Автореферат и диссертация по медицине (14.01.15) на тему:Новый способ пластики посттравматических дефектов суставной гиалиновой хрящевой ткани клеточно- тканевыми трансплантатами (экспериментальное исследование)
- Ученая степень
- кандидата медицинских наук
- ВАК РФ
- 14.01.15
Автореферат диссертации по медицине на тему Новый способ пластики посттравматических дефектов суставной гиалиновой хрящевой ткани клеточно- тканевыми трансплантатами (экспериментальное исследование)
На правах рукописи
4850184
ДОЛГУШКИН Дмитрий Александрович
НОВЫЙ СПОСОБ ПЛАСТИКИ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКИХ ДЕФЕКТОВ СУСТАВНОЙ ГИАЛИНОВОЙ ХРЯЩЕВОЙ ТКАНИ КЛЕТОЧНО-ТКАНЕВЫМИ ТРАНСПЛАНТАТАМИ (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)
14.01.15. - Травматология и ортопедия 14.03.02. - Патологическая анатомия
АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
1 6 июн 2011
Самара, 2011
4850184
Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Самарский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.
Научные руководители:
академик РАМН,
доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор
Официальные оппоненты:
доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор
Котельников Геннадий Петрович Волова Лариса Теодоровна
Измалков Сергей Николаевич Туманов Владимир Павлович
Ведущая организация:
Федеральное государственное учреждение «Саратовский научно-исследовательский институт травматологии и ортопедии» Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации.
Защита диссертации состоится «» От1 2011 г. в Ц часов на заседании диссертационного совета Д 208.085.01 при ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России (443079, г. Самара, просп. К. Маркса, 165 Б).
С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Самарского государственного медицинского университета (443001, г. Самара, ул. Арцыбушевская, 171).
Автореферат разослан «29у> _2011 г.
Ученый секретарь диссертационного совета,
доктор медицинских наук, профессор
Корымасов Е.А.
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы исследования
С каждым годом растет число люден, страдающих посттравматичсскимн и деструктивными поражениями хряща крупных суставов. Наиболее часто встречаются полнослоиные хрящевые и костно-хрящевые дефекты, частота которых составляет от 1,5 до 20% от всех видов повреждений суставного гиалинового хряща (Лисицын М.П., Трачук А.П., 2003).
Для оперативного лечения больных применяются разные способы хондропластики, то есть замещение дефектов хряща участками здоровой хрящевой ткани, различными видами трансплантатов и др. (Котельников Г.П., Ларцев Ю.В., 2010). Однако результаты выполняемых операций хондропластнкн часто не удовлетворяют ни врачей, ни пациентов - полноценного восстановления суставного гиалинового хряща не происходит (Писарев В.Б.. Маланин Д.А., 2010). Прогрессирование деструктивных процессов в суставе приводит к инвалидизации больных, что подчеркивает высокую социальную значимость выбора оптимального способа лечения пациентов с данной патологией (Миронов С.П., 2008, Измалков С.Н., 2009).
В последнее время для восстановления тканей стали применять клеточные технологии (Туманов В.П., 2009). Появилась возможность использования клеток с целью регенерации хрящевой ткани при выполнении хондропластнкн (Омельяненко Н.П. и соавт., 2005). Однако существуют проблемы выбора источника для получения клеточного материала (Вагопе L., 2007, Angcrmann Р., 2007). Не решен вопрос об оптимальных путях доставки и фиксации клеточного материала в тканях-мншенях. Наиболее предпочтительными в настоящее время являются биологические или искусственные матрицы-носители для клеток (Волова Л.Т., 2010). Однако оптимальной матрицы для клеточного материала, обладающей хондроиндуктнвными и хондрокондуктивнымп свойствами, до сих пор не найдено (Gillogly S., 2008, Mohamed Al-Rubeai, 2004, Brittberg M et al., 2006).
Цель исследования
Разработка и экспериментальное обоснование нового способа пластики посттравматических дефектов суставного хряща комбинированными клеточно-тканевымн трансплантатами на основе бионосителя и аутологичных клеток из рёберной хрящевой ткани.
Задачи исследования:
1. С помощью клеточно-тканевых технологии разработать новый способ восстановления суставной гиалиновой хрящевой ткани в эксперименте на кроликах.
2. Дать структурную характеристику созданному клеточно-тканевому трансплантату, используя гистологические методы, а также электронную растровую и конфокальную микроскопию.
3. С помощью комплекса морфологических методов исследования изучить в эксперименте на животных характер регенераторных процессов и состояние прилежащей к области повреждений гиалиновой хрящевой ткани при пластике дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами, при замещении их только бионосителем и без применения пластического материала.
4. Построить математическую модель структурно-функционального состояния задней конечности экспериментального животного на основе системного многофакторного анализа результатов функциональных и морфологических методов исследования и оценить динамнку отклонения интегральных показателен.
5. Изучить эффективность предложенного нового способа восстановления суставных поверхностей комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами с позиции доказательной медицины.
Научная новизна
Впервые для лечения костно-хрящевых повреждений разработан новый способ пластики дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантата-
ми (Патент РФ на изобретение № 2383310 от 10.03.2010).
С помощью гистологических методов, а также электронной растровой и конфокальной микроскопии доказана интеграция в бионоситель жизнеспособных аутологнчных фибробластоподобных клеток из реберной гиалиновой хрящевой ткани и возможность их пролиферации после трансплантации с последующей хондродифференцнровкон.
Разработан и внедрен в научно-исследовательский процесс способ оценки структурно-функционального состояния задних конечностей у кроликов в эксперименте (удостоверение на рационализаторское предложение № 132 от 2.03.11).
С помощью макро- и микроскопических методов исследования показано, что после пластики интраоперациоиных костно-хрящевых дефектов аллогенным бионосителем с аутологичными клетками гиалиновой хрящевой ткани происходит полное замещение дефектов регенератом, визуально не отличимым от окружающей суставной поверхности, представленным органотипнчной гиалиновой хрящевой тканью.
На основе системного многофакторного анализа результатов функциональных и морфологических методов исследования построена математическая модель структурно-функционального состояния задней конечности кролика, позволившая оцененить динамику отклонения интегральных показателей у животных экспериментальных групп.
С позиций доказательной медицины обоснована эффективность предложенного нового способа пластики костно-хрящевых дефектов коленного сустава комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами.
Практическая значимость
Результаты применения предложенного нами нового способа восстановления посттравматических повреждений суставного гиалинового хряща путем создания ннтраоперационных костно-хрящевых дефектов и их пластики комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами на основе деминерализованной спон-гнозы и культуры аутологнчных клеток из реберной хрящевой ткани свидетель-
ствуют о высокой эффективности данного способа н открывают перспективы для проведения его клинических испытаний.
Внедрение результатов исследования
Результаты проведенных исследований применяют в учебном процессе на кафедре травматологии, ортопедии и экстремальной хирургии, институте экспериментальной медицины и биотехнологий, кафедре травматологии, ортопедии и поликлинической хирургии ИПО, кафедре оперативной хирургии и клинической анатомии с курсом инновационных технологий ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоц-развнтия России.
Апробация работы
Основные положения диссертационного исследования доложены и обсуждены на итоговой научной конференции молодых ученых Самарского государственного медицинского университета «Аспирантские чтения» (г. Самара, 2009), Приволжском инновационном конвенте в рамках «Зворыкинского проекта» (г. Пермь, 2010).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 3 - в журналах, рекомендованных ВАК РФ.
Получен 1 Патент РФ на изобретение, 1 удостоверение на рационализаторское предложение.
Объем и структура работы
Диссертация изложена на 163 страницах (из них текста 135 страниц) и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных наблюдений, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Библиографический список содержит 92 отечественных и 165 зарубежных источников. Иллюстрации: 17 таблиц и 73 рисунка.
Положения, выноснмые на защиту: 1. Новый способ пластики посттравматических повреждений суставной поверхности, заключающийся в создании интраоперационных костно-хрящевых де-
фектов и заполнении их комбинированными клеточно-тканевымн трансплантатами на основе деминерализованной спонгиозы и культуры аутологнчных клеток из реберной хрящевой ткани, приводит к восстановлению структуры субхондральной кости и формированию новой гиалиновой хрящевой ткани.
2. Бионоснтель, аллогенная деминерализованная спонгиоза, изготовленная по
технологии «Лиопласт», обеспечивает жизнеспособность и пролнфератив-ную активность клеток из реберной гиалиновой хрящевой ткани с последующей их хондродифференцировкой после трансплантации.
3. Результаты выполненного комплекса морфологических и функциональных
методов исследования подтверждают полное восстановление структурно-функционального состояния задней конечности экспериментального животного после выполнения пластики дефектов суставной поверхности новым способом.
4. При выполнении пластики интраоперационных дефектов бионоентеля-ми на поздних сроках происходит анатомическое восстановление суставной поверхности, заполнение дефектов костно-фибрознымн регенератами с очагами остеорезорбции и развитием в прилежащем гиалиновом хряще деструктнвно-днстрофичсских процессов. Без пластики сохраняется деформация суставной поверхности и замещение дефектов волокнистой соединительной тканью, с развитием и прогресснрованисм деструктивных изменений прилежащих тканей.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материал и методы исследования Эксперименты были проведены на базе Института экспериментальной медицины и биотехнологий СамГМУ (директор Л.Т. Волова). Объектом исследования стали 53 разнополых кролика породы «Шиншилла» массой 2,5-3кг. возрастом 1-1,5года.
Все исследования осуществлялись в рамках международных рекомендаций по проведению медико-биологических исследований с использованием животных.
Кроликов содержали в условиях стационарного вивария на растительном витаминизированном рационе при свободном доступе к воде. Перед проведением эксперимента были определены границы биологической нормы для всех тестируемых показателей у интактных животных (5кроликов). Оперативные вмешательства проводили в стерильных условиях с соблюдением правил асептики и антисептики под наркозом (ксилазин и золетил). Оперированных животных содержали поодиночке. Для выведения кроликов из эксперимента, применяли наркоз (одномоментное внутривенное введение летальной дозы тиопентала натрия).
Всем животным интраоперационно создавали два костно-хрящевых дефекта надколенниковой поверхности мыщелков бедренной кости одной или обеих задних конечностей. С помощью зубоврачебного бора при малых оборотах формировали 2 цилиндрических костно-хрящевых дефекта. Диаметр дефектов был 2,5 мм, глубина - 5 мм (рис.1).
Рис. 1. Интраоперационные костно-хрящевые дефекты надколенниковой поверхности мыщелков коленного сустава кролика.
Кролики были разделены на три экспериментальные группы. В I (контрольную) группу вошли 15 животных (22 сустава), пластику дефектов суставной поверхности которым не выполняли. II группу сформировали 17 кроликов (20 су-
ставов), у которых костно-хрящевые дефекты заполняли только бионосителем-аллогенной деминерализованной лиофнлизированнон спонгиозон, изготовленной по методике «Лпопласт». В III группу вошли 16 животных (24 сустава), которым проводили пластику дефектов комбинированными клеточно-ткансвыми трансплантатами с аутологичнымн клетками реберной гиалиновой хрящевой ткани. У кроликов III группы предварительно осуществляли забор материала реберного гиалинового хряща для получения культур аутологнчных клеток.
Для подтверждения жизнеспособности и пролнфератпвной активности клеток, иммобилизованных на бионосителе, использовали конфокальную и растровую электронную микроскопию.
Обследование животных проводили до создания костно-хрящевых дефектов и в динамике на сроках 2 недели, 1 месяц, 3 месяца, 6 месяцев после проведения оперативного вмешательства.
Выполняли осмотр животных, пользуясь разработанным нами способом оценки структурно-функционального состояния задней конечности. Проводили реова-зографию симметричных сегментов задней конечностн, вычисляя основные рео-графическне параметры. Осуществляли термографию области оперированного коленного сустава. Применяли методы лучевой диагностики - рентгенологическое исследование со шкалой оценки рентгенологической картины н компьютерную томографию.
С целью визуализации области пластики дефектов и забора биопсийного материала осуществляли артротомию оперированных коленных суставов. Производили забор дистального эпифиза бедренной кости. Макропрепараты фиксировали в 10% растворе формалина.
Макроскопическую оценку коленных суставов животных в динамике производили с помощью специальной шкалы, разработанной S. О' Driscoll et al. Для микроскопической оценки материала изготавливали серийные срезы толщиной 5-6 мкм на всю глубину блока. Гистологические препараты окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофукенном по Ван-Гнзон, крезиловым фиолетовым. При
оценке характера репаративного процесса в динамике использовали морфологическую шкалу оценки заживления поврежденного суставного гиалинового хряща, предложенную Д. А. Маланнным с соавторами (2004).
Полученные результаты анализировали с помощью традиционных методов описательной статистики с использованием регрессионного, дисперсионного и системного многофакгорного анализа (Котельников Г.П. с соавт., 2001; Боровиков В.П., 2003; Лосев И.И., 2004). Применяли табличный редактор MS Excel со встроенным модулем для статистического анализа данных Attestat (Гайдышев И., 2006). Статистические гипотезы проверялись при помощи t-критерня, U-критерия. Различия между исследуемыми группами считали статистически значимыми при вероятности безошибочного прогноза Р = 95% и более, р <0,05.
На заключительном этапе строили математическую модель структурно-функционального состояния задней конечности кролика, с помощью которой, рассчитывая интегральные показатели Хв/, обосновывали теоретические положения, выявленные в ходе исследования.
Для обоснованного определения эффективности различных методов лечения мы так же проанализировали полученные результаты с позиции доказательной медицины ( Котельников Г.П., Шпигель А.С..2000).
ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
Работа представляет собой экспериментальное исследование, выполненное на живых системах с целью оценки на доклиническом этапе эффективности нового способа восстановления посттравматическнх повреждений суставной гиалиновой хрящевой ткани. Суть способа заключается в создании интраоперацион-ных костно-хрящевых дефектов и заполнении их комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами на основе аллогенной деминерализованной спонги-озы, изготовленной по методике «Лиопласт», и аутологнчных клеток из рёберной хрящевой ткани (Патент РФ на изобретение № 2383310 от 10.03.2010).
Клеточный компонент комбинированного трансплантата получали из реберной гиалиновой хрящевой ткани. Через линейный разрез вдоль нижнего пальпи-
руемого ребра вблизи грудино-реберного сочленения с помощью скальпеля выполняли забор фрагмента реберного хряща размером 0,2Х0,1 см. Дефекты хряща не замещали. Полученный материал использовали для выращивания культур клеток в лаборатории ИЭМБ в течение 3-4 недель.
В качестве матрицы-носителя для клеток была выбрана аллогенная деминерализованная спонгиоза, изготовленная в Самарском банке тканей ИЭМБ по технологии «Лиопласт» из губчатого вещества эпифизов длинных трубчатых костей взрослых кроликов. Данный носитель был выбран благодаря особенностям его гистоархитектоники, хорошей биорезорбируемости и тропности клеток реберной гиалиновой хрящевой ткани к нему. Для создания комбинированного трансплантата аллогенную деминерализованную спонгиозу помещали в чашку Петри и заливали суспензией выращенных культур аутологичных клеток из реберной гиалиновой хрящевой ткани.
Матрица не оказывала на данные клетки какого-либо отрицательного воздействия. При растровой электронной микроскопии через сутки после посадки клеток на поверхности и в порах биоматериала наблюдали расправившиеся удлиненные клетки с 3-5 отростками (рис.2). К концу седьмых суток поверхность спонгиозы покрывалась равномерным монослоем клеток.
Рис.2. Адгезия клеток (указаны стрелками) на бионосителе. Растровая микрофотограмма. Увеличение 1000.
При конфокальной микроскопии обнаруживали светящиеся флуоресцирующие клетки в глубинных слоях бионосителя.
Операцию пластики костно-хрящевых дефектов осуществляли, помещая в сформированные интраоперационно костно-хрящевые дефекты коленных суставов кроликов комбинированные клеточно-тканевые трансплантаты цилиндрической формы, соответствующие по размерам дефекту (рис.3). После ушивания послеоперационной раны иммобилизацию конечности у кроликов не проводили.
Рис. 3 Комбинированные трансплантаты, помещённые в костно-хрящевые дефекты коленного сустава кролика Обследование животных в ближайшие сроки наблюдения (спустя 2 недели после операции) показало постепенное снижение интенсивности болевого синдрома, уменьшение отека параартикулярных тканей. Отмечали улучшение опоро-способности конечности, увеличение объема движений в суставах. В отдаленные сроки наблюдения (спустя 3 н 6 месяцев после операции) результаты обследования в экспериментальных группах отличались.
В группе животных с замещением дефектов комбинированными трансплантатами на протяжении всего наблюдения сохранялась положительная динамика. Отмечали быстрое купирование местной воспалительной реакции, активизацию животных, прогрессивное увеличение объема движений в суставах. К шести месяцам по-
казатель струюурно-функционального состояния конечности возрастал до 25±0,8 баллов, практически не отличаясь от значения у здоровых кроликов (27±0,6 баллов).
При пластике суставных дефектов только бионосителем, в ближайшие сроки наблюдения отмечали достаточно быстрое уменьшение явлений локальной воспалительной реакции, восстановление опороспособности конечности и увеличение объема движений в коленных суставах. Функциональное состояние нижних конечностей спустя 2 и 4 недели оценили в 15± 0,6 баллов и 21±0,5 баллов соответственно. В отдаленные сроки, тем не менее, наблюдали отрицательную динамику, которая выразилась в уменьшении объема движений в суставах и развитии гипотрофии мышц бедра и голени (20±0,5 баллов и 19±0,7 баллов к 3 и 6 месяцу со дня операции).
У кроликов без выполнения пластики суставных дефектов в отдаленные сроки отмечали прогрессирование гипотрофии мыщц бедра и голени, снижение их силы, нарастающее ограничение объема движении в суставе. К 3 месяцу со дня создания дефекта, состояние нижних конечностей животных оценивали в 17±0,7 баллов, а спустя 6 месяцев - всего в 15±0,7 баллов.
У всех животных после выполнения оперативного вмешательства наблюдали местный воспалительный процесс, проявляющийся в локальном повышении абсолютной температуры, регистрируемом при термографии (37,6±0,02 С0). Длительность воспалительного процесса не имела значимых отличий в исследуемых группах животных. Также на ранних сроках во всех экспериментальных группах после операции наблюдалось повышение реографического индекса (0,94±0,02) и амплитудно-частотного показателя(1,3±0,05), что отражало увеличение величины и скорости притока крови к области оперативного вмешательства, а также увеличение объемного кровотока.
Показатели регионарной гемодинамики при пластике дефектов комбинированными трансплантатами, после увеличения на ранних сроках наблюдения имели тенденцию к снижению к первому месяцу после операции. Позже наблюдалась положительная динамика с увеличением реографического индекса (0,82± 0,02) и амплитудно-частотного показателя(0,96±0,05) и приближением их к нормальным показателям к концу наблюдения. На рентгенограммах и компьютерных томо-
граммах коленных суставов в группе животных с пластикой дефектов комбинированными трансплантатами признаков развития и прогрессирования деструктивно-дистрофических процессов в суставе не наблюдали.
При исследовании регионарной гемодинамики на поздних сроках в группах животных без замещения дефектов и с выполнением пластики только бионосителем отмечалось снижение величины и скорости притока крови, а также объемного кровотока в области коленных суставов. При этом в группе без выполнения пластики дефектов показатели регионарной гемодинамики были особенно низкими (РИ=0,75±0,07, АЧП=0,8±0,04). На контрольных рентгенограммах и компьютерных томограммах животных этих групп отмечались признаки прогрессирующего остеоартроза- сужение суставной щели, образование остеофитов.
При макроскопическом исследовании области пластики дефектов комбинированными трансплантатами область операции, начиная с 3 месяца, не отличалась от окружающей суставной поверхности и гиалинового хряща здоровых животных. Ткань регенерата полностью восполняла дефекты, была блестящей, бело-голубого цвета. Спустя 6 месяцев в области операции имелась ровная суставная поверхность без видимых изъянов. В суставах кроликов этой группы не отмечали развития деструктивно-дистрофических процессов.
После пластики только бионосителем, макроскопически наблюдали анатомическое восстановление суставной поверхности. Однако регенераты этих зон визуально отличались от окружающей суставной поверхности - были шероховатыми, мутными, серого цвета с костной плотностью при пальпации инструментом. На поздних сроках наблюдения в суставах животных этой группы прогрессировал спаечный процесс, отмечали единичные случаи развития синовита.
Макроскопическое исследование коленных суставов животных без хондропла-стики в течение всего динамического наблюдения показало сохранение деформации суставной поверхности. Сформированные регенераты не достигали уровня окружающего гиалинового хряща, были тусклыми, серо-розовыми. Регенераты были значительно менее плотными, чем прилежащая гиалиновая хрящевая ткань.
На поздних сроках наблюдения в суставах отмечали развитие спаечного процесса, избыточное образование жировой ткани, частые явления синовита.
При микроскопических исследованиях у кроликов, которым выполнялась пластика дефектов комбинированными трансплантатами, через 1 неделю в серийных срезах определяли пористый трансплантируемый материал, тесно спаянный с окружающими тканями. Прослеживали контуры трабекул пересаженной деминерализованной спонгиозы, все пространство которых было заполнено большим количеством активно пролиферирующих фибробластоподобных клеток. Клетки были продолговатой формы с двумя -тремя отростками, с центрально расположенным округлым ядром и ярко розовой цитоплазмой (рис.4 а,б).
Через 2 недели отмечали полиморфную картину в месте пластики. Область дефекта полностью выполняла ткань регенерата, представленная большим количеством пролиферирующих клеток, между которыми располагались небольшие фрагменты балок рассасывающегося трансплантата. Отмечали появление круглых клеток с центрально расположенным ядром, находящихся в состоянии спонтанной хондродифференцировки. В глубоких зонах регенерата наблюдали активную остеобластическую реакцию.
Рис. 4 (а,б). Пролиферирующие фнбробластоподобные клетки (указаны стрелками), заполняющие участки пористого бионосителя, спустя 1 неделю после операции. Окраска гематоксилин и эозин. Увеличение: рис.4 а -200, рис. 46- 400.
К 3 месяцу наблюдения отмечали полное восполнение дефекта. Поверхность регенерата была покрыта вытянутыми плоскими клетками, плавно переходящими в поверхностный слой прилежащего гиалинового хряща. В некоторых участках поверхностного слоя наблюдали плотно лежащие группы мелких круглых активно пролиферирующих хондроцитов. В промежуточном слое гиалинового хряща отмечали большое количество хондроцитов, располагающихся в виде столбиков. Изогенные группы клеток были редки. Четкого разделения хряща на некальцини-рующийся и кальцинирующийся слои не наблюдали. Пластинка субхондральной кости начинала восстанавливаться. В глубоких слоях обнаруживали зрелую губчатую кость. Через 6 месяцев наблюдения хорошо определяли все слои новообразованного суставного гиалинового хряща. Отмечали большое количество изоген-ных групп хондроцитов по 2-3 клетки в лакуне. В глубокой зоне четко наблюдали некальцинирующийся и кальцинирующийся слои, разделенные базофильной линией. Продолжалось восстановление субхондральной кости. Гиалиновая хрящевая ткань, прилегающая к месту пластики на протяжении всего эксперимента не была изменена, зональность её структуры всегда была хорошо выражена.
При пластике суставных дефектов только бионосителем на ранних сроках наблюдали участки рассасывающегося трансплантата в виде отдельных фрагментов безъядерной костной ткани губчатой формации. Бионоситель плотно сращивался с подлежащей костной тканью с помощью фиброзных перемычек. В костных балках губчатой кости отмечали расширенные полнокровные кровеносные сосуды и лакуны резорбции, выраженную остеобластическую реакцию. К завершению эксперимента наблюдали полное восполнение дефектов зрелой губчатой костной тканью, в которой отмечали формирование отдельных очагов остеорезорбции. В прилежащей гиалиновой хрящевой ткани на поздних сроках наблюдали явления вакуольной дистрофии хондроцитов, уменьшение количества изогенных групп клеток.
В группе животных без выполнения пластики морфологически костно-хрящевые дефекты в динамике постепенно заполнялись рыхлой волокнистой со-
единительной тканью, богатой капиллярами и мелкими клеточными элементами. Регенерат на всей глубине дефекта хорошо прорастал в подлежащие гиалиновый хрящ и губчатую костную ткань. С 3 месяца наблюдения в прилежащем к дефектам гиалиновом хряще прогрессировали дистрофические изменения, проявляющиеся в вакуольной дистрофии хондроцитов, их гибели и опустении лакун изо-генных групп. К завершению эксперимента поверхность фиброзного регенерата не достигала уровня окружающего гиалинового хряща.
С помощью построенной математической модели структурно-функционального состояния задней конечности животного были получены следующие значения отклонения интегральных показателей.
В III экспериментальной группе животных, которым выполняли пластику дефектов комбинированными трансплантатами, на протяжении всего периода наблюдения в динамике значения отклонений интегральных показателей уменьшались, достигая к 6 месяцу со дня операции Хв/ = -0,12±0,002. Это свидетельствовало о прогрессивном улучшении структурно-функционального состояния задних конечностей у животных исследуемой группы.
Во II группе кроликов, костно-хрящевые дефекты которых замещали только бионосителем, на протяжении 4 недель наблюдали уменьшение отклонения интегрального показателя - от Хв/ = -0,22±0,003, спустя 2 недели после пластики, до Хв/ = -0,17±0,004 на 4 неделе с начала эксперимента. Однако в дальнейшем отклонение интегрального показателя прогрессивно увеличивалось, достигая к 3 месяцу наблюдения Хв/ = -0,33±0,003 и Хв/ = -0,44±0,004, спустя 6 месяцев, что подтверждало ухудшение структурно-функционального состояния задних конечностей кроликов II группы.
В I группе животных без выполнения пластики, значения отклонений интегральных показателей прогрессивно увеличивались на протяжении всего наблюдения, составив к б месяцу Хв/ = -0,64±0,003, что свидетельствовало о значительном нарушеннн структурного состояния и функция задних конечностей кроликов I группы (рис.5).
2 недели 4 недели 3 месяца 6 месяцев
Рис. 5 Динамика структурно-функционального состояния нижней конечности у животных разных экспериментальных групп по данным системного
многофакторного анализа (значения Хвг).
С целью оценки полученных в эксперименте результатов с позиций доказательной медицины были вычислены следующие показатели (критерий достоверности во всех расчетах принимали как р=0,05):
1. Снижение абсолютного риска (САР). Выполнение пластики суставных костно-хрящевых дефектов только бионосителем (II группа) позволило снизить абсолютный риск развития неблагоприятных исходов на 46,4% по сравнению с отсутствием замещения дефектов суставной поверхности (I группа). Применение пластики костно-хрящевых дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами по разработанному нами способу (III экспериментальная группа) позволило снизить абсолютный риск на 82,2% по сравнению с группой I.
2. Снижение относительного риска (СОР). Относительный риск развития неблагоприятных исходов во II группе снижен на 53,7%, а в III группе на 95,1% по сравнению с I группой.
3. Повышение абсолютной пользы (ПАП). Повышение абсолютной пользы
при выполнении пластики дефектов суставной поверхности только бионо-
18
снтелем - деминерализованной сионгнозой - составило 46,4% (группа II по сравнению с группой I). А при замещении костно-хрящевых дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами (группа III по сравнению с I группой) соответствующий показатель составил 82.2%.
4. Повышение относительной пользы (ПОП). Относительная вероятность получения благоприятного исхода в III группе животных по сравнению со II группой составила 59,7%.
ВЫВОДЫ
1. Разработан новый способ восстановления посттравматических повреждений суставной поверхности, заключающийся в создании интраоперационных костно-хрящевых дефектов и заполнении их комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами на основе аллогенной деминерализованной спонгиозы, изготовленной по методике «Лиопласт», и аутологичных клеток из рёберной хрящевой ткани.
2. Комплекс морфологических методов исследования с использованием растровой и конфокальной микроскопии свидетельствуют о том, что аллогенная деминерализованная биорезорбируемая спонгиоза поддерживает жизнеспособность и пролиферативную активность аутологичных фибробластоподобных клеток из реберной гиалиновой хрящевой ткани с последующей их хондро-дифференцировкой после трансплантации.
3. Результаты макроскопических и микроскопических методов исследования показали, что при заполнении костно-хрящевых дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами происходит восстановление суставной поверхности, органотипичная регенерация субхондральной кости и гиалиновой хрящевой ткани без деструктивных изменений прилежащего суставного гиалинового хряща.
4. У животных без пластики интраоперационных дефектов сохраняется деформация суставной поверхности и неполное замещение области повреждения волокнистой соединительной тканью, с развитием и прогрессированием дис-
трофии окружающей гиалиновой хрящевой ткани. При пластике только бионосителями происходит восстановление суставной поверхности с заполнением дефектов костно-фиброзными регенератами с очагами остеорезорбции и развитием в прилежащем гиалиновом хряще деструктивно-дистрофических процессов на поздних сроках.
5. Математическая модель, построенная на основании результатов примененного комплекса морфологических и функциональных методов исследования, позволила выявить, что отклонение интегрального показателя к завершению эксперимента у кроликов без выполнения пластики составило Хв/ = -0,64±0,003; с замещением дефектов только бионосителями Хв/ = -0,44±0,004. При пластике комбинированными трансплантатами значение Хв/ максимально приближалось к показателям у здоровых кроликов и составило Хв/ =-0,12±0,002.
6. Новый способ пластики суставных костно-хрящевых дефектов комбинированными клегочно-тканевыми трансплантатами доказал свою эффективность с позиций научно-обоснованной медицинской практики. Его применение позволило предотвратить развитие и прогрессирование в суставах животных вторичных деструктив-пых изменений, снизить риск развили возможных осложнений с 86,4% до 4,2% и достичь более полного и раннего восстановления функции конечностей.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1. Посттравматические повреждения суставной поверхности необходимо лечить хирургическим путем, создавая интраоперационные костно-хрящевые дефекты и замещая их биопласгаческими материалами. Это способствует анатомическому восстановлению зоны повреждения и направлено на профилактику развили деструктивно-дистрофических процессов в гиалиновой хрящевой ткани сустава.
2. Для обеспечения репаративного хондрогенеза в области интраоперационных костно-хрящевых дефектов рекомендуется выполнять их пластику комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами на основе биорезорбируемого носителя и культуры аутологичных клеток из гиалиновой хрящевой ткани.
3. Для уменьшения травматичности операции хондропластики и повышения ее эффективности целесообразно осуществлять забор аутологичного материала вне сустава из реберной гиалиновой хрящевой ткани.
4. В качестве бионосителя для клеток рекомендуется использовать аллогенную деминерализованную лиофилизированную биорезорбируемую спонгиозу, созданную по методике «Лиопласт», которая поддерживает жизнеспособность, пролифератнвную активность и последующую хондродифференци-ровку иммобилизованных на ней клеток.
5. Для оценки состояния задней конечности кролика при проведении экспериментальных исследований целесообразно применять, разработанную балльную шкалу структурно-функциональных характеристик.
6. Результаты, полученные в доклинических испытаниях нового способа восстановления посттравматических повреждений суставной поверхности комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами, подтверждают его эффективность и позволяют рекомендовать его для проведения клинических испытаний.
СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ
1. Котельников, Г.П. Использование аплогенных носителей для культуры клеток хрящевой ткани при хондропластике / Г.П. Котельников, Л.Т. Волова, Ю.В. Ларцев, В.В. Российская, Д.С. Кудашев, Д. А. Долгушкин, М. А. Тер-Терян // «Инновационные технологии в трансплантащш органов, тканей и клеток»: материалы Всероссийской конференции с международным участием. - Самара, 2008. - С. 191-193.
2. Котельников, Г.П. Применение комбинированного клеточно-тканевого трансплантата для лечения деструктивно-дистрофических заболеваний коленного сустава / Г.П. Котельников, Л.Т. Волова, В.В. Российская, Д.А. Долгушкин, М.А. Тертерян // Материалы 18 международного конгресса европейской ассоциации клеточных банков. - Польша, Краков, 2009. — С.249
3. Долгушкин, Д.А. Новый способ пластики дефектов суставного гиалинового хряща комбинированным клеточно-тканевым трансплантатом / Д.А. Долгушкин //
Аспирантские чтения - 2009 (приложение к межвузовскому журналу «Аспирантский вестник Поволжья»). - Самара, 2009. - С. 20-25.
4. Котельников, Г.П. Применение нового комбинированного клеточно-тканевого трансплантата при пластике дефектов суставного гиалинового хряща у кроликов / Г.П. Котельников, JI.T. Волова, Д.А. Долгушкнн, М.А. Тертерян // «Актуальные вопросы тканевой и клеточной трансплантологии»: материалы IV Всероссийского симпозиума с международным участием. - С.-Петербург, 2010. - С. 81.
5. Котельников, Г.П. Новый способ пластики дефектов суставного гиалинового хряща комбинированным клеточно-тканевым трансплантатом / Г.П. Котельников, JI.T. Волова, Ю.Д. Ларцев, Д.А. Долгушкин, М.А. Тертерян // Травматология и ортопедия России. - С.-Петербург, 2010,- №1,- С. 150-155
6. Котельников, Г.П. Экспериментальное обоснование применения бионосителя клеток гиалиновой хрящевой ткани деминерализованной спонгиозы «Лиопласт®» для пластики дефектов суставного хряща у кроликов» / Г.П. Котельников, Л. Т. Волова, Ю.Д. Ларцев, Д.А. Долгушкин, М.А. Тертерян // Сборник тезисов IX съезда травматологов-ортопедов. - Саратов, 2010. - том III. - С. 1114.
7. Котельников, Г.П. Применение аллогенного трехмерного наноструктуриро-ванного бионосителя в составе комбинированного клеточно-тканевого трансплантата для хондропластики у кроликов / Г.П. Котельников, Л.Т. Волова, Д.А. Долгушкин, М.А. Тертерян // Материалы 19 международного конгресса европейской ассоциации клеточных банков. - Германия, Берлин, 2010. - С. 46
8. Долгушкин Д.А. Морфо-функциональная характеристика хондрорегенера-торного процесса при пластике суставных костно-хрящевых дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами / Фундаментальные исследования. - Москва, 2011. - №2. - С. 60-67
9. Долгушкин Д.А. Структурная характеристика и рентгенологическая картина области суставных костно-хрящевых дефектов при их пластике комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами / Аспирантский вестник Поволжья. -Самара, 2011.-№ 1-2 .-С. 151-155
АВТОРСКИЕ СВИДЕТЕЛЬСТВА, ПАТЕНТЫ
Патент РФ на изобретение №2383310 от 10.03.10 по заявке № 2008149207; риоритет от 12.12.2008 г. (Россия). Способ восполнения дефектов суставного хря-а / Г.П. Котельников, Л.Т. Волова, Ю.В. Ларцев, В.В. Российская, Д.А. Долгуш-щ; Опубликовано 10.03.2010 г. Бюллетень № 7.
РАЦИОНАЛИЗАТОРСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
Способ оценки струиурно-функционального состояния задних конечностей у кро-осов в эксперименте. Удостоверение на рационализаторское предложение № 132 от .03.2011, выданное БРИЗ Самарского государственного медицинского университета.
Подписано в печать 29.04.2011 г. Формат 60x80/16. Объем 1 усл. печ. л. Тираж 100 экз. Бумага офсетная. Печать оперативная.
Отпечатано в типографии ООО «ЦПР». 443013, г. Самара, Московское шоссе, 3. Тел. (846) 276-85-92, 276-85-72.
Оглавление диссертации Долгушкин, Дмитрий Александрович :: 2011 :: Самара
ВВЕДЕНИЕ.
Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.
1.1. Современные способы хирургического лечения при повреждениях суставной поверхности.
1.2. Клеточные технологии и тканевая инженерия в лечении повреждений суставного гиалинового хряща.
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
2.1. Общая характеристика наблюдавшихся животных.
2.2 Примененные методы обследования.
2.2.1. Клинический осмотр.
2.2.2. Реовазография.
2.2.3. Термография.
2.2.4. Рентгенография.
2.2.5. Компьютерная томография.
2.2.6. Морфологические методы исследования.
2.2.7. Методы статистического анализа, математического моделирования и доказательной медицины.
Глава 3. НОВЫЙ СПОСОБ ПЛАСТИКИ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКИХ СУСТАВНЫХ ДЕФЕКТОВ КОМБИНИРОВАННЫМИ КЛЕТОЧНО
ТКАНЕВЫМИ ТРАНСПЛАНТАТАМИ.
3.1. Характеристика комбинированных клеточно-тканевых трансплантатов.
3.2. Характеристика нового способа пластики суставных костно-хрящевых дефектов комбинированными трансплантатами.
Глава 4. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ОТДАЛЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
ЭКСПЕРИМЕНТА.
4.1. Итоги клинического обследования.
4.2. Основные итоги инструментального обследования.
4.2.1. Результаты реовазографии.
4.2.2. Результаты термографии.
4.2.3. Результаты рентгенографии и компьютерной томографии.
4.3.Результаты морфологических методов исследования.
4.3.1. Макроскопическая оценка.
4.3.2. Микроскопическая оценка.
4.4. Осложнения.
4.5. Оценка отдаленных результатов лечения в различных экспериментальных группах.
Глава 5. ОБОСНОВАНИЕ ЭФФЕКТИВНОСТИ НОВОГО СПОСОБА ПЛАСТИКИ СУСТАВНЫХ КОСТНО-ХРЯЩЕВЫХ ДЕФЕКТОВ КОМБИНИРОВАННЫМИ КЛЕТОЧНО-ТКАНЕВЫМИ
ТРАНСПЛАНТАТАМИ С ПОЗИЦИЙ ДОКАЗАТЕЛЬНОЙ МЕДИЦИНЫ.
Введение диссертации по теме "Травматология и ортопедия", Долгушкин, Дмитрий Александрович, автореферат
Актуальность темы исследования
С каждым годом растет число людей, страдающих посттравматическими и деструктивными поражениями, хряща крупных суставов. Наиболее часто встречаются полнослойные хрящевые и костно-хрящевые дефекты, частота которых составляет от 1,5 до 20% от всех видов повреждений суставного гиалинового хряща (Трачук А.П., Шаповалов В.М., 2000).
Для оперативного лечения больных применяются различные способы хондропластики, то есть замещение дефектов хряща участками здоровой хрящевой ткани, различными видами трансплантатов и др. (Ларцев Ю.В., 2007). Однако результаты выполняемых операций хондропластики часто не удовлетворяют ни врачей, ни пациентов - полноценного восстановления суставного гиалинового хряща не происходит (Маланин Д.А., Писарев В.Б., 2010). Прогрессирование деструктивных процессов в суставе приводит к инвалидизации больных, что подчеркивает высокую социальную значимость выбора оптимального способа лечения пациентов с данной патологией (Измалков С.Н., 2003; Миронов С.П., 2007).
В последнее время для восстановления тканей стали применять клеточные технологии (Туманов В.П., 2007). Появилась возможность использования клеток с целью регенерации хрящевой ткани при выполнении хондропластики (Cherubino P. et al., 2006). Однако существуют проблемы выбора источника для получения клеточного материала (Lin, Y. et al., 2005). Не решен вопрос об оптимальных путях доставки и фиксации клеточного материала в тканях-мишенях. Наиболее предпочтительными в настоящее время являются биологические матрицы-носители для клеток (Котельников Г.П., Волова JI.T. и соавт., 2008). Однако оптимальной матрицы для клеточного материала, обладающей хондроиндуктивными и хондрокондуктивными свойствами, до сих пор не найдено (Ponticiello, M.S. et al., 2000; Guo X. et al, 2004; Uchio, Y. et al., 2006).
Цель исследования
Разработка и экспериментальное обоснование нового способа пластики посттравматических дефектов суставного хряща комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами на основе бионосителя и аутологичных клеток из рёберной хрящевой ткани.
Задачи исследования:
1. С помощью клеточно-тканевых технологий разработать новый способ восстановления суставной гиалиновой хрящевой ткани в эксперименте на кроликах.
2. Дать структурную характеристику созданному клеточно-тканевому трансплантату, используя гистологические методы, а также электронную растровую и конфокальную микроскопию.
3. С помощью комплекса морфологических методов исследования изучить в эксперименте на животных характер регенераторных процессов и состояние прилежащей к области повреждений гиалиновой хрящевой ткани при пластике дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами, при замещении их только бионосителем и без применения пластического материала.
4. Построить математическую модель структурно-функционального состояния задней конечности экспериментального животного на основе системного многофакторного анализа результатов функциональных и морфологических методов исследования и оценить динамику отклонения интегральных показателей.
5. Изучить эффективность предложенного нового способа восстановления суставных поверхностей комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами с позиции доказательной медицины.
Научная новизна работы
Впервые для лечения костно-хрящевых повреждений разработан новый способ пластики дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами (Патент РФ на изобретение № 2383310 от 10.03.2010).
С помощью гистологических методов, а также электронной растровой, и конфокальной микроскопии доказана интеграция в бионоситель жизнеспособных аутологичных фибробластоподобных клеток из реберной гиалиновой хрящевой ткани и возможность их пролиферации после трансплантации с последующей хондродифференцировкой.
Разработан и внедрен в научно-исследовательский процесс способ оценки структурно-функционального состояния задних конечностей у кроликов в эксперименте (удостоверение на рационализаторское предложение № 132 от 2.03.11).
С помощью макро- и микроскопических методов исследования показано, что после пластики интраоперационных костно-хрящевых дефектов аллогенным бионосителем с аутологичными клетками гиалиновой хрящевой ткани происходит полное замещение дефектов регенератом, визуально не отличимым от окружающей суставной поверхности, представленным органотипичной гиалиновой хрящевой тканью.
На основе системного многофакторного анализа результатов функциональных и морфологических методов исследования построена математическая модель структурно-функционального состояния задней конечности кролика, позволившая оцененить динамику отклонения интегральных показателей у животных экспериментальных групп.
С позиций доказательной медицины обоснована эффективность предложенного нового способа пластики костно-хрящевых дефектов коленного сустава комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами.
Научно-практическая значимость работы
Результаты применения предложенного нами нового способа восстановления посттравматических повреждений суставного гиалинового хряща путем создания интраоперационных костно-хрящевых дефектов и их пластики комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами на основе деминерализованной спонгиозы и культуры аутологичных клеток из реберной хрящевой ткани свидетельствуют о высокой эффективности данного способа и открывают перспективы для проведения его клинических испытаний.
Внедрение результатов работы
Результаты проведенных исследований применяют в учебном процессе на кафедре травматологии, ортопедии и экстремальной хирургии, институте экспериментальной медицины и биотехнологий, кафедре травматологии, ортопедии и поликлинической хирургии ИПО, кафедре оперативной хирургии и клинической анатомии с курсом инновационных технологий ГОУ ВПО СамГМУ Минздравсоцразвития России.
Апробация работы
Основные положения диссертационного исследования доложены и обсуждены на итоговой научной конференции молодых ученых Самарского государственного медицинского университета «Аспирантские чтения» (г. Самара, 2009), Приволжском инновационном конвенте в рамках «Зворыкинского проекта» (г. Пермь, 2010).
Публикации
По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 3 — в журналах, рекомендованных ВАК РФ. Получен 1 Патент РФ на изобретение, 1 удостоверение на рационализаторское предложение.
Объем и структура диссертации
Диссертация изложена на 163 страницах (из них текста 135 страниц) и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав собственных наблюдений, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Библиографический список содержит 92 отечественных и 165 зарубежных источников. Иллюстрации: 17 таблиц и 73 рисунка.
Заключение диссертационного исследования на тему "Новый способ пластики посттравматических дефектов суставной гиалиновой хрящевой ткани клеточно- тканевыми трансплантатами (экспериментальное исследование)"
ВЫВОДЫ
1.Разработан новый способ восстановления посттравматических повреждений суставной; поверхности, заключающийся5; -в*' создании интраоперационных костно-хрящевых дефектов и . заполнении их комбинированными клеточно-тканевыми - трансплантатами.: на основе аллогенной деминерализованной спонгиозы, изготовленной" по методике «Лиопласт»®,, и аутологичных клеток из рёберной хрящевой ткани.
2. Комплекс морфологических методов. исследования с использованием растровой и конфокальной микроскопии- свидетельствуют о том, что аллогенная деминерализованная биорезорбируемая спонгиоза поддерживает жизнеспособность» и пролиферативную активность аутологичных фибробластоподобных клеток из, реберной гиалиновой хрящевой ткани с последующей их хондродифференцировкой после трансплантации.
3. Результаты макроскопических и микроскопических методов исследования показали, что. при заполнении костно-хрящевых дефектов* комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами происходит восстановление суставной поверхности, органотипичная регенерация субхондральной кости и гиалиновой хрящевой ткани без деструктивных изменений прилежащего суставного гиалинового хряща.
4. У животных без пластики интраоперационных дефектов сохраняется деформация суставной поверхности и неполное замещение области повреждения волокнистой соединительной тканью, с развитием и прогрессированием дистрофии окружающей гиалиновой хрящевой ткани. При пластике только бионосителями происходит восстановление суставной поверхности с заполнением дефектов костно-фиброзными регенератами с очагами остеорезорбции и развитием в прилежащем гиалиновом хряще деструктивно-дистрофических процессов на поздних сроках.
5. Математическая модель, построенная на основании результатов примененного комплекса морфологических и функциональных методов исследования, позволила выявить, что отклонение интегрального показателя к завершению эксперимента у кроликов без выполнения пластики составило Хвг = -0,64±0,003; с замещением дефектов только бионосителями Хвг = -0,44±0,004. При пластике комбинированными трансплантатами значение Хв/ максимально приближалось к показателям у здоровых кроликов и составило Хв/ = -0,12±0,002.
6.Новый способ пластики суставных костно-хрящевых дефектов комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами доказал свою эффективность с позиций научно-обоснованной медицинской практики. Его применение позволило предотвратить развитие и прогрессирование в суставах животных вторичных деструктивных изменений, снизить риск развития возможных осложнений с 86,4% до 4,2% и достичь более полного и раннего восстановления функции конечностей.
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
1 .Посттравматические повреждения суставной поверхности необходимо лечить хирургическим путем, создавая.интраоперационные костно-хрящевые дефекты и замещая их биопластическими материалами. Это способствует анатомическому восстановлению зоны повреждения и направлено на. профилактику развития деструктивно-дистрофических процессов в гиалиновой хрящевой ткани сустава.
2. Для обеспечения репаративного хондрогенеза в области интраоперационных костно-хрящевых дефектов рекомендуется выполнять их пластику комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами на' основе биорезорбируемого носителя и культуры аутологичных клеток из гиалиновой хрящевой ткани.
3.Для уменьшения травматичности операции хондропластики и повышения ее эффективности целесообразно осуществлять забор аутологичного материала вне сустава из реберной гиалиновой хрящевой ткани.
4.В качестве бионосителя для клеток рекомендуется использовать аллогенную деминерализованную лиофилизированную биорезорбируемую спонгиозу, созданную по методике «Лиопласт» которая поддерживает жизнеспособность, пролиферативную активность и последующую хондродифференцировку иммобилизованных на ней клеток.
5.Для оценки состояния задней конечности кролика при проведении экспериментальных исследований целесообразно применять, разработанную балльную шкалу структурно-функциональных характеристик.
6. Результаты, полученные в доклинических испытаниях нового способа восстановления посттравматических повреждений суставной поверхности комбинированными клеточно-тканевыми трансплантатами, подтверждают его эффективность и позволяют рекомендовать его для проведения клинических испытаний.
Список использованной литературы по медицине, диссертация 2011 года, Долгушкин, Дмитрий Александрович
1. Авксентьева, М.В. Доказательная медицина в России / М.В. Авксентьева // Проблемы стандартизации в здравоохранении. 2006. — № 2. — С. 3-7.
2. Антипов, A.B. Артроскопическое замещение дефектов суставной поверхности костно-хрящевыми трансплантатами при рассекающем остеохондрите коленного сустава / A.B. Антипов. — Курган, 2003*. — 20 с.
3. Афанасьева, Ю.И. Гистология (гистология, цитология и эмбриология) / Ю.И. Афанасьева, H.A. Юрина.,- М.: Медицина, 1999. 744 с.
4. Бебчук, Н.В. Гистология: учебник для вузов / Н.В. Бебчук, P.P. Челамов, С.Л. Кузнецов, Э.Г. Улумбеков, Ю.А. Челышев. М.: ГЭОТАР-Мед, 2003. - 672 с.
5. Берсенев, A.B. Клеточная трансплантология — история, современное состояние и перспективы / A.B. Берсенев / / Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2005. - № 1.-С. 49-56.
6. Боровиков, В.П. Statistica. Искусство анализа данных на компьютере: для профессионалов / В.П. Боровиков. — СПб.: Питер, 2003. 688 с.
7. Булатов, A.A. Деминерализованные костные трансплантаты и индукционный остеогенез / A.A. Булатов // Травматология и ортопедия Россия. — 2005. -№2. С. 5360.
8. Винокурова, Т.С. Реовазография в оценке состояния периферического кровообращения при удлинении нижних конечностей / Т.С. Винокурова, Ю.Е. Гаркавенко // Вестн. травматол. ортопед. — 2004. №3 — С. 73-77.
9. Волков, A.B. Тканевая инженерия : новые перспективы развития медицины / A.B. Волков / / Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2005. - № 1. -С. 57-63.
10. Волков, A.B. Синтетические биоматериалы на основе полимеров органических кислот в тканевой инженерии / A.B. Волков / / Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. — 2005. — № 2. — С. 43-45.
11. Дедух, Н.В. Скелетные ткани / Н.В. Дедух, Е.Я. Панков / / Руководство по гистологии. Т. 1. - СПб.: СпецЛит, 2001. - С. 284-327.
12. Деев, Р.В. Участие трансфузированных клеток костного мозга в репаративном остеогистогенезе / Р.В. Деев, Н.В. Цупкина, В.Б. Сериков и др; / / Цитология. 2005.- Т. 46, № 9: С. 755-759.
13. Деев, Р.В. Особенности физиологического и репаративного остеогенеза после трансфузии ядросодержащих клеток костного мозга / Р.В. Деев, Н.В. Цупкина, ВС. Сергеев и др. / / Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. 2006. - № 3(5).- С. 54-58.
14. Деев, Р.В. Анализ рынка клеточных препаратов для коррекции патологии скелетных тканей / Р.В. Деев / / Клеточная трансплантология и тканевая инженерия. -2006. Т. 2, №4. - С. 78-83.
15. Деев, P.B. Результаты трансплантации культуры аутогенных стромальных клеток костного мозга в область краевого дефекта длинныхтрубчатых костей / Р.В. Деев; Н.В. Цупкина, Д.Е. Иванов и др. / / Травматология ^ортопедия России. 2007. - № 2(44). С. 57-63.
16. Денисов-Никольский, Ю.И. Актуальные проблемы теоретической и клинической остеоартрологии / Ю.И. Денисов-Никольский, С.П. Миронов, Н.П. Омельченко, И.В. Матвейчук. Москва, 2005. - 334 с.
17. Зазирный, И.М. Тактика хирургического лечения дефектов хряща коленного сустава / И.М. Зазирный, В.Г. Евсеенко // Травматология и ортопедия XXI века: сборник тезисов докладов VIII съезда травматологов-ортопедов России. — Самара, 2006. С. 526-527.
18. Зубарев, A.B. Лучевая диагностика и телемедицина: вместе в XXI век / A.B. Зубарев, В.В. Китаев // Клинический вестник. — 2000. — № 4. — С. 36-38.
19. Измалков, С.Н. Повышенная гравитация кранио — каудального направления в лечении больных с заболеваниями и повреждениями коленного сустава / С.Н. Измалков, A.B. Яшков, М.Г. Котельников; — Самара, 2000. 16с.
20. Измалков, С.Н. Диагностика деформирующего артроза крупных суставов: методические рекомендации для слушателей ИПО, поликлинических хирургов, травматологов, врачей общей практики / С.Н. Измалков, Ю.В. Ларцев. — Самара: СамГМУ, 2003. 16 с.
21. Каземирский, A.B. Особенности асептического некроза мыщелков бедренной и большеберцовой костей (обзор литературы) / A.B. Каземирский, Н.В. Корнилов, К.А. Новоселов // Вестник травматологии и ортопедии им. H.H. Приорова. 2003. -№ 1. - С. 76-80.
22. Ким, И.И. Выделение и культивирование хондроцитов, полученных из различных источников / И.И. Ким / / Клеточная трансплантология и тканевая« инженерия! 2006. - № 4(6). - С. 48-50.*
23. Котельников, Г.П. Математическое моделирование в теоретической и практической медицине / Г.П. Котельников. Самара, 1994; - 110 с.
24. Котельников, Г.П. Доказательная'медицина. Научно-обоснованная медицинская практика / Г.П. Котельников, A.C. Шпигель. Самара, 2000. — 208 с.
25. Котельников, Г.П. Травматология: национальное руководство / Г.П. Котельников, С.П. Миронов. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2008. 808 с.
26. Котельников, Г.П. Новый способ лечения больных с дефектами гиалинового хряща в коленном суставе / Г.П. Котельников, Ю.В. Ларцев, А.Ю. Терсков, Д.С. Кудашев, Д.А. Распутин // Материалы Российского конгресса ASAMI: Курган, 2009. - С. 79-80:
27. Кудашев, Д1С. Комплексный подход в лечении больных с деструктивно-дистрофическими и травматическими поражениями хряща в коленном суставе / Д.С. Кудашев // Аспирантский вестник Поволжья. Самара, 2008. — № 3-4. - С. 108-112.
28. Кудашев, Д.С. Комплексное лечение больных с дефектами гиалинового хряща в коленном суставе / Д.С. Кудашев // Аспирантские чтения — 2009 (приложение к межвузовскому журналу «Аспирантский вестник Поволжья»), — Самара, 2009. С. 37-40.
29. Кудашев Д.С. Оперативное лечение больных с остеоартрозом и дефектом хряща коленного сустава Текст.: дис. . канд. мед. наук / Д.С. Кудашев'- Самара, 2010.- 162с.
30. Ларцев, Ю.В. Новый, лечебно-диагностический комплекс для больных гонартрозом: дис. . докт. мед. наук / Ю.В. Ларцев Самара, 2007.-349с
31. Ларцев, Ю.В. Новый способ лечения больных с дефектами^ гиалинового хряща коленного сустава / Ю.В. Ларцев, Д.С. Кудашев // Сборник тезисов IX. съездатравматологов-ортопедов. Саратов, 2010. - T.I. - С. 451-452.
32. Ларцев, Ю.В. Внутрисуставная оксигенотерапия в лечении больных с деструктивно-дистрофическими заболеваниями коленного сустава / Ю.В. Ларцев, Д.С. Кудашев // Сборник тезисов IX съезда травматологов-ортопедов. — Саратов, 2010. — T.I. — С. 450-451.
33. Лурия, Е.А. Культивирование и дифференцировка остеогенных костномозговых клеток-предшественников / Е.А. Лурия, С.А. Кузнецов, .Н. Генкина / / Методы культивирования клеток. — Л. : Наука, 1987. -С. 276-282.
34. Маланин, Д. А. Новый лечебно-диагностический комплекс для больных гонартрозом : дис. . докт. мед. наук / Д.А. Маланин Волгоград, 2002. -513 с.
35. Маланин Д.А. Пластика полнослойных дефектов гиалинового хряща в коленном суставе: экспериментальные и клинические аспекты репаративного хондрогенеза: автореф. дис. д-ра мед. наук. — Волгоград, 2002.
36. Маланин Д.А. Восстановление повреждений хряща в коленном суставе: экспериментальные и клинические аспекты / Д.А. Маланин, В.Б. Писарев, В.В. Новочадов. Волгоград, 2010. - 455 с.
37. Миронов, С.П. Стандартизированные исследования в травматологии и ортопедии / С.П. Миронов, Э.Р. Маттис, В.В. Троценко. М.: ОАО «Типография «Новости», 2008. - 88 с.
38. Монахов, B.B. Артроскопическое лечение болезни Кенига / В.В. Монахов, И.А. Кузнецов, З.К. Башуров // III конгресс российского артроскопического общества: сборник материалов конгресса. — Москва, 2000. С. 91-92.
39. Новик, A.A. Клеточная терапия / A.A. Новик, P.A. Иванов. М.: «ГЭОТАР», 2008.-239 с.
40. Павлова, В.Н. Синовиальная среда суставов / В.Н. Павлова. М.,1980. 296 с.
41. Платонов, А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии / А.Е. Платонов. — Москва, 2000 52 с.
42. Рыков, А.Г. Эндоскопическая диагностика и лечение хондральных и остеохондральных переломов коленного сустава / А.Г. Рыков // III конгресс российского артроскопического общества: сборник материалов конгресса. Москва, 2000.-С. 17-25.
43. Савельев, В.И. Трансплантация биологических тканей и репаративный гистогенез / В.И. Савельев, A.B. Калинин / / Травматология и ортопедия: практическое руководство. СПб.: Гиппократ, 2004. - Т. 1. - С. 436-505.
44. Сергеева Н.С., Использование аутологичных мезенхимальных стволовых клеток крысы для замещения костного дефекта/ Н.С. Сергеева, И.В.Решетов,
45. И.К.Свиридова// Цитология, 2004, т. 46, № 10. Материалы Международного симпозиума по биологии клетки в культуре «Стволовые клетки, регенерация, клеточная терапия». С. 941.
46. Трачук, А.П. Артроскопическая диагностика и лечение больных с острым гемартрозом / А.П. Трачук, P.M. Тихилов, Г.П. Соленый, В.И. Черный // III конгресс российского артроскопического общества: сборник материалов конгресса. — Москва, 2000. С. 44-45.
47. Трачук, А.П. Основы диагностической артроскопии коленного сустава / А.П. Трачук, В.М. Шаповалов, P.M. Тихилов. Санкт-Петербург, 2000. - 85с.
48. Трактуев, ДО. Стромальные клетки жировой ткани — пластический тип клеток, обладающих высоким терапевтическим потенциалом / Д.О. Трактуев, Е.В. Парфенова, В.А. Ткачук, К.Л. Марч / / Цитология. 2006. - Т .48, №2.-С. 83-93.
49. Туманов В.П. Морфологический анализ клеточного состава ожоговой раны при трансплантации культивированных аллофибробластов / В.П. Туманов // Онтогенез. 1998.-Т. 29, №6.-С. 478.
50. Туманов В.П. Морфологическая характеристика трансплантируемых фибробластов. /Туманов В.П., Пальчун В.Т., Поматилов А.А.// Вестник оториноларингологии. Материалы Российской конференции отоларингологов. Москва 2004. С. 59.
51. Туманов- В. П. Современные клеточные технологии // Новости клинической цитологии.России, т. 11, №3-4. 2007. - С. 34-38.
52. Углов, Б.А. Основы статистического анализа и математического моделирования в медико-биологических исследованиях / Б.А. Углов, Г.П. Котельников, М.В. Углова. Самара, 1994.- 68 с.
53. Фриденштейн, А.Я. Клонирование стромальных клеток-предшественников / А.Я. Фриденштейн / / Методы культивирования клеток. -JL: Наука, 1987. С. 257265.
54. Фриденштейн, А.Я. Стволовые остеогенные клетки костного мозга / А.Я. Фриденштейн // Онтогенез. 1991. - № 2. - С. 189-197.
55. Хлопин, Н. Г. Общебиологические и экспериментальные основы гистологии / Н.Г. Хлопин. Л.: Изд-во АН СССР, 1946. - 491 с.
56. Шишацкая, Е.И. Клеточные матриксы из резорбируемых полигидроксиалканоатов / Е.И. Шишацкая / / Клеточная- трансплантология и тканевая инженерия. 2007. - Т. 2, № 2. - С. 68-75.
57. Эйсмонт, O.JT. Артроскопическая остеохондральная аутотрансплантация в лечении изолированных повреждений хряща коленного сустава / O.JI. Эйсмонт // Украинский журнал малоинвазивной и эндоскопической хирургии. — 2004. № 11.— С. 23-28.
58. Ahn JI, Terry Canale S, Butler SD, Hasty KA. Stem cell repair of physeal cartilage. J Orthop Res. 2004 Nov; 22(6): 1215-21.
59. Andres, B.M. Treatment of osteoarthritic cartilage lesions with osteochondral autograft transplantation / B.M. Andres, S.C. Mears, D.S. Somel // Orthopedics. 2003. - Vol. 26 (ll).-P. 1121-1126.
60. Arinzeh, T.L. A comparative study of biphasic calcium phosphate ceramics for human mesenchymal stem-cell-induced bone formation / T.L. Arinzeh, T. Tran, J. McAlary, G. Daculsi // Biomaterials. 2005. - № 26. - P. 3631-3638.
61. Ashton, I.K. Mesenchymal stem cell therapy in joint disease / I.K. Ashton // Novartis Found Symp. 2007; 249:86-96; discussion 96-102. - P. 170-174.
62. Barone L., Cultured autologous chondrocyte implantation for cartilage repair / Barone L.,// Genzyme Tissue Repair, Cambrige, Massachusetts. — 1997.
63. Bobic V. Autologous osteochondral grafts in the management of articulan cartilage lesions/ V. Bobic// Orthopäde. 1999. - 28(1). - P. 19-25.
64. Bobic, V. Die Verwendung von autologen Knochen-Knorpel-Transplantation in der Behandlung von Gelenkknorpellasionen / V. Bobic // Orthopade. — 2005. — № 28. P. 19; 25.I
65. Boyan, B.D. Osteochondral progenitor cells in acute and chronic canine nonunions / B.D. Boyan, A.I. Caplan, J.D. Heckman // J. Orthop. Res. 2005. - Vol. 17. - № 2. - P. 246-255.
66. Bogan, B.D. Patent US. 600 1352 USA, CRN 11/08. 31.03.1997. Resurfacing cartilage defects with chondrocytes proliferated without differentiation using platelet-derived growth factor/Bogan B.D., Schwartz Z. ; 14.12.1999,424/93.7.
67. Bos, L.A. Ergebnisse und Komplikationen mit dem OATS-Instrumentarium / L.A. Bos, A. Ellermann, E. Silvia // Arthtroscopie. 2000. - № 13. - P. 99-102.
68. Brandt, K.D. Diagnosis and nonsurgical management of osteoarthrosis / K.D. Brandt // Professional Communication. 2001. - 304 p.
69. Brittberg M. Cellular aspects on treatment of cartilage injuries./ Brittberg M, Lindahl A, Nilsson A, Ohlsson C.// Agents Actions Suppl. 1994; 39:237-41.
70. Brittberg, M. Autologous chondrocyte transplantation / M. Brittberg / / Clin. Orthop. Relat. Res. 1999. - Vol. 367 (Suppl). - P. S147-S155.
71. Brittberg M. Articular cartilage engineering with autologous chondrocyte transplantation. A review of recent developments /Brittberg M., Peterson L, Sjogren-Jansson E, Tallheden T, Lindahl A.// J Bone Joint Surg Am 2003; 85-A; Suppl 3: 109-115
72. Brittberg, M. Articular cartilage repair in the knee joint with autologus chondrocytes and periosteal graft. Technical aspects / M. Brittberg // Operative Orthopädie und Traumatologic. 2008. - № 13. - P. 198-207.
73. Bruder SP, Jaiswal N, Haynesworth SE. Growth kinetics, self-renewal, and the osteogenic potential of purified human- mesenchymal stem cells during extensive subcultivation and following cryopreservation. J Cell Biochem. 1997 Feb; 64(2):278-94.
74. Bruder SP, Kurth AA-, Shea M, Hayes WC, Jaiswal N, Kadiyala S. Bone regeneration by implantation of purified, culture-expanded human mesenchymal stem cells. J Orthop Res. 1998 Mar; 16(2): 155-62. Related Articles, Links.
75. Buckwalter J. A., Rosenberg L. C., Hunziker E. B. // Articular cartilage: composition, structure, response to injury, and methods of facilitation,repair / eds J. W. Ewingi —New York: Raven Press, 1990. — P. 19—56.
76. Buckwalter J. A., Einhorn T. A., Bolander M. E., Cruess R. L. // Healing of musculoskeletal tissues / eds. C. A. Rockwood Jr., D. Green. — Philadelphia: J. B. Lippincott, 1996. — P. 261—304.
77. Butler, D.L. Functional tissue engineering for tendon repair : A multidisciplinary strategy using mesenchymal stem cells, bioscaffolds, and mechanical stimulation / D.L. Butler, N. Juncosa-Melvin, G.P. Boivin et al. / / J. Orthop. Res. 2007.
78. Cain, E.L. Treatment algorithm for osteochondral injuries of the knee / E.L. Cain, W.G. Clancy // Clin. Sports Med. 2007. - № 20. - P. 321-342.
79. Caplan, A.I. Mesenchymal stem cells : building blocks for molecular medicine in the 21 st century / A.I. Caplan, S.P. Bruder / / TRENDS in Mol. Med. -2001. Vol. 7, № 6. -P. 259-264.
80. Casabona, F. Prefabricated engineered bone flaps: an experimental model of tissue reconstruction in plastic surgery / F. Casabona, I. Martin, A. Muraglia et al. / / Plast. Reconstr. Surg. -1998. -Vol. 101, № 3. P. 577-581.
81. Chamberlain JR, Schwarze U, Wang PR et al. Gene targeting in stem cells from individuals with osteogenesis imperfecta. Science. 2004 v. 303, p. 1198-1201.
82. Chen, J.M. Autologous tenocyte therapy using porcine-derived bioscaffolds for massive rotator cuff defect in rabbits / J.M. Chen, C Willers, J. Xu et al. / / Tissue Eng. -2007. Vol. 13, № 7. - P. 1479-1491.
83. Cherubino, P. Autologus chondrocyte implantation using a bilayer collagen membrane: a preliminary report / P. Cherubino, F.A. Grassi, P. Bulgheroni, M. Ronga // J. Orthop. Surg.-2006.-№11.-P. 10-15.
84. Chost, P. Osteoarthritis, genetic and molecular mechanisms / P. Chost, M. Smith // Biogerontology. 2002. - № 3. - P. 85-88.
85. Cole, W.G. Advances in osteogenesis imperfecta / W.G. Cole // Clin Orthop. 2002. -Vol. 401.-P. 6-16.
86. Cowan CM, Shi YY, Aalami OO, Chou YF, Mari C, Thomas R, Quarto N, Contag CH, Wu B, Longaker MT.Adipose-derived adult stromal cells heal critical-size mouse calvarial defects. Nat Biotechnol. 2004 May;22(5):560-7. Epub 2004 Apr 11.
87. Curtis, A.S. An in vivo microfabricated scaffold for tendon repair / A.S. Curtis, CD. Wilkinson, J. Crossan et al. / / Eur. Cell. Matr. 2005. - Vol. 11, № 9. - P. 50-57.
88. Darling, E.M. Rapid phenotypic changes in passaged articular chondrocyte subpopulations / E.M. Darling, K.A. Athanasion II J. Orthop. Res. 2005. -Vol. 23, № 2. -P. 425-432.
89. Diduch, D.R. Marrow stromal cells embedded in alginate for repair of osteochondral defects / D.R. Diduch // Arthroscopy. 2000. -Vol. 16. - № 6. - P. 571-577.
90. Dominici, M. Hematopoietic cells and osteoblasts are derived from a common marrow progenitor after bone marrow transplantation / M. Dominici, C Pritchardb, J.E. Garlits et al. //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2004. -Vol. 101, № 32. - P. 11761 -11766.
91. Dominici, M. Minimal criteria for defining multipotent mesenchymal stromal cells. The International Society for Cellular Therapy position statement / M. Dominici, K. Le Blanc, I. Mueller et al: / / Cytotherapy. 2006. - Vol. 8, № 4. -P. 315-317.
92. Dorotka, R. Mid-term results of autologous chondrocyte transplantation^ n knee and ankle. A one- to six-year flow-up study / R. Dorotka, R: Kotz, S. Tratting, S. Nehrer / / Z. Rheumatol. 2004. - Vol. 63, № 5. - P. 385-392.
93. Dorotka, R., Repairof articular cartilage defects treated by microfracture and a three-dimensional collagen matrix/ R. Dorotka, U. Windberger, K. Macfelda et al. / / Biomaterials. 2004. - Vol. 26. - P. 3617-3629.
94. Dragoo, J.L. Bone induction by BMP-2 transduced stem cells derived from human fat / J.L. Dragoo, J.Y. Choi, J.R. Lieberman, J. Huang, P.A. Zuk, J. Zhang, M.H. Hedrick, P. Benhaim // J. Orthop. Res. 2003. - № 4. - P. 622-629.5
95. O Driscoll S.W., Preclinical cartilage repair: current status and future perspectives./ Clin Orthop Relat Res. 2001. Oct;(391 Suppl). - P. 397-401
96. O Driscoll S.W., The role of periosteum in cartilage repair./ S.W. O Driscoll, J.S. Fitzsimmons/ Clin Orthop Relat Res. 2001. Oct;(391 Suppl). - P. 190-207
97. Eberli, D. Tissue Engineering Using Adult Stem Cells / D. Eberli, A. Atala / / Methods In Enzymology. Editors-ln-Chief J.N. Abelson, M.I. Simon. Founding Editors S.P. Colowick, N.O. Kaplan. 2006. - Vol. 420. - P. 287-302.
98. Eppley, B.L. Resorbable PLLA-PGA plate and screw fixation in pediatric craniofacial surgery: clinical experience in 1883 patients / B.L. Eppley, L Morales, R. Wood et al. / / Plast. Reconstr. Surg. 2004. - Vol. 114, № 4. - P. 850-856.
99. Erggelet, C. The operative treatment of full thickness cartilage defects in the knee joint with autologus chondrocyte transplantation / C. Erggelet, M.R. Steinwachs, A. Reichelt // Saudi Med J. 2005. - № 8. - P. 715-721.
100. Ewing J.W. Articular cartilage and knee joint function. Basic science and arthroscopy. — New York: Raven Press, 1990.
101. Fell, H.B. Experiments on the differentiation in vitro of cartilage and bone. Part I / H.B. Fell / / Archiv fbr experimented Zellforchung besonders Gewebezbchtung explanation). 1928/1929. - Bd. VII. - S. 390-411.
102. Ficat R. P., Ficat C., Gedeon P., Toussaint J. B. // Clin. Orthop. — 1979. — Vol. 144. — P. 74—83.
103. Folkman, J. Self-regulation of growth in three dimensions / J. Folkman, M. Hochberg / / J. Exp. Med. 1973. - Vol. 138. - P. 745-753.
104. Gangji, V. Treatment of Osteonecrosis of the Femoral Head with Implantation of Autologous Bone-Marrow Cells / V. Gangji, J.-P. Hauzeur, C Matos et al. II J. Bone and Joint Surg. (Am.). 2004. - Vol. 86. - P. 1153-1160.
105. Gangji, V. Treatment of Osteonecrosis of the Femoral Head with Implantation of Autologous Bone-Marrow Cells / V. Gangji, J.-P. Hauzeur/ / J. Bone and Joint Surg. (Am.). 2005. - Vol. 87. - P. 106-112.
106. Gigante, A. Membrane-seeded autologus chondrocytes: proliferation analysis / A. Gigante, C. Bevilacqua, A. Ricevute, M. Mattioli-Belmote, F. Greco // Knee Surg. Sports Traumatol. Arthrosc. 2006. - № 23. - P. 124-127.
107. Johnson L. L. // Arthroscopy. — 1986. — Vol. 2. — P. 54—69.
108. Grayson, W.L Human mesenchymal stem cells tissue development in 3D PET matrices / W.L. Grayson, T. Ma, B. Bunnell / / Biotechnol. Prog. 2004. -Vol. 20, №3.- P. 905-912.
109. Guilak, F. Adipose-derived adult stem cells for cartilage tissue engineering / F. Guilak, H.A. Awad, B. Fermor, H.A. Leddy, J.M. Gimble // Biorheology. 2004. - № 4. - P. 389399.
110. Guo X., Repair of large articular cartilage defects with implants of autologous mesenchymal stem cells seeded into beta-tricalcium phosphate in a sheep model/ Guo X,
111. Wang C, Zhang Y, Xia R, Hu M, Duan C, Zhao Q, Dong L, Lu J, Qing Song Y.//. Tissue Eng. 2004 Nov-Dec; 10(11-12): 1818-1829:
112. Haddo, 0: The use of chondrogide membrane in autologous chondrocyte implantation / 0. Haddo? S. Mahroof, D. Higgs et al. / / Knee. 2004. - Vol. 11, №1'.-P. 51-55.
113. Hangody, L. Autologus-osteochondral mosaicplasty for the treatment of full-thickness defects of weight-bearing joints: Ten jears of experimental, and clinical experience / L. Hangody, P. Fuies // J. Bone Joint Surg-. Am. 2005. - № 85. - P. 25-32.
114. Hanks T., Comparison of cell viability on anorganic bone matrix with or without P-15 cell binding peptide/ T. Hanks, B.L.Atkinson //Biomaterials. 2004 Aug;25(19):4831-4836.
115. Hart J. Treatment of articular cartilage defects in the knee with autologouschondrocyte grafting/ J. Hart, J. Paddle-Ledinek// Proceedings of the International t
116. Cartilage Repair Society 2nd symposium. Boston: ICRS, 1998.,
117. Hayes, A.J. Macromolecular organisation and in vitro growth characteristics of scaffold-free neocartilage grafts / A.J. Hayes, A. Hall", L. Brown et al. II J. Histochem. Cytochem. 2007. - Vol. 55, № 8. - P. 853-866.
118. Hempfing, C.F. Ergebnisse der Lavage beim Knorpelschlagen / H. Hempfling, J.Jeroch, A.B. Imhoff. Steinkopf Verlag Darmstadt, 2005. - 256 p:
119. Henderson I, Tuy B, Connell D, et al. Clinical results and correlation with MRI findings of autologous chondrocyte implantation (ACI) with: a minimum 12 months prospective follow up. J Bone Joint Surg 2003; 85: 1060-1066
120. Hernigou P, Beaujean F, Lambotte JC. Decrease in the mesenchymal stem-cell pool in the proximal femur in corticosteroid-induced osteonecrosis. J Bone Joint Surg Br 1999; 81:349-355
121. Hokugo, A. Préfabrication of vascularized bone graft using guided bone regeneration / A. Hokugo, Y. Kubo, Y. Takahashi / / Tissue Eng. 2004. -Vol. 10, № 7-8. - P. 978-986.
122. Horas, U. Osteochondral transplantation versus autogenous chondrocyte transplantation. A prospective comparative clinical study/ U. Horas, R. Schnettler, D. Pelinkovic et al. // Chimrg. 2000. - Vol. 71, № 9. - P. 1090-1097.
123. Horwitz E.M., Clinical responses to bone marrow transplantation in children with severe osteogenesis imperfect/ E.M Horwitz, DJ Prockop, PL Gordon// Blood'. 2001. v. 97. №5. p. 1227-1231.
124. Horwitz, E.M. Clinical responses to bone marrow transplantation in children with severe osteogenesis imperfect / E.M. Horwitz, D.J. Prockop, P.L. Gordon et al. / / Blood. -2001. Vol. 97, № 5. - P. 1227-1231.
125. Horwitz, E.M. Clarification of the nomenclature for MSC: The International Society for Cellular Therapy position statement / E.M. Horwitz, K. Le Blanc, M. Dominici et al. // Cytotherapy. 2005. - Vol. 7, № 5. - P. 393-395.
126. ICRS Cartilage Injuiy Evaluation Package, 2000 // Materials of ICRS 1999, 2000 Standards Workshop at Schloss Munchenwieler, Switzerland.
127. Insall J.N. Surgery of the Knee. — New York, Edinburg, London, Melbourne: Churchill Livingstone, 1984.
128. Jager M, Sager M, Knipper A, Degistirici O, Fischer J, Kogler G, Wernet P, Krauspe R. In vivo and in vitro bone regeneration from cord blood derived mesenchymal stem cells. Orthopäde. 2004 Dec;33(12): 1361-72.
129. Jeh, J.K. Effect of hypophysectomy on the proliferation and differentiation of rat bone marrow stromal cells / J.K. Jeh, J.F. Evans, M.M. Chen, J.F. Aloia // Amer. J. Physiol. -1999. Vol. 276. - № 1. - p. 34-42.
130. Khouri, R.K. Préfabrication of composite free flaps through staged microvascular transfer: an experimental and clinical study/ R.K. Khouri, J. Upton, W.W. Shaw / / Plast. Reconstr. Surg. 1991. - Vol. 87. - P. 108-115.
131. Kim, W.S. Tissue Engineered Vascularized Bone Formation Using in vivo Implanted Osteoblast-Polyglycolic acid Scaffold /W.S. Kim, H.K Kim II J. Korean Med. Sci. -2005. Vol. 20. - P. 479-482
132. Koulalis, D. Autologous chondrocyte transplantation forosteochondritis dissecans of the talus / D. Koulalis, W. Schultz, M. Heyden / / Clin. Orthop. -2002. Vol. 395. - P. 186192.
133. Kose, N. Percutaneous autologous bone marrow grafting for simple bone cysts / N. Kose, E. Gokturk, A. Turgut, I. Gunal, S. Seber // Bull Hosp. Jt. Dis. -2002. № 2. - P. 105-110.
134. Krebsbach PH, Mankani MH, Satomura K, Kuznetsov SA, Robey PG. Repair of craniotomy defects using bone marrow stromal cells. Transplantation. 1998 Nov 27;66(10): 1272-8.
135. Kryger, G.S. A comparison of tenocytes and mesenchymal stem cells for use in flexor tendon tissue engineering / G.S. Kryger, A.K. Chong , M. Costa et al. II J. Hand Surg. Am.). 2007. Vol. 32, № 5. - P. 597-605.
136. Kuznetsov, S.A. Circulating Connective Tissue Precursors: Extreme Rarity in Humans and Chondragenic Potential in Guinea Pigs/ S.A. Kuznetsov, M.H. Mankani, A.I. Leet et al. / / Stem Cells. 2007. - Vol. 25, № 7. - P. 1830-1839.
137. Lalan, S. Tissue engineering and its potential impact on surgery / S. Lalan, I. Pomerantseva, J.P. Vacanti // World J. Surg. 2001. - Vol. 25.- № 11. - P. 1458-1466.
138. Lane, J.M. Bone marrow and recombinant human bone morphogenetic protein-2 in osseous repair / J.M. Lane, A.W. Yasko, E. Tomin // Clin. Orthop. 1999. - Vol. 361. - P. 216-227.
139. Langer, R. Tissue engineering / R. Langer, J.P. Vacanti / / Science. -1993. Vol. 260, №5110.-P. 920-926.
140. Larson, B.L. Human Multipotent Stromal Cells MSCs) Undergo Sharp Transition from Division to Development in Culture / B.L. Larson, J. Ylostalo, D.J. Prockop / / Stem Cells. 2007.
141. Lee C.R., Grodzinsky AJ, Hsu HP; Spector M. Effects of a cultured autologous chondrocyte-seeded type II collagen scaffold on the healing of a chondral, defect in a canine model. J Orthop Res. 2003 Mar;21(2):272-81
142. Lendeckel, S. Autologous stem cells adipose) and fibrin glue used to treat widespread traumatic calvarial defects : case report / S. Lendeckel, A. Jodicke, P. Christophis et al. / / J. Cranio-Maxi 11 ofac. Surg. 2004. - Vol. 32, № 6. - P. 370-373.
143. Leonardi, R. Spatio-temporal expression of E-cadherin during human odontogenesis. An immunohistochemical study / R. Leonardi // Minerva Stomatol. 1999. — Vol. 48. - № 7-8.-P. 325-331.
144. Liebau, C. Technik der autologen Knorpel-Knochen-Transplantation am Kniegelenk / C. Liebau, R1 Kramer, H. Haak // Arthroscopic. 2002. - № 13. - P. 94-98.
145. Lindahl, A. Cartilage repair with chondrocytes: clinical and cellular aspects / A. Lindahl, M. Brittberg, L. Peterson // Novartis Found Symp. 2003; 249:175-86; discussion 186-9, 234-8, 239-41.
146. Liu, W. Mesenchymal Stem Cells and Tissue Engineering / W. Liu, L Cui, Y. Cao / / Methods In Enzymology. Editors-ln-Chief J.N. Abelson, M.I. Simon. Founding Editors S.P. Colowick, N.O. Kaplan. 2006. - Vol. 420. - P. 339-361.
147. Livingston, T. In vivo evaluation of a bioactive scaffold for bone tissue engineering / T. Livingston, P. Ducheyne, J. Garino / / J. Biomed. Mater. Res. -2002. Vol. 62, № 1. -P. 1 -13.
148. Lochnert, J. Autologe Chondrozyten-transplantation (ACT) im Kniegelenk / J. Lochnert, K. Ruhnau, A. Gossen, K. Bernsmann, M. Wiese // Arthroscopic. 2005. - № 12.-P. 34-42.
149. Lozinsky, V.I. Polymeric cryogels as promising materials of biotechnological interest / V.I. Lozinsky, I.Y. Galaev, F.M. Plieva et al. / / Trends Biotechnol. 2003. - Vol. 21, № 10.-P. 445-451.
150. Lucarelli E, Donati D, Cenacchi A, Fornasari PM. Bone reconstruction of large defects using bone marrow derived autologous stem cells. Transfus Apheresis Sci. 2004 Apr;30(2): 169-74.
151. Luyten, F.P. Mesenchymal stem cells in osteoarthritis / F.P. Luyten // Curr. Opin. Rheumatol. 2004. - № 5. - P. 599-603.
152. Magnuson P.B. // Surg. Gynecol. Obstet. 1941. - Vol. 73. - P. 1-9.
153. Majima, T. Chitosan-based hyaluranan hybrid polimerfibre for ligament and tendon tissue engineering / T. Majima, T. Irie, N. Sawaguchi et al. / / Proc. Inst. Mech. Eng. H). -2007. Vol. 221, № 5. - P. 537-546.
154. Mandelbaum B.R., Browne J.E., Fu F. et al. // Amer. J. of Sports Medicine. 1998. -Vol. 26, N6.-P. 853-861.
155. Mankani, M.H. Pedicled bone flap formation using transplanted bone marrow stromal cells / M.H. Mankani, P.H. Krebsbach, K. Satomura et al. / / Arch. Surg. 2001. - Vol. 136, № 3. - P. 263-270.
156. Mankani, M.H. Canine Cranial Reconstruction Using Autologous Bone Marrow Stromal Cells / M.H. Mankani, S.A. Kuznetsov, B. Shannon et al. Am. J. Pathol. 2006. -Vol. 168. - P. 542-550.
157. Mankani, M.H. In vivo bone formation by Human marrow stromal cells: Reconstruction of the mouse calvarium and mandible / M.H. Mankani, S.A. Kuznetsov, R.M. Wolfe et al. / / Stem cells. Vol. 24, № 9. - P. 2140-2149.
158. Marcacci, M. Arthroscopic autologus chondrocyte transplantation: technical note / M. Marcacci, S. Zaffagnini, E. Kon, A. Visani, F. Iacono, I. Loreti // Knee Surg Sports Traumatol. Arthrosc. -2001. -№ 10. P. 154-159.
159. Marie, P.J. Cellular and molecular alterations of osteoblasts in human disorders of bone formation / P.J'. Marie // Histol. Histopathol. 2006. - .Vol. 2. - № 2. - P. 525-538.
160. Marlovits, S. Autologous chondrocyte transplantation forthe treatment of articular cartilage defects inf the knee joint. Techniques and results / S. Marlovits, F. Kutscha-Lissberg, S. Aldrian; et al. / / Radiologe. 2004. -Vol. 44, № 8. - P. 63-72.
161. Meisel, H.J. Clinical experience in cell-based therapeutics : disc chondrocyte transplantation a treatment for degenerated or. damaged intervertebral disc / H.J. Meisel, V. Siodla, T. Ganey et al. / / Biomol. Eng. 2007. -Vol. 24, №1 .-P. 5-21.
162. Melamed, E. Restoration of arthritic cartilage defects using autologous chondrocytes transplantation is superior to cartilage-paste graft in rabbit / E. Melamed, D. Robinson, N. Halperin, Z. Nevo / / J. Knee Surg. 2004. -Vol. 17, №1.-P. 6-12.
163. Nefussi, J.R. Mineralization in vitro of matrix formed by osteoblasts isolated by collagenase digestion / J.R. Nefussi, M.L Boy-Lefevre, H. Boulekbache, N. Forest / / Different. 1985. - Vol. 29, № 2. - P. 160-168.
164. Nischida, S. Number of osteoprogenitor cells in human bone marrow markedly decreases after skeletal maturation / S. Nischida, N. Endo, H.J. Yamagiwa // Bone Miner. Metab.-2005.-Vol. 14.-№3.-P. 171-177.
165. Nuki, G. Osteoarthritis: a problem of joint failure / G. Nuki // Z Reumatol. 2005. -№58.-P. 142-147.
166. Ochij M. Articular cartilage repair using tissue engineering technique -novel approach' with minimally invasive procedure / Ml Ochi,. N. Adachi, H. Nobuto et al. / / Artig. Organs. 2004. - Vol. 28, № 1. - P. 28^32.
167. Ohgushi H, Kitamura S, Kotobuki N, Hirose M, Machida H, Muraki K, Takakura Y. Clinical application of marrow mesenchymal stem cells for hard tissue repair. Yonsei Med J. 2004 Jun 30;45 Suppl:61-7
168. Okuma, M. Reinsertion of stimulated nucleus pulposus cells retards intervertebral disc degeneration : An in vitro and in vivo experimental study / M. Okuma, J. Mochida, K. Nishimura et al. / / J. Orthop. Res. 2000. - Vol. 18, № 6. - P. 988-997.
169. Oreffo, R.O.C. Future potential for using osteogenic stem / R.O.C. Oreffo, J.T. Triffitt // Cells and biomaterials in orthopedics. 2007. - Vol. 25. - №. 2. - P. 5-9.
170. Otto, W.R. Tomorrow's skeleton staff: mesenchymal stem cell and the repair of bone and cartilage / W.R. Otto, J. Rao, L.I. Guo // Cell Prolif. 2004. - № 37. - P. 97-110.
171. Outerbridge, H.K. The use of the lateral patellar autologous graft for the repair of a large osteochondral defect in the knee / H.K. Outerbridge, A.R. Outerbridge, R.E. Outerbridge // J. Bone Joint Surg. Am. 2002. - № 77. - P. 65-72.
172. Padua, R. Focal articular cartilage defects in the knee: surgical treatment / R. Padua, R. Bondi // J. Orthoped Traumatol. 2004. - № 1. - P. 63-65.
173. Pfander, D. Presence and distribution of collagen II, collagen I, fibronectin^ and tenascin in rabbit normal and osteoarthritis cartilage / D. Pfander, R. Rahmanzaden, E.E. Scheller // J. Rheumatol. 2004. - № 26. - P. 386-391.
174. Peters, T.A. Osteochondritis dissecans of the patellofemoral joint / T.A. Peters, I.D. McLean // J. Sports Med. 2000. - № 1. - P. 63-67.
175. Peterson L., Menche D., Grande D. et al. Chondrocyte transplantation: an experimental model in the rabbit (abstr.) / Transactions from the 30th Annual Orthopaedic Research Society, 1984. P. 218.
176. Peterson, L. Articular surface injuries and transplantation of chondrocytes : (Pap.) Spec. Day Eur. Fed. Nat. Assoc. Sports Traumatol. EFOST). Munich. 4-7 Juli, 1995 / L Peterson / / Sports Exercise and Injury. 1997. -№ 2. - P. 94-95.
177. Pietsch, M. Surgical treatment of knee joint osteoarthritis in the middle-aged patient / M. Pietsch, S. Hofmann / Wien Med Wochenschr. 2007. - № 157. - P. 7-15.
178. Pittenger, M.F. Multilineage potential of adult human mesenchymal stem cells / MiF. Pittenger, A.M. Mackay, S.C. Beck et al. / / Science. 1999. -Vol. 284, № 5411. - P. 143147.
179. Pittenger, M.F. Human mesenchymal stem cells : progenitor cells for cartilage, bone, fat and stroma / M.F. Pittenger, J.D. Mosca, K.R. Mcintosh / / Curr. Top. Microbiol. Immunol. 2000. - Vol. 251. - P. 3-11.
180. Polykandriotis, E. Autonomously vascularized cellular constructs in tissue engineering : opening a new perspective for biomedical science / E. Polykandriotis, A. Arkudas, R. Horch et al. / / J. Cell. Mol. Med. 2007. -Vol. 11, № 1. - P. 6-20.
181. Pridie K.H. //J. Bone Joint Surg. (Brit.). 1959. - Vol. 41. -P. 618-619.
182. Prockop, D.J. Targeting gene therapy for osteogenesis imperfecta / D.J. Prockop // The new England journal1 of medicine. 2004. - № 4. - P. 2302-2303.
183. Ricevuto, A. Stem cells for regenerative medicine: advances in engineering of tissue and organs / A. Ricevuto // J. Biomed Mater Res. 2008. - № 98. - P. 338-351.
184. Roos, E.M. Effectiveness and practice variation of rehabilitation after joint replacement / E.M. Roos // Curr. Opin. Rheumatol. 2003. - № 15: - P. 160-162.
185. Roos, E.M. Knee Injury and Osteoarthritis Outcome Score (KOOS) development of a self-administered outcome measure / E.M. Roos, H.P. Roos, L.S. Lohmander, C. Ekdahl, B.D: Beynnon // J. Orthop. Sports Phys. Ther. - 2007. - № 28. - P. 88-96.
186. Rougraff, B.T. Treatment of active unicameral bone cysts with percutaneous injection of demineralized bone matrix and autogenous bone marrow / B.T. Rougraff, T.J. Kling // J. Bone Joint Surg. Am. 2002. - № 6. - № 921-929.
187. Qi, X. Comparative study on seeding methods of human bone marrow stromal cells in bone tissue engineering / X. Qi, J. Liu, Y. Chang, X Xu / / Chinese Med. J. 2004. - Vol. 117, № 4. - P. 576-580.
188. Quarto R, Mastrogiacomo M, Cancedda R, Kutepov SM, Mukhachev V, Lavroukov A, Kon E, Marcacci M. Repair of large bone defects with the use of autologous bone marrow stromal cells. N Engl J Med 2001; 344; 5: 385-386
189. Reddi, A.H. Bone morphogenetic proteins, bone marrow stromal cells, and mesenchymal stem cells. Maureen Owen revisited / A.H. Reddi / / Clin. Orthop. Relat. Res. 1995.-№313.-P. 115-119.
190. Reiter, I. Spontaneous Differentiating Primary Chondrocytic Tissue Culture : A Model for Enchondral Ossification / I. Reiter, M. Tzukerman, G. Maor / / Bone. 2002. -Vol. 31, №2.-P. 333-339.
191. Robinson,D. Auto-logous chondrocyte transplantation for reconstruction of isolated joint defects : the Assaf Harofeh experience / D. Robinson, H. Ash, D. Aviezer/ / Isr. Med. Assoc. J. 2000. -Vol. 2, № 4. - P. 290-295.
192. Rougraff BT, Kling TJ- Treatment of active unicameral bone cysts with,percutaneous injection of demineralized bone matrix and autogenous bone marrow. J. Bone Joint Surg Am. 2002 Jun;84-A(6):921-9
193. Schoeters, G.E. Mineralization of adult mouse bone marrow in vitro / G.E. Schoeters, L. de Saint-Georges, R. van den Heuvel, 0. Vanderborght / / Cell Tissue Kinet. 1988. -Vol. 21, №5.-P. 363-374.
194. Shang, Q. Tissue-engineered bone repair of sheep cranial defects with autologous bone marrow stromal cells / Q. Shang, Z. Wang, W. Liu et al. / / J. Craniofac. Surg. -2001. Vol. 12, № 6. - P. 586-593.
195. Smith A.U. // Nature. 1965. - Vol. 205. - P. 782—784.
196. Sonoyama, W. Multipotent stem cells in dental pulp / W. Sonoyama, T. Yamaza, S. Gronthos, S. Shi / / Culture of human stem cells. Ed. Freshney R.I., Stacey G.N., Auerbach J. M. Wiley-lnterscience. A John Wiley S. Sons, Inc., 2007. -P. 187-206.
197. Srouji, S. Bone marrow stem cells and biological scaffold for bone repair in aging and disease / S. Srouji, E. Livne // Mech Ageing Dev. 2007. - № 2. - P. 281-287.
198. Steck, E. Induction of intervertebral disc-like cellsfrom adult mesenchymal stem cells / E. Steck, H. Bertram, R. Abel et al. Stem Cells. 2005. - Vol. 23. -P. 403-411.
199. Sun, J.S. The role of muscle-derived stem cells in bone tissue engineering / J.S. Sun, S.Y. Wu, F.H. Lin // Biomaterials. 2005. - № 18. - P. 3953-3960.
200. Temenoff, J.S. Review: tissue engineering for regeneration of articular cartilage / J.S. Temenoff, A.G. Mikos // Biomatetials. 2000. - № 21. - P. 431-440.
201. Tholpady, S.S. Mesenchymal stem cells from rat visceral fat exhibit multipotential differentiation in vitro / S.S. Tholpady, A.J. Katz, R.C. Ogle / / Anat. Rec. A Discov. Mol. Cell. Evol. Biol. 2003. - Vol. 272, № 1. -P. 398-402.
202. Vad, V.B. Managemement of knee osteoarthritis: knee lavage combined with hylan versus alone / V.B. Vad, A.L. Bhat, T.P. Sculco, T.L. Wickiewicz // Arch Phys Med Rehabi. 2007. - № 5. - P. 634-637.
203. Vacanti, C.A. Replacement of an avulsed phalanx with tissue-engineered bone / C.A. Vacanti, L.J. Bonassar, M.P. Vacanti, J. Shufflebarger/ / N. Engl. J. Med. 2001. - Vol. 344.-P. 1511 -1514.
204. Verfaillie, C.M. Adult stem cells: assessing the case for pluripotency / C.M. Verfaillie // Trends in cell biology. 2002. - Vol. 12. - № 11. - P. 502-508.
205. Wakitani, S. Myogenic cells derived from rat bone marrow mesenchymal stem cells exposed to 5-azacytidine / S. Wakitani, T. Saito, A.T. Caplan // Muscle Nerve. 1995. -Vol. 18,№ 12.-P. 1417-1426.
206. Wang, G. Influence of different mechanical environments on repair of cartilage defect with rabbit marrow mesenchymal stem cells / G. Wang, Y. Liu, Y.X. Shan / Zhongguo Xiu Chong Jian Wai Ke Za Zhi. 2004. - Vol. 18, № 2. -P. 96-99.