Автореферат и диссертация по медицине (14.00.27) на тему:Лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран с фотосенсибилизатором хлоринового ряда

ДИССЕРТАЦИЯ
Лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - диссертация, тема по медицине
АВТОРЕФЕРАТ
Лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - тема автореферата по медицине
Азимшоев, Акрам Марватшоевич Москва 2009 г.
Ученая степень
кандидата медицинских наук
ВАК РФ
14.00.27
 
 

Автореферат диссертации по медицине на тему Лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран с фотосенсибилизатором хлоринового ряда

ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ НАУЧНЫЙ ЦЕНТР ЛАЗЕРНОЙ МЕДИЦИНЫ ФЕДЕРАЛЬНОГО МЕДИКО-БИОЛОГИЧЕСКОГО АГЕНТСТВА

На правах рукописи

АЗИМШОЕВ АКРАМ МАРВАТШОЕВИЧ

ЛАЗЕРНАЯ ФОТОДИНАМИЧЕСКАЯ ТЕРАПИЯ ГНОЙНЫХ РАН С ФОТОСЕНСИБИЛИЗАТОРОМ ХЛОРИНОВОГО РЯДА

14.00.27-хирургия

003460150

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

л г'' Р '

2 с V11' "

МОСКВА 2008 г.

003460158

Работа выполнена в ФГУ «Государственный научный центр лазерной медицины» Федерального медико-биологического агентства.

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Дербенев Валентин Аркадьевич

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор Липатов К.Е.

доктор медицинских наук Шин Ф.Е.

Ведущее учреждение - ФГУ институт Хирургии им. А.В.Вишневского

Защита диссертации состоится «_»_2009 г. в_часов на

заседании диссертационного совета Д 208 .022.01 при ФГУ «Государственный научный центр лазерной медицины» Федерального медико-биологического агентства по адресу. 121165, г. Москва, ул. Студенческая, дом 40 , строение 1.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ ГНЦ лазерной медицины Федерального медико-биологического агентства.

Автореферат разослан «_» декабря 2008 г.

Учёный секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук

Данилин Н.А.

Актуальность проблемы. Лечение гнойно-воспалительных заболеваний и гнойных ран мягких тканей считается одним из важнейших направлений в современной хирургии. Несмотря на большие достижения хирургической науки, обусловленные, прежде всего, улучшением диагностики, широким применением антибиотиков и совершенствованием оперативной техники и анестезии, лечение гнойно-воспалительных заболеваний мягких тканей остается чрезвычайно сложной и далеко не решенной проблемой (Гостищев В.К. и соавт. 1980; Шапошников Ю.Г., Табатадзе К.Г. и соавт. 1991). Гнойная инфекция является одним из самых серьёзных осложнений как по летальности, так и по материальным затратам (Стручков В.И. 1983; Светухин A.M. и соавт. 2003). Для преодоления недостатков сложившейся ситуации в профилактической и лечебной антибактериальной терапии хирургической инфекции и правильного планирования лечебных мероприятий изучались факторы риска, менялись антибиотики и методики их введения. Однако число раневых осложнений заметно не уменьшалось (Ахмедов И.В. 1999). Увеличение частоты нагноений послеоперационных ран можно объяснить появлением штаммов микроорганизмов, устойчивых к воздействию антибактериальных препаратов, изменением иммунобиологической реактивности организма, вызванным экологическими факторами и нерациональным применением антибиотиков. Сложившаяся ситуация требует поиска новых методов лечения.

В настоящее время во всем мире интенсивно развивается относительно новая медицинская технология - фотодинамическая терапия (ФДТ) (В.М. Мешков, 2000; R.Bays et al., 1997; S. Navean et/. 1996 и др.). Суть метода состоит в том, что многие биологические объекты (раковые клетки, микробы, клетки крови) накапливают определенные красители -фотосенсибилизаторы, в результате чего они становятся чувствительными к воздействию энергии света, а также низкоинтенсивного лазерного излучения

соответствующей длины волны. В сенсибилизированных тканях и клетках развивается фотохимическая реакция с выделением синглентного кислорода свободных радикалов и высокоактивных биологических объектов, губительно действующих, в частности, на опухолевые клетки, микроорганизмы и т.п. В связи с чем, ФДТ нашла довольно широкое применение для лечения рака кожи и других новообразований (O.K. Скобелкин и соавт. 1992. 1993; В.И.Чиссов и соавт., Dougherty N.J., 1983; Spikes J.D. et al., 1987). В последние годы появились научные публикации о применении ФДТ для лечения гнойных ран, в которых отмечены преимущества ФДТ по сравнению с традиционной терапией и, в частности, выраженный антибактериальный и противовоспалительный эффект (П.И.Толстых и соавт., 1999,2003,2006; Grossero М.Н. et al, 1991).

Эффективность ФДТ не зависит от спектра чувствительности патогенных микроорганизмов к антибиотикам. Она оказалась губительной даже для антибиотикорезистентных штаммов золотистого стафилококка, кишечной палочки и других микроорганизмов (Malik Z, et al., 1986). В тоже время, противомикробное действие ФДТ не убывает со временем при длительном применении, при лечении хронических инфекционных процессов. У патогенных микроорганизмов не появляется устойчивости к ФДТ (Malik Z. et а!.,1986; Wilson М., et al., 1994). Повреждающее действие ФДТ на микроорганизмы вызывается синглентным кислородом и свободными радикалами. Именно поэтому развитие резистентности к губительному действию ФДТ на микроорганизмы не отмечается. Чрезвычайно важным фактором является то обстоятельство, что бактерицидный эффект не имеет системного, губительного действия на нормальную микрофлору организма (Е.Ф. Странадко и соавт., 1999; У.М. Корабаев и соавт., 2001 и др.). При этом фотодинамическое повреждение носит локальный характер, а бактерицидный эффект лимитируется зоной лазерного облучения сенсибилизированных тканей, это позволяет избежать при местной ФДТ побочного эффекта, наблюдаемого при применении

антибиотиков и антисептиков для лечения хирургической инфекции. По данным Толстых П.И. и соавт. (1999, 2006) ФДТ гнойных ран с производными гематопорфирина оказывает положительное воздействие на течение раневого процесса, что проявляется в выраженном антибактериальном действии, ускорении очищения ран от гнойно-некротического детрита и сокращении сроков заживлений раневых дефектов. Несмотря на перечисленные выше положительные эффекты, работы по ФДТ гнойных ран с использованием фотосенсибилизаторов первого поколения единичные, не использовались фотосенсибилизаторы хлоринового ряда, данное направление находится на стадии накопления клинического опыта и в настоящее время не нашло широкого применения в гнойной хирургии.

Исходя из этого, были определены цель и задачи исследования.

Цель исследования; Улучшить результаты лечения больных с гнойными ранами мягких тканей путем использовании лазерной фотодинамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда -фотодитазином.

Задачи исследования

1. Разработать и внедрить в хирургическую практику новый метод лечения гнойных ран мягких тканей с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда - фотодитазином.

2. Дать сравнительную оценку течения раневого процесса у больных с гнойными ранами мягких тканей при использовании лазерной фотодинамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда -фотодитазином.

3. С помощью гистологических и цитологических методов изучить основные закономерности течения репаративного процесса в гнойных ранах при использовании лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином.

4. Изучить ближайшие и отдаленные результаты лечения больных с

гнойными ранами с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином.

Научная новизна

Впервые разработан новый метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда - фотодитазином (патент РФ №. 2282471 от 27.08.2006 г), который является патогенетически обоснованным и высоко эффективным.

По данным клинических, планиметрических, гистологических, гистохимических и цитологических исследований доказано, что применение лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином способствует сокращению сроков очищения ран от гнойно-некротического детрита, появления грануляций и начала эпителизации в 1,5-2 раза, уменьшению микроциркуляторных нарушений, сокращению стадии альтеративно-экссудативного воспаления, стимулирует раннее созревание и фиброзирование грануляционной ткани.

Установлено, что использование лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином является высокоэффективным методом лечения гнойных ран мягких тканей, позволяющим уменьшить количество осложнений заживления и сократить сроки полного заживления гнойных ран на 20,8% по сравнению с традиционным лечением.

Практическая значимость

Использование лазерной фотодинамической терапии с

фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином является высоко эффективным методом местного лечения гнойных ран, позволяющим уменьшить количество осложнений заживления, число повторных операций и сократить сроки полного заживления гнойных ран на 5 - 7 дней по

сравнению с традиционным лечением с хорошим косметическим результатом.

Результаты проведенных клинических, морфологических и бактериологических исследований показали целесообразность и эффективность применения лазерной ФДТ с гелеобразной формой фотосенсибилизатора хлоринового ряда - фотодитазина для лечения гнойных ран независимо от их генеза и локализации. Благоприятное действие лазерной ФДТ с хлориновым производным - фотодитазином на репарагивные и метаболические процессы в тканях ран позволяет рекомендовать использование данного метода в комплексном лечении больных с гнойными ранами.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработанный метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином позволяет существенно снизить количество осложнений заживления ран ив 1,5 раза сократить средние сроки лечения данной категории больных.

2. Лечение гнойных ран с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином способствует сокращению альтеративно-экссудативной фазы раневого процесса, улучшению микроциркуляции в тканях раны, активации фагоцитоза, снижению микробной обсемененности тканей раны, стимулирует регенерацию и эпителизацию, создает благоприятные условия для наложения вторичных швов или выполнения аутодермопластики.

Внедрение в практику

Разработанный метод лечения больных с гнойными ранами используется в отделении хирургической инфекции ФГУ ГНЦ лазерной

s

медицины ФМБА России на базе Государственного Учреждения здравоохранения Городской клинической больницы № 51 Департамента здравоохранения г. Москвы.

Апробация работы

Основные результаты исследования доложены и обсуждены на: Ví-oft Всероссийской конференции с международным участием "Новые технологии в диагностике и лечении хирургической инфекции на основе доказательной медицины", Москва, 2003; первой научно-практической конференцией Северо-Западного региона Российской Федерации с международным участием "Высокие хирургические, лазерные и информационные технологии в медицине Санкт-Петербурга и Северо-Западного региона Российской Федерации: перспективы дальнейшего развития." СПб, 2003; международной научно-практической конференции «Лазерные технологии в медицинской науке и практическом здравоохранении Москва, 2004; IV Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты». Москва, 2005 г; VII Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты». Москва, 2008 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 научных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 10 таблицами, 26 рисунками. Указатель литературы включает 168 источников литературы, в том числе 138 работ иностранных авторов.

Содержание работы.

Для решения поставленных задач исследования было проведено комплексное обследование и лечение 120 больных с гнойными ранами мягких тканей различной этиологии и локализации, находившихся на лечении в Государственном Учреждении здравоохранения Городской клинической больнице № 51 Департамента здравоохранения г, Москвы в период с 2003 по 2008 гг.

Среди обследованных больных мужчин было 50 (43,75%), женщин - 70 (56,25%) в возрасте от 18 до 69 лет. Средний возраст больных в контрольной группе составил 40,3±14,1 лет, а основной - 38,2±14,2 лет.

По нозологическим формам у больных преобладали флегмоны и абсцессы различной локализации - таблица 1.

Таблица 1

Структура гнойной хирургической патологии у больных

№ Нозологические формы заболеваний Общее количество больных Основная группа . Контрольная группа

1. Флегмона 24 11 13

2. Абсцесс 27 14 13

3. Острый гнойный бурсит 15 8 7

4. Нагноившаяся гематома 12 7 5

5. Ушибленная гнойная рана 7 2 5

6. Острый гнойный мастит 11 6 5

7. Карбункул 7 4 3

8. Острый парапроктит 5 3 2

9. Другие 12 5 7

Всего 120 60 60

Следует указать, что сроки от начала заболевания до поступления больных в хирургическое отделение колебались от 4 до 15 суток, в среднем в основной группе они составили 8,8 ±0,9дней, в контрольной группе - 8,9 ±0,9суток.

У большинства больных с гнойными заболеваниями мягких тканей были выявлены сопутствующие заболевания различного характера, в некоторых случаях их было два и более. Следует отметить, что с увеличением возраста частота различных сопутствующих хронических заболеваний у одного пациента возрастает, что свидетельствует о наличии у лиц пожилого и старческого возраста полиморбидности.

Все больные с момента поступления в хирургическое отделение получали комплексное лечение, включающее оперативное вмешательство, антибактериальную терапию, инфузионную, дезинтоксикационную, улучшающую микроциркуляцию терапию, лечение сопутствующих заболеваний.

Все пациенты были оперированы под общим обезболиванием в первые сутки после поступления в стационар. Им была выполнена хирургическая обработка гнойного очага, которая включала широкое вскрытие, эвакуацию детрита, иссечение некротизированных и пропитанных гноем тканей. Брали гной и биоптат тканей в различные пробирки для микробиологических исследований, многократно промывали полость 3% раствором перекиси водорода, осушали, выполняли гемостаз и операцию завершали введением турунд с 1% водным раствором иодопирона.

В зависимости от расположения в мягких тканях гнойные раны были разделены на поверхностные и глубокие. Поверхностные гнойные раны составляли 65% (78 наблюдений), глубокие 35% (48 наблюдений).

Наиболее часто гнойные раны в обеих группах располагались на нижних конечностях - у 48 (40%) больных. На верхних конечностях раны располагались у 32 (26,66%) больных, на туловище у 25 (20,83%) больных, в области головы и шеи у 15 (12.5%) больных.

Площадь гнойных ран у больных в начале лечения составляла от 35 до 400 см2. В основной группе больных в начале лечения средняя площадь ран составляла 92±6,8 см2, в контрольной группе больных - 89±8,2 см2.

Лечение больных с гнойными заболеваниями было комплексным, имело индивидуальный характер, предусматривало воздействие на все звенья заболевания.

До начала лечения у больных была выраженная общая клиническая картина, характеризующаяся гипертермией, слабостью, головными и мышечными болями, тахикардией.

В зависимости от методики проводимого местного лечения гнойных ран все больные были распределены на 2 группы.

В контрольной группе 60 (50%) больным проводили традиционное местное лечение гнойных ран, которое включало в первой фазе раневого процесса, чаще всего, антисептические и антибактериальные препараты в виде жидких и мягких лекарственных форм: мази на гидрофильной или гидрофобной основе, кремы, пенные препараты в аэрозольной упаковке и пленки с антисептиками. Помимо антисептических и антибактериальных препаратов, использовали также препараты с местным противовоспалительным действием (антиоксиданты и препараты с гиперосмолярным действием), а также ферментные препараты.

Во второй и третьей фазах раневого процесса больным накладывали повязки с многокомпонентными мазевыми препаратами на гидрофильно-эмульсионной или гидрофобной основе.

Основную группу составили 60 больных, которым после хирургической обработки гнойного очага традиционное лечение дополняли лазерной фотодинамической терапией. Лазерную ФДТ осуществляли следующим образом. На рану после промывания 3% раствором перекиси водорода и высушивания накладывали фотосенсибилизатор хлоринового ряда - фотодитазин с концентрацией 0.5% в виде геля с экспозицией на 90мин. Затем после смывания с раневой поверхности фотосенсибилизатора

выполняли засвечивание раневой поверхности лазерным излучением полупроводникового лазерного аппарата „АТКУС 2". Аппарат выпускается ЗАО «Полупроводниковые приборы» г. Санкт - Петербург. Сертификат соответствия (Госстандарт РФ № РОСС Ш ИМ15. В00404, № 6053691 и разрешен к применению в медицине Минздравом РФ). Рану облучали лазерным светом с длиной волны 660 нм с плотностью мощности 1.0 Вт/смг. Расстояние от торца световода до раневой поверхности составляло 1 - 2 см при отсутствии теплового дискомфорта у больного. Общее время облучения зависело от площади раневой поверхности и составляло от 15 до 30 мин, плотность энергии за сеанс составляла 25 - 30 ДЖ/см3. У 14 пациентов (23,3%) через сутки после выполнения ФДТ проводили повторный сеанс ФДТ.

Фотосенсибилизатор «Фотодитазин» производится в Научно-производственной фирме ООО «ВЕТА-ГРАНД» в виде геля-пенентратора для наружного применения (регистрационное удостоверение Федеральной службы по надзору в сфере здравоохранения и социального развития № ФС 012А2006/4192-06 от 27.12.06). Фотодитазин - универсальный, единственный в ряду известных фотосенсибилизаторов, применяющихся в медицинской практике препарат, используемый как для флюорестенцентной диагностики, так и для фотодинамической терапии, имеет интенсивный максимум поглощения в области 660-820 нм.

Противопоказаниями к проведению лазерной ФДТ считали наличие злокачественных новообразований, декомпенсацию сердечно-сосудистой деятельности, острое нарушение мозгового кровообращения, печеночно-почечную недостаточность.

Важнейшее значение для определения преимуществ различных методов лечения гнойных заболеваний имеют сроки купирования воспалительных явлений, количество повторных операций в результате прогрессировать процесса, число рецидивов заболевания, средние сроки полного заживления ран, функциональные и косметические результаты.

Дополнение традиционного местного лечения гнойной раны воздействием лазерной ФДТ способствовало более быстрой нормализации общего состояния больных. У больных контрольной группы температура тела нормализовалась в среднем на 3,85±0,4 сутки, использование лазерной ФДТ приводило к более быстрой нормализации температуры тела - в среднем на 2,45±0,3 день (р<0,05). Анализ динамики клинических проявлений показал, что лечение гнойных ран с использованием лазерной ФДТ приводит к быстрому уменьшению перифокальных воспалительных проявлений. Гиперемия окружающих рану тканей разрешалась в течение 1-2 суток, отмечено выраженное уменьшение местного отека в среднем на 2-3 сутки, а инфильтрация в области краев ран сохранялась до 3-4 дня.

Анализируя в целом клинические проявления раневого процесса важно отметить, что после проведения лазерной ФДТ с фотодитазином сократились сроки очищения ран от гнойного детрита и фибринозных масс, а также время появления грануляций и начала эпителизации - таблица 2. В среднем, очищение ран от гнойного детрита и фибринозных масс наступало на 3,8±0,7 день, а появление грануляций выявлено на 3,4±0,6 сутки. На 4Д±0,5 день отмечено начало краевой эпителизации, что достоверно лучше, чем при традиционном лечении (р<0,05).

Таблица 2

Динамика раневого процесса в зависимости от проведенного лечения

Методы лечение Количество больных Средние сроки (сутки)

Очищения ран Появления грануляции Начало краевой эпителизации

ФДТ 60 3,8±0,4* 3,4±0,3* 4,1±0,4*

Традиционн ое лечение 60 6,5±0,7 6,8±0,7 7,5±0,8

♦При уровне значимости р<0,05 по сравнению с контрольной группой

При поступлении все больные имели признаки интоксикации различной степени выраженности, о чем свидетельствовали изменения лейкоцитарной формулы крови: лейкоцитоз, повышение количества

незрелых форм нейтрофилов, появление плазматических клеток, снижение количества моноцитов и лимфоцитов, а также увеличение показателя ЛИИ (до 6,1±0,2 усл. ед.). Увеличение числа незрелых форм нейтрофилов мы рассматривали как проявление напряжения компенсаторных механизмов, обеспечивающих инактивацию токсинов. Снижение количества моноцитов и лимфоцитов, с нашей точки зрения, свидетельствует об угнетении иммунологической системы защиты организма. Через 3 дня после выполнения больным хирургической обработки гнойного очага и проведения комплексной традиционной терапии мы отмечали уменьшение значений ЛИИ - до 2,72±0,15 усл. ед., при дополнительном воздействии на раны ФДТ происходило большее уменьшение показателя ЛИИ - до 1,95±0,12 усл. ед. (Р<0,05). Выявленные изменения свидетельствуют о повышении неспецифической резистентности организма и уменьшении интоксикации. Через 10 суток после операции при комплексном лечении гнойных ран с использованием лазерной ФДТ величина ЛИИ соответствовала нормальным цифрам - 1,04±0,11 усл.ед., в то время как у пациентов контрольной группы оставалась повышенной - 1,82±0,14 усл.ед. (Р<0,05). Значения ЛИИ в основной группе уменьшались быстрее за счет уменьшения нейтрофильного сдвига и увеличения количества моноцитов, лимфоцитов и эозинофилов.

Следует отметить, что у больных, получавших лазерную ФДТ, отмечено снижение количества послеоперационных осложнений. В частности, у больных основной группы ни в одном случае не было образования вторичных некрозов в области дна и краев раны, в то время как среди больных группы сравнения, получавших традиционное лечение, у 4 (6,7%) пациентов на 3-4 сутки выявлено образование вторичных некрозов, что потребовало выполнения им повторных операций - некрэктомий.

У 5 больных обеих групп после очищения ран от гнойно-некротических масс и появления грануляций была выполнена аутодермопластика свободным перфорированным кожным лоскутом. У 4 пациентов основной группы и у 6 больных контрольной группе

произведено наложение вторичных швов на гранулированные раны. У больных, которым в предоперационном периоде проводили лазерную ФДТ на область гнойных ран, приживление свободных расщепленных кожных лоскутов было полным во всех случаях. В контрольной группе больных приживление донорских лоскутов отмечено на 60-80%. После наложения вторичных швов у всех пациентов раны зажили без расхождения кожных краев.

Объективно оценить динамику заживления гнойных ран позволяют планиметрические исследования. Проведенные этапные планиметрические исследования показали, что в группе больных, где для лечения была использована лазерная ФДТ с фотодитазнном, площадь гнойных ран сокращалась быстрее, чем в контрольной группе - таблица 3. Так в основной группе больных площадь гнойных ран сократилась к 10-м суткам на 78,1%, в то время как при традиционном лечении площадь гнойных ран уменьшилась на 62,1% (р<0,05).

Таблица 3

Динамика изменения площади ран у больных

Группа больных Площадь ран (см"*)

1 сутки 3 сутки 7 сутки 10 сутки

Основная группа 92±6,8 64,4± 4,7 43,2±3,1* 20,2±1,4 *

Контрольная группа 89±8,2 65,3±5,7 47,8±3,8 33,8±3,1

*При уровне значимости р<0,05 по сравнению с контрольной группой

Показатели послеоперационного койко-дня в группах различались значительно. Если при традиционном лечении больных с гнойными ранами средний койко-день составил 10, 2±0,9 дней, то у пациентов основной группы, комплексно леченных в послеоперационном периоде с применением лазерной фотодинамической терапии, длительность пребывания в стационаре составила 8,6±0,7 дня (Р <0,05).

Средние сроки полного заживления гнойных ран, включая амбулаторное долечивание, в группе больных, получавших лазерную ФДТ,

были достоверно короче, чем при традиционном лечении и сократились, в среднем, на 5,4 суток или на 20,8% - таблица 4.

Таблица 4

Сроки полного заживления гнойных ран у больных_

Метод лечения больных Средний койко-день (сутки) Сроки заживления ран (сутки)

ФДТ (п=60) 8,6±0,7* 20,6±2,4*

Традиционное • лечение (п=60) 10,2±0,9 26,0±2,7

*При уровне значимости р<0,05

В процессе наблюдения за больными основной группы в течение года ни у одного пациента не было отмечено формирования келоидных или грубых гипертрофических рубцов. Рубцовая ткань не выступала над уровнем кожи, была гладкой, не деформировала кожу и подкожную клетчатку и не была спаянной с подлежащими тканями.

Микробиологические исследования патологического отделяемого из гнойных очагов показали, что ведущее место как в монокультуре, так и в ассоциациях заняли: St. aureus (84,9% и 80,4% соответственно); Str. Pyogenus выделено в монокультуре в 5,7% и в ассоциации 5,8% случаев; анаэробы в 5,7% и 4,7% случаев соответственно.

При количественных микробиологических исследованиях установлено, что до начала лечения у больных обеих групп имелся высокий уровень обсемененности тканей ран, в 1 г ткани ран содержалось в среднем 1x10 мКОЕ. Сразу после проведения ФДТ микробная обсемененность ткани ран не изменялось, а через 1 сутки обсемененность ткани раны микробной флорой уменьшилась до 105'6 КОЕ/г. При традиционном лечении данные показатели не изменялись и составляли 107'9 КОЕ/г. На третьи сутки после ФДТ содержание микробов в 1 г ткани составило 103"5 КОЕ/г, на 7 сутки после выполнения ФДТ в гранулированных ранах этот показатель снизился до 102"4

КОЕ/г, а у 50% больных микрофлора из ткани ран не выделялась. При традиционном лечении в этот же срок показатель микробной обсемененности ткани ран составил 106"7 КОЕ/г, отличалась разнообразием представителей. Полученные результаты свидетельствуют, что ФДТ с фотосенсибилизатором хлоринового ряда «Фотодитазином» более эффективно снижает бактериальную обсемененность тканей ран, чем традиционное лечение.

Морфологические исследования показали, что до хирургической обработки при гистологических исследованиях стенки и дно раны представлены деструктивными некротическими тканями, обильно инфильтрированными полиморфноядерными лейкоцитами, ткани отечны, имеет место венозное и капиллярное полнокровие, стазы, периваскулярные диапедезные и очаговые кровоизлияния.

При традиционном лечении по данным гистологических и цитологических исследований раневой процесс замедлен, долго сохраняются микроциркуляторные нарушения, отек, нейтрофильная инфильтрация, очаги некрозов тканей. При этом воспалительные проявления превалируют над репаративными, заторможены макрофагапьная реакция, нарушены макрофагально-фибробластическое взаимодействие, рост и созревание грануляционной ткани, пролиферация фибробластов и эпителизация.

Гистологическое исследование биоптатов гнойных ран на 3-й сутки после лазерной ФДТ показало значительно большее очищение раневой поверхности от гнойно-некротических масс, чем при традиционном способе лечения, уменьшение признаков микроциркуляторных нарушений. Раневая поверхность представлена фибринозно-лейкоцитарным слоем без бактериальных колоний, под которым выявляется широкий слой грануляционной ткани с большим количеством новообразованных полнокровных беспорядочно расположенных капилляров. Между капиллярами выявляются многочисленные клеточные элементы макрофагального ряда, фибробласты, полиморфноядерные лейкоциты. На границе с подкожной клетчаткой выявляются сформированные пучки

фуксин офильных коллагеновых волокон, свидетельствующие о начальных процессах трансформации грануляционной ткани в фиброзную.

Через 5 суток после ФДТ происходит уменьшение объема фибринозно-лейкоцитарного слоя. Отмечается созревание грануляционной ткани с перестройкой сосудистой архитектоники. Часть сосудов приобретает вертикальную направленность, формируется слой горизонтальных фибробластов. Между полнокровными капиллярами клеточный состав характеризуется увеличением количества макрофагов, фибробластов, а так же полиморфно-ядерных лейкоцитов. На границе с фиброзным слоем формируется слой горизонтальных фибробластов. При окраске толуидиновым синим выявляется метахромазия межуточного вещества грануляционной ткани, свидетельствующая об усилении синтеза гликозоаминогликанов (ГАГ). Происходит контракция раны за счет созревания грануляционной ткани и отмечается краевая эпителизация.

На 7-е сутки происходит более полная эпителизация раневой , поверхности в виде многорядного эпителиального пласта, дифференцирующегося на слои и четко выраженной базальной мембраной. Происходит дальнейшее созревание грануляционной ткани: уменьшается количество капилляров, слой горизонтальных фибробластов приобретает фрагментарный характер, появляются многочисленные пучки зрелых коллагеновых волокон.

К 10-м суткам у всех больных раны практически эпителизированы. В фиброзной ткани сохраняются островки грануляционной ткани с небольшим количеством сосудов, однако, основная масса ее представлена зрелыми фуксинофильными коллагеновыми волокнами. Среди клеточных элементов преобладают фиброциты и фибробласты, встречаются периваскулярные лимфоидные инфильтраты, свидетельствующие о нарастании иммунных процессов.

При цитологическом исследовании через 3 суток после фотодинамического воздействия отмечается значительное уменьшение

микрофлоры в мазках-отпечатках. Содержание нейтрофилов снижается с 93,6% до 80,2% от общего числа клеточных элементов. Отмечается высокое число дегенеративных форм нейтрофилов (57,63±4,8%), связанное с их разрушением под фотодинамическим воздействием. Имеет место увеличение количества макрофагов и моноцитов с фагоцитозом бактерий, тканевого и клеточного детрита. Встречается небольшое количество фибробластов, главным образом юных форм, значительно превышающее их количество в контрольной группе (8,7% по сравнению с 2,2% соответственно). Отмеченные изменения свидетельствуют об активации регенераторных процессов и соответствуют воспалительно-регенеративному типу цитограмм.

На 5 сутки после лазерной ФДТ практически не обнаруживается микрофлоры. Значительно уменьшается количество нейтрофилов (до 68,6±4,4%). Встречается большое количество макрофагов и фибробластов (11,8±2,б% и 13,2% соответственно), что свидетельствует о дальнейшей активации репаративных процессов.

К 7 суткам преобладающим клеточным элементом являются макрофаги и фибробласты (14,8% и 18,8% соответственно), обнаруживаются молодые эпителиальные клетки, что позволяет говорить о регенераторном типе цитограмм.

Проведенные морфологические исследования выявили, что использование лазерной ФДТ с фотосенсибилизатором хлоринового ряда -фотодитазином способствует сокращению экссудативно-альтеративной фазы раневого процесса, уменьшению микроциркуляторных расстройств, быстрому очищению ран от гнойно-некротического детрита, усилению фагоцитарной активности нейтрофилов, активации пролиферации клеточных элементов макрофагального и фибробластического ряда, ангно-и коллагеногенеза, ускоренному созреванию и фиброзированию грануляционной ткани.

20

ВЫВОДЫ.

1. Разработанный новый метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином является патогенетически обоснованным, высоко эффективным, обеспечивающим сокращение альтеративно-экссудативной фазы раневого процесса, сроков гранулирования и полного заживления гнойных ран.

2. По данным клинических и планиметрических исследований доказано, что применение лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином способствует сокращению сроков очищения ран от гнойно-некротического детрита, появления грануляций, начала эпителизации в 1,5 - 2 раза, уменьшению количества осложнений заживления и сроков полного заживления гнойных ран на 5 - 7 дней по сравнению с традиционным лечением.

3. Морфологические исследования показали, что проведение лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда -фотодитазином способствует быстрому купированию воспалительных проявлений, ускорению очищения ран от гнойно-некротического детрита, уменьшению микроциркуляторных расстройств, усилению фагоцитарной активности нейтрофилов, активации пролиферации клеточных элементов макрофагального и фибробластического ряда, ангио-и коллагеногенеза, ускоренному созреванию и фиброзированию грануляционной ткани.

4. Результаты микробиологических исследований показали, что лазерная ФДТ с фотосенсибилизатором хлоринового ряда «Фотодитазином» более эффективно снижает бактериальную обсемененность тканей ран, чем традиционное лечение.

5. Метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином приводит к образованию, мягкого эластичного рубца в более краткие сроки по сравнению с традиционным

лечением и может быть рекомендован к внедрению в широкую клиническую практику.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать в клиническую практику комплексный метод лечения гнойных ран мягких тканей с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином.

1. При поступлении больного в стационар в зависимости от клинической ситуации производят хирургическую обработку гнойного очага.

2. На следующие сутки после операции при наличии выраженного воспалительного процесса и гнойно-фибринозный масс выполняют сеанс фотодинамической терапии. Рану промывают 3% раствором перекиси водовода и накладывают фотосенсибилизатор - фотодитазин с концентрацией 0.5% в виде геля с экспозицией на 90мин. Затем после смывания с поверхности фотосенсибилизатора рану облучают лазерным светом с длиной волны 660 нм, при плотности мощности 1.0 Вт/см2, с плотностью энергии 25 - 30 ДЖ/см2, общее время облучения зависит от площади раневой поверхности. Расстояние от торца световода до раневой поверхности составляет 1 - 2 см при отсутствии теплового дискомфорта у больного. Затем на послеоперационную рану накладывают либо биологически активное раневое покрытие, либо салфетку с 1% водным раствором йодопирона.

Противопоказаниями к проведению лазерной ФДТ является наличие злокачественных новообразований, декомпенсация сердечно-сосудистой деятельности, острое нарушение мозгового кровообращения, печеночно-почечная недостаточность.

3. После очищения раны от девитализированных тканей и появления грануляций производят либо пластическое закрытие ран вторичными швами

или аутодермотрансплантантами, либо проводят лечение под мазевыми повязками до полной эпителизации.

Список опубликованных работ.

1. Дербенев В.А., Толстых М.П., Петрин С.А.,.. Азимшоев A.M. Физические и фотохимические факторы в комплексном лечении гнойных ран VI-я Всероссийская конференция с международным участием. "Новые технологии в диагностике и лечении хирургической инфекции на основе доказательной медицины" Сб. науч. тр. // Москва, 2003. - С.28 - 30.

2. Дзагнидзе Н.С., Дуванский В.А., Петрин С.А.,.. Азимшоев A.M. Воздействие высокоэнергетического лазерного излучения и плазменных потоков на раневую микрофлору у больных с гнойно-некротическими формами диабетической стопы. VI-я Всероссийская конференция с международным участием. "Новые технологии в диагностике и лечении хирургической инфекции на основе доказательной медицины" Сб. науч. тр. // Москва, 2003. - С.30 - 31.

3. Гейниц A.B., Дербенев В.А., Азимшоев A.M. Возможности применения фотосенсибилизатора фотодитазин в комплексном лечении гнойно-некротических поражений стоп у больных сахарным диабетом. Первая научно-практическая конференция Северо-Западного региона Российской Федерации с международным участием."Высокие хирургические, лазерные и информационные технологии в медицине Санкт-Петербурга и СевероЗападного региона Российской Федерации: перспективы дальнейшего развития" Сб. науч. тр. // СПб, 2003. - С. 16 -17.

4. Толстых П.И., Петрин С.А., Дербенев В.А., Азимшоев A.M. Применение фотодинамической терапии в комплексном лечении трофических язв венозной этиологии Первая научно-практическая конференция СевероЗападного региона Российской Федерации с международным участием."Высокие хирургические, лазерные и информационные технологии

в медицине Санкт-Петербурга и Северо-Западного региона Российской Федерации: перспективы дальнейшего развития." Сб. науч. тр. // СПб, 2003,-С. 17-19.

5. Толстых П.И., Дербенев В.А., Гусейнов А.И., Азимшоев A.M., Фотодинамическая и NO-терапия гнойных ран. Материалы международной научно-практической конференции лазерной технологии в медицинской науке и практическом здравоохранении //Лазерная медицина, М., 2004. - Т. 8(3). - С. 150.

6. Дербенев В.А., Елесеенко В.И., Раджабов A.A., Азимшоев А.М Основные механизмы воздействия фотодинамической терапии и воздушно-плазменных потоков в режиме NO-терапия Материалы международной научно-практической конференции лазерной технологии в медицинской науке и практическом здравоохранении // Лазерная медицина, М., 2004. - Т. 8(3). - С. 152.

7. Дербенев В.А.. Азимшоев A.M., Шарифов А.Д. Фотодитазин в комплексном лечении гнойных ран. // Российский биотерапевтический журнал. - 2007.С. 14.

8. Толстых П.И., Дербенев В.А., Азимшоев A.M., Елисеенко В.И. Теоретические и практические аспекты лазерной фотохимии для лечения гнойных ран // Российский биотерапевтическин журнал. - 2008. - №4. - С. 20 -24.

Подписано в печать 22.12.2008

Тираж 100 экз Заказ № 2727

ООО «ПршггХаус» ПЛД № 53-477

Формат 60x84/16 Усл. Печ. 1,2 Тел./факс (499) 148 78 50

 
 

Оглавление диссертации Азимшоев, Акрам Марватшоевич :: 2009 :: Москва

Страницы

Введение

Глава 1. Современное состояние проблемы лечения гнойных ран (обзор литературы) 1.1 Современные представления о течении раневого процесса и основные принципы лечения гнойных ран.

1.2. Использование фото динамической терапии для лечения гнойных ран.

Глава 2. Общая характеристика клинических наблюдений и методов исследований

2.1 Общая характеристика клинических наблюдений

2.2 Методы исследований

Глава 3. Эффективность лечения гнойных ран с использованием лазерной фотодинамической терапии

3.1 Результаты клинических исследований

3.2 Результаты планиметрических исследований

3.3 Результаты микробиологических исследований

3.4 Результаты морфологических исследований 65 Заключение 79 Выводы 85 Практические рекомендации 86 Указатель литературы

Сокращения (абревиатура ) ФДТ - фотодинамическая терапия ФС - фотосенсибилизатор AIF - индуцирующий апоптоз фактор. APAF - фактор 1 активации протеазы апоптоза. (d)ATP - аденозин-5 трифосфат. TNF - фактор некроза опухолей.

AIPcS4 - тетрасульфонатом алюминий (III) фталоцианита.

МФ - макрофаги

HSPs - протеины теплового шока

ДС5 - дентритные клетки

Юг - молекулярный кислород

HSPs - протеин теплового шока

CTL5 - цитотоксические Т-лимфоциты

ROS - реактивные виды кислорода

АРС5 - antigen presenting cells

AI - тетрасульфонат (III) фталоцианина тТНРС - мезо-тетрагидрокси фенилхлорин

8 - дельта

ALA - аминонолевуленовая кислота

PPIX - протопорфирин XI

АпТ - транслокатор аденинового нуклеотида

ДТТ - дитиотреитола

A\j/ - мембранный потенциал

Рс-4 - фталоцианин*

Са2+] - внутриклеточная концентрация Са2+

ER - эндоплазматическая ретикулома

Bel - семейство протеинов

Bak-Bcl - 2 антогонист киллер

Bax-Bcl-2 associated х protein

 
 

Введение диссертации по теме "Хирургия", Азимшоев, Акрам Марватшоевич, автореферат

Лечение гнойно-воспалительных заболеваний и гнойных ран мягких тканей считается одним из важнейших направлений в современной хирургии. Несмотря на большие достижения хирургической науки, обусловленные, прежде всего, улучшением диагностики, широким применением антибиотиков и совершенствованием оперативной техники и анестезии, лечение гнойно-воспалительных заболеваний остается чрезвычайно сложной I и далеко не решенной проблемой [6, 29] раневая инфекция считается одним из самых серьёзных осложнений как по летальности, так и по материальным затратам [18, 16]. Для преодоления недостатков сложившейся ситуации в профилактической и лечебной антибактериальной терапии хирургической инфекции и правильного планирования лечебных мероприятий изучались факторы риска, менялись антибиотики и время их введения. Однако число раневых осложнений заметно не уменьшалось [1]. Увеличение частоты нагноений послеоперационных ран можно объяснить появлением штаммов микроорганизмов, устойчивых к воздействию антибактериальных препаратов, изменением иммунобиологической реактивности организма, вызванным экологическими факторами и нерациональным применением антибиотиков и химиопрепаратов. Сложившаяся ситуация требует поиска новых методов лечения.

В настоящее время во всем мире интенсивно развивается относительно новая медицинская технология - фотодинамическая терапия (ФДТ) [31, 26, 11]. Суть метода состоит в том, что многие биологические объекты (раковые клетки, микробы) накапливают определенные красители - фотосенсибилизаторы, в результате чего они становятся чувствительными к воздействию световой энергии, а также низкоинтенсивного лазерного излучения соответствующей длины волны. В клетках тканей, накопивших фотосенсибилизатор, развивается фотохимическая реакция с выделением синглентных и триплетных форм кислорода, а также свободных радикалов, высокоактивных в отношении биологических объектов и, в частности, для опухолевых клеток, и микроорганизмов и т.п. В связи с чем, ФДТ нашла довольно широкое применение для лечения доброкачественных и злокачественных новообразований [17,28,62,137].

В последние годы появились научные публикации о применении ФДТ для лечения гнойных ран, в которых отмечены преимущества ФДТ по сравнению с традиционной терапией и, в частности, выраженный антибактериальный и противовоспалительный эффект [22, 76, 11]. А именно, эфf фективность ФДТ не зависит от спектра чувствительности патогенных микроорганизмов к антибиотикам. Она оказалась губительной даже для антибиотикорезистентных штаммов золотистого стафилококка, кишечной и синегнойной палочек и других микроорганизмов [106]. В тоже время, противомикробное действие ФДТ не убывает со временем при повторном применении, при лечении хронических инфекционных процессов. У патогенных микроорганизмов не появляется устойчивости к ФДТ [106, 150]. Повреждающее действие ФДТ на микроорганизмы вызывается синглент-ным кислородом и свободными радикалами. Именно поэтому развитие резистентности к губительному действию ФДТ на микроорганизмы маловероятно. Чрезвычайно важным фактором является то обстоятельство, что бактерицидный эффект не имеет системного, губительного действия на нормальную микрофлору организма [19, 20]. При этом фото динамическое повреждение носит локальный характер, а бактерицидный эффект лимитируется зоной лазерного облучения сенсибилизированных тканей, это позволяет избежать при местной ФДТ побочного эффекта, наблюдаемого при применении антибиотиков и антисептиков для лечения хирургической инфекции.

По данным ряда авторов [10, 11, 21, 22] ФДТ гнойных ран с производными гематопорфирина оказывает положительное воздействие на течение раневого процесса, что проявляется в выраженном антибактериальном действии, ускорении очищения ран от гнойно-некротического детрита и сокращении сроков заживлений раневых дефектов. Несмотря на перечисленные выше положительные эффекты, работы по ФДТ гнойных ран с использованием фотосенсибилизаторов первого поколения единичные, не использовались фотосенсибилизаторы хлоринового ряда, данное направление находится на стадии накопления клинического опыта и в настоящее время не нашло широкого применения в гнойной хирургии.

Исходя из этого, были определены цель и задачи исследования.

Цель исследования: Улучшить результаты лечения больных с гнойными ранами мягких тканей путем использовании лазерной фотодинамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда - фотоди-тазином.

Задачи исследования

1. Разработать и внедрить в хирургическую практику новый метод лечения гнойных ран мягких тканей с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда - фотодитази-ном.

2. Дать сравнительную оценку течения раневого процесса у больных с гнойными ранами мягких тканей при использовании лазерной фотодинамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда - фотодита-зином.

3. С помощью гистологических и цитологических методов изучить основные закономерности течения репаративного процесса в гнойных ранах при использовании лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином.

4. Изучить ближайшие и отдаленные результаты лечения больных с гнойными ранами с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином.

Научная новизна

Впервые разработан новый метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фото динамической терапии с фотосенсиблизатором хлоринового ряда - фотодитазином (патент РФ №. 2282471 от 27.08.2006 г), который является патогенетически обоснованным и высоко эффективным.

По данным клинических, планиметрических, гистологических, гистохимических и цитологических исследований доказано, что применение лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда — фотодитазином способствует сокращению сроков очищения ран от гнойно-некротического детрита, появления грануляций и начала эпите-лизации в 1,5 — 2 раза, уменьшению микроциркуляторных нарушений, сокращению стадии альтеративно-экссудативного воспаления, стимулирует раннее созревание и фиброзирование грануляционной ткани.

Установлено, что использование лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином является высокоэффективным методом лечения гнойных ран мягких тканей, позволяющим уменьшить количество осложнений заживления и сократить сроки полного заживления гнойных ран на 20,8 % по сравнению с традиционным лечением.

Практическая значимость

Использование лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда — фотодитазином является высоко эффективным методом местного лечения гнойных ран, позволяющим уменьшить количество осложнений заживления, число повторных операций и сократить сроки полного заживления гнойных ран на 5 - 7 дней по сравнению с традиционным лечением с хорошим косметическим результатом.

Результаты проведенных клинических, морфологических и бактериологических исследований показали целесообразность и эффективность применения лазерной ФДТ с гелеобразной формой фотосенсибилизатора хлоринового ряда — фотодитазина для лечения гнойных ран, независимо от их генеза и лакализации. Благоприятное действие лазерной ФДТ с хло-риновым производным - фотодитазином на репаративные и метаболические процессы в тканях ран позволяет рекомендовать использование данного метода в комплексном лечении больных с гнойными ранами.

Положения, выносимые на защиту:

1. Разработанный метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда — фотодитазином позволяет существенно снизить количество осложнений при заживлении ран и в 1,5 раза сократить средние сроки лечения данной категории больных.

2. Лечение гнойных ран с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда — фотодитазином способствует сокращению альтеративно-экссудативной фазы раневого процесса, улучшению микроциркуляции в тканях раны, активации фагоцитоза, снижению микробной обсемененности тканей раны, стимулирует регенерацию и эпителизацию, создает благоприятные условия для наложения вторичных швов или выполнения аутодермопластики.

Внедрение в практику Разработанный метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей используется в отделении хирургической инфекции ФГУ ГНЦ лазерной медицины ФМБА России на базе Государственного Учреждения здравоохранения Городской клинической больницы № 51 Департамента здравоохранения г. Москвы.

Апробация работы Основные результаты исследования доложены и обсуждены на: VI-ой Всероссийской конференции с международным участием "Новые технологии в диагностике и лечении хирургической инфекции на основе доказательной медицины". Москва, 2003; первой научно-практической конференции Северо-Западного региона Российской Федерации с международным участием "Высокие хирургические, лазерные и информационные технологии в медицине Санкт-Петербурга и Северо-Западного региона Российской Федерации: перспективы дальнейшего развития." СПб, 2003; международной научно-практической конференции «Лазерные технологии в медицинской науке и практическом здравоохранении Москва, 2004; IV Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты». Москва, 2005 г; VII Всероссийской научно-практической конференции «Отечественные противоопухолевые препараты». Москва, 2008 г.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 103 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 2 глав собственных исследований, общего заключения, выводов и практических рекомендаций. Работа иллюстрирована 11 таблицами, 26 рисунками. Указатель литературы включает 168 источников литературы, в том числе 138 работ иностранных, авторов.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Лазерная фотодинамическая терапия гнойных ран с фотосенсибилизатором хлоринового ряда"

ВЫВОДЫ.

1. Разработанный новый метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином является патогенетически обоснованным, высоко эффективным, обеспечивающим сокращение альтеративно-экссудативной фазы раневого процесса, сроков гранулирования и полного заживления гнойных ран.

2. По данным клинических и планиметрических исследований доказано, что применение лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда — фотодитазином способствует сокращению сроков очищения ран от гнойно-некротического детрита, появления грануляций, начала эпителизации в 1,5-2 раза, уменьшению количества осложнений заживления и сроков полного заживления гнойных ран на 5 - 7 дней по сравнению с традиционным лечением.

3. Морфологические исследования показали, что проведение лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином способствует быстрому купированию воспалительных проявлений, ускорению очищения ран от гнойно-некротического детрита, уменьшению микроциркуляторных расстройств, усилению фагоцитарной активности нейтрофилов, активации пролиферации клеточных элементов макрофагального и фибробластического ряда, ангио-и коллагеногенеза, ускоренному созреванию и фиброзированию грануляционной ткани.

4. Результаты микробиологических исследований показали, что лазерная ФДТ с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином более эффективно снижает бактериальную обсемененность тканей ран, чем традиционное лечение.

5. Метод лечения больных с гнойными ранами мягких тканей с применением лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином приводит к образованию мягкого эластичного рубца в более краткие сроки по сравнению с традиционным • лечением и может быть рекомендован к внедрению в широкую клиническую практику.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ.

Результаты проведенных исследований позволяют рекомендовать в клиническую практику комплексный метод лечения гнойных ран мягких тканей с использованием лазерной фотодинамической терапии с фотосенсибилизатором хлоринового ряда - фотодитазином.

1. При поступлении больного в стационар в зависимости от клинической ситуации производят хирургическую обработку гнойного очага.

2. На следующие сутки после операции при наличии выраженного воспалительного процесса и гнойно-фибринозный масс выполняют сеанс фото динамической терапии. Рану промывают 3% раствором перекиси водовода и накладывают фотосенсибилизатор - фотодитазин с концентрацией 0.5% в виде геля с экспозицией на 90мин. Затем после смывания с поверхности фотосенсибилизатора рану облучают лазерным светом с длиной волны 660 нм, при плотности мощности 1.0 Вт/см2, с плотностью энергии 25 - 30 ДЖ/см2, общее время облучения зависит от площади раневой поверхности. Расстояние от торца световода до раневой поверхности составляет 1 - 2 см при отсутствии теплового дискомфорта у больного. Затем на послеоперационную рану накладывают либо биологически активное раневое покрытие, либо салфетку с 1% водным раствором йодопирона.

Противопоказаниями к проведению лазерной ФДТ является наличие злокачественных новообразований, декомпенсация сердечно-сосудистой деятельности, острое нарушение мозгового кровообращения, печеночно-почечная недостаточность.

3. После очищения раны от девитализированных тканей и появления грануляций производят либо пластическое закрытие ран вторичными швами или аутодермотрансплантацией, либо проводят лечение под мазевыми повязками до полной эпителизации.

 
 

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Азимшоев, Акрам Марватшоевич

1. Ахмедов И.В. Эндолимфатическая профилактика гнойно-септических осложнений у хирургических больных: Автореф. дис. д-ра мед. наук.-М.-1999.-37С.

2. Берченко Г.Н. Гистологические и электронно-микроскопические особенности заживления огнестрельных ран больных, леченных традиционными методами // В кн.: Современная огнестрельная травма. — Санкт-Петербург. -1998. С.28.

3. Берченко Г.Н. Морфологические аспекты заживления осложненных ран // Автореферат дисс. на соискание ученой степени докт. мед. наук. — М.- 1997.-43 с.

4. Вялов С.А., Кундоз П., Питте Б. Современные представления о регуляции процесса заживления ран // Анналы пласт, реконстр. и эстет, хир. -1999. -№1. -С.49-56.

5. Вялов С.Л., Пшениснов К.П., Куиндоз П., Монтандон Д., Питте Б. / Современные представления о регуляции процесса заживления ран // Анналы пластической, реконструктивной и эстетической хирургии. — 1999. №1. — С.49-67.

6. Гостищев В.К. Общая хирургия / Монография. — Медицина. 1997.

7. Гостищев В.К. Оперативная гнойная хирургия / Монография. М., Медицина. - 1996. - 415 С.

8. Дербенев В.А. Лазеры, низкочастотный ультразвук и иммобилизованные протеиназы в комплексном лечении гнойных заболеваний мягких тканей / Автореферат дисс. на соискание ученой степени доктора мед. наук. М., 1990.-30 С.

9. Кузин М.И., Костюченок Б.М. Раны и раневая инфекция. — М., 1990.-С. 592.

10. Малюков А.Е. Комплексное лечение гнойных ран с применением биологически активных средств и методов. Автореферат дисс. на соискание ученой степени док. мед. наук. М., 1995.- С 31.

11. Покровская М.П., Макаров М.С. Цтология раневого экссудата как показатель заживления ран. М., 1942. - 43 С.

12. Светухин A.M., Земляной А.Б. Комплексное хирургическое лечение гнойно-некротических форм диабетической стопы. В кн.: Избранныйкурс лекций по гнойной хирургии. Ред. В.Д.Федорова, А.М.Светухина. Москва2003.-С. 153 172.

13. Светухин A.M., Матасов В.М., Истратов В.Г. Клинико-лабораторная оценка течения раневого процесса // Мед. журнал России.-1998.-№ 1-2.-С.38-43.

14. Стручков В.И., Гостищев В.К., Стручков Ю.В. Общая и местная гнойная инфекция // Вестн. АМН CCCP.-1983.-№8.-C.3-7.

15. Странадко Е.Ф., Маркичев Н.А., Рябов М.В. Роль фотодинамической терапии в лечении злокачественных опухолей головы и шеи // Фотодинамическая терапия / Материалы III Всероссийского симпозиума. — Москва.-1999. -С.92-95.

16. Корабоев У.М., Толстых М.П., Дуванский В.А Изучение антибактериальной активности ФДТ на заживление ран // Лазерная медицина. -2001. Том .5. -Вып.2. -С.23-27.

17. Толстых М.П. Комплексная оценка нового раневого покрытия даль-цекс-трипсин-серебро в лечении экспериментальных гнойных ран // Дисс. на соискание учёной степени кандидата мед. наук. -М. -1999. -С.131.

18. Толстых П.И., Иванян А.Н., Дербенев В.А., Рябов В.И., Луцевич Э.В.Практика эффективного использования лазерного излучения в медицине//-М. 1995. - 78 с.

19. Толстых П.И., Клебанов Г.И., Шехтер А.Б., Толстых М.П., Тепляшин А.С. Антиоксиданты и лазерное излучение в терапии ран и трофических язв. М.: Издательский дом « Эко ». 2006 238 С.

20. Чиссов В.И., Скобелкин O.K., Миронов А.Ф., Смирнов В.В. и др. Фотодинамическая терапия и флюоресцентная диагностика злокачественных опухолей препаратом фотогем // Хирургия. -1994. -№ 12. -С.3-6.

21. Клебанов Г.И., Сташкевич И.В, Чичук Т.В., Модестова Т.М., Владимиров Ю.А. // Влияние эндогенных фотосенсибилизаторов на лазер индуцированный прайминг лейкоцитов крови // Биол.мембраны. — 1998. — Т. 15.-№3.-С273-285.

22. Шехтер А.Б., Кабисов Р.К., Пекшев А.В., Козлов Н.П., Перов Ю.Л. Экспериментально-клиническое обоснование плазмодинамической терапии ран оксидом азота // Бюллетень экспериментальной биологии медицины. -1998. -Т. 126. -№8. -С.210-215.

23. The first experience of Photodithazine clinical application for photody-namic therapy of malignant tumors // Proceedings of SPIE- Vol.3909. -2000. -p.138-144. (With Stranadko E.F, Ponomarev G.N., Meshkov V.M. etk.).

24. Agarwal M.L, Clay M,E., Harvey E.J., Evans H.H., Antunez A.R., Olenick N,L: Potodynamic terapiy induces rapid cell death by apoptosis in L5178 mouse lymphoma cells. Cancer res 51: 5993 (1991).

25. Agawal R., Athar M,m Bickers D.R., Mukhtar H: Evdence for the involvement of singlef oxygen in the fhtodestruction by chloroaluminum phthalocyanine tetrasulfonate. Biocytm biophys res commun 173:34-41 (1990)

26. Ahmad N, gupt S, Feyes D.K, Mukhtar H: Involvement of Fas (APO-l/CD-95) during photodynamic-therapy-mediated apoptosis in human epidermoid carcinoma A431 cells. J Invest Dermatol 115: 1041-1046 (2000).

27. Antonsson В., Martinou J.C.: The BCL-2 protein family. Exp cell res 256:50-57 (2000).

28. Augustin W., Gellerich F., Wiswedel I., Evtodienko Y., Zinchenko V.: Inhibition of cation efflux bu antioxidants during oscillatory ion transport in mitochondria. Febs lett 107A (1979).

29. Barr H, Macrobert A.J, Tralau C.J, Boulos P.B, Bown S.G: The significan-cance of the nature of the photosensitizer for photodynamic therapy: quantitative and biological studies in the colon. Br J Cancer 62: 730-735 (1990)

30. Belzacq A.S, Vieira HL, Kroemer G, Brenner C: The adenine nucleotide translocator in apoptosis. Biochimie 84: 167-176(2002).

31. Bernardi P: Modulation of the Mitochondrial cyclosporine A-sensitive permeability transition pore by the proton electrochemical gradient. Evidence that the pore can be opened by membrane depolarization. J Biol Chem 267: 8834-8839 (1992).

32. Bernardi P, Scorrand L, Colonna R, Petronilli V, Di Lisa F: Mitochondria and cell death. Mechanistic aspects and methodological issues. Eur J Biochem 264: 687-701 (1999).

33. Bertoloni G., Sacchetto R., Jori G., Vemon D.I. and Brown S.B. Protoporphyrin photosensitisation offinterococcus hirae and Candida albicans cells. Lasers Life Sci. -1993. -V.5. -N4. -P.267-275.

34. Bertoloni G., Salvato В., M. DallAcqua, Vazzoler M. and Jori G. Hema-toporphyrin-sensitised photoinactivation of Streptococcus faecalis. Photochem. Photobiol. -1984. -V.39. -P.811-816.

35. Bertoloni G., Rossi F., Valduga G., Jori G. et al. Photosensitising activity of water- and lipid-soluble phthalocyanine on prokaryotic and eukaryotic microbial cells. Microbios. -1992. -V.71. -P.33-46.

36. Boegheim J.P, Dubbelman T.M, Mullenders L.H, Van Stevenninck J: Photodynamic effects of haematoporphyrin derivative on DNA repair in murine L929 Fibroblasts. Bio chem. J 244: 711-715 (1987).

37. Boegheim J.P, Scholte H, Dubbelman T.M, Beems E, Raap A.K, Van Ste-veninck J: Photodynamic effects of hematoporphyrin-derivative on enzyme activities of murine L929 fibroblasts. J Photochem Photobiol В 1: 61-73 (1987).

38. Boyle R.W, Dolphin D: Structure and biodistribution relationships of photodynamic sensitizers. Photochem Photobiol 64: 469-485(1996)

39. Brenner C, Cadiou H, Vieiera HL, Zamzami N, Marzo I, Xie Z, Leber B, Andrews D, Duclohier H, Reed J.C, Kroemer G: Bcl-2 and Bax regulate the channel activity of the mitochondrial adenine nucleotide translocator. Oncogene 19: 329-336 (2000).

40. Buja L.M, Eeigenbrodt M.L, Eigenbrodt E.H: Apoptosis and necrosis. Basic types and mechanisms of cell death. Arch Patholl Lab Med 117: 1208-1214 (1993).

41. Byrne A.M, Lemasters J.J, Nieminen A.L: Contribution of increased mitochondrial free Ca2+to the mitochondrial permeability transition induced by tert-butylhydroperoxide in rat hepatocytes. Htpatology 29: 1523-1531 (1999).

42. Cal J, Yang J, Jonts D.P: Mitochondrial control of apoptosis: the role of cytochrome c. Biochim Biophys Acta 1366: 139-149 (1998)

43. Cappugi P, Campolmi P, Mavilia L, Prignano F, Rossi R: Topical 5-aminolevulinic therapy in dermatology: a minireview. J Chemother 13: 494502 (2001).

44. Castedo M, Ferri K, Roumier T, Metivier D, Zamzami N, Kroemer G: Quantitation of mitochondrial alterations associated with apoptosis. J Immunol Methods 265: 39-47 (2002).

45. Cecic I, Parkins C.S, Korbelik M: Induction of systemic neutrophil response in mice by photodynamic therapy of solid tumors. Photochem Photobiol 74:712-720 (2001).

46. Chernjak B.V, Dedov V.N, Chernjak V: Ca(2+)- triggered membrane permeability transition in deenergized mitochondria from rat liver. FEBS Lett 365:75-78 (1995).

47. Grosserode M.H., Wenzel R.P. The continuing importance of staphylococci as major hospital pathogens. J. Hosp. Infect. -1991. -V.l9. -P.3-17.

48. Daugas E, Nochy D, Ravagnan L, Loeffler M, Susin SA, Zamzami N, Kroemer G: Apoptosis-inducing factor (AIF): a ubiquitous mitochondrial oxi-doreductase involved in apoptosis. FEBS Lett 476: 118-123 (2000).

49. Dougerty T.J: Photodynamic therapy. Photochem Photobiol 58: 895-900(1993).

50. Dougherty TJ: An update on photodynamic therapy applications. J Clin Laser Med Surg 20: 3-7 (20002).

51. Dougherty T.J. Haematoporphyrin as a photosensitiser of tumours. Photochem Photobiol. -1983. -V.38. -P377-379.

52. Earnshaw W.C, Martins L.M, Kaufmann S.H: Mammalian caspases: structure, activation, substrates, and functions during apoptosis. Annu Rev Bio-chem 68: 383-424 (1999).

53. Fabris C, Valduga G, MiottoG, Borsetto L, Jori G, Garbisa S, Reddi E, Photosensitization with zinc (II) phthalocyanine as a switch in the decision between apoptosis and necrosis. Cancer Res 61: 7495-750 (2001).

54. Fadok V.A, Bratton D.L, Rose D.M, Pearson A, Ezekewitz RA, Henson PM: A receptor for phosphatidylserine-specific clearance of apoptotic cells. Nature 405: 85-90 (2000)

55. Fadoc V.A, Xue D, Henson P: IF phosphatidylserine is the death knell, a new phosphatidylserine-specific receptor is the bellringer. Cell Death Differ 8: 582-587 (2001).

56. Fu Y.F, Fan T.J: Bcl-2family proteins and apoptosis. Sheng Wu Hua Xue Yu Sheng Wu Wu Li Xue Bao (Shanghai)34: 389-394 (2002).

57. Glantz J., Gom A The use of the carbon dioxide laser in general surgery. // Proc. Of the 2 nd intern. Sump. On laser surgery. Ierusalem, 1978. P.9-14.

58. Gibson S.L, Hilf R: Interdependence of fluence, drug dose and oxygen on hematoporphyrin derivative induced photosensitization of tumor mitochondria. Photochem Photobiol 42: 367-373 (1985).

59. Girrotti A.W: photodynamic lipid peroxidation in biological systems. Photochem Photobiol 51: 497-509 (1990).

60. Gomer C.J, LunaM, Ferrarrio A, Wong S, Fisher AM, Rucker N: Cellular targets and molecular responses associated with photodynamic therapy. J Clin Laser Med Surg 14: 315-321 (1996).

61. Cottlieb R.A: Mitochondria: execution central. FEBS Lett 482: 6-12 (2000).

62. Gough M.J, Melcher A.A, Ahmed A, Crittenden M.R, Riddle D.S, Linar-dakis E, Ruchatz AN, Emiliusen L.M, Vile R.G: Macrophages orchestrate the immune response to tumor cell death. Cancer Res 61: 7240-7247 (2001).

63. Gravestein L.A, Borst J: Tumor necrosis factor receptor family members in the immune systems. Semin Immunol 10: 423-434 (1998).

64. Green D.R, Reed J.C: Mitochondria and apoptosis. Science 281: 1309-1312 (1998).

65. Gross A, McDonnell J.M, Korsmeyer SJ: BCL-2 family members and the mitochondria in apoptosis. Genes Dev 13: 1899-1911 (1999).

66. Grosserode M.H., Wenzel R.P. The continuing importance of staphylococci as major hospital pathogens. J. Hosp. Infect. -1991. -V.19. -P.3-17.

67. Hackers G: The morphology of apoptosis. Cell Tissue Res 301: 5-17 (2000).

68. Halestrap A.P, McStay G.P, Clarke S J: The permeability transition pore complex: another view. Biochimie 84: 153-166 (2002).

69. Halliwell B, Gutteridge J.M: Free radicls, lipid peroxidation, and cell damage. Lancet 2: 1095 (1984).

70. Heier SK, Heier L.M: Tissue sensitizers. Gastrointest Endosc Clin N Am 4: 327-352 (1994).

71. Henderson B.W, Bellinier D.A: Tissue localization of photosenitizers and the mechanism of photodynamic tissue destruction. Ciba Found Symp 146: 112-125; discussion 125-130 (1989).

72. Henderson B.W, Dougherty TJ: How does photodynamic therapy work? Photochem Photobiol 55: 145-157 (1992).

73. Hengartner M.O: The biochemistry of apoptosis. Nature 407: 770-776 (2000).

74. Henry F, Boisteau O, Bretaudeau L, Lieubeau B, Meflah K, Gregoire M: Antigen-presenting cells that phagocytose apoptotic tumor-derived cells are potent tumor vaccines. Cancer Res 59: 3329-3332 (1999).

75. Hoffmann T.K, Meidenbauer N, Dworacki G, Kanaya H, Whiteside TL: Generation of tumor-specific T-lymphocytes by cross-priming with human dendritic cells ingesting apoptotic tumor cells. Cancer Res 60: 3542-3549 (2000).

76. Hsi R.A, Rosenthal D.I, Glatstein E: Photodynamic therapy in the treatment of cancer: current state of the art. Drugs 57: 725-734 (1999).

77. Kass G.E, Eriksson J.E, Orrenius S, Chow S.C: Chromatin condensation during apoptosis requires ATR. Biochem J 318 (Pt 3): 749-752 (1996).

78. Kessel D, Luo Y: Mitochondrial photodamage and PDT-induced apoptosis. J Photochem Photobiol В 42: 89-95 (1998).

79. Kirby B, Griffiths CE: Psoriasis: Br J Dermatol 144 Suppl 58: 37-43 (2001)

80. Korbelik M: Induction of tumor immunity by photodynamic therapy. J Clin Laser Med Surg 14: 329-334 (1996).

81. Koorbelik M., Naraparaju V.R., Yamamoto N: Macrophage-directed immunotherapy as adjuvant to photodynamic therapy of cancer. Br J Cancer 75: 202-207(1997).

82. Kowaltoswki A.J., Castilho F: Ca acting at the external side of the inner mitochondrial membrane can stimulate mitochondria! permeability transition induced by phcnylarsine oxide. Biochim Biophys Acta 1322: 221-229 (1997).

83. Kowaltowski A.J., Castilho R.F., Vercesi A.F.: Ca(2+)-induced mitochondrial membrane permeabilization: role of coenzyme Q redox state. Am J Physiol 269 (1 Pt 1): C141-147 (1995).

84. Kowaltowski A.J., Castilho R.F., Vercesi A.F.Mitochondrial permeability transition and oxidative stress. FEBS Lett 495: 12-15(2001).

85. Kroemer G., Reed J.: Mitochondrial control of cell death. Nat Med 6: 513-519(2000).

86. Levenson M.D., Dorinne Kan-Cruber, Charies Cruber et al. Wound healing asselerated by staphylococcus aureus // Arch Surg.-1983.-N.il 8.-p.310-320.

87. Lam M.,01einick N., Nieminem A.,L.: Photodynamic therapy-induced apoptosis in epidermoid carcinoma cells. Reactive oxygen species and mitochondrial inner membrane permeabilization. J Biol Chem 276: 47379л7386 (2001).

88. Lenaz G.: Role of mitochondria in oxidative stress and ageing. Biochim Biophys Acta 1366: 53-67 (1998).

89. Lewy J.G., Obochi M.: New applications in photodynamic therapy. Introduction. Photochem Photobiol 64: 737-739 (1996).

90. LIN. C.P., Lynch M.C., Kochevar I.E.: Reactive oxidizing species produced near the plasma membrane induce apoptosis in bovine aorta endothelial cells. Exp Cell Res 259: 351-359(2000).

91. Liu X., Kim C.N., Yang J., Jemmerson R., Wang X,: Induction of apop-totic program in cell-free extracts: requirement for dATP and cytochrome с Cell 86: 147-157(1996).

92. Luo Y., Chang C.K., Kessel D,: Rapid initiation of apoptosis by photodynamic therapy. Photochem Photobiol 63:528-534(1996)

93. Luo Y., Kessel D, Initiation of apoptosis versus necrosis by photodynamic therapy with chloroaluminum phthalocya-nine. Photochem Photobiol 66: 479A83 (1997).

94. Malik Z., Hanania J. and Nitzan Y., Bactericidal effects of photoactivated porphyrins. An alternative approach to antimicrobial drugs. J. Photochem. Photobiol. B: Biol. -1990. -V5. -P.281-293.

95. MacMillan J.D., Maxwell W.A., Chichester CO. Lethal photosensitiza-tion of microorganisms with light from a continuous-wave gas laser. Photochev. Photobiol. -1966. -V.5. -P.555-65.

96. MacRobert A.J., Bown S.G., Pblllips D. What are the. ideal properties of a photosensitiser? In: Dougherty T J., ed. "Photosensitizing Compounds: Their Chemistry, Biology and Clinical Use." Chichester: Wiley. -1989. -P.4-16.

97. McConkey D.: Biochemical determinants of apoptosis and necrosis. Toxicol Lett 99: 157-168 (1998).

98. Merchat M., Bertolini G., Giacomini P., Villanueva A. et al. Meso-substituted cationic porphyrins as efficient photosensitizers of Gram-positive and Gram-negative bacteria. J. Photochem. Photobiol. B: Biol. -1996. -V.32. -P.153-157.

99. Mills J.C., Stone N.L., Pitman R.N.: Extranuclear apoptosis. The role of the cytoplasm in the execution phase. J Cell Biol 146:703-708(1999).

100. Moan J.:Properties for optimal PDT sensitizers. J Photochem Photobiol В 5: 521-524 (1990).

101. Moor J.V., West C.M., Whitehurst C.: The biology of photodynamic therapy. Phys Med Biol 42: 913-935 (1997).

102. Morton C.A.: The emerging role of 5-ALA-PDT in dermatology: is PDT superior to standard treatments? J Derma-tolog Treat 13 Suppl 1: 25-29 (2002).

103. Nagy В., Chiu S.M., Separovic D.: Fumonisin B1 does not prevent apoptosis in A431 human epidermoid carcinoma cells after photosensitization with a silicon phthalocyanine. J Photochem Photobiol В 57: 132-141 (2000).

104. Nitzan Y., Shainberg B.and Malik Z. Photodynamic effects of deuteroporphyrin on Gram positive bacteria. Curr. Microbiol. -1987. -V.15. —P.251-258.

105. Nitzan Y., Shainberg В., Malik Z. The mechanism of photodynamic inac-tivation of Staphylococcus aureus by deuteroporphyrin. Curr. Microbiol. — 1989. -V.19. -P.265-269.

106. Noodt B.B., Berg K., Stokke Т., Peng Q., Nesland J.M.: Apoptosis and necrosis induced with light and 5-aminolaevulin-ic acid-derived protoporphyrin IX. Br J Cancer 74: 22-29 (1996).

107. Oberdanner C.B., Kiesslicht Т., Krammer В., Plaetzer K.: Glucose is required to maintain high ATP-levels for the energy-utilizing steps during PDT-induced apoptosis. Photochem Photobiol 76: 695-703 (2002).

108. Oleinick N.L., Evans H.Y.: The photobiology of photodynamic therapy: cellular targets and mechanisms. Radiat Res 150 (5 Suppl): 146-156(1998).

109. Peng Q., Moan J., Nesland J.M.: Correlation of subcellular and intratu-moral photosensitizer localization with ultrastructural features after photodynamic therapy. Ultrastruct Pathol 20: 109-129 (1996).

110. Peng Q., Warloe Т., Berg K., Moan J., Kongshaug M., Giercksky K.E., Nesland J.M.: 5-Aminolevulinic acid-based photodynamic therapy. Clinical research and future challenges. Cancer 79: 2282-2308 (1997).

111. Penning L.C., Dubbelman T.M.: Fundamentals of photodynamic therapy: cellular and biochemical aspects. Anti-cancer Drugs 5: 139-1.46 (1994).

112. Plaetzer K., Kiesslicht Т., Krammer В., Hammerl P.: Characterization of the cell death modes and the associated changes in cellular energy supply in response to AlPcS4-PDT. Photochem Photobiol Sci 1: 172-177 (2002).

113. Reiter I., Krammer В., Schwamberger G.:Cutting edge: differential effect of apoptotic versus necrotic tumor cells on macrophage antitumor activities. J Immunol 163: 1730-1732 (1999).

114. Scheffer S.R, Nave H., Korangy F., Schlote K., Pabst R., Jaffee E.M., Mannss M.P., Greten T.F.: Apoptotic, but not necrotic, tumor cell vaccines induce a potent immune response in vivo. Int J Cancer 103: 205-211 (2003).

115. Schendel S.L., Montal M., Reed J.: Bcl-2 family proteins as ion-channels. Cell Death Differ 5: 372-380 (1998).

116. Schlegel R.A., Williamson P.: Phosphatidylserine, a death knell. Cell Death Differ 8: 551-563 (2001).

117. Separovic D., He J., Oleinick N.L.: Ceramide generation in response to photodynamic treatment of L5178Y mouse lym-phoma cells. Cancer Res 57: 1717-1721 (1997).

118. Sibata C.H., Colussi V.C., Oleinic N.L., Kinsella T.J.: Photodynamic therapy in oncology. Expert Opin Pharmaco-ther2: 917-927 (2001).

119. Skulachev V.P.: Mitochondrial physiology and pathology; concepts of programmed death of organelles, cells and organisms. Mol Aspects Med 20: 139-184(1999).

120. Somersan S., Larsson M., Fonteneau J.F., Basu S., Srivas-tava P., Bhard-waj N.: Primary tumor tissue lysates are enriched in heat shock proteins andinduce the maturation of human dendritic cells. J Immunol 167: 4844л1852 (2001).

121. Specht K.G., Rodgers M.A.: Depolarization of mouse myeloma cell membranes during photodynamic action. Photochem Photobiol 51: 319-324 (1990).

122. Spikes J.D., Jori G. Photodynamic therapy of tumours and other diseases using porphyrins. Lasers Med. Sci. -1987. -V.2. -P.3-15.

123. Spikes J.D.: Chlorins as photosensitizers in biology and medicine. J Photochem Photobiol В 6: 259-274 (1990).

124. Stegh A.H., Peter M.E.: Apoptosis and caspases. Cardiol Clin 19: 13-29(2001).

125. Stennicke H.R., Salvesen G.S.: Properties of the caspases. Biochim Bio-phys Acta 1387: 17-31 (1998).

126. Stewart F., Baas P., Star W.: What does photodynamic therapy have to offer radiation oncologists (or their cancer patients)? Radiother Oncol 48: 233-248(1998)

127. Tadjiri H., Hayakawa A., Matsumoto Y., Yokoyama I., Yoshi-Da S.: Changes in intracellular Ca concentrations related to PDT-induced apoptosis in photosensitized human cancer cells. Cancer Lett 128: 205-210 (1998).

128. Thornberry N.A., Lazebnik Y.: Caspases: enemies within. Science 281: 1312-1316(1998).

129. Tsujimoto Y., Shimizu S.: Bcl-2 family: life-or-death switch. FEBS Lett 466: 6-10 (2000).

130. Vander Heiden M.G., Thompson C.B.: Bcl-2 proteins: regulators of apoptosis or of mitochondrial homeosta-sis? Nat Cell Biol 1: E209-216 (1999).

131. Weishaupt K.R., Gomer C.J., Dougherty T.J.: Identification of singlet oxygen as the cytotoxic agent in pho-toinactivation of a murine tumor. Cancer Res 36 (7 PT1): 2326-2329 (1976).

132. Wilson M, Pratten J. Sensitisation of Staphylococcus aureus to killing by low-power laser light. J. Antimicrob. Chemother. -1994. -V.33. -P.619-624.

133. Wilson B.C.: Photodynamic therapy for cancer: principles. Can J Gastroenterol 16: 393-396 (2002).

134. Wyld L., Reed M.W., Brown N.J.: Differential cell death response to photodynamic therapy is dependent on dose and cell type. Br J Cancer 84: 1384-1386 (2001).

135. Zue L.Y., Chiu S.M., Oleinick N.L.: Photochemical destruction of the Bcl-2 oncoprotein during photodynamic therapy with the phthalocyanine pho-tosensitiz-er Pc 4. Oncogene 20: 3420-3427 (2001).

136. Yasuhara N., Eguchi Y., Nachibana Т., Imamoto N., Yoneda Y., Tsuji-moto Y.: Essential role of active nuclear transport in apoptosis. Genes Cells 2: 55-64 (1997).

137. Zhou C.N.: Mechanisms of tumor necrosis induced by photodynamic therapy. J Photochem Photobiol В 3: 299-318(1989).

138. Zimmermann K.C, Bonzon C, Green D.R: The machinery of programmed cell death. Pharmacol Ther 92:57-70(2001).

139. Zimmermann K.C., Greend D.R.: How cells die: apoptosis pathways. J Allergy Clin Immunol 108 (4 Sup-pi): 99-103 (2001).

140. Zou H., Li Y., Liy X., Wang X.: An APAF-l.cy-tochrome с multimeric complex is a functional apop-tosome that activates procaspase-9. J Biol Chem 274: 11549-11556(1999).