Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Морфофункциональная характеристика лимфоидной ткани при антигенной стимуляции и аутосенсибилизации (Экспериментальное исследование)

ереванский государственный медицинский од университет им. м. гераци

3 РИ V

На правах рукописи

григорян наталья аршаковна

удк: 616.42-097+572.7

морфо-функциональная характеристика лимфоидной ткани при антигенной стимуляции и аутосен;сибилизации

(Экспериментальное исследование)

14.00.16-Патологическая физиология 14.00.23-Гистология, Цитология и Эмбриология

автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

е р е в ан -1995

Работа выполнена на кафедре гистологии, цитологии и эмбриологии Ереванского государственного медицинского университета им. М. Гераци (зав. проф. А. В. Азнаурян)

Научный руководитель - доктор медицинских наук,

профессор A.B. Азнаурян

Официальные оппоненты:

1. Доктор медицинских наук, профессор В.А. Шекоян

2. Доктор медицинских наук, профессор В.А. Мкртчян

Ведущая организация - Национальный институт здоровья Министерства здравоохранения Республики Армения.

Защита состоится " "_________ 1995 г. в часов

на заседании специализированного совета К.075.03.03 в Ереванском государственном медицинском университете им. М. Гераци (Ереван, 3750225, ул. Корюна,2).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Ереванского государственного медицинского университета им. М. Гераци.

Автореферат разослан " "_________ 1995 г.

Ученый секретарь а

Специализированного Совета ,-У/уС

кандидат медицинских наук, доцент^^/ ) А. С. Азнаурян

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность лемы. Благодаря успехам теоретической иммунологии в организме животных и человека определена система, которая отвечает за иммунологическую реактивность организма. Морфологически эта система представляется в виде лимфоидной ткани-центральных и периферических органов иммунной системы (Бернет М., 1971).

Иммунная система, аналогично другим системам организма обладает разнообразностью форм ответа, изучение особенностей которых позволяет раскрыть механизмы развития иммунологических изменений и иммунопатологических реакций и создает возможность разработать и предложить принципиально новые методы диагностики, лечения и профилактики заболеваний человека и животных.

Известно, что при некоторых заболеваниях человека иммунопатологические реакции генетически детерминированы, в связи с чем важным является изучение морфологических изменений, протекающих в лимфоидной-ткани, характерных для этих патологических процессов.

Имеющиеся в доступной нам литературе сведения о морфологических проявлениях иммуного ответа в условиях целого организма весьма ограничены. Монография Жариковой М.М. (1979), посвященная изучению морфологии периферических органов иммунитета, включает в себя исследования лимфоидных клеток и макрофагов лишь в селезенке и лимфатических узлах. Однако, весьма интересным и важным является морфофункциональное изучение в условиях антигенной стимуляции тимуса-центрального органа иммуногенеза.

Таким образом, вышеизложенное свидетельствует о важности и актуальности комплексного изучения функциональной морфологии периферических и центральных органов иммунитета в условиях антигенной стимуляции.

Цель и задачи исследования. Исходя из вышеизложенного мы задались целью изучить особенности морфологии лимфоидной ткани при антигенной стимуляции и врожденной аутосенсибилизации.

Конкретные задачи исследования сводились к следующему:

1. Изучить морфологические изменения тимуса, лимфатических узлов и селезенки при иг.мунизации животных ксеногенными эритроцитами;

2. Выявить характерные изменения лимфоидной ткани у животных с врожденной аутоиммунной патологией на уровнях световой и электронной микромкопии.

3. Провести цитохимический анализ лимфоцитов подопытных животных, а также изучить активность естественных киллеров и Т-супрессоров.

морфофункциональная характеристика изменений центральных и периферических лимфоидных органов при антигенной стимуляции и врожденной иммунопатологии.

данные обогащают наши знания о морфо-функциональных сдвигах, происходящих при врожденной аутоиммунной патологии и при антигенной стимуляции.

Впервые дана сравнительная

>_работы. Полученные

Выявленные морфо-функциональные изменения в центральных и периферических органах иммунной системы свидетельствуют о том, что тимус принимает активное участие при становлении гуморального иммунитета.

При этом электронномикроскопические и цитохимические исследования в сочетании с изучением субклеточных маркеров Ти В-лимфоцитов и гемолизинов в сыворотке крови подтвердили клеточные превращения, характерные для аутоиммунных состояний и явились информативными для оценки иммунитета.

Полученные данные позволяют расширить наши представления о роли тимуса и других лимфоидных органов при развитии иммунопатологических реакций.

1. Сила иммуного ответа животных, стимулированных антигеном находится в обратно-пропорциональной зависимости от их возраста;

2. Глубина морфофункциональных изменений в лимфоид-ной ткани при иммунизации чужеродными эритроцитами дает объективную информацию о приспособительных возможностях организма и намечает пути дезадаптационных мероприятий

Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на заседаниях кафедры гистологии Ереванского мединститута им. М. Гераци (1985, 1994), на IX Всесоюзном съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (г. минск, 1981), на Закавказской конференции морфологов (г. Ереван, 1987).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 9 работ.

Структура и о6т»рм диссертации. Диссертация написана на русском языке, изложена на машинописи и состоит из введения, обзора литературы, материала и методов исследования, результатов собственных иследований, заключения и выводов. Работа иллюстрирована 7 таблицами и 35 рисунками. Список литературы включает 103 работ.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материал и методы.

Общая характеристика материала. Под опытом находились 550 мышей и 1200 крыс. Все животные в зависимости от характера воздействия разделялись на 2 группы. В I группу вошли 400 мышей и 1200 крыс, иммунизированных эритроцитами барана. II группу составляли мыши гибриды FiNZB/NZW, ВА4В/С и С57В4/6 с врожденной аутоиммунной патологией (150 животных).

У иммунизированных эритроцитами барана животных в разные сроки опыта (1,3,5,7,11,15,16,20 сутки) исследованы шейные и мезентеральные лимфатические узлы, селезенка и тимус. Образцы ткани фиксированы в 10% нейтральном формалине, жидкости Карнуа с последующей заливкой в парафин. Полученные срезы окрашивали гематоксилин-эозином, метиловым зеленым-пиронином для выявления РНК, ШИК-реакцией для выявления нейтральных мукополисахаридов (Пирс, 1962).

В свежезамороженных криостатных срезах выявляли следующие ферменты: кислую и щелочную фосфатазы,

сукцинатдегидрогеназу, глицерофосфатдегидрогеназу и НАД-диафоразу по методу Нахласа (М. Берстон, 1965). В дальнейшем производили количественный анализ содержания ферментов на цитофотометре.

Для выявления скорости синтеза ДНК в лимфоидных клетках лимфатического узла, селезенки, тимуса был использован метод авторадиографии. Для этого животным вводили внутрибрюшинно Н3-тимидин из расчета 0,8 микрокюри (гр. за 2 часа до забоя животного). Срезы вышеуказанных органов обрабатывались е}ютоэмульсией в течение 21 дня. В полученных препаратах определяли индекс мечения лимфоидных клеток, для сравнения подсчитывали в этих же клетках и митотический индекс. Оба показателя выражали в процентах.

В тимусе, селезенке, лимфатических узлах определяли наличие биогенных аминов (серотонина, гистамина) по методу Фалька-Хиларпа (Гордон Д.С. с соавт., 1962), с последующим количественным анализом на цитофотометре ЛЮМАМ-ИЗ, с диаметром зонда 0,1 мкм при длинах волн 585 и 550 мкм.

Для выявления активности клеток, продуцирующих антитела, производили количественный анализ РНК. С этой целью препараты обрабатывали галлоцианин-хромовыми квасцами по методу Эйнарсона (Гамке, 1980) с последующим анализом на цитофотометре.

Использовали также иммунолюминесцентный метод Кунса для выявления антителопродуцирующих клеток с использованием меченых глобулинов А,М,С-классов (Coons 1959).

Морфометрические исследования проводили для подсчета числа макрофагов и их фагоцитарной активности.

В тимусе выявляли внутриорганные кровеносные сосуды АТФ-азным методом Чилингаряна Г.М. с последующей морфо-метрической обработкой (Блинков С.М. с соавт., 1964).

Для сканирующей электронной микроскопии суспензию тимуса и селезенки фиксировали в 2% растворе глютаральдегида на 0,1 М натрий-какодилатном буфере (pH 7,3-7,4) при 37°, после чего отмывали и ресуспензировали в растворе Хенкса. После инкубации и фиксации суспензии глютаральдегидом клетки осаждали на алюминивую фольгу и материал проводили через ряд водных растворов ацетона восходящей концентрации. Высушивание проводили методом перехода критической точки из жидкой СС>2, после чего клетки напыляли серебром и исследовали в электронном микроскопе stereoscon Cambredge при ускоряющем напряжении 10 кВ.

Для трансмиссионной электронной микроскопии кусочки ткани из тимуса, селезенки и лимфатических узлов фиксировали в 2 % растворе глютаральдегида на какодилатном буфере (pH 7,4), после промывки и постфиксировки в 1% растворе OSO4 на том же буфере дегидратировали в ацетонах возрастающей концентрации и заливали аралдит или смесь эпона с аралдитом (Mollenhauer, 1964). В процессе дегидратации образцы контрастировали 0,5% раствором уранилацетата в 70% ацетоне. Ультратонкие срезы получали на ультратомах типа LKB и Reichert, контрастировали цитратом свинца (Reinolds, 1963) и просматривали в электронных микроскопах JEM-100B при ускоряющем напряжении 80 kV и Тесла.

С помощью плазмоцитарной реакции в отпечатках тимуса и селезенки определяли содержание антителообразующих клеток (Пурзвид С. с соавт., 1957), а в сыворотке крови-титр антител.

Исследовали также число АТОК по методу Ерне-Нордина (Никитин В.М., 1962), Т-лимфоцитов (Т-РОК) по Mendes (1977), функциональную активность натуральных киллеров и Т-супрессоров.

Результаты исследований и их обсуждение.

Результаты ферментативного ана\иза тимуса показали, что с 5-го дня иммунизации отмечается повышение активности исследованных ферментов: щелочной фосфатазы, НАД-диафоразы в эндотелии сосудов. При этом, активность щелочной фосфатазы к 5-му дню хорошо выражена в эндотелии мелких артерий и капилляров, расположенных чаще всего в междольковой соединительной ткани тимуса.

Начиная с 5-го дня эксперимента происходит постепенное нарастание коллатеральных анастомозов и увеличение диаметра отдельных капилляров в его корковом веществе.

Гладкомышечные клетки среднего слоя сосудов обладали наиболее высокой ферментативной активностью.

На 7-й день иммунизации в корковом веществе тимуса накапливаются макрофаги с выраженной активностью кислой фосфатазы.

Нередко такие клетки расположены на границе коркового и мозгового вещества дольки, образуя гнездные скопления. В эти сроки активность окислительно-восстановительных ферментов в клеточных структурах тимуса не меняется.

На 9-й день иммунизации в мозговом веществе концентрируется большое количество фосфатазоположительных

макрофагов и эпитериальных клеток стромы. Увеличиваете] количество сосудов, дающих реакцию на щелочную фосфатазу I НАД-диафоразу. В клетках кортико-медулярного слоя (тимоцита: и ретикулоэпителиальных) число гранул диформазана при реак ции НАД-диафоразу увеличивается. На 11-й день иммунизацш все исследованные ферменты проявляли низкую активность.

При люминесцинтно-микроскопическом исследованш тимуса выявлялись тканевые базофилы, разнообразные пс форме, величине и характеру люминесенции.

Среди них чаще обнаруживались два вида тучных клеток мелкие, расположенные под капсулой с яркой зелено! люминисценцией и средние, которые светились желтым цветом Количество тучных клеток в тимусе было значительно больше 3 иммунизированных животных. Среди тучных клеток встречалоа много дегранулированных форм.

Как привило, такие клетки имели нечеткие границы ^ отличались крупными размерами. При количественном анализ« среднего содержания гистамина и серотонина в тучных клеггказ тимуса (без дегранулированных форм) выявлено достоверно« увеличение биогенных аминов (Р<0,01).

С помощью данного метода исследования в тимусе хорошс выявляются элементы симпатической нервной системы представленные нервными волокнами, которые сложнс переплетаясь, образуют в адвентициальной оболочке сосудов сеть, люминисцирующую зеленым светом. Нервные волокна сопровождают сосуды до самых мелких калибров. Многие волокна, отходя от стенки сосудов, разветвляются в паренхиме и образуют в ней тончайшую терминальную сеть, которая светится зелено-изумрудным цветом. В мозговом веществе дольки тимуса

адренергическая иннервация обильнее и богаче терминальными образованиями и контактами с железистыми клетками и тканевыми базофилами, образующими букетообразные скопления.

Таким образом, при иммунизации животных эритроцитами барана во всех исследуемых сроках тканевых базофилов становится больше, чем в контроле. Следовательно, антигенная стимуляция способствует секреторной активации лаброцитов, морфологическим проявлениям которой является их дегрануляция. Последняя способствует обогащению окружающей среды гепарином, гистамином и другими биологически активными веществами.

В тимусе выявлены также антителообразующие клетки (АТОК). При этом количество АТОК, начиная с 7-го дня эксперимента, нарастало и достигало максимума на 11-й день после иммунизации, а затем отмечался спад их количества, заканчивающийся к 20-му дню после иммунизации. К этому сроку АТОК в тимусе не обнаруживались (таблица 1).

При исследовании в сканирующем электронном микроскопе в тимусе преобладали клетки с шероховатой поверхностью и кратерообразными впадинами, отдельные клетки имели единичные микроворсинки. В условиях антигенного воздействия выявлялось много переходных форм: клетки с шиповатыми цитоплазматическими отростками при уменьшении числа типичных Т-лимфоцитов. По всей вероятности различная картина поверхности и наличие переходных форм клеток свидетельствует об их функциональной напряженности и повышенной активности.

Таблица 1

Количество АТОК тимуса и селезенки на разных сроках антигенной стимуляции

Дни после иммунизации Количество АТОК на 106 клеток

В селезенке В тимусе

М±м М±м

5 457±12,5 0

7 216,4*2,6 3,6±1,2

9 121,3±46 6,3±3,1

11 52,8 ±9,0 20,9±4,0

13 20,7 ±16,5 1,9 ±0,25

16 2,8±0,3 1,3±0,3

20 0 0

Интактные 0 0

животные

При электронномикроскопическом трансмиссионном исследовании в популяции клеточных элементов тимуса на 7-й день эксперимента обнаруживались плазматические клетки с расширенными цистернами гранулярного эндоплазматического ретикулума, заполненными электронноплотным содержимым с плотной цитоплазмой. Митохондрии вакуолизированы.

Кровеносные капилляры обнаруживали признаки реактивных свойств; в межклеточных пространствах встречались остатки разрушенных клеток. В последующих сроках эксперимента ультраструктурная характеристика органа во многом была сходна с контрольной группой животных.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о функциональных изменениях как паренхиматозных, так и стромальных элементов тимуса при антигенной стимуляции. При этом гистохимические, микроскопические, иммуноморфо-логические, электронно-микроскопические изменения подтверждают активную роль вилочковой железы в реакциях как гуморального, так и клеточного иммунитета.

В селезенке наибольшее количество антителообразующих клеток выявлено на 5-ый день после иммунизации, после чего отмечался спад, а к 20-му дню эксперимента АТОК не обнаруживались.

Гистологическое исследование кинетики клеточных превращений лимфоидных элементов при первичном иммунологическом ответе показало, что общая картина гистологических изменений в селезенке соответствовала описанию изменений в лимфатических узлах при первичном иммунологическом ответе (Раппопорт Я.Л, 1957).

Пролиферативные изменения на 3-й сутки были уже отчетливо выражены. Количество пиронинофнльных клеток, среди которых преобладали плазматические, достигало максимума на 7-е сутки. На 14-е сутки гистоструктура селезенки мало отличалась от нормальной.

В тимусе и селезенке наибольшее количество антитело-образующих клеток выявлено на 5-ый и 11-ый дни после иммунизации, после чего отмечалось уменьшение их числа, а к 20-му дню эксперимента АТОК не обнаружилось. (Рис. 1).

Гистологическая структур« лимфоцитов в белой и красной пульпы имело свои морфологические особенности. Так, в лимфоцитах, расположенных вокруг цешральной артерии, выявляется интенсивно окрашенное ядро незначительных размеров, цитоплазма почти неразличима.

Литературные данные и наши исследования дают основание утверждать, что лимфоциты в описанных участках относятся к Т-лимфоцитам. На 3-ый день иммунизации в просветах синусов выявляется большое количество Т-лимфоцитов. Эндотелиальные клетки резко меняют свою конфигурацию и как бы выбухают в просвет синуса. Обнаруженный факт свидетельствует о выходе лимфоцитов из венозных синусов.

В эти сроки клетки с морфологическими признаками Т-лимфоцитов выявляются в красной пульпе. Местами можно обнаружить картину розетки, где в центре расположен макрофаг, а по периферии венчиком располагаются лимфоциты, что может рассматриваться как морфологический субстрат клеточных взаимодействий для реализации гуморального иммунного ответа. Это согласуется с известной концепцией о кооперации Т-лимфоцитов с макрофагами в процессе антителообразования.

Результаты электронно-микроскопического исследования дают основание выделить различные по ультраструктуре лимфоидные элементы.

На 3-ий день иммунизации выявились лимфоциты с плотным хроматином в ядре. Цитоплазма представлена тонким ободком, органелл мало. Вместе с тем обнаруживаются лимфоциты, сходные с описанными, но с более крупным* митохондриями, канальцами эндоплазматической сети и обилиек

рибосом. Описанные лимфоциты, по литературным данным, соответствуют Т-лимфоцитам на различных стадиях дифферен-цировки. Такие лимфоциты выявились также в синусах. На 7-й день иммунизации в большом количестве обнаруживались лимфоциты с диффузным распределением хроматина, придающим светлый вид ядру, с большим обьемом цитоплазмы. В цитоплазме выявляются хорошо развитые органеллы. Описанная картина характерна для В-лимфоцитов.

При изучении ультраструктуры селезенки были обнаружены изменения, в некоторых чертах идентичные наблюдавшимся в лимфоузлах и тимусе, а именно: выраженные изменения митохондрий лимфоцитов и плазматических клеток, расширение в них перинуклеарной цистерны, признаки выраженного клеточного полиморфизма, наличие большого количества свободных рибосом, в цитоплазме лимфоцитов, расширение элементов гранулярного эндоплазма-тического ретикулума в цитоплазме плазматических клеток на 7-ой день опыта.

С 6-го по 9-ый день эксперимента отмечена значительная активация макрофагального звена селезенки; наблюдалось увеличение количества этих клеток и их фагоцитарной активности (Табл. 2), усиление активности в них фосфатазы.

Таблица 2

Влияние различных сроков антигенной стимуляции на содержание макрофагов и их фагоцитарную интенсивность в селезенке

Сроки Кол-во животных Содержание макрофагов Фагоцитарная интенсивность макрофагов

фагоцитарный среднее число кл« показатель ток со светотех-шггенсивным фагоцитозом

Контроль 6 396±9,97 10,22 ±0,18 2,75±0,83

(2,67%)

6 день 5 456±3,4 11,012±0,6 10,5±1,26

(9,5%)

9 день 5 666±3 11 ±0,3 10,5±0,76

(9,5%)

15 день 5 422±2,7 11,95±0,24 10±1,08 ______(9,09%)

Электронномикроскопическое изучение макрофагов селезенке на 7-ой день после иммунизации также обнаруживало признаки их значительной активации, проявляющиеся в виде появления большого количества полиморфных лизосом в цитоплазме, обилия цито плазматических выростов, клапано-образных вздутий и гребнеобразных выростов в этот же срок.

Электронномикроскопически было отмечено персисти-рование большинства вышеуказанных признаков до 10-15 суток эксперимента.

Результаты проведенных исследований показали, что при антигенном воздействии в лимфатических узлах выявляются определенные изменения морфофункционального характера.

У иммунизированных животных к 5-7 дню иммунизации в висцеральных лимфоузлах наблюдается следующая картина. По сравнению с контролем заметно увеличивается число лимфоидных клеток как в паренхиме узла, так и в его сшгусах, что можно объяснить и усилением миграции лимфоцитов в лимфатический узел, и усиленным размножением собственных лимфоидных клеток. Об усилении миграции лимфоцитов свидетельствует сосредоточение основной их массы (около 50 %) в паракортикальной зоне.

Согласно литературным данным, миграция лимфоцитов проходит через стенки посткапиллярных венул, что связано с особыми свойствами их эндотелиальной выстилки и, в частности, с наличием довольно широких межэндотелиальных щелей (1964, Поликар, 1966, Вернет М., 1971). Существует взаимосвязь между цитологическими особенностями эндотелия венул и интенсивностью рециркуляции лимфоцитов. Любое усиление рециркуляции сопровождается гипертрофией эндотелия посткапиллярных венул, и, наоборот, потеря лимфоцитами способности к рециркуляции вызывает довольно быструю атрофию эндотелия соответствующих кровеносных сосудов.

Таким образом, на ранних этапах эксперимента (5-7 сутки после введения антигена), когда начинается усиленный приток лимфоцитов в лимфатические узлы, клетки эндотелия гипертрофируются и приобретают призматическую форму, а лимфоциты через стенку венул выселяются в окружфющую ткань лимфоузла. В этот же период в сосудах органа отмечается высокая активность щелочной фосфатазы.

Взаимодействием между лимфоцитами и эндотелием венул обусловлено сосредоточение в паракортикальной зоне основной

части тимусзависимого ре циркулирующего пула лимфоцитов (Сапин М. Р. с соавт., 1978). В наших исследованиях к 7-му дню иммунизация в паракортикальной зоне было сосредоточено около 50 % всех лимфоидных клеток лимфатического узла. Наличие в паракортикальной зоне интердигитирующих ретикулярных клеток также создает благоприятные условия для рециркуляции лимфоцитов и вовлечения их в реакции иммунитета.

Со стороны лимфоидных фолликулов на 5-7 сутки эксперимента наблюдается активация центров размножения, что согласуется с данными (Ковалевский Г. В., 1976).

Клеточный состав представлен большими, средними и малыми лимфоцитами, ретикулярными клетками и макрофагами, однако, преобладающими клеточными формами на данном этапе являются бласты-гермонобласты с крупным светлым ядром и узким ободком пиронинофильной цитоплазмы, что свидетельствует об активном функционировании этих клеток в коре узла в эти сроки иммунизации. Отмечается повышение их числа по сравнению с контрольным уровнем.

Это увеличение имеет место за счет бластов светлых центров.

Мантийная зона вокруг фолликулов представлена плотно расположенными малыми лимфоцитами.

Паракортикальная зона густо заселена лимфоцитами и незначительным количеством пиронинофильных клеток. Лимфоциты в этой области в большинстве своем относятся Т-лимфо-цитам. Подсчеты показали, что именно паракортикальная зона является зоной наибольшего сосредоточения лимфоидных клеток.

Мозговое вещество на данном этапе иммунизации хорошо развито, а тяжи утолщены, представлены в основном зрелыми и

незрелыми формами клеток плазматического ряда, являющимися наиболее активными продуцентами антител.

Количественный анализ пиронинофильных клеток показал, что основная их масса локализуется в мозговом веществе, а общее число пиронинофильных клеток на 7-й день иммунизации превышает контрольный уровень.

Иммунологические исследования обнаружили самые высокие титры гемолизинов на 5-7 дни иммунизации, что совпадало со сроками обнаружения максимального количества АТОК в селезенке. К этому периоду обнаружено также транзи-торное нарушение функциональной активности натуральных киллеров и конканавалин А индуцированных Т-супрессоров.

В тимусе животных с врожденной аутоиммунной патологией отмечена активизация макрофагов; кислая фосфатаза выявлялась также в ретикулоэпителиальных клетках, что связано с большой функциональной нагрузкой этих клеток в тимусе в условиях изучаемой патологии. Отмечено повышение активности некоторых окислительно-восстановительных ферментов в крупных отростчатых клетках тимуса, что свидетельствует об их гиперфункции.

Полученные данные позволяют предположить определенную степень участия клеток макрофагальной системы в патогенезе аутоиммунного заболевания. Так, понижение активности макрофагов в одних органах может быть связяно с их врожденной дефективностью. Повышение активности их в селезенке, возможно, сопровождается секрецией проста-гландинов. Последние играют определенную роль в патогенезе аутоиммунных заболеваний. Отмечается, что макрофага некоторых больных с аутоиммунной патологией синтезируют

простагландины, причем различаются активные и малоактивные формы макрофагов (КикраШск 1961). Ряд исследователей указывает, что противовоспалительное действие простагландинов при некоторых аутоиммунных заболеваниях, выражающееся в расширении прекапилляров, повышении проницаемости их стенок, изменении чувствительности болевых рецепторов, опосредуется через ЦАМФ макрофагов воспалительного экссудата (усиление синтеза) и лизосомальные ферменты (уменьшение высвобождения), на что указывает Робинсон М. В. с соавт. (1979).

Таким образом, проведенные исследования показывают, что тимус с первых же дней после антигенной стимуляции вовлекается в процесс иммунного ответа, включая и продукцию антител.

ВЫВОД ы

1. Иммунизация животных чужеродным антигеном вызывает в центральных и периферических лимфоидных органах резко выраженные морфо-функциональные изменения, характерные для иммунного ответа и иммунопатологических реакций. Пик морфофункциональных изменений наблюдается к 5 дню опыта в селезенке и к 11 дню опыта в тимусе.

2. Изучение морфологии лимфоидных органов при врожденной аутоиммунной болезни показывало, что в лимфатических узлах наблюдалась нарастающая с возрастом гиперплазия ретикулярной ткани с замещением лимфоидных элементов плазматическими клетками. В селезенке с возрастом наблюдалась заметная активация макрофагального звена с признаками аутофагии, играющая, по-видимому, значительную роль в развитии аутосенсибилизации.

3. При антигенной стимуляции наблюдается нарушение функциональной активности естественных киллеров и Т-супрессоров, которые носят транзиторный характер и более выражены в начальных периодах опытов.

4. Растровая электронная микроскопия дает основание описать морфологическую картину различных лимфоцитов. При этом, в тимусе преобладают клетки с шероховатой поверхностью и кратерообразными впадинами, а при антигенной стимуляции обнаруживаются лимфоциты с шиповатыми отростками. В селезенке и лимфатических узлах преобладали лимфоциты с ворсинчатой поверхностью.

5. При антигенной стимуляции подопытных животных в тимусе на 9-ый день иммунизации отмечается пик увеличения

фосфатфзоположительных макрофагов и эпителиальных клеток стромы, а также увеличение количества сосудов, дающих реакцию на щелочную фосфатазу и НАД-диафоразу.

6. При люминисцентно-микроскопическом исследовании тимуса были выявлены два вида тучных клеток, разнообразные по форме, величине и характеру люминисценции. При количественном анализе биогенных аминов было выявлено достоверное их увеличение.

7. Изучение гистологической, электронномикроскопи-ческой, цитохимической картины лимфоидных органов и их клеток позволяет расширить наши знания о значении иммунной системы при срыве толерантности и врожденных дефектов развития тимуса.

Практические рекомендации.

1. В экспериментальной и клинической практике при морфологических исследованиях лимфоидных органов (аутопсийный или биопсийный материал) необходимо обратить внимание на структурно-функциональные изменения иммуно-компетентных клеток, что свидетельствует об активности иммунологического процесса.

2. Полученные в ходе, экспериментальных исследований данные позволят в клинической практике расширить диапазон диагностических тестов иммунопатологических реакций путем использования морфологических, цитохимических и электронно-микроскопических методов исследования.

СПИСОК

опубликованных работ по теме диссертации

1. Возрастная характеристика иммунного ответа. Арохчапа-утюн.1980, N 3,12-15 (в соавт. с А. В. Азнаурян, С. О. Чилингарян).

2. Количественная характеристика клеточных и неклеточных структур тимуса и селезенки при антигенной стимуляции. Тезисы докл. IX. Всесоюзн. съезда анат., гист. и эмбриол. Минск, 1981, 112 (в соавт. с М. 3. Бахшинян).

3. Возрастные особенности лимфоидных клеток при антигенной стимуляции. Арх. анат., гистол. и эмбриол., 1981, N 9, 92-97 (в соавт. с А В. Азнаурян, М. 3. Бахшинян, Э. С. Акопджанян, С. И. Чилингарян и И. С. Каспарова).

4. Гистоэнзиматическая характеристика тимуса при антигенном воздействии. Ж. эксперим. и клинич. мед. АН Армении, 1982, 22 N 3., 213-215 (в соавт. с А. В. Азнаурян, Э. С. Акопджанян и Г. Л. Мелтонян).

5. Центральные и периферические органы иммуногенеза в свете гистоферментативного анализа. Закавк. конф. патофиз. Баку, 1982, 18-21 (в соавт. с А.А. Азнаурян, Э.С. Акопджанян, И. С. Каспарова, Г. А. Мелтонян).

6. Тучные клетки тимуса в свете люминисцентно-микро-скопического анализа. Тез. докл. Всес. конф. Москва 1983 г. Азнаурян, Акопджанян.

7. Гистохимическая и иммуноморфологическая характеристика тимуса при антигенной стимуляции. Тбилиси 1986, Азнаурян А.В., Акопджанян Э.С.

8. К вопросу об антителообразующей функции клеток тимуса в эксперименте. Мат. Закавказ. конф. морфологов, Ереван, 1987, 162-163 (в соавт. с С. И. Чилингарян, А. В. Азнаурян и Г. Т. Даниелян).

9. Гистоферментативная характеристика тимуса у мышей гибридов линии Р, с врожденной аутоиммунной патологией, (в соавт. с Э. С. Акопджанян, Ж. С. Акопджанян, Г. Л. Мелтонян и К. Т. Саакян). Мат. Закавказ. конф. морфологов, Ереван, 1987.

1ШФПФП1-и

nhiruúGiuufjprupjruGGbpQ l^mmmpi|ht ЬО 1750 фпрдшршрш^и l^bûi^uûhQbph Црш: Unuiçfiû furuiJpQ Ifuiqúbi. ЬО 400 úljGbp L 1200 umGbinGbi npnGfi ^nLÛ^qiugil.hL bQ пб[ишр^ tplunpngtiinGbpnil, tibintuqmnilbi t iupáuiqbi\d| Uii|2UJjti{j hiuGqnijgGbpQ L фш]6ш|ис húniCifiqiugtiuijfí tnuippbp opbpmú <úbt|, 2, ! 7, 9, 11, 15, 16, 20): bpljpnpq Hpmú oûwWbi bG F-|NZB/NZW, BALB/C C5FBL/6 шгшлфЗшС iqujpninqfiujjrul 150 hfippjiq úljGbp:

Фпрйшрифш1{шО ujruinntiúniG iqújpn|nqhiujn4 ЦЬОгциС^СЬрЬ nipûujqbqàj un{2UjjfiG hiuGqmjgGbph L фицбифф ijiú$n|it hjniu^iuógQ bGpujplji|bi hbmuiqninnipjiuG hiuuujljiujhG 3 fuúpbpiuú:

ЦЬСшрп&шЦшО L óuJjpuji5ujuujj[iG ifutyntiq opqiuGGbpo hbimuqrumlbi b hjniutiuiôfiiupuiQuiljuiG, hjniuiluiópuj^tiúfiujljuiG, tibljmpnGnúuiGpuiritiinuHjiJujhl tiúniüninqhuHjujO йЬрпо&Ьрпф

(Эшрй ишпЬдфиб opqujGGbpfi tjwpiluidgGbpnu} niumúGtuu}ip4bi t ppm hb^jhü 3>nu$unmuqtujfi, ЛДГф, СДГ-li, Л-ГФДГ I» НАД-Д фЬрйЬйшйЬр ujljuifiiinipjiuG mbqu^uupcttip Ü ßuiGmljiuljujü фпфп[шнррт|ЛОЬр, прпОр фпрЗД 7-р opQ ruGbGniú ЬО ш1(иф4пLpjuiO piupàpuigruû, |iul{ 11-prj opo iJbpjfiGfi uuG^ruCi:

flipàujqbqôniù hiujinGiupbpilbi. bû hiiiljuJÜujpúGiuqDjUjgnigfc pgfigGbp, npnG £uíGuíIjq фпрй^ 7-prj opfig hbuin шйЬ^ bG iununlb|tuqnijGti hiuuGbiml 11-pq op[ huL| 20-pq ophg hbuin ¿bG hujjinGuipbptlbi: Ujq pgfigGbpQ t|btjmpnGujjf) йиШршгфини({|1 oqGnipjiuúp pGniptuqptlbi bG npiqbu imuiqüujtnfrfj ppfrçGbp: ЪгЦш duiiH|bmGbpnu! hiuúiuGútuG фпфп^иш^шййЬр bG GljtuuulbL фш^ьфф U ип&шф hiuGqnijgGbpfi ДОтиЦш^иц qnmhûbpfi huiljiuúiupóüujqnjmgnighi pgfigGbp Вшйш^Ь imJbiujgiliuG li hbùnifiqjiûûbpfi uifimpfi puipápiugiiiuG ûfipU:

húniGhqiugt|iuó l^GqiuG^iGbph nipôtuqbqôniù зшини^пи] t ujiupuipi pphíGbph giuûiuljq, npnGg qbqpiuGniijiugfiuijfi tIuiu|iG bG ittiujjniú úfi2UJiluijpm.ú hbiquipfiGh, h|iuumii3fiGfi U ^ЬйишЦшй шд urtjui|i4 Gjmpbp] hiujtnGujpbpniúQ:

:gijnmp gmfdiugqbuintimqu líiud i|dqg3iJ3d uigqinqhiputjugnjp ^ piuimlifi Dpiu£iZf]q]iZmqmhnm ijbdm^mjimq о1"?1! piudqgfimpifli rjiupi)uimur gmtimdmdmçdi^ ^пЦ '3qp i|nq6uütn rjmfdiuilbmmdm ijdqggijpdmpmhm } jnu^mübüqg Oçbqbmçdiu hjmgmpmp gmp^mbbm ijdqggtjjpmtyn üu 'mjlrrun gq 6hu6 Ddqg3giufbdm tjdqgguifdiumubmmqq pmfidminm '^um]hnn(n :piumn]mnj gmfdiu|ii|in^m lmgui|6ligiu<fc i|dqgdunqdhviun-j_ çm]i6tyiuùr}i q tJUqgüqlliJh gmtimgd 4mg gi^qjimimqmßmd uiup ijdqgijgmbgqti bip

:piuüqgmiJ6f]mqu bfm gijnmp ijgmpijuinn gmtdiuö^mgnmij ijdqg3i|3d ingqinqhijiufiugiujiil } tnufmffli Офт? ijdqgpiugmtnmu 6gudu 'dqpdmZmbqm gm^mtyngmi ijdqgiudd gijimgi|qlt]iug gq çm|nJqdmginfmj :çiiu6mdçdmd gmfdiuliijin^m ijdqgmgqpdqt gmïimbugbgmf)mdq|iubijn3c r| qtmbmLnmtnut íudd } lq]\mmtig jnudqg3i43d gijfmlqdubg.uhutiijinqi 4 bm<fcudtyn[i ijçbqbmçdiu ijdqgijgmbgqh giupijumium gmfimdmdmçduo

:piu6mlq|im 1|фт?тртй1г

i|dqgdugmbmçi 4mg riqta?gi| '£tm L|dqgbujimuinmgm ImdqinmTlh jnugqgu gq ijbqrn 6i]gm}ido bd-g 1^иф du 1q]iuifmqm6m;j :Qdqgdugm dmuimgiufdrr gi|fmhmd1ddqg gq 1qfidijnmg¡numu jnuçbqbmçdiu Jiubudqp gi]ímbm-fl)XV

il