Автореферат диссертации по медицине на тему Метаболизм ксенобиотиков в печени и коррекция его изменений в постгипоксическом периоде
Р;»6 од
2 О ДПР '»993 РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕДВДИВ2КИХ НАУК
СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ ИЕСГИТУТ РЕГИОНАЛЬНОЙ ПАТОЛОГИЙ И ПАТОЛОГИЧЕСКОЙ МОРвШОГИИ
яа правах руюпюи
ШАРАПОВ Виктор Иванович
МЕТАБОЛИЗМ КСЕНОБИОТИКОВ В ПЕЧ2НИ X КОРРЕКЦИЯ ЕГО ИЗМЕНЕНИЙ В ПОСТГИПОКСИЧЕСКОЫ ПЕРИОДЕ
14.00.16 - патологическая фиаиоюгт
Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук
Новосибирск - 1993
Работа выполнена в Новосибирском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте, Институте клинической и экспериментальной лимфологии 00 РАМН, Институте физиологии СО РАШ
Шучныэ консультанты:
доктор медицинских наук, профессор О.Р. Грек член-корреспондент РАМН, профессор Г. С. Якобсон
Официальные оппонентьс
Чден-корреспондент РАШ, профессор В. В. Ляхович доктор медицинских наук, профессор Т.д. Короленко доктор медицинских наук ЕЮ. Куликов
Ведув&я организация: Институт фармакологии Томского
научного центра РАШ
Зацюа состоится " С1" 1993 г. в чае
на заседании специализированного учёного совета Д 001.40.01 при Институте р-ггвоваяъной патологии и патологической морфологии СО РАШ (6Э0117, г. Новосибирск, ул. акад. Тимакова,2)
С диссертацией иохзо ознакомиться в библиотеке Института региональной патологии и патологической мэрфологии 00 РАШ
Автореферат разослав 1а93 г.
Учднъй секретарь специализированного совета,
кандидат бюлогнчгскнх наук £. Л. Душникова
ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ
Актуальность проблемы. Одним из перспективных направлений современной патофизиологии является изучение механизмов действия гипоксии как универсального повреждающего фактора (Иэшал-кин Е. R и др., 1982, Лукьянова JL Д. и др., 1982, Колчинская А. 3., 1983, Агадаанян Е А., Елфиыова А. И., 1986, Hochachka Р. W,, 1986) и разработка патогенетических подходов к коррекции гипок-сических повреждений тканей и органов (Кораблёв В. М., Лзпсиенко tt И., 1976, Виноградов В. VL, 'Ургаов О. П , 1985, Коваленко Е. А., 1988, Лукьянова Л,Д., 1989, 1S91, Чгкмая И.О., 1991). С решением данной задачи тесно связана проблема профилактики и лечения повреждений печени при патологических состояниях, ведущим звеном патогенеза которых выступает гипоксия печеночной паренхимы (Гальперин а И. и др. ,1978, Шумаков В. И. и др., 1981, Веронский Г.К, 1983, Ray R.А. е.а, 1983).
Общепризнано, что центральным звеном действия гипоксии на клетку является энергетический обмен (Мгерсбн Ф. 3. ,1981, Лукьянова Л. Д. и др., 1982, Лукьянова JL Д., 1987) и большинство исследований касаются изучения роли митохондриальных систем окис-' ления в адаптации клетки к недостатку кислорода и разработки способов фармакологической коррекции энергетического аппарата клетки (Меерсон Ф.3. , 1934, Лукьянова АД,, 1989, 1991).
С позиций клинической медицины актуальным остается вопрос значимости функциональных изменеь«й при гипоксии моноокеиге-назной системы гепатоцитов, потребляющей кислород на процессы окисления эндогенных соединений и поступающих в организм ксенобиотиков, в том числе и лекарственных весеств (Лакин К.Ы., Крылов Ю. Ф., 1981, Холодов Л.Е. , Яковлев EIL, 1985, Лукиенко П. И., Бутша IL И., 1986). В работах отечественных и зарубежных авторов показано, что микросомальная монооксигеназная система печени изменяет функциональную активность при гипоксической гипоксии (Грек О. Р. и др., 1984, Горчакова А А., 1987, ДУдченко 4.М. и др. ,1988, Щугалей а С. и др., 1988, Bonkovsky Н. L. е. а , 1986, GroverS. К. е. а., 1987, Jordi-Raclne А. е. а, 1988), при циркуляторной гипоксии (ишемии) печени, ишемии миокарда (Беди-ханова ДМ. и др. , 1981, Воронов Г. Г. и др., 1982, Катруха С. а и др. . 19Й7, Биленко М. Е , 1989, Prescotf L. F. е. а, 1976,' Fer-гего М. Е., е. а , 1978, Renton К. V. е. а , 1979) и при других заболеваниях (Матюшин Е а и др. ,1987, Лэгинов A.C. и др. ,1987).
1
Однако кз-за противоречивости полученных рэсультагов ке представляется воз^гаш установить ганоклзрностн ¡шаяекий кэгзбоавш ксенобиотиков при «жсгородиой недостаточности к роль мэзооксигеназ печена в формировали ответной реакции орга-г.а раэдячныэ виды гшюкснчэского воздействия. Бэкзучен-нни остается вопрос кэкзрганных взшоззотнопзнкй при пахокекчео-еогрегденняя в сиотеце "сердце - пзчэеь" и зяачошш ексте-1га кэт^болшна ксенобиотиков в патогенеза возижкагсза изрува-ш'й. йввддася едпшгшыз сообцмвш о возшшости коррекция sx-vzssscnr isiKpooouasbHKs: &зразетов кзогак при её изешк essim-свдзктеьа и Евдкгорааз швосгаигеягз (Воронов Г.Г., ,25та:гклО Е Я , 1983, Еиленко ЕЕ и Др., 19S3) не позкшвс сформировать взгогенетйчэскйз подхода к профааакггикв и терапзш повргк-ssimй печени при гипокслчэских воздействиях.
Совокупность пр;хводённых sacs данных выдветает в качестве актуального вопрэо о роля шаоодалгеназной система печзни в патогенезе гш;о;сенчзс;сих шзрездовий, а также экспериментального к теоретического обоснования патогенетических подходов к коррекции детокскциру»пвй Функции печени при гипоксичэских состояниях, повьелеодх одновременно и устойчивость клеток печшш к недостатку кислорода
Диссертация выполнена в соответствии с планом научно-нсслэ-довательской работы Новоскбирсгаго медицинского института по теш: "Разработка и изысканно эффективных методов фаршкопро-фагаягнкя и лечения гипокеических повреадений г капай, органов it оргаякаса в эксперименте к клинике" (теиатичэская гарта к 085, государственная регистрация N 01850065, в разиках государственной щюб£еш 10. 07 - "варкакологическая коррекция гк-поксических состояний**).
Цель исследования. Изучить закономерности кзшнепкй мзта-болкзш ксенобиотиков в печени в воестаноЕитедьноы периоде после различных задов гшоксического воздействия и на этой основе теоретически обосновать и разработать патогенетические подходы к коррекции активности шнооксигенааных ферментов, обеспечиваюсь повьшение устойчивости клеток печани к недостатку кислорода. Задачи исследования.
1. Изучить изазкениа ийкросошлъного метаболизма ксевобио-теозв в ЕоссталоЕйтелькоы периоде после тотальной и долевой кзэшш печзш, острой гипобаричэской гипоксии у крыс.
2
2. Оцзштть ¡жлк::э острого короларсогаисзяонного шт^оитга ккокарда у крыо г.а скорость биотраяс$ор!5ЗДН анттглр'.гкз, дг.а-зепачп, злфэдшгаа ¡5 активность гакросогагьиых юнооксигенаэ-шн ферьэитоз печени в восстановительном периоде.
3. Исследовать особенности пт'эненлл иетаболнзма ксенобиотиков в печени в восстановительном периоде после острой пгло-барической гипоксии и инфаркта шюкарда в зависимости от индивидуальной устойтавости тавотных к недостатку кислорода.
4. илстеть иэхан!!31.ш форюровашш ответной реакции моно-оксигеназной скстекы печени на острую гшюбарическуп гипоксгаэ у интактнызс и адаптированных к недостатку кислорода аивотных з зависюгости от ж индивидуальной резистентности к гипоксии.
5. Дать теоретэтеское обоснование роли иозсоксягеназ печени в форглпювззттп адаптационной реакции гепатоцктсв на гяпокск-ческоэ воздействие п принципов повкезши резистентности клеток печени к недостатку кислорода посредством фармакологической ре-гулкцш активности шкооксигеназ.
8. Кзегадогать проткзоккмичоекуз и протигогштексичоскуп акгеггость к?^«бг-"'Опротекторов, кадукгороз и напйетороа ¡яао-сксигеяав па мэдеяяс СО-доз тоталзпоЗ, 2-х чэсогой долевой кгз-иш печени и гипобаричесгай пягокспя.
7. Изучать а экеяерннгпге зозшпооть коррекции кэтсболизт ксеноСтгогяетв в паченк при г.чпс!»:п:эсках ссегс^'л-пх с кспользопздпом ;1?!йр2:гопрэтс1с?орсл (аптгюгкпдазтоз :: гпбитороз фэефозпязэ) я кздукгороэ юасогссигеяаэ (£эвсба,тбста--ла и вккссртаза), обосновать пзтогепеткческЕг подходи к копрофялактике я терапии зт;к состояний.
Шумная новггана.
- Впервые проведено изучение функциональной а'стгшнсстк г.хз-ноокспгепазной системы печени при различных видах гкпокапческо-го воздействия и выявлена зависимость ггзшнешй её активности от индивидуальной устойчивости животных к недостатку кислорода
- Показано, что в формировании адаптащюнной реакции организма при острой гипобарической гипоксии и в процессе тренировки гзгвотных к недостатку кислорода припишет участие ккслэрод-аависиыая микросомальная шнооксигеназяая систека
- Впервые установлена обратная зависимость исходного уровня функциональной активности монооксигенаэ печени и резистентности животных к гипоксии, а такаэ сопряженность данных пара-
3
штров с характером реагирования мюфосодальной ферментной системы печени на гипоксический раздражите».
- Впервые проведено экспериментальное н теоретическое обоснование целесообразности использования индукторов монооксиге-наз в качестве средств коррекции детоксицирукщэй функции печени при её ивемическом повреждении.
: - Теоретически обоснован и экспериментально разработан метод комбинированного подхода к коррекции изменений метаболизма ксенобиотиков в печени в восстановительном периоде после гипок-сических воздействий с использованием природных антиоксидантов, растительных полифенольных соединений и ингибиторов фосфолипаз.
- Дано теоретическое обоснование путей повышения устойчивости клеток печени к различным видам гипоксического воздействия посредством фармакологической регуляции активности моноокеиге-назной ферментной системы печени.
Теоретическая и практическая значимость.
Разработана концепция сопряженности параметров функциональной активности микросомальной нонооксигенааной системы и устойчивости клеток печени к недостатку кислорода На основе данной концепции предложены способы фармакологической коррекции активности микросомального метаболизма,обеспечивающие высокую устойчивость гепатоцитов к гипоксичесюш воздействиям и их функциональную активность в восстановительном периоде.
Излученные экспериментальные данные позволяют рассматривать гипоксическке состояния (ишемию печени, инфаркт миокарда, гипоксическую гипоксию) как фактор, вносящий значительные изменения в фармакок^нетические параметры лекарственных препара-ов, подвергающихся биотрансформации в печени. Данное обстоятельство является основанием для разработки рекомендаций по использованию антипиринового теста в клинике при проведении фармакотерапии больных инфарктом миокарда и для прогнозирования течения других патологических процессов, связанных с нарушением кислородного режима в тканях.
Дано экспериментальное обоснование целесообразности использования индукторов микросомальных монооксигеназ при хирургических вмешательствах на печени с целью коррекции детоксицирую-•аэй функции органа в послеоперационном периоде.
Экспериментально обоснована целесообразность комбинированного применения препаратов разных фармакологических групп и по-
4
казаны перспективы поиска высокоэффективных фармакологических средств из растительного сырья для предупреждения нарушений или коррекции детоксицируиедей функции печени в восстановительном периоде после гипоксических воздействий.
Внедрение результатов исследования.
Результаты настоящего исследования используются в Щ31Л, на кафедрах патологической фшюлопш и фэрьакологии Новосибирского медицинского института, з. ВИИ клинической и экспериментальной ЛШфОЛОПГЛ СО РАШ, В 11-й городской клиничёсюэй больнице г. Новосибирска.
По материалам исследования внедрено 3 рационализаторских предлогхэния, получены приоритетные справки на "Способ ¡»ррекщга детоксикационксй функции печени при её ийюai" N 3866994/14-03. 53Б2 и "Способ предотвращения гибели клеток печени ог КЕеггш" 3932189/14-104934.
Положения, выносимые на затиту.
1. Различные вида гяпэшюеоното воздействия 81&ивгшг разнонаправленное и разной степени штразэндости ешь:!И платности мэяооксигеназ яеченя, в зяачгггглькой степени заьисяви от индивидуальной рээютентяоета азшяаык к паюксии.
С. Исходная футщиональкал активность моксоксжч-йазноЛ скоте ки сопряжена с устойчивостью оргавкзиз к шожии, что определяет реакцию данной системы на ггаюккгсеакий раздражитель.
3. Кз»юнение устойчивости клеток печена к гшюкекчеекоиу воздействию возможно посредством фарьшологичзскоЯ регуляции а-стивкости кикросональных ьгоноомекгепаз.
4. В противогипоксичес1сом эффекте комбинации а-токоферол+ лидокаин наряду с мембраяопротективным действием существенную роль играет способность препаратов вызывать изменения структурно-функциональных характеристик эндоллааматичеегеого ретикулуиа гепатоцитов, аналогичные исходно детерминированным у высокоустойчивых к гипоксии животных или возникающим в процессе адаптации организма к гипоксии.
Апробация работы. Результаты исследования докладывались на Всесоюзном симпозиуме с международным участием "Структура и функция лизосом", Москва-Тбилиси, 1986 г., на Всесоюзной конференции с международным участием "Цитохром Р-450 и охрана окружающей среды", Новосибирск, 1987, на 1-й Всесоюзной конференции "Фармакологическая коррекция гипоксических состояний",
5
Шсква, 1988 г.. на VI Всесоюзной съезде фаршкологов, Ташкент, 1988 г., Еа Всесоюзной конференции "Еовые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока", Томск,1989 г., на 15-й Наадукародной конференции "Актуальные вопросы клинической йаршкологий", Волгоград, 1990 г., на Всесоюзной соЕэцан«к "Скзиологии и биоэнергетика гипоксии", Шсква-ЬЬшск, 19S0 г., ка Всесоюзной' научной конференции "Щюблемы лекарственной токсикология", Уэсква, 1990 г., на 7-й 1&ЕДукародной конференции "Biochemistry and Biophysics of Cytochrorra P-450", Уосква,1991 г., на 2-й Всесоюзной гояферзкщл "&арз£1яолоп148ская коррекция пшоксических состояний", Гродно, 1891 г., на 9-м Нэгдународ-еоы сишозиуые "Mlcrosores and Drug Oxidation", Jerusalem, Israel , 1992 г., на региональной конференции "Проблем клйнячэской и экспериментальной ликфохогии", Еовоснб;фск, 1992 г., па Республиканской сишозиуые "йэноокенгеназная система. Тсоратичес-киэ н яршиэднкз аспекты", Ташкент, 1992 г.
Публикации. По материалам диссертации опубликовала 41 научная работа, из них 33 в центральной печати.
Обьйм и структура диссертации. Диссертация изложена ка 23S страницах маданопненого текста. Состоит кг введения и 4-х глав, включаседа обзор литературы, штериагш и методы исследования, результаты собственных исследований, обсуждение полученных результатов и вывода Список литературы включает 194 работы отечественных и 166 зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 69 таблицами и 4 рисункам,!.
ИАТЕРЮШ И ШОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
В работе использованы 1500 крыс-самцов Vistar массой 150250 г. ручались фармакологические препараты: фенобарбитал, зиксорнн, сс-токоферол, лндокаян, биофлавоноиды (полифенольные соединения манжетки обыкновенной, кровохлёбки лекарственной, Евшовшка майского), химическое соединение^-®:зтвламиноэтил-детфеяилпропилацетат (SKF-525A). Фенобарбитал вводили в дозе 50 да/кг внутрабркшшо четырёхкратно 1 раз в сутки,зиксорин (син. ф^тыецинол) вводили внутрижелудочно в дозе 80 мг/кг на 10% водной растворе твина-80 в течение 4-х дней с 2-х дневным перерывом (Рыбакова Т.А., 1990). Шяипуляции (натоакние зажима на сосуды печени, декапитация) осдаствляли через 24 ч после последнего введения индуктора. Ингибитор цитохрома Р-450 -
б
5КР-Б25А вводили внутркбркзшно в дозах 10 и 20 иг/кг за 1 до наложения вазжыа на сосуды печени (Грек О. Р., 1982). ос,-»око-фзрала-ацетат веодили в виде зох шсхтаого раствора впутркбрю-аинно в дозе 100 мг/кг за 12 часов, лидокаш (в дозе 10 иг/кг) за 1 час до манипуляций (ютемии печени, гипоксии). Вюфяавопо-иды были предоставлены лабораторией фятохиши Центрального Сибирского боташгчесгаго сада СО РАЕ Изучались комплексы no.ni-фенольных соединений, полученные т корней и корневищ манхггкг обыкновенной, кровохлёбки лекарственкбй и шиповника майского. Соединения вводашюь в дозе 10 «г/кг' (1/10 Ц>-50) вяутриж&лу-дочно, С лечебной целы» препараты вводились 1 рав в сутки, ш-вотньк дэглгпггиропаги через 2 4. час а после последнего введения препарата. С профилактической цэлыа полифэнольяыэ соединен::)" вводились однократно в указачной визе дозе. Эксперименты проводились через 30 кян после введения препарата Экспериментальные модели.
1. У .тавотных создавали тотальную ¡пгеикв печени путём на-лохэшш ыжрозаяг.з на печёночзуо артерао и воротнув вену па 20 минут (обрагише ипецичес.чое повреждение).
* 2. Двухчасовую исамии печени (необратимое ипеьагсеское ьсе-регдояиз) создавали путём наложения иакрозажаа на сосуда: Г5 а ноту центральной и зевой долей печени. Оперчгаи выполняли иод зтаткшззьм наркозом (40 иг/кг). Исследования проводились ¿и 1, 3, 7, 14 и 21 сутки постнседоческого периода ^ .1 Острый инфаркт ыкокарда (ОКУ) у кркп создавай по кзгсду Селье Г. (1960) с доступом к сердцу по Когану Л. X (1979). Контролем с лудили интактяке гешотнке, которым проводилась торакс^'о-шя, вскрывался перикард, но коронарная артерия не перевивалась (ложнооперировзиные животные). Исследования проводились па 1, 3, 7, 14 и 21 сутки острого инфаркта миокарда
4.. Острая гипобарическая гипоксия вызывалась у крыс в вентилируемой барокш.'йре. Подьёи осуществляли со скоростьп 50 и/с без промеяуточннх остановок до "высоты" 9 ООО м (Кораблёв Я В. , Лушгенко Ей., 1976). Экспозиция на этой "высоте" состазлллз 2 часа Исследования проводились через 5 мин или 24 часа посх^ "спуска".
* Данные разделы работы выполнены совместно с к. н. н. Т. А. Рыбаковой и к. м. н. А. А. Зыковым
7
5. Устойчивость крыс к гипоксии определяли по времени появления второго атонального вдоха при подьеме на "высоту" 11 500 м в барокамере со скоростью 50 м/с. Если у крыс на данной высоте второй атональный вдох появлялся в течение первых 3-х минут, то гавотных относили к группе низкоустойчнвьк (НУ), если через 10 минут - к группе высокоустойчивых (БУ) (Еарезовс-ккй а А., 1978, Чэриобаева Г. Е , Лукьянова iL Д. , 1989). Исследования на НУ и БУ иивотных проводились не ранее, чем через 2 недели с ыомента разделения на группы.
6. Адаптация крыс к пшобарической гипоксии вырабатывалась содержанием лапотных в барокамере на "высоте" 6 ООО и в течение б часов евэдневно на протяжении 30 дней (Иеерсон Ф. 3., 1981, Дудченко А. 11 и др., 1988). Исследования проводились через 24 часа после последнего подъёма на высоту.
Изучение функциональной активности монооксигэнзз печени
Функциональная активность шнооксигеназ печени в условиях In vivo изучалась по скорости элиминации антипирина, нифедипи-ка и диааепаш.
1. Антипирин вводили внутрибрккияно в дозе 18 мг/кг. Кровь забирали из хвостовой вены череа 0,5, 1, 1,5 и 2 часа. Определение концентрации антипирина в плазме крови проводили методом обра^нно-фазовой высокоэффективной жидкостной хроматографии (В32Х) согласно описанию Рахманова И. А. и др. (1989).
2. Ннфэдялин (кордафен) вводили в желудок через зонд в до-ве 10 мг/кг. Кровь забирали гг хвостовой вены через 0,5, 1,0, 1,5 и 2,0 часа Определение концентрации нифедотина в плазме крови проводили методом обраярнно-фазовой ВЭЖХ (Snedden V. е. а 1986). О
3. Диазепам (реланиум) вводили внутркбрюшинно в дозе 20 иг/ кг. Кровь аабкрали из хвостовой вены через 2, 2,5, 3 и 3,5 часа Определение концентрации диазепама в плазме крови проводили на хроматографе "Милихроы-1А" методом ВЭЖХ согласно описанию «айбушевича A.A. и др. (1986). Элиминация антипирина, ни-федипина и диазепама рассчитывалась по периоду полувыведения (Т1/2), константе элиминация (Kel) и клиренсу препаратов (С1)
с использованием общепринятых* формул (Соловьёв ЕЕ и др., 1980, Холодов Л.Е., Яковлев В.Е , 1985).
4. Дяя оценки активности цитохрома Р-450 в условиях in vivo использовалось определение метаболитов антипирина После
8
внутркбргЕшгаого введения антипирина в дозе 18 мг/кг собиралась 9-ти часовая порция мочи. Определение основных метаболитов антипирина - норантипирина, З-гидроксиыэтилаятипирина и 4-гидроксиантипирина проводилось иетодом ЮЯХ согласно описания Рахманова H.A. и др. (1989).
4ункциональная активность монооксигенаэ печени in vitro оценивалась по концентрации цитохроиов Р-450 и Ь5 в шкросоиа-льной фракции печени. Изучалась тага» активность цитохроыа Р-450 по отношении к субстратам - амидопирину, анилину, диазе-паму и кинетика взаимодействия цитохроыа Р-450 с субстратами 1 (гексобарбитал) и 2 (анилин) типов.
Шкросошльную фракцию печени выделяли дифференциальным центрифугированием (Арчаков А. iL, 1975). Количественное содержание шкросоиалышх цитохромов Р-450 я Ь5 регистрировали в соответствии с иэтодон, описанным Опита Т.. Sato R. (1964). Исследования проводили с поморю дифференциального двухлучевого спектрофотометра "Hitachi-356" с записью на самописце QPD-54 (Япония). Активность ферментов зндовлазштичеекого ретикулуш определяли по скорости N-дештилировашш амидопирина (Smuckler Е.А. е.а., 1957), р-гидроксилирования анилина (Imal Y. е.а., 1966), гидроксилирования диааеггаиа (Garattinl S. е,а., 1973) и по скорости образования основных метаболитов диазепаыа - ок-сазепама, з-гвдроксидиааепама и N-дееиэтиддиазепвыа. Концентрацию диазепама и его «этаболитов в среде инкубации определяли методом ЮЯХ на приборе "teumxpoa-lA" (йайбуюевич A.A. и др., 1986). Исследование кинетических констант взаимодействия гексо-барбитала и анилина с цитохромом Р-450 проводилось на двухлуче-вом спектрофотометре "Hitachi-356". Спектральную константу диссоциации (Ks) определяли по методу Scbenkman J.а е.а (1967). Количественное определение максимального связывания субстратов с цитохромом Р-450 UAmx.) проводяли согласно описанию Kato R. е. а. (1971).
Изучение структурных характеристик микросом?ипьи«т мембран
Физико-химические свойства липидного компонента мембран зн-доплааматического ретикулума гепатоцитов оценивались на основании изучения:
1) Яирно-кислотного состава обадай фракции микросокальных липидов (Foloh J. е.а , 1957), регистрируемого методом газовой хроматографии (Синяк К.Ы. и др. ,1976) на приборе СЬгоп-4,(сталь-
9
ш> колонки 1,5 м, налолшиель "Rsoples-400");
2) Параметров связывания гидрофобного флюоресцентного зонда 1-аншшЕОна4аал1ш-8-сульфсната (АШ) с мкиросоиальньаа игиз-раяащ (Вгадаоров В. А. , Взбредав Г. Е. ,1080). Исследования про-Еоддаиоь на флюоресцентном спектрофотометре !,PF-4 "Hitachi";
3) Ижравяакости лзгпидкого компонента ызыбран шкросси, ре-п;атраруегай со ©иеральной дийузи» фашресцантного зонда пи-
(Вмдюатров ßi, £о5рецоз Г. Е., 1980). Исследования про-водииа» за спаетрофлюорзавтре F-3C00 '•KiUsM" (Яаокия);
4) Akshüsossk спонтанного, НА£СН- и сягпрИ&е-ааыхайюго пе-1.'лас:;ого окисгзниа ненасьехэшгых хгрннх ¡ссж>т »свдхзсо^аашя фтефолшадов in vitro (Ваздкшраз a. Л., Арчгаюа Л. , 1972).
Кэучен«-л дастру-аэтвнш; совргэдеккй паренхим начат
Usa шрфодогической оцэнкк поотясамичеекогэ позрсяяеия та-реыаэд пэчзви хвшмвык дгкашяиров&ги через 24 чсса и 3 суток К-ц;2р:сулз«ва Образцы шчзна asa сшсовай шкросколии отбкуалу арозтгд случайна выбором, &кс«ровад« в 102 раетвог« нейтрального фсргздша и 8амшчаля з парзфаи. ПзргфшоЕие с^.езы окр&аа-аалл гештоковашк и зоаиноя (Волкова О. В., Елгц^й а К., 1982) п етяодлеовали для определенна обьёиа зон нэкротитаекиа кзшнвгасй в печзнн. Обьёшшг шамносиь некрогизироваакоз и адо-Роеой ®кааи рзаочазсызаязаь в процентах от обьвьа ткани печени.
Кокцзятращ.Х) бежа ыикросои определяли по Lovry 0. Н. в. а. (1951). Ees зкспэргшэнтальяш дгшные подвергала! ск-тпстическоЯ обработке на иакрокалькузяторз "Злэетроккка УК-SI" с ислохьао-ванязм пакета программ. Дзетосеркоеть различий (Р) эксперюген-таяышх данных рассчитывалась с использованием критерия t Стьв-денга. Реавягш счигагж значииьас: при Р<0,06 (Лзкан Г. Ф. ,1980).
РЕЗУЛЬТАТЫ КССЛЕДОВШШ
Пшггическне процессы в твой клетке, к которым относится и бетграксфорьгщия ксенобиотиков, являются эндэргонкческныи и кгобхоякаоа условие га существования - сопряжение с окислитедь-ша истаболизцои. Шскояьку функционирование микросоиадьной спсгеыы двтокеикации ксенобиотиков сопряаено с процессом погло-EjjHißt колэкулярЕого кислорода, а в количественной отношении
л Дзтша раздел работы выполнен на базе ЩШ ИМИ совместно со ст. л. с. И. А. Сокирченко и п. н. с. Ii К Захаровой
10
концентрации ферментов данной системы в ¡слетках печени довольно высота (Е^аЬгоок Я. V/. е. а , 1971), следовательно, вклад росомашшх моноокскгеназ в окислительный метаболизм клетки в некоторых ситуациях шлет оказаться зесьмз значительный (Арча-ков А. И., 1975, Вгашег В. е. а ,1969, Ьопгш1г КБ.е.а. ,1980). Тагам! ситуациями в клинической практике является патологические процессы, протекайте с развитием гипоксии печеночной паренхимы (Гальперин Э.и. и др., 1978, Березовский е а., Наварен-ко А.И., 1981, Щумаков В. И. и др., 1981, Веронский г.и., 1983, !?ау Я. А. е. а., 1988). Однако в кастояпэе время из нкекзпюя литературных данных не представляется возможным установить определённые закономерности реакции ионооксигеназной системы печени на различные виды гипоксического воздействия.
Влияние идеыии печени и инфаркта шокарда яа активность
шноокеигеязз в восстановительном периоде Проведённое изучение гидроксилазной активности и количественного содержания ферментов ионооксигеназной систекы печена при различных видах гипоксического воздействия обнаружило, что на протяжении 3-х недельного периода после обратимой и необратимой ишемии печени скорость метаболизма амидопирина и анилина, концентрация ьмкросомальных цитохромов Р-450 и Ь5 оставались сниженными. На 21-е сутки после 30-иинутной тотальной иземии печени скорость р-гидроксилирования антшша не восстанавливалась (73,51 от исходной), а после 2-х часовой долевой ишемии печени оставались сникэнными скорость Н-дештилировашш амидопирина и концентрация цитохроьа Р-450 на 22,7 и 42,22 соответственно. Снижение активности ионооксигеназной систеш печени отмечалось и в восстановительном периоде инфаркта миокарда На 21-е сутки ОЯЫ оставались сниженными на 11,2 и 18,92 соответственно скорость И-деметилирования амидопирина я р-гид-роксилирования анилина, а содержание цитохромов Р-450 и Ь5 приближалось к контроля (табл. 1). Изучение фармакокинетики антипирина, нифедипина и диазепаыа в восстановительном периоде инфаркта миокарда показало неоднозначность нарушений элиминации данных препаратов. Наиболее выраженные изменения отмечались в элиминации антипирина, когда на 7-е сутки ОИЫ Т1/2 антипирина удлинялся в 2,5 раза, оставаясь выше контроля на 46 и
11
Таблица 1.
Изменение активности монооксигеназной системы печени в восстановительном периоде после 30-мин тотальной, 2-х час долевой ишемии печени и инфаркта миокарда у кркс
(М + ш, п - 8-12)
Условия Ш. Контроль Восстановительный период, сутки
эксперимента 1-е 3-й 7-е 14-е 21-е
30-мин то- 1 £>¿99+0,06 0,86+0,05 0,65+0,02* 0,62+0,04* 0,68+0,05* 1,01+0,10
тальная ише- 2 2,00+0,13 1,61+0.06* 0,93+0.09* 1,23+0,07л 1,41+0,03* 2,04+0,26
мия печени 3 0,419+0,03 0,28+0,01* 0,17+0,03* 0,16+0,02* 0,20+0,01* 0,36+0,02*
2-х час до- 1 1,09+0,05 0,52+0,04* 0,27+0,03* 0,51+0,09* 0,83+0,08* 0,63+0,07*
левая ише- 2 1,67+0,08 0,91+0,09* 0,60+0,01* 0,93+0,13* 1,31+0,16* 1,29+0,13*
мия печени 3 0,24+0,01 0,15+0,01* 0,11+0,01* 0,26+0,03 0,25+0,03 0,22+0,03
Инфаркт 1 1,07+0,08 0,64+0,02* 0,63+0,03* 0,48+0,02* 0,63+0,01* 1,17+0,01
миокарда 2 1,78+0,04 1,33+0,02* 0,97+0,04* 0,84+0,03* 1,23+0,0?* 1,58+0,02*
3 0,37+0,01 0,24+0,01* 0,17+0,01* 0,14+0,01* 0,25+0,01* 0,30+0,01*
Примечания. Пк. - показатели: 1 - концентрация цитохрока Р-450 (а июлях на 1 иг белка макросом), 2 - скорость Н-деиетширования амидопирина (в нмолях ШЕО за 1 шш на 1 от балка микросом), 3 - скорость р-гвдроксшшрованкя анилина (в нмолях р-амишфгнода за 1 мин на 1 ><г белка микросом). Звёздочка - достоверность различий с соответствуй?^ контролем (Р<0,05).
Таблица 2
вармакогашетика антипирина, нифэдишгна и диазепаиа при остром инфаркте миокарда у крыс (Ы + m, п - 6)
Т1/2 (мин) Контроль (интактнье зкивотные) Яэстинфарктный период, сутки
7-е 14-е 21-е
Антипирин Нифедшшн Диаззпаы 166,5+8,3 30,9+4,2 78,0+28,8 411,4+58,9* 54,3+7,4* ' 58,8+4,8 243,4+18,8* 47,4+10,7 53,4+7,2 203,8+11,3* 53,8+18,3
Цримзчания. Звёздочка - достоверность различий с контролен
Z2Z соответственно на 14-е и 21-е сутки ОНИ Элиминации няфе-дшпша наиболее вьзшэнно замедлялась только на 7-а сутки ОШ, а при изучении фар-пкогашеткки диазепаиа не вытпзпо судэст-венных её изменения в восстановительном периода (табл. 2).
Полученные экспериментальные даиякэ позволяет сделать заключение, что раздкнье по степени тягестн и виду гапоксшгеасю воздействия - обратимая и необратгаэя ивеияп пачоют, инфаркт миокарда вызывают однонаправленные, но неодвозпачннэ для резных субстратов изменения активности гидроксивавных реакций.
Структурные изменения липидиого компонента иикросокэаных ^ иембраи при ишемии печени и инфаркте миокарда таю© тгэли сходный характер и сохранялись более 3-х недель. Причём иэиэнения, происходящие в ранней восстановительном периоде после гнпокси-ческих воздействий (1-3-и сутки после ишешш нечет!,7-14-е сутки после ОИИ) шхно рассматривать как адаптивные. В 1-е сутки после игеыии печени отиэчалось максимальное увеличение индекса насвдэнности лкпидов иикросом (с 0,78 в контроле до 1,5 после игеыии). В этот период увеличивалось относительное содержашгэ пальшггиновой (С18.-0),ыиристиновой (014:0),стеариновой (С18:0) и уызнызалась концентрация олеиновой (С18:1) и арахидоновой (С20:4) кислот. Отмечалось такие существенное ушньшние сродства АШ к ыикросоиальным мембранам и концентрации центров связывания для зонда на мембране, что свидетельствовало об увеличении вязкости неубранных липидов (Heynes D.H. .Staerk Н. ,1974). Аналогичные иаягнения параметров связывания AHD с "ююмяэиро-ванныыи" микросоыами, а также увеличение содержания насыденных
13
гарных кислот в липндах макросом позволяет предположить, что p-закциэй клзтки па киеиичзскод воздействие является "уплотненна" юхйран ЭПР в ранней постшамгаэскхи периоде. В ь'зханиаие позызэниа васкости цикросоур-дных шиЗран основную роль играэт, по-видащаау, утилизация полиненасыщанных гарных кислот (ШШ) в реакциях перекксного окисления ( ПОЛ) ( Бхадтсфов Ю.А. .Арчаков A. JL , 1972, Htehaus V. S., Sanuelsson В. , 1968), интенсификация которых при острой кеэмяи печени показана рядом авторов (Каязе-ха Т.А. и др. ,1974, Еплекка ILE , 1939). Возрастание плотности упахэвки ьэлекул фосфолкшдов в иэ^Зраяах ЭПР является одшы Ез факторов рэгудздии активности перекисных процессов посредством уменьвешя доступности двойных ешаей для кислорода (Вла-дамкров Ю. А., Арчаков A. 5L , 1972, Яахозкч RE а др., 1973). С sïih позеций возникашие структурные перестройки мембран ЗПР в рангиы постшшшческои периоде, очевидно, должны ограничивать иерожидативныэ реакции и повывать тем садам устойчивость ыеб-рааосвяванных фэркенгов к дальнейшему повревдениа Для подт-Еерзденка этого предполоявкия проведено изучение содержания в ыжросоиальной фракции малонсзого диальдегнда ( ЩА), а также устойчивости цитохрома Р-450 к повреждению in vitro при активации НАД®-завйсиюго ГШ. а 3-й сутки постшшыичзского периода исходный уровень ЦДА в шкросошх был в 2 раза ниже контрольного. Скорость образования ВДД в НАД®-зависимой реакции ПОЛ тагаэ снижалась более чем в 2,5 раза Резистентность ыик-росомальных липидов в данном периоде к пероксидации препятствовала значительному повреждению цотохрока Р-450 в НАДФН-зависи-1юй реакции ГОЛ.
Аналогичные нацзненкя липидов микросомальньгх шмбрая отме-чалясь на 7 н 14-е сутки восстановительного периода после ОЖ Taras отмечалось значительное увеличение индекса насиценности к содераанЕЯ васы^кнкх жирных кислот - миристиновой, пентаде-каковой, пальмитиновой. Снижалось сродство АШ к мембране, уиекьаалось сродство цитохрома Р-450 к субстратам 2 типа Скорость образования МДА в НАДФН-вавнсиюй реакции БОЛ на 7-е н 14-е сутки 01-2.5 была достоверно яи«з контроля, йэыбраиы шгк-росом в этот период ОНИ такие находились в состоянии "уплотнения", о чём свидетельствовало повышение их резистентности к вндукцяи НАДШ-зааксишго ЮЛ и предупреждение значительного повреждения цягохрозга Р-450 в этот период. Одоачо "уплотнение"
14
нейбрал ЗПР з результате потери PES унгньпзет из прошарс-шсть для зндогеншл и эрогенных субстратов (Ляховлч ЕЕ и др. ,1373) л является основой нэхгякзш ингибировашп активности ¡/онос iхпгенгзних фер'юнтов в ранней восстановительном периоде пос.г.г кеэмии печени и инфаркта миокарда.
В отдаленные периоды после печени (14-е сутки) и
инфаркта миокарда (21-е сутки) в "лпгодко-ЯврыентЕом кошгексе" ЭПР развивается избиения структуры и функции, оцениваешь нз-ьгл как процесс дезадаптации. В этот период в лилидах кясросои, полученных после игэызм печени и ш«£ар'С?а миокарда, отучалось увеличение пзльмитоленнозой (С1б:1) кислоты, значгггадьээ повивалось сродство ШЗ к ¡дйфосо'зяьеш иаибраизм, зоерздтала скорость образования в реакции НДД-га-зазисюиго ПОЛ. йггсгкй уровень пероксидацяи иикросомальных лкпидоз снягал устойчивость цитохроиа Р-450 к повреядешш при акяшащш ШЛ и 1Щ12-аазиснкых реакциях. 'Язнлыэ изшненкя а лшидцой ссегав£<вдэй |.«еьбраны могао объяснить равуяорядочзваниеы юлекуд мгиЗранша фосфолптидов в результате откечешгаго вьез значительного узэ-личения в их составе доли юяопенасизэшшх nip гак ícícxot п колебания уровня аитиоксидаитов в восстановительном периоде после повреждахнза воздействий (Usda К. е. з., 1983). Это способствует "разрыхгенкп" липидного бисдоя, повшгет дсступяоеть ШЕК для реакций пероксидации (Hateft Y., Honsteln V.Q. ,1970). Преобладание процессов деструкции лнпидшго компонента bsiíípся ЭПР в отдаленные сроки после гияоксического воздействия является одним из препятствий восстановления ¡cat пенасьнзаности 1кпфссс!.'лльпых лнпидов, так и функциональной активности связанных с мембранами ферментов шнооксигеяаэной системы.
Влияние гипобарнческой гипоксии на активность {¡ояооксигзваз у 1срыс с различной устойчивостью к недостатку кислорода
Анализ литературы последних лет показал, что устойчивость организма к неблагоприятным воздействиям определяется генетическими и фенотияическими свойства^! организма (Березовский В. Л. , 1973, Hochachka P. V., 1985). Изучение физиологических и биохимических реша?й1 организма позволило выявить ¡пгрокую га< риабельность устойчивости индивидов к неблагоприятным воздействиям, в том числе и к недостатку кислорода (Берэзовский В. Л., 1978, Лукьянова Л. Д., 1989, Hochachka P. V. , 1986).
15
Кроме того, в литературе г тся сведения об индивидуальной ¡чувствительности и к ряду лекарственных веществ, которая варьирует в широких пределах и зависит cï генетически детерминированной активности микросошльных феркэатов печени (Vesell E.S., 1975, ЗЬлодов ХЕ., Яковлев ЕЕ, 1985). Шскольку окисление ксенобиотиков и эндогенных субстратов протекает со значительными затратами клеткой кислорода (Арчаков А. И., 1975, Brauser В. е.а., 1969, Jones D.P., tesón H.S., 1978, Longmuir I.S. е. a., 1980), то возникает вопрос о соотношении микросошльного и мшрохондриального окисления в условиях гипоксии и о корреляции данных параметров с устойчивостью тетки к недостатку кислорода
В ряде исследований показана взаимосвязь бштрансфорьтции н энергетических процессов в гепатоцигаз при различных воздействиях (Дудчэнко А. И., Лукьянова Л. Д., 1987, Уголев А. Т. и др., 1987, Дудчекко A. U , 1989, Jones 0. Р., 1981). Изучение потребления кислорода и тканевого дыхании у крыс с различной устойчивостью к гипоксии показало, что у ВУ особей потребление кислорода, интенсивность дыхания ткани мозга и печени достоверно шшэ {Курбаков Л А., 1833), расход энергии значительно меныээ (Старых Е. EL . и др., 1991), чем у НУ иивотных. Проведённое нами изучение активности ыонооксягеназ у животных с различной устойчивостью к гипоксии вшвило различия исходной концентрации мик-росоиальных фериентов и их гидроксилазкой активности. Оценка исходной активности ионооксигеназ in vivo показала,что длительность гексеналозого сна у ВУ крыс вьше,чем у НУ крыс (29,7+1,0 шда и 23,0+1,1 шн соответственно, Р<0,001). Скорость элиминации антипирина, крененная по Т1/2 и Ке1 антипирина значительно выше у БУ крыс (табл. 3). Различия исходного уровня функциональной активности шнооксигенаэ наши подтверждение и при изучении ферыэнтоз микросом in vitro - цитохрома Р-450, №. амидо-пир:ш-К-дештилазк, аннлин-р-гидрокснлааы. Цри этом тага» отмечалась более высокая исходная активность ферментов микросом у ВУ к гипоксии крыс (табл. 4).
Таким осЗразоы, изучение монооксигенааньос ферментов печени in vivo в in vitro свидетельствует, что в популяции крьс отмечается внутривидовая вариабельность активности данных фершнтов. Прн атом исходная активность ыонооксвгеназ у крыс с высокой устойчивостью к гипоксии достоверно ниже по сравнению с та-
16
Таблица 3
Изменение фарьикоккнетики антипирина у НУ а ВУ крыс в ответ на острую гипобарическую гипоксию (М + ш, п - 6-12).
Условия Т1/2 С1 Ке1
опыта (мин) (мл/мин) (1/ч)
1. НУ контроль 113,9+4,9 2.6+p.l 0,37+0,02
2. ВУ контроль 131,8+3,2 2,6jp,08 0,32+р,00в
а НУ + ОГ 95,8+4,4 ' 3,0+0,2 0,44+0,02
4. ВУ + ОГ 159,3+6,1 2,0+0,07 0,ЯНр,01
Р1-2 0,001 0,5 .0,01
Р1-3 0.05 0,5 0,05
Р2-4 0,05 0,01 0,01
Примечания. ОГ - острая гипоксия.
КОВОЙ у ЖИВОТНЫХ С НИЗКОЙ УСТОЙЧИВОСТЬЮ К ГИП01ХИ31
Изучение реакции юнооксигеказ на острую гипобар5мескую гипоксия обнаружило,что Т1/2 антипирина у НУ крыс достоверно укорачивался, возрастала константа элиминации препарата Реакция шнооксигеиаэной системы у ВУ крыс характеризовалась, напротив, удлинением Т1/2 антипирина, достоверным снижением показателей клиренса и консгадты элиминации препарата Цри научении аккьа-ности монооксигеназных ферментов in vitro было установлено,что у НУ крыс в ответ на острую гипоксию возрастала концентрация цитохромов Р-450 и Ь5, активность амидопирин-М-деметилазы и анилин- р-гидроксилазы. У ВУ крыс реакции со стороны микросональ-ных ферментов не отметаюсь (табл.4). Обнаруженная диссоциация мээду изменением фарызкокинетикн антипирина и концентрации ци-тохрома Р-450 в ответ на гипоксическое воздействие свидетельствует, по-видимому, с различиях в наборе конституционных форм цитохрома Р-450 в микросоиах НУ и ВУ к гипоксии крас.
Косвенным подтверждением этому предположит служат к экспериментальные данные, подученные каш при изучении метаболизма диавепама з микросомах печени. У ВУ крыз скорость наработки оксазепама и N-десметилдиазепама бьша достоверно выше, чем у ВУ животных. Оценивая профиль метаболитов диазепама было обнаружено, что у НУ животных преобладало образование в микросомах N-десиетйлдиазепама, а у ВУ крыс - 3-гидроксвдиазепама
17
Таблица 4
Изменение -активности юнооксигенаа печени у НУ и ВУ крьс в ответ на острое готоксическое воздействие (М + т, п - 10-17)
Показатель НУ контроль ВУ контроль НУ+ гипоксия ВУ+ гипоксия
Цитохром Р-450 Цитохром Ь5 Амидопирин-Ы- деметилировааие Анилин-р-гид- роксилнрование 0,9340,04 0,62+0,01 2,01+0,04 0,35+0,01 0,75+0,03** 0,56+0,02** 1,65+0,08** 0,31+0,01** 1,24+0,05* 0,87+0,05* 2,90+р, 17* 0,43+0,01* 0,74+0,06 0,51+0,03 1,60+0,11 0,31+0,02
Цримачания. Концентрации цитохромов Р-450 и Ь5 выраазны в талях ва 1 иг белка, скорость Л-деметилирования амидопирина -в июлях БСЮ за 1 иин на 1 ыг белка, скорость р-гидроксилиро-ваниа анилина - в шюлях р-аминофенола за 1 мин на 1 кг белка. Лэстоверносгь различий: две звёздочки - мзаду НУ и В/ контролем, одна звёздочка - с соответствующим контролем (Р<0,05).
Острая гипоксия у НУ крыс вызывала снижение скорости образования 3-гядроксидиазепама, а у ВУ животеых скорость наработки всех метаболитов диааепама значительно возрастала. Однако в ответ на острую гипоксию профиль метаболитов диазепама у ВУ, животных не наменялся, в то время как у НУ крыс отмечалось снижение скорости образования в ыюсросоиах 3-гидроксидиазепаыа, а наработка К-десметилдиазепаыа возрастала (табл. 5).
Адаптация в течение 30 дней НУ крыс сопровождалась достоверным сшиванием концентрации цитохрома Р-450, активности аыи-дояирин-М-дештилазы, аяилин-р-гидроксилазы. У ВУ животных активность юнооксигенаа при адаптации к гипоксии не изменялась. Излученные данные согласуются с результатами Чернобаавой Г.К и .Цукьяновой Л. Д. (1989) показавшими, что адаптируются к гипоксии только НУ животные. Ври анализе профиля метаболитов диазепама у адаптированных к гипоксии крыс также обнаружено, что у НУ крыс он приближался к таковому ВУ неадаптированных животных и в ответ на острую гипоксию не изменялся,как и у ВУ неадаптированные животных. По-видимому, ВУ животные имеют набор конституционных форм цитохроыа Р-450 с высокий сродством к кис-
18
Таблица 5
Влияние острой: гяпобарической гипоксии па ыетаболпаы днааепаш в микросоках печени НУ и ВУ крыс (и + п, п - 6)
Условия опыта Скорость образования метаболитов дказепака
оксазепама З-гидроксидиавепама М-десыетялдиавепака
1. НУ 12,7+1,1 68,7+1,0 72,3+4,8
контроль (9,0) (41Го) (50,0)
2. ВУ 8,9+0,3 64,4+3,3 59,0+1,1
контроль (бГо) (49Го) (4бГ0)
а ну + 11,0+0,5 42,8+4,9 75,1+2,4
гипоксия (9,о) (ззГо) (58,0)
4. ВУ + 11,0+0,9 83,1+4,5 74,8+4,2
гипоксия (?7о) (49,0) (44,0)
Р1-2 0,01 0,5 0,05
Р1-3 0,5 0,05 0,5
Р2-4 0,05 0,01 0,01
Примечания. В скобках - процентное содержанке метаболита диазепама от облиго их количества, принятого ва 100Х (профиль метаболитов).
лороду, что обеспечивает стабильное функционирование системы детоксикации ксенобиотиков в условиях гипоксии, в то время как у НУ крыс недостаток кислорода ведёт к адаптационной перестройке монооксигенавшЯ системы печени (БсЬепктап В. е. а , 1989), . проявляющейся значительным увеличением некоторых изоформ цитох-рома Р-4Б0, что сопровождается повышением потребления клеткой кислорода (1лпгши1г 1.Я е. а , 1980).
Таким образом, вышеизложенное позволяет вакличить, что ци-тохром Р-450-зависимая кислородпоглощаодзя система печени является активным звенои адаптации клетки к недостатку кислорода Важен тот факт, что у части животных эта система, по-видимэму, генетически приспособлена к функционированию в условиях низкого парциального давления кислорода. Проведенный анализ распределения выборок НУ и ВУ крыс по периоду полувыведения антипирина и концентрации цитохрома Р-450 с использованием критерия Колмогорова-Смирнова показал, что существуют достоверные различия (Р(Л) < 0,001) меаду выборками и они относятся к равным
19
2£
зо
20
10
лО
1.
100 120 140 Т1/2 0. 7 О. 9 1.1
[СП
Раз. 1. Гсстограа&а распределения выборки крыс Влетор по периоду полувызедення антипирина (А) и концентрации ьксросо-шльшзго цстохрока Р-450 (Б) (нормальное распределение отвергаемся по критерию Колмогорова-Смирнова, Р(Д) < 0,601).
Обочначзшвг: по оси абсцисс - период полузызедения антипирина (Т1/2, шн) к концентрация датохроыа Р-450 ГСП (в июлях ка 1 иг белка), по оси ордакат - X яквотыых от всей выборки.
распределениям (ркс. 1).
Изучение кирно-кислотного состава липидов микросон не вкн-вп£0 различий спектра жкрньа кислот в микроссмах НУ и ВУ крыс. Однако реакция лкпидяого компонента мембран в ответ ка острое гшюксическое воздействие существенно различалась в группах НУ н ВУ животных. Острая гипоксия у НУ крьк вызывала увеличение сушарвого содержания кеяас шинных жирных кислот, в основном £а счёт арахидоноьой кислоты. Индекс насьазгшюсти снижался до 0,68 против контроля - 0,72 (Р<0,05). В ответ на острую гипоксию у ВУ крыс значительно позывалось сродство АКЗ к мембранам шнросом, что свидетельствовало об их "разрыхлении". У ВУ гсргю, напротив, повышалось содержание в лнпвдах макросом насы-с^шаа лирных кислот - миристиновой и пентадекадовой (табл. 6). Срздстио флюоресцентного аонда АБС к мембране ке изменялось. Сцокяпая реакцию лиззадного компонента мнкрссошльяых мембран гипоксию следует отметить, что увеличение полкненасышрнных жир.чих кислот в ответ на острую гипоксию и "разрыхление" мембраны, иаблидаеыое у Ш яивотяых, является нецелесообразным, так как создаёт предпосылки повышенной повреждаемости мембран свободйораднкагьными процессами,активация которых при гипоксии
20
Б
orise чается рядом авторов (Сутговой Д. А., 1987, Конторг»ягова К. Я, 1992, Shugaley V. S. е. а., 1992). Изучение актизности ПОЛ ь иккросошх у НУ и ВУ крыс показало, что исходная концентрация ЦДЛ в обеих групп яивотпых не различалась, а после острой гипоксии у НУ крыс возрастала в 1,5 раза, а у ВУ - в 1,2 раза Пэвреядаеьюсть иикросо^гааьных дшгадов и цитохрокг Р-450 у НУ крыс при индукции НЛДЗЬзавкскыого ГОЛ Сыяа после воздействия гягоксичесюто фактора значительно визе контроля, тогд?. как у ВУ крыс ке отличалась от него.
Полученные данные свидетельствует о наличии внутривидовых различий срочной адаптационной реакции организма на недостаток кислорода, проявляетейся рэзпонзлразлегашмя гакэнеииями лил ид-ного гаютспентз ¡»-е^Зран ЗПР.
Таблица 6
Иэмэне.чне .-яфно-.глслотного состава дгпидов иккросомальных »Simpan печени у НУ и ВУ крьк в ответ на оструп г ипоСаричо с кую гипоксия (М + ш, п - 7-12).
Гирная кислота
014:0 С15: О С16: О С16:1 С18: О С18:1 И 8:2 С20: 4
Сугг-ia Нас Ж Сумка ПенасКК ИН
НУ контроль
0,11+0,01 О,08+0,01 16,9+1.2 1,7+0,1 23,6+0,6 12,8+0,5 15,9+0.5 25,8+1,2
41,8+1.2 58,2+1,2 0,72
ВУ контроль
0,14+0,03 0,10+0,01 18,3+1,5 2,3+0,3 22,1+1,4 12.6+1,3 15,6+1,0 25,6+1,1
40,6+2,3 59,4+2,3 0,68
НУ +
гипоксия
0,19+0,02* 0,11«Э,02 14,8+1,1 2,3+0,8 21,8+0,9 13,3+0,5 15,7+0,5 31,4+0,9*
36,9+1,9* 53,1+1,9* 0,58
ВУ + гипоксия
0.28¡p,04** 0,20+0.04** 18.5+1,3 4,1+0,6** 22,0+1,9 15,5«. 1 15,1+0,9 23,4+0,9
41,0+2,4 59,0+2,4 0,69
Примечания. Показатели гирных кислот вьграгагкы в процентах. НасКК - касыде иные гзсрны? кислоты, НэкасЕК - кенаеьагэннда кир-квз кислоты. Достоверность различий: одна авёвдочка - с НУ контролем, две звёздочки - с ЕУ контролем (Р<0,05).
21
Повышение устойчивости меток печени к недостатку кислорода фармакологическими средствами Излученные экспериментальные данные показывает тесную связь структуры и функции микросомальной мембраны и возможность модулировать активность монооксигеназ фармакологическими средствами, оказывающими избирательное действие на ферменты (индукторы и ингибиторы иэнооксигеназ) или влияющими на мембравы ЭПР (мембранотропниэ препараты). & этом основании перед нами встала задача разработки подхода к повышению устойчивости клеток печени к недостатку кислорода, основанном на фармакологической регуляции активности монооксигеназ. В основу концепции положены экспериментальные данные об обратной зависимости исходной активности монооксигеназ и устойчивости животных к гипоксии: "медленные "метаболизёры" является высокоустойчивыми, а быстрые, напротив, нивкоустойчивыми к гипоксии.
Проведённое изучение противоишемической и противогипокси-ческой активности фармакологических модуляторов монооксигеназ показало, что индукторы, избирательно повышающие активность микросомальных ферментов и не влияпцие на активность ферментов митохондрий, значительно снижает устойчивость клеток печени к ишеыическоцу воздействию. При предварительной индукции фенобарбиталом и зиксорином обьём некрозов в печени через 24 ч рециркуляции возрастал соответственно в 6,0 и 1,7 раза по сравнению с контрольной группой. При предварительном (до 2-х часовой кюш) введении ингибитора цитохрома Р-450 - 3!<Г-525А образование некрозов в печени через 24 часа рециркуляции умень-аалось в 5,1 рааа по сравнению с группой животных, не получавшее ингибитор (рис. 2).
Изучение противоишемической и противогипоксической активности ыеибранотропных препаратов, в механизме действия которых отмашется их влияние на липидный компонент мембран ЭПР как функционально необходимую составную часть "липидно-ферментного комплекса" млкросом показало, что предварительное (до 60-мин ивемии печени) введение «-токоферола увеличивало выживаемость животных до 73,з* по сравнению с контролем - 45,2Х. Профилактическое введение сб-токоферола совместно с лидокаином увеличиваю выживаемость животных до 87, IX. Комбинированное введение «х-токоферола и лидокаина уменьшало обьём некрозов в печени после 2-1 часовой долевой ишемии в 3,3 раза по сравнению с контро-
22
Уу 60 40 20
А
.А
.31
123 1456?
Рис. 2. Вгиание предварительного введения фармакологических препаратов ка развитие некрозов в ткани печени после ей 2-х часовой долевой игомии.
Шказатели обьёшой плотности некрозов (Уу) выраязны в % от обьёиа ткани печени. Обозначения: 1 - контроль, 2 - фенобарбитал, 3 - акксорхн, 4 - токоферол, 5 - лндохаан, б - тско-ферол+лвдокаяя, 7 - ОТ-525А.
мин-30 •
20 ■
10 •
А
[Ь
м
XX
100
80 40
Б
*
*/—1*
1234 12 4 5 6
Рнс. а Влияние профилактического введения фэрмакологкчэс' кях препаратов на продолжительность ига ни яиеотннх при острой гшгобарической гипоксии (А) и выживаемость после 60-шш тотальной кшмии печени (Б).
Обозначения: 1 - контроль, 2 - токоферол, 3 - лидокаия, 4 -токоферол+лидокаив, 5 - полифенолы кровохлебки, 6 - полифеновы манжетки. * - Р < 0.05.
леи, в то время как введение одного токоферола не оказывало эффекта, а введенкэ вадоканна стоило обьды некротичасяой ткани в органе только на 232. Вводениа токоферола совместно с хидо-каином оказываю вцраданный щютявогшгокеяческяй эффект - вре-
23
мя зиззни яивоткых в условиях гилобарической ГИПОКСИИ (12 ТЬЕЗ. и) возрастало почти в А раза по сравнен® с контрольной группой. Предварительное (до бСНдш ишемии) введение полкфенодоЕ кровохлёбки увеличивало выживаемость животных до 75Х по сравнению с контролем - 42,61. Полифенолы манжетки не оказывали противоише-мического эффекта (рис. 3).
Коррекция активности моиоокснгеназ печени введением
фенобарбитала и виксорина до и после ей ишемии Проведенное исследование свидетельствует, что увеличение мощности монооксигеназ перед киемическим воздействием с целью коррекции нарувений их активности является нецелесообразным. При предварительной индукции монооксигеназ фенобарбиталом и знксориноы динамжа и процент снилеяия активности амидопирин-Н-деметилааы.аншмл-р-гидооксилазы, концентрации цитохрома Р-450 в постншемическом периоде были аналогичными неиндуцироваяным янвотным. Хотя абсолютные цифры активности у индуцированных животных были выаг, но количество разруиенного цитохрома на период его максимального снижения при индукции фенобарбиталом составило 2,61+6,04 ндаль.зиксорином - 1,21+0,03 июль, в контроле - 0,70+0,06 нмэль на 1 мг белка микросом (Р<0,05).
Кэ литературных данных известно, что увеличение мощности макросомалыюй системы сопровождается повышением потребления клеткой кислорода (Ьопекшг I.Б. е.а, 1980). Кроме того, изучение эффэкта индукторов на состав и физико-химические свойства липидкого компонента мембран ЭПР показало, что в ляпидах микро-сом у индуцированных фенобарбиталом и зиксорином крыс значительно увеличивается содержание ненасыщенных жирных кислот -лииолевой и арахидоновой, снижается концентрация насыщенных кислот - миристиновой, пентадекановой, пальмитиновой и стеариновой. Изменения состава ляпидов ведут к изменению физико-химических характеристик микросоиальной мембраны. Увеличивается сродство АНС к мембране, изменяется микровязкость липидного бислоя. Указанные сдвиги способствуют повышенной повреждаемости мэмбран в процессах пероксидации, интенсивность которых значительно возрастает в индуцированных микросомах (Лычко А. П. и др., 1987, Аис1а1г С. е. а, 1978, Опо ^ е. а, 1986).
Таким образом, в условиях дефицита кислорода, в результате его повышенного запроса клеткой и недостаточного поступления
24
Таб-жща 7.
Влияние лечебного введения фенобарбитала и аиксорина на активность шгкросо^шаных ионооксигеназ в восстановительном периода после иеэшш печени (М + т, п - 6-10)
Показатели
Условия эксперимента
Вэсстаковитедьиыа период, сутки
7-е
14-е
21-е
Контроль
Цзтохрсм Р-4Б0
Ацвдопкрнв-Н-де-штилировалие 81 Ашшш-р-гидрок-сшшроваяие
Цитохром Р-4Б0
тотальная ивешга иваиия+фенобарбитал тотальная ишемия ипешга+фенобарбитал тотальная июэмия ишемия+фенобарбитал
0,62+0,04* 2,06+0,16* 1,23+0,07* 3,39+0,21* о,16+0,02а 0,68+0,04*
0,68+0,05* 2,54+0,13* 1,41+0,03л 4,34+0,20* 0,20+0,01* О,76+0,04л
1,01+0,10
3,47+0,27*
2,0440,26
4,92+0,21*
0,36+0,02*
0,72^3.02*
0,09+0,05 (3,80+0,12*) 2,СЮ+р,13 (5,13+0,24*) 0,49+0,03 (1,09+0,03*)
0,51+0,09* 0,83+0.03* 0,03+0,07* 1,09+0,С® 0,84+0,09 1,0110,11 0,91+0,12 (1,61+0,05*) 0,93+0,13* 1,31+0,16* 1,29+0,13* 1,82+0,06 3,24+0,24* 2,78+0,30* 1,97+0,15 (3,67+9,14*) 0,28+0,03 0,25+0,03 0,22+0,01 0.24+0,06 0,50+0,05* 0.39+0,01* 0,40+0,04* (0,73+0,03*) концентрация цитохрош Р-450 в пшлях/ш- белка, скорость Н-деметнлирования амидопирина - в ншлжс ШШАйш/иг белка, старость р-гпдроксняи-ровалая япидиия - в ншллх р-аминофзнода/иин/мг белка ижросоы. ЗгЗздочка - достоверность различна с контра&еи (Р<0,05). В скобках - шгтактяш гиеогнь» + индуктор.
Амидошфин-Н-де-ыеташфоваяпэ Ашшш-р-гидрок-сшгаровагше Примечания.
долевая шэешш иаешга+гиксорин долевая ииеши ивемия+зиксорин долевая ишеыия июеыия+аихсорин Шказателя выражены:
при наши, создаете*; услошгя для активацкл кгьйракоповрегдаа-ejsí процессов, в частности, перэюганого огак^экгл £>твдс2, уровень которого в "кадт&'роъапння" шкросоьзх уха значительно еугэ по сравгешга с изтаспшы. В результате устойчивость клетки к недостатку кислорода оказывается существенно снияэвной.
Использование индукторов е БоестгноЕйтелыгам периоде после кзгигв пзчэшг показало, что фенобарбитал и винеоряп эффективно вооетгтзляезля ешьэвву» атаска» шзфосашхшсс {»¡агентов Зга ка 7-е сутки постшззыггчеосого пгрпода (табл. 7). Kpoi® того, ЕВздаЕкэ югдукяоров в яоеткзшчгскоа периоде способствовало восстановлении в ранако ero сроет уровня ненасыщенных xzip-та ксслог в аяшдая icnqpocoy, что обеспечивает осткиальшгг уоазаш йдкцкоиировашах моноаисигеиаз (Ллхович а Е , Щфлов ЕЕ, 1978, Арчаков A.IL, 1683). Визокая эффективность индукторов яря лэчебном лрхкэкенки сгязала, яо-видкдацг, с их способности сктпзировать процессы регекерацин в печени О'ер&гика JL А., Кскаров DL Г., 1985).
Приведенное кссладоаанкэ позволяет сделать заключение о «гягсосбразпзств коррэкцж: детокввцкругцэй Санкции печени при-шпагкгы индукторов в псстипеикческоы периоде.
Коррокгра активности ютоотоьтеказ печени при ей идзшш
совигстггд прикзнегогеи сс-токофзрола п лидокаина В хирургической практике возникает ситуации, в которых требуется профилактическое использование препаратов с целью предупреждения поврэваешгй печени и развития послгдуЕслх осложнений при вьклвчзвии ей из кровотока (Плакав ЕЕ и др., 1981, 1983, Еэронский Г. Л , 1983. Ray R. А. е. а , 1988).
Изучение згекткого аффекта коьгбинацял токоферол+лидокаин еа издали кгзшш печени in vivo показало, что во все изученные сроки яост5шв1згчэского периода полностью предупреждалось сяи-зэккэ скорость N-демэтклирования амидопирина, сохранялась на исходной уровне концентрация цнтохроиов Р-450 и Ь5, значительно ушаыашгеь карувония гидроксилирования анилина в результате сохранения сродства цэтохроиа Р-450 к данной/ субстрату (табл. 8). Лрк гкпоксической гипоксии комбинированное введение препаратов ушньгало степень вкраязнности ткакеЕУХ реакций, Е^зхгваэшх гипоксией, что проявлялось аре активностью шноокси-геказ печэян ка гипокенчееккй раздракитель.
26
Таблица в.
Влияние профилактического введения номбккацаи ог-токоферол+ладскаак -ла футаэдпопазьнуо активность шнооксигеназной системы печени в постисемическом периода (M + м, п - 6-12)
Показатель Контроль Гр. ВосстанозительпвЯ период, сутки
1-е 3-й 7-г 14-э J 21-е
Цнтохрса Р-4.50 0,99+0,06 1 0,90+0,08 0,6510,02* 0,62+0,04л 0,68+0.05* 1,01+0,10
2 0,82+0,06 1, ОЭтО,09^ 0,90+0, СШ 0,00+0,03;? 1.15+0,15
Цатохром Ь5 0,68+0,03 1 0,Б9+р,02* 0,48+0,02* 0,44+0,01 л 0,65+0, Ol 0,65+0,05
2 0,68+0,00 0,77+0,03;? 0,74+0,04<? 0,73+0,02.? 0,73+0,05.
Аиидопирм i- !<- де- г.ОО+р.13 1 1,61+0,06* 1,05+0,07* 1,23+0,07* 2,04+0,23
сгтшкрование 2 1,02+0,25 1,78+0,13«? i, ааю, 07# l.ssvo.oa? 1,9310,09
áajysra- р- гидрок- 0,49+0,03 1 0,28+0,01* 0,19+0,02* 0,1В+0,02а 0,2010,01 к 0,оэ+О,02«
сзжрсазнве 2 0,32+0,03* 0,31+0,03*/ 0,29+0, 02А# 0,37+0.02^ 0,3710,01л
фаэчаава. Гр. (груши гашотая): 1 - "идиш". 2 - + ехдаа",
* - различая с контролем (кшгшстг» аивокшэ), * - шзздг 1 и 2 грухшмгз (Р < 0.05). йен-1»в*ра«аз цагюрошэ пр^тадака з вшш на 1 tsar белка, скорость агадо-
шгр;аа - в шашзс 13СШ sa 1 ьзн ка i цг беака, старость р-гикрокаиахрокшаа авасаа - а е^одзх гьодзофезоха за i шз eu î » Ca-ssa шкрссоа
Механизм противогипокеического и противоктэмического действия комбинации ввучался в плане влияния их на "липидео-фер-ыентный комплекс" иикроеоы. Введение изучаеных препаратов ин-тактнш животным вызывала перестройку жирно-кислотного состава обсрй фракции лшшдов микросомадьных мембран. Отмечалось су-цэственное увеличение относительного содержания миристкновой, пентадекановой, пальмитиновой. пальИтолеиноЕой жирных кислот. Содержание стеариновой и арахздоновой кислот снижалось, а олеиновой и динолевой оставалось неизменным. Следует заметить, чао перестройка лшшдов происходила таким образом, что степень насыщенности липидной фракции не изменялась в отличие от эффектов при раздельном введении препаратов. Аналогичный эффект оказывала адаптация животных к гипобарической гипоксии, когда в динамике -адаптации (1-14 сутки) отмечалась перестройка жирно-кислотного состава липидов ыикросой, а к концу периода адаптации насыщенность липидного компонента мембран не отличалась от исходной как у крыс общей популяции, так л у НУ и ВУ животных.
Совместное введение препаратов, изменяя структурную организацию "липидно-ферментного комплекса" ЭПР, значительно повывало резистентность клетки к гипоксическому воздействию, что и определяло в последуп^ы характер постгипоксических сдвигов в структуре и функции эндоплаэматического ретикулуда. В постише-мическом периоде нивелировался двухфазный характер ишемических перестроек шпфосоюльных мембран, создавалась достаточно мощная антноксидавтвая защита мембран, препятствующая активации ПОЛ в отдаленные сроки постишеиическрго периода. Сглаживался двухфазный характер изменений НАДК-вависимого ЮЛ и сродства АШ к микросомалъным дамбранаы. Предупреждение ингнбированяя акгиББости иикросомалышх ферментов и, в частности, цитохрома Ьб я связанной с иим десатуразной активности микросом явилось, очевидно, одной иа причин того, что реакция на ишемии со стороны эндоплаз«этических мембран характеризовалась увеличением в 1-е сутки поститеыического периода ненасыщэнности входящих в них липидов. Жирно-кислотный состав липидов микросои уже на 3-й сутки после июмического воздействия возвращался к исходному уровне и показатель соотношения насыщенных и ненасыщенных жирных кислот в последующие сроки постидошгсэского периода не отличав?* от контрольного. Из данных литературы известно, что процесс адаптации клетки к некоторый воздействиям характерна?'
28
ется знатательпш увеличением доли пояасшхэпшг ~гршя гстсдзт в фосфолгшпдяоц коыпопенто ю;.Срал (Ллзгссапдров ЕЯ, 1975). Целесообразность даипоЭ реакцкя icroTicri вгклзчзется в создания предпосылок для богзе егсткзпоа рсЗстн ^'йргпосгязаншх ферментов (Еурлгхова Б.Е н др., 1982), *п*о я обеспечивает адекватность ферментативных реекцка гзпаясщлоз а поркод ргоктя'е-нац: годного поврегщегпэ.
Еаоохелг шяязгое» йгшавягшзьнис соевом юеетки в рапкеи пгрсодэ «оастаЕоагэшга крсвото?» псэголпэ? прэдпоняять, чго> !зхашзм згг-отсого сф$з:ста попагьзупеыя ярзпярзтоз реализуется на урогкв сгггбплизздая измвретмх стругал». струк-
турной пз-peerpoftta, Е0спкжг,г3 а кеабргэтаз .г;"ФОсои прз введении фаркгкогогячгзюяс преизретов и Еоспроэподяг^зЯ г£фокг адаптации (Греков В. И. и др., 1233), гзэгго отпэстя pota фактора, с^ссг?т;г'-."-лго розютвптксстя к гкпоксаческо-
¡•7 воэлоЛетюаа. Вроиэ того, спэф&яшыя для гизогеншя агяиок-оядаитов является тшс-э повкзмя» астшкааааедьвой акгивЕоста лкпндов (Вурлакова S. В. и др., 10С£), а для кзстных анестетиков - стабкапгзшя кзи5раны (Haynas D.H. , Staerk И. ,1974). Однако ыэханизн протнэогкяокснческого лейстигя препаратов реализуется п на уровне регуляции процессов энергообеспечении клет-в экстремальных услошиг. еункцнвжзровагше гепатоцигоз связано с поглощением кислорода не только юггохондриа зьяыи я ихк-росо'шъннм аппаратам:* клетки. В условиях гипоксии активируется и такой ¡с-гслародпотребляюгзй процесс как пвре.чисксе октало-ш;о лкпвдов (Владимиров & А., Арчаков А. И., 1972, Иоятор^зссзз К Е , 1992). В этгпс условиях активность физиологических систем клетки и патологических процессов оказывает суг^ственноэ влтя-н'лз на кислородный регги в тканях. Возиогно возникновение icch-куренции за кислород меяду отеэчэнньмя скстешми его потргбхв-ния (Владимиров Ю. А. , Арчаков А. И., 1S72, Арчаков А. IL , 1Ö73, Грек 0. ?., 1982, Лукьянова Л. Д., Дудте:гко а. iL, 1988, ДУД^гика А. 11, 1989, ßrauser Е э. а , 1969). С этих позиций предло.тэн-ный подход к повшению устойчивости клэткя к гипокеическому воздействию, предполагающий блокирован?® "второстепенных" путей утилизации кислорода и поддеряаяпе высокого уровня штабо-лизна иитохондриальных статей являемся оправданным. Согласно полученным зтоперниентальнш данным, обратимая депрессия росоыелыпа шнооксигеяаа и ингйЗированке ГШ ос-тоюофзродза п
29
хздокагЕСУ в опредзлегшой степени ограничивает расход кислорода в клетка на эти "второстепенные" процессы в условиях гипоксии, что так» способствует повышенна устойчивости клзткн к недостатку кислорода
Коррекция активности юноокскгекаа печени в восстановительном периоде инфаркта ьаокарда биофлавоноидамп В ¡шшической практике часто возникают ситуации, когда про-фзшзктичэское введение препаратов нз ъакэт быть использовано. Такой, наиболее распространенной патологией является острый инфаркт миокарда С уютом возникащст в восстановительном периоде ОШ изменений структуры и функции ЗПР и показанной возможности корригировать возникайте изменения индукторами моноокси-геназ нами также изучалась возможность коррекции активности ■кикросокалышх ферментов растительными полифенольными соединениями. Вибор препаратов быа обусловлен имеющимися в литературе данными о колебании уровня анткоксидантов в печени при космических состоянии (1Ыз К. е.а ,1983, Лукиенко ДЕ и др. ,1991) и наличием у бяофлавовоидов антиоксидантной активности (Бега-сЬа Р. е.а, 1830, Николаев С.Ы., 1883).
Проведенное исследование показало, что введение полифеноль-ннх соединений шягзтки, кровохлёбки и виновника в постинфаркт-еом периоде аффективно восстанавливало активность моноокснге-иазной системы печени, увеличивая содержание цитохрош Р-450 и активность штаболкзш азздолирина и анилина в микросомах печени (табл. 9,10). Наиболее выраженный эффект отмечен у полифе-нольных соединений Еяповннка,которые оказывали индуцирующий эффект на кэгаокскгепазньв фзршнты (табл. 9). Аналогичное действие оказывает рутин и известные шотюксиданты - альфа-токоферол н юнол (Напзу1Ш ¡.V., Иа1г Р. Р. ,1975, Лашнева а а и др., 1985). Изучение лшшдного компонента микросомальных мембран в восстановительном периоде ОШ показало, что полифенолы шиповника не вьшываиг с умственных изменений их жирно-кислотного состава, однако оказывает1 модулирующее влияние на активность процессов пэроксидации липидов микросом, сохраняя во все изу-ченнш горкоды ОШ активность ПОЛ на уровне интактных животных (табл. 11).
Изучэииз всаиоююго механизма активирования монооксигеназ-вых реакций в восстановительном периоде ОШ показало, что по-
30
Те&пща 9
Вдпшшгз лэчобпого пртзеяення поягфсЕолькщ; совдкзганяа пэтовнн-ка та ксвцзшгрзцйя цетохрсшз р-450 и Ь5 а кпфссогзж печеяя криз з язияпъ ягфаргая» {.такпрда (!.! + п, п - 0).
-■ ПЬкззатела .........— Контроль Группа 1Ьст™,':,?п:„?:тН»! дЭ05:0д> сутки
7-е 14-е
Я.(яс'г.,ч?5 Г- '150 1,07+0,03 1 1,0110,04 1,5110, ГОл
2 0, .18+0, сел 0,63+0, 01*
Р 0,01 0,01
Г.тгохроп Ь5 0,03+0,05 1 0,75+0,02 1,03+0,02*
2 0,60+0,02* 0,6510,01 л
Р 0,05 0,01
""л^'г-лтл. Гргг.пп .•"•••г""::!Х: 1 - "•П'/арх? (г/окрда + г:\; "ттозиигг", г - Дзетп^р-
гость г-дзлтек?: ? - 4ч" ггрпг-.'п;, пг-ЗДДО!» - с конт-
ролем - (Р<0,0о). цэтохро'хаа
приведена в юодях ел 1 кг балка кдасросом.
Таблица 10
Ежат« па.та'енозьякх соединений ¡га акгчвяость шс?росс!'ггй!гого ¡»тэЗояанз галщоппр.ша а апшшяа в аооета.то2ктегьксм передо острого ия^аркта ¡ж;гарда у крив (М ¿на, п « 0),
Шказагел* Щйппрат 1 _ пэегод, .сутки
7-е 14-е
А'Л!Д0П!фИН- Н- ЕПЯЮЗЕНК 1,Б2+0,'С7* 2,63+0,03лг
демэта^фоваякз кшгэтка 0,87+0,01* 1,3210,05*
(Контроль - кровохлебка 1,4110, Юл 1,37+0,07
1,78+0,04) рутки 1.3410,05* 1.47+0,11а
инфаркт гтоязрда 0.&4+0.03 1,23+0,01
Ааилш-р- гид- сылозякк 0,28+0,007* 0,41+0,01*
роксклироввике 0,17+0,003* 0,30+0,02
(Контроль - кровохлёбка 0,34+0,03* 0,24+0,01
0,37+0,07) рутет 0,20+0,01* 0,23+0,009
гафаркт шокзрда 0,14+0,004 0,25+0,003
Примечания. Звёздочка - достоверность рампчзй с группой "инфаркт июкарда" (Р<0,05). 31
Таблица 11
Влияние лечебного пришкенил голнфэнолов Еиповпива ка актхяз-пость спонтанного перекшкого окисления липидоз ынкросошлышк 1аэьбран печени крыс в дшаиике инфаркта миокарда (М+га, п - 6).
Условия опыта Группа Шсткнфарктвый период, сутки Контроль
7-е 14-е
Пэлифенолн
шиповника 1 0,061+0,005** 0,074+0,001** 0,074+0,004
Инфаркт
миокарда 2 0.107+0,006* 0,062+0,002*
Примечания. Показатели активности спонтанного ПОЛ выражены в нмоляз ВДА на 1 ыг белка микросом. Достоверность различий: одна звёздочка - с контролем (интактные животные), две звёздочки - между 1 и 2 группами (Р<0,05).
лифенольные соединения при их однократном и хроническом введении интактины животным оказывали ингибируэдий эффект на метаболизм амидопирина и анилина в микросомах, снижали концентрацию цитохрома Р-450. Однако обращает внимание тот факт, что каталитическая активность цитохрома по отношению к амидопирину и анилину значительно возрастала как при однократном,так и при хроническом введении биофлавоноидов. Однократное и хроническое введение биофлавоноида интактным животным снижало исходный уровень процессов липидной пероксидации в микросомах, т.е. изучаемые соединения оказывали действие как типичные антиоксидан-ты. Эффект ингнбирукщэго действия изучаемых соединений на активность моноокснгенаа печени у интактных животных связан, по видимому, как и у известных антиоксидантов с их способностью в больших концентрациях повышать антиокислительную активность липидов, что ив меняет'состав фосфолипидов в сторону повышения их окислхемэстж. Увеличение скорости образования свободных радикалов. при взаимодействии с которыми утилизируется избыток антиоксиданта, возвращает систему на исходный уровень окислительных реакций (Хралова Е Г., 1977). С этим механизмом связано ослабление эффективности антиоксидантов при увеличении их концентрации, вплоть до обратного эффекта (Аристархова С. А. и др., 1974, Заславская Ю.А. и др., 1977, Арапова Е Г., 1982). В
32
условиях та истощения антиоксядантной защиты, наблюдаемого при ивемяи оргатов, введение анткоксидантов оказывает, по-видимому, влияние на структурную организацию мембранных фосфолилидов, определяющих конфор!Ецяонное состояние мембраны, которое регулирует, в свою очередь, свободяорадикальньгэ реакции (Конев С. Е и др., 1982) и каталитические процессы на мембране (0ер1еггв
, 0а11пег а , 1975, КИп?вг V. е.а , 1992). Кроме того, в механизме активации ьзонооксигеназной системы нельзя исключить участие флавоноэдов в переносе электронов в редокс-цепи (Гуляев а Г. и др., 1991).
Тагам образом, полкфенольные соединения эффективно корригируют функциональные сдвиги ЭПР, возникайте в восстановительном периоде ОИЫ, обеспечивая оптимальный уровень метаболизма ¡ссенобиотиков микросомальными ферментными системами.
ВЫВОДЫ
1. Изменения активности ыоноо кс иг е назкых ферментов. эндоп-лазматического ретикулуиа гепатоцнтов после шземии печени и инфаркта миокарда является однотипными, сохраняются на протяяр нии более 3-х недель восстановительного периода и проявляйте.-.
а) енкяэнием показателей элиминации антипирина и нифедипи-на, б) ингибированием процессов микросомального М-деметилиро-вания и р-гидроксилирования, в) снижением концентрации мик-росокзльных цитохромов Р-450 и № и изменением кинетических констант взаи:лодействия цитохрома Р-450 с субстратами.
2. Сшиюкке активности микросомальных ыонооксигенаакых ферментов после ишемии печени и инфаркта миокарда связано с изменением состава и физико-химических свойств лкпидного компонента микросомальных мембран, что выражается:
а) фазным изменением активности процессов липидной пероксн-дации, б) увеличением насыщенных и снижением доли ненасызденкых гарных кислот в липидном кошоненте шыбран в) изменением гидрофобных свойств микросомальных мембран.
3. Реакция монооксигеназной системы печени на острую гипо-барическую гипоксию определяется индивидуальной высокой или низкой устойчивостью животных к недостатку кислорода, которая сопряжена с исходной активностью монооксигеназ: у высокоустойчивых к гипоксии животных активность монооксигеназ значительно ниже, чем у низкоустойчивых.
4. Острая гкпобгрическая гипоксия вызывает активацию кап-;-росомадьных шноокеягеназкых ферментов и перестройку избранных лшгадов в популяции ннзкоустойчивых к гипоксии гашотньк:
а) возрастает скорость ззшшацни антипирина, б) активируется процессы микросокального Н-дештилирования и р-гидрокси-лироваиия субстратов, в) увеличивается концентрами микросо-шльных цитохромов Р-450 и Ь5, г) позьсаегся содержание в ли-пндах макросом ненасыщенных жирных кисло?, д) активируются процессы липидной пероксидащзд.
5. Мэнооксигеназная система и фосфолншдашй компонент мэмб-ран эндоплазматического ретикулуиа гепатощиов у высокоустойчивых к гипоксии кркс остается резистентными к острому гипокси-ческому воздействию.
6. 1Ьноокскгеназная система печени при адаптации к гкпоба-рической гипоксии реагирует изменением функциональной активности в зависимости от индивидуальной устойчивости животных к недостатку кислорода-
а) у нкакоустойчивых крь'е сжкзштся концентрация цктохро-юв Р-450 и Ь5, старость М-деметилазиых к р-гидроксилазных реакций, изменяется характер микросогалыюго гидроксилирования диагепама, б) у г к-? о га у с т о й ч т к крыс моносксигенаакая система печени остаётся резистентной.
7. Фармакологическая регуляция активности ыовоокеигеназной сиотеш с использованием индукторов и ингибиторов микросошль-ного цитохроиа Р-450 существенно изменяет устойчивость клеток печени к гипоксическоиу воздействию
а) предварительная индукция ыонооксигенаа виксориком и фенобарбиталом увеличивает в 1,7 и 6,0 раз соответственно обьём некротической ткани в печени после её 2-х часовой ишемии,
б) предварительное введение ингибитора цитохрома Р-4Б0 -БКР-525А уменьшает обьём некрозов в органе в 5,1 раза.
8. Использование индукторов юнооксигеназ целесообразно в восстановительном периоде после тзешческого воздействия:
а) фенобарбитал и зикеорин способствуют полному восстановлению в ранние сроки поститшческого периода содержания ыик-росоыальных цитохромов Р-450 и Ь5, скорости М-деметилааных и р-гидроксияааных реакций, б) фенобарбитал эффективно восстанавливает в постиоемическом периоде жирно-кислотный состав мнкро-сошльных лилидов.
9. Дрэдварэтельпое совместное введение «¿-токоферола и докаюта вызывает перестройку лшшдкого компонента и цктохроы Р-450-ааз;:с:систеш юнбрая эидоплазкатичэского регикулуш алагогпчяуэ адаптированным к гкпоксин анвотша и оказывает вы-рагзапкЯ лрокЕзоясэизчэскяа и протнвогкпоксичосгай сффэкгк:
а) уиэньпэг в 3,3 раза обьбм некротических изгекений з ткани почэки пос.-о ей 2-х часовой ппэши, б) увеличивает в 4 раза npotn ппзггл гявотякх в условиях ггаюбарачзской гйпсиака, в) предупреждает значительные хзшиеяга еягпвзостн фар'лзптов мо-ноокеигеназко£ скстеш печэш после кгзпгггсгаго и гппокеитос-¡иго есздсйствиД, г) продупрзгдазт озачигельшет пзизкешя состава я фязпко-хаояюекж свойств язпщаого шгдганента i»t#paa зпдоп.тйз:>згкчэского рзтпг-чглуцз в постязэинчэеяои периоде.
10. Пзжфэаогьзш ССЗДКШШ ПШОЕЙЯКа, кровохлёбки н ша-гэтки, оказывая .«-году-тфуггра дсйствез на процзссы яшщдаоа пе-роксэдвигя, з$$9К«вно г-осотаяавляваяг в ПОСТШфарКИГОЫ пэрио» да шетквиееть ферментов кикросо'.альной изнооиеагенззноЛ системы пэчааи.
11. Шг.шзэнкэ эффективности вгг^ты яэчзшг при различных гк-пскспчзсгсо: воздействиях посредством Фчнвкологитасшй регуляют акталЕосгя печеночных ¡якскхзгеназ оифьвает новое перспективное направление для поиска и создапшг протиэоптоюсичйс-гах и протпвогсгэиячэсгаа средств.
СПИСОК
работ, опубдмэваяных по теш диссертации
1. Шарапов RJL , Грек O.P. , Дэлгов А.а Шханизиы повреждения изпоокеигенаэкьк систем печени при тепловой тззмни // ®др-!*ачол. токснетл.- 1SSS. - Т. 49, H 2.- С. 64-68.
2. Eàpaioa ЕИ., Согарчеяко IL А., Грек О. Р., й<урупий В. А., Долгов А. В. Структурно-функциональные аспекты постииеиачоского восстановления зндоплазкмчгоеасой сети гепатоцотов крис // Qlm. зкспэршд. бшл. («д. - 1986. - Т. 101, N 3,- С. 277-279.
3. Литвинов Е С. , Шарапов В. И. , Грек О. Р., йсобеон Г. С. Состояние лизосо;.ального аппарата ишэшзкрованной гоченп // Структура и функция дкзоеси: Тез. докл. 3-го Всесояз. скш.-IL, 1986.- С. 119-120.
4. Яюбсон Г. С. ,Грек О. Р. .Лйтшшов а С., Оэрапоа В. И. Роль
35
лизосом в поддержать гокэостаза оргаяизш // Структура и функция лизосом: Тез. докл. 3-го Всесоюз. сиш. - 11,1983.- С. 2-41-242.
5. Шарапов Е И., Зьзтов А. А. Роль повреждения лзгаидного компонента мембран зндоплазматического ретпкулуиа печени в ин-гкбировании активности кояооксигеназ в постикемичуском периоде // Противогипоксическке свойства ненасыщенных соедш:анкй: Вауч. тр. Новое кб. мэд. инст.- Новосибирск, 1986.- Т. 123,- С. 56-61.
6. Рыбакова Т. к., ВЬрапов Е IL 1йтаболизм ашдопирика и анилина у крьк после гипобарической гипоксии // Протпвопшокск-ческие свойства ненасыщенных соединений: Науч. тр. Бэвосиб. мед. инст. - Новосибирск, 1986. - Т. 123. - С. 72-78.
7. Шарапов В. Я .Грек О. Р. .Долгов A. R Щюфшактика повреждений микросомальных шноо/хигеназ при тепловой ивеции печени раздельным к комбгомровалньм применением «(-токоферола, лидокаи-на и контрикала // (¡¡армакол токсикол. - 1987. - Т. .50, M 2. -С. 107-111.
8. Грек О. Р., Езрапоа В. К. Профилакпка постиземпчосгах нарушений мхкросоьшьного мэтаболиаиа ксекобкотккоз антиоксидаи-таш и иягибитораии фосфовияаэ // Цитохром Р-450 к охрана о.-сру-rawrç?ft среды: Тез. докл. Всесосз. конф. - Новосибирск, 1907. - С. 141.
9. Грек о. Р., З&ратов Я У- Профилактика исгмичзских повреждений ютоогскгеказкой системы печени лидогсаином к л-токоферолам /' йрмакоя. токсикол. - 1987,- Т. 50, N 5,- С. 60-04.
10 Грек О. Р., Шарапов В. И. , Сокирчешсо ÎL А. , Екурупкй Р. Л. г*рсфилактика ос-токоферолом к лидокаиьоы нарушений аетив-HocTi" ютооксигеиазнзй системы и ультраструктуры гепатоцитов пост," острой ипекии печени // Бюл. эксперим. биол. кед. - 1987. -Т. 104, N 12.- С. 669-671.
11. Грек О. Р. , Шарапов В. К. , Рыбакова Т. А. Изменение активности чонооксигенаэной системы печени при различных гипоксических воздействиях // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний: Тез. докл. 1-й Всесоюз. конф. - il , 1988. - С. 35-35.
12. Шарапов В. И. , Сокирченко И. А. , Грек О. Р., Пкурулий Е А. Предупреждение постивеыических структурно-функциональных повреждений печени совместным применением антиоксидантов и ингибиторов '¡осфолипаз // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний: Тез. докл. 1-й Всесоюз. конф.- UL.1988. - С. 145-146.
Шрапов ЕИ., Грек 0. Р., Зыков А. а. Структурные перестройки липидного компонента мембран зндоплазматического ретику-
36
луыа в ранние и отдаленные периоды после вееьяи печени // Вопр. иэд. хиши.- 1988. - Т. 34, N 1.- С. 25-29.
14. Рыбакова Т.Д., Шрзпов RH. Влияние фенобарбитала на активность цикросональпого штаболизка в печени крыс в пости-пэштагскои периоде // Шханкзыы повреждения и регуляцга' восстановительных процессов: Тез. дока. науч. кояф. - ВэЕоекбирск, 1988.- С. 13-14.
15. Грек О. Р., Шрапов В.И., Еьков A.A. Изменения лгпидпо-го кошгонента мккросоиальакх иеибран печени в посткзгшт'йгом периоде при введении х-токюфэрода и лидокаяна // Бспр. изд. химии. - 1988. - Т. 34, M 4. - С. 57-63.
16. Грек О. Р., Вэродин В.Е , Шарапов ЕIL , Зьков A.A., Рыбакова Т. А. вункционяровакне шнооксигеназной скстеку поченз при эксперЕызктальноы инфаркте шокарда // Воя. эксперта. Л пол. 1«д. - 1988. - î. ICO, H 7. - С. 34-37,
17. Грек О. Р., Шрапоз R И., Рыбакова Т. А. Реакция юш-оксигеназиой систеьш печени яа изшяение кислородного рэг^а в тканях // Саршкология и научпо-технический прогресс: Тез. докл. VI Всесохз. съезда фариакол. - Таикект, 1983. - С. 05-95.
18. Рыбакова Т. А., Езрапоз Е И., Зыков А. А., Грек 0. Р., Азовцэв г. Р. ваияпкэ полкфэшлышг кошиексов крогохлЭбкп гэ-карственной и кзнхетки обыкновенной на активность ыпфосоьшь-ных ионоокснгеназ при тепловой кззкаи печаки // Воеыэ лекарственные препараты го растений Сибири и Дальнего Востока: Тсэ. докл. Всесога. конф.- Томск, 1989.- Т. 2.- С. 150-151.
19. Шарапов В. TL , Зыков А. А., Грек О. Р., Азовцэв Г. Р. Пгп-янке биофлавокоидов на активность ^крссоиавьдсЯ моюоясагеЕаэ-ной системы печени //EbBt» лекарственные препараты из рзстеняй Сибири и Дальнего Востока: Тез. докл. Вгесоа когтф. - To«sk. 1983. - Т. 2,- С. 191-192.
20. Рыбакова Т. А., Вйрапов а И., Грэк О. Р. Влияние острей тзтт печени у индуцированных фенобарбиталом крыс на егспгз-ность микросоиалышх ионооксигеназ // IL, 1989. - 12 с. - Дэп. а ВИНИТИ 04.05.89, H 2923-R
21. Шарапов ait, Грек O.P., Зьков A.A. Ейянт а-товоферо-ла и двдекаина на структурно-функцконаганую пэрестройку
ран эндоплаемагического рётякулуш лечэни при шщтаст фенобарбиталом в поститакичэскш периоде // Вопр. цэд. хгвеш,-199а- Т. 36, N 2.- С. 14-18.
22. Е-фШэа Е II , Грек 0. Р., ЦпзюрЗв 0, Е, Со£5$!13КГЧ А. А, Оаредзлзкиг изгаболззоз дееогша как &рш=: СтТ^ВД^аго-вой ашгхяоетя »гжрсссгзшшх £эр»гэнтов печзпк прл агзезрззк-тольеоц шарите шзкзрдг // Актуальна- вопросы кхшкчзйюй «ар1ахогэгша !еа. дай. 15-й И?ед. га>я& - Волгоград, 1СГЭ, -С. 159.
23. Юзршюэ Е К , Зааэз А. А., Грек 0. Р. Еэиэяонке хгзр-ко-к:схогЕого состава' и активности парзк;:онсго окгохекзш яаш-дза 125фосошльагк ьаиЗрая печзмя пря акспериьзятатааш кгфзрк-тз игзкардд // Бха эксперзш. бкол. игд. - 1990. - Т. 110, I? 8. -С. 159-161.
24. Ерздов 2, Н., фев О. Р. Емгзнеша §арьакзкЕветши ан-гаацдоз ер:.' вюл?ре»ашйк воздейвгаых в вгшисяаоетн от устой-чгагоети егютгш к ггао:ссни // ¿кгуальпыо проблзш лекарственно,~ тзкеккодопда Тез. докл. Есесоаз. кэяф. - И, 1950. - Т. 3. -С. 347.
25. Икаров К Е , Езрсшов Е К , Ананьев Е. А., Грек 0. Р., Яаэбоов Г. с. Егагаюривамдаая фркцня квхпочэчааиов и скетеш цяфосошгыюго сютлзпвя поч-зкя у »агатных с различной устой-спзэстьи к гетзккзт // Еазкогэгия и бкознзргеткка гююксяж ?еэ. докл. Есесою. соьзц, - 1£&ск, 1890. - С. То.
25. Глрзяог Е И., Грек о. Р. Надакщуагьгшз разлгчш шетз-пэст»; юноокскгеказЕзД скстеш печзял кр:ю и кх устойчивость к газгссхчесгаА гкбогс&п // Скзгогогал к бшзвергеткка гипоксия: Тез. докл. Есессззз. сое«:; - 1990. - С. 102.
27. Шарапов ЕЯ, Рачзроз В. Е Грек О. Р., Ясобсон Г. С. Реакция эндокринной екстоха и кзконэят карпо-ккслэтного состава лзшцдэз мшфосошдыас изсЗраа у крыс с индивидуальной рз-экетоЕТпостьо к гипоксяк // Игха'жзш патологических реакций: Тез. дога науч. кокф. - НэвокузкецгС, 1991. - С. 225-226.
23. Шчаров Ю. Е , Шарапов ЕII Взашосвязь функщаI иксуляр-ного аппарата и коры надпочэчикков у крыс с различной устойчивостью к гипоксии // Актуальные вопросы обвэй патологии: Тез. докл. науч. конф.- Новосибирск, 1991.- С. 52-53.
29. Шчаров Ю. Е , Шарапов Е И., Грек О. Р. .Якобсон Г. С. Особенности эндокринной регуляции вирно-кислотного состава мембран у кивотвдх с различной устойчивостью к гипоксии // Фармакологическая коррекция гипоксичаских состояний: Иат. 2-й Бсесош. КОЕф.- Гродно, 1991.- Ч. 1.-С. 23-24.
за
£0. Tpin 0. ?. , Гйрглоз В. IL г Пояязхз 11 А., Е. Л.
Влсппте острг.а tsrssTi па фзр^ког^пэгг!? zz:7'~~z"~:i,
глг;о-.!з:гла к л:«геаг:га // гярргспгя гъптг::-
•гопя состспуА: "гг. 2-u Ifccscza. rr-пЛ.- Гро.™о, 1331,- Ч. п. - с. 1сз-:оо.
31. йхрппгз В. 71, Гр?к О. Р. Рога гслеггжггетаз встат» п РГжаг-'Д срггпгск* ¡с пхог-т // Сзгплкзгопгеегга repp cccicrnri: !<жг. 2-Я Вгоссгз. f^nj. -Ч. л - С. КО-С^О.
С2. П^глС-з 11, Фролов , Гг-c-s 0.?., *":~уп-л -1 , Г. С. Птгля;*? tt?jpy?vzut г:гяокз:гп г?з гстузкг^гпй сгз-?уз к гегЕо-^гитлязя **пя зжгро" 7 о глзеги:;.*.
yerctrcners» к // р?акггг1:
¡'яг. Изд. &:3. сбгг пягс^зезл. - 1591.- С. 57-53.
Г2. "т.рзяоз Л. И., Пуйров П. R , Грех О. Р., Сагсся Г. С, кзре-й'.гпаго оккз-эгпп „тягадез !£Пкросо$:з:!*:згз с а гор; опального статуса у ярьэ с различной уптс*":л~ геегью к гкпокспи // Изхагпя?:-« патолзхжэсша psor-ainit: К'™. Ш-эя. С:й. оЗа п&Т0$иэ!Г0Д - Кигутск, 1881.- С. 75.
34. Грек О. Р., Еарапоз В. II Вяпяяке бпофгазонолдса па г\ч~ гнзкость цктохром P-450-е-авнсшяй иикросоиальной спотеш! п?ч?~ кл кркс // Щюблзш клинической к эвеперяузнтальпоЯ шфхло-гки: Узт. науч. кон&- Нзвоенбкрск, 1G92. - Т. 1.- С. 55-Г",
25. гьрапов В. И., Колпзяов $1 А., Грек О. ?. Сармзйоктнт.'*л антипирина и шоииганда у крыо с различной утаоЗчявостьо к псксической птеншш //Шноокеягевазяая система. Теоретике::;::? и прикладяыэ аспекты: Маг. Респ. еккп. - Тапиент, 1932.- С. 20-27,
35. Русакова Т. А., Еараяоз В.IL , Грок 0. Р. Багаж» глдук-цгм зиксоршюм на характер фЕЗюю-хкшческюс яз»®пешй дяппд-яого ¡сокпонекта 1якросо«аяыаа ?»мбран при пзэ&ш дзчэпа // 1Ьноокснгена2ная систем Теоретнчс-снж и прмслзд'-Hi? аспекты: !£и. Респ. cram. - Таэкент, 1992. - С. 78-79.
37. Rybakova Т. А. , Sharspov V. I., Grek О. R. Effoct. of pI>->-ncbarbital and zlxoryn pretreatnsnt on the fluidity of nicror-o-mal rorrbranos and пяггЬгглэ-bound enzyres activity after 1 Jv.-:t tissue iscbomia // Cytochrorra P-4.50: Biochemistry ггк1 Bicf;hy-sics: Proo. 7th Int. Ccnf. - l.bscc*, 1S92. - P. 309-311.
28. RyhrJiova T. A., Shsropov V. I., Grc-k 0. R. Indi-cticn of i!OTco:iysere>S9 systenr before or after llvor ischials?// J. Ete.
39
Clin. Physioi. Pharmacol.- 1992.- Vol. 3, Suppl.- P. 272.
39. Sharapov V.I. , Grek O.R. Cytochrome P-450-substrate interactions under ischemic disorders of lipid component of rat liver microsomal treirfcranes // Cytochrome P-450: Biochemistry and Biophysics: Proc. 7th Int. Conf. - toscov, 1992. - P. 315-317.
40. Sharapov V. I., Kolpakov M.A., Grek O.R., Faibushevich A.A. Comparative activity of antlpyrine, nifedipine and diazepam metabolism in Vistar rats under experimental myocardial infarction// J. Bas. Clia Physiol. Pharmacol.- 1992.- Vol. 3, Suppl.- P. 277.
41. Шарапов В. И., Грек О. Р., Ананьев Е. А., Колпаков М. А. вврмакокинетика антипирина, нифедипина и диазепама при экспериментальном инфаркте миокарда // Вол. эксперим. биол. мед. -1992. - Т. ИЗ, N 4. - С. 381-383.
Подписано к печати 19 марта 1993 года Заказ N Si Формат бумаги 60 х 84 1/16 Обьбм 2 п. л. Тир. 100 экз.
Типография СО РАМН