Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Механизмы терапевтической эффективности цеолитсодержащего трепела на моделях острого токсического гепатита, острого гиперацидного гастрита и язвы желудка

На правах рукописи

КОЛОТИЛОВА МАРИНА ЛЕОНИДОВНА

МЕХАНИЗМЫ ТЕРАПЕВТИЧЕСКОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЦЕОЛИТСОДЕРЖАЩЕГО ТРЕПЕЛА НА МОДЕЛЯХ ОСТРОГО ТОКСИЧЕСКОГО ГЕПАТИТА, ОСТРОГО ГИПЕРАЦИДНОГО ГАСТРИТА И ЯЗВЫ ЖЕЛУДКА

14.00.16 - патологическая физиология

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук.

Москва - 2005

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Чувашский государственный университет им. И.Н. Ульянова» и в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования "Российский государственный медицинский университет"

Научные консультанты:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАМН

Г.В. Порядин доктор медицинских наук, профессор Л.Н. Иванов

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.И. Пыцкий доктор медицинских наук, профессор А.И. Воложин доктор медицинских наук, профессор П.Н. Александров

Ведущая организация:

Российский университет Дружбы Народов

Защита диссертации состоится «_»_2005 г. в_часов

на заседании диссертационного совета Д 208.07.205 в Российском государственном медицинском университете по адресу: 117997, Москва, Островитянова, 1

С диссертацией можно ознакомитьсяв библиотеке университета

г.

Ученый секретарь диссертационного совета, канд.мед.наук, доцент

Т.Е. Кузнецова

1. Общая характеристика работы Актуальность темы. Патологии печени и органов пищеварения являются социально-экономической и клинико-эпидемиологической проблемой здравоохранения всех стран мира (В.В. Чернин, 2000; В.Т. Ивашкин, Т.Л. Лапина, 2001; А.В. Охлобыстин, 2001; В.Г. Радченко с соавт., 2002; В.Т. Ивашкин, СИ. Рапопорт, 2004; M.A.L. Deltenre, 1997; Дж. М. Хендерсон, 1997; P. Malfertheiner et al., 2000; СП. Тревис и др., 2002 и др.).

Как считает Н.А. Агаджанян (1989), в последние десятилетия в связи с общим осложнением антропо- экологической обстановки особенно важное значение приобретают проблемы адаптации и экологии человека. Уровень здоровья популяции во многом определяется эколого-физиологическими особенностями адаптации человека к резко изменяющимся условиям современной жизни. Методология экологических исследований человека, считает он, должна включать и теоретический аспект: изучение физиологических механизмов адаптации к различным природно-климатическим и производственным условиям, моделирование процессов взаимодействия организма человека и факторов среды, а также управления трудовыми ресурсами на основе максимального снижения трудопотерь, обусловленных влиянием на организм факторов окружающей среды.

Первым патогенетическим звеном воздействия химических факторов независимо от химической природы является мембраноповреждающий эффект, сопровождающийся расстройством функции каскада митохондриаль-ных и микросомальных ферментов-оксигеназ, гидролаз, участвующих в де-токсикации и элиминации патогенного начала, а потом следуют остальные процессы, реализуемые на клеточном, органном уровнях и организмом в целом (А.С. Козлюк с соавт., 1987).

По мнению ряда ученых (P.M. Хаитов с соавт., 1998), особое внимание следует уделять хлор- и фосфорорганическим соединениям, составляющим основу ряда пестицидов и гербицидов.

Как отмечает Ю.А. Лысиков (2003), в настоящее время при лечении заболеваний печени получили распространение эфферентные методы терапии, основанные на выведении из организма токсических веществ, ксенобиотиков и продуктов метаболизма, что позволяет уменьшить токсическую и метаболическую нагрузку на печень. Энтеросорбция является наиболее простым, дешевым и физиологическим методом детоксикации организма.

В литературе есть данные о том, что активность искусственных цеолитов (С].; С2, С3) при энтеросорбционной детоксикации опытных животных в эксперименте не уступает активности активированного угля (А.А. Раков с со-авт., 1996). В этой связи нас заинтересовал цеолитсодержащий минерал -трепел Первомайского месторождения Алатырского района Чувашской Республики. По литературным данным, содержание цеолита (клиноптилолита) в данном трепеле составляет 24-30%. Цеолит обладает пористой кристаллической структурой. Благодаря строго определенным размерам пор и каналов цеолиты обладают адсорбирующими свойствами для органических и неорганических веществ, газов и ионообменной активностью.

Ю.Н. Шевченко (2002), исследовал кремнийорганические сорбенты, в том числе энтеросгель и комплексные препараты на его основе для обоснованного применения энтеросорбции в медицине. По его данным энтеросгель, в отличие от известных углеродных энтеросорбентов и высокодесперстных кремнеземов, характеризуются явной селективностью, ибо наиболее активно сорбируют среднемолекулярные токсические метаболиты, практически не связывает электролиты (ионы) и высокомолекулярные вещества (М.в.> 10000). Энтеросгель при внутреннем употреблении проявляет активное детоксирующее действие. Препараты адсорбируют из кишечного содержимого и крови (чрезмембранно из ворсинок слизистой оболочки кишечника) токсические вещества, продукты незавершенного метаболизма, инкорпорированные радионуклеиды, приостанавливает проявление токсикозов.

В литературе появились данные о применении трепела для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (Ж.Х. Васильев с со-

авт., 1998; Л.С. Семенова, 1999; Е.А. Павлова, 1999, и др.). Однако все эти клинические исследования и наблюдения проводились без предварительного экспериментального исследования на подопытных животных.

Следовательно, весьма актуально исследование цеолитсодержащего трепела, как фактора, влияющего на физиологию органов пищеварения и патофизиологию гастритов и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки в эксперименте, тем более, что в России до 1,5 - 5% взрослого населения страдает язвенной болезнью (В.Х. Василенко с соавт., 1987).

В связи с высокой заболеваемостью и смертностью от язвенной болезни, проблема язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки является не только медицинской, но и важной медико-социальной проблемой (П.Б. Кириленко, М.Г. Кириленко, 1989).

По данным В.Т. Ивашкина, СИ. Рапопорта (2004) распространенность болезней органов пищеварения находится на 3-м месте после болезней органов дыхания и кровообращения, при этом выявляется тенденция к их росту, а 60% страдающих этими заболеваниями относятся к лицам трудоспособного возраста.

Цель исследования: целью настоящих исследований явилось изучение сорбционных свойств и механизмов детоксикации подопытных животных цеолитсодержащим трепелом при остром токсическом гепатите, а также изучение механизмов экспериментальной терапии на моделях токсического ги-перацидного гастрита, ацетатной острой и хронической язвы у подопытных животных. Для достижения данной цели ставились следующие задачи.

Задачи исследования:

1. Изучить динамику изменения реактивности морских свинок и показателей внешнего дыхания при пероральном введении цеолитсодержащего трепела гематологическими, биохимическими, ферментологическими, фагоцитарными, функциональными и гистологическими методами исследования.

2. Изучить влияние перорального введения цеолитсодержащего трепела на высшую нервную деятельность, на морфофункциональное состояние

некоторых тканей организма, а также состояния перекисного окисления ли-пидов (ПОЛ) подопытных кроликов.

3. Изучить степень отравления подопытных кроликов при перораль-ном отравлении их четыреххлористым углеродом гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования в качестве контрольной группы.

4. Изучить степень отравления подопытных кроликов при перораль-ном их отравлении четыреххлористым углеродом на фоне перорального введения цеолитсодержащего трепела гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.

5. Изучить влияние цеолитсодержащего трепела на функциональное и морфологическое состояние слизистой оболочки желудка подопытных крыс.

6. Изучить влияние перорального введения цеолитсодержащего трепела на кислотность желудочного сока при воспроизведении острого ацетатного гиперацидного гастрита у подопытных крыс.

7. Изучить терапевтическое действие перорального введения цеолитсодержащего трепела на развитие острой ацетатной язвы желудка по Окабе у подопытных кроликов на фоне контрольной группы.

8. Изучить терапевтическую эффективность ЦТ при лечении экспериментальной хронической язвы желудка по Окабе у подопытных кроликов.

Научная новизна. Впервые в эксперименте исследованы механизмы положительного биологического действия ЦТ на морских свинках и кроликах с применением гематологических, биохимических, ферментологических, функциональных и гистологических методов исследования.

Впервые в эксперименте на кроликах получена модель острого токсического гепатита пероральным введением ССЦ.

Впервые на модели острого экспериментального токсического гепатита подопытных кроликов изучены энтеросорбционные свойства цеолитсодер-жащего трепела и механизмы детоксикации организма.

Впервые в экспериментальной гастроэнтерологии на модели острого токсического гиперацидного гастрита на подопытных крысах изучены механизмы положительного биологического, терапевтического действия ЦТ.

Впервые на модели «ацетатной» острой и хронической язвы желудка подопытных кроликов комплексно изучены механизмы терапевтического эффекта цеолитсодержащего трепела.

Впервые экспериментально показана потенциальная возможность использования ЦТ в клинике для детоксикации организма при отравлениях экзогенными токсическими веществами, в частности и использования в комплексной терапии острого гиперацидного гастрита и язвы желудка.

Внедрение в практику. Изданы монографии: «Цеолитсодержащий трепел в медицине» Чебоксары - 2003, 119 с, «Цеолитсодержащий трепел в гепато- и гастроэнтерологии» Чебоксары - 2004,140 с. По материалам исследований в 2004 изданы Методические указания на кафедре патофизиологии Чувашского госуниверситета «Нарушение секреторной функции желудка при остром гастрите и его экспериментальная терапия». Кроме того, результаты и материалы данных исследований используются в учебном процессе на кафедрах патофизиологии, профилактической медицины и терапии Чувашского государственного университета и на кафедре патофизиологии Российского медицинского университета. Разработанные модели острого токсического гепатита, острого токсического гастрита, язвы желудка используются в экспериментальных лабораториях лечебного факультета Чувашского государственного университета.

Научно-практическая значимость.

- Разработанная нами методика перорального введения четыреххлори-стого углерода позволяет получить модель острого токсического по-

ражения печени, о чем свидетельствуют лабораторные, биохимические, фер-ментологические, гистологические методы исследования и данная методика рекомендуется для разработки экспериментальных методов профилактики и терапии при пероральном поступлении экотоксикантов.

- Цеолитсодержащий трепел рекомендуется для улучшения физиологических показателей лабораторных животных при их содержании в виварии.

- Результаты экспериментального исследования ЦТ на моделях острого токсического гиперацидного гастрита и острой и хронической язвы желудка позволяют рекомендовать его в комплексном лечении больных с гипе-рацидным гастритом и язвенной болезнью желудка в клинике гастроэнтерологии, ибо ЦТ доступное, дешевое и в рекомендуемых дозах, совершенно безвредное средство.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Пятой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2000), на Седьмой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2002), на Научно-практической конференции «Семейная медицина в современных условиях» (г. Чебоксары, 2002), на Восьмой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2003), Девятой Российской Гастроэнтерологической Неделе (г. Москва, 2003), на Втором Международном Симпозиуме «Проблемы ритмов в естествознании» (г. Москва, 2004), на Девятой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2004), на Межрегиональной конференции, посвященной 70-летию кафедр патологической анатомии и патофизиологии БГМУ (г. Уфа, 2004), на Десятой Российской Гастроэнтерологической Неделе (г. Москва, 2004), на III Российском Конгрессе по патофизиологии с международным участием (г. Москва, 2004), на 19-ой Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и патология пищеварения» (г. Сочи, 2004), на X Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2005), на XI Международной конференции «Новые медицинские технологии и квантовая медицина» (г. Москва, 2005).

Положения, выносимые на защиту.

1. Цеолитсодержащий трепел при пероральном его введении в использованных нами дозах интактным морским свинкам, кроликам оказывает положительное биологическое действие, что доказано гематологическими, био-

химическими, ферментологическими, функциональными и гистологическими методами исследования.

2. Данная методика с пероральным введением гепатотропного яда (ССЦ) кроликам вызывает острый токсический гепатит, что подтверждается гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.

3. Пероральное введение ЦТ подопытным кроликам с острым токсическим гепатитом, обеспечивает значительную энтеросорбционную детокси-кацию, что подтверждено гематологическими, биохимическими, ферменто-логическими и гистологическими методами исследования.

4. Пятикратное пероральное введение ЦТ подопытным крысам достоверно снижает развитие острого гиперацидного состояния и гастрита по данным рН-метрии и гистологических методов исследования.

5. Двенадцатикратное пероральное введение цеолитсодержащего трепела подопытным кроликам с острой ацетатной язвой по Окабе у них по биохимическим и гистологическим показателям достоверно снижает степень выраженности перекисного окисления липидов, статистически достоверно снижает выраженность развития язвы и вызывает ускорение заживления экспериментальной язвы желудка, сохраняя явления гастрита.

6. Двенадцатикратное пероральное введение ЦТ подопытным кроликам с хронической язвой желудка по Окабе у них по биохимическим и гистологическим показателям статистически достоверно снижает выраженность перекисного окисления липидов и у всех животных существенно ускоряет заживление язвы до полного формирования слизистой оболочки.

Публикации по теме диссертации.

Материалы диссертации отражены в 32 опубликованных работах (монография - 2, статьи - 20, тезисы - 9, учебно-методическое указание - 1).

Структура и объем диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 7 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и спи-

ска литературы, содержащего 209 отечественных и 51 иностранного автора. Диссертация изложена на 182 страницах машинописи, иллюстрирована 22 таблицами, 16 рисунками и 3 диаграммами.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования Экспериментальные исследования проведены на 130 половозрелых кроликах, массой 2,0 - 3,1 кг, 105 крысах (129-198 гр.) и 53 морских свинках, массой 450-650 г. До начала основных экспериментов, исходя из цели и задач исследования, отрабатывали методику перорального введения на 6 животных. Токсичность трепела исследовалась при пероральном введении 12 крысам массой 140-180 г и 18 морским свинкам в различных дозах.

Моделирование токсического гепатита в эксперименте Проведены две серии опытов по исследованию влияния ЦТ на динамику развития острого гепатита: контрольной серией для 1-й и 2-й опытных серий служила интактная группа кроликов (12 животных). 1-я серия - перо-ральное введение четыреххлористого углерода 14 животным; 2-я серия - пе-роральное введение четыреххлористого углерода кроликам на фоне перо-рального введения ЦТ (16 животных).

Использована модель острого токсического поражения печени на кроликах путем перорального введения Четыреххлористый углерод для этого готовился на оливковом масле в виде 40%-го раствора. Раствор СО4 вводился с помощью специального шприца с удлиненным концом пятикратно, через день, из расчета 1,5 мл/кг массы. На 15-й день животные были забиты. Результаты опытов 1-й серии служили контролем для 2-й серии опытов.

Методы моделирования гиперацидного гастрита и язвы желудка в эксперименте Острый токсический гиперацидный гастрит воспроизводили на крысах 2-й (опытной) серии путем введения через зонд 5%-ного раствора уксусной кислоты из расчета 4 мл/кг массы животного. Через 5 дней производили рН-метрию. 10 животных забиты для гистологических исследований ткани же-

лудка. 1-я серия (интактные крысы) служили контролем для опытов 2-й и 3-й серии опытов. Крысам 3-й серии ежедневно с кормом вводился ЦТ из расчета 1,5 г/кг веса. Через 5 дней производилась рН-метрия, а 10 крыс забиты для гистологических исследований. Крысам 4-й (опытной) серии ежедневно в течение 5 дней перорально вводили цеолитсодержащий трепел из расчета 1,5 г/кг веса с кормом, после однократного введения 5%-ного раствора уксусной кислоты из расчета 4 мл/кг массы животного. Через 5 дней производилась рН-метрия, а 10 животных забиты для гистологических исследований. Забой крыс производился под эфирным наркозом.

Модель хронической ацетатной язвы воспроизводили по Окабе Okabe et. я1. 1971; Л.И. Аруин с соавт. 1976), на кроликах 2-й серии (аппликация ледяной уксусной кислоты к серозной оболочке желудка в течение одной минуты). Биохимические исследования проводились на 12-е сутки после введения ацетата. Животные были забиты на 12-е сутки для гистологических исследований. Кроликам 3-й опытной серии для воспроизведения острой язвы нанесение ацетата на серозную оболочку желудка производилось на фоне перорального введение цеолитсодержащего трепела, из расчета 1,5 г/кг массы животного в течение первых 12 дней. 1-я серия (интактные кролики) служили контролем для 2-й серии опытов. 4-я серия - проведение экспериментальной терапии хронической ацетатной язвы подопытных кроликов по Окабе ЦТ в течение 12 дней (13-24 сутки опытов).

Лабораторные методы исследования

Проводили гематологическое исследование крови путем подсчета абсолютного количества эритроцитов (х1012/л) и абсолютного количества лейкоцитов (х109/л) по известным методикам В.Г. Михайлова, Г.А. Алексеева (1986).

Показатель фагоцитоза в % (процент фагоцитирующих клеток) и фагоцитарное число определяли по стандартной методике (В.А. Берестов, Л.Б. Узенбаева, 1983) с использованием частиц латекса.

Биохимические методы исследования

Определение содержания общего холестерина в сыворотке крови производили методом Илька, основанного на реакции Либермана-Бурхарда (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982). Уровень общего билирубина в сыворотке крови определяли по Ендрашеку, Клеггорну и Грофу (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982).Уровень общего белка в сыворотке крови определяли по Лоури (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982).

Методы исследования ферментов сыворотки крови Активность аминотрансфераз сыворотки крови: аланинаминотрансфе-разы (К.Ф.2.6.1.2.), аспартатаминотрансферазы (К.Ф.2.6.1.1.) исследовалась колориметрическим дифенилгидразиновым методом по Райтману и Френкелю (В.Г. Михайлов, Г.А. Алексеев, 1986). Активность щелочной фосфатазы сыворотки крови (К.Ф.3.1.3.1.) определяли по гидролизу р-нитрофенилфосфата фотометричсским методом Бесселя, Лоури, Брока (В.Г. Колб, B.C. Камышников, 1982). Активность выражается в Е/л, который равен мккат/лх 60, а также нмоль/с-л. Исследования проводились с использованием реактивов фирмы "Лахема", Чехия.

Гистологические методы исследования Гистологические исследования ткани печени проводились после фиксации кусочков ткани печени в 10%-м нейтральном растворе формалина. Парафиновые среды окрашивались методом гематоксилин-эозин и Суданом III (Г.А. Меркулов, 1969).

В гистологических препаратах печени подсчитывали количество дву-ядерных, многоядерных гепатоцитов (в %), и митотический индекс (МИ, в%).

Гистологические исследования ткани желудка у подопытных крыс с воспроизведением острого гиперацидного гастрита производились методом гематоксилин-эозин, методикой гистохимических исследований нейтральных и кислых мукополисахоридов (ШИК - по Mac Manus). Ткань желудка животных с ульцерогенезом по Окабе исследовалась визуально, для чего выделяли желудок, разрезали по большой кривизне, после промывания исследовался с

помощью лупы для обнаружения язвы, измеряли площадь язвы в мм2. Гистологические исследования ткани желудка проводились методом гемотокси-лин-эозин.

Методы исследования перекисного окисления липидов

Перекисное окисление липидов (ПОЛ) у подопытных животных исследовали с помощью биохемолюминометра БХЛ - 06 (Е.И. Кузьмина, с соавт., 1983; Е.И. Кузьмина, с соавт., 1991), а именно, 8 - светосумма, буферная емкость всех имеющихся антиоксидантов; ответная реакция всей антиокси-дантной системы защиты на индукцию процесса ПОЛ; 1тах - значение максимальной амплитуды свечения, отражающее интенсивность процесса ПОЛ; 1тах/8 - коэффициент, характеризующий общую антиоксидантную активность; МДА - малоновые диальдегиды.

Функциональные методы исследования внешнего дыхания морских свинок

Динамику нарушения внешнего дыхания морских свинок исследовали методом «бесконтактной камерной пневмографии», описанным Ю.Н. Успенским (1966, 1971) в нашей модификации.

В своих исследованиях в качестве датчика (вместо электроманометра) мы использовали капсулу Марея и пьезоэлемент. Пьезоэлемент служил преобразователем механических сигналов датчика (капсулы Марея), обусловленных колебанием внутрикамерного давления, в электродвижущую силу (напряжение). Пьезоэлемент широко используется в радиопромышленности, в частности в производстве головки звукоснимателя марки «Урал». Создаваемую или возникающую электродвижущую силу в пьезоэлементе, усиливая, (усилитель ЭЛКАР-2) регистрировали на ЭЛКАР-2 или -6 со скоростью 25 мм/с. Таким образом, одновременно можно было записывать внешнее дыхание у 1-6 животных. В качестве камеры для животного использовались 3 или 4 литровая емкость. Если учесть, что потребление одной морской свинкой массой 250-300 г за 5 мин составляет 30 мл, то животное в течение 1,0-2,0 мин может находиться в камере, не испытывая недостатка и перенасыщенности

Периодически камеру разгерметизировали для восстановления нормального состава атмосферного воздуха.

Чтобы исключить введения поправочного коэффициента в формулу расчета относительного минутного объема дыхания и различного рода искажений, запись дыхания проводилась при строго определенном усилении самопишущего устройства ЭЛКАР-2. При соблюдении этих правил, расчетная формула имеет следующий вид (Ю.Н. Успенский, 1966, 1971)

искомый минутный объем дыхания (%), исходный минутный объем дыхания (%), частота дыхания животного в опыте, W|- исходная частота дыхания животного, Ьг- амплитуда дыхательной волны в опыте - исходная амплитуда дыхательной волны (мм)).

Методы исследования функционального состояния высшей нервной деятельности кроликов

У подопытных кроликов для исследования влияния ЦТ на функциональное состояние высшей нервной деятельности выработали условные рефлексы по двигательно-пищевой методике Л.И. Котляревского (1951) для мелких животных (крыс, мышей), видоизмененной И.Х. Канцеровым (1955) для кроликов. Положительными условными раздражителями служили: звуковой раздражитель (зв.1), световой (свет), а дифференцировочное торможение - на звонок 2-го тона (зв.2). После выработки прочной системы положительных (зв.1; свет) и отрицательных рефлексов (зв.2), выработанных со слухового и зрительного анализаторов подопытным кроликам ЦТ вводился из расчета 1,5 г/кг веса.

Метод внутрижелудочной рН-метрии у крыс

Внутрижелудочная рН-метрия проводилась введенным в полость желудка стеклянным электродом (ЭЛ - 40) с помощью рН-метра («рН 340») под внутрибрюшинным наркозом тиопенталом натрия, в дозе 30 мг/кг массы животного. Для осуществления рН-метрии проводилась верхнесрединная лапа-ротомия, и делался доступ к желудку. Далее проводилась гастротомия в области дна желудка. Вначале проводилось определение базального уровня ки-

слотности желудка, затем внутримышечно вводился гистамин (10 мг/кг массы тела) с последующим измерением величины рН через 5, 15,30 минут.

Методы статистической обработки Весь цифровой материал обрабатывался статистически с использованием компьютерных программ на базе процессора электронных таблиц QWATTRO PRO и Excel на компьютере IBM PC/386 с вычислением критерия Стьюдента и достоверности различий между контрольными и опытными сериями. Вычисляли среднюю арифметическую взвешенную (М), ошибки средней арифметической (m) и коэффициент достоверности (t). Степень достоверности различий показателей определяли в каждой группе по отношению к исходному результату (Р). Результат считали достоверным при Р менее 0,05; 0,01; 0,001.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Биологическая активность цеолитсодержащего трепела в эксперименте на морских свинках

Эксперименты по изучению биологической активности цеолитсодержащего трепела проводились на 29 морских свинках обоего пола, массой 450-650 г. 1-я опытная серия (19 животных). Контролем служили интактные морские свинки (10 животных), содержавшиеся в аналогичных условиях, что и опытные морские свинки.

Исследование гематологических и фагоцитарных показателей У морских свинок данной серии опытов абсолютное количество эритроцитов составило что практически не отличается от аналогичного показателя интактных животных, хотя имеет некоторую тенденцию (3,64%) к увеличению. Если абсолютное количество лейкоцитов интактных животных составляло то у морских свинок данной серии составило что на 7,74% больше, чем аналогичный показатель интактных животных. При этом показатели неспецифической резистентности организма (показатель фагоцитоза, фагоцитарное число) составляют соответственно: 40,83± 1,16; 2,99+0,19, т.е. выше на 3,76% и 14,55%,

чем у интактных морских свинок. У опытных животных весьма существенны индивидуальные колебания фагоцитарной активности лейкоцитов, что свидетельствует об особенностях индивидуальной неспецифической реактивности и резистентности организма. Известно, что фагоцитарная активность -один из основных защитных антиинфекционных механизмов организма.

Следовательно, пероральное введение цеолитсодержащего трепела вызвало некоторую тенденцию лейкоцитоза, тогда как общее количество эритроцитов практически не отличалось от показателя интактных морских свинок. Незначительное увеличение фагоцитарной активности лейкоцитов можно рассматривать в прямой зависимости от незначительного лейкоцитоза с одной стороны, с другой - как механизм улучшения фагоцитарной активности лейкоцитов под действием трепела.

Биохимические показатели сыворотки крови Уровень общего белка в сыворотке крови у животных данной серии опытов составил 59,7+0,67 г/л, что на 1,87% выше, чем у интактных морских свинок. Данная тенденция, возможно, объясняется стимулированием биосинтеза белков под действием трепела.

Содержание общего билирубина, если у интактных морских свинок составляло 8,4110,56 мкмоль/л, то у животных данной опытной серии оказалось на 7,73% ниже, чем у интактных животных.

Таким образом, тенденция к увеличению общего белка, вероятно, свидетельствует о стимулирующей активности биосинтеза белка, об улучшении обменных процессов белка, а несколько сниженный уровень общего билирубина является показателем улучшения функционального состояния печени.

Исследование ферментов сыворотки крови У животных данной серии содержание АлАТ составило 264,95 ±9,87 нмоль/с-л, что практически в пределах показателей нормы, составляющей 273,76+10,29 нмоль/с-л. Содержание АсАТ равно 104,25+5,50 нмоль/с-л, против аналогичного показателя у интактных морских свинок, составляющего 119,06+7,44 нмоль/с-л, что на 14,20% меньше, чем в норме. Как видно из этой

же таблицы, содержание щелочной фосфатазы составило 21,27+2,37 Е/л, что также имеет тенденцию к снижению (на 6,35%) по сравнению с аналогичным показателем интактных животных - (22,71 ±2,31 Е/л).

Следовательно, у животных данной серии, которым вводился цеолит-содержащий трепел, наблюдалась тенденция к снижению уровня ами-нотрансфераз и щелочной фосфатазы. Можно предположить, что содержащиеся в трепеле цеолиты адсорбируют ионы тяжелых металлов, и, сорбируя, выводят из организма различные яды и токсины кормового рациона снижая таким образом естественную нагрузку на печень и улучшая морфофункцио-нальное состояние печени исследованных животных.

Исследование внешнего дыхания Исследования внешнего дыхания, проведенные на интактных морских свинках до начала введения ЦТ, показали следующие результаты: частота дыхания в минуту в среднем 101± 1,72, глубина дыхательной волны -8,44±0,47 мм, относительный минутный объем дыхания (ОМОД) 100%, отношение вдоха и выдоха 1:1,59±0,04. При этом, ритм дыхания колебался в пределах 80 - 120 в минуту, глубина дыхательной волны - от 5 до 14 мм, отношение вдоха к выдоху - от 1:1,4 до 1:1,9.

После 3-го введения ЦТ ритм дыхания в среднем составил 101± 1,97, глубина дыхательной волны - 8,63±0,63 мм, отношение вдоха к выдоху составило 1,6±0,05, ОМОД - 100,5±2,73. Следовательно, после 3-го введения ЦТ динамика внешнего дыхания подопытных морских свинок существенных изменений не претерпела. После 8-го введения ЦТ ритм дыхания животных в среднем составил 101±2,23, глубина дыхательной волны 8,13±0,23 мм, отношение вдоха к выдоху составило 1,61 ±0,06, а ОМОД составил 104+3,71.

Таким образом, как после 3-го введения, так и после 8-го введения ЦТ динамика внешнего дыхания подопытных морских свинок достоверных изменений не претерпела. Параметры внешнего дыхания свидетельствуют о

том, что ЦТ не оказывает отрицательного воздействия на внешнее дыхание подопытных морских свинок.

Гистологическое исследование Гистологическое исследование ткани печени не выявило отклонений в структуре ткани от таковой интактных морских свинок. Дольковая структура ткани печени сохранена, портальные тракты узкие, клеточных инфильтраций не обнаружено.

БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ ЦЕОЛИТСОДЕРЖАЩЕГО ТРЕПЕЛА В ЭКСПЕРИМЕНТЕ НА КРОЛИКАХ

В предыдущей серии на морских свинках была изучена биологическая активность ЦТ по гематологическим, фагоцитарным, биохимическим, функциональным и гистологическим показателям. Однако из-за отсутствия адекватного метода было невозможно исследование влияния цеолитсодержащего трепела на функциональное состояние ВНД морских свинок. В связи, с чем опыты проводились на кроликах.

Исследование высшей нервной деятельности подопытных животных Латентный период условных рефлексов на звонок 1-го тона составил 11,2 сек. (1,1 ±0,012), латентный период условных рефлексов на свет был равен 2,2-3,4 сек. (2,92±0,07), что является свидетельством правильных силовых взаимоотношений между сильным и слабым раздражителями. При этом установилась абсолютная дифференцировка на звонок 2-го тона. После такого закрепления положительных пищевых условных рефлексов исследовалось влияние ЦТ на высшую нервную деятельность подопытных животных. На 3-й день исследования латентный период условных рефлексов на звонок 1-го тона составил 1,087±0,012 (1-1,2 сек.), латентный период условных рефлексов на свет составил 2,88±0,07 (2,2-3,4 сек.). На 7-й день латентный период условных рефлексов на звонок-1 был равен 1,08+0,012 (1-1,2 сек.), а на свет составил 2,88±0,075 (2,3-3,4 сек.).

Исследования в течение 12 дней показали, что нарушений условно-рефлекторной деятельности у опытных кроликов не происходило. Не отмечены удлинения латентного периода на звонок 1-го тона: он колебался от 1,01,2 сек., а латентный период условных рефлексов на свет колебался в пределах 2,2 -3,4 сек.

Следовательно, использованный нами цеолитсодержащий трепел в эксперименте на кроликах не оказал отрицательного влияния на условно-рефлекторную деятельность животных.

Гематологические показатели также не претерпели каких-либо заметных изменений после введения цеолитсодержащего трепела подопытным кроликам. Если до начала введения цеолитсодержащего трепела содержание абсолютного количества эритроцитов составляло то после

введения трепела составило 5,60х1012/л±0,12. Абсолютное количество лейкоцитов до введения цеолитсодержащего трепела было равно а после введения трепела -

Следовательно, абсолютное количество лейкоцитов и эритроцитов у подопытных кроликов введением ЦТ, по сравнению с контрольной группой статистически достоверных изменений не претерпело. Результаты, полученные на морских свинках при исследовании биологической активности трепела, нашли подтверждение в результатах данной серии опытов на кроликах.

По данным А.Н. Тарасова (2000), проводившего токсикологические исследования препаратов трепела «Пермаит» и «Пермамик» не обладают токсическими, кумулятивными, раздражающими свойствами и в соответствии с классификацией химических соединений по ГОСТ 12.1.007.76 относятся к четвертому классу.

Исследование перекисного окисления липидов

По данным ряда авторов (В.А. Барабой с соавт., 1991; Ch.B. Stubbs, A.D. Smith, 1984; R. Demling, С. La Londe, 1990; В.Г. Зайцев, 2000), перекис-ное окисление липидов является важным физиологическим процессом в организме млекопитающих. Через стадию перекисных производных полинена-

сыщенных жирных кислот в организме осуществляется синтез эйкозаноидов, а также некоторых стероидных гормонов. Продукты ПОЛ играют существенную роль в процессах клеточного деления, регуляции морфофункцио-нального состояния цитоплазматических мембран клеток (В.Л. Семенов, 1989; Л.В. Деримедведь, 1998; G.W. Bulkley, 1983; L. Mamett с соавт, 1985) и фагоцитоза (А.Н. Маянский, 1989; Т. Tono-Aka с соавт., 1983; R.E. Ratich с соавт., 1987; S. Ресаг, 1991; Larvkin, 2003).

У кроликов контрольной серии (интактных кроликов) уровень общих липидов составил 3,31+0,337 г/л, общего холестерина 1,91+0,087 ммоль/л, буферная емкость всех имеющихся антиоксидантов (S) - 47,76± 1,705 mV*ceK., интенсивность процесса ПОЛ (Imax) 5,65+0,184 mV, отношение Imax/S было равно 0,11+0,001, а МДА составили 2,52±0,173 мкмоль/л.

У подопытных кроликов с введением ЦТ уровень общих липидов составил 3,05+0,581 г/л, общего холестерина 1,32+0,231 ммоль/л (р<0,05). А буферная емкость всех имеющихся антиоксидантов (S) составила 49,46+1,019 mV*ceK., Imax (интенсивность процесса ПОЛ) составила 5,44+0,262 mV, отношение Imax/S было равно 0,13+0,004; МДА составляли 2,85+0,343 мкмоль/л.

Таким образом, пероральное введение ЦТ подопытным кроликам данной серии привело к незначительному снижению общего холестерина. Показатели буферной емкости антиоксидантов, интенсивности процессов ПОЛ, коэффициента, характеризующего общую антиоксидантную активность и малоновые диальдегиды не отличались от показателей интактных кроликов, что свидетельствует об отсутствии у подопытных кроликов данной серии каких-либо воспалительных, деструктивных процессов в результате перораль-ного введения цеолитсодержащего трепела. Как известно, в нормальных условиях (О. Niemela et al., 1995) в клинике сохраняется равновесие между уровнем свободнорадикального окисления и активностью антиоксидантных систем.

Гистологическое исследование

Слизистая желудка подопытных кроликов с введением ЦТ обычного строения, покровная выстилка представлена цилиндрически-кубическим эпителием. Встречались отдельные скопления лимфоцитов и эозинофилов.

Ткань печени обыкновенной структуры, гепатоциты без изменений, около желчевыводящих протоков и сосудов встречались клетки Купфера и небольшие очаги лимфоцитов.

Процентное содержание одноядерных гепатоцитов в препаратах печени составило 82,10±0,048, дву- и многоядерных гепатоцитов - 17,90±0,048, а у интактных кроликов аналогичные показатели составили соответственно: 83,75±0,938; 16,25±0,938. При этом МИ составил 0,21±0,015, что недостоверно отличался от аналогичного показателя интактных животных (0,19±0,013). По данным Б.Н. Кудрявцевой с соавт. (1982), у здоровых людей количество (в %) одноядерных гепатоцитов составляет 88%, двуядерных 9% и трехядер-ных 3%.

Таким образом, количество (в %) одноядерных и дву- и многоядерных гепатоцитов печени у животных с введением цеолитсодержащего трепела практически не отличалось от аналогичных показателей интактных кроликов.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ТОКСИЧЕСКОЕ ПОРАЖЕНИЕ ПЕЧЕНИ У КРОЛИКОВ ПЕРОРАЛЬНЫМ ВВЕДЕНИЕМ СС14

В данной, 1-й серии опытов (14 животных), на модели экспериментального острого токсического поражения печени кроликов с 5-кратным введением ставилась задача изучения нарушения обменных процессов в организме и морфо-функциональных изменений в печени. Контролем служили интактные кролики (12 животных).

Исследование гематологических показателей

У кроликов при остром токсическом поражении печени наблюдалось статистически достоверное уменьшение абсолютного количества эритроцитов и достоверное увеличение абсолютного количества лейкоцитов по сравнению с показателями до начала опытов. Так, если у интактных кроликов аб-

солютное количество эритроцитов составляло то у живот-

ных 1-й серии на 15-й день опытов составило 4,44х1012/л±0,11 (р<0,001). Абсолютное количество лейкоцитов у интактных кроликов составило 6,85х109/л±0,13, а у подопытных животных 1-й серии на 15-й день исследования - 9,73х109/л±0,16(р<0,001). По данным Д.И. Гольдберг, Е.Д. Гольдберг (1973), содержание абсолютного количества лейкоцитов у кроликов составляет 5,44х101г/л±0,05, а абсолютное количество эритроцитов (табл. 1).

Таким образом, 5-кратное пероральное введение сопровождается

выраженной, статистически достоверной эритроцитопенией, а также статистически достоверным лейкоцитозом. Полученные результаты свидетельствуют о выраженном воспалительном процессе в организме и значительном угнетении эритроцитопоэза.

Биохимические показа! ели сыворотки крови

У кроликов данной серии при остром гепатите на 15-й день опытов имело место статистически достоверное уменьшение общего билирубина, что свидетельствует о значительном угнетении морфофункциональной деятельности печени. Если до опыта содержание билирубина составляло 8,3±0,21 мкмоль/л, то на 15-й день опытов составил 16,5±0,71 мкмоль/л (р<0,001). Исследование биохимических показателей сыворотки крови кроликов в динамике опытов показали значительное нарушение в белковом обмене. Так, до опыта содержание общего белка у кроликов составляло 67,67±0,18г/л, а на высоте эксперимента (на 15-й день опытов) уровень общего белка снизился до 45,5±0,61г/л (р<0,001) (табл. 1). По данным Д.И. Гольдберг, Е.Д. Гольдберг (1973) содержание общего белка у здоровых кроликов составляет 7,27±0,16 г/%.

До опыта содержание альбумина сыворотки крови кроликов составляло 56,25±0,26%, на 15-й день опытов снизился до 41,02±0,56% (р<0,001) (табл. 1).

Содержание общего холестерина у интактных кроликов составляло 1.42+0,008 ммоль/л, а у животных 1-й серии на 15-й день эксперимента -1,04+0,02 ммоль/л (р<0,001) (табл. 1). Такое достоверное снижение холестерина у кроликов при 5-кратном пероральном введении свидетельствует о резком нарушении функции печени в липидно-холестериновом обмене.

Следовательно, достоверное снижение общего белка, альбуминов, общего холестерина и достоверное увеличение общего билирубина у кроликов в динамике опытов свидетельствует о выраженных морфо-функциональных нарушениях печени при данной методике воспроизведения острого токсического гепатита.

Исследование ферментов сыворотки крови

У подопытных кроликов данной серии при остром токсическом поражении печени имело место статистически достоверное увеличение ами-нотрансфераз (АлАТ, АсАТ). Так, у интактных животных содержание АлАТ составляло 139,2± 1,63 нмоль/с-л, содержание АсАТ - 74,0±3,49 нмоль/с-л, на 15-й день опытов отмечено статистически достоверное увеличение активности АлАТ и АсАТ: активность АлАТ составила 1114,88+38,67 нмоль/с-л (р<0,001); активность АсАТ- 514,3±29,53 нмоль/с-л (р<0.001) (табл. 1).

Таким образом, показатели исследованных трансаминаз (АлАТ, АсАТ), а именно статистически достоверное повышение их активности свидетельствуют о значительной степени повреждения гепатоцитов и клеток ряда органов подопытных животных при пероральном введении гепатотропного яда

СС14.

Исследование перекисного окисления липидов

У подопытных кроликов данной, 1-й серии с острым токсическим гепатитом буферная емкость всех имеющихся антиоксидантов (8) составила 89,022±0,07 (р<0,001), 1тах - интенсивность процесса ПОЛ составила 12,4510,03 (р<0,001), отношение 1тах/8 было равно 0,13+0,0003 (р<0,001), а МДА составляли 5,82±0,04 (р<0,001), что достоверно отличалось от показателей ПОЛ у интактных кроликов (табл. 1, диаграмма 1).

Таким образом, у подопытных кроликов 1-й серии имело место достоверное компенсаторное повышение буферной емкости всех имеющихся ан-тиоксидантов (8), как ответная реакция всей антиоксидантной системы защиты на индукцию процессов ПОЛ, ибо достоверно выше оказалась интенсивность процесса ПОЛ (1тах, 1тах/8, МДА). Все это свидетельствует о выраженных деструктивных процессах.

Гистологическое исследование Результаты гистологического исследования печени кроликов данной серии опытов показали паренхиматозную крупнокапельную жировую дистрофию с очагами кистообразования. В увеличенных гепатоцитах обнаруживались митозы и отдельные клетки с дегенеративными ядрами. Отмечались холестазы. В портальном тракте, реже - внутридольковой строме выявлялись многочисленные круглоклеточно-макрофагальные инфильтрации. Отмеча-■"»свк пролиферация звездчатых ретикулоэндотелиоцитов. Окраска Суданом 1 вым позволила обнаруживать в цитоплазме гепатоцитов оранжевые су-

данофильные отложения.

Отмеченные гистологические сдвиги в печени подопытных кроликов, перорально отравленных СС14 соответствовали гистологической картине печени, описанной рядом авторов при других методах воспроизведения острого токсического гепатита (В.В. Волошин, 1995; Л.М. Яковлева, 1997-1999).

В препаратах печени подопытных животных данной серии количество (в %) одноядерных гепатоцитов составило 90,18±0,861, что статистически достоверно (р<0,01) больше, чем у интактных животных (83,75±0,938). Количество (в %) многоядерных гепатоцитов составило 9,25±0,970, что статистически достоверно (р<0,01) меньше, чем у интактных животных (16,25±0,938). При этом митотический индекс (МИ, в %) составил 0,109±0,010, что также статистически достоверно отличалось от такового ин-тактных кроликов (0,195±0,013).

Следовательно, у животных 1-й серии с введением тетрахлорметана (ССЦ) токсическое поражение печени сопровождалось достоверным сниже-

нием дву- и многоядерных гепатоцитов, а также достоверным уменьшением МИ (р<0,01). По данным СИ. Павлович (2004), токсический гепатит у мышей сопровождался паренхиаматозной дистрофией, нарушением сосудистых стенок, периваскулярным отеком, снижением количества двуядерных и многоядерных гепатоцитов, а также уменьшением МИ (р<0,05).

ОТРАВЛЕНИЕ КРОЛИКОВ ПЕРОРАЛЬНЫМ ВВЕДЕНИЕМ СС14 НА ФОНЕ ПЕРОРАЛЬНОГО ВВЕДЕНИЯ ТРЕПЕЛА В эксперименте на 16 кроликах (2-я серия) массой 2,0-3,5 кг, исследовали энтеросорбционные, детоксикационные свойства ЦТ в условиях перо-рального отравления кроликов. С этой целью, животным ежедневно вводили ЦТ из расчета 1,5 г/кг массы, на фоне которого, пятикратно, через день пе-рорально вводили из расчета 1,5 мл/кг массы.

Исследование гематологических показателей

Абсолютное количество эритроцитов подопытных кроликов на 15-й день опытов составило (р<0,001), при соответствующем по-

казателе у кроликов 1 -й серии -

Абсолютное количество лейкоцитов у подопытных кроликов данной серии составило что по сравнению с аналогичным показате-

лем животных 1-й серии оказалось статистически достоверно ниже -

(табл. 1).

Таким образом, достоверная разница в количестве эритроцитов и лейкоцитов у животных данной серии опытов свидетельствует о значительно меньшем общем отравлении подопытных кроликов по сравнению с 1-й, контрольной серией и является доказательством детоксикационных свойств ЦТ в динамике проведенных экспериментов.

Биохимические показатели сыворотки крови Содержание общего билирубина на 15-й день опытов у животных 2-й серии составило 12,09+0,34 мкмоль/л, тогда как у животных контрольной, 1-й серии была статистически выше (16,5+0,71 мкмоль/л, р<0,001). Содержание холестерина составило 1,17+0,02 ммоль/л, что статистически выше, чем

у животных 1-й, контрольной серии (1,04+0,02 ммоль/л р<0,001). Уровень общего белка у животных данной серии был равен 55,91+0.64 г/л, что достоверно выше (р<0,001), чем у кроликов контрольной серии (45,5+0,61 г/л). Если содержание альбумина у животных контрольной серии составило 41,02+0,56 %, то у животных 2-й, опытной серии - 53,05+0,56 % (р<0,001) (табл. 1).

Следовательно, у подопытных кроликов, отравленных пероральным введением СС14 на фоне перорального введения ЦТ токсическое поражение печени по биохимическим показателям выражено значительно в меньшей степени, чем у животных 1-й, контрольной серии.

Исследование ферментов сыворотки крови

У кроликов 2-й серии опытов содержание АлАТ составило 581,91 + 12,53 нмоль/с-л, что достоверно ниже аналогичного показателя у кроликов 1-й, контрольной серии - (1114,88+38,67 нмоль/с-л). При этом активность АсАТ у животных данной серии составила 176,08+9,66 нмоль/с-л, что статистически достоверно (р<0,001) ниже, чем у кроликов 1-й, контрольной серии - 514,3±29,53 нмоль/с-л (табл. 1).

Такая динамика активности аминотрансфераз является свидетельством того, что при пероральным введением СС14 происходит общее отравление организма, токсическое поражение печени и ряда других анатомо-функциональных систем. Использование ЦТ привело к статистически достоверно низкому показателю АлАТ и АсАТ, что свидетельствует об энтеро-сорбционной и детоксирующей активности трепела по отношению к СС14.

У животных 1-й, контрольной серии активность щелочной фосфатазы составила 1046,6+52,47 нмоль/с-л, а у подопытных кроликов данной серии, этот показатель составил 682,0+20,07 нмоль/с-л (р<0,001) (табл. 1).

Таким образом, показатели активности аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ) и щелочной фосфатазы у кроликов 1-й, контрольной и 2-й серии опы-

тов (пероральное введение СС1.( на фоне перорального введения ЦТ) свидетельствуют об энтеросорбционном и детоксикационном свойствах ЦТ.

Таблица 1.

Гематологические, биохимические и ферментологические показатели и показатели ПОЛ у интактных и подопытных кроликов 1-й (пероральное введение СС1д) и 2-й серий опытов (пероральное введение ССЦ +ЦТ)

№ Показатель Интактные кролики (п=12) 1-я серия (п=14) 2-я серия (п=16)

1. Количество эритроцитов, х1012/л 5,41х10'2/л10,08 4,44х1012/л±0,11 (р<0,001) 5,04х10|2/л +0,04 (р<0,001)

2. Количество лейкоцитов, х109/л 6,85х107л ±0,13 9,73x109/л +0,16 (р<0,001) 8,25x10ч/л 10,12 (р<0,001)

3. Общий белок, г/л 67,67±0,18 45,5±0,61 (р<0,001) 55,9110,64 (р<0,001)

4. Общий холестерин, ммоль/л 1,24±0,008 1,0410,02 (р<0,001) 1,1710,02 (р<0,001)

5. Общий билирубин, мкмоль/л 8,3 ±0,12 16,510,71 (р<0,001) 12,0910,34 (р<0,001)

6. Альбумин, % 56,25+0,26 41,02±0,56 (р<0,001) 53,0510,56 (р<0,001)

7. АлАТ, нмоль/с'л — 1114,88138,67 581,91112,53 (р<0,001)

8. АсАТ, нмоль/с-л — 514,3129,53 176,0819,66 (р<0,001)

9. Щелочная фосфа-таза, нмоль/с-л — 1046,6152,47 682,0120,07 (р<0,001)

10 8, шУ*сек 47,76± 1,705 89,0210,73 (р<0,001) 66,8011,233 (р<0,001)

11 1шах, шУ 5,65+0,184 12,45+0,033 (р<0,001) 8,6410,255 (р<0,001)

12 1шах/8 0,1110,001 0,1310,0003 (р<0,001) 0,1210,004 (р<0,001)

13 МДА, мкмоль/л 2,52±0,173 5,8210,046 (р<0,001) 4,4910,129 (р<0,001)

Таким образом, если у контрольных кроликов 1-й серии (пероральное введение СО4) имело место достоверное компенсаторное повышение буферной емкости всех имеющихся антиоксидантов, как ответная реакция всей ан-тиоксидантной системы защиты на индукцию процессов ПОЛ, ибо достовер-

но выше оказалась интенсивность процесса ПОЛ (Imax, Imax/S, МДА), свидетельствующая о выраженных деструктивных процессах у животных 1-й серии, то у кроликов 2-й серии с пероральным введением на фоне пе-рорального введения ЦТ показатели интенсивности ПОЛ оказались достоверно ниже, что свидетельствует о том, что ЦТ, обладая энтеросорбционной детоксикационной, положительной биологической активностью, защищает организм от отравляющего действия перорально введенного четыреххлори-стого углерода (табл. 1, диаграмма 1).

Гистологическое исследование Как показал анализ гистологических препаратов ткани печени, у животных 2-й серии структурные сдвиги были менее выраженными, чем у кроликов 1-й, контрольной серии. Дольковое строение печени полностью сохранено, однако наблюдалась мелкокапельная, реже - крупнокапельная жировая дистрофия. В портальном тракте встречалась круглоклеточно-макр-офагальная инфильтрация, в перипортальных полях отмечалось расширение кровеносных сосудов, имела место оксифилия цитоплазмы гепатоцитов.

Следовательно, цеолитсодержащий трепел, вероятно, адсорбируя в кишечном тракте данное гепатотропное вещество, снижает степень повреждения гепатоцитов и других клеток организма, что подтверждается биохимическим исследованием и результатами перекисного окисления липидов. Результаты гистологического исследования полностью коррелируют с биохимическими и клинико-патофизиологическими показателями.

Исследуя в данной, 2-й серии опытов ЦТ, мы исходили из того, что основным компонентом цеолитсодержащего трепела являются кремнезем и цеолиты. По данным В.И. Бгатова (1997), цеолиты - это минералы, химически являющиеся водными алюмосиликатами и содержащие большое количество микро- и макроэлементов, которые могут обмениваться на другие вещества. В организме человека цеолиты отдают те элементы, которые необходимы для восполнения их дефицита и нормализации минерального обмена.

Показатели ПОЛ у интактных и подопытных кроликов 1-й и 2-й серий в динамике

опытов

Диаграмма 1.

У подопытных кроликов данной, 2-й серии процентное содержание одноядерных гепатоцитов составило 87,09±0,928, что статистически достоверно (р<0,05) меньше, чем у животных с введением СС14 (1-я серия). Процентное содержание дву- и многоядерных гепатоцитов составило 12,90±0,928, что выше такового, чем у животных 1-й серии (р<0,05). При этом, МИ был равен 0,149±0,112, что достоверно выше (р<0,05), чем у подопытных животных с введением СС14 (1-я серия). Кроме того, обращали на себя внимание более гиперхромные ядра гепатоцитов у животных данной серии. Как известно, (Я.К.М. Маевшееп й а1., 1979), гиперхромизм ядер считается признаком регенераторной активности.

Следовательно, более высокий показатель МИ у подопытных животных данной, 2-й серии (ССЦ + ЦТ) свидетельствует о выраженных регенераторных процессах печени, чем у подопытных кроликов с введением серия).

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ТЕРАПИЯ ГИПЕРАЦИДНОГО ГАСТРИТА У КРЫС ЦЕОЛИТСОДЕРЖАЩИМ ТРЕПЕЛОМ

В настоящих исследованиях нами ставилась задача воспроизвести гипе-рацидное состояние желудка крыс путем введения уксусной кислоты для экспериментальной терапии гиперацидного состояния желудка и гастрита у крыс путем перорального введения ЦТ.

Опыты проводились на 79 крысах обоего пола массой от 160 до 225 г. 1 -я (контрольная) серия 22 крысы, - интактные, из них 7 крыс - на гистологические исследования. 2-я (опытная) серия 28 крыс, однократное введение через зонд уксусной кислоты за 5 дней до опыта по рН-метрии, из них 10 крыс использовались на гистологическое исследование. 3-я серия (14 крыс) - ежедневное пероральное введение ЦТ в тех же дозах, что и в 4-й серии. 4-я (опытная) серия 29 животных, ежедневное пероральное введение ЦТ, из расчета 1,5 г/кг массы с кормом и однократное введение 5%-ого раствора уксусной кислоты, из расчета 4 мл/кг массы через зонд за 5 дней до опыта по рН-метрии. Из них 10 крыс использовались на гистологическое исследование.

Исследование внутрижелудочной рН-среды у контрольных и подопытных крыс

У крыс 1-й, контрольной серии базальная кислотность (рН) в среднем составила 2,54±0,03, что колебалось в пределах 2,20 - 2,80. После стимуляции гистамином, через 5 мин величина рН составила 2,16±0,03 в интервале от 2,00 до 2,40; через 15 мин уровень рН повысился до 1,95±0,03 в пределах 1,80 -2,15. Через 30 мин величина рН в среднем составила 2,01 ±0,03 с колебаниями в пределах от 1,85 до 2,25. Следовательно, общая кислотность после стимуляции гистамином стала максимальной через 15 мин (табл. 2, диаграмма 2).

Динамика изменения уровня рН свидетельствует о том, что крысы относятся к животным с достаточно высокой устойчивостью к гистамину, даже при такой высокой концентрации вводимого экзогенного гистамина в дозе 10 мг/кг.

У подопытных крыс во 2-й серии (табл. 2, диаграмма 2) уровень базаль-ной кислотности составил 1,92±0,02 (р<0,001), при этом кислотность колебалась в пределах 1,80 - 2,00. После стимуляции гистамином, величина рН желудочного сока через 5 мин была равна 1,82±0,02 (р<0,001) с колебаниями в пределах 1,70 - 2,00; через 15 мин кислотность повысилась до 1,67±0,008 (р<0,001), при этом величина рН колебалась в пределах 1,60 - 1,70; через 30 мин - рН понизилась до 1,71 ±0,02 (р<0,001). Однако кислотность во всех опытах была достоверно выше, чем в 1-й, контрольной серии.

Таким образом, введение уксусной кислоты позволило получить гипе-рацидное состояние подопытных крыс 2-й серии опытов.

У подопытных крыс 3-й серии уровень базальной кислотности был равен 2,55±0,6, что практически не отличался от аналогичного показателя ин-тактных крыс (2,54±0,03). Эти показатели колебались в пределах 2,35 - 3,00. После стимуляции гистамином величина рН желудочного сока у крыс данной серии через 5 мин составила 2,139±0,03, с колебаниями в пределах 2,00 - 2,35, что практически не отличалась от показателей интактных крыс. Через 15 мин величина рН повысилась до 1,95+0,04, против аналогичных показателей ин-

тактных крыс 1,95±0,03. Через 30 мин кислотность составила 2,10±0,04, с колебаниями от 1,90 до 2,50, при соответствующих показателях у интактных крыс 2,01±0,03, с колебаниями в пределах 1,85-2,25 (табл. 2, диаграмма 2). Следовательно, у подопытных крыс с введением ЦТ, как базальная секреция, так и динамика изменения общей кислотности после стимуляции гистамином не отличались от аналогичных показателей интактных крыс.

Таблица 2.

Динамика изменения кислотности желудочного сока у интактных (1-й серии) и подопытных 2-й (введение уксусной кислоты), 3-й серии (введение ЦТ) и подопытных крыс 4-й серии

(введение ЦТ и уксусной кислоты) через 5,15,30 минут

Серия опытов Базальная секреция (рН) М±ш 5 15 30

1-я серия (интактные) 2,54±0,03 2,16±0,03 1,9510,03 2,01 ±0,03

2-я серия (введение уксусной кислоты) 1,92+0,02 р<0,001 1,82+0,02 р<0,001 1,67±0,008 р<0,001 1,71 ±0,02 р<0,001

3-я серия (введение ЦТ) 2,55±0,03 р<0,001 2,13±0,03 р<0,001 1,95+0,04 р<0,001 2,01 ±0,04 р<0,001

4-я серия (введение ЦТ и уксусной кислоты) 2,20+0,04 р<0,001 2,01±0,02 р<0,001 1,85±0,02 р<0,001 1,93±0,01 р<0,001

Примечание: 1) 2-я и 3-я серии сравниваются с 1-й серией, 2) 4-я серия сравнивается с 2-й серией.

У подопытных крыс 4-й серии с однократным введением уксусной кислоты на фоне введения ЦТ, (табл. 2, диаграмма 2) базальная кислотность желудка (рН) составила 2,20±0,04, что по сравнению с данными 2-й серии достоверно ниже (р<0,001). Через 5 мин после стимуляции экзогенным гистамином, величина рН составила 2,01±0,02 (р<0,001), с колебаниями от 1,85 до 2,30; через 15 мин уровень рН повысился до 1,85±0,02 (р<0,001), с колебаниями в пределах 1,60 - 2,00; через 30 мин величина рН составила 1,93±0,01, с колебаниями в пределах 1,75 - 2,00, что достоверно ниже аналогичных показателей животных 2-й серии (р<0,001).

Динамика изменения кислотности желудочного сока у интактных и подопытных

животных через 5, 15, 30 минут

Диаграмма 2.

Следовательно, у животных 4-й, серии исследованные показатели рН как базальной кислотности, так и после стимуляции гистамином оказались достоверно ниже, чем у животных 2-й серии, что свидетельствует о том, что введение ЦТ позволяет достоверно снизить выраженность ацетатного гипера-цидного состояния.

Гистологическое исследование

У интактных крыс слизистая желудка обычного строения, цилиндрически-кубический эпителий с умеренным слизеобразованием. Собственная пластинка слизистой с умеренными полнокровными сосудами. Встречались небольшие скопления лимфоцитов и эозинофилов.

Как показали наши гистологические исследования, у всех животных 2-й серии был установлен глубокий острый гастрит, о чем свидетельствовали очаги нейтрофильной инфильтрации во всех слоях слизистой оболочки желудка. Полиморфноядерные лейкоциты обнаруживались в подслизистом, собственном мышечном слоях СОЖ с явлениями воспалительного повреждения гастроцитов слизистой желудка.

Данные гистологического исследования находили подтверждение при гистохимическом исследовании. В частности, в поверхностном эпителии выявлялись нейтральные мукополисахариды. При этом отмечалось нормальное строение главных клеток, а в некоторых из них обнаруживались нейтральные мукополисахариды. Кроме того, в поверхностном эпителии встречались также кислые мукополисахариды. В клетках глубоких слоев желез кислые мукопо-лисахариды выявлялись реже.

Данные гистологических исследований ткани желудка подопытных крыс 3-й серии полностью соответствовали показателям интактных крыс, что свидетельствовало о том, что ЦТ никак не повреждает слизистую оболочку желудка крыс. По данному показателю, ЦТ практически соответствует свойствам, характеризующим «идеальный» энтеросорбент (Ю.Н. Шевченко, 2002).

Гистологические и гистохимические методы исследования желудка у животных 4-й серии с острым гастритом с введением ЦТ показали, что очаги

инфильтраций полиморфноядерных лейкоцитов в эпителиальных клетках встречались значительно реже, что свидетельствовало о меньшей выраженности воспалительных процессов. Нейтральных и кислых мукополисахаридов также выявлено значительно реже, чем у животных 2-й серии опытов.

Следовательно, результаты использованных гистологических и гистохимических методов исследования ткани желудка свидетельствуют о полном соответствии описанных функциональных (рН) и морфологических изменений.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ТЕРАПИЯ ЦЕОЛИТСОДЕРЖАЩИМ ТРЕПЕЛОМ ЯЗВЫ ЖЕЛУДКА У КРОЛИКОВ В ЭКСПЕРИМЕНТЕ Задачей настоящих исследований явилось изучение механизмов развития экспериментальной язвы желудка подопытных кроликов (2-я серия), а также терапевтической эффективности цеолитсодержащего трепела на модели острой (3-я серия) язвы и хронической язвы желудка (4-я серия).

Опыты проводились на 70 кроликах обоего пола массой 2,6 - 3,2 кг. 1-я серия (16 кроликов) - интактные животные. 2-я серия (26 кроликов) - моделирование хронической ацетатной язвы по Окабе (8. ОкаЬе Ы. а1., 1971; Л.И. Аруин с соавт., 1976; К.Е. Бадмаева с соавт., 2005). 3-я серия (15 кроликов) -воспроизведение острой ацетатной язвы по Окабе на фоне перорального введения ЦТ в течение 12 дней. На 12-й день от начала опытов были забиты 8 интактных кроликов (1-я серия), 12 кроликов 2-й серии, все 15 кроликов 3-й серии. 4-я серия (13 кроликов) - экспериментальная терапия хронической ацетатной язвы по Окабе подопытных кроликов ЦТ. Для чего, с 13-го по 24-е дни опытов перорально вводился ЦТ из расчета 1,5 г/кг массы животного.

8 интактных кроликов, 14 подопытных кроликов 2-й серии и 13 кроликов 4-й серии были забиты на 24-й день опытов. Все забои подопытных животных производились под эфирным наркозом. Данная модель язвы по Окабе применялась нами неслучайно, ибо по данным исследователей (Л.И. Аруин с соавт. 1976 и др.), лишь отдельные модели воспроизводят морфологическую картину хронической язвы, напоминающей хроническую язву человека. К таким моделям относится и экспериментальная язва по Окабе.

Исследование перекисного окисления липидов

Как показали результаты исследований интенсивности процессов ПОЛ и состояния антиоксидантных систем у интактных животных (1-я серия), уровень общих липидов составил 3,42±0,179 г/л, общего холестерина - 2,02+0,092 ммоль/л. 1тах (интенсивность процесса ПОЛ) составил 5,66+0,109, $ (буферная емкость всех имеющихся антиоксидантов) -47,17+0,876, 1тах/$ (коэффициент, характеризующий общую антиоксидантную активность) - 0,121 ±0,003, а МДА (малоновые диальдегиды) составили 2,63+0,122. На 12 сутки исследований у подопытных кроликов 2-й серии полученные данные ПОЛ свидетельствует о том, что активность ПОЛ значительно превосходит таковую интактных кроликов. Уровень общих липидов составил 5,39+0,185 г/л (р<0,001), общего холестерина - 1,04+0,072 ммоль/л (р<0,001), 1тах была равна 8,07±0,189 (р<0,001). $ составила 59,05±1,385 (р<0,001), 1тах/$ был равен 1,138±0,004 (р<0,001). МДА составили 4,00+0,197 (р<0,001) (табл. 3, диаграмма 3).

Таким образом, у подопытных кроликов 2-й серии отмечено интенсивное свободно-радикальное ПОЛ, о чем свидетельствуют максимально достоверные изменения 1тах, МДА, уровня общего холестерина и общих липидов. А статистически достоверное увеличение буферной емкости всех имеющихся антиок-сидантов ($) свидетельствует о недостаточной компенсации активации ПОЛ.

Все это является свидетельством выраженных функционально-структурных изменений в клеточных мембранах эпителиальных клеток желудка и, возможно, всего пищеварительного тракта. Можно предположить, что в гастро-цитах имеет место нарушение процессов утилизации кислорода в результате непосредственного кислородного повреждения их мембран, что еще более способствует активации свободно радикальных процессов и в различной степени истощения антиоксидантной защиты (глутадионпероксидазы (ГП) и каталазы).

У подопытных кроликов 3-й серии с воспроизведением язвы по Окабе на фоне двенадцатикратного перорального введения ЦТ, на 12-е сутки от начала опытов уровень общих липидов сыворотки крови составил 4,005+0,149 г/л, что достоверно (р<0,001) ниже, чем у животных 2-й серии. Содержание общего хо-

лестерина составило 1,97+0,114 ммоль/л, что статистически достоверно (р<0,001) выше, чем у подопытных животных 2-й серии (1,048+0,072 ммоль/л) (табл. 3, диаграмма 3).

Исследования показателей гипероксидации (ПОЛ) у животных данной (3-й серии), показали, что буферная емкость всех имеющихся антиоксидантов (8) составила 50,38+0,776, что достоверно ниже (р<0,001), чем у животных 2-й серии. Этот показатель, выражающий ответную реакцию всей антиоксидантной системы защиты на индукцию процессов ПОЛ свидетельствует о менее выраженной гипероксидации у животных 3-й серии с введением ЦТ. Об этом же свидетельствует 1тах у животных данной, 3-й серии составившее 6,41+0,126, против 8,07+0,189 у животных 2-й серии (р<0,001). 1тах/8 - коэффициент, характеризующий общую антиоксидантную активность составил 1,129+0,003, против 0,138 у животных 2-й серии (р<0,001). Уровень МДА у данных подопытных животных составил 3,106+0,159, что статистически достоверно (р<0,001) ниже, чем у животных 2-й серии (4,005±0,197) (табл. 3, диаграмма 3).

У подопытных кроликов 4-й серии на 24-й день опытов, содержание общих липидов составило 4,26+0,097 г/л, что достоверно ниже (р<0,05) по сравнению с аналогичным показателем на 24-е сутки исследований подопытных животных 2-й серии (4,61+0,112). Уровень общего холестерина составил 1,87+0,078 ммоль/л, против аналогичного показателя подопытных животных 2-й серии на 24-й день, составившего 1,30+0,082 ммоль/л (р<0,01).

Буферная емкость всех имеющихся антиоксидантов (8) у животных 4-й серии составила 51,34+0,712, что статистически достоверно ниже (р<0,05), чем у животных 2-й серии на 24-й день исследований (56,16+2,053). Интенсивность процесса ПОЛ (1тах) составила 6,28+0,123, против 7,50+0,128 (р<0,01). Отношение 1тах/8 характеризующее общую антиоксидантную активность, составило 1,122+0,002 (р<0,01). Уровень МДА (малоновые диальдегиды) составил 3,30±0,118, что статистически недостоверно ниже, чем у подопытных кроликов 2-й серии на 24-й день опытов (3,52+0,126) (табл. 3, диаграмма 3).

Таблица 3.

Показатели ПОЛ в динамике воспроизведения экспериментальной язвы по Окабе у подопытных кроликов 1-й, 2-й, 3-й и 4-й серий опытов.

Серия опытов Общие липиды (г/Л) Общий холестерин (ммоль/л) (тУ*сек) 1тах (шУ) 1тах/5 МДА (мкмоль/л)

1 -я серия (интактные животные) 3,42±0,179 2,02±0,092 47,1710,876 5,66±0,109 0,121+0,003 2,63±0,122

2-я серия (экспериментальная язва на 12-й день) 5,39±0,185 (р<0,001) 1,04±0,072 (р<0,001) 59,05±1,385 (р<0,01) 8,07+0,189 (р<0,001) 1,138+0,004 (р<0,01) 4,00±0.197 (р<0,001)

3-я серия (ацетатная язва + пероральное введение ЦТ на 12-й день) 4,005+0,149 (р<0,001) 1,97±0,114 (р<0,001) 50,3 8±0,776 (р<0,001) 6,41+0,126 (р<0,001) 0,129±0,003 (р<0,001) 3,Ю6±0,159 (р<0,01)

2-я серия (экспериментальная язва на 24-й день) ' 4,61 ±0,122 (р<0,01) 1,30±0,082 (р<0,01) 56,16±2,053 (р<0,05) 7,50+0,128 (р<0,05) 0,139±0,003 (р<0,05) 3.52±0.126

4-я серия (экспериментальная язва + пероральное введение ЦТ на 24-й день) 4,26+0,097 (р<0,05) 1,87±0,078 (р<0,01) 51,34±0,712 (р<0,05) 6,28±0,123 (р<0,01) 0,122±0,002 (р<0,01) 3,30±0.118

Примечание: 1) результаты опытов 2-й серии на 12-й день сравнивались с таковыми 1-й серии опытов;

2) результаты опытов 3-й серии на 12-й день сравнивались с таковыми 2-й серии опытов;

3) показатели 2-й серии опытов на 24-й день сравнивались с показателями 2-й серии опытов на 12-й день;

4) показатели опытов 4-й серии на 24-й день сравнивались с показателями опытов 2-й серии на 24-й день.

Динамика ПОЛ при воспроизведении острой и хронической язвы желудка и ее экспериментальной терапии

1 -я серия

2-я серия (12-й день)

2-я серия (24-й день)

4-я серия (24-й день)

ОН Общие липиды ■ Общий холестерин

И 1шах □ МДА

Диаграмма 3.

Следовательно, все показатели процессов ПОЛ свидетельствуют о статистически достоверном снижении интенсивности ПОЛ у подопытных животных 4-й серии (с экспериментальной терапией ЦТ) на 24-й день исследований, по сравнению с подопытными животными 2-й серии на 24-й день опытов.

Мы считаем, что сохранение уровня антоксидантов и снижение интенсивности ПОЛ у подопытных животных 4-й серии связаны с энтеросорбцией и детоксикацией организма ЦТ от продуктов ацетата и цитолитических токсинов, способствующих высвобождению лизосомальных ферментов активизирующих протеолиз. Об этом свидетельствуют результаты предыдущих серий опытов, где нами показаны улучшения детоксикационной функции печени при перо-ральном введении ЦТ подопытным морским свинкам и кроликам.

Статистически недостоверное снижение уровня МДА у подопытных кроликов 4-й серии, по сравнению с животными 2-й серии в те же сроки, вероятно, связано с присутствием ПОЛ под действием токсических продуктов метаболизма и снижением запасов эндогенных антиоксидантов.

Таким образом, использование для исследования противоязвенной эффективности ЦТ, как терапевтического средства, обеспечивало статистически достоверно низкие показатели ПОЛ и, соответственно, более низкую выраженность повреждения слизистой оболочки желудка у подопытных животных 3-й (на 12-й день опытов) и 4-й серий опытов на 24-й день. Установленное биохимическими методами защитное действие цеолитсодержащего трепела следовало подтвердить гистологическими методами исследования.

Гистологическое исследование

У всех животных 1-й серии (интактные кролики) слизистая оболочка желудка (СОЖ) обычного строения, покровная выстилка представлена цилиндрически-кубическим эпителием, с явлениями умеренного слизеобразования. Собственная пластинка слизистой была с умеренно полнокровными микрососудами, встречались микроочаговые скопления и единичные лимфоциты.

У всех подопытных кроликов 2-й серии, с острой экспериментальной язвой на 12-е сутки исследования, обнаружена язва в виде одиночного крате-

ра округлой формы площадью 29,5±1,63 мм2 с гнойно-некротическим содержимым, с колебаниями площади от 25 до 36 мм2. Гистологически отмечалось воспалительное изменение СОЖ, а именно оттек стромы, стаз форменных элементов крови, избыточное слизеобразование, десквамация покровно-ямочного эпителия. В поверхностных отделах слизистой оболочки отмечалось полнокровие паретически расширенных капилляров и многочисленные мелкие геморрагии, что нами отмечено, как признаки гастрита различной глубины. Кроме того, отмечались лимфоцитарные инфильтрации и фиброб-ласты. У всех исследованных животных кроме язвы отмечены и другие деструктивно-некротические процессы. Встречались экссудативно-геморраги-ческие и некротические фокусы в слизистом, подслизистом и мышечном слоях стенки желудка. В зоне некроза встречались тромбированные сосуды.

Результаты наших гистологических исследований полностью согласуются с данными В.М. Успенского с соавт. (1990), о том, что язвообразование на модели по Окабе (1971) у подопытных кроликов максимума достигает к 12-14-м суткам.

У подопытных кроликов 3-й серии на 12-й день исследований язва в виде одиночного кратера обнаружена лишь у 47% подопытных кроликов площадью 0,7±0,28 мм2 (р<0,01), с колебаниями 1 - 4 мм2, а у остальных 53% кроликов язва не обнаружена. Гистологическая картина СОЖ существенно отличалась от таковой животных 2-й серии в те же сроки. Отмечались некоторые участки эозинофильных и лимфоцитарных очагов в собственной пластинке, свидетельствующих о различной глубине острого гастрита. При этом, дно язвы отчистилось от некротизированной ткани.

Следовательно, у животных 3-й серии острой язвой по Окабе и с экспериментальной терапией ЦТ на 12-й день исследования ацетатный ульцероге-нез обнаружен лишь у 47% кроликов с нарушениями микроциркуляции в слизистой оболочке, свидетельствующими о гастрите различной глубины, однако, у 53% подопытных животных имевшее место язва находилась в состоянии заживления.

Таким образом, пероральное введение ЦТ подопытным кроликам данной, 3-й серии у 53% животных предупредило развитие ацетатного улыдеро-генеза, хотя явления гастрита отмечены у всех исследованных животных.

У всех 100% подопытных кроликов 2-й серии на 24-е сутки опытов отмечен язвенный дефект площадью 5,0±0,75 мм2 (р<0,01), с колебаниями от 1,0 до 9,0 мм . Сохранялись явления гастрита: отек стромы, дистрофия и де-сквамация покровно-ямочного эпителия. У всех животных язва находилась в той или иной стадии заживления.

У всех подопытных кроликов 4-й серии на 24-й день опытов, имело место полная ликвидация язвенного дефекта в слизистой оболочке желудка. Отмечено умеренное разрастание соединительной ткани, умеренно выраженная дистрофия. На фоне рубцевания язвы, однако сохранились очаговые изменения слизистой оболочки желудка по типу подострого гастрита. Вокруг рубца имели место выраженные дистрофические изменения.

Следовательно, экспериментальная терапия подопытных кроликов ЦТ в течение 12 дней на 12 - 24-е сутки исследования обеспечивала ликвидацию язвенно-эрозивного процесса и активную репарацию слизистой оболочки желудка, однако явления гастрита еще сохранялись. С учетом исследования динамики ПОЛ и результатов визуальных и гистологических исследований можно предположить, что ЦТ, подавляя ПОЛ в слизистой оболочке желудка, вызывая энтеросорбцию токсикантов и детоксируя организм, выступает в роли протектора клеточного эпителия стенки желудка. Вероятно, этому способствует богатый состав ионов, как А1, Ре, 81, Mg, Мп, Си. По данным А.В. Григорьева с соавт. (2002), модификация энтеросорбента ионами Си, 2п способствует увеличению его адгезивной активности в отношении 8.Аехпеп и 8.аигеш в 2,2-2,5 и 1,2-1,3 раза соответственно.

Таким образом, ЦТ с энтеросорбционным, антиоксидантным и мембра-ностабилизирующим эффектами может быть рекомендован, как средство патогенетической терапии экспериментального язвенно-некротического процесса, и дальнейших исследований в клинике гастроэнтерологии.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Уменьшение содержания обшего холестерина у опытных кроликов с введением CCI4 (1-я серия) происходит из-за повреждения гепатоцитов, в результате чего угнетается активность ферментов, как гидроксиметилглутарил-СоА-редуктазы (КФ 1.1.1.34), участвующей в биосинтезе эндогенного холестерина и холестеролацетилтрансферазы (КФ 2.3.1.26), участвующей в эте-рификации холестерина (P.Monroe et al., 1983; B.Jacson et al.,1989; Manohar L.Garg, J.R.Sabine, 1988; M.J.P.Higgins, 1989; M.T.R.Subbiah et al.,1989, и др.).

О выраженных деструктивных процессах гепатоцитов у данных животных (1-я серия) свидетельствует достоверно высокий уровень общего билирубина (16,5+0,71 мкмоль/л), против нормы - 8,3+0,21 мкмоль/л. Достоверно повышенный уровень аминотрансфераз (АлАТ; АсАТ) свидетельствует о выраженных деструктивных процессах не только в печени, но и во всем организме опытных животных.

Пятикратное пероральное введение CCI4 на фоне пероралыюго введения ЦТ подопытным кроликам (2-я серия) сопровождалось по сравнению с результатами 1-й, контрольной серии (пероральное введение СС14) опытов на кроликах, статистически достоверно низким уровнем абсолютного количества лейкоцитов, общего билирубина, активности аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ), щелочной фосфатазы и статистически достоверно высоким уровнем общего белка, альбуминов, общего холестерина, а также менее выраженными, чем 1-й, контрольной серии опытов, гистологическими изменениями. Пятикратное пероральное введение CCI4 подопытным кроликам 1-й серии вызывает достоверное компенсаторное повышение буферной емкости всех исследованных антиоксидантов, как ответная реакция всей антиоксидантной системы на индукцию ПОЛ. У подопытных кроликов с пероральным введением СС14 на фоне перорального введения ЦТ (2-я серия) интенсивность ПОЛ была достоверно ниже, чем у животных контрольной, 1-й серии, что свидетельствует об энтеросорбционной детоксикационной и положительной

биологической активности ЦТ, защищающей организм от гепатоцитолиза при воздействии

Положительный энтеросорбционный и детоксикационный эффект природного ЦТ в динамике развития острого токсического гепатита у подопытных кроликов объясняется, прежде всего, содержанием цеолитов. Цеолиты представляют собой минералы, относящиеся к водным алюмосиликатам. Кристаллическая решетка цеолитов состоит из тетраэдров таким образом, что между ними располагаются катионы Са и а также молекулы воды. Цеолиты в состоянии обменивать содержащуюся в них воду на другие жидкости (спирт, аммиак и т.д.), а катионы Са и № на различные другие катионы (Б.В. Некрасов, 1955).

Результаты исследования динамики кислотности желудочного сока и морфологии слизистой оболочки стенки желудка у подопытных крыс 3-й серии свидетельствуют о полной безвредности ЦТ и индифферентности к функциональному состоянию железистого аппарата, что позволяет рекомендовать его, как энтеросорбент, в данном случае, по отношению уксусной кислоты.

Анализ результатов опытов на подопытных крысах 2-й серии по воспроизведению острого ацетатного гиперацидного гастрита свидетельствует о возможности экспериментального воспроизведения острого гиперацидного гастрита с помощью использованной методики.

Существенное снижение выраженности ацетатного гиперацидного гастрита и статистически достоверное снижение кислотности (рН) желудочного сока при многократном пероральном введении ЦТ, мы объясняем этеро-сорбционной детоксикацией организма от уксусной кислоты, инактивацией ферментных систем желудочного сока и обволакивающей способностью це-олитсодержащего трепела СОЖ и кишечника и таким образом, защищающей от повреждения и эрозии. Именно выраженный сорбционный эффект лежит в основе лечебного действия ЦТ при воспроизведении острого ацетатного гастрита.

Исследования ПОЛ в динамике экспериментальной язвы желудка у подопытных кроликов и гистологические исследования подтвердили противоязвенную эффективность ЦТ. Статистически достоверно низкие показатели интенсивности ПОЛ свидетельствуют о менее выраженной реакции гипероксидации у подопытных кроликов 3-й серии. Активность протекания свободноради-кальных реакций и тяжесть эндогенной интоксикации взаимосвязаны и в значительной степени определяют адаптационно-компенсаторные возможности организма (F.J. Romero et al., 1998; P. Boya et al., 1999; V. Lankin, 2003).

При макроскопическом и гистологическом исследованиях у 100% подопытных животных 2-й серии обнаружена язва на 12-е сутки, а у животных 3-й серии на 12-е сутки язва обнаружена лишь у 47% подопытных животных площадью 0,7±0,28 мм2 (р<0,01), а у остальных 53% кроликов язва не обнаружена. Аналогичную динамику морфологических изменений желудка обнаруживали В.М. Успенский с соавт. (1990), при исследовании эффективности гипербарической оксигенации, цитохрома с и тималина в лечении экспериментальных язв желудка.

У подопытных кроликов 4-й серии, с хронической экспериментальной ацетатной язвой с пероральным введением ЦТ на 24-е сутки, в отличие от животных 2-й серии в те же сроки интенсивность ПОЛ оказалась существенно ниже, а эрозивно-язвенный процесс отсутствовал, отсутствовали также участки с глубокими повреждениями слизистой оболочки желудка. Учитывая положительное терапевтическое влияние ЦТ на развитие компенсаторно-приспособительных и репаративных процессов в желудке у подопытных животных 3-й и 4-й серии опытов, считаем возможным его применение в комплексном лечении гиперацидных гастритов и язвы желудка. Такая патогенетическая целесообразность применения ЦТ, как энтеросорбента, прежде всего, связана с детоксикацией организма от токсинов эндогенного и экзогенного происхождения.

Следовательно, ЦТ в использованных нами дозах в эксперименте, обладает энтеросорбционной, детоксикационной, антиульцерогенной по отношению ацетата, положительной биологической, а также снижающей кислотность (рН) желудочного сока активностью и поэтому рекомендуется даль-

нейшее исследование по его применению в клинической практике гастроэнтерологии.

ВЫВОДЫ

1. Параметры динамики внешнего дыхания подопытных морских свинок в динамике введения цеолитсодержащего трепела свидетельствуют о том, что он не оказывает отрицательного воздействия на внешнее дыхание исследованных животных, а обладает энтеросорбционной, детоксикационной и положительной биологической активностью и как детоксикант может быть исследован в клинике гепато- и гастроэнтерологии.

2. Цеолитсодержащий трепел не оказывает токсического действия на функциональное состояние высшей нервной деятельности подопытных кроликов и морфологическое состояние желудка и печени.

3. Пятикратное пероральное введение ССЦ кроликам сопровождается статистически достоверным увеличением абсолютного количества лейкоцитов, общего билирубина, активности аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ), щелочной фосфатазы, статистически достоверным снижением абсолютного количества эритроцитов, общего белка, альбуминов, общего холестерина и выраженными гистологическими сдвигами в ткани печени, а также резким снижением показателей регенераторных процессов в печени.

4. Пятикратное пероральное введение четыреххлористого углерода на фоне перорального введения цеолитсодержащего трепела подопытным кроликам сопровождалось по сравнению с результатами 1-й, контрольной серии опытов на кроликах, статистически достоверно низким уровнем абсолютного количества лейкоцитов, общего билирубина, активности аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ), щелочной фосфатазы и статистически достоверно высоким уровнем общего белка, альбуминов, общего холестерина, а также менее выраженными, чем 1-й, контрольной серии опытов, гистологическими изменениями, в том числе улучшением регенераторных процессов в печени.

5. Пятикратное пероральное введение ССЦ подопытным кроликам вызывает достоверное компенсаторное повышение буферной емкости всех ис-

следованных антиоксидантов, как ответная реакция всей антиоксидантной системы на индукцию ПОЛ.

6. У подопытных кроликов с пероральным введением четыреххлори-стого углерода на фоне перорального введения ЦТ, интенсивность перекис-ного окисления липидов была достоверно ниже, чем у животных контрольной серии, что свидетельствует об энтеросорбционной. детоксикационной, положительной биологической активности ЦТ и фактора, защищающего организм от гепатоцитолиза при воздействии

7. Внутрижелудочные рН-метрические и гистологические методы исследования позволили установить гиперацидное состояние и глубокий гипе-рацидный гастрит у подопытных крыс при однократном введении уксусной кислоты.

8. Пероральное введение цеолитсодержащего трепела в течение пяти дней крысам с однократным введением уксусной кислоты позволило статистически достоверно снизить выраженность гиперацидоза и гиперацидного гастрита у подопытных крыс, по сравнению с контрольными животными (однократное введение уксусной кислоты).

9. Экспериментальное воспроизведение острой язвы желудка по Окабе сопровождалось статистически достоверным повышением уровня общих ли-пидов, повышением интенсивности ПОЛ, малоновых диальдегидов, компенсаторным повышением емкости всех имеющихся антиоксидантов, достоверным снижением уровня общего холестерина, по сравнению с интактными животными, язвообразованием у всех подопытных животных и развитием глубокого гастрита.

10. Пероральное введение ЦТ в течение первых 12 дней при моделировании острого ульцерогенеза по Окабе у подопытных животных приводит к статистически достоверному снижению уровня общих липидов, интенсивности процессов ПОЛ, уровня малоновых диальдегидов, буферной емкости всех имеющихся антиоксидантов, к статистически достоверному повышению

уровня общего холестерина, по сравнению с показателями подопытных животных 2-й серии (экспериментальный ульцерогенез), а также к существенному, статистически достоверному снижению развития острого ульцерогене-за (у 53% животных язва не обнаружена), к ускоренному заживлению язвы при ее возникновении, что является свидетельством значительной антиуль-церогенной эффективности ЦТ.

11. Пероральное введение ЦТ с 12 по 24-е сутки опытов подопытным кроликам с хронической язвой по Окабе приводит к статистически достоверному снижению интенсивности процессов ПОЛ, по сравнению с подопытными животными 2-й серии в те же сроки (экспериментальный ульцерогенез по Окабе), к полной ликвидации язвенного процесса, а также к значительному улучшению морфологической структуры слизистой оболочки желудка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанная нами методика воспроизведения острого токсического гепатита путем перорального введения рекомендуется в качестве модели для исследования механизмов развития токсического гепатита и разработки лечебных методов.

2. Модифицированная нами методика для воспроизведения острого токсического гиперацидного гастрита у крыс рекомендуется для исследования механизмов развития токсического гиперацидного гастрита и разработки новых методов терапии и терапевтической эффективности тех или иных препаратов.

3. Цеолитсодержащий трепел в использованных нами дозах, как обладающий положительным биологическим эффектом, свойствами энтеросор-бента рекомендуется для клинических исследований при экзогенных отравлениях химическими гепатотропными ядами.

4. Цеолитсодержащий трепел, как энтеросорбент и антитоксикант рекомендуется также для клинических исследований его терапевтической эффективности при токсических гастритах у больных.

5. Цеолитсодержащий трепел, как минерал с богатейшим составом микро- и макроэлементов с антитоксической активностью рекомендуется для дальнейших исследований в клинике острых и хронических токсических язв у больных язвенной болезнью желудка и 12-перстной кишки.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л., Саперов В.Н,, Ергунов И.М., Малышев И.И., Сунгоркина Т.М.Цеолитсодержащий трепел Первомайского месторождения Алатырского района как энтеросорбент и детоксикант в эксперименте// Ж. «Известия НАНИ ЧР» - Чебоксары -2000 -№2.-С.З-9.

2. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л., Сунгоркина Т.М. Механизмы энте-росорбционной детоксикоции цеолитсодержащим трепелом Первомайского месторождения морских свинок при отравлении CCI4 // Сб. ст.: Изучение и применении трепелов и диатомитов.- Чебоксары.-2000.-С.70-84.

3. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Гепатобилиарная система морских свинок, подвергнутых воздействию в условиях энтеросорбциошюй де-токсикации цеолитсодержащим трепелом// Материалы международной кон-фер., посвященной 75-летию A.M. Уголева «Механизмы функционирования висцеральных систем». - С-Пб. - 2001. - С. 181.

4. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Исследование возможного токсического влияния трепела на ЦНС кроликов и энтеросорбционных свойств его в условиях воздействия гепатотропного яда в эксперименте на морских свинках // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктоло-гии. (Приложение №16). - М. - 2002. - Т.ХН. - №1. - С. 60.

5. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Трепел как энтеросорбент в эксперименте на кроликах с токсическим гепатитом// Семейная медицина в современных условиях. Мат. научно-практич. конференции. - Чебоксары. - 2002. -С. 230-231.

6. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н., Сунгоркина Т.М. Исследование трепела как энтеросорбента на кроликах с токсическим гепатитом// Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. (Приложение № 17). - М. - 2002. - Т.ХП.-№ 5. - С. 88.

7. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Цеолитсодержащий трепел в медицине. Монография. - Чебоксары. - 2003. - 120 с.

8. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н., Туктанов Н.В. Энтеросорбционная и детоксикационная активность цеолитсодержащего трепела по показателям перекисного окисления липидов (ПОЛ) в эксперименте на модели токсического гепатита// Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Коло-проктологии. (Приложение №18). - М. - 2003.-Т.ХШ .-№1 .-С.34.

9. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Активность цеолитсодержащего трепела при энтеросорбционной детоксикации опытных животных в эксперименте// Журнал «Известия НАНИ ЧР». - Чебоксары.-2003.-№2.-С.46- 52.

10. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Биологическая активность цеолитсодержащего трепела в эксперименте на морских свинках// Журнал «Известия НАНИ ЧР». - Чебоксары. - 2003. - №2. - С. 53 - 59.

11. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Токсический гепатит в эксперименте и его терапия цеолитсодержащим трепелом// Медицинский академический журнал (Приложение №4) - С.-П6.-2003. - Т.З.-№3.-С.25-26.

12. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н., Туктанов Н.В. Экспериментальная терапия токсического гепатита// Росс. журн. Гастроэнтерологии, Гепатоло-гии, Колопроктологии. (Приложение №21)- М. -2003.-T.XIII. - №5.- С. 133.

13. Колотилова М.Л., Павлова Е.А., Иванов Л.Н. Цеолитсодержащий трепел в эксперименте и в клинике лечения больных язвенной болезнью желудка и двенадцатиперстной кишки// Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. (Приложение №21) - М. - 2003. - Т.ХН. -№5.-С. 133.

14. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Динамика изменения секреторной функции желудка при остром гиперацидном гастрите и в условиях его экспе-

риментальной терапии// Матер. 2-го Международ, симпозиума «Проблемы ритмов в естествознании». - М. - 2004. - С. 1S6 - 1SS.

15. Ivanov L.N., Kolotilova M.L. Dynamics in the chauge of gastric secretary function during acute hyperacidic gastritis and under its experimental therapy // Матер. 2-го Международ, симпозиума «Проблемы ритмов в естествознании». - М. - 2004. - С. 1SS - 1S9.

16. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Экспериментальная терапия острого токсического гепатита подопытных кроликов цеолитсодержащим трепелом// Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. - М.

-2004.-T.XIV.-№l.-C. 15.

17. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Экспериментальный гиперацидный гастрит в условиях терапии цеолитсодержащим трепелом// Здравоохранение Башкортостана (спец. вып. №4). -Уфа. -2004. -№4. -С. 107-10S.

1S. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н., Ванюкова В.В. Секреторная функция желудка при остром гиперацидном гастрите и в условиях экспериментальной терапии цеолитсодержащим трепелом// Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктологии. (Приложение №23). - М. -2004.-T.XIV.-№5.-C. 126.

19. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Острый гиперацидный гастрит в условиях его экспериментальной терапии// Тез. докл. 3-го Рос. конгресса по па-тофизиол. «Дисрегуляционная патология органов и систем». -М.-2004.-С^6.

20. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Цеолитсодержащий трепел в гепато-и гастроэнтерологии. Монография. - Чебоксары. - 2004. - 140 с.

21. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л., Романова Л.П. Секреторная функция желудка при остром гиперацидном гастрите и в условиях его экспериментальной терапии// Матер. 19 Всероссий. конф. с международн. участием «Физиология и патология пищеварения» - Сочи. - 2004. -С. 37- 39.

22. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Биологическая активность цеолит-содержащего трепела (ЦТ) в эксперименте// Ж. Вестник Чувашского университета. - Чебоксары. - 2004. - С. 30 - 3S.

23. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Нарушение секреторной функции желудка при остром гастрите и его экспериментальная терапия. Метод, указания к лабораторной работе. - Чебоксары. - 2004. - 12. с.

24. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Фадеев А.С., Фадеева Н.К. Экспериментальная терапия язвы желудка подопытных кроликов цеолитсодержа-щим трепелом// Сб.ст. Международн. конф. «Новые медицинские технологии и квантовая медицина». - М. - 2005. - С. 207.

25. Колотилова М.Л., Иванов Л.Н. Цеолитсодержащий трепел в экспериментальной терапии острого токсического гепатита подопытных кроликов// Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии, Колопроктоло-гии. (Приложение №24). - М. - 2005. - Т.ХУ. - С. 94.

26. Колотилова М.Л. Лечение язвы желудка экспериментальных животных цеолитсодержащим трепелом // Жур. Морфологические ведомости. Москва - Берлин. - 2005. - №1-2. - Раздел 8. Мат. Российской научно-практической конф. с международным участием «Сахарный диабет и его осложнения». - Саранск. - 2005. - С. 213.

27. Колотилова М.Л. Экспериментальная терапия острой язвы желудка подопытных кроликов цеолитсодержащим трепелом// Матер, научно-практ. конференции «Озонотерапия и механизмы ее действия. Озон в биологии и медицине» - Чебоксары. - 2005. - С. 40 - 41.

28. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л., Фадеев А.С., Корнилова Н.К. Язва желудка в эксперименте и ее лечение цеолитсодержащим трепелом// Матер, научно-практ. конференции «Озонотерапия и механизмы ее действия. Озон в биологии и медицине» - Чебоксары. - 2005. - С. 41 - 42.

29. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Цеолитсодержащий трепел в экспериментальной терапии острого токсического гастрита (СС14) подопытных кроликов// Сб. научных трудов, посвящен. 10-летию открытия Республиканского медицинского центра МЗ ЧР «Современные технологии в медицине». -Чебоксары. - 2005. - С. 174 - 175.

30. Колотилова М.Л. Терапия язвы желудка подопытных животных це-олитсодержащим трепелом// Сб. научных трудов, посвящен. 10-летию открытия Республиканского медицинского центра МЗ ЧР «Современные технологии в медицине». - Чебоксары. - 2005. - С. 175 - 176.

31. Иванов Л.Н., Колотилова М.Л. Лечение экспериментального гипе-рацидного гастрита цеолитсодержащим трепелом// Сб. трудов №8, «Достижения и проблемы клинической медицины», посв. 60-летию Победы в Велик. Отечест. Войне.-Чебоксары.-2005.-С. 114- 115.

32. Колотилова М.Л. Экспериментальная терапия токсического острого гастрита у крыс цеолитсодержащим трепелом// Казанский мед. журнал. - Казань. - 2005. - №4. - С. 297 - 299.

Подписано в печать 13.07.2005. Формат 60x84/16. Объем 1,0 п.л. Печать оперативная. Тираж 100 экз. Заказ № 454.

Отпечатано в типографии Чувашского государственного университета имени И.Н.Ульянова 428015 Чебоксары. Московский проспект, 15

15 ИЮЛ2CG5 /а«««""- ,

* «awiw« ;

Актуальность темы. Патологии печени и органов пищеварения являются социально-экономической и клинико-эпидемиологической проблемой здравоохранения всех стран мира (В.Т. Ивашкин, T.JI. Лапина, 2001; A.B. Охлобыстин, 2001; В.Г. Радченко с соавт., 2002; M.A.L. Deltenre, 1997, и др.).

Проблема дестабилизирующего гомеостаз человека влияния антропогенных факторов в последние десятилетия приобретает особо значимый характер, о чем свидетельствует ряд отечественных и зарубежных исследований (Л.Н. Иванов с соавт., 1983, 1996, 2000; К. Рейли, 1985; В.Эйхлер, 1985, 1997; Р.Д. Габович с соавт., 1987; С.Ю. Каганов с соавт., 1992; P.M. Хаитов с соавт., 1995; Yu. L. Mizernitski et al., 1996; H.C. Журавская, 1998; Л.С. Леме-шонок с соавт., 2000; A.B. Ефремов с соавт., 2000; A.B. Баранов, 2000; М.Г. Китов с соавт., 2000). Значительное место в ней занимают вопросы изучения влияния экотоксикантов, то есть ксенобиотиков антропогенного происхождения, на здоровье населения и разработки эффективных методов защиты. В мире, в том числе в нашей стране, разрабатываются все новые виды химических и биологических средств борьбы с вредителями растений и сорняками. Широко применяются химические средства защиты растений, такие, как гербициды, пестициды, фунгициды, акарициды, инсектициды, дефолианты, протравители, и, естественно, население вынуждено прямо и косвенно контактировать с ними, что увеличивает вероятность острых и хронических отравлений организма в среде с высокой химической нагрузкой.

Как считает H.A. Агаджанян (1989), в последние десятилетия в связи с общим осложнением антропо- экологической обстановки особенно важное значение приобретают проблемы адаптации и экологии человека. Уровень здоровья популяции во многом определяется эколого-физиологическими особенностями адаптации человека к резко изменяющимся условиям современной жизни. Методология экологических исследований человека, считает он, должна включать и теоретический аспект: изучение физиологических механпзмов адаптации к различным природно-климатическим и производственным условиям, моделирование процессов взаимодействия организма человека и факторов среды, а также управления трудовыми ресурсами на основе максимального снижения трудопотерь, обусловленных влиянием на организм факторов окружающей среды.

Первым патогенетическим звеном воздействия химических факторов независимо от химической природы является мембраноповреждающий эффект, сопровождающийся расстройством функции каскада митохондриаль-ных и микросомальных ферментов-оксигеназ, гидролаз, участвующих в де-токсикации и элиминации патогенного начала, а потом следуют остальные процессы, реализуемые на клеточном, органном уровнях и организмом в целом (A.C. Козлюк с соавт., 1987).

По мнению ряда ученых (P.M. Хаитов с соавт., 1998), особое внимание следует уделять хлор- и фосфорорганическим соединениям, составляющим основу ряда пестицидов и гербицидов.

В литературе есть данные о том, что активность искусственных цеолитов (Ci.; С2; С3) при энтеросорбционной детоксикации опытных животных в эксперименте не уступает активности активированного угля (A.A. Раков с соавт., 1996). Для исследования энтеросорбционной детоксикации трепела в эксперименте на морских свинках в качестве токсиканта мы использовали четыреххлористый углерод. В этой связи нас заинтересовал цеолитсодержа-щий минерал - трепел Первомайского месторождения Алатырского района Чувашской Республики. По литературным данным, содержание цеолита (клиноптилолита) в данном трепеле составляет 24-30%. Цеолит обладает пористой кристаллической структурой. Благодаря строго определенным размерам пор и каналов цеолиты обладают адсорбирующими свойствами для органических и неорганических веществ, газов и ионообменной активностью. Т.Е. Григорьева, Г.И. Иванов (1998), исходя из физико-химических свойств цеолитсодержащего трепела отмечают перспективность использования его в ветеринарии и животноводстве.

Ю.Н. Шевченко (2002), исследовал кремнийорганические сорбенты, в том числе эитеросгель и комплектные препараты на его основе для обоснованного применения энтеросорбции в медицине. По его данным эитеросгель, в отличие от известных углеродных энтеросорбентов и высокодесперстных кремнеземов, характеризуются явной селективностью, ибо наиболее активно сорбируют среднемолекулярные токсические метаболиты, практически не связывает электролиты (ионы) и высокомолекулярные вещества (М.в.> 10000). Эитеросгель при внутреннем употреблении проявляет активное детоксирующее действие. Препараты адсорбируют из кишечного содержимого и крови (чрезмембранно из ворсинок слизистой оболочки кишечника) токсические вещества, продукты незавершенного метаболизма, инкорпорированные радионуклеиды, приостанавливает проявление токсикозов.

Исследования, проведенные Л.Н. Ивановым с соавт. (2000), М.Л. Коло-тиловой (2000; 2002) позволили сделать заключение, что цеолитсодержащий трепел как энтеросорбент и детоксикант может быть исследован в дальнейшем в условиях клиники при отравлениях различными токсинами и ядами.

В литературе появились данные о применении трепела для лечения язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки (Ж.Х. Васильев с соавт., 1998; Л.С. Семенова, 1999; Е.А. Павлова, 1999, и др.). Однако все эти клинические исследования и наблюдения проводились без предварительного экспериментального исследования на подопытных животных.

Следовательно, весьма актуально исследование цеолитсодержащего трепела как фактора, влияющего на физиологию органов пищеварения и патофизиологию гастритов и язвенной болезни желудка и 12-перстной кишки в эксперименте, тем более что в России до 1,5 - 5% взрослого населения страдают язвенной болезнью (В.Х. Василенко с соавт., 1987).

В связи с высокой заболеваемостью и смертностью от язвенной болезни, проблема язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки является не только медицинской, но и важной медико-социальной проблемой (П.Б. Кириленко, М.Г. Кириленко, 1989).

По данным В.Т. Ивашкина, С.И. Рапопорта (2004), распространенность болезней органов пищеварения находятся на 3-м месте после болезней органов дыхания и кровообращения, при этом выявляется тенденция к их росту, а 60% страдающих этими заболеваниями относятся к лицам трудоспособного возраста.

Цель исследования: целью настоящих исследований явилось изучение сорбционных свойств и механизмов детоксикации подопытных животных цеолитсодержащим трепелом при остром токсическом гепатите, а также изучение механизмов экспериментальной терапии на моделях токсического ги-перацидного гастрита, ацетатной острой и хронической язвы у подопытных животных. Для достижения данной цели ставились следующие задачи.

Задачи исследования:

1. Изучить динамику изменения реактивности морских свинок и показателей внешнего дыхания при иероральном введении цеолитсодержащего трепела гематологическими, биохимическими, ферментологическими, фагоцитарными, функциональными и гистологическими методами исследования.

2. Изучить влияние пероралыюго введения цеолитсодержащего трепела на высшую нервную деятельность, на морфофункциональное состояние некоторых тканей организма, а также состояния перекисного окисления лили до в (ПОЛ) подопытных кроликов.

3. Изучить степень отравления подопытных кроликов при иероральном отравлении их четыреххлористым углеродом гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования в качестве контрольной группы.

4. Изучить степень отравления подопытных кроликов при перораль-ном их отравлении четыреххлористым углеродом на фоне пероралыюго введения цеолитсодержащего трепела гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.

5. Изучить влияние цеолитсодержащего трепела на функциональное и морфологическое состояние слизистой оболочки желудка подопытных крыс.

6. Изучить влияние перорального введения цеолитсодержащего трепела на кислотность желудочного сока при воспроизведении острого ацетатного гиперацидного гастрита у подопытных крыс.

7. Изучить терапевтическое действие перорального введения цеолитсодержащего трепела на развитие острой ацетатной язвы желудка по Окабе у подопытных кроликов на фоне контрольной группы.

8. Изучить терапевтическую эффективность цеолитсодержащего трепела при лечении экспериментальной хронической язвы желудка по Окабе у подопытных кроликов.

Научная новизна. Впервые в эксперименте исследованы механизмы положительного биологического действия цеолитсодержащего трепела на морских свинок и кроликов с применением гематологических, биохимических, ферментологических, функциональных и гистологических методов исследования.

Впервые на модели острого экспериментального токсического гепатита подопытных кроликов изучены энтеросорбционные свойства цеолитсодержащего трепела и механизмы детоксикации организма.

Впервые в экспериментальной гастроэнтерологии на модели острого токсического гиперацидного гастрита на подопытных крысах изучены механизмы положительного терапевтического действия цеолитсодержащего трепела.

Впервые на модели «ацетатной» язвы желудка подопытных кроликов комплексно изучены механизмы терапевтического эффекта цеолитсодержащего трепела.

Впервые экспериментально показана возможность использования цеолитсодержащего трепела в клинике для детоксикации организма при отравлениях экзогенными токсическими веществами, в частности ССЦ и использования в комплексной терапии острого гиперацидного гастрита и язвы желудка.

Внсдрспнс в практику. Изданы монографии «Цеолитсодержащий трепел в медицине» - Чебоксары — 2003, 119 е., «Цеолитсодержащий трепел в гепато- и гастроэнтерологии» - Чебоксары - 2004, 140 с. По материалам исследований в 2004 году изданы Методические указания на кафедре патологической физиологии медицинского факультета Чувашского госуниверситета «Нарушение секреторной функции желудка при остром гастрите и его экспериментальная терапия». Кроме того, материалы данных исследований используются в учебном процессе на кафедрах токсикологии, профилактической медицины и терапии.

Практическая значимость. Разработанная нами методика перораль-ного введения четыреххлористого углерода (СС14) позволяет получить модель острого токсического поражения печени, о чем свидетельствуют лабораторные, биохимические, ферментологические, гистологические методы исследования и данная методика может быть рекомендована для разработки экспериментальных методов профилактики и терапии при пероральном поступлении экотоксикантов.

Цеолитсодержащий трепел рекомендуется для улучшения физиологических показателей лабораторных животных при их содержании в виварии. Результаты исследования цеолитсодержащего трепела на моделях острого токсического гиперацидного гастрита и язвы желудка позволяют рекомендовать его в комплексном лечении в клинике гиперацидного гастрита и язвенной болезни желудка.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на Пятой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2000), на Седьмой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2002), на Научно-практической конференции «Семейная медицина в современных условиях» (г. Чебоксары, 2002), на Восьмой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2003), Девятой Российской Гастроэнтерологической Педеле (г. Москва, 2003), на Втором Международном Симпозиуме «Проблемы ритмов в естествознании» (г. Москва, 2004), на Девятой Российской коиференции «Гспатология сегодня» (г. Москва, 2004), на Межрегиональной конференции, посвященной 70-летшо кафедр патологической анатомии и патофизиологии БГМУ (г. Уфа, 2004), на Десятой Российской Гастроэнтерологической Неделе (г. Москва, 2004), на Третьем Российском Конгрессе по патофизиологии с международным участием (г. Москва, 2004), на 19-ой Всероссийской научной конференции с международным участием «Физиология и патология пищеварения» (г. Сочи, 2004), на Десятой Российской конференции «Гепатология сегодня» (г. Москва, 2005), на XI Международной конференции «Новые медицинские технологии и квантовая медицина» (г. Москва, 2005).

Положения, выносимые на защиту.

1. Цеолитсодержащий трепел при пероральном его введении в использованных нами дозах интактным морским свинкам, кроликам оказывает положительное биологическое действие, что доказано гематологическими, биохимическими, ферментологическими, функциональными и гистологическими методами исследования.

2. Данная методика с пероральным введением гепатотропного яда (ССЦ) кроликам вызывает острый токсический гепатит, что подтверждается гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.

3. Пероральное введение цеолитсодержащего трепела подопытным кроликам с острым токсическим гепатитом, обеспечивает значительную эн-теросорбционную детоксикацию, что подтверждено гематологическими, биохимическими, ферментологическими и гистологическими методами исследования.

4. Пятикратное пероральное введение цеолитсодержащего трепела подопытным крысам достоверно снижает развитие острого гиперацидного гастрита по данным р! 1-метрии и гистологических методов исследования.

5. Двенадцатикратное пероральное введение цеолитсодержащего трепела при воспроизведении острой ацетатной язвы по Окабе у подопытных кроликов по биохимическим и гистологическим показателям достоверно снижает степень выраженности перекисного окисления липидов, существенно снижает степень развития язвы и вызывает ускорение заживления экспериментальной язвы желудка, сохраняя явления гастрита.

6. Двенадцатикратное пероральное введение цеолитсодержащего трепела при воспроизведении хронической язвы желудка по Окабе у подопытных кроликов по биохимическим и гистологическим показателям статистически достоверно снижает выраженность перекисного окисления липидов и у всех животных существенно ускоряет заживления язвы до полного формирования слизистой оболочки.

Публикации по теме диссертации.

Материалы диссертации отражены в 32 опубликованных научных работах.

Объем и структура диссертации.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, 7 глав собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций и списка литературы, содержащего 209 отечественных и 51 иностранного автора. Диссертация изложена на 182 страницах машинописи, иллюстрирована 22 таблицами, 17 рисунками и 3 диаграммами.

ВЫВОДЫ

1. Параметры динамики внешнего дыхания подопытных морских свинок в динамике введения цеолитсодержащего трепела свидетельствуют о том, что он не оказывает отрицательного воздействия на внешнее дыхание исследованных животных, а обладает энтеросорбционной, детоксикационной и положительной биологической активностью и как детоксикант может быть исследован в клинике гепато- и гастроэнтерологии.

2. Цеолитсодержащий трепел не оказывает токсического действия на функциональное состояние высшей нервной деятельности подопытных кроликов и морфологическое состояние желудка и печени.

3. Пятикратное пероралыюе введение четыреххлористого углерода кроликам сопровождается статистически достоверным увеличением абсолютного количества лейкоцитов, общего билирубина, активности ами-нотрансфераз (АлАТ, АсАТ), щелочной фосфатазы, статистически достоверным снижением абсолютного количества эритроцитов, общего белка, альбуминов, общего холестерина и выраженными гистологическими сдвигами в ткани печени, а также резким снижением показателей регенераторных процессов в печени.

4. Пятикратное пероралыюе введение четыреххлористого углерода на фоне перорального введения цеолитсодержащего трепела подопытным кроликам сопровождалось по сравнению с результатами 1-й, контрольной серии опытов на кроликах, статистически достоверно низким уровнем абсолютного количества лейкоцитов, общего билирубина, активности аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ), щелочной фосфатазы и статистически достоверно высоким уровнем общего белка, альбуминов, общего холестерина, а также менее выраженными, чем 1-й, контрольной серии опытов, гистологическими изменениями, в том числе улучшением регенераторных процессов в печени.

5. Пятикратное пероралыюе введение четыреххлористого углерода подопытным кроликам вызывает достоверное компенсаторное повышение буферной емкости всех исследованных антиоксидантов, как ответная реакция всей антиоксидантной системы на индукцию перекисного окисления липи-дов.

6. У подопытных кроликов с пероральным введением четыреххлори-стого углерода на фоне перорального введения цеолитсодержащего трепела, интенсивность перекисного окисления липидов была достоверно ниже, чем у животных контрольной серии, что свидетельствует об энтеросорбционной, детоксикационной, положительной биологической активности цеолитсодержащего трепела, как фактора, защищающего организм от гепатоцитолиза при воздействии ССЦ.

7. Внутрижелудочные рН-метрические и гистологические методы исследования позволили установить гиперацидиое состояние и глубокий гипе-рацидный гастрит у подопытных крыс при однократном введении уксусной кислоты.

8. Пероральное введение цеолитсодержащего трепела в течение пяти дней крысам с однократным введением уксусной кислоты позволило статистически достоверно снизить выраженность гиперацидоза и гиперацидного гастрита у подопытных крыс, по сравнению с контрольными животными (однократное введение уксусной кислоты).

9. Экспериментальное воспроизведение острой язвы желудка по Окабе сопровождалось статистически достоверным повышением уровня общих липидов, повышением интенсивности ПОЛ, малоновых диальдегидов, компенсаторным повышением емкости всех имеющихся антиоксидантов, достоверным снижением уровня общего холестерина, по сравнению с интактными животными, язвообразованием у всех подопытных животных и развитием глубокого гастрита.

10. Пероральное введение цеолитсодержащего трепела в течение 12 дней при моделировании острого ульцерогенеза по Окабе приводит к статистически достоверному снижению уровень общих липидов, интенсивности процессов перекисного окисления липидов, уровня малоновых диальдегидов, буферной емкости всех имеющихся антиоксидантов, к статистически достоверному повышению уровень общего холестерина, по сравнению с показателями подопытных животных 2-й серии (экспериментальный ульцерогенез), а также к существенному, статистически достоверному снижению развития острого ульцерогенеза (у 53% животных язва не обнаружена), к ускоренному заживлению язвы при ее возникновении, что является свидетельством значительной антиульцерогенной эффективности ЦТ.

11. Пероральное введение цеолитсодержащего трепела с 12-го по 24-е сутки опытов подопытным кроликам с хронической язвой по Окабе приводит к статистически достоверному снижению интенсивности процессов ПОЛ, по сравнению с подопытными животными 2-й серии в те же сроки (экспериментальный ульцерогенез по Окабе), к полной ликвидации язвенного процесса, а также к значительному улучшению морфологической структуры слизистой оболочки желудка.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Разработанная нами методика воспроизведения острого токсического гепатита путем перорального введения ССЦ рекомендуется в качестве модели для исследования механизмов развития токсического гепатита и разработки лечебных методов.

2. Модифицированная нами методика для воспроизведения острого токсического гиперацидного гастрита у крыс рекомендуется для исследования механизмов развития токсического гиперацидного гастрита и разработки новых методов терапии и терапевтической эффективности тех или иных препаратов.

3. Цеолитсодержащий трепел в использованных нами дозах, как обладающий положительным биологическим эффектом, свойствами энтеросор-бента рекомендуется для клинических исследований при экзогенных отравлениях химическими гепатотропными ядами.

4. Цеолитсодержащий трепел, как энтеросорбент и антитоксикант рекомендуется также для клинических исследований его терапевтической эффективности при токсических гастритах у больных.

5. Цеолитсодержащий трепел, как минерал с богатейшим составом микро- и макроэлементов с антитоксической активностью, как энтеросорбент рекомендуется для дальнейших исследований в качестве терапевтического средства для лечения больных с острой и хронической язвой желудка.

156