Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Поиск и изучение противосудорожных свойств в ряду соединений производных дибензодиазепина

ОА

/

На правах рукописи

ТРЕГУБОВ АЛЕКСАНДР ЛЕОНИДОВИЧ

ПОИСК И ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОСУДОРОЖНЫХ СВОЙСТВ В РЯДУ СОЕДИНЕНИЙ ПРОИЗВОДНЫХ ДИБЕНЗОДИАЗЕПИНА 14.00.25-фармакология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Уфа -1997

Работа выполнена в Пермской государственной фармацевтической академии. Научный консульташ-:

доктор биологических наук, профессор В.Э. Колла

Официальные оппонента:

доктор медицинских наук, профессор Х.М. Насыров доктор медицинских наук, профессор Б .Я.Сыропятов доктор медицинских наук, профессор Л.П. Л Джонов

Ведущая организация: Российский государственный медицинский университет

Защита состоится "_"_1997 г.

в_часов на заседании диссертационного совета Д.084.35.01 при

Башкирском государственном медицинском университете. (450000, г. Уфа, цешр ул. Ленина, 3)

с диссертацией можно ознакомится в библиотеке университета. Автореферат разослан "_"_1997 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета,

доктор медицинских наук, профессор

Э.Г. Давлегов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Фармакотерапия эпилепсии до сих пор является одной из наиболее трудных проблем психиатрии. Это во многом связано прежде всего с наличием неврологического и психического компонента болезни. Подавление пароксизмальной активности не всегда приводит к улучшению психического статуса, тем более, что противоэпилептические препараты сами могут вызывать при длительном применении некоторые неврологические и психические нарушения. Среди достаточно большого числа антиконвульсантов практически отсутствуют лекарства лишенные нежелательных побочных эффектов. Клинические признаки этих эффектов достаточно многообразны и не касаются этих препаратов в равной степени. Кроме того, эти проявления во многом зависят от доз и длительности лечения. Из всех нежелательных эффектов наиболее часто встречается седа-тивное действие, которое сопровождается угнетением скорости психических процессов, моторной реакции и общей трудоспособности. Нередко также встречаются и желудочно-кишечные расстройства. Особое внимание заслуживают и психические нарушения, такие как: депрессии, эйфории, галлюцинации.

Таким образом, существующие антиконвульсанты далеко не идеальны как с точки зрения эффективности так и с точки зрения терапевтической безопасности. Поэтому создание препаратов, которые могут применятся для лечения различных вариантов припадков и которые отличаются хорошей переносимостью и безопасностью, является чрезвычайно важной задачей.

В этой связи нами исследована противосудорожная и психотропная активность в ряду производных дибензодиазепина, синтезированных в Новокузнецком НИХФИ под руководством Чернова Г.С. Данная группа соединений является родственной в химическом отношении известному нейролептику азалеппгину (лепонексу). Наибольший интерес среди изученных веществ как потенциальных противосудорожных средств представил препарат под рабочим шифром ГЧ-46

(Селептин), который и прошел дополнительные испытания в рамках большой программы для подготовки к клиническому изучению.

Цель работы. Поиск соединений в ряду производных дибензодиазепина, обладающих противосудорожными и психотропными свойствами.

Задачи исследования:

1. Поиск соединений, обладающих психотропными и противосудорожными свойствами в ряду производных дибензодиазепина

2.Изучение связи химического строения с противосудорожным действием в ряду производных дибензодиазепина.

3. Изучение психотропной, противосудорожной активности и острой токсичности Селептина.

4. Изучение фармакокиыетических свойств Селептина.

5. Изучение влияния ангиконвульсантов на противосудорожную активность Селептина.

6. Изучение механизма противосудорожного действия и спектра психотропного действия Селептина.

Научная новизна. Впервые в эксперименте изучены психотропные и проти-восудорожные свойства 21 соединения в ряду производных дибензодиазепина. В ходе исследований выявлены соединения, обладающие психотропной и противосудорожной активностью. Изучение наиболее активного препарата с рабочим шифром ГЧ-46, который в дальнейшем получил название Селептин, позволило выявить определенный спектр психотропной активности и значительное противо-судорожное действие, сравнимое, а в ряде случаев и превосходящее таковое традиционных антиконвульсантов. При этом установлено, что Селептин выгодно отличается и большей широтой фармакологического действия.

Практическая ценность работы. Представленный экспериментальный материал позволил рекомендовать секции психофармакологии фармакологического комитета Селептин как потенциальный аитиэпилептик к клиническим испыта-

ниям. Кроме того остальные соединения этого ряда, проявившие противосудорож-ную и психотропную активность, представляют определенный интерес для дальнейшего их изучения.

Положения выносимые на защиту;

1. Соединения в ряду производных дибензодиазепина представляют интерес в качестве потенциальных противоэпилептических и психотропных средств.

2. Оптимальной для проявления противосудорожного действия является алифатическая цепочка при азоте в 5-м положении гетероцикла, состоящая из 3-х атомов углерода.

3. Химическая модификация нейролептика азалептина привела к резкому изменению профиля препарата.

4. Селептин обладает широким спектром противосудорожной и психотропной активности, а также низкой токсичностью.

5. Селептин является антиэпилептиком с транквилизирущим компонентом без значительного седативного эффекта.

6. В реализации противосудорожного эффекта Селептина принимает участие несколько медиаторных систем, среди которых ведущая роль принадлежит ГАМК-Бензодиазепин рецепторному комплексу.

7. Селептин представляет несомненный интерес для клинической практики при лечении генерализованных и фокальных форм эпилепсии, а также купирования приступов эпилепсии.

Апробация. По основным разделам работы были сделаны сообщения на итоговых научных конференциях Пермской фармацевтической академии в 1991, 1993, и 1994 гг., а также республиканских конференциях: "Естественные науки в решении экологичеких проблем народного хозяйства" Пермь 1991 г., "Нейро-фармакология на рубеже двух тысячелетий" С Петербург 1993 г., "Биологически активные соединешш. Синтез и использование" Пенза 1992 г., "Современные ме-

тоды биологической терапии психических заболеваний" Москва 1994 г., на 2-м и 3-м Российском конгрессе " Человек и лекарство" Москва 1995, 1996 г. и Российском съезде фармакологов Волгоград 1995 г.

Публикации. По материалам диссертации имеется 23 научных публикаций, в том числе 2 авторских свидетельства и один патент.

Объем и структура диссертации

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 5-ти глав, в которых изложены результаты экспериментальных исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Работа изложена на 178 страницах машинописного текста, в которой помещено 49 таблиц и 8 рисунков.

Материал и методы исследования

В качестве объектов исследования было взято 21 соединение в ряду производных дибензодиазепина, а также чистые субстанции препаратов сравнения. Опыты производились на белых беспородных мышах и крысах обоего пола массой 18-22 г. и 200 г. соответственно, а также 4-х собаках.

Распределение животных по видам экспериментам представлено в таблице 1. Изучаемые соединения и препараты вводили внутрь в виде взвеси в 2% крахмальной слизи из расчета 0.1 мл на 10 г массы животного. Тестирование в большинстве случаев производили через 1 час после введения препаратов. Полученные результаты были подвергнуты статистической обработке на компьютере "Электроника ДЗ-28" по соответствующим программам.

Результаты исследований ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОСУДОРОЖНОЙ И ПСИХОТРОПНОЙ АКТИВНОСТИ СОЕДИНЕНИЙ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ ДИБЕНЗОДИАЗЕПИНА

1. Острая токсичность. Определение острой токсичности соединений дибензо-диазепинового ряда проводили экспресс методом на белых беспородных мышах

Таблица 1.

Распределение животных по видам эксперимента

№№ Модель исследования Изучаемые параметры Вид животных и

их количество

1. Тест МЭИ! ПСА, привыкание, длительность дей- Мыши 1230

ствия, перекрестная устойчивость и

влияние антиконвульсантов на ука-

занные параметры

2. Коразоловый тест ПСА (В/Б, В/В титрование), длитель- Мыши 354

ность действия и влияние антикон-

вульсантов па указанные параметры.

3. Камфарный тест ПСА Мыши 20

4. Тиосемикарбазидный ПСА Мыши 36

5. тест Стрихниновый тест ПСА (В/Б, В/В) Мыши - 46

6. Биккулиновый тест ПСА (В/Б) Мыши - 48

Крысы 35

7. Коразоловый юшдлинг ПСА Мыши - 30

8. 5 - ОТФ тест Психотропная активность Мыши - 36

9. Стереотипия апоморфнн. Психотропная активность Мьппи- 12

10. Стереотипия фенамин. Психотропная активность Мыши - 15

11. Тест "Отчаяния" Психотропная активность Мыши - 30

12. Ареколиновый тест Психотропная активность Мьпли - 20

13. Тремориновый тест Психотропная активность Мыши - 54

14. Тест "Открытое поле" Психотропная активность Мыши - 100

15. Тест Ургти Психотропная активность Крысы - 20

16. Гексеналовый сон Психотропная активность Мыши - 32

17. "Каталепсия" Психотропная активность Крысы - 35

18. Никотиновый тест Психотропная активность, (В/Б, В/В) Мыши- 50

19. Гипертермия фенамин. Психотропная активность Мыши- 18

20. Тест вращающийся стер- Психотропная активность Мыши - 30

21. Тест "Горячая пластинка Анальгетическая активность Мыши - 120

22. Тест "Уксусные корчи" Анальготическая активность Мыши - 42

23. "Давление на хвост" Анальгетическая активность Крысы - 30

24. Электроболевой тест Анальгетическая активность Крысы 20

25. Метод Борна Антиагрегантная активность Собаки -1

26. Метод Першина Острая токсичность Мыши - 330

Крысы - 170

27. Фармакокинетика Крысы - 79

Собаки -3

ИТОГО: Мыши - 2304 Крысы - 883 Собаки - 4

[В.Б. Прозоровский, М.П. Прозоровская, В.М. Демченко, 1978]. Исключение составило соединение ГЧ--46, определение ЛД50 которого проводили по методу Литчфильда и Уилкоксона [М.Л. Беленький, 1963]. Изучение острой токсичности производных дибензодиазепина, результаты которого представлены в таблице 2., выявило относительную безопасность данного класса соединений. Для большинства исследованных веществ были установлены ЛД50. Однако для пяти соединений, в связи с их малой токсичностью, точные величины ЛД50 установить не удалось. Из приведенных в таблице данных видно, что для многих веществ сред-нелетальные дозы превышают 1 ООО мг/кг. При определении класса опасности по ГОСТ 12.1.0007-76 было установлено, что соединение ГЧ-67 относится ко 2-му классу - высокоопасным веществам, семнадцать соединений к относятся к 3-му классу - умеренно опасным, и два соединения ГЧ-63 и ГЧ-64 относятся к 4-му классу - малоопасным веществам.

Зависимость токсичности соединений от их химического строения в представленных группах прослеживается слабо. Так все ацильные производные аминоазалеп-тина, имеющие алкильные ароматические и гетероциклические радикалы в своей структуре проявили примерно одинаковые токсические свойства. В группе производных алкенаминоазалептина соединения проявили более высокую токсичность по сравнению с предыдущими группами. Здесь более четко проявилась зависимость уменьшения токсичности веществ в связи с удлинением и разветвлением радикала

2. Противосудорожная активность. Изучение противосудорожной активности изучаемых соединений дибензодиазепинового ряда определяли на белых мышах при оральном введении по известным скрининговым методикам электрошоковых и коразоловых судорог. Судорожную реакцию у животных вызывали в параметрах, предложенных К.С. Раевским, 1961.

Таблица 2.

Острая токсичность производных дибензодиазепинана белых мышах при

оральном введении

<2 Шифр соединения Формула радикала R лд50, Класс

i/n (l мг/кг опасности

гч-46 -nh-co-ch, 980 3

гч-60 -nh-co-ch, j (803-1195) 4600 (3300-6300) 3

гч-63 -nh-co-h 5640 (4900-6400) 4

гч-65 -nh-co-chj 730 (530-1000) 3

ст-180 -nh-co-(cha)2 -nh-(ch2)2-oh >4000 3

гч-88-19 -nh-cckchj)2-n4c2h5)2 1030 (840-1260) 3

ст-194 -nh-c04chx)j -nh-(chj)i-nc4hio 3250 (2800-3800) 3

!. гч-68 -nh-co-chro >3000 3

1. ст-164 -nh-co-qh4-ci >4000 3

0. гч-88-16 -ш-ссксн2)з -n-onh 2180 (1600-3000) 3

i. гч-88-18 -nh-co(chi)2-n<=>n-chj 1410 (1100-1700) 3

2. гч-62 -nh-co-ch(ch3 ,aí2-non-ch3 3870 (3200-4500) 3

3. гч-64 -nh-cckchj)2 -n<on-ch4c6h5)2 >6000 4

4. гч-88-31 -nh-co-ch2-noo >4000 3

5. гч-88-17 -nh-cckch2)2-noo 1120 (980-1270) 3

6. гч-89-01 -nh-co-(ch2)3-noo 3250 (2800-3800) 3

7. гч-61 -NH-CO-CH(CH3}-CHj -noo 2240 (1700-2900) 3

.8. гч-67 -nch-ch, 141 (110-170) 2

i 9. гч-69 -nch-ch2-ch3 515 (362-962) 3

!0. ст-173 -NC-(chj)2 870 (630-1200) 3

11. гч-66 -nc(ch3)-chrchj 1410 (1100-1700) 3

Результаты опытов по определению противосудорожной активности соединений производных дибензодиазепина по обеим методикам представлены в таблице 3. Для соединений, оказавших выраженный эффект приведены показатели ЕД50, для соединений, не проявивших активности по данным тестам или оказавших слабое действие, результаты приведены в альтернативной форме. Из приведенных в таблице данных ввдно, что ю всех обследованных соединений активными по тесту максимального электрошока оказалось только 5 соединений (ГЧ-46, ГЧ-63 ГЧ-66 и ГЧ-88-17), ЕД50 которых в 6-50 раз меньше чем показатели их ЛД50. По коразоловому тесту выраженную противосудорожную активность проявило только одно соединение (ГЧ-46), для которого была установлена зависимость доза-эффект.

Таблица 3.

Противосудорожная активность соединений по электрошоковому (МЭШ) и

коразоловому тестам на белых мышах при оральном введении

№ п/п Шифр соединения Тест МЭШ Коразоловый тест

Доза в мг/кг 1/10 лдьп эффект едзо Доза в мг/кг 1/10лд«, эффект ЕДло

1. гч-46 - 30,0 - 30

2. гч-60 - 153,5 460,0

3. гч-63 - 106,9 564,0 -

4. гч-65 73,0 0/6 73,0 -

5. ст-180 100,0 100,0 -

6. гч-88-19 100,0 100,0 -

7. ст-194 325,0 325,0 -

8. гч-68 300,0 300,0 -

9. ст-164 400,0 400,0 -

10. гч-88-16 218,0 218,0 -

11. гч-88-18 50; 300 141,0 -

12. гч-62 387,0 387,0 -

13. гч-64 300,0 300,0 -

14. гч-88-31 400,0 400,0 -

15. гч-88-17 - 186,0 112,0 -

16. гч-89-01 325,0 0/6 325,0 -

17. гч-61 224,0 - 224,0 -

18. гч-67 14,1 - 14,1 -

19. гч-69 51,5 51,5 -

20. ст-173 87,0 - 87,0 -

21. гч-66 - 85,0 - 130.2

3. Изучение влияния производных днбензодназепина на двигательную активность и ориентировочную реакцию по тесту "открытое поле"

В нашем случае был использован метод доски с отверстиями [J.R. Boisser, Р. Simon, J.M. Zwölf). Тестирование проводили через 1 час после орального введения соединений в дозе 1/10 от ЛД50.

Результаты статистической обработки препаратов по данным видам активности представлены в таблице 4.

Таблица4

Влияние производных дибензодиазешша на двигательную активность и ориентировочную реакцию по тесту" Открытое поле" _

№ Шифр соединения Доза в мг/кг Количество Количество обсле

п/п пройденных полей дованных отвер-

стий

1. Контроль - 32,0+6,4 36,5+4,3

2. ГЧ-88-16 128,0 24,8+6,6 26,7+6,8

3. ГЧ-88-17 112,0 9,0+3,8 13,8+6,8 *

4. ГЧ-88-18 141,0 12,3+6,8 17,0+7,3 *

5. ГЧ-88-19 103,0 15,1+3,6 18,9+4,4 *

6. ГЧ-88-Э1 300,0 12,3+3,9 * 24,2+7,8

7. Контроль - 21,9+2,5 22,8+2,6

8. СТ-164 400,0 28,6+3,6 20,3+2,3

9. СТ-173 87,0 25,0+3,2 12,8+3,0 *

10. СТ-1 ЯП 400,0 33,9+2,4 * 28,9+3,2 *

11. Оу ГЧ-89-01 325,0 31,9+2,8 * 29,5+1,5 *

12. Контроль - 41,9+8,7 32,5+3,5

13. ГЧ-60 460,0 11,3+0,8* 5,6+0,4 *

14. ГЧ-61 • 224,0 39,2+1,63 16,2+0,9 *

15. ГЧ-62 387,0 45,9+9,9 24,9+5,6 ♦

16. ГЧ-63 564,0 11,5+0,8 * 5,5+0,4 *

17. ГЧ-64 600,0 41,0+4,7 22,8+4,2 *

18. СТ-194 325,0 40,4+10,1 23,3+5,1 *

19. Контроль - 30,0+12,0 28,7+8,8

20. ГЧ-65 73,0 22,4+7,8 29,7+7,3

21. ГЧ-66 141,0 18,5+6,9 23,4+6,9

22. ГЧ-67 14,1 22,5+8,7 26,4+5,9

23. ГЧ-68 300,0 39,5+8,6 33,0+5,9

24. ГЧ-69 51,5 36,4+2,6 32,5+2,0

25. Контроль - 37,0+2,6 28,7+8,8

26. ГЧ-46 200,0 30,2+14,0 24,6+10,7

27. Контроль - 32,0+6,4 34,5+4,2

28. ГЧ-46 100,0 29,5+9,7 26,8+4,3*

Примечание. * - Достоверно при Р=0.05

Обобщая результаты исследований по методике "открытого поля", которая позволяет получить представление об общей направленности действия веществ на центральную нервную систему, можно выделить 11 веществ, которые оказывают в большей или меньшей степени угнетающее влияние. Это ГЧ-60, ГЧ-63, СТ-180, СТ-194, ГЧ-62, ГЧ-64, ГЧ-88-17, ГЧ-61, СТ-173, ГЧ-46. Два соединения СТ-180 и ГЧ-89-01 оказывают спшулирующее действие на функциональное состояние ЦНС, остальные соединения не оказывали существешюго влияния на показатели двигательной активности и ориентировочной реакции.

4. Влияние соединений дибензодиазепинового ряда на длительность апомор-финовой стереотипии

Критерием оценки эффективности являлась длительность стереотипии для каждого животного [А. С. Закс, Т.А. Кашгтоненко, M.J1. Суслова, 1982].

В ходе проведенных исследований, было установлено, что 11 соединений (ГЧ-46,ГЧ-63, СТ-180, ГЧ-88-18, ГЧ- 62, ГЧ-88-31, ГЧ-88-17,ГЧ-89-01, ГЧ-61, СТ-173, ГЧ-66) достоверно увеличивают продолжительность апоморфиновой стереотипии, другие 10 соединений не оказали существенного эффекта . Таким образом, соединения увеличивающие время апоморфиновой стереотипии не проявляют ан-тидофаминергического действия, а наоборот но каким-то механизмам способствуют усилению дофаминергических воздействий.

СВЯЗЬ ХИМИЧЕСКОГО СТРОЕНИЯ С ИРОТ11ВОСУДОРОЖИЫМ ДЕЙСТВИЕМ В РЯДУ ПРОИЗВОДНЫХ ДИБЕНЗОДИАЗЕПННА

Самый поверхностный анализ полученных результатов позволяет увидеть некоторую закономерность. А именно: противосудорожную активность в той или иной мере проявили только те соединения, которые при аминогруппе имели последовательную цепочку, состоящую не более чем in 3-х атомов углерода. Исклю-

ченнем в этом плане явился лишь препарат ГЧ-65, в структуре которого имеется четвертичный атом азота. По-видимому с этой особенностью связана низкая биологическая активность препарата при оральном введешш. Известно, что вещества такого типа ( полярные ) плохо проходят через мембраны клеток первого типа Отсутствие эффектов ГЧ-65 по другим методикам подтверждает данный вывод. Основным отличием соединений, не оказавитх противосудорожного действия, была значительная длина радикала при азоте в пятом положении гетерощпсла.

Даже небольшое количество обследованных соединений дало возможность определить перспективу поиска противосудорожных средств в данном раду. Для этой цели был использован компьютерный анализ по методу молекулярных орби-талей как линейной комб1шации атомных орбит в П-электронном приближении Хюккеля [Б. Пюльман, А. Пюльман, 1965]. Для некоторых соединений данного ряда, позволяющих примешггь данный метод было рассчитано суммарное влияние заместителей на проявлешгс протнвосудорожной активности.

Так увеличение или уменьшение длины алифатической цепочки радикала при аминогруппе более чем на три углеродных атома приводило к 31ШЧительному ослаблению противосудорожного действия, что удовлетворительно коррелировало с ослаблением реакционной активности молекулы. Препарат ГЧ-63 имел практически одинаковые с ГЧ-46 квантовые показатели, однако его противосудорожная активность оказалась ниже. Возможно это объясняется более низкой липофильно-стыо ГЧ-63, от которой зависит биодоступность веществ. Устранение хлора из ге-тероникла значительно снижало реакциошгую способность и липофильность молекулы и соответствешю приводило к резкому падению протнвосудорожной активности (ГЧ-60, ЕД50-153 мг/кг). Перемещение хлора по другим участкам бензольного кольца в гипотетических соединениях не приводило к значительным изменениям реакционной способности молекулы, что свидетельствует о необходимости присутствия хлора в гетероцикле для пр0явле1шя протнвосудорожной активности. Если исходить из того, что производные днбензодиазепина являются

веществами рецепторного типа действия, становится понятным отсутствие у соединений с "длинным радикалом", который не позволяет молекуле пространственно вписываться в структуру рецептора, противосудорожного эффекта

Таким образом, проведенный анализ дает некоторое основание считать, что соединение ГЧ-46 (Селептин) является оптимальным в химическом отношении препаратом для проявлении противосудорожных свойств в данном ряду и паличие наиболее высокой противосудорожной активности является скорее закономерным результатом.

ИЗУЧЕНИЕ ПРОТИВОСУДОРОЖНОЙ АКТИВНОСТИ СЕЛЕПТИНА

Дополнительное изучение острой токсичности Селеппша на крысах показало, что величины ЛД$о при оральном и виутрибрюшинном введении не отличались существенно между собой (Таблица 5.). Параметры токсичности в этом случае позволяют отнести Селептин по ГОСТ 12.1.007-76 соответственно к умеренно опасным веществам ( 3-й класс ), что фактически подтверждает полученные ранее результаты по токсичности на мышах.

Более подробная оценка противосудорожной активности Селеппша потребовала использования "батареи" тестов.

Тест максимального электрошока. Изучение противосудорожной активности Селеппша на белых крысах подтвердило результаты, установленные ранее на мышах (см. табл.3). Из таблицы 5 видно, что Селептин сравним по активности с фенобарбиталом и превосходит вальпроат натрия, превышая всех по степени безопасности

Коразоловый тест. Изучение противосудорожной активности Селеппша по коразоловому тесту на крысах также подтвердило результаты его изучения на мышах. Зависимость доза-эффект на этот раз была более четкой, что позволило рассчитать ЕД50 препарата, которая составила 31.7мг.кг в отношении тонико-экстензорной фазы припадка, при минимальном влиянии на клоническую фазу.

Таблица 5.

Острая токсичность и противосудорожная активность Селептина и препаратов сравнения на белых крысах по тесту максимального электрошока

Наименование препарата Острая токсичность ЕД50 мг/кг внутрь УШФД

т0 в мк/кг

внутрибрюшинно внутрь

Селептин 3160,8 2932,7 18,4 159,0

2424,9-4120,0 22180,6-3771,0 14,2-23,8

Фенобарбитал 160,0 315,0 34,9 9,0

133,0-192-0 242,3-409,5 3,7-6,5

Вальпроат* 790,0 1530,0 489,5 3,1

натрия 351-728,4

♦ АпйерПер^с Эги^. 1980. УОЬ.27

Бикуллиповый тест. Опыты проводились на мышах и крысах. Контрольным животным опытным путем была подобрана доза бикукуллина (соответственно 5 и 10 мг/кг), которая вызывала наступление тонических судорог у всех животных. Критерием оценки противосудорожного эффекта Селептина явилась защита от тонико-экстензорной фазы припадка. В ходе опытов была установлена хорошая противосудорожная активность, позволившая определить пока-гатели ЕД50 (см. табл. 6).

Тиосемикарбазидный тест. Судороги вызывали подкожным введением гиосемикарбазида мышам в дозе 12 мг/кг [Р.У. Островская, Г.М. Молодавкин, °.П. Порфирьева, 1975]. Селептин вводили внутрь в дозах, дающих эффект защиты от 0 до 100%. Критерием оценки являлась защита животных от тонико-жстензорной фазы припадка Результаты опытов представлены в таблице 6.

Бемегридный тест. В качестве судорожного агента использовали 0.5% раствор бемегрида в ампулах по 10мл. Экспериментальным путем была подобрана юза (40 мг/кг), которая вызывала у 100% животных клонические и тонические ^дороги при внутрибрюшинном введении через короткий латентный период (1-2 иин.). Селептин вводили внутрь в дозах, дающих эффект защиты от 0 до 100%. Результаты этих опытов на мышах представлены в таблице 6.

Стрихшшовый тест.. Опыты проводились в 2-х вариантах. В первом - с; дороги вызывались внутрибрюшинным введением мышам стрихнина нитрата дозе 2мг/кг. Селептин вводили внутрь в дозах 100 и 200 мг/кг. Критерием оценк эффективности препарата являлась защита животных от тонических судорог и п бели. Во втором варианте данной методики использовали внутривенное введени 0.01% раствора нитрата стрихнина с определением судорожного порога, при коте ром наступали тонические судороги и гибель мышей. Селептин в этом случае вве дили внутрь и внутрибргошшшо в дозах 98 и 78 мг /кг соответственно. Результат! этих опытов представлены в таблицах 7 и 8.

Таблица 6

Противосудорожная активность Селепггина по бикукуллиновому,

Судорожный ашгг Доза в мг/кг ЕД50 Селептина УШФД

Бикукуллин 5 61,4 15,9

43,0-86,0

10 - -

Тиосемикарбазид 12 177,5 5,5

132,1-237,2

Бемегрвд 40 39,8 24.6,5

33,1-47,9

Таблица 7.

Противосудорожная активность соединения Селептина при камфорных

Судорожный агент доза, путь введения Доза СЛ в мг/кг Защита от судорог в % Защита от гибели в %

Контроль - - 0

Стрихнин 2мг/кг, в/б 100 0 0

200 0 34

Камфара 1000 мг/кг,п/к 100, 0 40

200 0 60

Никотин 8 мг/кг, в/б 100 0 90

200 0 70

СЛ - Селептин

Камфорный тест. Судороги вызывали подкожным введетшем камфоры в дозе 1000 мг/кг в виде 10% масляного раствора [В.В. Гацура]. Эта доза вызывала

клонические судорога и 100% гибель мышей. Критерием оценки активности Се-лептина, который вводют! внутрь в дозе 100 и 200 мг/кг, являлась защита животных от судорог и гибели. Результаты этих опытов представлены в таблице 7.

Никотиновый тест. Опыты проводились в двух вариантах. В первом -Никотин вводили внутрибрюшинно в дозе 8 от/кг после орального введения Се-лептина в дозе 100 мг/кг. Критерием оценки действия препарата являлась защита мышей от судорог и гибели. Во втором варианте данной метод!пси Селептин вводили внутрибрюшинно и внутрь в дозах 78 и 98 мг/кг соответственно и через 1 час после этого инъецировали 0.08% раствор никотина. При этом определяли пороговую дозу в мг/кг, которая вызывала клонические судороги и гибель мышей. Результаты этих опытов представлены в таблице 8.

В ходе опытов по изучению противосудорожной активности Селептина по перечисленным методикам была установлена четкая зависимость доза-эффект в опытах по бикукуллнновому, тиосемлкарбазидиому и бемегридному тестам.

Противосудорожный же эффект по стрихшпювым и камфорным судорогам был не столь значительным и касался лишь защиты животных от гибели (табл.8).

Таблица 8.

Влияние соединения Селептина на порог судорог, вызванных коразолом, стрихнином и никотином при внутривенном введешш белым мышам_

Название Селептин в дозе 1/10 Дозы судорожных

судорожного ЛД50 агентов в мг/кг

агента

Доза мг/кг Путь введения клонические гибель мышей

судороги

Коразол Контроль Контроль 43,99+7,53 73,11±16,7

Коразол 98 п/о 53,16+9,05 127,08+31,1 *

Коразол 78 в/б 70,93+40,0 177,52+68,2 *

Стрихнин Контроль Контроль 1,0+0,08 1,33+0,08

Стрихнин 98 п/о 1,0+0,098 1,72+0,13 *

Стрихнин 78 в/б 1,0+0,09 1,68+0,16*

Никотин Контроль Контроль 1,05+0,09 1,43+0,28

Никотин 98 п/о 1,06+0,16 2,51+0,22*

Никотин 78 в/б 0.8+0,076 2.15+0,23 *

Примечание. * Достоверно по сравнению с контролем при Р <0.05

Коразоловый киндлинг. Результаты изучения противосудорожной активно ста Селептина в условиях острого опыта потребовали аналогичных испытаний т фойе длительного введения препарата. Адекватной методикой в этом плане явля ется коразоловый "киндлинг", который во многих отношениях стоит ближе к клиническим вариантам малых форм эпилепсии. В нашем случае была использоваш методика, разработанная А. А. Шавдрой и др., (1983)

Опыты были проведены на 3-х группах по 30 животных в каждой. На протяжении 22-х дней двум группам мышей вводили внутрь Селептин и препарат сравнения фенобарбитал в дозах 6 мг/кг. Третьей группе, которая служила контролем, в течение , указанного времени внутрь вводили 2% крахмальную слизь. Противосудорожная активность Селептина и фенобарбитала оценивалась по длительности латентного периода наступления первых судорог в днях и количеству мышей, у которых возникали судороги различной интенсивности, а также по общему количеству погибших животных на конец опыта.

В ходе исследований противосудорожного действия Селептина на модели коразолового киндлинга, было установлено, что в группе животных, которым вводили Селептин, клонические судороги развивались лишь на 4-й день. В контрольной группе и группе, которой вводили фенобарбитал латентный период наступления судорог составил 2 дня. В дальнейшем число животных с судорогами и их гибель нарастали во всех трех группах. Однако динамика этого процесса и общее количество погибших животных в опытах с Селептином и фенобарбиталом существенно отличались от контроля. На основании этих данных можно констатировать достаточно высокую противосудорожную активность Селептина, сравнимую с таковой фенобарбитала. В отличие от острых опытов, Селептин существенно влиял также и на клонический компонент судорог.

Привыкание к противосудорожному действию Селептина. Изучение привыкания к противосудорожному действию Селептина проводили по коразоло-вому тесту и тесту максимального электрошока.

Тест максимального электрошока Изучение привыкания к противосудорожному действию Селептина и препарата сравнения - фенобарбитала проводили на мышах обоего пола Селептин и фенобарбитал вводили внутрь в дозе 60 мг/кг. Тестирование проводили каждые 5 дней с 1-го по 25-й включительно. При этом учитывали количество животных, у которых отсутствовала тоническая фаза припадка.

В ходе этих экспериментов было установлено, что привыкание к противосудорожному действию Селептина развивалось начиная с 15-го дня эксперимента и было сопоставимо с таковым фенобарбитала, который является классическим индуктором метаболизма (рис. 1.).

Коразловый тест . Груше из 20-ти крыс ежедневно вводили внутрь Селептин в дозе 60 мг/кг. Тестирование проводили каждые 5 дней с 1-го по 20-й включительно через 1 час после введения Селептина Коразол вводили внутрибрюшин-но в дозе 100 мг/кг через 1 час до введения препарата Критерием оценки было отсутствие тонических судорог. Результаты этих опытов представлены на рисунке 2., из которого видно, что по данному тесту процент животных, защитившихся от судорог на протяжении всего времени эксперимента оставался примерно одним и тем же.

Отсутствие корреляции результатов опытов по указанным методикам возможно также связано и с выбором животных. Так известно, что крысы физиологически существенно отличаются от других грызунов. Например, у них имеются существенные особенности в образовании желчи, обмене билирубина и желчных кислот [И.П. Западнюк, Е.А. Захария, 1983 ]. Это может значительно повлиять на процессы элиминации противосудорожных средств. Кроме того, характер привыкания и его выраженность существенно зависит от методики вызывания судорож-

ной реакции. Например, к транквилизаторам бензодиазепинового ряда привыка ние развивается при тестировании по методике электрических но не коразоловы: судорог [ А. БЬешег е1 а1, 1984]. Изучение нами привыкания к прсггивосудорожно му действию Селептина на крысах по коразоловому тесту подтвердили даннук посылку (рис. 1 и 2).

Влияние подпороговых доз антиконвульсантов на привыкание крыс * противосудорожному действию Селептина. Опыты проводились на 5-ти группах животных по 10 в каждой. Первой группе в течение 25-ти дней внутрь вводили Селептин в дозе 40 мг/кг. Остальным группам в течение указанного времени вводили внутрь дифенин, фенобарбитал или карбамазепин и диазепам (24, 14, 9 и 0.3 мг/кг соответственно ) в сочетании с оральным введением Селептина в дозе 40 мг/кг. Тестирование Селептина проводили по тесту максимального электрошока с 1-го по 15-й день опыта через каждые 5 дней, а его комбинаций с антиконвульсан-тами проводили на 1-й, 10-й и 15-й дни эксперимента

%

15

20

25

1 10

Дни тестирования [—.

Рис. 1. Развитие привыкания к противосудорожной активности Селептина! |и Фенобарбитала | | по тесту максимального электрошока

В результате этих опытов было установлено, что применение одного Селептина приводило к снижению его противосудорожной активности к 10 и 15 дню на

20%. В комбинациях Селептина со всеми антиконвульсантами его противосудо-рожная активность сохранялась в течение указанного срока на уровне 100%. Из чего следует, что использование совместно с Селептином антиконвульсантов в подиороговых дозах не приводило к развитию привыкания. Это явление возможно связано со значительным усилением противосудорожного действия Селептина под влиянием антиконвульсантов что и приводило к перекрыванию эффекта привыкания.

%

90 ---

50

15 10 15 20

Дни наблюдения

Рис. 2. Привыкание к противосудорожному действию Селептина по коразоловому тесту (крысы).

Примечание. На оси ординат представлен процент животных у которых отсутствовали тонические судороги.

Изучение перекрестной устойчивости Селептина и антиконвульсантов (фенобарбитал, дифенин) проводили на 7-ми группах мышей по 20 животных в каждой. Первым трем группам мышей на протяжении 15-дней вводили внутрь Се-лептин, фенобарбитал, и дифешш в дозах 60, 40 и 40 мг/кг. Тестирование по тесту максимального электрошока проводили на 16-й день через 1 час после введения препаратов. Фиксировали количество мышей, у которых отсутствовали тонические судороги. Остальным группам в течение 15-ти дней внутрь вводили: 4-й группе Селепгин в дозе 60 мг/кг и на 16-й дет только фенобарбитал в дозе 40 мг/кг; 5-й группе также в течение указанного времени вводили Селептин и на 16-й

день тестирования вводили дифенин в дозе 40мг/кг; 6-й и 7-й группе аналогичны образом в течение 15-ти дней вводили фенобарбитал и дифенин, а на 16-й де! тестирования только Селептин.

В ходе экспериментов, представленных на рисунке 3, было установлено, Ч1 перекрестная устойчивость развивается к Селептину на фоне фенобарбитала, фенобарбиталу на фоне Селептина и к Селептину на фоне дифенина. Привыкаш к противосудорожной активности дифенина на фоне длительного применения С< лептина не наблюдалось, что может свидетельствовать об одностороннем метаб( литическом антагонизме этих препаратов.

Изучение продолжительности действия Селептина по тесту МЭШ

Данный показатель является важной характеристикой препаратов, так ка

определяет в дальнейшем ориентир по частоте приема в клинических условиях. %

100 - -

50

1 2 3 4 5 6 7

Рис. 3. Перекрестная устойчивость Селептина с фенобарбиталом и дифенином по

тесту МЭШ.

Примечание. 1-группа - Селептин, 2-я группа- фенобарбитал, 3-я группа - дифенин, 4-я группа - Селептин на фоне фенобарбитала, 5-я группа - фенобарбитал на фоне Селептина, 6-я группа - Селептин на фоне дифенина, 7-я группа - дифенин на

фоне Селептина. На оси ординат отмечен % животных, у которых отсутствовали судороги.

Изучение продолжительности действия Селептина проводили на мышах обоего пола. Препарат вводили внутрь и внутрибрюшинно в дозе 60 мг/кг (ЕДзд). В том и другом случае было использовано две группы по 20 животных. Тестирование проводили с интервалом в 1 час по методике максимального электрошока На основании полученных данных по защите животных от судорог в % рассчитывали среднеэффективное время в часах (ЕТ50).

Кроме того, по тесту максимального электрошока изучали влияние подпороговых доз (ЕД50) антиконвульсантов на продолжительность противосудорожного действия Селептина при оральном введении белым крысам в дозе 40 мг/кг. Селептин и антиконвульсанты вводили одновременно за один час до тестирования.

Полученные данные свидетельствуют о достаточно продолжительном действии Селептина, которое по показателю ЕТ50 при внутрибрюшинном введении на мышах превосходит многие противоэпилептические средства Сравнительная характеристика препаратов по показателям ЕТзд представлена в таблице 9.

Таблица 9.

Средняя продолжительность противосудорожного действия Селептина и других противоэпилептических средств при внутрибрюшинном введении белым мышам

Наименование препарата ЕДоо ЕТ50 час

мг/кг

Селептин п/о 60 4,0(2,8-5,7)

Селептин в/б 40 6,6 (4,0-10,8)

Фенобарбитал 50 7,7(6,5-9,3)

Гексамидин 140 5,4 (4,8-5,9)

Карбамазепин 60 1,8(1,6-2,1)

Диазепам 50 1,6(1,4-1,9)

Примечание. ЕТ50 препаратов сравнения даны по Германе С.К. 1978г.

Из таблицы видно, что Селептин по продолжительности действия по данному тесту незначительно уступает только фенобарбиталу, сравним с гексамидином

и значительно превосходит остальные препараты более чем в два раза. Меньш продолжительность действия Селептина при оральном введении закономерна, т; как при этом способе введения имеет большое значение пресистемный метаболиэ препарата, приводящий к ускорению его элиминации. Данный вывод вполне о гласуется с меньшим противосудорожным эффектом Селептина при внутрибри шинном введении.

Влияние подпороговых доз антиконвульсантов на продолжителъност действия Селептина

В результате проведенного эксперимента было установлено, что стахистич* ски достоверное увеличение ЕТ50 по сравнению с Селептином в чистом виде не блюдалось лишь на фоне ЕДз фенобарбитала. В остальных комбинациях гамет ния ЕТ$о Селептина не произошло, что очевидно объясняется более короткой про должительяостью действия указанных антиконвульсанов по сравнению с таково) Селептина. Значительное увеличение показателя ЕТ5о Селептина при совместно» применении его с фенобарбиталом кроме того связано с потенцирующим влияни ем фенобарбитала на противосудорожную активность Селептина в остром опыте чего не наблюдалось в других комбинациях.

Изменение ЕДы Селептина и антиконаульсантов при совместном применении на мышах тесту максимального злектрошока и коразоловому тесту.

Изучение комбинаций препаратов проводили в изоэффективных дозах с вычислением ЕД5о. Комбинации препаратов вводили внутрь за 1 час до тестирования по обеим методикам. В ходе опытов, результаты которых представлены в таблице 10 и И, было установлено взаимное усиление противосудорожной активности препаратов по сравнению с раздельным их применением в комбинациях Селептина с дифенином, фенобарбиталом, седуксеном по тесту максимального электрошока и седуксеном и фенобарбиталом по коразоловому тесту.

Таблица 10.

Изменение ЕД® Селептина и антиконвульсантов при совместном применении на

Состав комбинаций ЕД50 препаратов в мг/кг при

раздельном применении в комбинации

1. Селептин + днфенин 2. Селептин + фенобарбитал 3. Селептин + седуксен 4. Селептин + конвулекс 30,0 (24,3-36,9) 50,0(48,0-75,0) 30,0 (24,3-36,9) 32,0 (27,1-37,7) 30,0 (24,3-36,9) 23,0(18,4-28,5) 30,0 (24,3-36,9) 272,0 (247-338) 17,1(13,8-21,3)* 10,2 (8,2-12,6) 16,5(14,0-14,9)* 17,5 (14,9-20,7) 7,4(5,6-9,9)* 4,9(3,7-6,6) 21,0(16,2-27,3) 466,6 (359,7-605,3)

: - АпйерИер^е Оп^, 1980. уо1. 27

Влияние подпороговых доз ЕД5 фенобарбитала, дифенина, карбамазепина и диазепама на ПСА Селептина по тесту МЭШ. Были определены величины ЕД50 Селептина в комбинации с указанными препаратами. Тестирование проводили через 1 час после введения комбинаций Селептина с традиционными антиконвуль-сантами. Селептин и антиконвульсанты вводили внутрь в дозах, дающих эффект от 0 до 100%. Результаты этих исследований представлены в таблице 12.

Таблица 11.

Противосудорожная активность Селептина и антиконвульсантов при

Состав комбинаций ЕД50 препаратов в мг/кг при

раздельном применении в комбинации

1. Селептин + 30 27,9 (20,7-42,8)

дифенин 44,6 (37,7-52,8) 44,1 (37,7-63,4)

2. Селептин + 30 12,9 (8,4-19,8) *

фенобарбитал 34,0 (29,0-39,0) 7,6 (4,7-12,8)

3. Селептин + 30 14,7(11,8-18,8)*

диазепам 0,32 (0,22-0,42) 0,16(0,13-0,20)

4. Селептин + 30 15,5(11,5-21,2)

карбамазегаш 39,5 (28,7-54,4) 20,4(14,5-28,6)

5. Селептин + 30,0 19,5(15,9-23,9)

конвулекс 388 (349-439) 253,0 (206.5-310,1)

Из представленных в таблице 12 данных видно, что известные антиконвуль санты даже в малых подпороговых дозах значительно в 2-5 раз усиливают ПС/ Селептина. Исключение в этом случае составила лишь комбинация Селепгпша < дифенином, где не наблюдалось статистически достоверного снижения ЕД50 Селептина.

Таблица 12.

Влияние подпороговых доз антиконвульсантов на величины ЕДзо Селептина по

тесту МЭШ у крыс.

Препараты и комбинации Путь введения ЕДз антикон- ЕДзо Селептина в

вульсантов мг/кг

Селептин внутрь - 24,9 (18,6-33,3)

Селептин + фенобарбитал внутрь 14,0 4,8 (3,2-7,2)*

Селептин +дифении внутрь 24,0 18,6(12,8-27,1)

Селептин +карбамазепин внутрь 9,0 10,1 (6,9-14,7)*

Селептин + даазепам внутрь 5,0 14,0(10,8-18,1)*

* Отличие достоверно по сравнению с раздельным применением Селептина при

Р=0.05

Влияние вегетотропных средств на противосудорожную активность Селептина по тесту максимального электрошока. При изучении противосудо-рожной активности Селептина его вводили внутрь в дозах дающих эффект о 0 до 100%. Адренергические средства вводили внугрибрюшшшо одновременно с Се-легтшном: анаприлин (40мг/кг) пирроксан (15 мг/кг) алупент (20мг/кг), фетанол (5 мг/кг) [А.А. Дутов, В.Н. Карпов, Б.А. Толпышев, В.Н. Гладун. 1987]. Противосудорожную активность Селептина при раздельном и совместном применении с ад-ренергическнми средствами изучали по тесту максимального электрошока. Тестирование проводили через 1 час после введения препаратов.

Изучение влияния анаприлина и пирроксана (адреноблокаторы), а также алупента и фетанола (адреномиметики) на противосудорожную активность Селептина показало, что бета-адреноблокатор анаприлин значительно (в 6 раз) снижал ЕД50 Селептина. Другие препараты не приводили к достоверному изменению ЕДзо

Селепгина по данному тесту. Не исключено, что определенную роль в усилении противосудорожного действия Селептина играет седативный эффект анаприлина и его способность блокировать повышение уровня цАМФ в ЦНС, с которым тесно связана эпилептическая активность [ Д.А. Феррендили, P.A. Гросс, Д.А. Киншер, Е.Х. Рубин, 1982 ].

ИЗУЧЕНИЕ ПСИХОТРОПНЫХ СВОЙСТВ СЕЛЕПТИНА

Изучение катаяептогенного действия Селептина. Каталепсия является одним из наиболее известных внешних проявлений нейролептического эффекта Селегггин вводили внутрь крысам в дозе 50, 100, 200, 300, 400, и 500 мг/кг. Через один час крыс помещали на две параллельные пластинки (с расстоянием между ними в 10 см.) так, чтобы они могли удержаться на них передними и задними лапами. Наличие каталепсии отмечали в тех случаях , когда животные оставались на пластинках в течение 30-ти секунд. Наблюдение за животными вели в течение 6-ти часов.

Изучение каталептогенных свойств Селегггин на крысах при оральном введении в дозе 50 и 100 мг/кг показало полное отсутствие таковых свойств. В качестве препаратов сравнения были использован ближайший химический аналог препарата Селепгина азалептин, а также аминазин и гало пер идол. Азалептин также не вызывал значительной каталепсии и в этом смысле значительно отличался от классических нейролептиков фенотиазинового и бутирофенонового ряда. Однако по истечении трех часов с момента введения азалептина его каталептогенное действие усиливалось.

Влияние Селептина на температуру тела крыс. Опыты проводили на белых крысах обоего пола. Для этой цели использовали 2 группы по 10 животных в каждой. Селептин вводили внутрь в дозах 100 и 200 мг/кг за 1 час до тестирования. Контрольным животным внутрь вводили 2% крахмальную слизь. Измерение ректальной температуры крыс производили до введения препаратов и через 1 час в течение 5 часов с интервалом в 1 час.

В ходе опытов было установлено, что под влиянием Селептина на протяжении всего наблюдаемого времени происходило некоторое снижение ректальной температуры крыс, однако оно не было статистически достоверным. Причем эта тенденция наблюдалась только в течение первых 3-х часов. В дальнейшем происходило повышение ректальной температуры до нормальной.

Влияние Селептина на течение апоморфиновой и феналшновой стереотипии

Тест апоморфиновой стереотипии. Опытные и контрольные исследования проводились последовательно на каждом данном животном. Для этого сначала была сформирована группа га 6-ти животных с четко выраженной стереотипией. При этом апоморфин вводился внутрибрюпшнно в дозе 4 мг/кг. Через 4 дня за 1 час до инъекции той же дозы апоморфина мышам внутрь вводили Селептин в дозе 100мг/кг. Для каждого животного регистрировали начало апоморфиновой стереотипии и ее длительность, (см. таблицу 13).

Тест фенаминовой стереотипии. Изучение влияния Селептина на течение фенаминовой стереотипии проводилось на двух группах животных ( опытной и контрольной ). Селептин вводили внутрь в дозе 100мг/кг за 1час до подкожной инъекции фенамина в дозе 18 мг/кг. При этом учитывалась общая продолжительность стереотипии в минутах, (см. табл. 14).

Результаты опытов, представленные в таблице 13 и 14 свидетельствуют о том, что Селептин достоверно увеличивал продолжительность апоморфиновой стереотипии и уменьшал продолжительность фенаминовой стереотипии.

Таблица 13.

Влияние Селептина на течение апоморфиновой стереотипии

Препарат Доза внутрь в мг/кг Продолжительность стереотипии в мин.

Контроль -

Апоморфин 35,5+1,4

Селептин 100,0 43,8+1,8 *

Азалептин 15,2 21,0+1,6*

* достоверно по сравнению с контролем при Р=0.05

Таблица 14

Влияние Селептина на течение фенаминовой стереотипии

Препарат Доза внутрь в мг/кг Продолжительность стереотипии в

мин.

Контроль (фенамин)

18 мг/кг п/к > 18,8+6,7

Селептин 100,0 12,0+2,9 *

* Достоверно по сравнению с контролем при Р-0.05

Изучение влияния Селептина на изменение температуры тела белых мышей, вызываемое апоморфином и фенамином. Тест "фенаминовая гипертермия". Опьггы проводили на 3-х группах мышей. 1-й группе животных, которая служила контролем, вводили внутрь 2% крахмальную слизь. 2-й группе вводили подкожно фенамин в дозе 5 мг/кг, 3-й группе вводили внутрь Селептин в дозе 100 мг/кг и через 1 час проводили инъекцию фенамина [М.Д. Машковский, Н.И. Андреева, А.И. Полежаева, 1983]. Измерение ректальной температуры мышей проводили через 0.5, 1,2, и 3 часа с помощью элекгротермометра.

Тест "апоморфиновая гипотермия". Опыты проводили на 2-х группах мышей. 1-й группе животных подкожно вводили апоморфин в дозе 8 мг/кг. 2-й группе внутрь вводили Селептин в дозе 100 мг/кг и через 1 час проводили подкожную инъекцию апоморфина. Контрольная группа животных была общей для обоих тестов.

В ходе экспериментов, было установлено,что Селептин усиливает апомор-финовую гипотермию и ослабляет фенаминовую гипертермию.

Изучение влияния Селептина на двигательную активность белых мышей, стимулированную фенамином по тесту "Открытое поле". Влияние Селептина на двигательную активность, усиленную фенамином изучали на трех группах животных. Первая группа, которой вводили внутрь 2% крахмальную слизь, служила контролем. Второй группе вводили подкожно фенамин в дозе 5

мг/кг. Третьей группе внутрь вводили Селептин в дозе 100 мг/кг за 1 час до подкожной инъекции фенамина. Наблюдение за животными проводили в течение 6 минут.

Результаты данных опытов, представленные в таблице 15 показывают, что Селептин в указанной дозе значительно снижал двигательную активность животных как по сравнению с контролем, так и стимулированную фенамином.

Таблица 15.

Влияние Селепггина на двигательную активность белых мышей, стимулированную фенамином

Показатель активности Контроль Фенамин 5 мг/кг Селептин + фенамин (100 мг/кг 8 мг/кг)

Количество пройденных квадратов 129,2+44,8 205,8+54,4 35,5+1,4

Влияние Селептина на длительность гексепалоаого сна и эффект под-пороговых доз гексенала. Опыты проводились на мышах. Селептин вводили внутрь в дозе 100 мг/кг за 30 минут до внутрибрюшинного введения гексенала в дозе 70 мг/кг. Данная доза в контроле вызывала наступление бокового положения у 100% мышей. Контрольным животным вместо Селептина вводили внутрь 2% крахмальную слизь. После введения препарата и крахмальной слизи мышей отдельно рассаживали под воронки. При этом отмечали время введения гексенала, время наступления бокового положения и его длительность. Критерием оценки эффекта являлась длительность наркоза в минутах и процент животных принявших боковое положение. При изучении влияния Селептина на эффект подпорого-вых доз гексенала последний, вводили в дозе 40 мг/кг. Данный опыт также проводили на двух грушах животных с фиксацией тех же параметров что и в первом случае. Результаты исследований по данным тестам представлены в таблице 16, из которой видно, что Селептин значительно усиливает эффекта гексенала в обоих вариантах.

Тест " Вращающийся стержень Эта известная методика позволяет оценить нейротоксичность (общеугнетающее действие) изучаемых соединений

[N.W. Dunham, T.S. Миуа,1957].

Таблица 16.

Влияние Селептина на длительность гексеналового наркоза и эффект подпороговых доз гексенала

Наименование Латентный период Длительность нар- Процент живот-

препарата, Доза в в мин. коза в мин. ных, принявших

мг/кг боковое положение

1. Гексенал 70 3,0+0,2 61,0+8,1 100

(контроль)

2. Селептин 100 + 2,4+0,3 90,0+13,7 100

гексенал

3. Гексенал 40 - - 0

(контроль)

4. Селептин 100 + 5,4+0,4 52,1+12,1 83

гексенал

Результаты изучения нейротоксичности Селептина и препаратов сравнения на белых мышах представлены в таблице 17. № приведенных в таблице данных видно, что Селептин при введении его внутрь проявил значительно меньшую токсичность по показателю ТДм по сравнению с фенобарбиталом, но уступил по этому параметру вальпроату натрия. Однако при внутрибрюшинном введении Селептин проявляет более низкую нейротоксичность по сравнению со всеми эталонными препаратами. Из этого следует, что Селептин не обладает значительным угнетающим действием на центральную и периферическую системы. Кроме того, по показателю защитного индекса, определяемого как отношение ТД50 к ЕД50 Селептин превосходил все препараты сравнения, что свидетельствует о большей его терапевтической безопасности.

Таблица 17.

Нейротоксичность Селептииа и препаратов сравнения по тесту "вращающийся стержень" в опытах на мышах.____

Наименование ТД50 в мт/кг внутрь ЗИ ТД50 в мг/кг ЗИ

препарата внугрибрюшинно

Селептин 124,5 (96,0-160.0) 4,1 206,9 (159,0-265,0) 3,1

Фенобарбитал 65,2 (50,-84,2) 2,1 32,5 (25,2-41,4) 2,0

Карбамазепии 112,0(86,8-144,4) 2,8 54,8 (45,0-66,0) 3,9

Вальпроат натрия 1252,0(891,0-1759,0) 1,8 152,6 (90,0-258,1) -

Примечание. ЗИ - защитный индекс

Тест "Отчаяния". Опыты пэ данной методике были проведены на мышах самцах, которые за 2 часа до нача а эксперимента рассаживались в индивидуальные клетки. При тестировании жн зотных , по - одному, помещали в стеклянный цилиндр ( диаметр 10см., высота 75 см. ), заполненный на 1/3 водой с температурой 21-23 С. Поведение животные оценивали в течение 6-ти минут с фиксацией времени наступления первой и последующих иммобилизаций, их общей продолжительности, а также их числа Селептин в условиях острого опыта вводили внутрь в дозе 100 и 200 мг/кг за 1 час до тестирования. В условиях хронического опыта Селептин вводили ежедневно на протяжении 12-ти дней в дозе 30 мг/кг. Тестирование проводили на 12-й день через 1 час после введения препарата. В качестве эталона сравнения использовали трициклический ангидепрессант амитрип-тилин, который вводили внугрибрюшинно в дозе 5 и 10мг/кг. Контрольным животным внутрь вводили эквиобъемное количество 2% крахмальной слизи. Полученные результаты были подвергнуты статистической обработке по методу вариационного ряда

Результаты исследования Селептина по тесту "Отчаяния" , которые представлены в таблице 18, показали, что Селептин в условиях острого и хронического опытов приводил к некоторому уменьшению времени иммобилизации животных, однако оно не было статистически достоверным.

Таблица 18.

Антидепрессивная активность Селептина по тесту "Отчаяния" в условиях

острого и хронического опыта

Наименование препарата, доза в мг/кг Время иммобилизации в сек.

Крахмальная слизь (контроль) 207,0±32,4

Острый опыт

Селептин, 100 168,3+32,0

Селептин, 200 170,7+28,3

Амитршггилин, 10 150,3+14,3*

Хронический опыт

Селептин, 30 175,9+26,1

Амигрипгилин, 5 149,1+18,1*

Примечание. * Достоверно при Р < 0.05

Изучение влияния Селептина на центральные холин-. серотонин- и адренер-гические механизмы психотропного действия проводили с использованием широко применяемых тест -агентов: ареколина и треморина.

Тремариновый тест. Опыты проводились на мышах. Селептин вводили внутрь в дозах от 25 до 100 мг/кг. Каждую дозу отрабатывали на отдельной группе из 6-ти животных. Через 1 час после введения препарата проводили внутрибрю-шинную инъекцию треморина в дозе 12 мг/кг. Критерием оценки эффекта препарата являлось отсутствие тремора и саливации. Контрольным животным внутрь вводили 2% крахмальную слизь.

Изучение Селептина по тремориновому тесту показали его значительную эффективность, которая выражалась в уменьшении количества животных с тремором, степени его выраженности и носила дозозависимый характер. Эти результаты, которые представлены в таблице 19, свидетельствуют о наличии у препарата центральных антиадренергических и антихолинергичесхих свойств, так как его защитный эффект в отношении тремора был достаточно значительный, что позволило рассчитать ЕД50 С другой стороны, проявление диареи у всех животных и слабый защитный эффект в отношении саливации говорит о незначительных периферических эффектах Селептина.

Ареколиновый тест. Опыты проводили на мышах обоего пола. Ареколин вводили внугрибрюшинно в дозе 20 мг/кг через 1 час после орального введения 200 мг/кг Селептина. Контрольным животным внутрь вводили 2% крахмальную слизь. Критерием оценки активности препарата являлась длительность латентного периода наступления тремора и саливации.

Изучение препарата по данному тесту не приводило к достоверному увеличению латентного времени наступления тремора и саливации, что подтверждает отсутствие у Селептина выраженных периферических ангихолинергических свойств (таб. 19).

5-Окситритофановый тест ( 5-ОТФ ). Опыты проводились на белых беспородных мышах обоего пола Через 1 час после орального введения Селептина в дозе 200 мг/кг проводили внутрибрюшинную инъекцию 5-ОТФ в дозе 100мг/кг. Контрольным животным внутрь вводили 2% крахмальную слизь. Оценку антисеротониновой активности Селептина проводили по его способности блокировать встряхивания головой, диарею и рефлексы с ушной раковины. В ходе опытов было установлено отсутствие эффекта препарата по трем указанным параметрам.

Таблица 19.

Влияние Селептина на тремор и саливацию по тремориновому и

ареколиновому тестам на мышах

Тест-агент Селептин Латентный период ЕД50 в мг/кг

наступления в сек.

доза в мг/кг доза в Мг/кг тремора саливации по треморину

Треморин 12 контррль 6,9±1,9 10,5+4,9 -

Треморин 12 25-100 - 3/6 42,3

(66,6-26,9)

Ареколин 20 контроль 34,5+10,9 3,9+1,3 -

Ареколин 20 100 24,2+7,2 4,5+0,2 -

Тест электроболевой агрессивности пары мышей. Мышей самцов подбирали в пары по весу. Животных помешали парами на электрическую площадку и раздражали ударами электрического тока (прерывисто). Начальное напряжение

равнялось 10 вольтам, которое ступенчато повышалось каждые 30 секунд на 5 вольт. Максимальное напряжение, при котором проводилось наблюдение не превышало 40 вольт, поскольку большее напряжение является запредельным, вызывающем ожог лап или даже гибель животных. Реакцией агрессивности считалась взаимная схватка двух мышей, во время которой они кусали друг друга, принимая при этом характерную позу на задних лапках. До введения препарата все пары мышей вступали в драку. Селептин вводили внутрь в дозах, дающих эффект от 0 до 100%. Критерием оценки эффекта являлся учет пар не вступивших в драку после ведения различных доз препарата [Я.И. Зайдлер, 1960].

Изучение влияния Селептина на проявления элекгроболевой агрессии у мышей показало эффективность препарата по данному тесту, что позволило рассчитать среднеэффективную дозу, которая составила 187,3 мг/кг.

Тест УРПИ (условная реакция пассивного избегания ). Опыты проведены на белых беспородных крысах самцах массой 180-200 граммов. Условная реакция пассивного избегания вырабатывалась по методу Б.И. Любимова [1965].

Селептин изучали в дозе 100 мг/кг при оральном пути введения. Результаты опытов по влиянию Селептина на УРПИ представлены в таблице 20.

Таблица 20.

Влияние Селептина и препаратов сравнения на УРПИ у крыс

Наименование препаратов 1-й день 2-й день

ЛП ВН % ЛП ВН %

Контроль 12,8 167,2 100 72,8 105,2 90

Селептин 13,3 166,7 100 64,9 115,1 90

Пирацетам И,2 160,6 100 125,2 54,6 37

Карбамазепин 15,1 144,1 100 95,3 84,9 50

Примечание. ЛП- латентный период, ВН- время нахождения в темном отсеке в сек. % - животных зашедших в темный отсек.

* Достоверно по сравнению с контролем при Р <0.05

В результате проведенных исследований было установлено, что Селептин не триводил к существешшм изменениям латентного времени и времени нахождения

в темной камере по сравнению с контрольными показателями. Это свидетельствует о том, что Селептин в указанных дозах не стирал след памяти у опытных крыс, а значит и не оказывал ни амнестического ни антиамнестического действия действия. Препараты же сравнения : карабамазепин и особенно пирацетам проявили ан-тиамнестическое действие по всем перечисленным параметрам.

ДРУГИЕ ВИДЫ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА СЕЛЕПТИИА

Определение анальгетической активности. Тест "горячая пластинка Об активности препарата судили по степени увеличения времени оборонительного рефлекса на термический раздражитель. До начала эксперимента определялась исходная реакция мышей (время начала облизывания задних лапок) при помещении их на пластинку с температурой 54-56 С (заданная температура поддерживалась с помощью термостата). В опыт брали животных, время оборонительного рефлекса которых не превышало 15 секунд. Препарат вводили внутрь в дозе 100 и 200 мг/кг за 0.5 часа до тестирования, которое в дальнейшем проводили через I, 2 и 3 часа. Максимальное время экспозиции животных на нагретой пластинке не превышало 60 секунд. [N.В. Eddy, D.J. Leimach, 1953]. Полученные результаты были подвергнуты статистической обработке по методике вариационного ряда.

Тест "уксусных корчей** позволяет отмечать устранение боли, вызванной химическим раздражением брюшины. Мышам внутрибрюшинно вводили 3% уксусную кислоту из расчета 100 мг/кг массы. При этом у животных возникал» "корчи" - судорожные сокращения брюшинных мышц, сопровождающиеся вытягиванием задних конечностей и прогибанием спины. Селептин вводили внутрь в дозе 100 и 200 мг/кг за 1 час до тестирования. Регистрировали количество корчей в течение 20 минут после введения раздражающего агента. Эффективность препарата оценивали по способности уменьшать количество корчей по сравнению с контрольными животными. [Г.Я. Шварц, Р.Д. Сюбаев, 1988].

"Тест давления". Опыты проводились на белых крысах обоего пола Пять крыс помещали в специальную клетку, каждую в отдельный отсек. Хвост крысы при этом оставался вне клетки. Для определения порога болевой чувствительности хвост крысы помещали между стержнем, оказывающим давление и грушей манометра Рива-Роччи, в показаниях которого учитывается сила давления. Повышение давления производили с постоянной скоростью до наступления ответной реакции-писка. При этом фиксировали порог болевой реакции. В опыт брали животных, дающих ответную реакцию при показаниях ртутного манометра не выше 20 мм. рт. столба. При показаниях манометра 100 мм. рт. столба отмечали наступление полной анальгезии. Селепгин вводили внутрь в дозах 100 и 200 мг/кг. Контрольным животным внутрь вводили 2% крахмальную слизь. Тестирование проводили через 1 час после введения препарата. [А.К. Сангайло, 1962].

Тест электрического раздражения. Основан на электрическом раздражении кожи спины крысы при нарастании силы раздражителя до наступления оборонительного рефлекса (писк). При этом определяли порог болевого раздражения до и после применения препарата. При помощи делителя напряжения на электроды подавался ток со ступенчатым нарастанием напряжением от 0 до 100 вольт. В опыт брали животных, показавших при контрольном определении порог болевой чувствительности не выше 10 вольт. Порог болевой чувствительности определяли через 1 час после орального введения Селепгин в дозе 100 мг/кг. В опыте были использованы две группы животных по 5 крыс в каждой.[А.К. Сангайло, 1962].

В ходе проведения испытаний анальгетическая активность Селептина была установлена только по методике "Уксусные корчи". В этом случае ЕД50 препарата составила 210 мг/кг.

Антиагрегантная активность. Антиагрегангную активность Селептина изучали по методу Борна (1962). В ходе опытов, результаты которых представлены в таблице 21, было установлено значительное антиагрегантное действие Селептина, сравнимое по показателю торможения агрегации тромбоцитов с извест-

ными антиагрегантами по дшшому тесту [Б.Я. Сыропятов, Б.В Александров, Е.С. Бороненкова, 1992].

Таблица 21.

Торможение агрегации в % Селептин Аспирин Папаверин Тиклид

86.7 24,6 7.7 44,6

ФАРМАКОКИНЕТИКА СЕЛЕНТШ1А

Материал и методы исследования. Для изучения фармакокинетики Се-лепгина у опытных животных необходим чувствительный метод количественного определения препарата в различных биологических объектах. Нами была выбрана методика на основе высокоэффективной жидкостной хроматографии [JI.E. Холодов, В.П. Яковлев]. Хроматографический анализ проводили на жидкостном хроматографе ZSI (ЧССР). В колонке длиной 150 мм. диаметром 2.2мм был использован сорбент "SEPARON CGX-NH2" с размером частиц 7 мкм. В качестве элюенга применялась смесь гексан: изопропанол: хлороформ в соотношении 70:8:22. Условия хроматографирования: скорость тока элюен-та-0.4мл/мин., объем вводимой пробы 3.0 мкл. Температура 18-20 °С. Детектирование проводили на УФ-детекторе LSD- 2563 (ЧССР) на длине волны 254 нм. Математическая обработка полученных хроматограмм выполнялась на интеграторе CI-105 (ЧССР). Измеряемым параметром на хроматограмме была площадь пика. Расчет проводился методом внутренней стандартизации. В качестве внутреннего стандарта использован ортошпроаншшн, который вводился в пробу непосредственно перед экстракцией. В указанных условиях время удерживания Селептина составляло Юминут 25 секунд, внутреннего стандарта 8 минут 42 секунды.

В опытах на крысах изучали содержание Селептина в органах, тканях и плазме крови, а также экскрецию препарата с мочой. В опытах на собаках изучали содержание Селептина в плазме крови при оральном и внутривенном введении. В ходе проведенных экспериментов была установлена динамика изменения концен-

грации Селеитина в плазме крови, концентрация препарата в органах и тканях, его жстракция с мочой.

Так, продолжшельность действия Селеггпша при оральном и внутрнбрю-пинном пути введения составила соответственно 4 и 6,6 часа, что вполне объяснимо относительно низкой биодоступностью Селеитина при внутрибрюшшшом пути введения. Более низкая биодоступность Селеитина при внутрибрюшшшом пути введет« косвенно подтверждается также опытами по определению противо-гудорожной активности и нейротоксичности препарата. Например, ЕДзо Селептина при оральном введении по тесту максимального электрошока ЗОмг/кг, внутри-брюшинном введешш-60 мг/кг; нейротоксичность (по тесту вращающийся стержень) соответственно 124.5 и 206.9, что свидетельствует о более низкой скорости всасывания препарата при парентеральном пути введет».

Средняя продолжительность действия, установленная на мышах при обоих путях введения находится в пределах 4-6 часов. Эксперименты на крысах показали, что в течение суток с мочой экскретирует 73.6% вещества, а в течение 4-х часов около 10% от введенного вещества. Это дает основание утверждать, что продолжительность действия, установленная на мышах, удовлетворительно согласуется с фармакологическими исследованиями.

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

Механизм противосудорожного действия Селептина. Общая оценка противосудорожной активности Селептина по наиболее значимым для характеристики препаратов методикам, позволяет сопоставить его с эффектом самых мощных противоэпилептических средств ( фенобарбитал, дифенин, карбамазепин, гек-смидин, бегоонал ). перед которыми он имеет неоспоримое преимущество - значительно большую широту фармакологического действия (таблица 22). Необходимо отметить при этом, что продолжительность противосудорожного действия Селептина, установленная в опытах на мышах по тесту максимального электрошока

сопоставима с показателями ЕТ$о фенобарбитала, гексамидина и превосходит п данному тесту карбамазепин и дказепам более чем в 2 раза.

Таблица 22

Сравнительная характеристика Селептина и известных противосудорожных ве ществ по токсичности, активности и терапевтической безопасности в опытах к мышах при оральном введении ____

Наименование препарата ЛДзо в мг/кг ЕДЬов мг/кг (по электрошоку) УШФД ЕДзов мг/кг (по коразолу) УШФД

Селептин 980 30 32,7 30 32,7

Фенобарбитал 172 36 4,7 34 5,0

Дифешш 325 60 5,4 не определяй -

Карбамазепин 550 40 13,7 не оирсасдсм -

Гексамндин 470 110 4,2 120 3,9

Бензонал 340 57 5,9 56 6,0

Изучение препарата по тесту МЭШ,коразолового и бикукуллинового тестов в самых жестких параметрах, обусловливающих 100% гибель животных, подчеркивает прежде всего его способность подавлять процесс генерализащш судорожной активности. Это положение подтверждается также электрофизиологическими исследованиями, проведенными в НИИ общей патологии и патологической физиологии. В частности было установлено, что внутривенное введение Селептина кошкам в дозах 10 и 30 мг/кг оказывало заметное влияние на спонтанную биоэлектрическую активность в коре головного мозга, хвостатом ядре и гиппокампе, которое проявлялось подавлением колебаний тета и альфа диапазонов, усилением медлешюволновой части спектра и повышением активности в бета-1 диапазоне. В этих же дозах Селегтгин приводил к двух кратному увеличению судорожного порога ответов коры головного мозга иа электростимуляцгао хвостатого ядра. Введение Селептина в дозе 100 мг/кг приводило к тотальному подавлению биоэлектрической активности структур головного мозга [Е.В. Никушкин, 1991].

Эффективность указанных доз Селептина подтверждена также и в ходе наших собственных исследований на скришшговых моделях по определению проти-

восудорожной и психотропной активности. Подавление биоэлектрической активности гиппокампа и хвостатого ядра является особенно важным, поскольку именно в этих зонах формируются очаги эпилептической активности [В.А. Гусель, В.Л. Козловский, 1986]. В ходе этих экспериментов было также установлено, что Се-лептин подавляет эпилептический припадок (генералгаацию), но не эпилептический разряд, что приближает его по характеру противосудорожного действия к препаратам бензодиазеппнового ряда. Более того, подавляющее действие Селеп-тина в отношении эпилептического припадка по сравнению с диазепамом значительней выражено как при предварительном введешш препарата, так и при введе-шш его на стадии сформировавшейся эпилептической активности [Е.В. Никуш-кин, 1991].

Наиболее отчетливый протнвосудорожный эффект Селеппша наблюдался по тесту МЭ111. По современны представлениям ведущую роль в развитии судорог, вызванных электротоком, играет торможение Ыа+ К+- АТФ -азы и структурные изменения в синаптосомах [Р.И. Глебов, Г,Н. Крыжановский, 1984 ]. Поэтому эффект Селеппша можно в какой-то мере объяснить возможной защитой активного центра данного фермента. Мощное подавлешге Селептином в дозах 10-30 мг/кг строфантин-индуцированной очаговой эпилептической активности, которое было установлено в лаборатории Е.В. Никушкина удачно коррелирует с предыдущей методикой. Стимуляцию эпилептической активности под влиянием строфантина в настоящее время связывают с блокадой им калиевого центра К+Ыа, АТФ-азы [Р.И. Глебов, Г.Н. Крыжановский, 1984 ].

Остальные методики связаны с воздействием химических тест - агентов, проконвульсивный эффект которых развивается во времени отностгтельно долго. При этом большее значение имеет биохимическая перестройка различных структур ЦНС, в том числе и изменение медиаторного баланса. Эффект препарата по коразоловому, бикукуллиновому и тиосемикарбазидному тестам однозначно говорит об усилении под влиянием Селеппша ГАМК-ергических тормозных возденет-

вин. Однако роль этих влияний оценить достаточно трудно, ибо между различны ми меднаторными системами существует сложная взаимосвязь.

Наиболее четкие результаты были получены при исследовании влияния Се лепгина на ГАМК-ергическуго систему по тестам бикукуллшювых, тиосемикарба зидных, коразоловых и пешщиллиновых судорог. Данный механизм является од нозначным но общей направленности. Однако детали требуют специального рас смотрешм ввиду особешюсгей применяемых тест-агентов. Так значительный ре зультат был получен по бикукуллиновому тесту (ЕД5о=:60мг/кг ). По-видимом; Селептин вступает с бнкукуллнном в конкурентные отношения, поскольку проти восудорожный эффект Селенита но тносемикарбазндному тесту носил мене! выраженный характер (ЕД/5о=177мг/кг) что свидетельствует, вероятно, о несущественном влиянии препарата на процессы пресиналгического накопления ГАМК То есть препарат очевидно не способен значительно воздействовать на синтез ГАМК в термилали или устранять иигибируютций эффект тиосемикарбазцца. Возможно это влияние мишшально и компенсируется прямой стимуляцией ГАМК - бензодиазепин - ионофор-рецепторного комплекса Подтверждением этого является высокая активность Селентина при пенициллшювой аппликации на сенсорные зоны левого полушария при внутривенном введешш препарата крысам в дозе 30 мг/кг [Е.В.Никушкин, 1990]. В результате применения Селепгина предупреждалось развитие очаговой эпи-активности. Поскольку нешщиллин является селективным блокатором хлорных каналов можно предположить также и способность Селентина продлевать время их открытия по различным известным механизмам. Наиболее вероятным из них является стимуляция бензодиазешшовых рецепторов.

Этот вывод удовлетворительно согласуется с результатами опытов в лаборатории Е.В. Никушкина(1990) по связыванию Селентина бензодиазешшовыми рецепторами центрального и периферического тина. Поскольку Селептин является лигандом данного типа рецепторов, результатом взаимодействия может быть либо их стимуляция либо блокада. Так как противосудорожный эффект Селепгина по

методикам, выявляющим ГАМК-ергическую активность, установлен, агонизм его в отношении бензодиазепиновых рецепторов не вызывает сомнений. Кроме того высокое сродство Селептина к бензодиазепиновым рецепторам периферического типа косвенно подтверждается и нашими опытами по определению антиагрегант-ной активности препарата. Значительное снижение агрегации тромбоцитов под влиянием Селептина свидетельствует также и о воздействии его на "молчащие" рецепторы, которые находятся на мембране тромбоцитов. Установлено, что стимуляторы бензодиазепиновых рецепторов, а также и многие другие психотропные средства имеют высокое сродство к белковым структурам форменных элементов крови, что является своеобразным маркером значительного связывания их в ЦНС. Однако в нашем случае тропность Селептина к тромбоцитам может иметь важное клиническое значение, поскольку с этим связано и ангиагрегантное действие Селептина Развитие ДВС- синдрома и других нарушений гемостаза является часто существенным механизмом патогенеза эпилепсии [В.А. Карлов, 1987]. В нашей работе специальных исследований по связыванию Селептина с ГАМК рецепторами не проводилось. Однако прямое воздействие препарата на ГАМК рецепторы вполне вероятно. В настоящее время установлено, что стимуляторы ГАМК рецепторов проявляют выраженный антагонизм к бикукуллину, но не стрихнину. Согласно этим критериям истинные агонисты ГАМК - рецепторов можно определить как бикукуллинобратимые и нечуствигельные к стрихнину ингибиторы нейро-нальиой активности [э.б. Арушанян, 1985]. Данное положение входит в полное соответствие результатами наших опытов по бикукуллиновому и стрихниновому тестам.

В реализации противосудорожного эффекта Селептина принимают участие по-видимому и другие медиаторные системы. Так апоморфин и фенамин, которые не являются собственно судорожными агентами, дают возможность косвенно оценить воздействие Селептина на систему дофамина и норадреналина.

Спектр психотропной активности Селептина. Определение фармакологического профиля новых препаратов процесс достаточно сложный, так как набор традиционных методик позволяет со всей определенностью выявить только типичных представителей той или иной группы. Тогда как спектр действия препаратов промежуточного типа (атипичных) удается установить главным образом во время клинических испытаний. В определенном смысле это касается и Селептина. Однако имеющийся в нашем распоряжении материал дает возможность говорить о преимущественном характере его психотропного действии (таблица 23.)

Так отсутствие каталептогешшх свойств, стимуляция центральных дофами-нергических механизмов (тесты "апоморфиновой" и "фенаминовой" стереотипии), отсутствие влияний на температуру тела и выработку условной реакции пассивного избегания позволяет со всей определенностью высказаться в пользу отсутствия у Селептина нейролептических свойств в традиционном понимании этого слова

Наличие же выраженного агрессивного эффекта и угнетение ориентировочной реакции Селептином по тесту "Открытое поле", а также его антагонизм с ко-разолом, бикукуллином и тиосемикарбазидом позволяет высказаться в пользу транквилизирующих свойств препарата

Результаты, полученные по другим методикам в изолированном виде могут представлять аргументы в пользу характеристики любой группы психотропных средств за исключением психостимуляторов и пожалуй ноотропов.

Отсутствие значительных седативного и миорелаксирующего действия у Селептина в сочетании с низкой нейротоксичностью позволяет рассматривать его как антиконвульсант с транквилизирующим и антидепрессивным компонентом действия.

Таким образом, фармакологическое изучение нового противосудорожного препарата Селептина позволяет рекомендовать его для клинических испытаний как эффективный антиэпилептик, сочетающий в себе необходимые противопарок-сизмальные и психотропные свойства, при высокой степени терапевтической

^опасности. Наличие же антиагрегаитных свойств может только повысить его ¡рапевтическую значимость.

Таблица 23.

Спектр психотропного действия Селептина.

армакологический эффект

Фармакологические эффекты характерные для

СЛ ИЛ ТР АД ПС

НО О

Каталепсия

Двигательная активность Ориентировочная реакция Длительность гексеналового сна Влияние на температуру Эффект под пороговых доз гексенала Эффект по тесту поведенческого отчаяния . Влияние на выработку условных рефлексов . Влияние на координацию движений Э.Агрессивное поведение 1. Анальгетический эффект 2.Эффекг анальгетиков

3.Апоморфнновая стереотипия

4.Апоморфиновая гипотермия

5.Фенаминовая стереотипия

6.Фенаминовая гипертермия

7. Эффект треморина Й.Эффект ареколина 9.Эффекг 5-ОТФ

0.Двигательная активность, стимулированная

1. фенамином

З.Судорожный эффект коразола

нет +*

+ + -

+ + -+ -

+ + + +

+ .

есть

нет + *

+ + -+ + -

+ -+ -+ -

нет + *

+ *

+ + -

+ + + -+ -

4 -

+

+ +

нет

+

+

+ + + + + -+ + + + + -+ -+ -+

нет +

+. + -+ + + -+ -+ -+ -+ -+ . + -+ -+ -+ -+

Соотношение положительных и отрицательных эф-Ьектов

7/8

4/13

4/6

8/7

13/3

5/2

Совпадение эффектов Селептина с другими группа-<и препаратов_

7/8

4/4

4/2

7/2

5/0

2/0

1римечание. знаками "+" или указано усиление или ослабление эффекта по триведенным тестам. "+-" - отсутствие значимого эффекта. СЛ - селептин, НЛ -¡гейролептический, ТР - транквилизирующий, АД - антвдепрессивный, ПС- психо-гтимулирующий, НОО - ноотропный. * - проявление эффекта в больших дозах.

+

+ -

+ -

+

+

ВЫВОДЫ

1. Эксперименальное изучение 21-одного нового соединения дибензодиазепиново го ряда позволило установить у некоторых веществ наличие противосудорож ной и психотропной активности.

2. Присоединение радикала при азоте гетероншсла в 3-м положении приводило 1 появлению противосудорожных свойств, которые отсутствуют у базового пре парата азалептина, при этом оптимальная длина алифатической цепочки пру азоте гетероцикла находится в пределах 3-х атомов углерода. Увеличение шн уменьшение ее длины приводит к ослаблению противосудорожной активности в данном ряду.

3. Наибольший интерес для клинической практики, с точки зрения противосудорожных свойств и терапевтической безопасности, представляет препарат Селеп-тин.

4. Селептин сопоставим по противосудорожной активности с традиционными ан-тиконвульсантами и превосходит их по терапевтической безопасности.

5. Механизм противосудорожного действия Селептина обусловлен положительным изменением медиатор ного баланса в пользу усиления тормозных влияний. Ведущая роль в этих изменениях принадлежит ГАМК - бегаодиазепин - рецептор- ионофорному комплексу. Воздействие препарата на другие системы дополняет указанный механизм прямо или опосредовано посредством реципрокных отношений.

6. По психотропной активности Селептин занимает промежуточное положение между антидепрессантами и транквилизаторами.

7. Совокупные исследования Селептина позволяют оценить его как перспективный препарат для лечения судорожных форм эпилепсии и эпилептического статуса.

СПИСОК ПАРНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ

ДИССЕРТАЦИИ

1. Залесов B.C., Хволис Е.А., Трегубов А.Л., Барггейл Б.А. Изучите развития толерантности к сочетаниям фенобарбитала с некоторыми транквилизаторами. // Доклинические испытания биологически активных веществ с целью их внедрения в практику. Пермь. 1987. с. 11-15

2. Трегубов А.Л. Комбинированное применение антиконвульсантов при экспериментальных судорогах. // Комбинированное применение антиконвульсантов с другими фармакологическими средствами. Пермь. 1987. С. 16-36.

3. Трегубов A.JI. Влияние антидепрессантов на противосудорожную активность и острую токсичность антиконвульсантов. /У Фармакол. и токсикол.-1990.-№6. С.

4. Колла В.Э, Шеленкова С.А., Трегубов А.Л., Чернов Г.С., Данилова В.К., Кузнецова Э.Г. Перспективы поиска новых прогивосудорожных препаратов. Материалы республ. конф. Естественные науки в решении экологических проблем народного хозяйства. Пермь.-1991.-С. 170-174

5. Трегубов А.Л. и др. Авторское свидетельство № 1713245 от 15.10.91 на изобретение ацетил аминолепонекса.

6. Трегубов А.Л. и др. Международная авторская заявка rCT/SU91/000 01.-11.91. Лекарствешшй препарат для лечения эпилептического статуса на основе производных дибензодназепина.

7. Колла В.Э., Трегубов А.Л., Шеленкова С.А. Биологическая активность производных дибензодназепина -Тез. докл. научн. конф. "Биологически активные соединения синтез и использовшше". Пенза,- 1992. - С. 115.

8. Трегубов А.Л. Противосудорожные свойства ацетиламинолепонекса. Тез. докл. конф. "Нейрофармакология на рубеже двух тысячелетий" С. Петербург. - С.85.

9. Сульдин A.B., Трегубов А.Л., Иванов А.Н., Метелева C.B. Фармакокинетика ГЧ-46. СБ. тез. межвузовской и 49 научно-практической конференций. Пермь. -1993.-С. 127.

Ю.Трегубов А.Л. Противосудорожные свойства ацетиламинолепонекса. СБ. тез. межвузовской и 49 научно-практической конференций. Пермь. - 1993. - С. 129.

11.Трегубов А.Л., Колла В.Э., Шеленкова С.А., Чернов Г.С. Поиск новых проти-воэпилептических средств. В кн. современные методы биологической терапии психических заболеваний. - Москва. - 1994. - С. 58.

12.Трегубов А.Л. К мехшшзму противосудорожного действия препарата ГЧ-46. В кн. материалы докладов 50-й научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава. Перш. - 1994. С.41-42.

13.Трегубов А.Л., Жданов A.B. Квантово-хпмический анализ и прогноз биологической активности в ряду производных дибензодназепина. В кн. материалы докладов 50-й научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава. Пермь. - 1994. С.43-44.

14.Трегубов Л.А.., Колла В.Э. Сравнительная характеристика спектра фармакологического действия азалептина и ГЧ-46.// Фармакол. и токсикол. - 1995. - №2. -С. 19-21.

15.Трегубов J1.A.. Антиагрегантная активность 5 (ацетиламино)-8-хлор-11-(N-метилпиперазшшл-дибешо-[Ь,-е]-[1.4] диазепина. 3 стр.:2 текст, 1 табл., О илл. библ.5 назв. Статья депонирована ф!фМой "Денаст" 04.01.1995. 15-24 №457 Рус.

16.Трегубое Л.А.., Анальгетические свойства ацетиламиноазалепгина. 5 стр.:3 текст, 2 табл., 0 илл., библ. 6 назв. Статья депонирована фирмой "Денаст'' 04.01.1995. 15-24 №457. Рус.

17.Манжелевская Э.В., Колла В.Э., Трегубов А.Л., Шеленкова С.А., Нектарова Т.А., Баргтейл Б.А., Хволис Е.А. Комбинированное применение противоэпи-лептических средств с психотропными препаратами в эксперименте. // 2-й Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". Москва. - 1995.-С. 105106.

18.Трегубов A.JL, Колла В.Э. Спектр психотропного действия нового противосу-дорожного препарата ацетиламиноазалепгина. Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств. II 1-й съезд Российского научного общества фармакологов. -Москва.-1995.-С441.

19.Трегубов А.Л. Изучение психотропной активности 5 (ацетиламино)-8-хлор-11-(Ъ}-мет1штшеразшшл-дибензо-[Ь,-е]-[ 1.4] диазепина. Деп. в ВИНИТИ 19.01.95 № 169 В 95.

20.Трегубов А.Л. Противосудорожные свойства ацетиламиноазалепгина в условиях хронического опыта Актуальные вопросы фармации. Мат. 51-й научн. пракг. конф. Пермского фармацевтического института -Пермь. - 1995.-С. 38.

21.Трегубов А.Л. О роли адренергических механизмов в противосудорожном действии нового препарата ацетиламиноазалепгина. Эксперим. и клиническая фар-макология.-1996.-№1 С. 19-20.

22.Трегубов А.Л., Колла ВЭ. Селептин - новый противоэпилептический препарат. // 3-й Российский национальный конгресс "Человек и лекарство". -Москва. -1996.-С.52

23.Трегубов А.Л., Колла В.Э. К фармакотерапии нового противоэпилептического препарата Селепгина // Фармация здравоохранению. -Уфа.-1996.-С. 158.