Автореферат и диссертация по медицине (14.00.20) на тему:Особенности кожных изменений у человека и животных при воздействии 2,3,7,8-тетрахлородибензо- π диоксина

Министерство Здравоохранения и Медицинской Промышленности Российской Федерации Институт Токсикологии

На правах рукописи УДК 615.9:616.591:616.594.1

Р Г о ОД

ПАНТЕЛЕЕВ Андрей Александрович

ОСОБЕННОСТИ КОЖНЫХ ИЗМЕНЕНИЙ У ЧЕЛОВЕКА II ЖИВОТНЫХ ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ 2,3,7,8-ТЕТРАХЛОРОД11БЕНЗО-п-ДНОКСИНА.

14.00.20 - токсиколог ия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Санкт-Петербург 1996

Работа выполнена в Институте проблем экологии и эволюции имени А.Н. Северцова Российской Академии Наук (г. Москва).

Научный руководитель:

доктор медицинских наук B.C. Румак

Научный консультант:

доктор медицинских наук профессор Г.А. Софронов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук JI.A. ¡Чуковский

доктор медицинских наук B.I1. Козаков

Ведущая организация

Научно-Исследовательскнй Институт Военной Медицины Министерства Обороны Российской Федерации

Защита диссертации состоится "30 "№1?*% 1996г. в

часов___минут на заседании диссертационного Совета К074.13.01

при Институте Токсикологии МЗ МГ1 РФ по адресу: 193019, С-Петербург, ул. Бехтерева I, Институт Гоксиколот ни.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Инстшуга Токсикологии МЗ МП РФ

Л у, gs

Автореферат разослан....£>...'..........."..Тг °

Ученый секретарь диссертационного совета кандидат биологических наук

Т.Н. Саватеева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Исследования воздействия 2,3,7,8-тетрахлороднбензо-и-яиоксина на организм человека в последнее время приобретают чре>вычайную актуальность, что подтверждается утверждением Роснйским правительством в ноябре 1995 года Федеральной целевой программы "Защита окружающей природной среды и населения от диоксинов.....".

Диоксин является самым токсичным синтетическим химическим соединением (Schwetz, 1973), отличающимся также высокой устойчивоыью, способностью передавался по трофическим цепям и накапливаться в организме человека и животных (Kimbrough, 1980). В последнее время были показаны тератогенные и иммунотоксические свойства этого вещества, действующего как дизрегуляторный агент на многие компоненты гомеостаза (Sweeney et al., 1993). В связи с исключительностью токсикологических свойств диоксина, особое значение приобретают проблемы диагностики и прогнозирования последствий его поступления в организм человека, а также методы его биоиндикации в различных средах.

Наиболее характерным эффектом поражения человека диоксином является хлоракне - акнеподобный дерматоз со специфическими клиническими признаками, вызываемый минимальными дозами диоксина и очень устойчивый во времени (CunlifTe et al., 1975). Эти особенности обусловливают высокую значимость хлоракне в дифференциальной диагностике интоксикации человека при производстве и использовании диоксинсодсржащих хлорорганическнх соединений, в том числе и п военных целях, как, например, во Вьетнаме (Westing, 1984; Roumak et al, 1994; Stone, 1994). Несмотря на высокое значение хлоракне в токсикологии диоксина, сведения об этом заболевании ограничиваются лишь клиническими наблюдениями (Crow, 1981; Taylor et al., 1982), динамика развития хлоракне на гистологическом уровне не исследовалась, клеточные механизмы действия диоксина на кожу, а также молекулярные процессы, лежащие в основе этого воздействия, до сих пор не ясны. Не описаны и дерматологические последствия крупнейшего инцидента с диоксином в Южном Вьетнаме (применение Оранжевою Агента армией США).

г

Традиционно считается, что хлоракне является результатом воздействия диоксина на салыюжелезистый аппарат кожи (Crow, 1981; Tindall, 1985), однако общепринятые методы лечения нарушений функций сальных желёз с помощью ретиноидов в случае хлоракне оказываются неэффективными (Cunlifle, 1989; Yip et al., 1993). Разработка'денственых методов терапии хлоракне затрудняется как неясностью механизмов индукции и развития этого заболевания, так и отсутствием его адекватной лабораторной модели.

В последние годы в качестве модели токсического действия диоксина используются клеточные культуры хератиноцитов. При этом основное «нимание уделяется воздействию диоксина на экспрессию белков-регуляторов клеточной дифференцировки и пролиферации через связывание со специфическим арилуглеводородным (Ah) рецептором (Whitlock, 1990; Okey, 1994). К настоящему времени достигнуто определённое понимание молекулярных механизмов воздействия диоксина на физиологию хератиноцитов в культуре (Gaido et al., 1994; Hankinson, 1995), однако возможность экстраполяции этих данных на процессы, происходящие при действии диоксина на живую кожу пока не оценивалась. Характер экспрессии Ah-рецептора в коже животных и человека неизвестен.

Исследование механизмов модуляции диоксином основных клеточных и молекулярных процессов в коже, является актуальной • задачей токсикологии и может внести большой вклад в решение проблемы оценки уровня опасности диоксина для человека и в разработку методов диагностики и терапии патологических проявлений его кожного действия.

Цель и задачи исследования, Цель данной работы - характеристика процесса развития кожных проявлений токсического действия диоксина на человека и лабораторных животных и выявление некоторых механизмов эгого действия. В задачи исследования входило следющсе:

1) Подготовить и осуществить токсикологический эксперимент на лабораторных мышах лиши HRS/J.

2) Оценить адеквагность различных методов аппликации диоксина (накожное и подкожное введение) задачам исследования особенностей действия лот вещества на структуру и функции хожных покровов.

3) Методами световой микроскопии и морфометрни выявить в коже экспериментальных животных клеточные структуры, наиболее чувствительные к действию диохснна, описать динамику и характер происходящих в них изменений и оценить степень их идентичности кожным нарушениям, вызываемым диоксином у человека (хлорахне).

4) Исследовать влияние ретиноевой кислоты на процесс развития диоксин-индуцирсяанных кожных изменений у лабораторных животных и оценить перспективность использования ретиноидов в терапии хлоракне.

5) Методом гибридизации in situ выявить характер воздействия диоксина на экспрессию в коже мышей линии HRS/J кератинов 1 и 17 (белков-маркёров клеточной пролиферации и днфференцировки).

6) Выявить роль диоксинового (Ah) рецептора в регуляции клеточных процессов в кожных покровах на основании изучения характера его экспрессии в нормальной и патологически изменённой коже человека.

7) На основания анализа результатов экспериментальных исследований и данных литературы обсудить возможные механизмы действия диоксина на кожные покровы и наметить дальнейшие пути исследований в этой области.

8) Оценить адекватность использованной нами модели (лабораторная линия безволосых мышей HRS/J) для исследования хлоракне.

9) Выявить характер распространения диоксин-специфических кожных изменений у населения, имевшего контакт с дефолиантами в некоторых районах Южного Вьетнама.

10) Исследовать гистологические особенности структуры кожи пациентов, имевших различную степень контакта с дноксинсодержашими фнтотоксикантами в Южном Вьетнаме.

И) На основании анализа результатов медико-статистических к экспериментальных исследований охарактеризовать место хлоракнеподобных проявлений в комплексе симптомов отдалённого токсического действия диоксина.

Научная новизна. Впервые на лабораторной модели описана динамика развития днокенниндуцируеммх кожных проявлений на клеточном

(световая микроскопия) и молекулярном (транскрипция основных кератинов) уровнях, что позволило раскрыть некоторые механизмы развития хлоракнеподобных кожных изменений. Было выявлено также, что ретнноевая кислота резко усиливает действие диоксина на эпидермис.

Нашими исследованиями впервые показана экспрессия Ah-рецептора в коже человека и выявлена её связь с процессом дифференцировки кератиноцитов в нормальном эпидермисе и при кожных заболеваниях.

В работе впервые представлена характеристика стойких кожных проявлений действия диоксина у жителей Южного Вьетнама, имевших отдалённый контакт с дефолиантами (Оранжевый Агент).

Теоретическое и практическое значение работы. Полученные данные позволили предложить новую схему развития хлоракне, в основе которого лежит избирательная индукция диоксином дифференцировки клеток проксимальной части волосяного фолликула без участия сальных желёз. Результаты одновременного нанесения на кожу диоксина и рстиноевой кислоты показали, что кожные проявления токсического действия диоксина могут модулироваться биологическн-активными веществами не обладающими собственной токсичностью. Эти данные позволяют внести коррективы в практику использования ретиноидов в терапии хлоракне. Выявление активной экспрессии Ah-рецептора в эпидермисе и её связь с процессом дифференцировки кератиноцитов, позволяют предположить, что действие диоксина на кожу ш vivo также, как и в клеточной культуре, осуществляется через связывание с этим рецепторным белком. Данные о молекулярных и клеточных аспектах регуляции процесса дифференцировки d эпидермисе и о влиянии на этот процесс внешних факторов могут быть полезны как с точки зрения практической дерматологии так и для понимания общих механизмов функционирования кожи. В работе дана характеристика отсроченных кожных эффектов поражения людей дефоли-шпамн do время II Индокитайской войны и показана перспективность использования комплекса дерматологических показателей при оценке уровня воздействия диоксина на человека и при дифференциальной нос инее поражения этим веществом. Результаты работы показывают

перспективность использовании линии мышей HKS/J в качестве модели дня исследования хлоракне, разработки методов lepaiiiin ною заболевания и методов би01ес11ф0В1Н1ия диоксина в ра (личных средах.

^1ШРбаиия_р£бо1Ь1^ Материалы диссертации были представлены на IV пленуме правления Всероссийскою Научною Общества Токсиколоюп (Леншкрад, декабрь 1990); неоднократно представлялись на ежеюдных Международных Контрессах по Диоксину - п 1988. 1990 и 1991гг; на VI Международном Токснколот нческом Кшнрессе, Рим, Италия, 1992; на международной конференции "Herbicides in War: Ihe long-terin cffects on птап and nature", Ханой, Вьетнам, 1993; на ежа одном Koinpecce 1:пронейскою Дерматологическою Обшесгва, Вена, Австрия, 1995. В полном обьёме материалы диссертации были представлены на межлаборлторном коллоквиуме И1ГУЭ РАИ (май 1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано и сдано н нешп. 12 работы.

Структура и обьём диссертации. Диссертация состоит ш нведенич, об юра лшературы, методического раздела, 5 глав собственных исследовании (включающих обсуждение резулыаюв), включения, выводов и укатателч цитируемой литературы. Общий объём работы 204 стр. Днсссртаннч содержит 9 таблиц, 67 фотографий, II графиков и схем. Литературный указатель содержит 213 наименований цитируемых работ.

Автор приносит искреннюю благодарность своему научному руководителю д.м.н. B.C. Румаку и научному консультанту проф. Г.А. Софронову, постоянное внимание и помощь коюрых сыграли неоценимую роль в завершении представляемой к защите работы. Также я глубоко признателен академику В.Е. Соколову, ст.u.c. Л.В. Степановой, докторам Т. Розенбаху и Р. Паусу (Берлин), а также веди.с. В.В. Бочарову за их большую помощь в обсуждении результатов исследований. Пользуясь случаем, я благодарю Н.В, Поляк, С.П. Познякова. В.В. Антоиюка и других сотрудников Совместною Российско-Вьетнамского Тропического центра (Хошимин) и Института проблем экологии и эволюции (Москва) за помощь в сборе, обработке и аналн w материалов диссертации.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Методика исследований

Экспериментальная часть иследований была осуществлена на мутантных (hr/hr) безволосых мышах линии HRS/J в виварии Института Токсикологии и Эмбриофармакологни Свободного Университета (Берлин, ФРГ).

2,3,7,8-тетрахлородибензо-л-диохсин наносился животным нахожно в растворе ацетона (ЮОрл) в концентрации 2цг/мл или вводился подкожно в растворе кукурузного масла (ЮОцл) в концентрации 1цг/мл. При этом накожная аппликация диоксина рассматривалась как прямое экспонирование клеток кожи действию токсиканта, а подкожное введение -как системное действие диоксина на кожу (Abraham К. et al, 1988).

Рстиноевая кислота (PK) для накожной аппликации (ЮОцл) разводилась в смеси толуол-ацетон (1:9) в концентрации 10 мг/мл.

Все животные были разделены на 8 групп, содержащихся раздельно и подвергавшихся в ходе эксперимента различным видам обработки: Группа 1 - ннтактпые животные (абсолютный контороль) Группа 2 - ацетон накожно (контроль накожной аппликации) Группа 3 - кукурузное масло подкожно (контроль подкожного введения) Группа 4 - рстиноевая кислота накожно Группа 5 - диоксин накожно Группа 6 - диоксин подкожно

Группа 7 - диоксин накожно + ретнноевая кислота накожно Группа 8 - диоксин подкожно + ретиноевая кислота накожно

Диоксин (накожно и подхожно) вводился животным каждый третий день в течение 25 дней. Ретиноевая кислота в течение эксперимента наносилась накожно три раза (1-й, 7-й и 19-й дни). Применяемая в эксперименте доза диоксина была определена на основе работ групп S.M. Puhvel (Puhvel S.M. cl al, 1982; 1986; 1989; 1991) и A. Poland (1984). Доза накожного применения рстиносвой кислоты была определена на основании данных группы L.S. Birnbaum (Abbott, 1989) и I. Mauer (1961).

Всего в эксперименте было использовано 69 мышей. Каждый 7-й день (день 7, 13, 19, 25 эксперимента) часть животных из всех групп забивалась для контроля динамики действия диоксина и ретиноевой кислоты.

Дорзальная кожа мышей фиксировалась в 4%-ном формальдегиде и заливалась в парафин по общепринятой методике. Всего было изготовлено 283 парафиновых блока (по 4-5 блоков на одну мышь). Кроме того, было приготовлено 28 блоков с образцами нормальной и псориазной кожн человека. Для гистологических исследований срезы кожи толщиной 5цм окрашивались раствором Эозин-Гемалаун по Майеру (Merck, Darmstadt, FRG). Часть препаратов (125) кожи экспериментальных мышей была проанализирована морфометрически на основе общеизвестных принципов (Автандилов Г.Г., 1973; Брэдбери С.Д., 1992) по 20 различным показателям. Статистическая обработка цифровых данных производилась с использованием прикладной статистической программы "Statistica 4.3" ©, StatSoft Inc., 1993.

Гибидизация in situ осуществлялась на основе стандартных методик (Угрюмов, 1991; Uhl, 1988) с использованием некоторых недавно предложенных модификаций (Nürnberg et al, 1995). Получение матриц кДНК мышиных кератинов 1 и 17, а также диоксннового (АН) рецептора человека, их клонирование и последующий синтез соответствующих дигоксигенинмеченных рибозондов осуществлялись в соответствии с общепринятыми методами молекулярной биологии.

Для выявления особенностей распространения среди поражённых дефолиантами жителей Южного Вьетнама отсроченных дноксннспецнфи-ческих кожных нарушений были использованы данные, полученные автором в процессе его работы в лаборатории экотокснкологин человека Совместного Российско-Вьетнамского Тропического Центра (Кунцевич А.Д. и др., 1990; Roumak V.S. et al., 1991; 1992) на основе обследования репрезентативных выборок пациентов в двух сельских районах Южною Вьетнама (провинция Шонг-Бе), один из которых (Бнн-Мн) неоднократно обрабатывался дефолиантами в' ходе войны, а второй (Тяпь-Ми) в зону обработок никогда не попадал. Всего было проведено обследование 877

мужчин парше 2Ü nei, коюрые были ра(делены на ipti фуппы риска в зависимосш 01 cicricun их кошиыа с дефолнашами (Кунпснич Д.Д. и др., 1992; Rouinak V S. et al., 1992). Обследование паниенюп включало комплексное анкетирование и осмотр их кожных покровов с целью выявления щмгненнй, характерных дня токсического действия диоксина. В анкету помимо вопросов, харак iepinyioimix уровень контакта человека с дефолнашами в ходе военных действии, входили вопросы о состоянии кожных покровов анкетируемою » ратные сроки после поражения (Roumak V.S. et al, 1993). У част напнешов возрастом от 30 до 60 лег в стационарных условиях при местной анестезии (новокаин) были взяты нолнослойные (жопппы кожи (2x5 мм) с наружной стороны плеча. Всею было получено 89 бшчпатов кожи: 40 - у пациентов, имевших прямой кошакг с дефолнашами, 27 - у пациентов, имевших косвенный контакт и 22 - у пациентов щ кои (рольной i рулим. Образцы кожи были зафиксированы |> 2,.Vi,-ном т лу гф-альдетндс и 1%-ном OsOj на 5-коллиднновом буфере и обрабоганы по общепринятой схеме для сканирующей электронной микроскопии (Соколовм др., 1988). Полуюнкне срезы (ультраюм LKB-III) образцов кожи были проанализированы морфометрическн согласно стандаршым методам (Автандилов, 1973).

Результаты исследований и их обсухшетще

ОСпцстоксико.чог-ическис результаты эксперимента на животных:

Изменения кожных покровов были первым клиническим признаком ииюкенкацин мышей диоксином, как это было отмечено ранее и для человека (Нага I., 1985). Изменения в весе животных, их двигательной и пищевой активности были выявлены на значительно более поздних стадиях интоксикации и при большей суммарной дозе полученного диоксина.

Результат определения накопления радиоактивно-меченного диоксина в печени экспериментальныч животных показали значительно более высокую 'шолоешпшеп. этою вещества при накожной аппликации - о этом случае ¡¡нинсшшость накопления диоксина печенью была и три раза выше, чем при (¡ч.-ih" i ном впеденни. При этом накожная аппликация диоксина не

только обеспечивала значительно более высокие токсикокинегнческне показатели, но и характеризовалась более высоким уровнем воспроизводимости полученных результатов в сравнении с подкожными инъекциями в масляном растворе.

Особого внимания заслуживает факт резкого усиления токсического действия диоксина одновременным накожным нанесением решноевой кислоты. В 7-й экспериментальной группе (диоксин накожно + PK накожно) уже после третьей аппликации диоксина (в сумме всего 1/200 полулетальной дозы!) погибла большая часть животных. В эюй группе было отмечено самое значительное падение веса тела и тимуса, причём на самых ранних стадиях эксперимента. Этот эффект возможно было бы объяснить возрастанием проницаемости кожи для диоксина в результат активного слущивания эпидермиса, вызываемого ретиноевой кислотой, однако сцинтилляционный анализ показал, что накожное нанесение решноевой кислоты не увеличивает уровня накопления диоксина печенью и, следовательно, не влияет на биодоступность этого вещества. Кроме тою, накожное нанесение ретиноевой кислоты резко усиливало токсический эффект также и подкожного введения .диоксина, что подтверждалось как сниженим веса тимуса у животных из 8-й группы (в среднем на 80% п сравнении с контролем), так и характерными изменениями веса тела. Полученные нами результаты ставят под сомнение предположение о антагонизме диоксина и ретнноидов при их совместном действии на живой организм, . выдвинутые ранее на основе сходстпа симптомов авитаминоза А и интоксикации диоксином у животных. Необходимо отметить, что наша работа является первым примером изучения непосредственного взаимодействия этих веществ in vivo.

Cmpymypa кожных покровов безволосых мъгмей в норме:

Кожа безволосых мышей линии HRS/J характеризуется наличием рудиментов волосяного фолликула: так называемых "угрику^сй" (гомологичных дистальной часта волосяного фолликула) н "дсрмлльпых цист", происхождение которых неясно (Sundberg, 1994).

Наши исследования позволили выявить некоторые неизвестные особенности нормальной струхтуры кожи мышей этой линии: Во-первых, присутствие структурно обособленной группы клеток так называемого "ложа волосяного фолликула" ("bulge" в англоязычной литературе), которым в последнее время отводится ведущая роль в регуляции многих клеточных процессов в волосяном фолликуле. Во-вторых, присутствие в коже безволосых мышей по крайней мере двух типов дермальных цист, различающихся по клеточному составу их эпителия. В-третьих, различные структуры кожи безволосых мышей характеризуются совершенно разным типом экспрессии основных структурных белков эпидермиса - кератинов 1 и 17. Кератин I экспрессировался только в межфолликулярном эпидермисе, а кератин 17 -только в утрикулях и эпителии дермальных цист. Зоны экспрессии этих кератинов не перекрывались, маркируя таким образом совершенно разные популяции кератиноцитов.

Характер действия ретиноевой кислоты на структуру кожи безволосых мышей:

Морфологические эффекты накожного применения ретиноевой кислоты были связаны с резким возрастанием уровня пролиферативной активности в межфолликулярном эпидермисе (акантоз). На 13-й день эксперимента его толщина в три раза превышала норму. Воздейтвие ретиноевой кислоты вызывало полное исчезновение утрикулей к 13-19 дню эксперимента. Хотя инволюция утрикулей вела к потере связи большинства сальных желёз с поверхностью кожи, никаких изменений в структуре этих желёз выявлено не было. Эпителий дермальных цист оставался также без изменений. На экспрессию кератинов ретиноевая кислота не влияла.

Влияние диоксина на структуру кожных покровов и на синтез в них основных структурных белков (кератинов):

Накожное нанесение диоксина вызывало полное исчезновение утрикулей (как н при действии ретиноевой кислоты) и сальных желёз, а также гиперкератинизацию эпителия дермальных цнет, которые значительно \исличнвались в размерах под давлением наполняющих их кератиновых %п)!л is формировали структуры, практически идентичные проявлениям

хлоракне у человека. Дермальные цисты, исходно имеющие эпителий различного типа, реагировали на действие диоксина одинаково - резким усилением кератиннзации, однако характер этой кератинизации был различен и имел сходство или с эпидермальной кератинизацией, или с кератинизапией "волосяного" типа с потерей гранулярного слоя и формированием аморфных кератиновых масс.

Накожное нанесение диоксина вызывало и радикальные изменения в характере экспрессии кератинов 1 и 17 в различных структурах кожи безволосых мышей. Было отмечено появление и дальнейшее усиление экспрессии кератина 1 в эпителии некоторых дермальных цист и в остатках эпителия исчезающих утрикулей. Экспрессия кератина 17 полностью подавлялась в утрикулях уже на самых ранних стадиях аппликации диоксина, но появлялась и постепенно усиливалась в межфолликулярном эпидермисе, достигая максимума к последнему (25-му) дню эксперимента. Характер экспрессии кератина 1 в эпидермисе, а также кератина 17 в дермальных цистах при действии диоксина не менялся.

Вызванный диоксином акантоз эпидермиса был сходен с проявлениями акантоза, вызываемыми действием на кожу ретиноевой кислоты. Кроме того, оба этих вещества не оказывали никакого влияния на экспрессию кератина 1 в шиповатом слое, что позволило нам предположит!, неспецифичный характер действия диоксина и ретиноевой кислоты на клетки эпидермиса.

Исчезновение сальных желёз и утрикулей под действием диоксина до снх пор не имело. объяснения. Инволюция саЛьных желёз была описана как характерный симптом начальной стадии развития хлоракне у человека (Crow K.D., 1970), при этом предполагалось, что клетки эпителия сальных желёз под действием диоксина меняют программу дифференцировки и начинают кератинизироваться (чешуйчатая метаплазия). Их дальнейшая корнификацня приводит к образованию характерных для хлоракне внутридермальных цист, заполненных ороговевшим веществом (Plewig, Kligman, 1975). В отличие от этой схемы, нам не удалось выявить каких-либо признаков метаплазии себоцитов. Те себоцнты, которые уже встали на

путь дифференцнровкн до начала действия диоксина, закнчнвали этот процесс совершенно нормально, производя последние порции сального секрета, однако новых себоцнтов после нанесения диоксина не обраювывалось. Сальная железа заканчивала своё существование, а её место занимала эпителиальная некератинизйрующаяся структура. Таким образом, сальные железы исчезали не за счёт метаплазии их эпителия, а за счёг подавления диоксином его пролиферативной активности.

Инволюция утрикулей при действии диоксина ранее не рассматривалась как отдельный процесс, так как, согласно мнению Б.М. Ри1туе1, утрикули составляют вместе с сальными железами единый комплекс - "сальный фолликул", перетерневающий под действием диоксина перерождение в оротовевающую структуру (РиЬуе! Б.М. с1 а1, 1982). Мы показали, что утрикули и сальные железы в коже безволосых мышей не представляют единой структуры даже не смотря на то, что они связаны морфологически и утрикули имеют функциональное сходство с протоком сальной железы. Акишная экспрессия эпителием утрикулей кератина 17 подтверждает их происхождение из воронки волосяного фолликула (Рап1е1еуеу А.А., Райе Я. ^ а], 1995) и резко отличает их от сальных желёз, не экспрессирующих этот белок. Различие между сальными железами и утрикулями в коже безволосых мышей подтверждается также их различной реакцией на действие рстиносвой кислоты, которая вызывает быстрое исчезновение утрикулей, но никак не влияет на структуру сальных желёз. В отличие от исчезновения сальных желёз, инволюция утрикулей наблюдалась только при накожном (прямом) действии диоксина, а его подкожное введение не оказывало на них никакого действия. Согласно данным гибридизации ¡п л/1и, экспрессия кератина 17 при действии диоксина подавляется в эпителии исчезающих утрикулей и появляется в ннтерфолликулярном эпидермисе в непосредственной близости от их устья, как бы перемещаясь кз одной зоны в ;футую. Все эти факты, а также наши данные о локализации титрирующей "ремонтной" популяции кератиноцитов в области воронки волосяного фолликула '(Рап1е1еуеу е( а1„ 1995), дали нам основания предположить, что ннволюцня утрикулей является не результатом

специфического воздействия диоксина на клеточные процессы в их 3mrTOiHn(Puhvel et al., 1982), а результатом миграции клеток их эпителия в эпидермис в ответ на раздражающее действие этого вещества (т.е. неспецифической реакцией). Этот вывод подтверждается и совершенно аналогичным (исчезновение) действием на утрикули ретиноевой кислоты, обладающей, судя по данным большинства авторов, совершенно отличными от диоксина механизмами регуляции клеточных процессов в коже (Osborne et al., 1987; Puhvel et al., 1991).

Полное исчезновение утрикулей и сальных желёз при действии диоксина показывает, что эти структуры не участвуют в образовании специфических кератинизированных хлоракнеподобных цист в коже мышей линии HRS/J. Этот вывод может служить основанием для корректировки существующего мнения о нарушении функций сальных желёз и о гиперкератинизанни утрикулей (аналога дистальной части волосяного фолликула), как о ключевых механизмах развития хлоракнеподобных проявлений у безволосых мышей (Puhvel et al., 1982) и, вероятно, хлорахне у человека (Cuniiffe et а!., 1975).

Как показали наши исследования, ключевыми структурами в развитии хлоракнеподобных проявлений у безволосых мышей являются дермальные цисты. Происхождение этих структур до настоящего времени оставалось неясным (Montagna et al., 1952; Sundberg, 1994). Нами было показано, что дермальные цисты в нормальной (контрольной) кожг безволосых мышей активно экспрессируют кератин 17, что совершеннко не характерно для себоцнтов, но является отличительной чертой клеток проксимальной части волосяного фолликула (Rosenbach et al., 1995; Panteleyev et al., 1995), что даёт основание предположить происхождение дермальных цист именно из этой части фолликула.

Наши исследования показали, что вне зависимости от типа дермальных цист процесс кератинизации их эпителия был ограничен во времени и завершался, как правило, к 19 дню эксперимента. Между 13-м и 19-м днями эксперимента эпителий большинства цист начинал разрушаться, очевидно из-за снижения пролиферационной активности составляющих его клеток.

исчерпавших свои внутренние возможности к делению. Очевидно, действие диоксина резко стимулирует активность клеток эпителия дермальных цист, в результате чего они реализуют свою потенциальную жизненную программу (определённое количество делений и затем- дифференцировка) в чрезвычайно короткий срок. После реализации этой программы эпителий дермальных цист разрушается.

Совместное действие диоксина и ретиноевой кислоты на структуру кожных покровов безволосых мышей:

Согласно данным, полученным на культуре кератиноцитов, ретиноевая кислота подавляет воздействие диоксина на дифференцировку клеток (Вегкегее! а!., 1995). Поэтому было логично ожидать, что ретиноевая кислота ослабит действие диоксина на кожу животных 7-й экспериментальной группы. Однако, при совместном нанесении этих веществ, все характерные дня действия диоксина изменения в коже мышей (инволюция утрихулей и сальных желёз, кератинизации дермальных цист), проявлялись значительно раньше и были столь же драматически выражены, как и признаки общей интоксикации в 7-й группе. Вместе с тем, к 10-му дню эксперимента в коже мышей этой группы были отмечены и новые эффекты, не свойственные отдельному действию ни диоксина, ни ретиноевой кислоты: практически полное исчезновение гранулярного слоя эпидермиса, выраженный паракератоз, гиперваскуляризация сосочкоаого слоя дермы, резкое увеличение числа вновь образующихся дермальных цист, появление в эпидермисе вакуолизированных клеток и многочисленных участков некроза с активной инфильтрацией. На коже животных появлялись характерные бляшки, представляющие собой участки паракератоза с активным вовлечением полиморфоядерных лейкоцитов (микроабсцесс). Значительные морфологические изменения были отмечены на этой стадии аппликации диоксина и ретиноевой кислоты и в клетках ложа волосяного фолликула, где отмечалась повышенная пролифератнвная активность, очевидно являющаяся источником формирования новых дермальных цист.

Исчезновение гранулярного слоя при совместном нанесении диоксина и ретиноевой кислоты говорит о подавлении синтеза профилаггрина,

являющегося основным компонентом кератогиалиновых гранул (ЗГЬгаск е( а1., 1974). Функции и механизмы регуляции синтеза этого белка до конца не ясны, однако на его функциональную значимость указывает подавление его экспрессии при таких распространённых патологических состояниях кожи, как псориаз и ихтиоз (УоогЬеев е1 а]., 1968; 5уЬег( е1 а!„ 1985). Совместное действие диоксина и ретиноевой кислоты не только подавляет синтез профиллагрина, но вызывает активный паракератоз и гиперваскулярн-зацию в коже безволосых мышей, что также характерно для псориаза. Вероятно, совместно диоксин и ретиноевая кислота обладают способностью воздействовать на пока неизвестные регуляторные механизмы, лежащие в основе не только данной интоксикации, но и нехоторых кожных заболеваний.

Анализ наших результатов показывает, что решающим фактором в развитиии драматического эффекта при совместном нанесении диоксина и ретиноевой кислоты является специфическое синергическое действие этих веществ на эпидермис. Поражение эпидермиса, генерализованное нарушение его основных функций и, как следствие, активное обезвоживание тела животных, очевидно и являлось непосредственной причиной гибели животных из 7-й группы. Взаимодействие диоксина и ретиноевой кислоты в эпидермисе реализуется, по-видимому, на уровне специфических рецепторов или транскрипции каких-либо регулирующих факторов, участвующих в осущестэлени воздействия диоксина на геном клеток кожи, однако механизм этого процесса пока неясен. Исследование этой проблемы могло бы существенно расширить представления о природе токсичности диоксина, однако в настоящее время экспериментальные данные о взаимодействии этих веществ отсутствуют и наша работа является лишь первым шагом в этом направлении.

Характер экспрессии диоксинового (АН) рецептора в коже человека:

Наши исследования впервые показали, что диохснновый рецептор активно эхспрессируется в эпидермисе человека, при этом интенсивность транскрипции его мРНК увеличивается в процессе днфференцировкн

кератиноцитов. Клетки начинают транскрибировать мРНК диоксинового рецептора не сразу после выхода из базального слоя, а на продвинутых стадиях кератинизации - во втором или третьем ряду шиповатых клеток. Сразу над базальным слоем располагаются переходные клетхи эпидермиса, сохраняющие лимитированную способность к делению (Lavker R.M., Sun Т.-Т., 1983). Вероятно, именно эти клетки и образуют зону с низким уровнем (или с отсутствием) экспрессии диоксинового рецептора, мРНК которого, появляется в кератиноцитах только после их окончательного перехода к дифференцировке. Резкое снижение уровня экспрессии Ah-рецептора в псориазной коже, где дифференциовка кератиноцитов протехает по неполной программе, также подтверждает связь его экспрессии с этим процессом. При псориазе способность к пролиферации свойственна не только клеткам базального слоя эпидермиса, но и клеткам вышележащих слоев. Дифференцировка в них подавлена и имеет место только в самом верхнем ряду клеток шиповатого слоя, где мы и выявили транскрипцию Ah-рецептора. Неожиданно высокий для белкового рецептора уровень экспрессии в нормальном эпидермисе и её зависимость от уровня дифференцировки кератиноцитов позволяют предположить, что Ah-рецептор (и, вероятно, его гипотетический лиганд) играют функциональную роль в регуляции клеточных процессов в коже человека.

Исследования кожных покровов пациентов, имевших отдалённый контакт с диоксинсодержащими фитотоксикантами:

Наши исследования в Южном Вьетнаме включали анкетирование населения, направленное на выявление степени поражения дефолиантами, и оценку состояния кожных покровов респондентов (Кунцевич и др., 1990; Roumak et al., 1994).

Анализ данных анкетирования пациентов из 1-й группы риска показал, что приблизительно у половины (48%) пострадавших в течение первых шести месяцев после поражения развивалось хлоракне. В последующие годы у большинства пострадавших наблюдалось восстановление кожных покровов, однако даже в момент обследования и анкетирования, то-есть через 15-20 лет после непосредственного контакта с дефолиантами, во всех

трёх группах риска нами было выявлено .43 пациента с признаками хлоракнеподобных изменений кожи на разных стадиях развития - от рубцующихся до активных комедонов и цист.

8 1-й группе риска (прямой контакт) хлоракнеподобные кожные изменения были вывлеиы у 11,8% пациентов. У трёх пациентов этой группы на скулах бьшн отмечены также пустулы, сопровождающиеся активным воспалением окружающих тканей и характерные для тяжёлой формы протекания хлоракне (Crow K.D.. ¡970; Capisto R. et al, 1988). Во второй группе риска (косвенный контакт) 3% пациентов имели хлоракнеподобные кожные проявления. В контрольной группе таких пациенгопбыло выявлено менее 1%, что лежит в пределах ошибки метода. Эти данные с высокой сзепенью достоверности подтверждают, что рассматрззвяемые ними показателя состояния котхных покровов коррелируют с уровнем поражения дмохсинсодержящиг-ш дефолиантами. Согласно нашим данным, через 15-20 лет после поражения, признаки хлоракне в активной форме или в виде остаточных рубиоя сохраняются приблизительно у четверги людей, имевших хлоракне в течение первого года. Эти данные согласуются с результатами полученными как при изучении последствий промышленных аяярий, так н па Вьетнамских ветеранах CUJA (May, 1982; Wolfe et al., 1988).

Все 33 случая хлоракнеподобных кожных изменений были отмечены нами у мужчин возрастом от 31 до 60 лет, полностью отсутствуя в возрастных группах пациентов моложе 30 лет и старше 60. При этом в 1-й группе риска эти изменения преобладали (с высокой степенью достоверности) у пациентов возрастом 41-50 лет, которые принимали наиболее активное участие в боевых действиях 20-летней давности п имели в среднем более высокую степень поражения дефолиантами.

Помимо хлоракне, для пациентов из группы I (прямой контакт с дефолиантами) были характерны и другие кожные заболевания. Среди пациентов этой группы в 6 раз чаще, чем в контроле (группа 3) встречались случаи повышенной сухости кожи, интенсивного ороговения отдельных её участков, аномально актипной десхвамяиин (между группами 2 зз 3 различий по ним иоказа1Слям выявлено ие было). Эиз проявления

связанны с нарушением процесса дифференцировки кератиноцитов, что является характерной ' чертой токсического действия диоксина на кератиноциты в клеточной культуре (Greenlee et al., 1987). С целью проверки предположения о влиянии диоксина на - процесс клеточной дифференцировки в коже человека in vivo, мы предприняли эллектронно-микроскопические и морфометрические (световая микроскопия) исследования эпидермиса кожи пациентов из 1-й (прямой контакт с дефолиантами) и 3-й (контроль) групп.

Морфометричесхими методами на полутонхих срезах кожи окрашенных по общепринятой методике (Humpry, Pittman, 1974) оценивалось 12 различных параметров, харахтеризующих состояние эпидермиса. Результаты показали, что у пациентов из 1-й группы риска, имеющих признаки хлоракне, значительно увеличена толщина рогового слоя, которая в среднем приблизительно в 3 раза превосходила толщину рогового слоя эпидермиса пациентов из контрольной группы (64 мкм против 23 мкм), причём достоверность этих различий была очень высока (Но = 9,2 х 10->°). Увеличение толщины рогового слоя у пациентов 1-й группы риска происходило за счёт резкого увеличения межкорнеоцитных пространств, что придавало роговому слою сходство с пчелиными сотами. В контрольной группе пациенты имели компактный роговой слой, состоящий из плотно прилегающих друг к другу корнеоцитов. Причиной подобных нарушений в структуре рогового слоя у пациентов, поражённых дефолиантами, могут быть изменения в уровне адгезии между корнеоцитами из-за стойкого нарушения липидного обмена в эпидермисе. Являются ли изменения в роговом слое прямым следствием реализации тех же механизмов, которые ведут к развитию хлоракне, покажут будущие исследования. Ответ на этот вопрос позволит оценить диагностическую значимость выявленного феномена в токсикологии диоксина и родственных ему веществ.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Наши исследования показали что действие диоксина на кожу безволосых мутантнтных мышей активно стимулирует гиперкератинизацию клеток-выходцев из проксимальной части волосяного фолликула, что и приводит к формированию специфических для хлоракне кератинизированных цист. Сальные железы и дистальная часть волосяного фолликула не вовлечены в этот процесс. Эти данные позволяют предложить новую схему развития хлоракне при действии диоксина.

Чувствительность различных кожных структур к действию диоксина определяется исходным типом кератинизации составляющих их клеток: наиболее чувствительны к действию диоксина кератиноциты обладающие "волосяным" типом кератинизации (эпителий дермальных цист), которые и реагируют на действие диоксина специфически вне зависимости от типа его введения (накожного или подкожного). Межфолликулярный эпидермис и утрикули, в норме характеризующиеся эпидермальным типом кератинизации, реагируют лишь на накожное действие диоксина. Эта реакция является неспецифической, как на действие любого другого раздражающего фактора.

Совместное нанесение на кожу диоксина и ретиноевой кислоты даёт специфический синергическнй эффект, не свойственный отдельному действию этих веществ и обусловленный, очевидно, их взаимодействием на молекулярном уровне. Подобная ситгуация может иметь место как в природных условиях, так и в условиях химических производств, где действие диоксина мржет непредсказуемо. усиливаться и/или видоизменяться одновременным действием на- организм человека каких-либо биологически активных веществ, например ретиноидов или стероидных гормонов.

Наши исследования кожи чесловека методом гибридизации /я situ с использованием специфического рибозонда против мРНК диоксинового (Ah) рецептора показали, что этот протеин активно экспрессируется в эпидермисе человека в соответствии с уровнем дифференцнровки кератиноцнтов, и что характер его экспрессии резко меняется при переходе

к различным патологическим состояниям. Это доказывает, что АИ-рецептор и его пока неизвестный внутренний лнганд играют определённую роль в регуляции клеточных процессов в коже. Воздействие диоксина на кожу может осуществляться через нарушение этой регуляции в результате конкуренции диоксина с естественным лигандом за АЬ-рецептор.

Результаты исследования отдалённых последствий поражения жителей Южного Вьетнама диоксинсодержащими дефолиантами показали, что воздействие Оранжевого Агента вызывает достоверные долговременные изменения в кожных покровах, выражающиеся как в хлоракне, так и в изменениях структуры межфолликулярного эпидермиса. Степень выраженности этих проявлений и их устойчивость во времени связаны прямой корреляционной зависимомтыо со степнью поражения людей дефолиантами. Выявленные нами стойкие изменения в структуре рогового слоя поражённых диоксином пациентов, могут иметь функциональное значение, как причина нарушения барьерной функции эпидермиса (Михайлов И.Н., 1979). Наши исследования показали, что высокая специфичность кожных проявлений токсического действия диоксина и чёгкая связь степени их выраженности с уровнем поражения обусловливают перспективность использования дерматологического показателя в оценке эпидемиологических последствий контакта населения с диоксином и для дифференциальной диагностики поражения диоксином.

ВЫВОДЫ

1. В коже безволосых мышей линии НЯЯ/.! представлены структуры (межфоллнкулярнын эпидермис, утрнкули, сальные железы, дермальные цисты), с различными программами кератинизации составляющих их клеток.

2. Диоксин вызывает в популяциях кератиноцитов с разным типом кератинизации (эпидермальным и фолликулярным) клеточные изменения различной направленности и интенсивности.

3. Действие диоксина на эпидермис и утрнкули определяется исходным эпидермальным типом кератинизации этих структур, является

неспецнфическим и имеет черты контактного дерматита. При этом никаких изменений в программе дифференцировки кератиноцитов, составляющих эпидермис и эпителий утрикулей выявлено не было.

4. Эпителий сальных желёз и дермальных цист, представленный кератиноцитами неэпидермального (фолликулярного) типа, является наиболее чувствительной мишенью специфического действия диоксина. При действии диоксина характер клеточной дифференцнровкн меняется в эпителии этих структур радикально. Реакция сальных желёз и дермальных цист в коже мышей линии Ш^Ш может быть использована для разработки метода биотестирования диоксина в различных средах.

5. В отличие от существующего ранее мнения, наши исследования показали, что утрикули и сальные железы не вовлекаются в формирование характерных для хлоракне кератинизированных цист, в силу полного исчезновения этих структур при действии диоксина. Клеточные механизмы исчезновения утрикулей и сальных желёз различны.

6. Основным механизмом развития в коже безволосых мышей хлоракнеподобных изменений, является индуцированная диоксином птерхератшшзация неоднородного эпителия дермальных цист. При этом диоксин воздействует на характер дифференцнровкн составляющих их эпителий клеток в соответствии с потенциальной способностью этих клеток к различным типам кератинизации.

7. Специфические изменения, вызываемые действием диоксина в коже мышей линии Ш^/.! мутантных по гену Иг, яляются адекватной моделью хлоракне у человека.

8. Полученные данные позволяют предположить, что хлоракне у человека является результатом избирательной индукции диоксином гиперкератиннзации популяций клеток, локализующихся в проксимальной части волосяного фолликула, а не результатом метаплазии эпителия сальных желёз.

9. Ретиноевая кислота не только не оказывает терапевтического действия на вызванные диоксином кожные изменения, но и резко усиливает тохсическое действие днокенна на эпидермис экспериментальных животных. Кроме

того, совместное действие этих двух веществ вызывает дополнительные эффекты, не свойственные раздельному действию диоксина и ретиноевой кислоты на кожу.

10. Применение ретиноидов как для терапии хлоракне, так и с косметическими целями, при сохранении контакта пациента с диоксином (работа на химическом производстве или высокий уровень содержания диоксина в тканях тела пациента) не рекомендуется, в связи с активным взаимодействием диоксина и ретиноидов в коже. Возможные последствия этого взаимодействия для здоровья человека пока до конца не ясны.

11. Поражение диоксинсодержащими фитотоксикантами людей в Южном Вьетнаме в ходе II-й Индокитайской войны вызвало долговременные изменения в их кожных покровах.

13. Состояние кожных покровов человека может быть использовано ках адекватный показатель при оценке отдалённых последствий контакта с диоксином, а так же при разработке методов дифференциальной диагностики поражения людей этим веществом.

14. Накожное нанесение диоксина в растворе ацетона является эффективным методом экспонирования мышей линии HRS/J действию минимальных доз этого вещества и характеризуется высоким уровнем биодоступности диоксина и полным спектром как кожных, так и общетоксикологических проявлений его действия.

ПЕРЕЧЕНЬ ПУБЛИКАЦИЙ АВТОРА ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ:

1. Бочаров Б.В., Пантелеев A.A. - Загрязнение окружающей среды полихлорароматическими веществами как экстремальный экологический фактор. В сб. "Организмы, популяции и сообщества в экстремальных условиях", Москва, 1986,: 23-25

2. Пантелеев A.A. - Источники поступления и судьба хлорированных диоксинов и фуранов в природных экостстемах. Проблемы окружающей седы и природных рессурсов 1: 52-63, 1987

3. Пантелеев А.А. - Методы биологического анализа полихлорнров энных диоксинов, фуранов и родственных им соединений. Проблемы окружающей седы и природных рессурсов 9: 26-40, 1987

4. Кунцеввч АД., Румак B.C., Чан Суан Тху, Позвяков С.П., Нгуен Куок Ан, Бочаров Б.В., Пантелеев А.А., Цирлов И.Б., Софровов Г.А. -Экотоксикологический подход к изучению медицинских последствий контакта населения с феноксигербицидами, содержащими 2,3,7,8-ТХДЦ, в Южном Вьетнаме. В сб.: Экология и Токсикология, вып. 2 (М-лы IV пленума правления ВНОТ, декабрь 1990), Ярославль, Изд. "Содействие", 1990, стр. 67-76

5. Румак B.C., Позняков С.П., Пантелеев А.А., Софровов Г.А. -

Экотоксикологическое исследование медицинских последствий контактов с фитотоксикантамн в Южном Вьетнаме. Труды Всес. Конференции по токсикологическим проблемам химических катастроф. Ленинград, 1991, стр. 95-

6. Паятелеев А.А., Румак B.C., Степанова Л.В., Позпегов С.П., Бочаров Б.В.

- Клинические и ультраструктурные характеристики эпидермиса человека на фоне экспозиции действию диоксин-содержащих дефолиантов. В сб. : "Трощентр-9Г\ Москва-Хошимин-Нячанг-Ханой, Изд. "ЮНИФИР", 1992,: 300-304

7. Pozoyakov S, Parteteyev А. - Retinoic acid enhances (he effects of PCB's on the vitamin A status in Wistar rats. Proc. of 8th Int. Symp. "Dloxin-88", 1988

8. Paatefeyev A, Poznyakov S, Bocharov B. - Granuloma-like transformation of subcutaneous connective tissue in hairless and Wistar rats following injection of technical PCB's. Proc. of 8th Int. Symp. "Dioxin-88", 1988

9. PiLite'eyev A, Bocbarov B, Skptzova L. Experimental study of PCB's action on the early life stages of Misgurnus Fossilis. Proc. of 8th Int Symp. "Dioxin-W, 1988

10.PitEteteyer A., Stepaaova L., Roaaak V., Pozayakov S., An N.K., Bocbarov D.

- Skin disorders in people due to different extent of their exposure to dioxin-contaminated phytotoxicants. Proc. of 10th Int. Symp. "Dloxin-W': 18, Germany, 1990

11 .Panteleyev A., Roumak V., Stepanova L., Poznyakov S., Bocharov B. -

Ultramicroscopic aspects of patients epidermis due to different extent of their exposure to Agent Orange. Proc. of 11th Int. Symp. "Dioxin-91" : 252, P42, USA, 1991

12.Panteleyev A., Roumak V., Stepanova L., Antooyuk V. - Some results of dermatological investigations in the South Vietnamese exposed to Agent Orange. Proc. of VI Int. Congr. of Toxicology, Rome, Italy, 1992

13.Panteleyev A., Stepanova L., Bocharov B., Poznyakov S., Antonyak V., Roumak V. -Ultrastructural study of epidermis in rural South Vietnamese Exposed to Agent Orange. In: Herbicides in War, the Long-Term Effects on Man and Nature. Hanoi, Vietnam, 1993, pp.: 227-228.

14.Rosenbach T., Panteleyev A.A., Nürnberg W., Pans R., Czarnetzki B.M. Hair cycle-dependent keratine 17 gene expression in skin of normal mice and hairless mutants. J Invest Dermatol 105 (3): 508, 1995

15.Panteleyev A.A., Thiel R., Nürnberg W., Czarnetzki B.M., Rodenbach T. Influence of 2,3,7,8-TCDD on the expression of keratins 1 and 17 in hairless mouse skin. J Invest Dermatol 105 (3): 496, 1995

16.A.A.Panteleyev, R.Wanner, W.NQrnberg, B.M.Henz, and T.Rosenbacb -Dioxin-binding Ah-receptor expression in normal and psoriatic skin. XXIII Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft Dermatologische Forschung. 26-28 Januar 1996, Münster. :65, 1996

17. A.A.Panteleyev, R.Wanner, R.Thiel, D.Neabert, W.NQrnberg, G.Kokte, B.M.Henz, and T.Rosen bach. - 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin affects the keratin I and keratin 17 gene expression and differentially induces the keratinization in HRS/J hairless mouse skin. XXIII Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft Dermatologische Forschung. 26-28 Januar 1996, Münster. :69, 1996

18. A.A.Panteleyev, R.Pans, R.Wanner, Wamberg, S.EichmQller, B.M.Henz, and T.Rosenbach - Keratin 17 gene expression during the hair cycling in the skin of C57BL/6 mice. XXIII Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft Dermatologische Forschung. 26-28 Januar 1996, Münster. :70, 1996

19. U.Gniber, R.Wuaer, A.Puteieyev, В.М.Неяг ud T.Roeeebacfc - The

expression of the dioxin-receptor is closely associated with the differentiation program оГ human keratinocytes. XXIII Jahrestagung der Arbeitsgemeinschaft Dermatologische Forschung. 26-28 Januar 1996, Münster. :64, 1996

20.Paateleyev A.A., Рам R., Warner R., Nürnberg W., FichmOIIer S„ TMd R., Zfcang J., Czareetzki B.M., Roseabacfc T. Keratin 17 цепе expression in normally cycling murine hair follicles and in the skin of hairless mouse mutants. (J Invest Dermatol). В печати.

21. Paeteleyev A.A., TJiiel R., Ww R., Koide G., Ne^brrt D., Czanetzki B.M., Ronen bach T. 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin (TCDD) affects the keratin I and keratin 17 gene expression in hairless mouse skin. (Brit J Dermatol). В печати

22.Wa.eer R., Panteleyev A.A., Graber U„ Czarwetzkl B.M., Ro«enbach T. -

Retinoic acid modulates the dioxin-receptor expression in keratinocytes by inhibition of differentiation. (Molecular Pharmacology). В печати

Подтесано в печать *J J С У t/Ь Формат Зим "Ш

'/сл. пп. л. л, .Г

Тапгогхлф** Россетажомыщемяя