Автореферат и диссертация по медицине (14.03.02) на тему:Морфогенетические потенции сосудистого (капиллярного) компонента коммуникационных систем в тканях яичек плодов и у лиц с врожденным крипторхизмом

На правах рукописи

БУНЬКОВ Кирилл Вадимович

МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОТЕНЦИИ СОСУДИСТОГО (КАПИЛЛЯРНОГО) КОМПОНЕНТА КОММУНИКАЦИОННЫХ СИСТЕМ В ТКАНЯХ ЯИЧЕК ПЛОДОВ И У ЛИЦ С ВРОЖДЕННЫМ КРИПТОРХИЗМОМ

14.03.02 - патологическая анатомия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

2 г июл 2015

Саратов-2015

005570791

005570791

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Смоленский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации и областном государственном бюджетном учреждении здравоохранения «Смоленский областной институт патологии».

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор Доросевич Александр Евдокимович. Официальные оппоненты:

Астраханцев Александр Федорович - доктор медицинских наук, профессор; НУЗ ЦКБ №2 им. Семашко ОАО «РЖД»; патологоанатомическое отделение; заведующий отделением;

Слесарева Елена Васильевна - доктор медицинских наук, доцент, ГБОУ ВПО «Ульяновский государственный университет» Министерства образования и науки Российской Федерации; кафедра морфологии; заведующая кафедрой.

Ведущая организация: Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования "Оренбургский государственный медицинский университет" Министерства здравоохранения Российской Федерации.

^Защита состоится » Сб/^УЛ 2015 г. в _ часов на

заседании диссертационного совета Д 208.094.01 при ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского» Минздрава России по адресу: 410012, г. Саратов, ул. Б. Казачья, 112.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГБОУ ВПО «Саратовский ГМУ им. В.И. Разумовского» Минздрава России и на сайте организации: www.sgrriu.ru.

Автореферат разослан «

»

2015 г.

Ученый секретарь

диссертационного совета

доктор медицинских наук, профессор

Маслякова Г.Н.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы

Имеются разноречивые данные выявляемое™ крипторхизма в мире: в Великобритании 8,4% [Boisen К. et al., 2004, Virtanen Н.Е., 2007], США - 96 на 100 000 пациентов с урогенитальной патологией. В России крипторхизм диагностируется у 10-20% новорожденных, у 2-3% годовалых детей, 1% в пубертатном периоде и лишь у 0,2-0,3% взрослых мужчин [Мирский В.Е., 2008].

Ведущее место в изучении крипторхизма занимает сравнительный анализ, а именно: проспективное обследование полового развития с учетом как пораженного, так и контрлатерального яичка [Морозов Д.А. и др., 2007], комплексного обследования с отдаленными результатами после орхиопексии [Морозов Д.А. и др., 2007], исследование мезенхимальных трансформаций тканей яичка с учетом формы крипторхизма [Морозов Д.А. и др., 2007], морфологические изменения при абдоминальной фиксации яичка, с позиций временного фактора [Bychkov V.A. et al., 2013], сравнительный микроморфометрический анализ компонентов тканей яичка у млекопитающих [Costa D.S.et al., 2006], рассмотрение происходящих процессов с позиций возрастного аспекта как в антенатальном [Narasinga Rao В., 2012], так и в постнатальном периодах.

При изучении тканей яичек определяются стадии сперматогенеза, предложенные Clermont Y. (1963), балльная система оценки сперматогенеза по Johnsen S.G. (1970), балльная оценка нарушений сперматогенеза по доле семенных канальцев, содержащих вытянутые сперматиды по Bergmann M. (1998), а также осуществление оценки компенсаторно-приспособительных реакций по морфометрическим характеристикам тканей яичка.

На сегодняшний день нет четких критериев и классификаций оценки качества состояния сперматогенеза для лиц детского возраста.

Известно, что гомеостаз в тканях яичка осуществляется благодаря сложным взаимодействиям между сосудистым руслом и клеточным микроокружением паренхнматозно-стромального компонента тканей яичка [Ergün S., 1994].

Изучение коопераций клеточных популяций с позиций коммуникационных систем позволяет подойти к более углубленному рассмотрению отдельных патологических процессов [Доросевич А.Е., 1988; ВусЬкоу А.У., Оогозеу1сЬ А.Е., 2009].

Цель исследования

Сравнение морфогенетических характеристик взаимодействий между микроморфометрическими структурами капиллярного компонента коммуникационных систем в тканях яичек плодов с аналогичными структурами у лиц с врожденным крипторхизмом с учетом возрастного аспекта, расположения и локализации яичек.

Задачи исследования:

1. Измерить площадь микроморфометрических структур тканей яичек (интерстициальной соединительной ткани, извитых семенных канальцев, спер-матогенного эпителия, микроциркуляторного русла) и определить их соотношения у плодов и лиц с врожденным крипторхизмом.

2. Произвести подсчет клеточного микроокружения сосудистого русла (абсолютные значения эндотелиальных клеток, интерстициальных эндокрино-цитов, поддерживающих клеток, перитубулярных миоидных клеток, суммарное количество клеточных популяций сперматогенного эпителия, межканальцевой соединительной ткани) в тканях яичек плодов и у лиц с врожденным крипторхизмом.

3. Выявить силу и характер корреляционных связей между клеточными популяциями в тканях яичек плодов и у лиц с врожденным крипторхизмом.

4. Установить с помощью статистических методов исследования особенности взаимоотношений микроморфометрических структур тканей яичка у плодов и сопоставить их с аналогичными структурами у лиц с врожденным крипторхизмом с учетом возраста и расположения яичек.

Научная новизна исследования

1. Проведенные исследования позволили уточнить микроморфомет-рические данные тканей яичек в антенатальном периоде и при врожденном крипторхизме в сопоставлении между собой.

2. Показано, что наиболее информативным способом в оценке состояния тканей яичек при врожденном крипторхизме является сопоставление мик-роморфометрических показателей с аналогичными данными тканей яичек в антенатальном периоде.

3. Выявлены характерные сходства корреляционных связей между клеточными популяциями в тканях яичек плодов и у лиц с врожденным крип-торхизмом с позиций сосудистого компонента коммуникационных систем.

4. Система корреляционных связей между клеточными популяциями с позиций коммуникационных систем является подтверждением гистофизиоло-гической идентичности протекающих процессов в тканях яичка при врожденном крипторхизме и в антенатальном периоде.

Практическая значимость работы

1. Проведенное исследование подтверждает идентичность изменения отдельных микроморфометрических данных в тканях яичка у лиц с врожденным крипторхизмом и в антенатальном периоде. Полученные результаты могут быть учтены в практической работе врача - патологоанатома и детского хирурга.

2. Патоморфологические изучения тканей яичка у лиц с врожденным крипторхизмом необходимо дополнять морфометрическими исследованиями, учитывающими характеристики капиллярного компонента коммуникационных систем.

3. Результаты работы - база для дальнейшего совершенствования диагностики на основании параметров сосудистого компонента коммуникационных систем у лиц с врожденным крипторхизмом в разные периоды развития.

Положения, выносимые на защиту

1. При изучении процессов, происходящих в тканях яичек при врожденном крипторхизме, предпочтителен комплексный подход, направленный не только для обнаружения различий по исследуемым признакам, но и сходства с периодами его естественного развития.

2. При сравнительном анализе тканей яичка при врожденном крипторхизме с тканями яичка антенатального периода важной составляющей выступает сосудистый (капиллярный) компонент коммуникационных систем, что подтверждается кооперацией клеточного микроокружения.

3. Процессы кооперации клеток сосудистого (капиллярного) компонента коммуникационных систем имеют схожие черты взаимодействия в зависимости от локализации яичка у плодов антенатального периода и лиц с врожденным крипторхизмом.

4. Изучение количественных (клеточных) показателей с микроморфометрическими характеристиками (площадь межканапьцевой соединительной ткани, извитых семенных канальцев, сперматогенного эпителия) с позиций их связи и соотношений в тканях яичек как в антенатальном периоде, так и при врожденном крипторхизме, является одним из важных дополнений в изучении гистофизиологической идентичности при данных состояниях.

Апробация работы

Основные положения диссертации доложены и обсуждены на: XI Российском конгрессе «Инновационные технологии в педиатрии и детской хирургии» (Москва, 2012); I Всероссийской научно-практической конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Актуальные проблемы науки XXI века» (Смоленск, 2013); III съезде детских урологов-андрологов (Москва,2013); IV Всероссийском съезде патологоанатомов (Белгород, 2013); 26 Европейском конгрессе патологов ( Лондон, 2014); Смоленском областном

обществе патологоанатомов (Смоленск, 2014); IV съезде детских урологов-андрологов (Москва, 2015).

Внедрение результатов исследования

Материалы диссертационной работы представлены в печатных научных работах, докладах на научно-практических конференциях и съездах, заседаниях общества патологоанатомов Смоленской области. Основные результаты работы внедрены в соответствующие темы практических занятий и в лекционном курсе на кафедре патологической анатомии ГБОУ ВПО «Смоленский государственный медицинский университет». Практические результаты внедрены в работу отделений ОГБУЗ «Смоленский областной институт патологии».

Публикации по теме диссертации

По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 4 в журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией Министерства образования и науки Российской Федерации, 1 — в иностранной печати.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 198 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственного исследования, обсуждения полученных результатов, выводов, списка литературы и приложения.

Работа содержит 66 рисунков и 60 таблиц. Библиографический указатель включает 228 источников литературы, из которых - 48 отечественных и 180 иностранных.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы

В качестве материала для исследования использовались ткани яичек у плодов антенатального периода (АНТ) и биопсийный материал у лиц с врожденной патологией - крипторхизмом (КР).

Забор материала у плодов массой 500 и более граммов (34 случая) проводился на базе отделения клинической патологии детского возраста Смоленского областного института патологии. Выборочная совокупность была представлена 34 плодами антенатального периода: от 20 до 41 недели гестационного возраста, медиана массы (веса) - 1275 г [430 - 4020]; медиана длины - 36 см. [23 - 61]. Изучено 27 пар яичек у 27 плодов и по 1 непарному яичку в семи случаях, всего изучено - 61 яичко у 34 плодов антенатального периода.

Во вторую группу (46 случаев) были включены биоптаты тканей яичек с врожденным крипторхизмом в возрасте от 1 года до 14 лет.

При заборе материала в первой группе учитывали гестационный возраст (неделю внутриутробного развития), локализацию яичек (правое / левое) и то-пографо-анатомическое (топографическое) расположение яичка, которое соответствовало его местонахождению согласно естественному перемещению в мошонку (абдоминальное, паховое, мошоночное). Локализацией яичка считали расположение справа или слева (правое или левое). У лиц с врожденным крипторхизмом при заборе материала учитывали возраст пациента, локализацию яичек (правое / левое) и топографическое расположение яичка (форму криптор-хизма - абдоминальный, паховый, эктопия). Эктопия яичка: расположение яичка за пределами наружного пахового кольца в нетипичном для него месте (под кожей промежности, брюшной стенки или бедра).

Биопсийный и аутопсийный материал (тканей яичек) фиксировали по общепринятым методикам с использованием забуференного нейтрального 10%-го водного раствора формалина от 5 до 24 часов. Депарафинированные гистологические срезы толщиной 7-8 мкм окрашивали гематоксилином и эозином, пикрофуксином по методам ван Гизона и Маллори. Для иммуногистохи-мического исследования использовалась панель моноклональных антител: CD34 class II, (clone QBEnd-10), фактор фон Виллебранда (vWF), виментин (Vimentin) MCV.

Морфометрию и оценку клеточных популяций осуществляли в одном и том же поле зрения (выбранном участке). Каждые последующие участки (поля

зрения), центром которых служил капилляр, гистотопографически были удалены друг от друга и не перекрывались между собой. В каждом поле зрения измерялась площадь извитых семенных канальцев (ИСК), площадь сперматогенного эпителия (СПЭ), площадь межканальцевой соединительной ткани (МСТ), площадь просвета капилляра (ПК). Для полного и унифицированного отображения преобладания одного показателя относительно другого было введено понятие индекса соотношения. Использовали два индекса - канальцево-стромальный (КСИ) и эпителиально-стромальный (ЭСИ).

Оценка клеточных популяций подразумевала подсчет клеток стромы и паренхимы яичка в исследуемых полях зрения, центром каждого из полей зрения служил капилляр. Для статистического анализа в двух группах были исследованы следующие клеточные популяции: поддерживающие эпителиоциты-клетки Сертоли (Ск); другие представители сперматогенного эпителия - суммарное количество клеток сперматогенного ряда за исключением Ск (£Сэ); пе-ритубулярные миоидные клетки (Мк); суммарное количество клеточных представителей МСТ - компартментобразующие клетки (£Кк): фибробласты, ин-терстициальные эндокриноциты - клетки Лейдига (КЛ); эндотелиоциты (Эн).

В зависимости от размеров биоптата (при крипторхизме) анализу подвергались от 3 до 10 полей зрения в микропрепарате.

Микроморфометрическое исследование аутопсийного и биопсийного материалов выполнялось на светооптическом микроскопе «Axiostar plus» (Carl Zeiss, Германия), совмещённом с видеокамерой «Progrès СЮ Plus» (Jenoptic Jena, Германия). Документирование результатов осуществлялось при помощи компьютерной программы «Видео Тест 4.0, Морфология» (Санкт-Петербург).

Множественные сравнения проводили с помощью аналога дисперсионного анализа для непараметрических распределений - критерия Краскела - Уол-лиса, с последующим применением критерия Данна для попарных сравнений. Для анализа линейной связи вычисляли коэффициент корреляции Спирмена (г) и проверяли его значимость на заданном уровне а = 0,05 (корреляционная связь -КС).

Для проведения статистического анализа исследуемые выборки были подвергнуты категоризации. Категория деления (КД„) подразумевает деление на статистические группы с заданным показателем, относительно которого осуществляется деление исходной выборочной совокупности на подгруппы, а именно возраста, локализации и топографического расположения яичка.

- Первая категория деления (КД,) - подразумевает деление выборочных совокупностей в зависимости от возраста. Для группы антенатального периода - 17 подгрупп, соответствующих неделям гестационного возраста: 20, 21, 22, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 32, 33, 37, 38, 39, 40, 41. Для группы с врожденным крипторхизмом - 13 подгрупп: 1,2, 3,4, 5, 6, 7, 8, 9, 10,11, 13, 14 лет.

- Вторая категория деления (КДз) - исходные выборочные совокупности делились на три группы в зависимости от естественного перемещения в мошонку или формы врожденного крипторхизма и 6 подгрупп в зависимости от локализации яичка - правое /левое (табл. 1, 2).

Таблица 1

Группа антенатального периода, разделенная по КДг.

Топографическое расположение яичка

Абдоминальное Паховое Мошоночное

Локализация Локализация Локализация

Правое Левое Правое Левое Правое Левое

70 п/з 100 п/з 85 п/з 90 п/з 120 п/з 120 п/з

10 плодов (170 п/з) 11 плодов (175 п/з) 13 плодов (240 п/з)

34 случая (585 полей зрения)

Таблица 2

Группа с врожденным крипторхизмом, разделенная по КДд.

Топографическое расположение яичка

Абдоминальное Паховое Эктопия

Локализация Локализация Локализация

Правое Левое Правое Левое Правое Левое

19 п/з 40 п/з 176 п/з 151 п/з 30 п/з 28 п/з

6 пациентов (59 п/з) 33 пациента (327 п/з) 7 пациентов (58 п/з)

46 случаев (444 полей зрения)

-Третья категория деления (КДз) - подразумевает разделение выборочных совокупностей на три подгруппы в зависимости от естественного перемещения в мошонку (для группы антенатального периода) или формы врожденного крипторхизма (для группы с врожденным крипторхизмом) (табл. 3).

Таблица 3

Группы, разделенные по КД3

Топографическое расположение яичка в группе антенатального пеотода

Абдоминальное Паховое Мошоночное

10 плодов (170 п/з) 11 плодов (175 п/з) 13 плодов (240 п/з)

34 случая (585 полей зрения)

Топографическое расположение яичка в группе с врожденным

крипторхизмом

Абдоминальное Паховое Эктопия

6 пациентов (59 п/з) 33 пациента (327 п/з) 7 пациентов (58 п/з)

46 случаев (444 полей зрения)

Результаты исследования и их обсуждение

Сравнение микроморфометрических структур и клеточных популяций Проведенный нами анализ КС между клеточными популяциями и микро-морфометрическими показателями тканей яичек в группе АНТ периода показал, что наиболее активными клеточными элементами по силе корреляционной связи (КС) являются £Кк и £Сэ. Связь между £Кк и МСТ во всех подгруппах была положительной умеренной или значимой. Это связано, по мнению [Linda М.Е., 2011] с занимаемой площадью £Кк и KJ1 в МСТ в АНТ периоде, хотя им не проводилось выявление КС.

Корреляционный анализ в группе с врожденным KP показал, что наиболее активными клеточными популяциями по силе связи являются Ск. При КД3 это явление прослеживается при паховом расположении яичка между Ск и МСТ (г = -0,57, р<0,05), Ск и ИСК (г = 0,57, р<0,05), Ск и СПЭ (г = 0,52, р<0,05), Ск и КСИ (г = 0,57, р<0,05), Ск и ЭСИ (г = 0,58, р<0,05). Данная тенденция Ск по отношению к МСТ, ИСК, СПЭ, КСИ и ЭСИ не теряется и в правом яичке по сравнению с левым.

Сравнение клеточных популяций в группе антенатального периода в зависимости от расположения яичка

Наибольшее число КС между клеточными популяциями выявлено при абдоминальном расположении яичка у лиц в АНТ периоде. Наиболее активными клетками по силе связи среди других клеточных представителей явились £Кк и KJI. Объяснение данного феномена заключается в наличии единого зачатка развития составляющих фибробластического дифферона и KJI [Бозо И.Я. и др., 2010; Dong L.et al., 2007; Mendis-Handagama S.M., 2001]. Следует отметить, что имеется тенденция формирования КС между близкими по расположению относительно сосудистого русла клеточными популяциями в тканях яичка: £Кк и КЛ (г = 0,56, р<0,05); КЛ и Мк (г = - 0,35, р<0,05); Мк и Ск (г = 0,22, р<0,05); Ск и £Сэ (г = _ о,39, р<0,05).

Корреляционная связь между КЛ и Мк, выявленная в результате исследования, может быть объяснена тем, что она опосредуется андрогенами [К. De Gendt, et al., 2004]. При этом данная связь проявляется благодаря наличию рецепторов к андрогенам не только на КЛ и Мк, но и на Ск: Мк и Ск (г = 0,22, р<0,05) [Pearl С.А. et al., 2011]. Плотное расположение Ск непосредственно на базальной мембране извитых семенных канальцев совместно с собственной пластинкой является условием для функционирования гематотестикулярного барьера (ГТБ). Ск путем кооперации с Мк (г = 0,22, р<0,05) осуществляют поддержание синцития зародышевых клеток [Miryounesi М. et al., 2013]. Значимая корреляционная связь между Ск и £Сэ (г = - 0,39, р<0,05) указывает и подтверждает участие Ск в трофическом поддержании клеток сперматогенного эпителия - £Сэ [Boussouar F., 2004; Alves M.G. et al., 2013].

Наибольшее число значимых КС как при абдоминальном расположении яичка, так и при паховом имеют КЛ, не теряющие связи с £Кк _ от умеренной до заметной. При паховом расположении яичка выявлены значимые КС между: £Кк и КЛ (г = 0,34, р<0,05); КЛ и Мк (г = - 0,29, р<0,05); Ск и £Сэ (г = - 0,24, р<0,05). Отсутствовала КС между клетками £Кк и Мк; Мк и Ск.

При паховом расположении яичка была выявлена связь с эндотелиоцита-ми и КЛ. Это является косвенным подтверждением кооперации в ретикулярной сети МСТ между клеточными популяциями, направленной на поддержание го-меостаза в тканях яичка, что показано в работах [Потапов С. Н., 2010; Kuroda N. et al., 2004]. На втором месте по числу КС между клеточными популяциями в группе АНТ периода по сравнению с абдоминальным и паховым расположением яичка стоит мошоночное. В данной группе наиболее активными клетками по числу связей выступают £Кк.

При абдоминальном и паховом расположении яичка в группе АНТ периода выявлена КС между КЛ и Ск, что дополняет другие исследования [Ema-nuele М.А., 1998; Oliveira P.F. [et al.], 2011; O'Shaughnessy P.J. et al., 2002]. Помимо андрогенов КЛ опосредованно могут влиять на Ск через нестероидные факторы и их рецепторы. Пептиды и белки КЛ действуют на сустентоциты и СПЭ [Einspanier А., 1997; Douglass J. et al., 1987].

Сравнение клеточных популяций в группе антенатального периода в зависимости от локализации яичка

По числу значимых КС между клеточными популяциями левое яичко стоит на первом месте по сравнению с правым. Наиболее активными по числу связей в левом яичке выступают КЛ, тогда как в правом — тенденция первенства была разделена между КЛ и £Сэ, то есть наиболее часто формировали значимые КС.

Корреляционный анализ всей выборочной совокупности антенатального периода, без деления на КД, в большей мере позволил отобразить все описанные связи между клеточными популяциями тканей яичка. Максимальное число корреляционных связей формируют £Кк и КЛ в группе АНТ периода.

Сравнение клеточных популяций в группе с врожденным крипторхизмом в зависимости от расположения яичка

Меньше всего значимых КС между клеточными популяциями было отмечено в подгруппе с абдоминальным расположением яичка Ск и £Сэ (г = 0,35, р<0,05). На втором месте по количеству связен между клеточными популяция-

ми находится подгруппа из КД3 с эктопией. В данном случае выявлено две КС -£Кк и Эн (г = 0,33, р<0,05), £Кк и £Сэ (г = 0,54, р<0,05), и одна умеренная отрицательная £Кк и Мк (г= - 0,44, р<0,05). На последнем месте из КДз по числу КС между клеточными популяциями находится подгруппа при паховом расположении яичка.

Сравнение клеточных популяций в группе с врожденным КР в зависимости от локализации яичка При разделении выборочной совокупности на правое и левое яичко анализ, направленный на выявление значимых КС между £Кк и Мк, показал такую связь только в правом яичке £Кк и мк (г= - 0,18; р<0,05).

В нашем исследовании КС между £Кк и Мк была выявлена при паховом расположении крипторхических яичек £Кк и Мк (г= - 0,12; р<0,05) и их эктопии £Кк и Мк (г= - 0,44; р<0,05).

Как известно, связь между Ск и Мк обеспечивает мезенхимально -эпителиальные взаимодействия в яичках [Thompson E.W. et al., 1995; Verhoeven G., 2000]. Кооперация между указанными клеточными популяциями опосредуется комплексом внеклеточного матрикса, который обеспечивает структурную целостность ИСК и участвует в эффективном поддержании ГТБ, включая ба-зальную мембрану [Magnanti М. et al., 2001]. При анализе КС между Мк и Ск была выявлена лишь одна значимая умеренная КС при паховом расположении яичка в группе с врожденным КР: Мк и Ск (г = 0,31; р<0,05), тогда как при абдоминальном расположении и эктопии она отсутствовала. Известно, что связь между Мк и Ск осуществляется при помощи нитей актина. В свою очередь, при крипторхизме происходит нарушение структурных связей и разбалансировка нитей актина [Maekawa М. et al., 1995], что, по-видимому, может служить причиной нарушения количественных связей между Мк и Ск и их качественных характеристик [Devkota В. et al., 2006].

Анализ КС между клеточными популяциями в паренхиме крипторхиче-ского яичка позволил выявить одну значимую связь при его абдоминальном расположении - Ск и £Сэ (г = 0,35; р<0,05). При других локализациях (паховая,

эктопия) как в правом, так и левом яичках, КС выявлено не было. Отсутствие КС между Ск и £Сэ может быть объяснено наличием дисбаланса составляющих клеточных популяций СПЭ, в частности, между зародышевыми клетками и Ск в ранние возрастные периоды при врожденном КР [1л Я. е1 а1., 2014].

Связь клеточных популяций с сосудистым (капиллярным) руслом в двух исследуемых группах В отличие от группы АНТ периода при врожденном КР связь с сосудистым руслом была выявлена не при паховом расположении яичка, а при его эктопии Эн и £Кк (г = о,33; р<0,05) [Бопв Ъ. [й а1.], 2007; МепсН5-Напс1а§ата Б.М., 2001] и близости расположения £Кк к сосудам микроциркуляторного русла [Ег§ип Б. й а1., 1996]. Отсутствие связей клеточных популяций с площадью капиллярного русла и Эн при абдоминальном и паховом расположении крипторхического яичка в наших исследованиях, по-видимому, могут быть объяснены изменениями самих сосудов микроциркуляторного русла [Шкитырь З.В., 2012., РшаП Е. й а1„ 2001].

Анализ всей выборочной совокупности при КР, независимо от расположения и локализации яичка, позволил выявить значимые КС между Эн и £Кк (г = 0,13; р<0,05), Эн и Ск (г = - 0,12; р<0,05), Эн и £Сэ (г = 0,12; р<0,05).

В левом яичке при врожденном КР между сосудистым руслом и клеточными популяциями выявлены две значимые КС: Эн и £Кк (г = 0,20; р<0,05); Эн и Ск (г = - 0,17; р<0,05), а в правом - только одна: Эн и £Сэ (г = 0,15; р<0,05). Трактовать полученные данные однозначно нельзя, но следует указать о влиянии сосудистого русла при КР на клеточные популяции СПЭ (Ск, £Сэ) [Ртай Е.й а1., 2001].

Сравнительный анализ кооперации клеточных популяций в двух исследуемых группах При абдоминальном расположении яичек в группе АНТ периода и врожденным КР схожие по значимости КС были выявлены между Ск и £Сэ. При сравнении полученных КС можно констатировать одну значимую КС между Ск и £Сэ, но с поправкой: направленность связи отличается. Таким образом, при

абдоминальном расположении яичка между группой АНТ периода и врожденным КР одинаковых КС выявлено не было.

При паховом расположении яичка как в АНТ периоде, так и при КР, значимая положительная КС была выявлена между Мк и £Сэ. Известно, что Мк способны содержать андрогенные рецепторы, как и Ск, что осуществляется в совместном регулировании по поддержанию гомеостаза и гетерогенности клеток сперматогенного эпителия (£Сэ) [Wang R. S. et. al., 2009].

При мошоночном расположении яичка в группе АНТ периода и при его эктопии при КР выявлены две значимые КС между £Кк и Мк; £Кк и £Сэ. Корреляционная связь между £Кк и Мк значимая отрицательная в двух группах, между £Кк и £Сэ - значимая, но с противоположным направлением связи.

Связь между Ск и £Сэ отсутствовала в группе при врожденном КР во всех исследуемый подгруппах, за исключением абдоминального расположения яичка. Причина отсутствия КС между Ск и £Сэ может быть связана с потерей фактора роста эндотелия сосудов (VEGF), что влечет за собой изменение состояния гомеостаза недифференцированных сперматогоний [Lu N. et al., 2013]. Помимо этого, связь может нарушаться в результате отсутствия фактора из семейства клеточных молекул адгезии нектина - Nectins and Nectin-like molecules (Necl-2). Данный фактор в тканях яичка экспрессируется исключительно на клетках сперматогенного ряда и выступает посредником в кооперации между Ск и £Сэ, в том числе и зародышевыми клетками. В исследованиях было выяснено, что потеря данного типа молекул — причина мужского бесплодия, что изначально может проявляться дискоординацией в кооперации вышеупомянутых клеточных популяций [Gao Y., Lui W. Y., 2013].

Связь между Ск и Мк меняется в зависимости от расположения и локализации яичка. Однако при сравнении двух выборочных совокупностей без деления на подгруппы определяется одинаковая значимая положительная связь между данными клеточными популяциями. Кооперация между Ск и Мк осуществляется при помощи паракринных факторов и опосредуется комплексом внеклеточного матрикса, включая базальную мембрану. Данный комплекс обеспе-

чивает структурную целостность ИСК и участвует в поддержании ГТБ [Yazama F., 2008].

Ск участвуют в регуляции и поддержании дифференцированного фенотипа Мк и в поддержании предшественников KJI в постнаталыюм периоде, а также в развитии зрелых KJI [Rebourcet D. et al., 2014].

При этом, Мк способны экспрессировать на цитолемме андрогенные рецепторы, что может быть рассмотрено в качестве поддержания зародышевых клеток и сперматогониев. В свою очередь, тестостерон способствует индуцированию клеточной линии глиального нейротрофичекого фактора - glial cell line-derived neurotrophic factor (GDNF), действия которого направлены на самообновление и дифференцировку сперматогониальных клеточных популяций -spermatogonia! stem cell (SSC) [Chen L.Y. et. al., 2014].

При сравнении количественных (клеточных) показателей правого и левого яичек в выборках, соответствующих АНТ периоду и врожденному КР, удалось выявить наибольшее количество значимых КС между одноименными признаками в правом яичке по сравнению с левым.

Выявлена закономерная последовательность, одинаковая для двух выборок без деления их на КД: £Кк _ Мк; Мк - Ск; £Кк _ Мк - £Сэ.

Сравнительный анализ между группами АНТ периода и врожденного КР подразумевал определение наибольшего числа схожих признаков между данными выборками. Общее количество признаков составило - 11 (11 баллов), включающие микроморфометрические и количественные (клеточные) параметры (МСТ, ИСК, СПЭ, КСИ, ЭСИ, ПК, £Кк, Эн, Мк, Ск, £Сэ). Сравнение проводили в КД,, КДг и КД). Схожие признаки характеризовались отсутствием значимых различий (р>0,05) между группами, соответствующими АНТ периоду и врожденному КР.

1 балл соответствует одному исследуемому признаку (МСТ, ИСК, СПЭ, КСИ, ЭСИ, ПК, Эн, £Кк, Мк, Ск, £Сэ) с отсутствием значимых различий (р>0,05) при множественном сравнительном анализе между двумя исследуе-

мыми группами. Максимальное количество баллов (сходств) -11, минимальное -0.

Суммарный анализ при КД[ приведен в таблице 4, из которой видно, что наибольшее число сходств по исследуемым признакам для группы с врожденным КР отмечается в возрасте 6, 11 и 13 лет.

Таблица 4

Сходства при попарном сравнении групп между выборками, соответствующими антенатальному периоду и врожденному крипторхизму

в зависимости от возраста, разделенных по КД1

КРИПТОРХИЗМ (1 - 14 ЛЕТ)

1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 иМ 14

§ 20 8 8 8 9 10 9 9 5 8 8 4 107

1 21 5 8 6 9 8 9 9 4 9 7 4 5 93

й 22 8 7 8 8 9 9 9 2 10 7 3 ■а 4 92

3-. 24 10 9 9 10 10 10 га 6 9 10 10 125

25 9 9 9 10 9 10 10 10 8 9 и п 11 126

о <ч 26 5 9 9 9 9 9 9 5 6 8 .Ж. п 5 104

27 8 7 7 8 б 10 5 9 6 8 9 Ш 9 102

О К 28 7 8 8 9 5 10 4 9 6 8 10 10 105

(X ш 29 7 7 7 8 4 8 9 7 6 7 9 98

С 30 7 7 8 9 3 9 10 9 7 9 ЦТ] 11 9 108

Е »д 32 8 6 7 8 5 10 9 8 7 9 9 И 9 106

33 9 9 10 10 6 10 9 9 9 10 п 10 123

37 7 8 7 8 б 10 10 10 ■яи 9 н ■П П9 I

< ь 38 7 8 8 8 5 9 9 4 9 9 10 10 7 103

< ж 39 5 8 6 8 5 7 8 2 10 6 3 1 6 3 77

ш (— 40 6 6 3 3 4 рви 4 9 4 7 9 1 10 9 85

X 41 7 8 8 6 6 10 4 10 7 9 ю ! ЯаР 10 106

* 123 132 128 140 110 160 I 138 1 18 137 139 147 172 135

Примечание: верхняя горизонтальная строка соответствует возрастному интервалу [114 лет] группе с врожденным КР, вертикальная строка соответствует возрастному интервалу [20 - 41 недели гестации] группе АНТ периода.

^НИ - наибольшее количество схожих признаков (совпадений) между исследуемыми группами - 10, 11 баллов, | | - 9 баллов (совпадений), | | - менее 9 баллов (совпадений).

Суммарный анализ при КД> результатов типичных для выборки с врожденным крипторхизмом показал, что наибольшее число баллов по схожести с группой АНТ периода приходится на правое эктопированное яичко (табл. 5). На втором месте стоит левое яичко той же формы крипторхизма. Это, в свою очередь, приводит к накоплению наибольшего числа баллов для эктопии при КР (I). Второе место занимает яичко при абдоминальном расположении (II),

третье - при паховом расположении (III) в выборке с врожденным КР. Первое место по количеству баллов схожести между двумя исследуемыми выборками занимает правое яичко при паховом расположении в группе АНТ периода и правое яичко при эктопии КР. Второе место занимает левое яичко тех же локализаций (табл. 5).

Таблица 5

Количество сходств при попарном сравнении групп антенатального

периода и врожденного крипторхизма, разделенных по КД2

АНТЕНАТАЛЬНЫЙ ПЕРИОД

1 АБД ПАХ МОШ I

2 ПР ЛВ № ■ лв ПР ЛВ

го К АБД ПР 8 8 7 8 7 46 86 (II)

X си О Н с лв 4 4 9 в 8 7 40

ПАХ ПР 7 6 нэ ■ 7 6 5 39 81 (III)

лв 7 8 ■ 7 6 6 42

к а. ЭКТ ПР 7 10 10 9 9 Е1 102(1)

м лв 1 8 6 9 9 8 8 48

£ 43 39 т ■ 48 45 42

82 (III) 100 (I) 87 (II)

Примечание: АБД - абдоминальное расположение яичка, ПАХ - паховое расположение яичка, МОШ - мошоночное расположение яичка, ЭКТ - эктопия, ЛВ - левая локализация яичка, ПР - правая локализация яичка. - наибольшее количество схожих признаков (совпадений) между исследуемыми группами - 9, 10 баллов, I I - 8 баллов (совпадений), I I - менее 8 баллов (совпадений).

Различия между правым и левым яичком можно обосновать множеством факторов, которые в большинстве случаев носят и физиологический характер.

Известно, что правое и левое яички кровоснабжаются по-разному, причем комбинация вариантов кровоснабжения может быть различной [Я^и М.С., 2006]. Наличие артерио-венозного анастомоза может играть функционально-значимую роль в онтогенезе яичка [ТЧауак В.8. е1 а1., 2013]. Следовательно, нельзя исключить влияние кровоснабжения на морфофункциональные и количественные параметры в тканях правого и левого яичек.

Таким образом, при эктопии яичка у лиц с врожденным крипторхизмом имеется наибольшее число сходств по микроморфометрическим параметрам при паховом расположении яичка в группе АНТ периода. Наибольшее число баллов по схожести в группе АНТ периода между правым и левым яичком вы-

явлено в правом яичке при абдоминальном, паховом и мошоночном расположении. В свою очередь, для группы с врожденным КР наибольшее число баллов по схожести отведено правому яичку только при эктопии и абдоминальном расположении яичка.

Выводы

1. Сравнительный анализ микроморфометрических показателей тканей яичка, включающих в себя площадь межканальцевой соединительной ткани, извитых семенных канальцев, сперматогенного эпителия и их соотношений (ка-нальцево-стромального и эпителиально-стромальных индексов) в совокупности с клеточными популяциями в группах антенатального периода и лиц с врожденным крипторхизмом указывает на наибольшее суммарное количество схожих признаков, обнаруженных между паховым расположением яичка у плодов и эктопией яичка при врожденном крипторхизме.

2. Наибольшее число сходств по микроморфометрическим признакам и клеточным популяциям в группе антенатального периода выявлено в правом яичке при абдоминальном, паховом и мошоночном его расположении по отношению к группе с врожденным крипторхизмом. В свою очередь, в группе с врожденным крипторхизмом наибольшее число сходств по микроморфометрическим признакам и клеточным популяциям, по сравнению с антенатальным периодом, отведено правому яичку при эктопии и абдоминальном расположении.

3. Показаны значимые корреляционные связи между одноименными количественными (клеточными) показателями в тканях яичек у плодов и лиц с врожденным крипторхизмом, указывающие на схожие результаты кооперации клеточных популяций в зависимости от расположения яичка (абдоминальное, паховое, мошоночное/эктопия), локализации (правое/левое) и являющиеся косвенным подтверждением гистофизиологической идентичности происходящих процессов с позиций капиллярного компонента коммуникационных систем.

4. В правом и левом яичках у плодов в антенатальном периоде и при врожденном крипторхизме процессы, затрагивающие изменения микроморфометри-

ческих структур, в том числе и корреляционные связи между одноименными клеточными популяциями, происходят несинхронно.

Практические рекомендации

1. При исследовании тканей яичек у плодов антенатального периода в сроках от 20 до 41 недели гестации установлены минимальный порог 4177,25 мкм2 по площади межканальцевой соединительной ткани, характерный для мошоночного расположения яичка и максимальный 38495,18 мкм2 для абдоминального расположения яичка. Размах (границы) площади межканальцевой соединительной ткани для пахового расположения яичка у плодов антенатального периода установлена в пределах 5583,07 — 33951,66 мкм2. Указанные параметры площади межканальцевой соединительной ткани - материальное подтверждение конкретных сроков гестации при разных расположениях яичек.

2. При исследовании тканей яичек у лиц с врожденным крипторхизмом в возрасте от 1 года до 14 лет установлен минимальный порог 2170,90 мкм2 площади межканальцевой соединительной ткани, характерный для абдоминального расположения яичка и максимальный порог 37419,21 мкм2 - для пахового расположения яичка. Размах (границы) площади межканальцевой соединительной ткани при эктопии яичка у лиц с врожденным крипторхизмом установлена в пределах 5277,68 - 28664,79 мкм2.

3. Введенная балльная система сравнительного анализа, в которой 1 балл соответствует одному исследуемому признаку (структуре) с отсутствием значимых различий между двумя исследуемыми группами, позволит подойти к стратегии объективной количественной оценки сходств. Сравнительный анализ микроморфометрических структур тканей яичка, включающих в себя площадь межканальцевой соединительной ткани, извитых семенных канальцев, сперма-тогенного эпителия и их соотношений (канальцево-стромального и эпители-апьно-стромальных индексов) в совокупности с клеточными популяциями в группах антенатального периода и лиц с врожденным крипторхизмом позволил выявить балльные интервалы (границы) для пахового расположения яичка у

плодов антенатального периода (88 - 100 баллов) и лиц с врожденным крип-торхизмом (87 - 102 балла) при эктопии.

4. Наибольшее число баллов (сходств) по микроморфометрическим структурам и клеточным популяциям тканей яичек в зависимости от возраста выявлено в возрасте 6, 11, 13 лет, что может использоваться как в патологической анатомии, так и в детской хирургии.

5. Выявлены наиболее заметные морфологические (качественные) изменения в тканях яичек у лиц с врожденным крипторхизмом, наблюдаемые при эктопии в возрасте 14 лет, в виде склероза межканальцевой соединительной ткани с одновременным уменьшением её площади, утолщением базальной мембраны извитых семенных канальцев, а также проявлениями в сперматогенном эпителии в виде синдрома «только клетки Сертоли», что также может использоваться и в патологоанатомической, и в судебно-медицинской практике.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Морфологическая характеристика стромального компонента яичек у детей различного возраста при крипторхизме / К.В. Буньков, А.Л. Савченков //Вестник Рос. науч. центра рентгенорадиологии. — 2012. - №1 (2). - С. 19 -20.

2. Пренатальные факторы риска рождения ребёнка с синдромом неопущенного яичка/ А.Л. Савченков, А.Б.Салопенкова, К.В. Буньков // Вестник Рос. науч.центра рентгенорадиологии. — 2012. — №1(2). — С.52 -53.

3. Роль направляющей связки яичка в его перемещении. Обзор литературы. / А.Ю. Кузьменков, К.В. Буньков, А.Е. Доросевич // Саратовский научно-медицинский журнал. - 2013. - Т. 9. — № 1. - С. 20—25.

4. Сравнительные морфометрические исследования яичек у плодов антенатального периода / К.В. Буньков, А.Ю. Кузьменков, А.Л. Савченков // Проблемы репродукции. -2013. - Т. 19. - №6.- С. 67 - 71.

5. Корреляционный анализ паренхиматозно-стромальных взаимоотношений тимуса и яичек в антенатальном периоде онтогенеза как отражение иммуногистофизиологической идентичности / К.В. Буньков, В.Я. Юрчинский // Известия Смоленского гос. ун-та. - 2013. - №3 (23) -С. 236 - 240.

6. Корреляционный анализ паренхиматозно-стромальных взаимоотношений тимуса и яичек в антенатальном периоде онтогенеза как отражение иммуногистофизиологических процессов / К.В.Буньков, В.Я.Юрчинский,

А.Л.Савченков // Материалы IV Всерос. съезда патологоанатомов. Белгород, 2013. - С . 19 - 20.

7. Исследование частоты встречаемости крипторхизма у детей с врожденными аномалиями и особенностями течения антенатального периода развития/ А.Л.Савченков, А.Б.Сапопенкова, К.В.Буньков, А.А.Захаров, Д.С.Лабузов // Материалы 3 съезда детских урологов-андрологов.-г. Зеленоград, 2013. - С. 225 - 226.

8. Comparative morphometric study of the testicles of fetus in antenatal perod. / D. Kozlov, K. Bunkov // Virchows Archiv. The European Jornal of Pathology. - 2014. - 465 (Suppl 1) - SI - S379.

9. Соотношение канапьцево-стромального и эпителиально-стромалыюго индексов яичек плодов антенатального периода / К.В. Буньков // Проблемы репродукции. - 2014. - Т. 20. - №2.- С. 12-17.

Буньков Кирилл Вадимович

МОРФОГЕНЕТИЧЕСКИЕ ПОТЕНЦИИ СОСУДИСТОГО (КАПИЛЛЯРНОГО) КОМПОНЕНТА КОММУНИКАЦИОННЫХ СИСТЕМ В ТКАНЯХ ЯИЧЕК ПЛОДОВ И У ЛИЦ С ВРОЖДЕННЫМ КРИПТОРХИЗМОМ

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Подписано к печати 01.07.2015 г. Объем - 1,0 п.л. Формат 60x84/16. Тираж 100 экз. Заказ № 4106/1.

Отпечатано в ООО «Принт-Экспресс», г. Смоленск, пр-т Гагарина, 21. Тел.: (4812) 32-80-70.