Автореферат и диссертация по медицине (14.00.15) на тему:Морфологическая характеристика легких при экспериментальном хламидиозе



На правах рукописи

ЛАПТЕВ

Сергей Павлович

МОРФОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЛЕГКИХ ПРИ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОМ ХЛАМИДИОЗЕ

14.00.15 - патологическая анатомия 03.00.07 - микробиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь - 1998

Работа выполнена в Пермской государственной медицинской академии

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Н.С. Ефимова доктор медицинских наук O.A. Тимашева

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор В.А. Цинзерлинг заслуженный деятель наук РФ, доктор медицинских наук, профессор Р.Б. Гольдин

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: Санкт - Петербургская медицинская академия последипломного образования

Защита состоится "21" декабря 1998 г. в ■JJ часов на заседании диссертационного совета к 084.12.01 при Санкт - Петербургской государственной педиатрической медицинской академии по адресу: ин.194100,Санкт - Петербург, ул. Литовская д.2.

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Санкт -Петербургской государственной педиатрической медицинской академии

Автореферат разослан

ноября 1998 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

И.А.Комиссаров

Актуальность проблемы. Многочисленные, преимущественно клиник о - лабораторные исследования, свидетельствуют о широком распространении хламидноза. В то же время, иатологоанатомические изменения при респираторном хламидиозе, изучены недостаточно. Требуется уточнение патологоанатомической картины данного заболевания.

Учитывая то, что респираторный хламидиоз может быть вызван различными видами хламидий, при разнообразных путях инфицирования, Необходимо изучение морфологических особенностей данного вида хламидноза, обусловленного разными видами микроорганизмов рода Chlamidia, при разнообразных механизмах заражения (Шаткин А.А., 1979, 1981; Цннзерлинг А.В., 1989,1992,).

Литературные данные последних лет свидетельствуют о том, что патологические процессы в легких, связанные с хламидийной инфекцией различной локализации, встречаются очень часто (Шастнна Г.В., Цннзерлинг А.В., 1991; Дементьева Г.М., 1990; 1993; Цннзерлинг В.А., 1997; Веет М.О.,Saxon Е.М. et al., 1977, 1979; Brusfield D.M. et al.,1979; Emlil G.A., Ozere R.L. et al., 1979).

В настоящее время наибольшее значение имеет уроге-нитальный и связанный с ним BiiyTpiiyTpo6nbm хламидиоз, а также пневмонии, как одно из наиболее частых проявлений внутриутробного хламидноза (Кахрамов Т.Б., 1986; Цннзерлинг А.В., 1989, 1992, 1993; Козлова В.И., Пухнер А.Ф., 1995, 1997; Цннзерлинг А.В., Цннзерлинг В.А., 1996).

В работах ряда авторов указывается, что хламидиями инфицированы от 500 млн. до 1 млрд. человек на земле (Зай-деева Я.З., 1990; Семенов В.М., Никифоровский Н.К., Том-

чина A.B. 1997; Mergui J. L., Salut - Baroux J. 1987).

Хламндийные инфекщш имеют значительный удельный вес в гинекологии, урологии, венерологии, педиатрии, широко распространены в различных возрастных н социальных группах. Они Могут протекать как остро, подостро, так и иметь хроническое течение, выявляться в виде спорадических случаев, эпидемий и даже пандемии. Часто имеет место респираторный хламидиоз и патологические изменения в легких могут быть проявлением генерализации, особенно на фоне иммуподсфицитных состояний ( Савичева A.M., 1982, 1985; Цинзерлинг A.B., 1989, 1992, 1993; Jacobs D., Arum E.S., Kraus S.J., 1978; Arth С., 1979; Hammerschlag M.P., 1979).

Единичные экспериментальные работы проводились в 60-70 годы, в них неполно отражена морфология легких лишь при наиболее изученном респираторном хламндиозе -орнитозе, с использованием преимущественно аэрозольного пути заражения (Толыбеков A.C., 1970; Терских И.И., 1972; Цинзерлинг A.B., 1989; Barron А. et al., 1981).

Между тем, по мнению A.B. Цинзерлинга (1989), эти заболевания почти не диагностируются в повседневной практике ни клиницистами, ни патологоанатамами.

Медико-социальная значимость хлампдиоза подчеркивается тем, что он включен в число инфекционных заболеваний, подлежащих обязательному статистическому учету в соответствии с приказом Минздрава России № 286 от 07.12.93 г.

В доступных нам литературных источниках мы не нашли сведений, отражающих морфологию хламидийного поражения легких, обусловленного различными видами хлами-

Актуальность проблемы. Многочисленные, преимущественно клиник о - лабораторные исследования, свидетельствуют о широком распространении хламидноза. В то же время, патологоанатомические изменения при респираторном хламидиозе, изучены недостаточно. Требуется уточнение патологоанатомической картины данного заболевания.

Учитывая то, что респираторный хламидиоз может быть вызван различными видами хламидий, при разнообразных путях инфицирования, Необходимо изучение морфологических особенностей данного вида хламидноза, обусловленного разными видами микроорганизмов рода Chlamidia, при разнообразных механизмах заражения (Шаткий А.А., 1979, 1981; Цннзерлипг А.В., 1989,1992,).

Литературные данные последних лет свидетельствуют о том, что патологические процессы в легких, связанные с хламидийной инфекцией различной локализации, встречаются очень часто (Шастина Г.В., Цинзерлинг А.В., 1991; Дементьева Г.М., 1990; 1993; Цинзерлинг В.А., 1997; Веет М.О.,Saxon Е.М. et al., 1977, 1979; Brusfield D.M. et al.,1979; Emlil G.A., Ozere R.L. et al., 1979).

В настоящее время наибольшее значение имеет уроге-нитальный и связанный с ним внутриутробный хламидиоз, а также пневмонии, как одно из наиболее частых проявлений внутриутробного хламидноза (Кахрамов Т.Б., 1986; Цинзерлинг А.В., 1989, 1992, 1993; Козлова В.И., Пухнер А.Ф., 1995, 1997; Цинзерлинг А.В., Цинзерлинг В.А., 1996).

В работах ряда авторов указывается, что хламидиями инфицированы от 500 млн. до 1 млрд. человек на земле (Зай-деева Я.З., 1990; Семенов В.М., Никифоровский Н.К., Том-

• г-

чина A.B. 1997; Mergui J. L., Salat - Baroux J. 1987).

Хламндийные инфекции имеют значительный удельный вес в гинекологии» урологии, венерологии, педиатрии, широко распространены в различных возрастных и социальных группах. Они Могут протекать как остро, подостро, так и иметь хроническое течение, выявляться в виде спорадических случаев, эпидемий и даже пандемий. Часто имеет место респираторный хламидиоз и патологические изменения в легких могут быть проявлением генерализации, особенно на фоне иммуподефшщтных состояний ( Савичева A.M., 1982, 1985; Цинзерлинг A.B., 1989, 1992, 1993; Jacobs D., Arum E.S., Kraus S.J., 1978; Arth С., 1979; Hammerschlag M.P., 1979).

Единичные экспериментальные работы проводились в 60-70 годы, в них неполно отражена морфология легких лишь при наиболее изученном респираторном хдамидиозе -орнитозе, с использованием преимущественно аэрозольного пути заражения (Толыбеков A.C., 1970; Терских И.И., 1972; Цинзерлинг A.B., 1989; Barron А. et al., 198!).

Между тем, по мнению A.B. Цинзерлинга (1989), эти заболевания почти не диагностируются в повседневной практике ни клиницистами, ни патологоанатамами.

Медико-социальная значимость хлампдиоза подчеркивается тем, что он включен в число инфекционных заболеваний, подлежащих обязательному статистическому учету в соответствии с приказом Минздрава России № 286 от 07.12.93 г.

В доступных нам литературных источниках мы не нашли сведений, отражающих морфологию хламидийного поражения легких, обусловленного различными видами хлами-

- 3' - , . . , .

дий при различпых путях инфицирования, что имеет большое значение при оценке характера и глубины патологического процесса при хламидиозах.

Исходя из вышеизложенных предпосылок, нам представлялось актуальным и обоснованным сравнительное изучение морфологии легких при хламидиозах, индуцированных Chi. psittaci, вызывающих генерализованные инфекции и Chi. trachomatis, представителями, так называемых, локализованных хламидиозов. Поскольку указанные данные весьма важны и необходимы для практической деятельности как морфологов, так и клиницистов.

Цель исследования. Изучение морфологических особенностей легких при хламидийной инфекции в эксперЦ-менте, обусловленной Chi. psittaci и Chi. trachomatis при различных способах заражения экспериментальных животных в разные сроки наблюдения.

Основные задачи исследования:

1. Выявить морфологические особенности легких при внутрибргошинном заражении животных Chl.psittaci и Chi. trachomatis.

2. Установить морфологическую картину легких при интраиазальиом заражении морских свинок Chi. psittaci и Chi. trachomatis.

3. С помощью электронномикроскопического исследования определить локализацию возбудителя и ультра-структурные изменения в клетках - мишенях.

4. Изучить гуморальный иммунный ответ и диссеми-нацию антигена в легких, сопоставив морфологические изменения при различных способах заражения и двух видах хламидпй.

Научная повнзна исследования. На основании комплексного исследования определены ранние морфологические изменения р легких у экспериментальных животных при внутрибрюшинной и интраназадьной аппликации различных видов хламидий, а также отмечена динамика их развития в течение месяца. Установлена преимущественная локализация возбудител? в легочной ткани.

Установлена динамика гуморальной иммунной реакции, присутствие хламидий и их антигенов в легочной ткани в течение месяца после заражения.

Впервые родучены сравнительные данные по морфологическим изменениям в легких экспериментальных животных при внутрцбрюшинном и интраназальном заражении различными видами хламидий.

Впервые показано, что при внутрибрюцшнцом заражении воспалительный процесс в легких имеет более выраженный характер, чем при интраназальном инфицировании.

Подтверждено, что поражение легких характеризуется очаговым продуктивным интерстипиальным воспалением. В динамике процесса выявляются лимфоидногистиоцитарные узелки, периваскулиты, десквамация и пролиферация альве-ойоцитов и цилиндрического эпителия бронхов, повышение сосудистой проницаемости, мелкие очаги с серозно - геморрагическим экссудатом (14 сутки) и нежное фиброзиро-вание. Все изменения наиболее ярко проявились при внутри-брюшинном заражении Chi. psittaci.

Установлено, что при интраназальном и внутрибрхо-шинном заражении Chi. trachomatis экссудативный компонент воспаления легких отсутствует.

На основании анализа электронограмм легочной тка-

пи экспериментальных животных показана преимущественная локализация хяамидий иа разных стадиях биологического цикла развития й альвеолоцитах II- ц I- порядка, реже в зндотелиоцптах;.

Наиболее интенсивный иммунный ответ наблюдали при внутрибрюшяйном заражении Chi. psittaci, тогда как более выракенпаа Диссешгаация антигена в легких отмечена при интраназаяьном инфицировании.

Теоретическое и практическое значение работы. Аналитическая оценка результатов исследования показала, что морфологические изменения и динамика их развития зависят от пути заражений а вида возбудителя. Наблгодае^я корреляция морфологических изменений с гуморальном иммунным ответом и индикацией возбудителя в легких.

Выявлена излюбленная локализация хдамидий в легочной ткани. Определены морфологические особенности пневмонии, при разных путях инфицирования вызванной различными видами хламидий. Интерпретация гистологических, гистохимических, цитологических, эдектронпомикро-скопических, иммунноморфологических и серологических методов исследования позволяют утверждать, что основным пусковым механизмом в развитии пневмонии является повреждение клеток - мишеней (альвеолоцитов II и I порядка) вследствие размножения н персистенции возбудителя в них.

Патологоанатомические изменения в легких животных, зараженных Chi. psittaci внутрибрюшинно, проявляются очаговой продуктивной интерстициальной пневмонией, с десквамацией альвеолоцитов, изредка с очаговым серозио -геморрагическим экссудатом и примесью единичных лейкоцитов: На 14 сутки после заражения животных, независимо

от вида хл а мидий и путей инфицирования, начинались процессы фибрознрования, но степень их выраженности различная.

Типичные хламидийные цнтоплазматические включения хорошо определяются в полутойких срезах при окраске толуидйновьШ й метиленовым синим, а также в мазках - отпечатках при окраске по Романовскому - Гимзе и по Павловскому.

Положительные результаты по индикаций антигенов хламидий дает реакция непрямой иммунофлюоресценцйи (РНЙФ).

Результаты нашего исследования могут быть использованы при дальнейшем изучении респираторного хламиди-оза и в диагностике его не только на секционном материале, но и в клинике.

Для прижизненного диагноза хламидиоза легких необходимо рекомендовать исследование бронхиальных лова-жей и биоптатов слизистой бронхов.

На секционном материале уточнение диагноза хламидиоза легких возможно при исследовании полутонких срезов легких, что позволяет выявить морфологические изменения в них и хламидийные цнтоплазматические включения в клетках - мишенях.

Морфологический диагноз респираторного хламидиоза необходимо подтверждать серологическими методами диагностики /РНИФ, РНГА, РСК и другими/.

Основные положения выносимые на защиту.

1. Морфологические изменения при внутрибрюшин-ном заражении наиболее выражены, проявляются очаговой продуктивной интерстициальной пневмонией с десквамацией

- 7 -

альвеолоцитов и затяжным течением.

2. Для ийтраназального заражения более характерно развитие пптерстиЦналыгого воспаления в ранние сроки, оно менее выражено, чем при внутрибрюшинном заражении.

3. Хламидии определяются в адьвеолоцитах II- и I- порядка, и реже в эндотелиоцитах, а также располагаются Ьво-бодно при разрушении клеток - мишеней. Среди оргааеля клеток наиболее уязвимы мнтохондрпи, лизосомы и пластЫй-чатые тельца.

4. Морфологические изменения в легких морских свинок наиболее ярко прослеживаются при внутрибрюшинндм заражении Chl.psittaci, выражающиеся очаговой ннтерстй-циальной пневмонией с десквамацией альвеолоцитов, лишь на 7 - 14 сутки развитием очаговой экссудативной пневмонией.

5. Наиболее высокие титры хягшиднйиых антител выявлены при внутрибрюшинном заражении Chi. psittaci, а индикация антигена более эффективная при интрапазаяьном заражсиии.

Внедрение результатов исследования в практику. Результаты проведенной работы внедрены в учебный процесс кафедры патологической анатомии, микробиологии, гистологии и инфекционных болезней.

Апробация работы и публикации. Основные положения работы доложены на III - межрегионарной научно - практической конференции патологоанатомов Урала и Западной Сибири (Челябинск, 1996), областном обществе патологоанатомов (Пермь, 1993*1995), областной научно - практической конференции патологоанатомов (Пермь,1992,1996, 1998),научной сессии Пермской государственной медицин-

- в -

ской академии (Пермь,1996,1997,1998), научно - практической конференции молодых ученых Пермской государственной медицинской академии (Пермь, 1996, 1997).

По теме диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 5 работ в центральйой печати и прирайненной к ней.

Структура и объем диссертации. Работа изложена на 165 страцицах. Состоит из введения,. 4 глав, заключения, выводов, указателя литературы. Диссертация иллюстрирована 6 таблицами, 6 графическими диаграммами и 57 фотографиями. Спцсок литературы содержит 203 наименований работ: в Toivf числе 139 отечественных и 64 зарубежных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы U методы исследования

Исследование выполнено на 66 морских свинках обоих полов массой 280 - 320 гр. До начала эксперимента животное содержались в виварии и пройши 3 месячный карантин.

Для воспроизведения хламидийной инфекции использовали микроорганизмы Chi. psittaci, штамм "Lori". Выделен в 1957 г. от попугая. Chi. trachomatis, штамм "Ьг", выделен оТ больного венерической паховой лимфогранулемой. Возбудители получены из лаборатории хламидий и риккетсий НПО "Биомед", г. Пермь. : -1: ;

Применяли внутрибрюшинное и интраназальное заражение. Инфекционный материал вводили в виде,.10% взвеси очищенной овокультуры Chl.psittaci и Chl.trachomatis (раздельно) внутрибрюшинно 1,0 мл и интраназально 0,2 мл. Инфекционный титр вводимого материала составил

- 9 -

107 LD 50/0,03 мл для белых мышей.

Животные были разделены на две экспериментальные группы: 1 группа представлена 15 - морскими свинками, зараженными Chi. psittaci внутрибрюшинно и 15 - животными, зараженными Chi. trachomatis также внутрибрюшинно; 2 группа состояла из 15 - животных инфицированных Chi. psittaci и 15 - морских свинок зараженных Chi. trachomatis, инфекционный материал вводили ннтраназально. Животные, зараженные разными видами хламидий при различных путях инфицирования, содержались изолированно друг от друга, с соблюдением равных условий содержания п питания. Контрольную группу составили 6 животных, которым аналогично экспериментальной группе вводили контрольный ап-тиген. Материал для исследований забирала через 2. 4, 7. 14 и 30 суток после инокуляции возбудителя. Кровь для серологического исследования ук о итр о льиы х и опытных животных забирали пункцией из сердца.

Сразу после забоя животных путем декапитацин, проводили вскрытие, с описанием макроскопической картины легких.

Далее производился забор материала для гистологического, гистохимического, цитологического, иммуномор-фологического, эдектронномикроскоппческого исследования и изготовления полутонких срезов.

¡После вырезки кусочков легких и обезвоживания их в спиртах восходящей крепости проводили заливку в парафиновые блоки. Затем срезы толщиной 5 микрон окрашивали гематоксилином и эозином , по ван Газону, по Малло-ри для выявления фиброзных волокон и по Вейгерту на фибрин. Использовали окраску альциановым синим при выяв-

лении гликозаминогликанов н ШИК - реакцию для определения нейтральных мукополисахарйдов. Для выявления нейтральных жиров прймёнялн окраску Суданом - III. Реакцию Браше использовали для определения плазматических клеток. Гистологические препараты исследовали ь световом микроскопе.

В каждом случае в легких производимой Подсчет лим-фойдногистиоцйтарных узелков в 10 полях зрения.

s Для цитологического исследования, на обезжиренное предметное стекло с поверхности разреза легкого, предварительно подсушенного фильтроваЛьной бумагой, выполняли мазки - отпечатки t последующей фикбацией в 100% ацетоне и смеси Никифорова и окраской метилейобым синим в модификации по Павловскому, толуйдиИовым синим и по Романовскому - Гимзе. Препараты изучали под йасленной им-1 мерсией при увеличений 2025х для выявления хламидийных цитоплазматических включений (Цинзерлинг В. А., 1992; Автандилов Г.Г., 1973, 1994).

! Непосредственно после вскрытик животного острой бритвой вырезали кусочки легкого размером не более 1-2 мм* и быстро помещали их в 10% раствор глютарового альдегида, а затем в 1% растворе четырехокиси осмия для последующего изготовления полутонких и ультратонких срезов.

Дальнейшую проводку материала осуществляли но общепринятой методике с заливкой в аралдитовые смолы для изготовления блоков. Полутонкие (толщиной;1 - 2 мк) и ультратонкие (толщиной менее 1 мк) срезы получали на ультратоме LKB-8800. После окраски полутонких срезов толуи-диновым и метиленовым синим, с предварительным экстрагированием смол, исследовали их для выявления хламидий и

-11-

прицельного изготовления ультратонких срезов.

Ультратоикпе срезы после контрастирования просматривали в просвечивающем электронном микроскопе ,!ЕМ -100Х при увеличении 7 000s и 10 000* (Перов Ю.Л., 1973; Ерохии В.В., 1973, 1974, 1979, 1980, 1987; Автандилов Г.Г., 1973, 1994). В срезах прицелено выявляли альвеолоциты II; I порядка и цилиндрический эпителий бронхов, в которых определяли состояние митохондрий, лизосом и изменение структуры пластинчатых (осмнофильных) телец в альвеоло-цптах II порядка, наличие хяамидпй и их стадии развития, Вместе с тем оценивали морфологию капилляров, эндоте-лпоцнтов, а также фибропластнческне, процессы в легочной ткани. Исследование проведено у 10 - животных в каждой группе наблюдений. Интересующие йас наиболее измененные участки легких фотографировали.

Для изучения гуморального иммунитета и индикации возбудителя в легочной ткани и сыворотке крови использовали серологические методы. РеакциЬэ непрямой микроим-мунофлгооресценции (р.НМИФ) проводили по методике • прёдложенйой Э.С. Горовцом и O.A. Тимашевой (1976, 1978, 1979, 1981, 1986).

Реакцию использовали как для выявления хламнднй и их антигенов в мазках, так и для регистрации противохла-мидийных антител и их титров в сыворотках крови.

В первом случае на фиксированный в ацетоне мазок наносили иммунную антихяамидийную сыворотку кролика, после 30 - минутной инкубации и отмывания в фосфатяо солевом буферном растворе (ФСБР), добавляли антивидовую люминисцирующую сыворотку. После очередной инкубации, отмывания и подсушивания проводили микроскопию. Резуяь-

- 12 - (

таты учитывали по четырехкрестовой системе. ,

Для учета результатов использовали Люминесцентный микроскоп ЛЮМАМ И-1 при комбинации светофильтров ФС-2; БС-2; СЗС-2; ЖС-18. Объектив 90*, окуляр 7*. Фотографирование производили на фотопленку РФ-3 с чувствительностью 900 обратных рентген при экспозиции 6т 15 до 40 с.

Для выявления антител проводили реакцию непрямой гемагглютинации (РИГА), применяли микрометод постановки РНГА на стандартных полистеролЬвых панелях, общий объем ингредиентов 0,05 мл. Готовили последовательно двукратное разведение исследуемой сыворотки на фиЗиблЬ-гнческом растворе, начиная с разведёнйя 1 : 2 до 1 : 256. Результаты РНГА учитывали по виду осадка на дне лунки, исходя из четырехкрестовой системь!.

Реакцию связывания койплемента (РСК) проводили выборочно на полйстеролоВых панелйХ1 Оценивали результаты традиционный способом.

Обработка вСех данных выполнялась с оценкой среднего значения, доверктельного интервала и степени достоверности полученных результатов. Различия основных параметров исследования считались достоверными при р <. 0,05 по критерию Стьюдента - Фишера.(Гублер Е.В., Генкин А.А, 1973; Автандилов Г.Г., 1973, 1994; Маймулов В.Г., Лучкевич B.C. и соавт., 1996).

Статистическая обработка результатов проводилась на ЭВМ ICS 486 с использованием программы Microsoft Excel (версия 5.0).

Полученные даПные при разных методах исследования сопоставлейы.

-13-

Результаты исследований и их обсуждение

Результата; наших исследований свидетельствуют о выраженных изменениях в легких морских свинок при хла-мидийяой инфекции в эксперименте с использованием различных видов хламидий и путей заражения экспериментальных животных.

На основании полученных результатов комплексного исследования легких прослежены ранние морфологические изменения в легких при внутрибргошинном и интраназаль-пом заражении животных и отмечена их динамика в течение месяца.

Установлена преимущественная локализация возбудителя в легочной ткани. Отражена гуморальная иммунная реакция и индикация антигена в легких.

Проанализировав полученные морфологические данные при внутрибрюшинном и интраназальном заражении различными видами хламидий установили, что. при внутрибрюшинном заражении воспалительный процесс в легких был более выраженный, чем при интраназальном. Однако при интраназальном заражении уже на .2 сутки отмечали патологические изменения в легких, а диссеминацня антигена была более значительной (табл. 1).

Вне зависимости от путей инфицирования и вида хламидий в легких животных определялась преимущественно очаговая инфильтрация межальвеолярных перегородок лим-фоидными клетками к гистиоцитами, десквамация альвеолоцитов н покровного эпителия бронхов, однако степень выраженности патологических изменений была различной.

Кроме лимфоидногистиоцитарной инфильтрации межальвеолярных перегородок, наблюдаларь десквамацид альве-олоцитов в просвет альвеол в риде единичных клеток и многоядерных симпластов.

При внутрибрюшшщом заражении Chl.psittaci на 7-14 сутки часто встречались очаги, в которых просвет альвеол бщг выполнен серозной жидкостью с примесью эритроцитов. Крайне редко определялись лейкоциты. Морфологическая картина в легких напоминала серозно - геморрагическую пневмонию. Вероятно, данные изменения связаны с внутри-брюшинным путем инфицирования ft повышением сосудистой проницаемости, о чем свидетельствовали Морфологические цзмененця в эндотелии сосудов. Эндотелий сосудов быц утолщен, ядра эндотедиальных ^слеток приобретали округлую форму. Отмечалась десквамадня эндотелия в просвет сосудов. В эндо^е^ир и кое - где в мышечных элементах артерий наблюдалась гидроиическая дистрофия. Стенки капилляров межальвеолярных . перегородок были разрыхлены, слабо ШИК - положительны.

При интраназальном и внутрибрюшиннЬм Заражении Chi. trachomatis экссудативный компонент воспаления отсутствовал. Нарастание титров специфических антител бо-лёе интенсивно проявлялось при заражении Chi. psittaci в РИГА. В РСК компдиментфнкснрующне специфические айтитела во всех экспериментальных группах обнаруживались лишь к 14-30 суткам после заражения в невысоких: титрах (рис. 1. 2).

В межальвеолярных перегородках выявлялись лим-фоидногистиоцитарные узелки, очаги дисТелектаза, ателектаза и эмфиземы. Надо полагать, что очаги ателектазов и

•РСК: СЫ. psittaci Chi. trachomatis ■

Рис. 1 РИГА и РСК при внутркбрюшинном заражении Chi. psittaci и Chi. trachomatis

РСК: Chi. psittaci Chi. trachomatis ' i, „

Рис. 2 РНГА и РСК при ннтряназяльном заряжении Chi. frsittxci я Chi. trachomatis

дистелектазов связаны с цитопатическим действием ^хлами-дий на альвеолоциты II - порядка и повреждением пластинчатых телец, которое приводит к снижению выработки сурфактанта. Возможно в генезе эмфиземы, ателектазов и дистелектазов имеет значение нарушение вентиляции легких вследствие десквамации и пролиферации эпителия бронхов и бронхиол, гиперпродукции бронхиальными .железами слизи и образованием слизисто - эпителиальных пробочек.

В бронхах связь между отдельными клетками эпителия довольно часто была нарушена. Наблюдалось разрыхление эпителиального пласта, клетки располагались беспорядочно. Можно было наблюдать отторжение поверхностных слоев эпителиального покр1ова в виде отдельных клеток или пластов. В перибронхиальной ткани - отек, рыхлые, слабо выраженные лимфоидногистиоцитарные инфильтраты, умеренная гиперемия. Наряду с дистрофическими процессами, сопровождающимися десквамацией покровного эпителия, нередко выявлялись очаговые разрастания эпителия в виде сосочков, состоящих-из нескольких слоев клеток, как проявление регенераторных процессов.

Данные наблюдения находят подтверждение в работах многих авторов, изучавших орнитоз и наблюдавших нарушения бронхиальной проходимости, доходившей до полной закупорки бронха с образованием ателектазов (Казанцев "А. П., 1973; Ильинский Ю.А., 1974; Терских И.И., 1979)^

На секционном материале Казанцев А.Ц." и. соавт. (1973) при орнитозе отмечали катаральный трахео - бронхит, с преимущественным поражением мелких бронхов, разбросанные фокусы гемаррагий и пневмонические фокусы с тенденцией к слиянию.

' Казанцев А.П. (1973), изучая секционный материал, в случаях присоединения вторичной бактериальной флоры, отмечал гнойный трахеобронхит и картину лобарного вос-.паления в легких. В плевре наблюдал свежие отложения фибрина, серозный и гнойный экссудат и очень редко гангрену и абсцес£й! легких.-'Очаговые, сегменгтарные и субсегмен-тарййё гйошШс пневмонии; объясняются наслоением: 'вто-рйчйой микрофлоры (кокков).

Нарушение бронхиальной проходимости у больных орнитозом закономерно. Сужение просвета бронха возникает в результате воспалительной инфильтрации и отека степки бронха, а также за счет спазма; и скопления в. просвете бронха вязкойхлизи. Спазму й повышенному отделению слизи способствует поражение симпатнко - адрена-ловой системы с преобладанием парасимпатической иннервации (Казанцев А.П., 1973;! Ильинский Ю.А.,1974; ТерсЛсих И.И., 1979). !

При исследование мазков отпечатков срезов легкйх, окрашенных по Павловскому и Романовскому - Гимзе, а также в полутонких срезах легких, окрашенный толуидиновым синим и меТиленовым синим, нами выявлены в цитоплазме макрофагов,! альвеодоцитов,| эпителии бронхов и эндотелио-цитах базоф!плБНые -¡вюгючгения» мелких йГ"средних*,размеров, округлой формы. Цитоплазма их с множественными-мелкими вакуолями, ■ хламидййные цитоплазматические включения

I

иногда оттесняли ядра клеток - мишеней к периферии. Ядра содержали множественные мелкие вакуоли, отмечалась мар-гинация хроматина и размытость контуров ядер.

Мазки - отпечатки содержат 40 - 50 эритроцитов в поле зрения. В некоторых мазках - отпечатках определялись

до 8 сегментпоядерных и полиморфноядерпых нейтрофиль-вых лейкоцитов в пояс зрения, при этом очень редко встречались единичные диплококки. Наличие антигенов во всех случаях подтверждено иммунофлюоресцентным исследованием. Причем РНИФ более интенсивна на 7 н 14 сутки эксперимента, в яри ннтраназальном заражении также и на 4 сутки, когда оепределялись высокие титры специфических антител (табл. 1), что объясняется большей иммуноген-ностыо данного вида хл а мидий.

Таблиц» 1

Индикация антигена СЫ. р«Шяс{ штамм чЬвг1" и СМ. *гясЬотаи» штамм "!»" в РНИФ яр» инхраназальном заражении

Сроки наблюдения: 2 - е сутки 4 - е сутки 7-е сутки 14 - е сутки 30-е утки

РНИФ Chi. psittaci «+++' в + + + я

РНИФ Chi. trachomatis " + + Ч-" м 4- + " « Я

Кромр того, нами отмечено, что сосудах межальвеолярных перегородок полнокровны, особенно резко гипереми-рованы капилляры. Также эти изменения паиболее ярко выражены при заражении Chi. psittaci, особенно при внутри-брйшинном заражении. В окружности сосудов встречались лимфондные клетки, располагающиеся в виде муфт. Пери-васкулярные инфильтраты были представлены лймфойдными клетками. Нередко выявлялась полнокровие сосудов. Капил-лярй вдавались в просвет альвеол, форма которых становилась щелевидной.

Начиная р Н суток в межальвеолярных 'перегородках отчетливо выявлялись нежные волокна соединительной ткани, в которых, как и в фибробластах имела место слабо выраженная ШИК - положительная реакция. Обращал па себя внимаппе процесс фиброзирования в окружности бронхов и перйваскулярньш склероз с рыхло' расположенными клеточными элементами. Активность фибробластЬв была повышена уже с: 7 суток начала опыта, о чем свидетельствует увеличение содержания ШИК - положительного материала в их цитоплазме. В поздние сроки наблюдения (30 сутки) фнброзирование лучше всего выявляется в окружности сосудов и бронхов, где еще в более "ранние сроки определялись скудные клеточные инфильтраты.: Фиброзные волокна, окружающие сосуды, в виде множества лучей рас* пространялись в перегородки альвеол. Вокруг сосудов соединительнотканные волокна наблюдались более Четко, чем в отдаленной от сосудов легочной ткани. Наряду с процессами фиброзирования выявлялись морфологические признаки ранних сроков эксперимента: повышенная сосудистая проницаемость, очаговая1 лимфоидногистиоцитарная йнфпль-

трация межальвеолярных перегородок, перибронхиальных и перпваскулярных зон, десквамация и регенерация эпитслио-цитов н иногда мелких симпластов в просвет альвеол. Следовательно, можно говорить о затяжном теченнии воспалительного процесса в легких. Таким образом, патологические изменения легких характеризуются затяжным течением со склонностью к фиброзированию.

Клинически постепенное начало и затяжное течение хламидийных пневмоний подчеркиваются в работах некоторых авторов (Tipple M.A., Saxon Е.М., Radkowski M.A. et al., 1977; Duplon E.M.C., Harris R.J., Darougar S. et al., 1980; Schachter J., Lum L., Gooding С.A. et al., 1987).

Морфологическая картина общепатологических процессов заслуживает особого внимания, поскольку, возможно они были связаны с действием разнообразных факторов.

Прежде всего это цитопатнческое действие хламидии, связанное с их жизнедеятельностью в ходе цикла развития в клетках - мишенях, а также путях их проникновения в легочную ткань и вирулентности использованных для заражения штаммов. Нельзя не учитывать и индивидуальную реактивность макроорганизма подопытных животных.

Вероятно имеет значение нарушение кровообращения, фиброзирование легочной ткани, нарушение вентиляции легких вследствие альтеративных и пролиферативных изменений в бронхах и бронхиолах, сочетающихся с гиперпродукцией слизи.

В наших наблюдениях инфекция сопровождалась нарастанием выраженности патологических процессов вплоть до, 14 суток, которые сохранялись до окончания опыта.

При внутрнбрюшинном заражении, моделирующем гематогенной путь распространения инфекции, который возможей Цри Ьнутрйутробном хламидИогЗе, патологические измененпя более ярко выражен!,!. При кнфицнрованнй СЫ. psittaci на 7 ^ 14 сутки наблюдёния в легких обнаруживался серозио-гемаррагнческий экссудат, в Сочетании с признаками повышенной сойудистЬй проницаемости. В эти же сроки наблюдения отмечена наибольшая динамика нарастания ти1ра специфических антител (рис. 1) и яркая индикация антигена в РНИФ (табл. 2). ^

Таблица 2

Индикация антиген;* Chi. psittaci штамм "Löri" и Chi. trachomatis штамм "Li" о РНИФ при внутриврюшйнном заражении

Сроки наблюдения: 2 - b сутки 4 - е сутки сутки 14 - е сутки 30 - с утки

РНИФ Chi. psittaci " + ++" " + + + " " + +"

РНИФ Chi. trachomatis " +• » и " + + + " " + +"

Мы наблюдали иммунную клеточную реакцию определяемую уже на 2 - 4 сутки, достигающую максимума к 7 - 14 суткам. Встречалась очаговая иммунная реакция, однако

отдельные компоненты воспаления носили диффузный характер, которые проявлялись Виде значительной лнмфонд-иогистиоцитарной инфильтрации межадьвеолярных перего-одок, утолщения эндотелия сосудов, десквамативной реакцией, наличием макрофагов, увеличением количества лимфоид-ных фолликулов с широкими Центрами размножения. При использовании реакции Брате отчетливо выявлялись плазматические клетки различной степени зрелости в периброн-хиальных фолликулах и утолщение межальвеолярных перегородок. Эти изменения подтверждают данные экспериментальных исследованй Б.С Гусман., И.И. Терских и соавт. (1966, 1968, 1979).

Наибольшее количество лнмфондногнетиоцнтарных узелков определяется при интраиазалъпом заражении Chi. psittaci (на 30 сутки - 2-4 при подсчете в 10 полях зрения, а в контрольной группе этот показатель 0-1), несколько меньше их при внутрибрюшинном заражении данным видом хлйми-дий. Возможно это связано с местньй иммунной реактивностью животных н способом инфицирования. Так при внутрибрюшинном заражении лимфоидногистиоцитарных узелков было меньше, но чаще встречались и были более выраженными периваскулярные муфты, состоящие преимущественно из димфоидных клеток.

Актйвное участие в иммуноморфологическнх реакциях принимали димфоидные образования легких. Подобные изменения отмечали - Б.С. Гусман, И.И. Терских и соавт. (1968), И.И. Терских (1979).

Изучение электронограмм отдельных структур легкого, по сравнению с исследованием их при световой микроскопии, позволило выявить более глубокие нарушения

ультраструктур клеток - мишеней, в которых обнаружены хлампдии па разных стадиях развития. В альвеолоЦитах II -порядка выражены изменения со стороны ультраструктур и прежде всего осмиофильных телец, являющихся местом синтеза и депонирования сурфактантй. На 14 и особенно -30 сутки в легких выявлялись коллагеновые волокна.

Анализ электронограмм позволил определить хл^ми-дии на разных стадиях развития преимущественно в алЬве-олоцйТах II - и I - порядка реже, в эндотелиоцйтах. Хл&-мидни могут располагаться и внеклеточно (Цинзерлинг A.B., 1989). Мы наблюдали хламидий в Просвете альвеол при разрушении клеток - мишеней. i ; .

Размножение хламидий наблюдалось И в эпителии бронхов. В течение первой недели опыта (начиная со 2 суток) у всех зараженных животных в апикальных концах отдельных эпителиоцитов мелких бронхов встречались вакуоли, заполненные элементарными тельцами возбудителя. Особенно хорошо хламидийные включения определялись в полутонких срезах легких. ...

По данным A.B. Цинзерлинга (1981),' структурные изменения при внутриутробном хламидиозе напоминают подобную картину при микоплазмозе. Однако они отличаются несколько меньшими размерами в пораженных клетках, преимущественно альвеолоцитах (Цинзерлинг А.В:,1989; 1983; Цинзерлинг A.B., Цинзерлинг В. А., 1996).

Подобные изменения мы наблюдали в мазках - отпечатках. Помимо элементарных частиц, внутри- и внеклеточно были обнаружены более крупных размеров базофильные и оксифнлыгае тельца Гальберштедтера - Провачека (Цинзерлинг A.B., 1989; 1983; Цинзерлинг A.B., Цинзерлинг В.А.,

1996), при окраске азуром - эозином в модификации Павловского и по Романовскому - Гимзе.

Полученные данные могут быть использованы при дальнейшем изучении респираторного хламидиоза и диагностике его на секционном материале, а также при исследовании бронхиальных ловажей и биоптатов из бронхиального дерева легких при проведении лечебно - диагностических эн доек опий.

Таким образом, поражение легких при экспериментальном хламидиозе с различными путями инфицирования и вызванного различными видами хламидий, характеризуется интерстициальным воспалением. В динамике процесса выявлялись лимфоидиогистиоцитарныс узелки, иериваскулиты, десквамация и пролиферация аяьвеолоцитов и цилиндрического эпителия бронхов, повышение сосудистой проницаемости, мелкие очаги серозно - геморрагической пневмонии на 7-14 сутки только при внутрибрюшинном инфицировании Chi. psittaci и нежное фнброзироэание, особенно на 30 сутки эксперимента.

Подобные изменения отмечаются на секционном материале при перинатальном хламидиозе (Самохин П.А., Ерман Б.А., Тулакина Л.Г., и соавт., 1997).

По мнению В.А. Цинзерлинга (1997), наиболее ценная информация при респираторных инфекциях может быть получена при цитологическом исследовании мазков слизистой оболочки трахеи, окрашенных метиленовым синим - основным фуксином по методу Павловского (Цинзеряинг В.А., Комарова Д.В., Вашукова С.С. и соавт., 1997). Данное представление находит подтверждение в нашей экспериментальной работе с использованием комплексного исследования.

Аналитическая оценка результатов исследования показала, что основным пусковым механизмом в развитии пневмонии, являлось повреждение клеток - мишеней вследствие размножения в liiix и персистенцпп возбудителя. Динамика мо^фологическйх изменений в легких коррелйрует со сроками эксперимента, способами заражения, характером возбудителей и гуморальным иммунным ответом.

Обращает на себя внимание, что патологический процесс в легких развивается в виде очаговой продуктивной интерстициальной пневмонии, начиная со 2 суток опыта, сопровождается гидропическои дистрофией и десквамациен альвеолоцитов и эПителиоцитов слизистой бронхов. Одновременно в эти же сроки кроме десквамации выявляется и регеперация поврежденного эпителия.

На 4 сутки опыта каких либо особенных изменений по сравнению с предыдущим сроком наблюдения отметить не удалось.

Через 7 суток с начала эксперимента дополнительно обнаруживаются мелкие очаги серозно - геморрагической пневмонии (только при внутрибрюшинном инфицировании Chi. psittaci). Во всех наблюдениях выявляется активность фибробластов, находящихся среди клеточных инфильтратов в межальвеолярных перегородках. Она наиболее ярко прослеживается при внутрибрюшинном заражении Chi. psittaci. Обнаруживалось слабое перпваскулярное и перибронхиаль-ное фиброзирование.

На 14 сутки опыта сохранялись очаги серозно -геморрагической пневмонии, усиливается перпваскулярное и

перибронхиальное фиброзирование. Появлялись нежные фиброзные волокна среди инфильтратов в межальвеолярных перегородках.

К 30 суткам эксперимента в легких встречались морфологические признаки характерные для ранних сроков опыта, которые сочетались с процессами фибрознрования не только пернваскулярно, но и в интерстиции межальвеолярных перегородок. Эти признаки указывают на затяжной характер воспалительного процесса в легких.

Наиболее интенсивно воспалительный процесс в легких прослеживался при внутрибрюшинном и в меньшей степени при интраназальном инфицировании СЫ. psittaci и значительно слабее при внутрибрюшинном и интраназальном заражении СЫ. trachomatis.

Мы полагаем, что морфологическая картина воспалительного процесса в легких при экспериментальном хяами-днозе отдаленно напоминает те изменения в них, которые встречаются при РНК вирусной инфекции и, в частности, при респираторно - синтициаяоьной (цитоплазматические включения, десквамацня и регенерация эпителия и образование спмпластов).

Следует отметить, что в РНГА сероконверсии выявляются уже на 2 сутки эксперимента, а в РСК на 14 - 30 сутки в невысоких титрах. Положительные результаты по индикации антигена дала РНИФ.

Наиболее интенсивный иммунный ответ наблюдали при внутрибрюшинном заражении СЫ. psittaci (рис. 1). Уровень тиров специфических хламидийных антител 1 : 286, а при интраназальном заражении СЫ. psittaci он был ниже и не превышал 1 : 64 (рис. 2). Наилучшая индикация антигена

и диссеминация его в легких, отмечена при интраназальном нфицированни CHI. psittaci (табл. 1). Это можно объяснить большей имМуногепностыо, вирулентностью Chi. psittaci и сродством к легочной ткани, нежели, чем Chi. trachomatis. Вероятйо по тем Же причинам при заражении Chi. psittaci более выраженны морфологические изменения. Хотя прямая зависимость между динамикой нарастания титров специфических антител и патологическими изменениями в легких не является обязательной.

По сравнению с экспериментальными группами животных инфицированных Chi. psittaci и морских свинок, зараженных Chi. trachomatis титры специфических хламиднйных антител не превышали 1 : 64 и достигали максимального значения к 7 суткам опыта при внутрибрюшинном пути введения возбудителя, а при интраназальном - к 14 суткам.

Титры специфических хяамидийных антител во всех группах наблюдения в РНГА сохранялись на достаточно высоком уровне вплоть до 30 суток наблюдения, в более поздние сроки /14-30 сутки/ начинается нарастание титров в PC К.

Одним из основных моментов нашей работы является желание пробудить интерес патологоанатомов и врачей других специальностей, заинтересованных в диагностике пневмоний хламидийной этиологии, к комплексному подходу в решении данной проблемы, с использованием различных доступных диагностических методов.

- 28 -ВЫВОДЫ

1. На основании данных комплексного исследования легких (гистологических, гистохимических, цитологических, электрониомикроскопических, иммуноморфологических и серологических) - установлено, что при экспериментальном хламидиозе развивается очаговая продуктивная интерстици-альная пиеЬмония с десквамацией альвеолоцитов и эпителия слизистой бронхов, связанная с персистенцией возбудителя.

2. Хлямидии обладают тропизмом к эпителиальным структурам легкого, персистнруют в них, повреждая при этом клетки - мйшени, к которым относятся альвеолоциты 1Ь и I - порядка, эпителий слизистой бронхов и эндотелий сосудов. Среди органелл эпителиальных клеток наиболее уязвимы митохондрии, лизосомы и осмиофидьные тельца.

3. При внутрибрюшинном заражении животных высоко вирулентным возбудителем Chi. psittaci, в легких наблюдается наибольшая степень выраженности очаговой продуктивной интерстициальной пневмонии, склонной к затяжному течению, которая только на 7 - 14 сутки после инфицирования, сочетается с очаговой серозно - геморрагической пневмонией.

4. Интраназальное заражение морских свинок Chi. trachomatis и Chi. psittaci, а также внутрибрюшинное заражение Chi. trachomatis характеризуются развитием очаговой продуктивной интерстициальной пневмонией с десквамацией альвеолоцитов, но она выражена значительно слабее, чем при внутрибрюшинном заражении СЫ. psittaci.

5. Наиболее выраженная динамика антитеяообразо-вания и их уровень отмечаются при заражении животных Chi. psittaci. наиболее высокие титры определяются в РНГА.

Специфические.комплиментфиксирующие антитела во всех экспериментальных группах определялись в невысоких титрах к 14 - 30 суткам наблюдения.

6. Во всех случаях воспроизведения экспериментальной хлампдииидй инфекции, независимо от способа заражения и вида хламидий, в-легких обнаруживался специфический антиген в течение всего срока наблюдения.

7. Интенсивность морфологических изменений в легких при экспериментальном хламндиозе, также как и степень выраженности гуморального иммунного ответа и динамика развития розбудитедя, зависят от способов заражения животных, вирулентности возбудителя и сроков наблюдения.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется использовать полученные результаты исследования для постановки прижизненного диагноза хла-мидиоза легких при изучении бронхиальных ловажей и био-птатов слизистой бронхов.

На секционном материале уточнение диагноза хламидноза легких возможно при исследовании полутонких срезов легких и мазков - отпечатков с поверхности разреза легких, что позволит выявить морфологические изменения в них и хламидийные цитоплазматическне включения в клетках - мишенях.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДОЮСЕРГАЦИИ

1. Патоморфологические изменения легких у морских свинок при экспериментальной хламнднйной инфекции // Современные проблемы охраны здоровья населения Коми -Пермяцкого автономного округа Пермской области. Материалы научно-практической конференции, посвященной 70-летию округа. -Кудымкар, -1995. -С.15-19 (соавт. O.A. Тнма-шева, Н.С. Ефимова).

2. Морфология легких при интраназальном заражении различными видами хламидий в эксперименте // Тез. докл. 98-й студенческой научной конференции, посвященной 50-летию победы в Великой Отечественной войне. -Пермь, -1995. -С.8 (соавт. Н.И. Капитонова).

3. Морфология легких при экспериментальном хлами-диозе // Актуальные вопросы патологической и нормальной морфологии. Материалы республиканской научно-практической конференции. -Ижевск, -1995, -С.64 ( соавт. Н.С. Ефимова, O.A. Тимашева).

4. Гистологические и ультраструктурные изменения легких при экспериментальном хламидиозе II Тез. докл. научной сессии ПГМА. -Пермь, -1996, -С.32 (соавт. В.П. Хо-ринко).

5. Морфологическая характеристика легких при хла-мидийной инфекции в эксперименте И Актуальные вопросы патологической анатомии. Материалы III Межрегиональной научно-практической конференции патологоанатомов Урала и Западной Сибири. -Челябинск, -1996, -С. 132-133 (соавт. Н.С. Ефимова, O.A. Тимашева).

6. Патологическая анатомия легких при эксперимен-

тальяом хламидиозе // Сборник трудов VI Национального Конгресса по болезням органов дыхйния. -Новосибирск, -1996, -С. 370. (соавт. Н.С. Ефимова, O.A. Тимашева),

7. Морфология легких морских свинок при внутри-брюшинном заражении различными видами хламидий // Тез. докл. научио-практической конференции молодых ученых ПГМА. -Пермь, -1996, -С. 113-114.

8. Изучение гуморального иммунного ответа при экспериментальной хлэмидийной инфекции // Тез. докл. научной сессии ПГМА. -Пермь, -1997, -С. 43. (соавт. O.A. Тимашева, Н.С. Ефимова).

9. Сопоставление морфологических и электронно-микроскопических исследований легких при экспериментальном хламидиозе // Тез. докл. научной сессии ПГМА. -Пермь, -1998, -С. 42.

10. Нммуноморфологнческие и патоморфологические изменения в организме животных при экспериментальном хламидиозе // Пермский медицинский журпал -Пермь, -1998, -С. 82-84. (соавт. В.А. Четвертных, Э.С. Гсровиц, Н.С. Ефимова, O.A. Тимашева и др.).

та льном хламнднозе // Сборник трудов VI Национального Конгресса по болезням органов дыхания. -Новосибирск, -1996, -С. 370. (соавт. Н.С. Ефимова, O.A. Тимашева).

7. Морфология легких морских свинок при внутри-брюшинном заражении различными видами хламндий // Тез. докл. научно-практической конференции молодых ученых ПГМА. -Пермь, -1996, -С.113-114.

8. Изучение гуморального иммунного ответа при экспериментальной хламндийной инфекции Н Тез. докл. научной сессии ПГМА. -Пермь, -1997, -С. 43. (соавт. O.A. Тимашева, Н.С. Ефимова).

9. Сопоставление морфологических и электронно-микроскопических исследований легких при экспериментальном хламидпозе- // Тез. докл. научной сессии ПГМА. -Пермь, -1998, -С. 42.

10. Иммуноморфологичеекие и патоморфологические изменения в организме животных при экспериментальном хяамидиозе П Пермский медицинский журнал -Пермь, -1998, -С. 82-84. (соавт. В.А. Четвертных, Э.С. Горовиц, Н.С. Ефимова, O.A. Тпмашева и др.).