Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Нейрофармакологическое изучение механизмов взаимодействия типичных и атипичных нейролептиков с ингибиторами каналов кальция

На правах рукописи

ГУЛИЕВА СЕВИНДЖ ТОФИГ КЫЗЫ

НЕЙРОФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМОВ

ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ТИПИЧНЫХ И АТИПИЧНЫХ НЕЙРОЛЕПТИКОВ С ИНГИБИТОРАМИ КАНАЛОВ КАЛЬЦИЯ: РОЛЬ ДОФАМИНЕРГИЧЕСКИХ СИСТЕМ МОЗГА

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

Москва- 2005

Работа выполнена на кафедре фармакологии (зав. - д.м.н., проф. М.М.Ганиев) Азербайджанского медицинского университета и в лаборатории нейрохимической фармакологии (зав. - член-корр. РАМН К.С. Раевский) ГУ НИИ фармакологии им. В.В. Закусова Российской Академии медицинских наук

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор М.М.Ганиев Научный консультант:

член-корреспондент РАМН, профессор К.С. Раевский Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Т.А.Воронина доктор биологических наук Г.А.Романова Ведущая организация:

Российский Государственный Медицинский Университет

Защита состоится «_»__2005 г. в часов

на заседании Диссертационного совета Д.001.024.01 в ГУ НИИ фармакологии им В.В. Закусова РАМН по адресу: 125315, Москва, ул. Балтийская, 8.

С диссертацией можно ознакомиться в Ученой части ГУ НИИ фармакологии РАМН по адресу: 125315, Москва, Балтийская ул., 8.

Автореферат разослан «_»_2005 г.

Ученый секретарь Диссертационного совета,

доктор медицинских наук Е.А.Вальдман

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБО ГЫ Ак1уальность темы В настоящее время нейролептики прочно вопли в праюическчю медицин\ в качестве основных антипсихотических средств По современным представлениям основным свойством нейротептиков. определяющим их эффективность при лечении психозов, является способность снижать активность центральной дофаминер1ической нейропередачи (ГЯ Авруцкий.1988 К С Раевский.1998. 2000) В то же время, серьезным недостатком большинства использ\емых в настоящее время в клинике нейролептических средств явтяегся развитие при их длительном применении экстрапирамидных нарушений (С Н Мосолов. 2001, Deutsch. 1991) Кроме юго. известно, что 25-30% пациентов, страдающих шизофренией, проявляют резистентность к нейролешической терапии (И А Коз юва. 2003) В связи с л им. одним из приоритетных направлений психофармакологии является направленный поиск и создание веществ, обладающих высоким антипсихотическим потенциалом, но не вызывающих побочных эффектов В настоящее время в клинике психотических состояний успешно применяется целый ряд лекарственных средств (КС Раевский. 2002.Goldstem.2000). к числу которых относятся такие достаточно хорошо изученные соединения, как сульпирид, клозапин, раклоприд и другие К этому же классу нейролептиков можно отнести и новый препарат оланзапин (Zjprexa. Eli Lilly), успешно внедряемый в последние годы в клиническую практику (Tollefson.2000) Уникальный спектр психофармакологических свойств оланзапина. высокая клиническая эффективность соединения, стойкость его ¡ерапевтического эффекта при низкой частоте возникновения побочных эффектов позволяют отнести данный препарат к числ\ наиболее перепек швных атипичных нейролептиков

Другой, не менее важной, проблемой современной психофармакологии является изыскание средств способных корригировать побочные эффекты, развивающиеся при применении нейролептиков (Suddath. 1991. Markowitz, 1995: Soarcs-Weizer. 2004) К их числу можно отнести группу ингибиторов кальциевых каналов (ИКК). вазодилататорные и антиаригмичсские свойства которых изучены достаточно потно, что обусловливает их широкое клиническое применение в терапии как заболеваний сердечно-сосудистой системы, так и ряда патологий неврологического профиля -инсульта, мигрени, сенильных расстройств (Vanhoutte et al, 1988; Markowitz. 1995; Sareen. 2002). Наконтен также ботьшой объем данных, свидетельствующих об уникальном психофармакологическом профите ИКК В частности, описаны антидепрессивные, анксиотигические и противос\дорожные.эффекты этих соединений (Fulga. 1997. Chakrabarli et al, 1998, Garen.

2003) В iü

о»

tfsflи

I «к»

же время, имеющиеся в литературе данные об аши юфамипергических »ффеюач некоюрых представителей класса ИКК в частное 1 и. верапами та и чиииа^ма юсталочно противоречивы Следуе! отметить что в литераторе прамичсски отсутствуют свеления о механизмах взаимодействия ИКК с атипичными нейролептиками, в том числе, с отанзапиноч

Цель и задачи исследования Целью представленной работы яви юсь комплексное изучение механизмов взаимодействия ишибиюров кальциевых каналов и нейролептиков атипичного профиля клозапииа и оланзапина, с использованием ряда поведенческих и нейрохимических методов

В соответствии с указанной це 1ыо были поставлены следующие задачи

1 Провести сравните тьное изучение эффектов классических и атииичных нейролептиков на поведенческие показатели животных в тесгс «открытое поте».

2 Исследовать влияние ингибиторов кальциевых каналов различной химической структуры верапамила. дилтиазема. нифедипина, а также циннаризина на параметры поведения крыс в тех же условиях,

3 Изучить эффекты совместного введения классических и атипичных нейролептиков с

ингибиторами кальциевых каналов на поведенческие показатели животных в тесте «открытое поле»,

4 Провести нейрохимическое изучение эффектов галоперидола. клозапииа и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в струкгурах головного мозга крыс.

5 Исследовать эффекты ингибиторов кальциевых каналов верапамила, ди 1тиазема и нифедипина на содержание моноаминов и их метаболитов в сфуклурах моз! а крыс

6 Изучить влияние ишибитора кальциевых каналов верапамила и атипичною нейролептика оланзапина на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс при их совместном введении

Научная новизна. Впервые изучено влияние комбинации 1ипичных и атипичных нейролептиков -галоперидола. сулышрида. клозапина, оланзапина и ишибигоров кальциевых каналов- верапамила, дилтиа!сма и нифедипина на показатели двигательной, исследовательской и ориентировочной активности крыс в тесте «открытого поля» Ингибиторы кальциевых каналов при их введении на фоне 1 алоперидола прояв ш ш антаюнизм по отношению к угнетающему действию нейротепшка, что приводило к достоверному дозо!ависимому увешчению параметров поведения животных При совместном введении галоперидола и лилтиазема наблюдаюсь значительное увеличение локомоюрнои акишностат* живр|нь«, сниженной вследствие введения неиро (спгика

« чГ . <'8

'Н ч

Комбинация сутьпирида и дитгиазема не оказывала влияния на регистрируемые параметры повеления крыс

При нейрохимическом изучении эффектов совместного введения верапамита и отанзапинд на содержание моноаминов и их метаботитов в структурах мозга крыс впервые обнаружено более выраженнпое увеличение содержания метаболита дофамина ДОФУК и ГВК в 1игтокампе и прилежащем ядре в сравнении с эффектами каждою т веществ в отдельности Наблюдавшееся при введении оланзапина повышение содержания норадреналина в прилежащем ядре мота устранялось в случае использования комбинации отанипина с верапамитом Результаты исследования раскрывают новый аспект механизма действия ингибиторов кальциевых каналов различной химической структуры - их способность проявлять антагонизм по отношению к угнетающему действию нейролептиков что обус ювлено. по-видимому, способностью ИКК позитивно модулировать дофаминергическую передачу в моз! е

Научно-практическая значимость. Полученные в работе данные расширяю! существующие представления о нейрофармакологических и нейрохимических механизмах психотропного действия ингибиторов каналов кальция а также вносят существенный вклад в понимание нейрохимических основ вшимодействия типичных и атипичных нейролептиков с ИКК Результаты исследования могут быть исполыованы при разработке новых стратегий терапии психических расстройств

Апробации работы. Результаты работы были доложены и обсуждены на 8 Межрегиональной конференции Европейской котчегии по нейропсихофармакологии (Москва. 2005). ряде респубтиканских конференций, а также на научных конференциях кафедры фармакологии Азербайджанского медицинского университета и межлабораюрной конференции отдела фармакологии ГУ НИИ фармакологии им В В Закусова РАМН

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 5 статей (1 в печаш) и 6 теэисов

Структура диссертации. Диссертация изложена на 128 страницах машинописного 1екыа и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Список литературы включает 308 литературных источников, из них 16 отечественных и 292 зарубежных. Работа итлюстрирована 9 таблицами и 6 рисунками

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Pd6oid бы id выпо шена на 460 бе 1ы\ беспородных крысах-самцах массой I 80-240 г и 45 крысах линии Вистар массой 160-240 г

В исс (едовании исгюлыонали следующие вещества мюиериго! (lansscn Pharmaceutica Вельгия). сульпирид (Serva, ФРГ), кломпин (AWD Германия) оланзапин (Eli Lilly США), верапамил (Orion Farmaceutical Финляндия) дил1иа!ем (Ratiopharm GmbH 1 ермания). ииннаризин (Gedeon Richter Венгрия), нифедипин (Balkanpharma Бол! ария)

Все соединения готовились непосредственно перед использованием в виде водной суспензии Галоперидол и оланзапин растворя ти с добав1ением «Твин-80», клозанин- в капле уксусной khcioiw и доводили до нужного объема физио югическим раствором Ocia'ibHbie вещества растворяли в 0.9% NaCl Все испо 1ьзованные в экспериментах фармаколошческие агенты вводились внутрибрюшинно галоперидол (0.5 и 3 mi/кг). сульпирид (100 мг'кг) клозапин (20 мг/кг). оланзапин (0,5 и 5 мг/кг), верапамил (2, 5. 7,5. 10 15 и 25 mi'кг), дилтиазем (5. 10 и 25 мг/кг), нифедепин (5, 7.5, 10 и 25 mi/кг), ииннаризин (25 и 50 мг/кг)

Изучение соединений производили с учетом времени наступления ожидаемого максимума поведенческого эффекта

В нейрохимических опытах но определению содержания моноаминов и их метаболитов исследуемые антипсихо1ические вещества - клозапин и отанзапин вводи ги вну трибрюшинно за 45 мин до декапитации животных, при сочеганном введении оланзапина с верапамилом инъекция первого осуществлялась за 2 ч . а последнею- ¡а 30 мин до забоя

1. Методика оценки локомоторной активности животных в «открытом поле»

Д 1я оценки поведенческих покате ich крыс использовался тес! «открытое поле» Для избежания ь шяния суточных ршмов на поведенческие показатеш животных, эксперименты проводили в одно и то же время суток Регистрация параметров поведения осуществилась автоматически с помощью злекфонно-оптического прибора РОДОО-2 в котором активность животных определяется путем подсчета количеыва пересечений световых лучей на четырех уровнях относительно рабочею поля (дна темной камеры) Оценивались следующие поведенческие показатели животных 1) уровень юризошального движения (УГ) 2) уровень вертикатьно-ориентировочнои активности -чисто "сюек' (УВ) 3) число обследованных отверстий в полу - показатель исс le товате 1Ьской активности (УЗ) В обоих вариантах мониторинт поведения животных ос>ществтялся в течении 5 мин Эксперименты проволились по следующей схеме крыс

до введения веществ сажали в экспериментальною камер> на 15 мин not ie чею животным вводи in одно и i исс юдуемых соединений и в течение послед}ющич 5 мин регистрировали покашгети поведения

2. Определение содержания моиоаминов и их четаболиюв в сфуктура\ мозга

крыс

Для избежания влияния суточных ритмов на ферментативп>ю активность и уровни нейропередатчиков Животных «бивали путем декантации в период межд) 9 и 14 ч при температуре шбораюрною помещения 22_j''C. (Warren et al. 1984) На льдч быстро извлекали voir и выделяти фронтальн\ю кору. стриат>ч. прилежащее ядро (ПЯ), типпокамп и гипоталамус (Glowmski, Iversen, 1966) Затем выделенные структуры размельчали в гомо!енизаюре «cien ю-геф юн» (0,2 мм) при -Ч0°С при скорости выражения пеС1ика 3000 об/мин В качестве среды выделения использовали 0,1 11 HClO-i с добавлением 100 нг/мл внутреннего стандарта диоксибензилачина (ДОБА). Прилежашее ядро гомогенизировали в 40 объемах, а остальные структуры мозга - в 20 объемах среды выделения Пробы центрифугировали при 10000 g в течение 10 мин Супернатант использовался в дальнейшем для определения моноаминов и их ме1аболиюв.

Содержание моноаминов и их метаболитов определялось методом высокоэффективной жидкостной хроматографии с электрохимической детекцией (ВЭЖХ/ЭД) на хроматографе LC-304T (BAS, США) с инжекюром Rheodyne 7125 с петлёй на 20 мкл дтя нанесения образцов Изучаемые вещества раздедяти на обращённо-фазной колонке (3x150 мм. С 410 0.5 мкм. МНПГ1 «Элсико». Москва) Маточные стандарты готовили ежемесячно в 0.1 Н HCIO4 в концен фации 100 мкг/мл с добавлением 0,2 мМ метабисульфиы натрия в качестве консерванта Рабочие стандарты приготовляли из маточных растворов ежедневно Все использовавшиеся для анализа реактивы были высокой степени чистоты ОСЧ или analytical grade Для калибровки хроматографа использовались смеси рабочих стандартов определяемых веществ в соошошении 100 нг/мл.

Полученные результаты поведенческих экспериментов статистически обрабатывались с использованием непараметрических методов - Уилкоксона и Манна-Уитни. метода точной вероятности Фишера данные нейрохимических опытов были ста!ис|ически обработаны с помощью методов параметрической ста/истки - критерия Стьюдента и отношения дисперсии Фишера (Р Б Стре шов, 1986)

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Изучение эффектов нейротешиков раз шчных ipynn и ингибиторов катытиевих каналов на поветенческие показатели животных в тесте «о[крытое гкпе>>

Мучение эффектов нейро ¡ептиков различных групп на характеристики поведения крыс в тесте «открытое поле»

В поведенческих экспериментах в качестве эталонных препаратов сравнения бьпи использованы массический нейролептик галоперидот (0 5 и 3 mi'кг) а также атипичные антипсихотики су тытирид П 00 чг/кг). ктозапин (20 мг/кг) и отанзапин (5 mi 'кг) При этом быто покатано что все и ученные нейро шптики достоверно по швтяти как У1 так и другие формы повеления - УВ и УЗ Максимальный эффект набтюдакя при введении галоперидола (3 мт'кг) наименьитим лепремируюшим действием на твитательную активность обладал оланзапин подтверждая таким образом, атипичный характер своего действия

Изучение влияния верапамила на пара-метры двигательной активности крыс в тесте «открытое поле»

Введение верапамила (5 мг/кг) достоверно увеличивало локомоторную активность животных (приблизительно на 60-70%) В то же время, чисто УВ значительно сокращалось, что подтверждает известные из литературы данные об анксио ¡итическич эффек1ах верапамила (Goldstein. 1985) Уветичение дозы до 10 мг'кт вьнывато четкое снижение локомоторной активности крыс и угашение УЗ. что позволяет сделать вьгвот о развитии нейротептикополобной седаиии При совместном введении интибитора ИКК (5 мг/кг) и галоперидола (3 мг'кг) было показано, что верапамил незначите ibiio, но статистически достоверно увеличивал локомоторную активность крыс, не влияя, в ю же время, на друтие поведенческие характеристики Увеличение дозы до 10 мг'кг приводите к значительному количественному увеличению всех параметров повеления, что свидетельствует в польз\ выдвинутого предпо южения о наличии у верапамила стимулирующих свойств (Рис 1)

Изучение влияния дилтиазема на поведенческие характеристики крыс в тесте «открытое поле».

Бы ю показано, что вве тение ли ттиазема (Ч 10 и 20 мг'кг) ведет к дозозависимом\ уве тичению УГ (примерно на 60-70%) Для более углубленного изучения наблюдавшегося стимулирующего эффекта дилтиазема нами бы ти проведены эксперименты по исследованию сочетанного введения этого соединения (5 и 20 мг'кг* и нейро тептиков галопери гола (3 мт 'кг)

и су 1ьпирида (100 чг'кг) При комбинированном введении дилтиазема мг'к!) и галоперидотн (Рис 2) наблюдалось незначительное но статистически значимое увеличение

300 с 250 200 о 150 н 100 3« 50 0

Рис.1. Эффекты совместного введения верапамила и галоперидола на показатели двигательной и исследовательской активности крыс

юкомоюрной активности животных, в то время, как другие показатели поведения практически не изменялись Повышение вводимой дозы дилтиазема до 20 мь'кг вызывало еще более значительное возрастание количества пересеченных животными квадратов «открытого поля».

140 к 120 о 100 £ 80 2 60 о 40

ае 20

о

Рнс.2. Эффекгы совместного введения дилтиазема и галоперидола па показате ш двигательной и исспедовательской активности крыс

вигательная активность о Исследовательское поведение

II ЛИ -

л — о О -

= ^ о 5 г 2 ™ з

с 4; ч 5 2 5 + ? е , <

от - * - х ^ а ; г * ^ ^

* е I Д Е Д 1 1 1 § "

■ Двигательная активность □ И^с 1едовательское поведение

Объяснением набтю (авшсйся нами рашицы в эффектах совместного введения штгиазема и нейроаептиков рапичных групп по-видимому может стужить го чго с} тьпирид яв 1ясгся избирагетьным Д-2 aurai онистом. гогта как i а юпсридо j но(теиств\е1 не юлько на рецепторы этого по пипа но и па Д-1 а также серотонинер! ические (J аниев M M .1992 1993 Van Toi, Seeman. 1994)

Сончесшое введение сутьпирида (100 мг/кг) и дитгиазема в обеих и!ученных до!ах не влияло ни на один ш параметров твшатетьной активности (Рис 3)

150

Контроль Сульпирид Дилтиазем Дилтиазем Дилтаазем Дилтаазем

(0 9% NaCI) 100 мг/кг 5 мг/кг 20 мг/кг 5 мг/кг + 20 мг/кг +

сульпирид сульпирид

100 мг/кг 100 мг/кг

■ Дн^ыи. и,|ыя dkmmiOLlf О И[е юнак. 1[.<.кое повс iuflit

Рис.3. Эффекты совместного введения дилтиазема и сульпирида на показатети двитатетьной и исстедоватетьской активности крыс

Изучение влияния нифедитша на поведение крыс в тесте «открытое поле».

При изучении эффектов нифе шчина на поведенческие характеристики крыс Вистар в ус ювиях модети «открытого потя» быт обнаружен достоверный стимулируюшии эффект постеднего в дозе 10 мг/кг, проявтявшиися в уветичении УГ однако встичины друшх поведенческих параметров значите шно снижались С'очетанное вветение нифстипи"? ПО мг/кг) и галоперидола (3 мг/кг) вызывало незначите 1ьнос, но статистически достоверное ослабтение депремирмощето )ффскта постетнего (Рис 4)

Изучение влияния циннаризинп на поведенческие характеристики крыс « тесте «открытое поле»

Как было показано в хоте наших экспериментов циннаризин в раз шчньгх дозах проявтят противоположные по !нак\ свойства - при введении данного соединения в тозе 25

мг/кг. наблюдалась активация всех форм поведения животнот о тогда как доза 50 мпы вызывала отчетливое угнетаюшее действие на все покупатели (Рис 5) Совместное введение циннаризина (25 и 50 мг'кг) и галоперитола ("5 мг кг) вызываю значительное снижение нейролептической седации животных, величина которот о примерно соответствовала уровню двигательной активности крыс, получавших оланипин (5 мг/кг)

200

180

к 160

с; о 140

а. 120

X о 100

зс 80

ь о 60

г? 40

20

0

Контроль (0 9% Галоперидоп Нифедипин 10 мг/кг Нифедипин 10 мг/кг ЫаС!) Змг/кг + галоперидол 3

мг/кг

■ Двигатетьная активность □ Исслеловатетьское поведение

Рис.4. Эффекты совместного введения нифедипина и галоперидола на показатети двигательной и исследовательской активности крыс

I Двигательная активность □ Исс [еловательское повеление

Рис.5. Эффекты совместного введения циннаризина и галоперидола на показатели двигательной и исследовательской активности крыс

Нейрохимическое изучение )ффектов нейролешиков различных групп и ингибиторов каналов кальция на содержание нейротрансчи11сров в структурах мо!га крыс

Нейрохимическое изучение ¡ффектов шотпина и олатапина на содержание моноаминов и т метаболитов в структурах гоювного мозга крыс

С целью сопоставления резутьтатов поведенческих опытов с сопутствующими им изменениями нейрохимических параметров моноаминергической передачи мола бы то изучено влияние ктозапина (20 мг/кг) и отанзапина (20 мг/кг) на содержание биогенных аминов и их метаботитов в ра¡личных структурах го товного мозга крыс

Ни один и! нейролептиков не вызывал значитетыгого изменения концентрации НА ни в одной из изученных структур мозг а Аналогичным образом, практически не измснятось и содержание ДА Ььпо обнаружено, что пракгически все изученные нами нейро гепгики в различной степени вызывали уветичение содержания метаботита ДА- ДОФУК во всех структурах мозга Максиутатьное повышение содержания ДОФУК отмечаюсь в стриатуме при введении отанзапина (в 3,5-4 раза) Анатогичным образом, нами было обнаружено повышение содержания другого метаботита ДА - ГВК во всех изученных структурах мозга при введении отанзапина

Было показано что изученные нейролептики в той или иной степени увегичивати величину соотношений ДОФУК/ДА и ГВК/ДА. которые являются основными показатетяути скорости кругооборота ДА Наибольшую эффективность при этом по показатетю ДОФУК/ДА в стриатуме проявтя г отанзапин (уветичение оборота на 400%) Отанзапин увеличивал последний показатель ГВК/ДА во всех изученных структурах в 4-5 раз

Было усгановтено. что ктозапигг снижа1 уровень 5-ОТ в гипотатаугусе Необходимо указать, что уровень метаботита серогонина 5-ОИУК возрастал при введении обоих антипсихо1ических препаратов При введении ктозапина и отанзапина возрастание показателя 5-0ИУК/5-0 Г отутечатось только в стриатуме

Таким образоут. резутьтагы наших экспериментов свидстетьствуют о тоуз, что отанзапин и ктозапип способны в значитетьной степени моту тировать акгигзность моноаминергических систем мозга (прежде всего дофаминергической), при этоут эффект отанзапина на постетшою прояв тятся в ботьшей степени чем у к юзапина

Нейрохимическое изучение эффектов ингибиторов каналов кальиия на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс.

В \оде проведенных нами экспериментов бы ю показано, что наиболее выраженные изменения содержания нейротранемичеров и их метабо штов в структурах мозта крыс вызывал верапамил (Таблица 1) Было обнаружено, что данный npenapai снижает содерл<ание НЛ в i ипоталамусе уветичивая в то же время, концентрацию этого нейротрансмиттера в ПЯ а также ДОФУК в гипоталамусе Обращает на себя внимание также повышение более чем в 2 раза последнего параметра в Г1Я Кроме того, с ituyei отметить увешчение содержания ДОФУК во фронтальной коре и, как следствие, рост соотношения ДОФУК/ДА

При изучении )ффектов дитгиазема на содержание нейротрансмиттеров и структурах мозга, было показано, что этот ИКК статистически достоверно снижал содержание НА в коре и ПЯ В последней структуре наб подались сходные изменения уровня дрмпх нейромедиаюров, т те диттиазем понижал концентрацию ДА, ДОФУК и 5-ОТ Данный ИКК не влия i на содержание и оборот нейромедиаюров в гиппокампе и гипоталамусе

Нифедипин снижал уровень ДА в коре, что приветило к значительному возрастанию соотношения ГВК'ДА Наибо тее чувствительной к лому соединению структурой оказалось ПЯ. в котором нифедипин снижал уровни практически всех нейротрансмиттеров и их метаболитов (за исключением 5-ОИУК)

При сопоставлении нейрохимических профилей ИКК интересно отметить, что верапамил в оттичие от дилтиазема и нифедипина, повышал уровень НА в ПЯ, тот да как первые его существенно снижали Обращает на себя внимание тот факт, что верапамил оказался единственным препаратом проявившим фармакологи ческу ю активность в гиппокампе- »юг ИКК оказывал выраженное воздействие на содержание 5-ОТ и соотношение 5-ОИУК/5-ОТ. увеличивая их В то же время, концентрация ДА и ею метаботитов прояв тяла тенденцию в сторону уменьшения

Таким образом, по тученные нами результаты позволяют сделать заключение о том что ИКК различных трупп оказывают модулирующее влияние на функциональную активность моноаминергических систем мозта (прежде всего, дофаминергической) на нейрохимическохт уровне, предположительно воздействуя, в основном, на процессы обратного захватай синтеза / метаболизма аминов

Нейрофармако югическое изучение эффектов совместного введении верапамила и оланзапина на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс

Таблица 1

Влияние введения оланмпина (5 мг/кг в'б) и верапамила (2 мг'кг в'б) и их совместного введения на со тержание моноаминов и их метаболитов в гипогаламусе стриатуме. прилежащем

___ _ ядре, фронтальной коре и гиппокампе мозга крыс Вис тар______

, Препарат , НА 7 ДА £ ДОФУК ДОФУК/ДА

Гипотатамус

Кон фоль 100,0 + 5.7 100.0+17.3 100.0 + 9,1 100,0+10.1

Оланзапин 83,3 + 5.8 90.2 + 8,8 201,0 + 21.9* 203.9 -г 18.3**

Верапамил 103,7 + 4.5 96.0 ±3,5 161,5 + 8.4* 154.1 ^ 12.9*

Олан +Верап 93.8-9,0 103.9 ±4,8 262.1 + 14 8 251.7 - 60.2

Стриатум

Контроль 100,0+ 16,1 100,0 + 6.0 100.0+ 7.9 100,0 + 3,2

Оланзапин 100.1 - 16,9 95.6 г 5,3 348,0+29.6** 375.2 - 32.7**

Верапамил 176,9+ 16,8* 117.3 + 3 1 120,9+1.9* 104,5 х 2.6

Олан т-Верап И 1.6 ±9.7 118.4 + 3.2* 436,1^20,9" 372.9 ± 19.1

I (рилежащее ядро

Кошро гь 100.0 + 9.8 г 100,0 + 7.8 100.0 + 6.5 100,0 л-4,3

Оланзапин 138,8±27.8 91,1 +6,5 307,8±39,1 ** 326.1 + 30.2**

Верапамил 137,8 - 29.3 85,4 + 8.6 95,0 + 6,2 112,8 + 6,4

Олан +Верап 89,6 ± 18,0 92.1 ±6.7 330.2 + 28.0 355,1 -23,3

Фронтальная кора

Контроль 100.0 ± 13,5 100,0 ±8,1 100.0 ± 13,6 100,0 ± 17,1

Оланзапин 64.2 х 2.2** 64.6 ± 8,6" 99,7 ± 17,9 152.1 ± 17.9*

Верапамил 145,7 + 5,5* 151,4 + 22,3* 273,2x68.2** 196,5 ±24,0**

Олан +Верап 118.7 т 6,0*" 149,7 + 5.2** 220,0+ 29.6м 166.1 + 19,6

1 иппокачп

Контроль 100,0 ±8,2 100,0 2 31,2 100,0+14,6 100.0 + 54,3

Оланзапин 91,4 + 7,2 42,4 + 8,6** 91,9+11.3 186.0 + 41,9**

Верапамил 117,0 + 4,2 72,4 + 9,7 94.6+10,8 81.7+ 12.6

Олан +Верап 108,5 + 6,2 81,2+12,2* 93,2 г 11-7 90.4 ± 19,2"

Примечание * - достоверность различий оланзапина и верапамила по сравнению с контролем при р0.05, ** - при р<0,001 1 - достоверность отличия группы оланипин+верапамил по сравнению с контролем при р<0.05, " - при р<0,001

На основании полученных в поведенческих экспериментах данных об активирующем дофаминомиметическом действии верапамила на седацию, вызванную галоперидолом, были проведены эксперименты по совместному введению данного ингибитора ИКК и олан!апина При сочетанием введении оланзапина (5 мг'кг в'б) и верапамила (2 мг/кг в/б) было обнаружено, что указанная комбинация соединений вьнываст разнонаправленные изменения содержания НА в различных структурах мо<га (Таблица 1) Так. если во фронтальной коре всрапачит не юлько устранял снижение содержания этого нейротрансмиттера, вызванное отанзапином. но и вызывал незначительное увеличение

уровня НА (примерно на 20%). ю в ПЯ. напротив отмечалась тенденция (не достигавшая впрочем статистической достоверности) к снижению его концентрации В друтпх структурах моira эффекта ИКК на фоне неиротептика не наб подалось Бы ю показано что верапами i достоверно увеличиват содержание ДА во фронтальной коре а также в сгриатуме. и снижал его в гиппокампе Уровень ДОФУК вофастал в коре и стриапме тогда как концентрация Г ВК не изменятась ни в одной из изученных структур

Следует отметить увеличение концентрации 5-ОТ при введении комбинации препаратов практически во всех структурах мозта животных, при этом наиботее выраженные изменения указанного параметра наблюдались во фронтальной коре и стриатуме (возрастание приблизите тьно на 40%) Введение верапами та практически не влияло на со тержание 5-ОИУК ни в олной из структур та исключением коры где уровень этою метаболита 5-OI снижался на 40%. достигая контрольных значений Аналогично не и ¡меня юсь и соотношение ДОФУК'ДА ни в одном из функциональных образований мозта. за исключением гиппокампа. в котором этот параметр значительно снижался (почти в 2 раза) Сходным образом понижатся и показатеть [ ВК'ДА в стриатуме. ПЯ и во фронтальной коре, причем в последней структуре это снижение было наиболее значительным (на 400%) Величина соотношения 5-ОТ'5-ОИУК уменьшалась практически во всех структурах, за исключением ПЯ

В целом полученные нами результаты опытов по изучению влияния совместного вве тения оланзапина и верапамила на параметры нейропередачи в мозге позволяют придти к выводу о с тожном комптексном характере наблюдаемых эффектов, опосретусмых рецепторами различных нейролрансмиттерных систе\! мозга, в частности, ДА- и 5-ОТ-ергической

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В представленном исследовании было проведено комплексное нейрофармакологическое изучение механизмов возможного втаимодействия ИКК и нейролептиков атипичного профиля, в частности оланзапина, с помощью поведенческих и нейрохимических мет о юв

На первом этапе работы был проведен ря т экспериментов, направленных на изучение показателей пове тенчсской активности крыс * 1естс «открытое по ¡с» при введении ИКК относящихся к различным группам Было поклано, что низкие дозы верапамила обладал отчетливым стимулирующим действием на поведение крыс однако, с увеличением наб по тался депремиру ющий эффект на твигателытую активность При совм^ "ом

введении ишибитора ИКК и галопери тола верапами I незначительно но статистически достоверно увеличивал локомоторную активность крыс

При введении дилтиазема (5 10 и 20 мг'кг) наблюдалось доюзависимое уве шченис двитатстьнои активности (примерно на 60-70%) При комбинированном введении дипиазема (5 М1'кг) и галоперидота (3 мг/кл) наблюдаюсь незначительное, но статистически значимое увеличение локомоторной активности животных Повышение дозы шллиазема до 20 мг/кг вызывало еще более значительное возрастание количества пересеченных животными квадратов «открытою шля»

При из\чении (ффектов нифе типина на поведенческие характеристики крыс Вистар в условиях модели «открытого поля» был обнаружен достоверный дозозависимый стимулирующий эффект последнею Сочетанное введение нифедипина (10 мг/кг) и галоиеридола (3 мг/кг) вызывало незначительное но статистически достоверное ослабление депрсмирующето эффекта последнего

При введении циннаризина в дозе 25 мг/кг. наблюдалась активация всех форм поведения животного, тогда как в дозе 50 мг/кг соединение проявляло отчетливое угнетающее действие, снижая значения всех характеристик двигательной активности Совместное введение циннаризина (25 и 50 мг/кг) и галоперидола (3 мг/кг) вызывало значительное снижение нейролептической седапии животных, величина которого примерно соответствовала уровню двш аильной активности крыс, по [учавших оланзапин (5 мг/кг)

На следующем этапе работы нами было проведено нейрохимическое изучение эффектов ИКК на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс Наиболее выраженные изменения содержания нейротрансмиттеров и их метаболитов в структурах мозга крыс вызывал верапамил, снижавший содержание НА в гипоталамусе, увеличивая, в то же время, концентрацию зюто нейротрансмиттера в ПЯ. а также ДОФУК в гипоталамусе Отмечалось также повышение более чем в 2 раза последнего параметра в ПЯ Кроме лого, регистрировалось увеличение ДОФУК во фронтальной коре, и, как следствие, рост соотношения ДОФУК/ДА

При изучении эффектов дилтиазема на содержание нейротрансмил /еров в струк|урах мозга, было показано, что этот ингибитор достоверно снижал содержание НА в коре и ПЯ В последней структуре наблюдались сходные изменения уровня других нейромедиаюров где дил гиазем понижал концентрацию ДА ДОФУК и 5-01

Пифедипин снижал уровень ДА в коре, что приводило к значительному возрастанию соотношения ГВК/ДА Наиболее чувствительной к этому соединению структурой оказалось ПЯ. в кошроч нифедипин снижал уровни практически всех нейротрансмиттеров (за

иск почением 5-ОИУК)

На посте тнем згапс пашей работы быт проведены эксперименты с совместным введением перапамита и о ишапииа При зтом эи ю продемонстрировано что ука!анная комбинация сое шнепий вьпывасг рашонаправ 1снные изменения содержания нора (ренадина (НА) в различных структурах мозга Так, ссти в ФК верапамит не только устранят снижение содержания этою нейротрансмиттера вызванное отанзапином, но и вызывал незначите 1ьное уветичение уровня НА (примерно на 20%), то в ПЯ напротив, отмена тась тенденция к снижению ею концентрации Набтюдавшсеся нами увешчение содержания НА хороню согласуйся с имеющимися в титературе сведениями о по южитстьном втиянии хроническою введения верапамит на эют биохимический параметр в ФК и гиппокампе При совместным введением верапамита и отатапина бы ю пока!ано что указанная комбинация соединений достоверно уве шчивает сотержапие ДА во фрон1альной коре, а также в стриатуме Уровень ДОФУК во5растал в коре и стриатуме, топа как концентрация ГВК не изменятась ни в одной и; изученных структур Стедуег отметив уветичение концентрации сероюнина практически во всех ыруктурах мозг а животных При этом паиботее выраженные изменения указанного параметра наблюдались во фронтальной коре и стриа!уме (возрастание приблизитетьно на 40%) Аналогичным образом, уровень 5-ОИУК снижался на40% достигая кошротьных ¡качений Ни в одном и< функциональных образований мозга не изменятось и соотношение ДОФУК'ДА за иск точением гиппокампа. в котором эют параметр значите 1ьно снижался (пот и в 2 раза) Схо хным образом понижался и показатель Г ВК/ДА в стриатуме, ПЯ и во фронтальной коре, причем в иостедней структуре это снижение бы ю наиболее значшельныч (па 400%) Соотношение 5-ОТ;5-ОИУК уменьшалось практически во всех структурах, за исктючением ПЯ

В це юм обобщая поч\ченные резутьтаты стетует отметить, что в ходе проведенных экспериментов была обнаружена способность ИКК раз шчных трупп противодействовать седативным эффектам пейротептиков, уситивая дофаминергическую передачу в мозге, что существенно расширяет существующие претставления о механизмах действия сое шнений данной группы Данные наших исследований могут быть учтены при разработке новых стратегий терапии психотических состояний

выводы

1 Ингибиторы кальциевых каналов верапамит нифедипин. лилтиазем а также циннаризин проявляю! антагонизм по отношению к угнетающему действию галоперидота. ч(о проявляется в дозозависимом увеличении двигательной и исследовательской активности крыс в «открытом поле»

2 Дилтиазем при совместном введении с атипичным нейролептиком сульпиридом не оказывает существенною втияния на вызываемое пос [едним угнетение двигательной активности животных

3 Нейролептики атипичного профиля клозапин и отанзапин увеличивают скорость оборота дофамина в стриатуме и причежащем ядре, при этом эффект оланзапина па дофаминергичеекие системы мозга выражен в ботьшей степени

4 При совместном введении с оланзапином веранамил вызывает достоверное снижение скорости оборота серотонина во фронгальной коре, гиппокампе стриатуме и гипоталамусе

5 Верапачил устраняв вызываемое оланзапином повышение содержания норадреналина в прилежащем ядре мозга крыс

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1 Асметов ВЯ. Гутиева С Г Сравнитетьное изучение рози ДЗ дофаминов!,1\ рецепторов в механизме действия типичных и атипичных нейролептиков Журнал «Здоровье» (Баку). 2001. №1. с 22-25

2 Ганиев ММ. Асметов В Я Ятубов КМ Коррекция кальциевыми бдокаторами побочных эффектов проявляемых посте приема Галоперидота Журнал «Здоровье?, (Баку). 2002. №1. с 35-37

3 Асметов В Я 1 у шева С Т . Исчаилова 3 Д I аниев М М . Втияние антаюниста катьция дитгиазема на поведенческие эффекты, вызванные су тытирилом Со мат копф . поев 100-летию Махмудбекова. 2002. с 121-122

4 Ганиев М М. Кудрин В С . Гулиева С Т I усейнова Ф Д Шадтинский Э А Мирзоев X М Сравнительное влияние ряда производных бензамида на содержание моноаминов и их метаболитов в мезолимбической и нигросгриатной системе мозга крыс С б мат конф.иосв 100-тетию 3 Мамедова, 2003, с 179-180

5 Гулиева С Т . Кудрин В С . Ягубов К М . Асметов В Я , Дадашева М Н , Ганиев М V! Сравнительное влияние галоперидола и сульпирида на содержание моноаминов и их метаболитов в мезотимбической и нигростриатной системе мозга крыс Сб мат конф . поев 100-летию 3 Мамедова. 2003. с 180-181

6 Кудрин В С . Гулиева С Т , Ганиев М М Сравнительное влияние галопери ю та и ряда производных бензамида на содержание моноаминов и их метабо тиюв в подкорковых структурах мозга крыс Фармацевтический Журнал (Баку). 2003, № 1, с 38-41

7 Гулиева С I . Гусейнова ФД. Ганиев ММ Сравнительные эффекты галоперидота и производных бензамида при ингранеребральном введении в неостриатум Сб мат конф поев 80-летию 3 Салаевой. 2004. с 131-132

8 Асметов ВЯ, Гулиева СТ. Аскеров ША. Мирзоев ХМ. Ганиев ММ Влияние циннаризина на поведение крыс, нарушенное 1 алоперидолом Сб мат конф , поев 80-летию 3 Салаевой. 2004, с 143-144

9 Ганиев М М , Гулиева С Т, Андреева Ю А Ктодт П М . Кудрин В С . Наркевич В Б . Раевский КС Нейрофармакологическии анализ эффектов отанзапина и клозапина на поведенческие характеристики и содержание нейромедиаторов в стрхктурах мозга крыс Психофармакол и био I наркология. 2004. К» 1 с 585-589

10 Кудрин ВС. Клодт ИМ, Наркевич В Б Г\лиева С1 Нейрофармакотогическое и!учение эффектов совместною введения верапамила и отанзапина на содержат ие

нсйротрансмиттеров в структурах мозга крыс Вистар Эксиер кшн фармако 1 печати)

Сдано в печать 26 июля 2005г. Объем печати 1 п.л. Заказ № 548. Тираж 100 экз. Отпечатано: ООО «Спринт-Принт» г. Москва, ул. Краснобогатырская, 92 тел.: 963-41-11, 964-31-39

459 1

РНБ Русский фонд

2006-4

8878

Актуальность проблемы. В настоящее время нейролептики прочно вошли в практическую медицину в качестве основных антипсихотических средств. По современным представлениям, основным свойством нейролептиков, определяющим их эффективность при лечении психозов, является способность снижать активность ДА-ергической нейропередачи [4,18,40,41, 268]. В то же время, серьезным недостатком большинства используемых в настоящее время в клинике нейролептических средств является развивающиеся при их длительном применении экстрапирамидные нарушения [101]. В связи с этим, одним из приоритетных направлений поиска новых антипсихотических средств является направленный поиск и создание нейролептиков атипичного профиля, обладающих антипсихотическим действием, но не вызывающих экстрапирамидной симптоматики [38,41,16]. В настоящее время разработан и успешно применяется в клинике психотических состояний целый ряд таких лекарственных средств [128]. Экспериментальное и клиническое изучение этих препаратов позволило выявить оригинальный спектр их психофармакологического действия, существенно отличающийся от спектра классических представителей антипсихотических средств [20,21,71,113,128, 186]. К числу препаратов этой группы относятся такие достаточно хорошо изученные соединения, как сульпирид, клозапин, раклоприд, ремоксиприд и другие. К числу можно отнести и новый препарат оланзапин, разработанный фирмой Zyprexa (Eli Lilly) и успешно внедряемый в последние годы в клиническую практику [278]. Уникальный спектр психофармакологических свойств оланзапина, высокая клиническая эффективность соединения, стойкость его терапевтического эффекта, а также низкая частота возникновения его побочных эффектов позволяют относить данный препарат к числу наиболее перспективных на сегодняшний день атипичных нейролептиков.

Другой, не менее важной, проблемой современной психофармакологии является изыскание средств, не относящихся к числу нейролептиков, но способных корригировать побочные эффекты, развивающиеся при применении последних [186]. Подобные средства могут использоваться при проведении общеукрепляющей адъювантной терапии, а также при лечении сопутствующих заболеваний. К числу таких соединений, в первую очередь, следует отнести группу ингибиторов кальциевых каналов (ИКК), вазодилататорные и антиаритмические свойства которых изучены достаточно полно, что обуславливает их широкое клиническое применение в терапии как заболеваний сердечно-сосудистой системы (при гипертензии, фибрилляции предсердий, тахиаритмиях), так и ряда патологий неврологического генеза - инсульте, мигрени, сенильных расстройствах [2,7,8,186]. Накоплен также большой объем данных, свидетельствующих о том, что ИКК способны изменять активность ЦНС и, качестве психотропных агентов. Психофармакологический профиль этих соединений является уникальным, комплексным и многоплановым. В частности, известны и описаны антидепрессивные, анксиолитические и противосудорожные эффекты ИКК [3].

Имеющиеся в литературе данные об антидофаминергических эффектах некоторых представителей класса ИКК указанных эффектах, в частности, вера-памила и дилтиазема, достаточно противоречивы [8]. Так, способность оказывать антагонистическое действие в отношении эффектов, вызванных агониста-ми ДА, было обнаружено у соединений, относящихся к различным группам ИКК - никардипина, нифедипина, флунаризина, тогда как нимодипин, низолди-пин, нитрендипин, верапамил и дилтиазем антидофаминергических свойств, по сообщению ряда авторов, не проявляли [147,308]. В то же время, следует отметить, что в литературе практически отсутствуют сведения о механизмах взаимодействия ИКК с атипичными нейролептиками, в частности, с оланзапином.

Цель исследования. В связи со сказанным, основной целью нашей работы было комплексное нейрофармакологическое изучение механизмов возможного взаимодействия ингибиторов кальциевых каналов и нейролептиков атипичного профиля, в частности, оланзапина, с помощью набора поведенческих и нейрохимических методов.

В соответствии с указанной целью были поставлены следующие задачи:

1. Провести сравнительное изучение эффектов классических и атипичных нейролептиков на поведенческие показатели животных в тесте «открытое поле».

2. Исследовать влияние ингибиторов кальциевых каналов различной химической структуры на параметры поведения крыс в тесте «открытое поле».

3. Изучить эффекты совместного введения классических и атипичных нейролептиков с ингибиторами кальциевых каналов на поведенческие показатели животных в тесте «открытое поле».

4. Провести нейрохимическое изучение эффектов галоперидола, клоза-пина и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах головного мозга крыс.

5. Выполнить исследование эффектов ингибиторов кальциевых каналов на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс.

6. Исследовать влияние совместного введения верапамила и оланзапина на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс.

Научная новизна. Впервые изучено влияние совместного введения нейролептиков, относящихся к различным фармакологическим группам (галопери-дол, сульпирид, клозапин, оланзапин) и ИКК на показатели двигательной, исследовательской и обстановочной активности крыс в тесте «открытого поля». Было обнаружено, что введение верапамила, дилтиазема, нифедипина, а также циннаризина на фоне галоперидола приводило к достоверному дозозависимому увеличению всех параметров поведения, что свидетельствует в пользу наличия у данных соединений дофаминстимулирующих свойств. При совместном введении галоперидола и дилтиазема наблюдалось значительное увеличение локомоторной активности животных, тогда как комбинация сульпирида и дилтиазема в обеих изученных дозах не оказывала влияния ни на один из параметров двигательной активности.

При нейрохимическом изучении эффектов совместного введения верапамила и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в структурах мозга крыс впервые было обнаружено значительное увеличение содержания метаболитов дофамина ДОФУК и ГВК в гиппокампе и прилежащем ядре, а также достоверное снижение уровня норадреналина, повышенного вследствие введения оланзапина, в последней структуре.

Практическая значимость. Полученные в работе данные расширяют существующие представления о нейрофармакологических и нейрохимических механизмах психотропного действия ингибиторов каналов кальция, а также вносят существенный вклад в понимание нейрохимических основ взаимодействия типичных и атипичных нейролептиков с ИКК. Результаты, полученные в работе, раскрывают новый аспект действия ИКК различных групп - их способность противодействовать седативным эффектам нейролептиков, усиливая до-фаминергическую передачу в мозге. Данные наших исследований могут быть использованы для разработки новых стратегий терапии психотических состояний.

Основные положения, выносимые на защиту

Повышение двигательной и исследовательской активности крыс в тесте «открытого поля», после введения верапамила, нифедипина, и циннари-зина на фоне галоперидола позволяет констатировать наличие дофамин-стимулирующих свойств у данных соединений.

Комбинация галоперидола и дилтиазема способствовала увеличению локомоторной активности животных. Сравнительная оценка влияния клоза-пина и оланзапина на содержание моноаминов и их метаболитов в стриа-туме, прилежащем ядре и гипоталамусе мозга крыс свидетельствовала об усилении оборота дофамина в стриатуме и прилежащем ядре.

При нейрохимическом изучении эффектов комбинированного введения верапамила и оланзапина было продемонстрировано достоверное снижение оборота дофамина и серотонина, а также повышение содержания норадреналина при введении верапамила во всех структурах мозга крыс. Апробация работы

Апробация работы состоялась 24.06 2004г. в г.Москве на межлабораторной научной конференции ГУ НИИ Фармакологии им.В.В.Закусова РАМН, протокол от 24.06.2004г.) и 28.01.2005г. в г.Баку на кафедре фармакологии Азербайджанского Медицинского Университета (протокол от 28.01.2005).

Публикации

Основные положения диссертации опубликованы в 10-ти научных работах.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 121 странице машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка использованной литературы. Список литературы включает 308 литературных источников, из них 41 отечественных и 267 зарубежных. Работа иллюстрирована 3 таблицами и 6 рисунками.

ВЫВОДЫ

1. Ингибиторы кальциевых каналов верапамил, нифедипин, дилтиазем, а также циннаризин проявляют антагонизм по отношению к угнетающему действию галоперидола, что проявляется в дозозависимом увеличении двигательной и исследовательской активности крыс в «открытом поле».

2. Дилтиазем при совместном введении с атипичным нейролептиком сульпиридом не оказывает существенного влияния на вызываемое последним угнетение двигательной активности животных.

3. Нейролептики атипичного профиля клозапин и оланзапин увеличивают скорость оборота дофамина в стриатуме и прилежащем ядре, при этом эффект оланзапина на дофаминергические системы мозга выражен в большей степени.

4. При совместном введении с оланзапином верапамил вызывает достоверное снижение скорости оборота серотонина во фронтальной коре, гиппокампе, стриатуме и гипоталамусе.

5. Верапамил устраняет вызываемое оланзапином повышение содержания норадреналина в прилежащем ядре мозга крыс.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Несмотря на значительные успехи в лечении психотических расстройств, следует признать, что применяемая при этих состояниях терапия в ряде случаев является недостаточно эффективной, а используемые лекарственные средства не лишены ряда существенных недостатков. К их числу относятся, в частности, экстрапирамидные нарушения, развивающиеся при длительном терапевтическом использовании классических нейролептиков [101]. В связи с этим, одним из приоритетных направлений создания новых антипсихотических средств является направленный поиск и синтез нейролептиков атипичного профиля, обладающих антипсихотическим действием, но не вызывающих экстрапирамидной симптоматики [38,41]. В настоящее время разработан и успешно применяется в клинике психотических состояний целый ряд таких лекарственных средств [128]. Кроме того, представляется весьма перспективным изыскание соединений, способных корригировать побочные эффекты, развивающиеся при применении нейролептиков, среди веществ других фармакологических групп [186]. Среди них особый интерес представляет группа ингибиторов кальциевых каналов (ИКК), фармакологический профиль которых является уникальным, комплексным и многоплановым. В частности, известны и описаны антидепрессивные, анксиолитические и противосудорожные эффекты ИКК [63]. В то же время, следует отметить, что вопрос о взаимодействии ИКК с атипичными нейролептиками, в частности, с оланзапином, остается неизученным.

В связи со сказанным, нами было проведено комплексное нейрофармакологическое изучение механизмов возможного взаимодействия ИКК и нейролептиков атипичного профиля, в частности, оланзапина, с помощью поведенческих и нейрохимических методов.

На первом этапе нашей работы был проведен ряд установочных экспериментов, направленных на изучение показателей поведенческой активности крыс в тесте «открытое поле» при введении как классических нейролептиков, так и атипичных антипсихотических средств, использовавшихся в качестве эталонных препаратов сравнения. Наблюдавшаяся картина соответствовала описанной в литературе [95]. При этом было показано, что все изученные нейролептики достоверно подавляли как локомоторную активность, так и другие формы поведения - количество заглядываний в отверстия и число вертикальных стоек. Аналогичным образом, было изучено влияние ИКК, относящихся к различным группам, на поведенческую активность крыс в «открытом поле». При этом наблюдалась разнонаправленная реакция животных на введение препарата. Так, в частности, нами было показано, что низкие дозы верапамила обладают отчетливым стимулирующим действием на поведение крыс, однако, с увеличением дозы наблюдался депремирующий эффект на двигательную активность. При совместном введении ингибитора ИКК и галоперидола было показано, что верапамил незначительно, но статистически достоверно увеличивал локомоторную активность крыс, не влияя, в то же время, на другие поведенческие характеристики, что позволяет предположить задействованность Д-2 ДА-Р в реализации нейролептических эффектов данного соединения.

При введении дилтиазема (5, 10 и 20 мг/кг) нами наблюдалось увеличению двигательной активности (примерно на 60- 70%), причем эффект линейно нарастает с повышением концентрации вводимого соединения. При комбинированном введении дилтиазема (5 мг/кг) и галоперидола (3 мг/кг) наблюдалось незначительное, но статистически значимое увеличение локомоторной активности животных, тогда как другие показатели поведения практически не изменялись. Повышение дозы дилтиазема до 20 мг/кг вызывало еще более значительное возрастание количества пересеченных животными квадратов «открытого поля». В то же время, совместное введение сульпирида (100 мг/кг) и дилтиазема в обеих изученных дозах не влияло ни на один из параметров двигательной активности.

При изучении эффектов нифедипина на поведенческие характеристики крыс Вистар в условиях модели «открытого поля» был обнаружен достоверный дозозависимый стимулирующий эффект последнего, причем отмечалось также и увеличение значений других параметров. Сочетанное введение нифедипина (10 мг/кг) и галоперидола (3 мг/кг) вызывало незначительное, но статистически достоверное ослабление депремирующего эффекта последнего.

Как было показано в ходе наших экспериментов, циннаризин, относящийся к группе производных пиперазина (IV группа ИКК), в различных дозах проявлял противоположные по знаку свойства. Так, при введении данного соединения в дозе 25 мг/кг, наблюдалась активация всех форм поведения животного, тогда как в дозе 50 мг/кг циннаризин проявлял отчетливое угнетающее действие, снижая значения всех характеристик двигательной активности. Совместное введение циннаризина (25 и 50 мг/кг) и галоперидола (3 мг/кг) вызывало значительное снижение нейролептической седации животных, величина которого примерно соответствовала уровню двигательной активости крыс, получавших оланзапин (5 мг/кг). Наличие у циннаризина разнонаправленных эффектов, а также вышеупомянутое отсутствие различия действия двух доз последнего при его сочетании с галоперидолом, дает основание предположить, что в реализации фармакологических свойств данного ИКК задействованы не только ДА-ергическая, но и другие нейротранмиттерные системы мозга, в частности, холинергическая и аминоацидергическая [132].

Таким образом, на основании полученных нами результатов изучения ИКК в тесте «открытого поля» можно сделать вывод о наличии у всех соединений этого класса разнонаправленных психотропных эффектов, что обусловило интерес к дальнейшему углубленному изучению механизмов действия этих веществ.

На следующем этапе работы нами было проведено нейрохимическое изучение эффектов ингибиторов каналов кальция на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга крыс. Как и в проведенных ранее поведенческих опытах, в ходе нейрохимических экспериментов было продемонстрировано, что каждый из изученных ИКК обладает уникальным профилем, что, по-видимому, объясняется различиями химической структур этих соединений.

Наиболее выраженные изменения содержания нейротрансмиттеров и их метаболитов в структурах мозга крыс вызывал верапамил, снижавший содержание НА в гипоталамусе, увеличивая, в то же время, концентрацию этого нейротрансмиттера в прилежащем ядре, а также ДОФУК в гипоталамусе. Отмечалось также повышение более чем в 2 раза последнего параметра в прилежащем ядре. Кроме того, регистрировалось увеличение ДОФУК во фронтальной коре, и, как следствие, рост соотношения ДОФУК/ДА.

При изучении эффектов дилтиазема на содержание нейротрансмиттеров в структурах мозга, было показано, что этот ингибитор достоверно снижал содержание НА в коре и прилежащем ядре. В последней структуре наблюдались сходные изменения уровня других нейромедиаторов, где дилтиазем понижал концентрацию ДА, ДОФУК и 5-ОТ. Данный ИКК не влиял на содержание и оборот нейромедиаторов в гиппокампе и гипоталамусе.

Нифедипин, представитель II группы ИКК, снижал уровень ДА в коре, что приводило к значительному возрастанию соотношения ГВК/ДА. Наиболее чувствительной к этому соединению структурой оказался N.accumbens, в котором нифедипин снижал уровни практически всех нейротрансмиттеров (за исключением 5-ОИУК). В то же время, эффектов на содержание и оборот нейромедиаторов в гиппокампе, а также в гипоталамусе обнаружить не удалось.

При сопоставлении нейрохимических профилей ИКК интересно отметить, что верапамил, в отличие от дилтиазема и нифедипина, повышал уровень НА в N. accumbens, тогда как первые его существенно снижали. Обращает на себя внимание тот факт, что верапамил оказался единственным препаратом, проявившим фармакологическую активность в гиппокампе- этот ИКК оказывал выраженное воздействие на содержание 5-ОТ и соотношение 5-ОИУК/5-ОТ, увеличивая их. В то же время, концентрация ДА и его метаболитов проявляла тенденцию в сторону уменьшения.

Таким образом, полученные нами результаты позволяют сделать заключение о том, что ИКК, относящиеся к различным группам, оказывают модулирующее влияние на функциональную активность моноаминергических систем мозга (прежде всего, дофамин- и адренергических) на нейрохимическом уровне, предположительно воздействуя, в основном, на процессы обратного захвата и синтеза/метаболизма аминов.

На последнем этапе нашей работы, на основании полученных в поведенческих опытах данных об активирующем дофаминомиметическом действии верапамила на седацию, вызванную галоперидолом, были проведены эксперименты с совместным введением данного ингибитора ИКК и оланзапина. При этом было продемонстрировано, что указанная комбинация соединений вызывает разнонаправленные изменения содержания НА в различных структурах мозга. Так, если во фронтальной коре верапамил не только устранял снижение содержания этого нейротрансмиттера, вызванное оланзапином, но и вызывал незначительное увеличение уровня НА (примерно на 20%), то в n.accumbens, напротив, отмечалась тенденция (не достигавшая, впрочем, статистической достоверности) к снижению его концентрации. В других структурах мозга эффекта ИКК на фоне нейролептика не наблюдалось. Было показано, что верапамил достоверно увеличивал содержание ДА во фронтальной коре, а также в стриатуме, и снижал его в гиппокампе. Уровень ДОФУК возрастал в коре и стриатуме, тогда как концентрация ГВК не изменялась ни в одной из изученных структур. Следует отметить увеличение концентрации серотонина практически во всех структурах мозга животных. При этом наиболее выраженные изменения указанного параметра наблюдались во фронтальной коре и стриатуме (возрастание приблизительно на 40%). С другой стороны, введение верапамила практически не влияло на содержание 5-ОИУК ни в одной из структур, за исключением коры, где уровень этого метаболита серотонина снижался на 40%, достигая контрольных значений. Аналогично, ни в одном из функциональных образований мозга не изменялось и соотношение ДОФУК/ДА за исключением гиппокампа, в котором этот параметр значительно снижался (почти в 2 раза). Сходным образом понижался и показатель ГВК/ДА в стриатуме, прилежащем ядре и во фронтальной коре, причем в последней структуре это снижение было наиболее значительным (на 400%). Что касается соотношения 5-ОТ /5-ОИУК, то следует отметить, что величина этого параметра уменьшалась практически во всех структурах, за исключением n.accumbens.

Результаты проведенных нами опытов по изучению влияния совместного введения оланзапина и верапамила на параметры нейропередачи в мозге позволяют вынести заключение о сложном комплексном характере наблюдаемых эффектов, опосредуемых рецепторами различных нейротрансмиттерных систем мозга, в частности, ДА-, 5-ОТ и адренергической. В последнее время появились данные, свидетельствующие о возможности прямого влияния нейролептиков на систему каналов Са, в частности, Т-подтипа [206]. Вполне допустимо также участие в реализации фармакологического ответа некоторых других нейромедиаторных систем, в частности, аминоацид-[206] и холинергической [84].

В целом, обобщая полученные нами результаты, следует отметить, что в ходе проведенных экспериментов была обнаружена способность ИКК различных групп противодействовать седативным эффектам нейролептиков, усиливая дофаминергическую передачу в мозге, что существенно расширяет существующие представления о механизмах действия первых. Данные наших исследований могут быть учтены при разработке новых стратегий терапии психотических состояний.