроль

1 Изучение ишемических и ранних постреанимационных изменений показателей ПОЛ в корковом и мозговом слое почек 30 20 200

2 Изучение влияния фридокса и эмоксипина на ишемические и постреанимационные изменения процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек in vitro 200

3 Оценка дозозависимых эффектов фридокса в корковом и мозговом слое почек in vitro 14 164

4 Влияние фридокса и эмоксипина на ранние постреанимационные изменения показателей липопероксидации в почках и конечные результаты реанимации 50 70 250

5 Влияние ограничения начальной гиперперфузии на ранние постреанимационные изменения показателей липопероксидации в почках и конечные результаты реанимации 40 40

6 Всего: 224 854

Клиническую смерть (5 минут) вызывали пролонгированным кровопусканием из бедренной артерии. С целью после регистрации исходных показателей снимали зажим с силиконовой трубки, соединяющей катетер в левой бедренной артерии с резервуаром для кровопускания. В последнем предварительно создавали давление 50 мм рт. ст. Используя принцип гемо-баростата Уитгерса, поддерживали системное давление на этом уровне в течение 30 минут. Первоначально объем крови в резервуаре быстро возрастал, однако, по мере уравновешивания системного артериального давления с давлением в гемобаростате, истечение крови замедлялось. По истечении 30 минут гипотензии, давление в гемобаростате снижали до атмосферного и осуществляли смертельное обескровливание.

Реанимационные мероприятия включали в себя внутриартериальное нагнетание выпущенной крови, искусственное дыхание в режиме умеренной гипервентиляции, и при необходимости, непрямой массаж сердца. На 5 минуте клинической смерти, через 5 и 180 минут после возобновления кровообращения, то есть в периоды полной ишемии, гиперперфузии и гипо-перфузии (Яковлев А.И., 1984; Евтушенко А.Я., 1990), забирали органы, необходимые для исследования. Почки немедленно помещали на лед, отмывали от крови 0,89% раствором хлорида натрия (0-4 С) с помощью пульсирующей перфузии через катетеры, введенные в почечные артерии. Для оценки роли изменений процессов ПОЛ в патогенезе постреанимационной болезни выполнены эксперименты с включением в комплекс реанимационных мероприятий антиоксиданта нового поколения фридокса (тирилазада мезилата) и применяемого для защиты почечного трансплантата антиоксиданта эмоксипина. Препараты вводили внутриартериально в составе реин-фузированной крови из расчета 6 мг/кг и 7 мг/кг соответственно. Фридокс в дозе 1,5-3 мг/кг зарекомендовал себя как эффективное средство защиты головного мозга при ишемии и реперфузии (КавзеИ К., СНк Н., 1996-1998), однако автор считает целесообразным изучить применение более высоких

доз препарата. Поэтому предварительно было изучено влияние фридокса в дозах 3-9 мг/кг на накопление продуктов липопероксидации в инкубируемых гомогенатах почек. Установлено, что при достаточно продолжительной инкубации происходит «ускользание» прооксидантных систем от ингиби-рующего действия фридокса в дозе 3 мг/кг. В дозе 6 мг/кг ингибирующее действие фридокса было более продолжительным и эффективным. Увеличение дозы до 9 мг/кг не сопровождалось сколько-нибудь значимым увеличением продолжительности и эффективности действия препарата.

Для оценки роли реперфузии в развитии постреаниманионных изменений процессов ПОЛ выполнены эксперименты с ее ограничением в рамках адаптивного диапазона, установленного Будаевым А.В. (1996). С этой целью в течение первой минуты после возобновления кровообращения, используя систему артериального гемобаростата Уиггерса, исключали из ге-моциркуляции часть крови до стабилизации системного АД на уровне 8685% от исходного.

В экспериментах с анализом выживаемости и эффективности фармакологической и гемодинамической коррекцией процессов ПОЛ за животными наблюдали в течение 10 суток постреанимационного периода. Оценивали ранние показатели восстановления жизнедеятельности и восстановление видимого неврологического статуса по ЮО-бальной шкале (Todd М.М. et al., 1981). В качестве контроля использованы животные, перенесшие аналогичные оперативные вмешательства без моделирования терминального состояния. С целью уменьшения погрешностей, обусловленных сезонными, климатическими и производственными факторами, а также сменой реактивов эксперименты опытных и контрольных серий выполнялись по принципу «цикличности» практически в одно и тоже время, а определение показателей липопероксидации - параллельно в идентичных условиях.

Определение показателей липопероксидации. Все операции по приготовлению гомогенатов (1/15 М фосфатный буфер, рН 7,4; разведение

1:5) проводились на льду в холодовой комнате (0-4 С). Для определения концентрации продуктов ПОЛ был выбран тест с тиобарбитуровой кислотой (ТБК), который был и остается наиболее адекватным для мониторинга процессов липопероксидации не только в экспериментальной, но и в клинической практике (Kikugawa К., Kosuge Н., 1993; Абакумов М.М. и соавт., 2002; Бердичевский Б.А. и соавт., 2000-2002). Оптическую плотность измеряли в бутанольном экстракте при длине волны 535 нм на спектрофотометре СФ-46. Используя коэффициент молярной экстинции (1,56х105 М^см"1), рассчитывали концентрацию ТБК-активных продуктов (ТБК-ап). С целью выявления скрытых, незначительных изменений процессов ПОЛ осуществляли инкубацию гомогенатов изучаемых структур при 37±0,1°С в условиях спонтанной и индуцированной (Fe2+ - аскорбат, 20 и 400 мкмоль соответственно) липопероксидации (Гаврилова В.Б. и соавт., 1987; Разумов A.C. и соавт., 1997). Антиоксидантные препараты добавляли к инкубируемым го-могенатам в дозах, аналогичных применяемым in vivo. Через 15, 30, 60,90 и 120 минут определяли концентрацию ТБК-ап в инкубируемых пробах и рассчитывали скорость ее изменения в динамике инкубации. Результаты исследования обработаны статистически с использованием критерия t Стьюдента и непараметрического критерия Т Вилкоксона.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Изменения процессов липопероксидации в почках при умирании и в раннем постреанимационном периоде

Установлено, что к 5-й минуте клинической смерти концентрация ТБК-ап (продуктов липопероксидации, реагирующих с тиобарбитуровой кислотой) в корковом веществе достоверно не изменялась (табл.2), тогда как в мозговом увеличивалась в среднем на 30% (табл.3).

Таблица 2

Динамика концентрации ТБК-ап в гомогенатах коркового вещества почек при инкубации в условиях индукции ПОЛ (нмоль/мл, М±ш)

Серия исх (ш \пуо) Время инкубации (мин)

15 30 60 90 120

1 5,29 +1,04 6,39 ±0,95 6,73 ±0,95 6,71 +0,96 6,84 ±1,09 6,88 ±1,06

2 5,56 +0,89 7,71 ±0,68* 6,61 ±0,53 9,10 ±0,83* 7,60 ±0,66* 8,66 ±0,62*

3 7,52 +1,00* 12,94 ±0,87* 12,34 ±0,78* 13,15 +0,86* 13,62 ±0,71* 13,25 ±1,04*

4 5,23 +0,86 5,15 ±1,10 5,31 ±0,99 5,70 ±1,58 5,60 ±1,11 5,85 ±1,32

5 5,68 ±0,81 9,24 ±0,90* 10,37 ±1,89* 10,74 ±1,44* 9,46 ±0,98* 12,28 ±1,24*

Примечание: здесь и в табл. 3:

1 серия - контроль для клинической смерти и 5-й минуты ПРП (наркоз +фиксация, аналогичные по времени п = 11); 2 серия - 5-я минута клинической смерти (п = 9); 3 серия - 5-я минута ПРП (п = 13); 4 серия - контроль для 3-го часа ПРП (п = 9); 5 серия - 3-й час ПРП (п = 8).

* - р<0,05 в сравнении с контрольной серией № 1;

* - р<0,05 в сравнении с контрольной серией № 4.

Таблица 3

Динамика концентрации ТБК-ап в гомогенатах мозгового вещества почек при инкубации в условиях индукции ПОЛ (нмоль/мл, М±ш)

Серия исх (ш \чуо) Время инкубации (мин)

15 30 60 90 120

1 3,45 ±0,49 5,83 ±1,06 6,76 ±1,12 7,24 ±0,79 7,41 +0.71 7,75 +0.67

2 4,46 ±0,71* 5,58 ±0,67 5,97 ±0,78* 6,42 ±0,69* 5,45 ±0,51* 6,99 ±0,62*

3 5,63 ±1,09* 10,61 ±2,30* 11,73 ±2,27* 12,78 ±2,22* 13,63 ±2,34* 14,10 ±2,5*

4 3,26 ±0,56 3,97 ±0,59 4,19 ±0,50 4,32 ±0,69 4,52 ±0,59 4,89 ±0,72

5 4,09 ±0,76* 10,72 ±0,93* 9,13 ±2,06* 10,78 ±1,98* 7,95 ±1,41* 15,57 ±1,9*

Примечание (см. табл. 2).

С возобновлением кровообращения концентрация ТБК-ап еще больше увеличивалась и превышала таковую во время клинической смерти в среднем на 35% и 25% соответственно в корковом и мозговом веществе. К 3-му часу постреанимационного периода (ПРП) она уменьшалась, однако в мозговом веществе оставалась достоверно выше контрольных значений (на 2025%), тогда как в корковом - различия с контролем становились минимальными. Вместе с тем, несмотря на то, что содержание продуктов липоперок-сидации в мозговом веществе к 5 минуте клинической смерти достоверно увеличивалось, при последующей инкубации гомогенатов концентрация продуктов липопероксидации в них в течение 2-х часов была меньше контрольных значений. В гомогенатах коркового вещества она, хотя и незначительно превышала таковую в контрольных гомогенатах. После оживления (5 минут и 3 часа) накопление продуктов липопероксидации при инкубации • было более выраженным в среднем в 1,5-2 раза больше чем в гомогенатах

соответствующих контрольных серий, i, Анализ полученных данных позволяет заключить, что при умирании и

последующим оживлении, происходит увеличение прооксидантной активности в почках. Преобладание прооксидантной активности в корковом ве-. ществе отчетливо проявляет in vivo только в первые минуты после ожив-

ления, тогда как при умирании и к 3-му часу ПРП только in vitro при достаточно продолжительной инкубации гомогенатов. В мозговом веществе активация прооксидантных систем более выражена, что отчетливо проявляется накоплением продуктов липопероксидации и при умирании, и после оживления как in vitro так и in vivo.

Таким образом, происходящие при умирании и последующем оживлении изменения показателей липопероксидации в почках in vivo в определенной степени нивелируется, возможно, вследствие весьма быстрых изменений параметров гемоперфузии и оксигенации, соответственно образования, утилизации и элиминации продуктов липопероксидации в крове-

носное русло. Выявить и адекватно оценить происходящие изменения можно только при достаточно продолжительной инкубации гомогенатов, особенно в условиях индукции ПОЛ in vitro. Данное положение подтверждается расчетами скорости накопления продуктов липопероксидации в инкубируемых гомогенатах. В частности, при инкубации в условиях спонтанной липопероксидации различия стартовой и средней скорости накопления ТБК-ап и се динамики во всех гомогенатах коркового и мозгового вещества опытных и контрольных серий были незначительными. Однако, в условиях индукции ПОЛ, когда возрастает нагрузка и на про- и на антиок-сидантные системы, что позволяет выявить даже их незначительные изменения, стартовая и средняя скорости накопления продуктов ПОЛ в гомогенатах мозгового вещества животных, перенесших 5- минутную реперфу-зию, увеличивались в два раза, а в гомогенатах коркового вещества - в 5 и 3,5 раза. Через 3 часа после оживления стартовая и средняя скорости нако- •

пления ТБК-ап в гомогенатах мозгового вещества увеличивались в среднем в 9 и 5 раз соответственно. t

2. Сравнительная характеристика влияния антиоксидантных

препаратов и ограничения реперфузии на постреанимационные

изменения липопероксидации в почках

При включении в комплекс реанимационных мероприятий фридокса и эмоксипина концентрация ТБК-ап в корковом веществе к 3-му часу после оживления была в среднем на 20% меньше по сравнению с таковой при обычном ведении постреанимационного периода. Накопление продуктов липопероксидации в инкубируемых гомогена1ах уменьшалось на 20 и 40% соответственно при спонтанном и индуцированном ПОЛ (р<0,05). В мозговом веществе ограничение постреанимационной активации процессов липопероксидации под влиянием препаратов in vivo не выявлялось, содержание ТБК-ап к 3-му часу после оживления не отличалось от такового при

обычном ведении ПРП. Однако ингибирующее действие фридокса отчетливо выявлялось in vitro - при инкубации гомогенатов в условиях индукции ПОЛ накопление ТБК-ап уменьшалось на 40-50% (р<0,05). Ограничение накопления продуктов липопероксидации при использовании эмокси-пина было менее выраженным (рис.1).

120

I

100 j 80 ! 60 40 20 0

корковое вещество

15

30 60

Время инкубации (мин).

90

1

120

мозговое вещество

15 30 60

Время инкубации (мин).

Рис.1. Влияние антиоксидантных препаратов на динамику накопления продуктов ПОЛ (в % от обычного ведения ПРП) в почках. 1 - обычное введение ПРП; 2 - введение фридокса (бмг/кг) in vivo; 3 - введение эмоксипина (7мг/кг) in vivo.

Заштрихованные маркеры - р< 0,05 в сравнении с обычным ПРП.

Сравнительный анализ влияния препаратов на скорость накопления продуктов ПОЛ в инкубируемых гомогенатах показал, что эмоксипин первоначально (первые 15 минут инкубации) оказывает более выраженное ин-гибиругощее действие, однако более кратковременное по сравнению с фридоксом. Так, стартовая скорость накопления ТБК-ап в инкубируемых гомогенатах животных с использованием эмоксипина была в среднем в 1,5 - 3 раза меньше, а средняя - достоверно больше, чем при использовании фрндокса.

Предварительно антиоксидантные эффекты на процессы липоперок-сидации препаратов были изучены в экспериментах in vitro, результаты которых представлены в таблице 4 и 5.

Наиболее выраженное ингибирующее действие фридокса и эмоксипина наблюдалось в гомогенатах животных, полученных через 3 часа после оживления. При добавлении фридокса к гомогенатам коркового вещества минимальное ограничение накопления ТБК-ап было равно 15%,а максимальное - 40% в зависимости от времени извлечения органов (5 минут клинической смерти, 5 минут и 3 часа после оживления). Минимальное ограничение накопления продуктов липопероксидации в гомогенатах мозгового вещества при добавлении фридокса было 20%, максимальное - 60%, при добавлении эмоксипина - 15 и 45% соответственно.

Установлено, что при ограничении реперфузии содержание продуктов дипогтерпк^идяции r корковом веществе почек к 3-му часу цоспе оживления, было в среднем на 20% меньше, чем при обычном введении IIPII; в мозговом - сколько-нибудь значимо не отличалось.

В течение 2-х - часовой инкубации концентрация ТБК-ап в гомогенатах коркового вещества увеличивалась так же как, в контроле, в среднем на 10-15% по отношению к исходной. В экспериментах с обычным ведением ПРП, она увеличивалась более чем в 2 раза.

Таблица 4

Влияние фридокса и эмоксипина in vitro на ишемические и репер-фузионные изменения динамики концентрации ТБК-ап в гомогена-тах коркового слоя почек при инкубации в условиях индукции ПОЛ

Серии Время инкубации (м и н)

Исх (in 15 30 60 90 120

vivo).

1 5,29 6,39 6,73 6,71 6,84 6,88

±0,88 +0,95 ±0,95 +0,96 ±1,09 ±1,06

2 5,56 7,71 6,61 9,10 7,59 8,66

±0,89 ±0,68 ±0,53 ±0,83 ±0,66 ±0,62

3 5,59 6,39 6,80 7,47 7,82 7,00

±0,75 ±0,70* ±0,72* ±0,50* ±0,36* ±0,48*

4 5,52 6,42 6,85 7,96 8,93 9,14

±0,86 ±0,36* ±0,37 ±0,82* ±0,47* ±0,62

5 7,52 12,94 12,34 13,15 13,62 13,25

±0,90 ±0,87 ±0,78 ±0,86 ±0,71 ±1,04

6 7,44 8,34 9,03 10,82 10,91 11,36

±0,89 +0,96* ±0,76* ±1,03* ±0,92* ±0,78*

7 7,16 10,28 11,18 11,26 12,03 12,89

±1,06 ±0,93* ±1,02* [ ±1,03* ±1,07* ±1,03*

8 5.23 5,15 5,31 5,70 5,60 5,85

±0,86 ±1,00 ±0,99 ±1,58 ±1,11 ±1,32

9 5,68 9,24 10,37 10,74 9,46 12,28

±1,24 ±0,90 ±1,89 ±1,44 ±0,98 ±1,24

10 4,82 5,90 6,03 5,63 6,51 7,41

±0,78* +0,96* ±1,08* ±0,99* ±0,79* ±1,45*

11 4,70 6,17 7,19 7,53 7,86 6,03

±0,76* ±0,93* ±1,33* ±1,42* ±0,87* ±1,07*

Примечание:

1 - контроль (наркоз к фиксация и-11); 2-5-я минута клинической смерти (п=9); 3 - 5-я минута клинической смерти + фридокс (п-9); 4-5-я минута клинической смерти + эмоксипин (п=9); 5 - 5-я минута постреанимационного периода (п=13); 6 - 5-я минута постреанимационного периода + фридокс (п=13); 7 - 5-я минута клинической смерти + эмоксипин (п=9); 8 - контроль (наркоз и фиксация, п=9) для 3 часа ПРП; 9 - 3-й час постреанимационного периода (п=8); 10 - 3-й час постреанимационного периода + фридокс (п=8); 11 - 3-й час постреанимационного периода + эмоксипин (п=8).

*- р<0.05 в сравнении с гомогенатами без препарата (по критерию Вил-коксона).

Таблица 5

Влияние фридокса и эмоксипина ill vitro на ишемические и репер-фузионные изменения динамики концентрации ТБК-ап в гомогена-тах мозгового слоя почек при инкубации в условиях индукции ПОЛ

Серии Время инкубации (м и н)

Исх (in 15 30 60 90 120

vivo).

1 3,45 5,83 6,76 7,24 7,41 7,75

±0,49 ±1,06 ±1,12 ±0,79 ±0,71 ±0,67

2 4,46 5,58 5,97 6,42 5,45 6,99

±0,71 ±0,67 ±0,78 ±0,69 ±0,69 +0,62

3 4,39 5,31 5,04 6,03 5,11 5,38

±0,62 ±0,65 ±0,68* +0,59 ±0,42 ±0,55*

4 4,23 5,17 5,38 6,11 5,53 5,69

±0,66 ±0,77 ±0,72 ±0,73 ±0,43 ±0,64*

5 5,63 10,61 11,73 12,78 13,63 14,10

±1,09 ±1,19 ±2,27 +2,22 +1,34 ±2,51

6 4,26 6,38 7,46 8,58 9,61 10,13

±0,76* ±1,19* ±1,18* ±2,05* ±1,32* ±1,19*

7 3,42 7,93 9,03 10,03 10,86 11,78

±0,69* ±1,09* ±2,05* ±1,09* ±2,13* ±1,07*

8 3,26 3,97 4,19 4,32 4,52 4,89

±0,59 ±0,59 ±0,50 ±0,69 ±0,59 ±0,72

9 4,09 10,72 9,13 10,78 7,95 15,57

±0,76 ±0,93 *2,06 ±1,98 ±1,41 ±1,99

10 3,80 4,14 4,62 4,49 3,71 5,67

±0,81 ±0,67* ±0,84* ±0,99* ±0,81* ±0,41*

И 4,05 5,21 5,58 4,31 5,38 6,85

±0,75 ±0,68* ±0,59* ±0,98* ±0,86* ±0,58*

Примечание: (см. табл. 4).

В инкубируемых гомогенатах мозгового вещества в экспериментах с ограничением реперфузии концентрация продуктов липопероксидации в течение 2 часов практически не увеличивалась, тогда как при обычном ведении ПРП - возрастала в 3,5 - 4 раза. Для сравнения - в гомогенатах контрольных (интактных) животных она возрастала в среднем в 1,5 раза. При использовании антиоксидантных препаратов ограничение накопления ТБК-

an в инкубируемых гомогенатах коркового и мозгового вещества было менее выраженным.

Таким образом, анализ влияния антиоксидантных препаратов (in vivo и in vitro) и ограничения реперфузии на содержание продуктов липоперок-сидации в корковом и мозговом веществе почек in vivo и их накопление в инкубируемых гомогенатах, позволяет сделать следующее заключение. Фридокс и эмоксипин достаточно эффективно ограничивают чрезмерную активацию прооксидантных систем в первые минуты после оживления и предупреждают истощение антиоксидантных систем. В результате этого изучаемые показатели липопероксидации к 3-му часу ПРП приближаются к таковым у контрольных животных. Ограничение реперфузии, по-видимому, уменьшает не столько чрезмерную активность прооксидантных систем при оживлении, сколько действие активирующих факторов, в частности, гипе-роксию. В результате этого мобилизация эндогенных систем антиоксидант-пой защиты не сопровождается столь быстрым их истощением, как при обычном ведении ПРП и даже по сравнению с применением экзогенных ан-тиоксидантов. Уменьшение (антиоксидантные препараты) или предупреждение чрезмерной активации процессов липопероксидации (ограничение реперфузии) способствуют более быстрой нормализации соотношения про-и антиоксидантной активности в тканях, метаболизма и восстановлению функций после перенесенного терминального состояния.

3. Влияние фридокса, эмоксипнна и ограничения реперфузии на процессы восстановления жизнедеятельности и конечные результаты реанимации

При включении в комплекс реанимационных мероприятий антиоксидантных препаратов и ограничения реперфузии у животных быстрее восстанавливались ранние показатели восстановления жизнедеятельности (табл.6).

Таблица 6

Ранние показатели восстановления жизнедеятельности (М ± ш)

Серии Сердечные Время от возобновления кровообращения

сокращения (минуты)

(секунды) Первый Ритмичное Рогович- Болевая

вдох дыхание ный рефлекс чувствительность

1 49,0 3,6 21,7 24,3 37,2

±4,95 ±0,55 ±2,05 ±2,27 ±3,43

2 68,7 2,7 17,2 22,1 25,4

±7,32* ±0,27* ±1,24* ±2,19 ±3,00*

3 40,9 5,0 9,5 23,2 26,3

±10,6 ±2,7 ±4,2* ±3,32 ±3,82*

4 48,8 3,4 18,3 22,4 28,9

±4,90 ±0,48 ±1,37 ±2,14 ±3,06*

Примечание:

1 - обычное ведение ПРП (п = 70); 2 - введение фридокса (п = 35);

3 - введение эмоксипина (п = 10); 4 - ограничение гаперперфузии (п = 40);

* - р < 0,05 в сравнении с обычным ведением ПРП.

Так, при использовании фридокса достоверно раньше появлялся первый вдох, болевая чувствительность и восстанавливалось самостоятельное дыхание по сравнению с обычным ведением ПРП. При использовании эмоксипина наблюдалась некоторая задержка первого вдоха; не смотря на это, достоверно раньше восстанавливалось самостоятельное дыхание по сравнению с животными остальных анализируемых серий. При ограничении реперфузии достоверно раньше восстанавливалась только болевая чувствительность. Вместе с тем последующее восстановление функций центральной нервной системы у животных этой серии, по-видимому, происходило несколько быстрее. К концу первых суток после реанимации неврологический дефицит уменьшался на 50% больше по сравнению с обычным ведением ПРП, тогда как при использовании фридокса и эмоксипина только на 30 и 25% соответственно. Летальность животных наблюдалась только в первые 10-24 часа после реанимации, так же как и в опытах с использованием фридокса. В экспериментах с обычным введением ПРП и использованием эмоксипина животные погибали в течение первых 4-х суток, пережившие этот срок все выживали.

Выживаемость животных увеличивалась с 28,6% (из 70 выжили 20, р<0,05) при обычном введении ПРП до 42,9% (из 35 выжили 15, р<0,05) с использованием фридокса, до 54,6% (из 11 выжили 7, р<0,05) - с использованием эмоксипина и до 62,5% (из 40 выжили 25, р<0,05) - при ограничении реперфу-зии.

Таким образом, при включении в комплекс реанимационных мероприятий фридокса и эмоксипина, а так же при ограничении реперфузии улучшаются ранние показатели восстановления жизнедеятельности, видимого неврологического стагуса и увеличивается выживаемость животных, перенесших клиническую смерть от пролонгированной кровопотери.

ВЫВОДЫ

1. При умирании и в раннем постреанимационном периоде в почках происходит активация прооксидантных систем: увеличивается содержание продуктов ли-попероксидации in vivo и их накопление в гомогенатах in vitro.

2. Изменения процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек при умирании и в раннем постреанимационном периоде имеют существенные различия. В мозговом веществе содержание продуктов перекис-ного окисления липидов увеличивается как во время умирания, так и в раннем постреанимационном периоде. В корковом веществе содержание продуктов липопероксидации достоверно увеличивается только с возобновлением кровообращения.

3. Фридокс (6 мг/кг) и эмоксипин (7 мг/кг) эффективно ограничивают in vitro и in

vivo ишемическую и раннюю постреанимационную активацию процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек. Уменьшается содержание продуктов липопероксидации в тканях почек in vivo (на 20-45%) и их накопление в гомогенатах in vitro (на 15-65%).

4. Ограничение начальной реперфузии с помощью разгрузки сосудистого русла предупреждает чрезмерную активацию прооксидантных систем к 3-му часу постреанимационного периода.

5. Коррекция ранних постреанимационных изменений процессов липопероксидации с помощью антиоксидантов фридокса и эмоксипина и ограничения реперфузии является одним из патогенетически обоснованных способов повышения эффективности реанимационных мероприятий. Выживаемость животных с полным восстановлением видимого неврологического статуса, увеличивается при введении фридокса с 28,6% до 42,9% , при введении эмоксипина до 54,6%, при ограничении реперфузии до 62,5%.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Разумов, A.C. Определение статических и динамических показателей липо-пероксидации: Mei одические рекомендации // A.C. Разумов, Ю.А. Пеганова, Е.В. Вандакуров. - Кемерово, 1997. - 20с.

2. Пеганова, Ю.А. Влияние тирилазада-мезилата на индуцированную липоперок-сидацию в корковом веществе почек / Ю.А. Пеганова // Проблемы медицины и биологии: Материалы Всероссийской конференции-семинара с международным участием. - Кемерово, 1998. - С. 116.

3. Пеганова, Ю.А. Модулирующий эффект фридокса на индуцированную ли-попероксидацию в корковом веществе почек в раннем постреанимационном периоде / Ю.А. Пеганова // Актуальные проблемы здравоохранения Сибири: Материалы Всероссийской конференции. - Ленинск-Кузнецкий, 1998. - С. 203.

4. Пеганова, Ю.А. Органная специфичность аптиоксидаптпой активности фридокса / Ю.А. Пеганова, Е.В. Вандакуров, Е.И. Паличева // Проблемы медицины и биологии: Материалы Всероссийской конференции-семинара с международным участием. - Кемерово, 1998. - С. 123-124.

5. Методологические аспекты мониторинга перекисного окисления липидов в норме и патологии / A.C. Разумов, АЛ. Евтушенко, Ю.А. Пеганова и др. // Среда обитания, состояние здоровья населения, Госсанэпиднадзор в Кузбассе: Тез. докл. научн. - практ. конф., посвящ. 35-летию медико-профилактического фак-та КГМА. - Кемерово, 1998. - Вып.2. - С. 89.

6. Пеганова, Ю.А. Сравнительная характеристика влияния фридокса и эмокси-пина на процессы ПОЛ в мозговом веществе постишемических почек / Ю.А. Пеганова, A.B. Лузанова // Актуальные проблемы патофизиологии: Тез. докл. конф. мол. ученых. - Санкт-Петербург, 1999. - С. 100-102.

7. Пеганова, Ю.А. Сравнительная характеристика влияния фридокса и эмокси-пина in vitro на процессы перекисного окисления липидов в мозговом слое постишемических почек / Ю..А. Пеганова, А.Я. Евтушенко // Проблемы медицины и биологии: Сборник науч. трудов Всероссийской науч. конференции - семинара, посвящ. 275-летию РАН. - Кемерово, 1999. - 4.2. - С. 89.

8. Органоспецифичность перекисного окисления липидов в условиях индукции Fe2+- аскорбатом in vitro / A.C. Разумов, Е.И. Паличева, Ю.А Пеганова и др // Механизмы функционирования висцеральных систем: Междунар. конф., посвящ. 150-летию И.П. Павлова (СПБ, 23-25 сентября 1999 г.).- Санкт-Петербург, 1999. - С. 276-277.

9. Модификация процессов перекисного окисления липидов в восстановительном периоде после временной остановки сердца как способ повышения эффективности реанимационных мероприятий / А.Я. Евтушенко, A.C. Разумов, Ю.А. Пеганова и др. // Материалы 8-го Российско-Японского Международного медицинского симпозиума. - Благовещенск, 2000. - С. 449-450.

10. Влияние ограничения интенсивности начальной гиперперфузии на ранние постреанимационные изменения процессов перекисного окисления липидов / A.C. Разумов, А.Я. Евтушенко, Ю.А. Пеганова и др. // Анестезиология и реаниматология. - 2000. - № 6. - С. 49-51.

11.Методологические аспекты оценки ишемических и ранних реперфузионных изменений процессов липопероксидации / Ю.А. Пеганова, Е.И. Паличева, A.C. Разумов и др. // Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы: Материалы 2-го Российского конгресса по патофизиологии. -Москва, 2000,- С. 197.

12.Роль постишемической гиперперфузии в развитии ранних постреанимационных нарушений процессов липопероксидации / A.C. Разумов, А.Я. Евтушенко, Ю.А. Пеганова и др. // Фундаментальные науки - практике здравоохранения: Материалы Российской научной конференции, Омск, 30 ноября 2001 г. - Омск, 2001. - С. 32-35.

13.Пеганова, Ю.А. Оценка эффективности антиоксидантной терапии при терминальных состояниях / Ю.А. Пеганова// Проблемы биологии и медицины: Материалы конференции студентов и молодых ученых. - Кемерово, 2002. -С. 206-207.

14.Пеганова, Ю.А. Влияние фридокса и эмоксипина на процессы перекисного окисления липидов в корковом слое почек в раннем реперфузионном периоде / Ю.А. Пеганова // Здоровье и образование в XXI веке: Тезисы докл. 3-й Международной научно-практической конференции. - Москва, 2002. С. 310.

15.Адаптивный характер изменения процессов липопероксидации при ограничении ранней постреанимационной гиперперфузии / Ю.А. Пеганова, Е.И. Паличева, С.Г. Долгова и др. // Компенсаторно-приспособительные процессы: фундаментальные и клинические аспекты. Материалы Всероссийской конференции. - Новосибирск, 2002. С. 326-327.

16. Расширение области применения фридокса: защита почек при терминальных состояниях / Е.И. Паличева, Ю.А. Пеганова, A.C. Разумов и др. // Человек и лекарство: Тезисы докл. X Российского национального конгресса. -Москва, 2003. - С. 741-742.

Список сокращений

артериальное давление; перекисное окисление липидов; иостреанимационный период; 2-тиобарбитуровая кислота; карбонильные продукты ПОЛ, реагирующие с 2-тиобарбитуровой кислотой: ТБК-активные продукты.

АД ПОЛ

гтпгт иг 11

ТБК ТБК-ап

Соискатель

Пеганова Ю.А.

10227

Отпечатано редакционно-издательским отделом Кемеровской государственной медицинской академии цГМл

650029, Кемерово, .* —* „ п,

„ ' г _„ - -j-J' ' Подписано в печать 22.05.2003

ул. Ворошилова, 22а. , ,. _ - ,,,,,

Тел./факс+7(3842)734856; Ш® < арнитуратаймсЛираж 100 ,кз.

epd®ksma.kuzstu.ас.ru " Усл. печ. листов-1,3.

Отпечатано с готового оригинал-макета Лицензия JIP №21244 от 22.09.97

Актуальность проблемы. В результате многочисленных клинических и экспериментальных исследований убедительно доказана роль активации процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ) в развитии ишемических и реперфузионных повреждений органов и тканей (Биленко М.В., 1989; Семченко В.В. и соавт., 1999; Разумов А.С, 2001; Willmore L.J. et al., 1991; Steltren H.G. et al., 1999). Обладая в норме широким спектром физиологических эффектов, среди которых регуляция процессов физико-химической модификации клеточных мембран, белков, окислительного фосфорилирова-ния, экспрессии генов и множество других жизненно важных функций (Ар-чаков А. И., 1983; Владимиров Ю.А., 1998; Ozden A. et al., 1999), продукты липопероксидации при их чрезмерном образовании могут оказать прямое повреждающее действие на липидный биослой мембран и, следовательно, на их барьерную и рецепторную функцию, работу ионных каналов, метаболизм структурных и транспортных белков (Рябов Г.А. и соавт., 2002; Shaul P.W., 1994; Chen J. et al., 1998).

При этом традиционными объектами изучения процессов липопероксидации при различных формах нарушения кровообращения были и остаются сердце и головной мозг (Долгих В.Т. и соавт., 1983-2002; Грибанов Г.А., Ильященко Д.В., 1994; Ерин А.Н. и соавт., 1994; Семченко В.В. и соавт., 1986-2002; Safar Р., 1981; Smit S.L. et Hall E.D., 1998). Вместе с тем, имеются органы и ткани, в частности почки, которые не менее уязвимы, для повреждающих факторов ишемии и реперфузии, а нарушение их функций лежит в основе вторичных нарушений кровообращения, водно-солевого обмена и интоксикации организма, перенесшего терминальное состояние. Увеличение образования продуктов липопероксидации, а также уменьшение активности антиоксидантных систем в почках установлено в экспериментах с использованием различных моделей гипоксии-реоксигенации, ишемииреперфузии (Биленко М.В., 1989; Рябов С.И., Куликова А.И., 1995; Макаренко B.C., 2000; Бердичевский Б.А., 2001; Green C.J. et al., 1986; Tanigawa К. et al., 1999). Вместе с тем, в исследованиях Takenaka М. et al. (1981-1989) усиление прооксидантной активности ни во время полной ишемии, ни после реперфузии почек не выявлено.

Кроме того, особая актуальность данной проблемы определяется широким распространением почечной траспланталогии, в связи с чем, возникает острая необходимость разработки эффективных способов защиты почек и отдельных почечных структур от ишемических и реперфузионных повреждений (Augustin W. et al., 1997; Nugent D. et al., 1998; Grinyo J.V., 2001).

Исходя из этого, повышение антиоксидантной защиты почек рассматривается как необходимое условие сохранения их структурно-функциональной целостности и активности (Аристархова С.А. И со-авт.,1973; Бурлакова Е.Б. и соавт., 1975, 1992; Бюрроуз Э., 2001). Вместе с тем информация об изменениях процессов ПОЛ в различных отделах почек при терминальных состояниях недостаточна и весьма противоречива, значительный разброс сведений об интенсивности процессов ПОЛ в почках и изменении состояния систем антиоксидантной защиты ставит вопрос о целесообразности и эффективности использования антиоксидантных препаратов в момент выведения организма из критического состояния.

Од и н из антиоксидантов нового поколения - фридокс хорошо зарекомендовал себя как эффективное средство защиты мозга при ишемии и реперфузии (Разумов А.С., 1999-2001; Kassell N.F et al., 1998-1999). Не исключено, что он может быть эффективным средством и для защиты почек.

Таким образом, отсутствие достаточно ясного представления о закономерностях и патогенетической значимости ишемических и реперфузионных изменений процессов ПОЛ в почках, необходимости и возможности их коррекции с помощью современных антиоксидантов нового поколения послужило основанием для выполнения данного исследования.

Цель исследования.

• Провести оценку ранних постреанимационных изменений процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек и обосновать принципы их коррекции. Задачи исследования.

1. Изучить особенности процессов перекисного окисления липидов в корковом и мозговом веществе почек кошек при умирании от пролонгированной кровопотери и в раннем постреанимационном периоде (3 часа).

2. Оценить в сравнительном аспекте влияние фридокса и эмоксипина на ранние постреанимационные изменения процессов перекисного окисления липидов в корковом и мозговом веществе почек.

3. Оценить влияние ограничения реперфузии на ранние постреанимационные изменения процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек.

4. Изучить в сравнительном аспекте влияние коррекции ранних постреанимационных изменений процессов липопероксидации в почках с помощью антиоксидантных препаратов и ограничения реперфузии на процессы восстановления жизнедеятельности и выживаемость животных, перенесших терминальное состояние.

Научная новизна исследования.

Впервые изучены в корковом и мозговом веществе почек изменения процессов липопероксидации при умирании от кровопотери и в раннем постреанимационном периоде. Установлено, что при умирании и последующем оживлении в почках, происходит чрезмерная активация прооксидантных систем. Показано, что происходящие изменения выявляются только при инкуба* ции гомогенатов, особенно в условиях индукции ПОЛ in vitro - изменяется динамика и увеличивается скорость накопления продуктов липопероксидации.

Впервые произведена оценка дозозависимых эффектов фридокса (3; 6 и 9 мг/кг) in vitro на ишемические и ранние постреанимационные изменения процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек. Установлено, что в дозе 6 мг/кг фридокс эффективно ограничивает ишемическую и реперфузионную активацию процессов ПОЛ в почках. Увеличение дозы до 9 мг/кг не сопровождается сколько-нибудь значимым увеличением продолжительности и эффективности действия препарата.

Впервые изучено в сравнительном аспекте влияние фридокса и эмокси-пина и ограничения реперфузии на ранние постреанимационные изменения процессов ПОЛ в корковом и мозговом веществе почек. Показано, что ограничение реперфузии предупреждает, а антиоксидантные препараты эффективно уменьшают чрезмерную активацию прооксидантных систем в почках в первые минуты после оживления и истощение систем антиоксидантной защиты в динамике постреанимационного периода.

Показано, что ранняя коррекция постреанимационных изменений процессов липопероксидации в почках с помощью ограничения реперфузии и применения антиоксидантных препаратов достоверно улучшает показатели раннего восстановления жизнедеятельности и видимого неврологического статуса. Выживаемость животных увеличивается в среднем в 1,5-2 раза.

Теоретическая и практическая значимость.

Показано значение изменений процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек при умирании и последующем оживлении в развитии постреанимационной патологии.

Показано, что дополнительное определение динамических показателей липопероксидации in vitro при инкубации гомогенатов, позволяет повысить информативность и объективность оценки изменений про- и антиоксидантной активности в тканях при быстро изменяющихся параметрах гемодинамики, оксигенации и метаболизма.

Положительные результаты коррекции постреанимационных изменений процессов липопероксидации в почках с помощью антиоксидантных препаратов и ограничения реперфузии могут быть использованы для разработки патогенетически обоснованных способов повышения эффективности реанимационных мероприятий, а также антиоксидантной защиты почечного трансплантата.

Основные положения, выносимые на защиту

1. В корковом и мозговом веществе почек при умирании и в раннем постреанимационном периоде происходит активация процессов перекисно-го окисления липидов.

2. При умирании и последующем оживлении в корковом и мозговом веществе почек имеются существенные отличия процессов липопероксидации: преобладание прооксидантной активности в мозговом веществе наблюдается при умирании и последующем оживлении, а в корковом -только в первые минуты после оживления.

3. Использование антиоксидантных препаратов (фридокс, эмоксипин) и ограничение интенсивности реперфузии предупреждают чрезмерную активацию прооксидантных систем, достоверно улучшают восстановление процессов жизнедеятельности и выживаемость животных, перенесших терминальное состояние.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедр биохимии и патофизиологии, в научно-исследовательскую практику ЦНИЛ, кафедр биохимии, патофизиологии, травматологии, анестезиологии и реаниматологии, урологии, гигиены труда и питания Кемеровской государственной медицинской академии. Оптимизированный способ выявления скрытых изменений соотношения про- и антиоксидантной активности был использован при выполнении диссертационного исследования «Влияние биологических добавок на липопероксидационный статуе урологических больных» (Маликов Д.И., 2001-2002; Областная клиническая больница г. Кемерова).

Апробация материалов диссертации. Результаты исследования доложены и обсуждены на: 1-ом и 2-ом Всероссийском конгрессе по патофизиологии «Патофизиология органов и систем. Типовые патологические процессы» (Москва, 1996, 2000); Всероссийских научно-практических конференциях «Проблемы медицины и биологии» (Кемерово, 1998, 1999, 2001, 2002); Всероссийской конференции «Актуальные проблемы здравоохранения Сибири» (Ленинск-Кузнецкий, 1998); Всероссийской научной конференции молодых ученых «Актуальные проблемы патофизиологии» (Санкт-Петербург, 1999); Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2002); X Российском национальном конгрессе « Человек и лекарство» (Москва, 2003).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 16 печатных работ, из них 7 в центральной печати.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 154 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материала и методов исследования, глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка цитируемой литературы, включающего 135 отечественных и 103 зарубежных источников. Диссертация содержит 20 таблиц, иллюстрирована 22 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. При умирании и в раннем постреанимационном периоде в почках происходит активация прооксидантных систем: увеличивается содержание продуктов липопероксидации in vivo и их накопление в гомогенатах in vitro.

2. Изменения процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек при умирании и в раннем постреанимационном периоде имеют существенные различия, периоде активация прооксидантных систем в почках существенно превышает функциональные возможности систем антиоксидантной защиты и утилизации продуктов В мозговом веществе содержание продуктов перекисного окисления липидов увеличивется как во время умирания, так и в раннем постреанимационном периоде. В корковом веществе содержание продуктов липопероксидации достоверно увеличивается только с возобновлением кровообращения.

3. Фридокс (6 мг/кг) и эмоксипин (7 мг/кг) эффективно ограничивают in vitro и in vivo ишемическую и раннюю постреанимационную активацию процессов липопероксидации в корковом и мозговом веществе почек. Уменьшается содержание продуктов липопероксидации в тканях почек in vivo (на 20-45%) и их накопление в гомогенатах in vitro (на 15-65%).

4. Ограничение начальной реперфузии с помощью разгрузки сосудистого русла предупреждает чрезмерную активацию прооксидантных систем к 3-му часу постреанимационного периода.

5. Коррекция ранних постреанимационных изменений процессов липопероксидации с помощью антиоксидантов фридокса и эмоксипина и ограничения реперфузии является одним патогенетически обоснованных способов повышения эффективности реанимационных мероприятий. Выживаемость животных с полным восстановлением видимого неврологического статуса, увеличивается при введении фридокса с 28,6% до 42,9%, при введении эмоксипина до 54,6%, при ограничении реперфузии до 62,5%.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для повышения информативности и объективности интегральной оценки изменений процессов липопероксидации в различных органах и тканях при острых нарушениях кровообращения необходимо определение динамических показателей липопероксидации при инкубации гомогенатов в условиях спонтанного и индуцированного ПОЛ.

2. Данные о влиянии антиоксидантных препаратов и ограничения интенсивности реперфузии на постреанимационные изменения процессов липопероксидации в почках и результаты реанимации целесообразно использовать при разработке патогенетически обоснованных способов повышения эффективности реанимационных мероприятий.

3. Данные о влиянии антиоксидантных препаратов (фридокс, эмок-сипин) на показатели липопероксидации, важно также учитывать при антиоксидантной поддержки почечного трансплантата и заболеваниях сопровождающихся нарушением почечного кровообращения.