Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Количественный анализ нарушений микроциркуляции при разных видах патологии и пути их коррекции

¡21 и $' ь г

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ МЕШЩИНСКИХ НАУК НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ ПАТОЛОГИИ И ПАТОФИЗИОЛОГИИ

На правах рукописи

ШИНКАРЕНКО Владимир Сергеевич

КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ НАРУШЕНИЙ МИКРОЦИРКУЛЯПИИ ПРИ РАЗНЫХ ВИДАХ ПАТОЛОГИИ И ПУТИ ИХ КОРРЕКЦИИ

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации я форме научного доклада на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 1992

/У/ - •

г*

Работа выполнена в лаборатории общей патологии микроциркуляции НИИ общей патологии и патофизиологии Российской АМН.

Научный консультант - доктор медицинских наук, профессор П.Н.Александров

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, академик Российской АМН

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук

В.В.Куприянов

Н.В.Крылова

О.Я.Кауфман

Ведущее учреждение:

Московский медицинский стоматологический институт имени Н.А.Семашко

Защита диссертации состоится " I " октября 1992 г. в 15 час на заседании Специализированного совета Д 001.03.01

при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН по адресу: 125315 Москва, Балтийская ул., д.8.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института. Автореферат разослан " 1 " сентября 1992 г.

Ученый секретарь Специализированного совета

кандидат медицинских наук Л.Н.Скуратовская

РОССИЙСКАЯ

5 С У Д А Р С Т 3 Е И Н А Я библиотека

3

ОБШДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность данной работы определяется м, что она посвящена изучению количественных характеристик различных >мпонентов микроциркуляторной системы в разных органах (мозг, сердце, нлечник, скелетная мышца) при типовых патологических процессах (ишемии, >спалении, гипертензии), при воздействии физических факторов (гипер- и [потермия, магнитное поле) и фармакологических веществ, что является ¡обходимой - основой для разработки методов коррекции возникающих [рушений.

Развитие микроциркуляции как самостоятельной области науки началось :оло сорока лет назад в США при активном участии Paul Johnson'a и :njamin Zweifach'a. Особое значение этого отдела сосудистого русла ¡условлено огромной суммарной поверхностью капилляров, через которую :уществляется обмен, и которая составляет у человека около 560 кв.м (Keele al., 1982). Значительные достижения в исследованиях микроциркуляции, .ввавшие резкий подъем интереса к новому научному направлению во всем ире, в немалой степени были обусловлены применением в этих исследованиях кледних технических достижений, телевизионной и видеоаппаратуры, лазерной вычислительной техники.

В нашей стране усилиями школ В.В.Куприянова, А.М.Чернуха, И.Мчедлишвили, К.А.Шошенко, многих лабораторий и ученых в условиях :сперимента и клиники разрабатываются фундаментальные проблемы изиологии и патологии микроциркуляции. До недавнего времени уровень •ечественных исследований микроциркуляции соответствовал тенденциям 13вития мировой науки, но в последние годы возник разрыв между »стнжениями зарубежных и отечественных ученых в этой области. В то время IK во многих странах нарастает объем фундаментальных работ, посвященных юблемам регуляторных механизмов (Altura, 1982), физиологии и фармакологии икроциркуляции (Mortillaro, 1984), роли свободных радикалов в повреждении икрососудистого русла (Arfors, Del Maestro, 1986), ишемическим и реперфузион->ш нарушениям (Hammersen, Messmer, 1989), современным методам исследова-1я микроциркуляции (Baker, Nastuk, 1986) и клинической капилляроскопии iollinger, Fagrell, 1990), в нашей стране число работ, по актуальным проблемам икроциркуляции, сокращается. Об этом свидетельствуют и материалы 4-го Международного конгресса по микроциркуляцин (г.Луисвилль, США, 1991) и 17) конгресса Европейского общества по микроциркуляции (Лондон, 1992).

В значительной мере, такой спад обусловлен ограниченными возможностями зименяемых методов исследования, и в первую очередь микроскопии, которая ггается одним из основных инструментов для изучения микроциркуляцин. эзможности применения субъективных, качественных оценок, на основе зторых основана большая часть исследований, ограничены и в значительной епени исчерпаны. В связи с этим, все более важной становится проблема «работки количественных методов исследования микроциркуляции и, в 1СТНОСТИ, методов количественной микроскопии.

Для количественного анализа необходим системный подход, который требуе установления субординации в системе микроциркуляции и выделения элементе ее структуры, которые функционируют относительно самостоятельно. Результат обобщения многих частных наблюдений явилось обоснование А.М.Чернухо (1976, 1979) положения о функциональном элементе органа или ткани, по которым понимается единство кровеносных микрососудов, лимфатически капилляров, прилежащей к сосудам ткани и средств регуляции протекающих этом участке процессов, а также введение понятия модуля, заключающего себя комплекс повторяющихся элементов, взаимодействующих в предела ограниченного пространства (В.В.Куприянов, 1986).

В данной работе осуществлена разработка новых количественных методе оценки состояния микроциркуляции, основу которых составляют автоматически анализ изображений - для определения морфофункциональных параметре микрососудистого русла, и метод микропризматической решетки - для изучени микрогемодинамики. С помощью этих методов проведены исследовани нарушений микроциркуляции в разных органах и у разных видов животны при типовых патологических процессах: ишемии, гипертензии, воспалении, также при фармакологических и физических воздействиях.

На фоне большого числа работ о влиянии ишемии и реперфузии н состояние различных систем и органов - сердца (Gavin et al., 1983; F.Z.Meersoi 1984), скелетной мышцы (Burton et at., 1987; Lewis, 1980) и др. очень мал исследований влияния ишемии и реперфузии на структуру и функци микрососудистого русла (Gidloef et al., 1980; Hammersen F., Hammersen E. 198' Hammersen F., Messmer K., 1989; П.Н.Александров и др., 1986). Известно, чт гипертензия сопровождается уменьшением васкуляризации тканей (Hutchii Darnell, 1974; Henrich, 1980; Prewitt et al., 1982), обнаружено уменьшеш: плотности сосудистой сети головного мозга у гипертензивных крыс, уменьшен! числа капилляров в коре у людей, страдавших гипертонической болезнь (Г.Ф.Демиденко, 1981). Поскольку такое уменьшение может приводить возникновению ишемических зон в мозговой ткани (И.А.Соколова, С.М.Блинко 1981), изучение васкуляризации мозга при гипертензии непосредственно связан с исследованиями проблем ишемии.

Для коррекции ишемических нарушений наряду со многим фармакологическими препаратами все шире применяются различные физическ1 факторы. В ряде случаев, особенно в хирургической практике, для этой цел используются температурные воздействия. Однако, изменения микроциркуляци под воздействием повышенной или пониженной температуры не изучены.

В последнее время в терапевтических целях при ишемических гипертензивных состояниях все чаще используются магнитные поля (магнитнь браслеты, "магнитотроны" и др.). С другой стороны, проблема воздейстш магнитных полей (МП) на организм человека становится все более актуально в связи с широким распространением электрических и электронных приборо используемых в лабораториях, на производстве и в быту. Эти приборы обыч! создают МП небольшой интенсивности (до 3 мТл, по данным Miller (1974 которые, однако, при достаточно длительной экспозиции, могут вызыват неблагоприятные последствия для здоровья: от слабости, головных болей расстройств зрения до увеличения частоты самопроизвольных аборто

теринатальной смертности, врожденных уродств и др. (Loevsund, 1980; Ericson, iCaellen, 1986). Сведения о влиянии магнитных полей на состояние никроциркуляции весьма ограничены (А.М.Демецкий и др., 1979; Э.Л.Соболева и Ф-, 1981).

Несмотря на широкое изучение воспалительного процесса (Л.М.Чернух, 1979; rlauck, Irwin, 1979; Movat, 1979 и др.), сведений о влиянии этого процесса на :остояние микроциркуляции недостаточно.

Экспериментальные исследования нарушений, возникающих в никроциркуляторном русле при разных видах патологии и внешних воздействий, тредставляют собой основу для разработки методов их патогенетической трофилактики и терапии, что является непосредственной задачей патофизиологии Т.Н.Крыжановский, 1984).

Цель работы - изучить возможности количественного анализа эазных компонентов микроциркуляторной системы для объективной оценки ее :остояния в условиях нормы и патологии, а также при фармакологических и физических воздействиях. Дать количественную характеристику развития «которых типовых патологических процессов на уровне микрососудистого русла.

В рамках этой общей цели решались следующие задачи:

1. Разработать методы определения морфофункциональных характеристик :истемы микроциркуляции на основе автоматического анализа изображений.

2. Сравнить результаты оценки морфофункциональных параметров иикрососудистого русла, получаемые при компьютерном анализе, с данными градиционных ручных методов измерений.

3. Оценить возможности применения метода мнкропризматической решетки хля измерения скорости кровотока в микрососудах в условиях нормы и при крушениях микрогемодинамики.

4. Определить характер распределения скорости кровотока в разных звеньях иикрососудистого русла брыжейки тонкой кишки в условиях нормы.

5. Провести количественный анализ изменений состояния разных сомпонентов микроциркуляторной системы, возникающих при ишемии, воспалении i гипертензии.

6. На основании количественного анализа выявить реакции мпкроцир-суляторного русла на воздействие фармакологических и физических факторов.

Научная новизна работы. Впервые проведен соличественный анализ состояния разных компонентов микроциркуляторной :истемы в условиях нормы, при патологических состояниях и при воздействии фармакологических и физических факторов. Показаны возможности ^пользования компьютерного анализа изображений для прижизненного изучения микроциркуляции.

Впервые для измерения скорости кровотока в микрососудах применен метод мнкропризматической решетки. С помощью нового метода установлен характер распределения скоростей кровотока в терминальных звеньях микрососудистого зусла в пределах функционального элемента органа. Обнаружено, что наибольшие изменения скорости кровотока происходят в прекапиллярных 1ртериолах и посткапиллярных венулах.

Обнаружен феномен разнонаправленных реакций сходных звеньев микрососудистого русла на одинаковые воздействия. Установлено, что близкие

по морфофункциональным характеристикам и локализации микрососуды, входящие в один функциональный элемент, на одно и то же внешнее воздействие отвечают различно: дилатацией, констрикцией или отсутствием реакции. Показано, что эти различия в типах реакции могут быть связаны с пространственной ориентацией гладкомышечных клеток в стенке микрососуда, а также с относительной толщиной стенки.

Установлено, что непрерывная остановка кровотока и сопровождающая ее ишемия вызывают меньшие нарушения микрогемодинамики, чем несколько последовательных выключений кровотока меньшей суммарной продолжительности.

В динамике развития ишемии кишечника и в процессе реперфузии выявлен феномен экстравазации эритроцитов из венул и венулярных отделов капилляров.

Установлено, что повышение температуры кишечной петли до 40°С в постишемическом периоде сопровождается усилением нарушений микроциркуляции, вызванных ишемией и реперфузией. Понижение температуры органа до 20°С в тех же условиях способствует нормализации возникающих при ишемии нарушений.

Выявлена реакция периферической микрогемодинамики и ряда системных показателей на кратковременные и длительные воздействия на мозг слабых магнитных полей.

Теоретическое значение работы.

Как в условиях развития типового патологического процесса, так и при физических воздействиях обнаружена разнородность реагирования микрососудов, близких по морфофункциональным характеристикам и входящим в один функциональный элемент. Эта неоднородность реагирования может быть обусловлена разными свойствами стенок микрососудов.

В условиях ишемии кишечника и при реперфузии показана динамика процесса экстравазации эритроцитов из микрососудистого русла, что свидетельствует о нарушениях резистентности сосудистой стенки.

Проведенные экспериментальные исследования с помощью количественных методов оценки позволили выявить неизвестные до настощего времени звенья патогенеза микрососудистых расстройств при ишемии. Показана важная роль состояния стенок микрососудов в развитии нарушений микроциркуляции.

Практическое значение работы определяется тем, что в ней показаны возможности применения автоматического анализа изображений для количественных исследований микроциркуляции, не только в эксперименте, но и в клинических условиях, разработаны необходимые методические приемы, алгоритмы анализа и программное обеспечение. Показано на практике, что результаты автоматического анализа коррелируют с данными традиционных ручных методов, но компьютерный анализ обеспечивает большую точность и объективность результатов, возможность определения значительно большего числа параметров, высокое быстродействие и эффективность исследований.

Проведены испытания и определены возможности практического применения прибора МРУ-Сошрас1-Уе1 для измерения скорости кровотока в микрососудах. Показано, что новый метод обеспечивает высокую точность измерений в широком диапазоне скоростей и диаметров микрососудов.

Установлено, что наибольшее изменение скорости кровотока в микрососудистом русле брыжейки происходит в прекапиллярных артериолах и посткапиллярных венулах.

Методом количественной морфометрии показано, что предварительное введение маннитола до временной остановки мозгового кровотока позволяет сохранить проходимость микрососудов в период реперфузии и значительно уменьшить проявления феномена невосстановления кровотока.

Установлено, что снижение температуры кишечной петли до 20°С в постишемическом периоде способствует более быстрому восстановлению нарушений микроциркуляции, вызванных ишемией и реперфузией.

Определен характер реакции периферической микрогемодинамики и ряда системных показателей на воздействие пременных магнитных полей. Показано, что длительное облучение организма магнитным полем 0,6 мТл сопровождается стойким уменьшением частоты дыхания.

Положения, выносимые на защиту:

1. Метод компьютерного анализа изображений обеспечивает определение всех основных параметров микроциркуляции во всех звеньях микрососудистого русла как в условиях нормы, так и при разных видах патологии, фармакологических и физических воздействиях, обладая высокой точностью, быстродействием, значительно повышая эффективность исследований. Результаты автоматического анализа коррелируют с данными, полученными традиционными методами ручной морфометрии.

2. Метод микропризматической решетки обеспечивает высокую точность, объективность и эффективность исследований микрогемодинамики в физиологических условиях и при различных нарушениях микроциркуляции, обладая существенными преимуществами перед другими методами.

3. Микрососуды, аналогичные по морфофункциональным характеристикам и локализации, на одинаковые воздействия могут отвечать разнонаправленными реакциями. Важную роль в возникновении такой неоднородности играют свойства сосудистой стенки.

4. В условиях реперфузии после ишемии повышение температуры стенки кишки до 40°С сопровождается усилением нарушений микроциркуляции, вызванных ишемией. Понижение температуры в этих условиях до 20°С способствует нормализации возникших нарушений.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на 1-м Советско-Шведском симпозиуме "Прижизненная микроскопия: ее настоящее и будущее" (Упсала, Швеция. 1981); 9-м Всемирном конгрессе по кардиологии (Москва, 1982); 3-м Советско-западногерманском симпозиуме "Количественные методы в медицинских и биологических исследованиях" (Москва, 1983); Всесоюзной конференции "Актуальные вопросы нарушений гемодинамики и регуляции микроциркуляции в клинике и эксперименте" (Москва, 1984); 2-м Советско-шведском симпозиуме "Исследование микроциркуляции в эксперименте и клинике" (Москва, 1986); 5-м Советско-западногерманском симпозиуме "Новые методы и приборы для микроскопии в медицине и биологии" (Москва, 1987); 15-м Съезде Всесоюзного физиологического общества им.И.П.Павлова (Кишинев, 1987); Симпозиуме СССР-

ГДР "Субстанция Р в регуляции физиологических и патологических процессов" (Москва, 1988); IV Всесоюзном съезде патофизиологов (Кишинев, 1989); 3-м Советско-шведском симпозиуме "Клинические и экспериментальные исследования микроциркуляции" (Линчепинг, Швеция, 1989); 16-й Европейской конференции по микроциркуляции (Цюрих, Швейцария, 1990); Учредительном конгрессе Международного общества по патофизиологии (Москва, 1991) и др.

Структура работы:

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ I. ИССЛЕДОВАНИЕ СИСТЕМЫ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ МЕТОДОМ АВТОМАТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ИЗОБРАЖЕНИЙ

1.1 Сравнительное изучение микрососудов мозга методом рунного счета и автоматического анализа

1.2 Нарушения микроциркуляции мозга после кршпковреме/шой ишемии и влияние мшшитола на восстшювление кровотока в постишемическом периоде

1.3 Морфологические показатели микрососудистого русла мозга при экспериментальной гипертензии

1.4 Исследование ишемического повреждения миокарда и влияния ионола на ограничение ишемического некроза

1.5 Нарушения микроциркулящги тонкого кишечника при ишемии разной продолжительнсти

1.6 Влияние гипер- и гипотермии на состояние микроциркуляции кишечника в постишемическом периоде

1.7 Нарушения микроциркуляции при воспалении

II. ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОГЕМОДИНАМИКИ

С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА МИКРОПРИЗМАТИЧЕСКОЙ РЕШЕТКИ 2.1. Регистрация скорости кровотока в микрососудах

¿2 Распределение скоростей кровотока в микрососудистом русле брыжейки

2.3. Изменения скорости микрокровотока при острой кратковременной ишемии кишеч!шка

2.4. Изменения системной и микрогемодинамики при воздействии маиштных полей разной интенсивности и продолжительности

III. КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ АНАЛИЗ МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫХ ХАРАКТЕРИСТИК СТЕНКИ МИКРОСОСУДОВ

3.1. Роль пространственной орие/ипации гладкомышечиых волокон стенки микрососудов в процессе их сужения и закрытия 3.2 Тонус и относительная толщина стенки артериол скелетной мышцы ЗАКЛЮЧЕНИЕ ВЫВОДЫ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Линии, вес и число использованных животных указаны при описании результатов исследований в соответствующих разделах.

Приборное обеспечение. Исследования микрососудистого русла в разных органах проведены на комплексе аппаратуры для биомикроскопии, который включает в себя: систему автоматического анализа изображений TAS (Textur Analyse System, Ernst Leitz Wetzlar GmbH, ФРГ) для измерения и количественного анализа морфофункциональных параметров микроциркуляторного русла; исследовательский микроскоп Orthoplan (Leitz), с конденсором с большим

абочим расстоянием 0.46/L 20; приборы MPV-Compact-Ve! (Leitz) для измерения инейной скорости кровотока в микрососудах и RZD-DO (Leitz) для олуавтоматической регистрации диаметра микрососудов; Mingograf-82 (Siemens-llema, Швеция) для синхронной регистрации скорости кровотока в мнкрососудах, истемного артериального давления, частоты сердечных сокращений и частоты ыхания; автоматическую микрофотонасадку Orthomat-B (Leitz) и камеру типа [олароид для фоторегистрации исследуемых феноменов,

Порядок проведения экспериментов. Крыс наркотизировали этаминалом атрия (нембутал, 6 мг на 100 г массы тела животного внутримышечно), акладывали трахеостому, в левую общую сонную артерию вводили катетер Е50 (Intramedic, Швеция), для регистрации артериального давления и частоты ердечных сокращений. Для инфузии исследуемых веществ в хвостовую артерию станавливали канюлю. Орошение исследуемых органов и заполнение системы змерения давления осуществляли бикарбонатным раствором Хенкса (Flow aboratories, Великобритания). Катетеры заполняли гепарином (5000 IE/ml фирма labi, Швеция).

Биомикроскопию исследуемых органов проводили по общепринятым [етодикам (Чернух A.M., 1975) в нашей модификации. Для наблюдения спользовали объективы 1,0, 2,5х и 6,Зх/0,20; для измерения и фотосъемки -бъективы для водно-солевой иммерсии SW25x/0.60, SW50x/l,00 и SW10()x/l,00.

В процессе биомикроскоппи проводили регистрацию скорости кровотока в шкрососудах, внутреннего и наружного диаметра микрососудов, определяли аспространенность нарушений проницаемости стенок микрососудов, степень егрануляции тучных клеток, интенсивность процесса экстравазации эритроцитов, егистрировались основные параметры системной гемодинамики - артериальное авление, частота сердечных сокращений и частота дыхания. Процесс измерения корости микрокровотока описан в разделе. посвященном методу ;икропризматической решетки.

Измерение диаметра микрососупов проводили автоматически с помощью истемы TAS или в полуавтоматическом режиме с помощью прибора RZD-DO.

Проницаемость стенок микрососудов исследовали тушевым или юминесцентным методами (М.П.Горизонтова, 1991) . с использованием втоматического анализа изображений.

Степень дегранулянпи тучных клеток, число и площадь экстравазатов в сследуемых участках русла в норме и при экспериментальных воздействиях пределяли методом автоматического анализа изображений непосредственно во ремя исследования или по серийным фотоснимкам.

Частоту дыхания регистрировали с помощью резиновой манжеты, шолненной физраствором, помещенной под грудную клетку животного и оединенной катетером с датчиком давления 746 и усилителем 863 Мингографа.

По окончании экспериментов из ишемизированного участка, а также из частков выше и ниже места окклюзии брали образцы ткани для кстологического исследования. Срезы окрашивали гематоксилин-эозином.

Статистическая обработка полученных результатов осуществлялась с спользованием t-критерия Стьюдента.

ОСНОВНЫЕ РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ОБСУЖДЕНИЕ

I. ИССЛЕДОВАНИЕ СИСТЕМЫ МИКРОЦИРКУЛЯЦИИ МЕТОДОМ АВТОМАТИЧЕСКОГО АНАЛИЗА ИЗОБРАЖЕНИЙ 1.1 Сравнительное изучение микрососудов мозга метопом ручного счета и автоматического анализа

Микрососудистая сеть мозга весьма чувствительна к патологическим изменениям, поэтому ее состояние отражает развитие таких изменений. В то же время, от состояния микрососудов зависит течение и исход самих патологических процессов (А.М.Чернух, 1979). Поэтому получение количественных характеристик строения микрососудистой сети мозга представляет собой важную и актуальную задачу. Поскольку удовлетворительного метода для решения этой трудоемкой задачи не существовало (С.М.Блинков, 1972), мы применили для данной цели метод автоматического анализа изображений.

Исследовали гистологические срезы головного мозга собак. Мозг животных, находившихся под гексеналовым наркозом, перфузировали тушью (50 мл на 1 кг массы тела под давлением 16 кПа) через обе общие сонные артерии. Мозг фиксировали в 70° алкоголе, заливали в целлоидин, и готовили поперечные срезы 20 мкм (С.М.Блинков и др., 1979). Часть срезов окрашивали крезиловым фиолетовым и подсчитывали длину фрагментов капилляров вручную, с помощью окулярной сетки (С.М.Блинков, 1972). На соседних с ними неокрашенных срезах микроциркуляторное русло изучали методом автоматического анализа изображений. Определяли общую площадь и длину микрососудов, число фрагментов в поле зрения, площадь и длину сосудов разных диаметров, суммарную площадь измеренных полей, удельную длину (на единицу объема ткани) и средний диаметр микрососудов.

Проведенные измерения позволили обнаружить такие различия в состоянии микрососудистой сети, которые при визуальной оценке не выявляются. Так, при визуальном сравнении плотность микрососудистой сети в молекулярном и зернистом слоях выглядит одинаковой, невозможно также выявить различия в плотности расположения сосудов в поверхностных участках коры и на дне борозд.

Исследование показало, что удельная длина микрососудов коры увеличивается по мере удаления от вершин извилин по направлению к дну борозд, а длина микрососудов в зернистом слое коры больше, чем в молекулярном:

Удельная длина микрососудов Время выполнения Способ измерения в слое коры (мм/мм3): измерений, час

молекулярном зернистом

Автоматический 575 ±21 Ручной 597 ±19

724 ±12

702 ±26

0,5 60-75

Эти данные подтверждают факты, установленные ранее с помощью рудоемких ручных измерений (В.Н.Ларина, 1980). Однако, эффективность втоматического анализа в 100-150 раз выше, чем ручных способов счета. Существенно также, что в процессе исследования методом автоматического налнза за указанное в таблице время удается определить сразу 10 и более [араметров, а при ручном счете лишь 1-2 показателя.

Таким образом, применение метода автоматического анализа изображений ля получения морфометрических показателей микрососудистого русла мозга начительно расширяет возможности исследований, обеспечивает повышение ффективности исследований и, что особенно важно, объективности и точности ;змерений.

1.2 Нарушения микроциркуляции мозга после кратковременной

ишемии и влияние маннитола на восстановление кровотока

в постишемическом периоде

После кратковременной (в течение нескольких минут) остановки кровотока ишемии - в органах появляются зоны, где микрососудистая сеть становится ¡епроходимой. В мозге после временной ишемии и последующей перфузии его ушью зоны непроходимости обнаруживаются в виде белых пятен - участков, в оторых не происходит заполнения сосудов красителем - так называемый зеномен невосстановления тока - no-reflow phenomenon (NRP) (Ames et al., 968). Этот феномен играет значительную роль в гипоксическом поражении юзга, поскольку установлено, что не депривация кислорода сама по себе, а вязанные с этим процессы изменения микроциркуляции в мозге приводят к ибели нервных клеток (А.М.Гурвпч и др., 1974; Hossmann, Zimmermann, 1974). 'акторы, влияющие на возникновение и выраженность NRP изучены еще едостаточно.

Для ослабления последствий NPR применяли маннитол (Sobotka et al., 1974; .¡ttle, 1978), представляющий собой шестиатомный спирт из группы Сахаров и спользуемый в нейрохирургической практике как противоотечный препарат Л.З.Маневич, В.И.Салалыкин, 1977). Целью данного этапа исследования было ыяснение влияния маннитола на появление и выраженность NRP, а также ыявление и количественное описание изменений, возникающих при этом в шкрососудах (МС) мозга собаки.

Опыты проведены на 9 беспородных собаках массой 7-25 кг. Животных азделили на три группы : 1) - без воздействия; 2) - после остановки ровоснабжения мозга на 4 мин; 3) - после остановки кровоснабжения на 8 [ин с предварительным (за 30 мин) введением маннитола (20% раствор, 1,5 г а 1 кг массы тела внутривенно). Остановку кровотока у животных, аходившихся под гексеналовым наркозом (40-200 мг на 1 кг массы тела) с обавлением 8 г морфина, вызывали фибрилляцией сердца электротоком. Через или 8 мин после остановки кровотока мозг перфузировали тушью и готовили истологические срезы.

Учитывая анпюархитектонпческие особенности разных слоев коры мозжечка [Ш.Ларина, 1980), которая является одной из наиболее чувствительных к ипоксии структур мозга (Н.П.Романова, 1959; Г.А.Акимов, 1971), исследовали 1С молекулярного слоя коры на дне борозд. В срезах, полученных от онтрольных животных, наблюдали равномерное заполнение тушью МС разных

отделов мозжечка. После 4-минутной ишемии визуально выраженных изменений сосудистого русла, в частности образования белых пятен, не отмечалось. В то же время, при компьютерном анализе выявляются существенные изменения микрососудистого русла (табл. 1). Таблица 1

Диаметр и удельная длина капилляров червя мозжечка после кратковременной остановки кровотока и при введении маннитола (М±ш)

Исследуемый Без воз- Остановка кро- Маннитол + оста-

показатель действия вотока 4 мин новка кровотока

(1-я группа) (2-я группа) 8 мин (3-я группа)

Диаметр, мы*3 3,43+0,25 4,47±0,32 5,20+0,28

Р <0,01 <0,001

Удельная длина, 545±64 336±16 573±10

мм/мм3 Р <0,05 >0,05

Число измеренных полей 426 277 446

Остановка кровотока на 4 мин приводит к уменьшению длины МС в 1,5 раза, что свидетельствует о поялении выраженного NRP. Увеличение при этом диаметра МС является относительным. Гистограммы распределения длины МС по их диаметрам показывают, что происходит выключение МС наименьших калибров, чем и обусловлено увеличение среднего диаметра МС. Таким образом, NRP проявляется прежде всего на уровне самых мелких МС.

Известно, что наиболее сильно NRP у собак проявляется через 7-8 мин после остановки кровотока (АЛ.Валанчуте, 1974). В наших опытах, вопреки ожидаемому уменьшению удельной длины МС после более продолжительной, чем во 2-й группе, ишемии мозга, изменения этого показателя в сравнении с контролем было недостоверно. Это свидетельствует о защитном действии предварительного введения маннитола. Важно отметить существенное увеличение диаметра МС, которое (при неизменной их длине) свидетельствует о наличии дилатации этого звена сосудистого русла.

Возникновение NRP связывают с внутри- и внесосудистыми факторами: изменениями реологических свойств крови, изменениями стенок сосудов (набухание, слущивание эндотелия), сдавлением МС при отеке мозга или вследствие набухания отростков периваскулярной глии, а также со снижением артериального давления и венозным застоем после ишемии (Ames, 1975; Ito et al., 1980). Учитывая влияние маннитола на перечисленные факторы и исходя из результатов данного исследования, его применение для предупреждения NRP является патогенетически обоснованным. Так, введение маннитола сопровождается увеличением отрицательного заряда эритроцитов, что улучшает реологические показатели крови, он вызывает повышение осмотического давления крови, что способствует переходу жидкости из межклеточного

[ространства в кровь и препятствует сужению просвета капилляров. Поскольку <аксимальное дегидратирующее действие маннитола наступает через 30 мин Little, 1978), именно в данный период применение прапарата может дать ■аибольший защитный эффект.

Таким образом, премедикация маннитолом за 30 мин до временной »становкн мозгового кровотока у собак позволяет сохранить проходимость -шкрососудов мозга, а также вызывает дилатацию этих сосудов, что создает юлее благоприятные условия кровоснабжения мозга после ишемии.

1.3 Морфологические показатели микрососудистого русла мозга

при экспериментальной гипертензии

Целью данного раздела работы являлся количественный анализ процесса 'меньшения плотности микрососудистого русла в стволе головного мозга ипертензивных животных и изучение характера распределения МС разного :алибра в мозге этих животных по сравнению с нормотензивными.

Исследовали гистологические препараты ствола головного мозга 12 :понтанно гипертензивных крыс (СГК) и 14 крыс с экспериментальной почечной ипертонией (ПГК) (Grollman, 1944) массой 190-250 г. Артериальное давление АД) измеряли в хвостовой артерии. У гипертензивных крыс систолическое АД ¡оставляло 155-165 мм рт.ст., у контрольных 100-120 мм рт.ст.

Мозговые артерии наркотизированных гексеналом (100 мг на 1 кг шутрибрюшинно) животных прижизненно заполняли тушью (с добавлением епарина 100 ME на 1 мл туши). В неокрашенных просветленных срезах оловного мозга толщиной 20 мкм методом автоматического анализа 13ображений исследовали МС диаметром менее 15 мкм по специально шработанной программе.

Результаты количественной обработки полученных срезов (табл. 2) оказывают на уменьшение удельной длины МС, которое у СГК составляло 15,6 7о, а у ПГК 13,8% по сравнению с контролем. Значительно снижается при itom отношение площади сосудов к площади поля, в котором проводилось омерение: у СГК этот показатель на 24,6 % меньше, чем в контроле, а у 1ГК - на 21,5%. Таблица 2

Морфометрические параметры микрососудистого русла у гипертензивных крыс (М±т)

Группа Число Число из- Среднее Удельная Диаметр Плошаль со-

кивотных прспа меренных число полей длина сосудов сосудов судов/пло-

ратов полей в препарате мм/мм' мкм щадь ноля, 7с

контроль 48 1909 40±1,6 544±12,7 7,90±0,25 7,96 ±0,22

СГК 35 1650 47±2,1 459±15,0 6,96 ±0,27 6,00±0,20

Р <0,001 <0,05 <0,001

ПГК 42 1513 36±1,0 469±9,2 7,20±0,26 6,25±0,13

р <0,001 <0,05 <0,001

Происходит также уменьшение среднего диаметра МС, соответственно, на 11,9 и 8,9%. Указанные изменения свидетельствуют об уменьшении плотности микрососудистой сети мозга пшертензивных животных по сравнению с контрольными.

Анализ распределения площади исследуемых сосудов в зависимости от калибра показывает, что при гипертензии уменьшается доля МС диаметром 6-10 и 11-15 мкм (рис. 1) в единице объема ткани, что свидетельствует о выключении части этих МС из кровообращения.

—В том случае, если выключение полное, должны выключиться и снабжаемые этими сосудами более мелкие ветви. Но, как видно из диаграммы (рис. 1-а), доля, самых мелких сосудов (диаметр до 5 мкм) не изменяется. Поскольку полное выключение сосудов диаметром более 5 мкм маловероятно, следует сделать вывод, что уменьшение доли этих МС происходит за счет уменьшения их диаметра и перехода в категорию сосудов меньшего калибра, что должно привести к увеличению доли сосудов диаметром до 5 мкм. Но, поскольку суммарная площадь этих сосудов остается неизменной, очевидно, определенная часть их закрывается и полностью выключается из кровообращения.

Существенным является тот факт, что процесс выключения мелких сосудов как при спонтанной, так и при почечной гипертензии ограничен некоторым минимальным уровнем, который соответствует контрольному. Это свидетельствует о том, что даже на фоне патологических изменений, связанных с гипертензией, число функционирующих сосудов малого калибра поддерживается постоянным.

Результаты изучения одного из вероятных механизмов, обеспечивающих возможность значительного сокращения просвета МС и полного их закрытия приведены в разделе III.

1.4 Исследование ишемического повреждения миокарда и влияния ионола на ограничение ишемического некроза Известно, что с помощью антиоксиданта ионола удается ограничить зону некроза при экспериментальном инфаркте миокарда (Ф.З.Меерсон, 1984; Г.Г.Коновалова и др., 1984). Однако, исследования с введением ионола до или после создания экспериментального инфаркта, оставляют ряд открытых вопросов.

Кроме того, существенно, что измерение размеров некроза обычно проводилось одним из методов планиметрии или ручного счета, характеризующихся субъективностью оценок, значительной трудоемкостью и возможностью обработки ограниченных объемов экспериментального материала, что также влияет на точность и достоверность получаемых результатов. Для

Рис.1. Распределение площадей микрососудов разного диаметра в мозге контрольных и пшертензивных крыс, а - сосуды диаметром до 5 мкм; Ь - от 6 до 10 мкм; с - от 11 до 15 мкм. Светлые столбики - контроль; заштрихованные - СГК; темные- ПГК.

беспечения дальнейших исследований механизмов действия ионола и других репаратов, используемых для ограничения ишемических и постинфарктных овреждений, была поставлена задача разработать более эффективный метод ценки этих нарушений. Для применения автоматического анализа изображений

этих условиях требуется проведение сравнительных исследований араллелыю новым и традиционным методами - для определения корреляции [ежду их результатами, обеспечения "преемственности" оценок, полученных азными способами.

В связи с этим, цель данного этапа работы состояла в том, чтобы во-ервых, оценить эффективность ионола как ингибитора перекисного окисления ипидов в зоне и вне зоны ишемии, и во-вторых, оценить влияние на езультаты исследования применяемого метода определения размеров зоны екроза путем независимого параллельного использования двух методов: 1) учного - метода точечного счета (проведено М.В.Евсевьевой, Ставропольский [едицинский институт) и 2) автоматического - компьютерного анализа зображений исследуемых срезов сердца.

Эксперименты проведены на 42 крысах Вистар массой 180-200 г. Инфаркт шокарда создавали по методике Селье путем перевязки нисходящей ветви левой оронарной артерии. Ионол вводили per os в оливковом масле в дозе 100 1г/кг ежедневно в течение 3 дней до создания инфаркта и через 2 и 24 часа осле него. Сердца животных, получавших ионол, и контрольных животных ыли взяты через 48 часов после создания инфаркта. Измерения площади екротизированной ткани проводили на серийных гистотопографических срезах ердца, окрашенных нитросиним тетразолием на сукцинатдегидрогеназу. )пределение относительного объема некроза проводили на основе принципа (елессе, позволяющего рассчитывать долю объемных образований на основе лоскостных измерений. Величина относительного объема некротической ткани ычислялась по формуле: Vv = Pj / Р,

где: Pj - число тестовых точек, приходящихся на зону некроза в истологическом срезе при использовании ручного счета; Р, - суммарное число естовых точек, приходящихся на данный срез ткани. Принцип расчета при втоматической морфометрии был аналогичным, но вместо тестовых точек [спользовались структурные элементы телевизионного растра.

В целом результаты мофометрии показывают, что объем некротической кани в сердцах животных, получавших ионол, был на 25% меньше, чем у юнтрольных. Сравнение результатов, полученных методом точечного счета и втоматического анализа изображений, показывает, что они качественно овпадают (табл. 3). При этом величины объема некроза, измеренные втоматическим методом, на 23-25 % выше, чем при ручном счете. Эта 1азница обусловлена большей чувствительностью и точностью компьютерного метода, который обеспечивает более надежное выявление зон некроза. Следует акже отметить большую эффективность этого метода за счет высокого ¡ыстродействия.

Таким образом, подтверждены данные о том, что ионол ограничивает >азмеры ишемического некроза миокарда (Ф.З.Меерсон, 1984). Результаты ¡иохимических исследований (М.В. Евсевьева, Ф.З.Меерсон, 1989) позволяют

Таблица 3

Результаты ручной и автоматической морфометрии по определению влияния ионола на объем некротической ткани миокарда

Объем некроза в процентах к объему сердечной мышцы Условия опыта _

Метод точечного Метод автоматического счета анализа изображений

Инфаркт миокарда

38,5 ±2,9 (п=9) 48,1 ±2,8 (п=8)

Инфаркт миокарда

+ионол

28,8±1,4 (п=12) 36,6±1,7 (п=13)

* - различия по отношению к контролю достоверны (р<0.05); п - число животных.

отнести этот кардиопротекторный эффект в периинфарктной зоне за счет защитного действия на микрососудистое русло, где ионол подавляет активацию перекисного окисления липидов, после того, как первоначальная ишемия сменяется реоксигенацией, сопровождаемой характерным для инфаркта действием высоких концентраций катехоламинов.

1.5 Нарушения микроииркуляции тонкого кишечникапри острой ишемии разной продолжительности

Известно, что полное или частичное прекращение притока крови к тонкому кишечнику, остро возникающее под действием различных факторов (тромбоз, эмболия мезентериальных сосудов, ущемление или перекручивание кишечной петли и др.), вызывает нарушение микроциркуляции в ишемизированных тканях (Meilanh, Bulkley, 1987; Rozsa, Jacobson, 1987). Однако характер этих нарушений и зависимость их от продолжительности ишемии, а также изменения микроциркуляции в постишемическом периоде остаются малоизученными.

В связи с этим, задачей данного раздела работы было количественное исследование состояния микроциркуляции при острой локальной ишемии тонкой кишки продолжительностью от 5 мин до 4 час, а также в постишемическом периоде - до 10 суток. Исследование проведено на 78 крысах-самцах Вистар массой 150-350 г.

Системное АД у исследованных животных составляло 125,7±3,8 мм рт.ст. (16,7±0,5 кПа). Кратковременное повышение АД до 143,1 ±4,15 мм рт.ст.(Р<0,05) возникало лишь на 1-й минуте после начала окклюзии.

Вслед за наложением лигатуры на основание кишечной петли, находившейся на световоде, отмечалось резкое замедление кровотока во всех звеньях микрососудистого русла кишечной стенки и брыжейки. В большинстве сосудов через 1-2 мин кровоток полностью прекращался, но в отдельных

случаях, будучи резко замедленным, он сохранялся в течение всего периода окклюзии. В сравнительных экспериментах по изучению состояния микрососудистого русла кишечной стенки и брыжейки показано, что проявления основных микроциркуляторных феноменов в этих отделах русла практически одинаковы, поэтому при дальнейшем изложении конкретная локализация отмеченных изменений особо оговаривается лишь при наличии каких-либо различий.

В начальный период окклюзии происходило заполнение кровью участков микрососудистого русла, которые в нормальных условиях содержали единичные клетки крови, либо совсем не функционировали и, вследствие этого, были не видны на фоне окружающих тканей С увеличением срока ишемии этот процесс приобретал большую выраженность - заполнялось все больше сосудов, которые до этого были закрыты. При этом в отдельных участках наблюдался выход форменных элементов крови, главным образом эритроцитов, в экстраваскулярное пространство - образование экстравазатов. Они возникали в основном вокруг мелких венул и капилляров. В первом случае экстравазаты достигали значительных размеров, во втором - имели небольшую величину.

Рис. 2. Относительная площадь экстравазатов в зависимости от продолжительности ишемии.

Б - площадь, занимаемая экстравазатами в измерительном поле в процентах. По оси абсцисс - время в минутах после начала окклюзии. Сплошные линии соответствуют периоду окклюзии, штриховые - реперфузии. Цифры на графике - длительность ишемии в минутах.

После прекращения окклюзии продолжительностью 5-20 мин кровоток в большей части микрососудистого русла восстанавливался. Более продолжительная ишемия приводла к необратимым изменениям в МС - тромбированию их просвета и коагуляции крови. При этом выраженность остаточных явлений (стаз, замедленный кровоток) зависели от длительности ишемии. В процессе реперфузии происходило постепенное восстановление кровотока в разных участках русла, прежде всего в более крупных артериолярных ветвях и соответствующих им венулах. После кратковременной ишемии кровоток восстанавливался в большинстве капилляров, после длительной окклюзии кровоток осуществлялся в значительной степени через шунты.

В процессе реперфузии большая часть образовавшихся экстравазатов теряла свою плотность и уменьшалась в размерах, происходила их резорбция.

Количественный анализ изменений величины экстравазатов во время ишемии и реперфузии показывает, что при длительности окклюзии до 40-60 мин происходит их увеличение, которое имеет практически линейный характер (рис.2). Дальнейшее увеличение сроков ишемии не сопровождается увеличением площади экстравазатов, а при окклюзии сроком 180-240 мин даже отмечается тенденция к их уменьшению. Обращает на себя внимание, что в первые минуты после начала реперфузии происходит быстрое увеличение площади экстравазатов, отчетливо выраженное после ишемии сроком 5 и 120 мин.

Увеличение длительности ишемии до 120 мин приводит к усилению экстравазации. После ишемии сроком 240 мин площадь экстравазатов меньше, чем в предшествовавшие сроки. Это свидетельствует, с одной стороны, об обратимости нарушений целостности сосудистой стенки, а с другой - об интенсивных процессах резорбции эритроцитов, вышедших в околососудистое пространство. Хронические эксперименты показали, что в отдаленные сроки реперфузии (от 1 до 10 дней) экстравазаты подвергаются полной резорбции.

1.6 Влияние гипер- и гипотермии на состояние микроииркуляиин

тонкого кишечника в постишемнческом периоде

Задачей данного раздела работы было количественное изучение состояния микрососудистого русла при острой локальной ишемии и реперфузии тонкой кишки в условиях нормо-, гипер- и гипотермии.

Исследование проведено на 72 крысах-самцах Вистар при реперфузии ишемизированного (в течение 60 минут) участка кишки на протяжении 60 мин после возобновления кровотока в условиях: 1) нормотермии (38°С), 2)гипертермии (42°С) и 3) гипотермии (20°С).

Влияние гипертермии на реакции разных звеньев микрососудистого русла в норме и после ишемии изучали при обкладывании кишечной петли, выведенной на световод микроскопа, салфетками, смоченными в физрастворе с температурой 40°С, что в основном соответствует условиям, используемым в клинике для "оживления" участков кишки, подвергшихся ишемизации. Нормо- и гипотермию моделировали при температуре физраствора, соответственно 37°С и 20°С.

Системное АД у исследованных животных составляло 124±4 мм рт.ст. (16,5±0,5 кПа). АД понижалось лишь в конце периода реперфузии на фоне гипертермии в среднем до 94±12 мм рт.ст. (Р<0,001) и на фоне гипотермии до 100+13 мм рг.сг. (Р<0,05).

Результаты биомикроскопических исследований.

В процессе биомикроскопии в условиях гипертермии отчетливо отмечалось расширение разных звеньев микрососудистого русла. Однако, статистическая обработка данных, полученных по результатам измерений всего исследованного русла, не выявила достоверных различий. в средних величинах диаметра МС при гипертермии и в контроле. Это не соответствовало ни визуальным наблюдениям, ни результатам гистологического контроля. При повторном анализе экспериментальных данных оказалось, что не все исследованнные сосуды реагируют на одно и то же воздействие одинаковым образом. Только часть сосудов на гипертермию отвечала дилатацией (69% из 89-ти артериол, 65% из 93 венул и 73% из 158-ми капилляров). При этом увеличение просвета МС составляло от 13 до 20%. Пятая часть артериол и четверть всех исследованных венул не проявляли реакции на повышение температуры. И, что более важно для понимания возникших противоречий, около 12% артериол, 7% венул и 27% капилляров уменьшали свой просвет на 6-20%. Учитывая проявление такой неоднородной, разнонаправленной реакции на гиперемию, результаты других групп экспериментов были также подвергнуты дифференцированному анализу, который выявил аналогичный характер ответа МС.

Дифференцированная оценка изменений внутреннего диаметра в ответ на ишемию и реперфузию показала, что большая часть из 142-х артериол и 158-ми исследованных венул реагирует на такое воздействие увеличением просвета на 20-35% (рис. 3 а и (1 ). Но в то же время около 20% артериол н 15% венул уменьшают свой диаметр на 5-12%, а каждая десятая артернола и одна из двадцати венул не меняют при ишемии величину своего просвета, остаются 'нейтральными".

Гипертермия во время реперфузии изменяет характер реакции МС: в то время как доля артериол, участвующих в реакциях разных типов, остается практически неизменной, выраженность каждого вида реакции меняется весьма значительно (рис. 3 Ь и е ). Степень дилатации артериол уменьшается почти в 3, а венул - в 2 раза. При этом вдвое увеличивается степень констрикции артериол. Доля венул, отвечающих на это воздействие констрикцией, увеличивается вдвое, но степень их сокращения вдйое меньше. Доля 'нейтральных" сосудов остается практически неизменной.

Гипотермия в контрольных опытах сопровождалась вначале замедлением кровотока в МС, но через 2-5 минут происходило его восстановление и постепенное усиление вследствие дилатации большей части МС.

В постишемическом периоде гипотермия изменяла структуру реакции МС (рис. 3 с и / ). При неизменном количестве дилатированных артериол число расширенных венул увеличивалось почти вдвое. В то же время степень цилатации обоих отделов русла не менялась. Существенно возрастала доля артериол, уменьшающих свой просвет, в основном за счет сосудов, которые не проявляли своей реакции при ишемии. Характер реакции венул несколько иной число сосудов, участвующих в реакции дилатации и констрикции, практически одинаково, в то же время доля "нейтральных" сосудов возрастает вдвое. В целом, по данным биомнкроскопических исследований, снижение температуры кишки в постишемическом периоде способствовало более быстрой

нормализации микрогемодинамики и ускоряло процессы резорбции образовавшихся экстравазатов.

Результаты гистологического исследования

При гистологическом исследовании выявлено, что через 1 час ишемии в стенке кишки отмечался отек стромы ворсинок, круглоклеточная инфильтрация, кровоизлияния, нарушения нормальной структуры слизистой оболочки. После реперфузии морфологические изменения кишечной стенки заметно усиливались, стенка кишки была растянута, все слои ее истончены.

а) N. % Ь) % с) N. %

<1)А0, % 40

30 20 10 0

+ - 0

Ишемия

е)дО, % 40

+ • 0

Ишемия+гипертермия

Олй, % 40

302010"

13СНЕМ1А + НУРОТЕРМ1А

1

□ А

□ V

I

+ - О

Ишемия+гипотермия

Рис. 3. Диаграммы распределения разных звеньев мнкрососудистого русла брыжейки по типу реакции (а, Ь и с) и степени ее выраженности (с!, ей/) при ишемии, гипер- и гипотермии после ишемии. N - процент сосудов, участвующих в реакции данного типа: "+" - дилатация, "-" - констрикция, "0" - отсутствие реакции. ¿Р - относительное изменение диаметра сосудов. А - артериолы, V - венулы.

Гипертермия во время реперфузии вызывала усиление деструктивных процессов в кишечной стенке: значительный отек, инфильтрацию круглоклеточными элементами, массивные кровоизлияния на фоне нарушенной структуры слизистого слоя. Серозная и мышечная оболочки были не изменены. При гипотермии отек и круглоклеточная реакция ворсин выражены слабо, изменений микрососудов не отмечалось. В целом гистологическая картина в этом случае была близка к наблюдавшейся в конце ишемии.

Таким образом, деструктивные изменения стенки тонкой кишки при ишемии в течение одного часа, сопровождались сохранностью основы слизистой оболочки, что свидетельствует о возможности ее регенерации.

В целом результаты исследования свидетельствуют о том, что вопреки распространенному мнению, нагревание тканей, подвергшихся ишемии, усиливает возникающие нарушения микрососудистого русла и стимулирует деструктивные процессы в тканях, а понижение температуры, способствуя оптимизации режима микроциркуляции и снижению интенсивности обмена, сдерживает развитие этих процессов.

При проведении данного исследования выявлен факт наличия неоднородной реакции близких по строению и локализации звеньев микрососудистого русла, проявлявшийся в том, что на одинаковые воздействия внешне однотипные сосуды, как в артериолярных, так и венулярных отделах, отвечают различно. Эти отпеты носят разнонаправленный характер: в части сосудов отмечается дилатация, в других - констрикция, а в некоторых реакция на примененные воздействия отсутствует. Для выяснения возможных механизмов, лежащих в основе такой неоднородности реагирования сходных МС, проведено специальное исследование, результаты которого приведены в разделе III.

1.7 Нарушения микроциркуляции при воспалении

В этом разделе работы исследованы изменения микроциркуляторного русла, возникающие в процессе воспаления,и приведены количественные характеристики таких изменений, полученные методом автоматического анализа изображений.

У 42 крыс-самцов Вистар массой 150-250 г моделировали перитонит введением в брюшную полость каррагенина (Sigma, США) в дозе 5 мг в 5 мл физраствора NaCl. 9-ти контрольным животным внутрибркЛиинно вводили по 5 мл физраствора NaCl. У наркотизированных животных биомикроскопнчески изучали состояние микроциркуляторного русла брыжейки в период от 15 мин до 7 суток после введения исследуемых веществ. Измеряли внутренний (Di) и наружный (Dc) диаметры МС, определял» коэффициент их дилатации К = (De - Di ) / Di, показатель кровенаполнения, интенсивность и распространенность нарушений проницаемости стенок МС, число тучных клеток (ТК), приходящихся на единицу площади брыжейки. Показатель кровенаполнения определяли по формуле: ПК = (ODf - ODb) / (ODb . Di) . 100 (% / мкм),

где ODf - оптическая плотность кровотока в данном сосуде в направлении, перпендикулярном оси кровотока; ODb - оптическая плотность фона, т.е. тканей окружающих сосуд. Об интенсивности нарушений проницаемости сосудистой стенки судили по величине оптической плотности скоплений коллоидного угля (метки) в пораженных участках сосудов, а распространенность этих нарушений оценивали по площади, занимаемой скоплениями данной интенсивности.

Коллоидный уголь (РеНсап, ФРГ) вводили перед началом измерения через канюлю в левой сонной артерии (0,25 мл на 100 г массы животного).

Повреждение, вызванное каррагенином, сопровождалось развитием выраженной воспалительной реакции в микрососудистом русле брыжейки. Уже через 15 мин после введения каррагенина в МС отмечалась реакция краевого стояния лейкоцитов, а также начальные стадии дегрануляции ТК. Через 1 час реакция ткани и сосудов усиливалась, повышалась проницаемость стенок сосудов, отмечался выход лейкоцитов из просвета МС и более выраженная дегрануляция ТК. Через 24 часа развивалась выраженная картина воспаления. В последующие дни интенсивность воспалительной реакции уменьшалась и к 5-7 дню происходила нормализация состояния МС. Измерения проводили в период наибольших изменений - 1 сутки после нанесения повреждения.

Сравнение результатов измерений в контроле и при воспалении выявляет увеличение среднего диаметра венул с 15,2±0,9 до 18,8±1,1 мкм (Р<0,05) и капилляров с 6,6±0,2 до 7,4±0,2 мкм (Р<0,01, рис. 4-а), что свидетельствует о дилатации этих отделов микрососудистого русла. Разница в величинах средних диаметров артериол у контрольных и подопытных животных недостоверна. Однако, о наличии расширения артериол свидетельствует уменьшение коэффициента дилатации (рис. 4-Ь).

Показатели кровенаполнения у подопытных животных существенно не отличаются от контрольных значений (рис. 5-а). Этот параметр связан со скоростью кровотока в микрососудах - при ее увеличении возрастает оптическая плотность сосуда, что выражается в увеличении показателя кровенаполнения. Такая зависимость обусловлена изменением величины рассеяния света, проходящего через сосуд к чувствительному элементу (телекамере), при изменении скорости кровотока (1п1а£ПеИа е1 а!., 1975; Ра£ге11 е1 а1., 1980). Отмеченное отсутствие изменений показателя кровенаполнения в ткани при воспалении свидетельствует о том, что линейная скорость кровотока в изученных сосудах остается в пределах нормальных значений. Однако, при неизменной линейной скорости, имееющее место расширение микрососудистого русла приводит к увеличению объема протекающей крови, т.е. хотя линейная скорость не меняется, объемный кровоток в изученных микрососудах при воспалении увеличивается.

Для количественного описания процесса дегрануляции ТК был введен показатель дегрануляции (ПД), представляющий собой отношение числа ТК, приходящегося на единицу площади в норме, к их числу при воспалении. В наших опытах воспалительная реакция сопровождалась уменьшением числа ТК (рис. 5-Ь) вследствие их дегрануляции. Интенсивность дегрануляции характеризовалась ПД=2,53, т.е. более половины ТК подверглось распаду с выделением физиологически активных веществ (ФАВ): гистамина, серотонина, гепарина, наличие которых определялось дифференциальным окрашиванием.

Результаты измерений показали, что при воспалении проницаемость стенок микрососудов возрастала в 2,74 раза (рис. 6-а), причем эти нарушения охватывали значительную часть микрососудистого русла (рис. 6-Ь). Отмечена прямая зависимость между выраженностью процесса дегрануляции ТК и интенсивностью нарушений проницаемости. Эта зависимость отчетливо проявилась и в суммарных показателях: при ПД=2,53 проницаемость возрастала

а) 151050

0, шкш

- г1- -I- 1

/// _I—

' ''

Ь) %-

р1-|

20-

ю-

о-

Р>0.05 Р<0.05

Артериолы Венулы

Р<0.01

Капилляры

Р<0.001

Артериолы

Р<0.05

Венулы

Рис. 4. Изменения внутреннего диаметра ( а ) и коэффициента дилатации ( Ь ) разных отделов микрососудистого русла брыжейки В процессе воспаления.темные столбики -контрольнаштрихованные -воспаление.

а) % / ткт 0.3

0.2

0.1 -

0.0

£

Ь) 1 / тт 604020-

0

Р>0.05

Артериолы

Р>0.05

Венулы

Р<0.01

Число тучных клеток

Рис. 5: Изменения показателя кровенаполнения ( а ) и числа тучных клеток ( Ь ) в процессе воспаления.

Темные столбики - контроль; заштрихованные - воспаление.

а) 80604020 0

Ь)

2 2 ткт / тт -

2000-

юоо-

□ К

□ В

Г—I—

Р<0.05

Р<0.001

Рис. 6. Изменения интенсивности (а ) и распространенности нарушений проницаемости стенок микрососудов ( Ь ) в процессе воспаления.

Темные столбики - контроль; заштрихованные - воспаление.

в 2,74 раза. Эта связь, по-видимому, обусловлена тем, что интенсивность нарушений проницаемости пропорциональна количеству ФАВ, действующих на сосудистую стенку, а оно, в свою очередь, зависит от числа дегранулированных ТК.

Таким образом, экспериментально воспроизведены основные типы нарушений микроциркуляции, которые возникают в процессе воспаления, и определены количественные характеристики этих нарушений по ряду важнейших параметров. Приведенная модель и ее количественное описание могут служить основой для анализа патофизиологических механизмов воспалительной реакции на уровне микроциркуляции, а также для исследований по экспериментальной терапии этого вида патологии.

И. ИССЛЕДОВАНИЕ МИКРОГЕМОДИНАМИКИ

С ПОМОЩЬЮ МЕТОДА МИКРОПРИЗМАТИЧЕСКОЙ РЕШЕТКИ

2.1. Регистрация скорости кровотока в микрососудах

Скорость кровотока в микрососудах (СКМ) является одним из основных количественных параметров микрогемодинамики, определяющих состояние метаболизма в тканях. Величина СКМ определяется взаимодействием физических факторов с механизмами гуморальной и нервной регуляции, назначением которых является обеспечение достаточного уровня снабжения тканей кислородом и другими необходимыми веществами, а также адекватного режима удаления продуктов метаболизма и отвода тепла (Renkin, 1984).

Определение СКМ на живых объектах связано со значительными методическими трудностями. Распостраненные методы измерения СКМ, основанные на применении кросскоррелляторов, или использующие эффект Допплера, покадровый анализ кино- и видеограмм (А.М.Чернух и др., 1975; Intaglietta et al., 1975; Born, 1978; М.К.Калинина и др., 1979; Malmstrom, 1988; Oberg et al., 1988; Schmidt et al., 1991), хотя и позволяют получать важную информацию о микрокровотоке, все же обладают рядом существенных недостатков: ограниченные пределы измерений скорости или ограниченный диапазон диаметра микрососудов; возможность измерения скорости не в отдельном сосуде, а (например, при лазерной допплеровской флоуметрии) в совокупности нескольких или многих микрососудов; сложность и громоздкость аппаратуры, высокая ее стоимость; невозможность получения результатов измерения в момент регистрации (при кино- и видеосъемке) и др. Это вызывает необходимость конструирования новых приборов для измерения скорости микрокровотока, основанных на иных технических решениях.

С целью объективной оценки СКМ совместно с фирмой Leitz (ФРГ) создан прибор MPV-Compact-Vel, отличающийся от используемой в настоящее время аппаратуры подобного назначения более простым устройством и, в то же время, большей надежностью измерений. Нами проведены испытания опытного образца прибора. На основании результатов этой работы фирмой выпущена серийная его модификация, использованная в данном исследовании. Поскольку этот метод отличается от известных способов измерения скорости микрокровотока, необходимо кратко изложить его суть.

Метод основан на пространственной фильтрации изображения (Rockeman, Plesse, 1973) с помощью микропризматической решетки, которая вместе с двумя

фотодиодами составляет главные элементы измерительной части прибора (рис.7). Наблюдаемое через окуляры микроскопа измерительное окно путем изменения его размеров и пространственной ориентации совмещается с изображением исследуемого сосуда. При этом изображение микрососуда (1) через оптическую систему микроскопа (2) проецируется на микропризматическую решетку (3), которая представляет собой прозрачную пластину, одна сторона которой плоская, а другая состоит из расположенных параллельно микропризм. Изображение сосуда делится микропризмами на полосы, при этом на один фотодиод проецируются четные полосы, а на другой - нечетные. При движении эритроцитов по сосуду их изображение перемещается на решетке и попеременно попадает на оба фотодиода. На выходе измерительного устройства появляется электрический сигнал, частота которого прямо пропорциональна скорости движения эритроцитов Уэ. Она также находится в прямой зависимости от увеличения микроскопа (М) и обратно пропорциональна постоянной решетки ((3):

I = М . У* / ±

В данном исследовании использована решетка с постоянной А = 0,2 мм. От измерительного устройства сигнал поступает на вход усилителя, фильтруется, модулируется и выдается в виде постоянного напряжения, пропорционального частоте исходного сигнала. Результаты измерений скорости подаются на цифровой индикатор и регистрируются на Мингографе через усилитель 3|'шеп5-8б4.

Рис. 7. Схематическое изображение измерительной части прибора МРУ-Страа-уе1 для измерения скорости микрокровотока. 1 - микрососуд; 2 - оптическая система микроскопа; 3 - микропризматнческая решетка; 4 - промежуточна линза; 5 - усилитель-преобразователь сигналов; 6 - регистратор; а и Ь - фотодиоды; (1 - постоянная решетки. Стрелки - направление движения потока эритроцитов и их изображения.

В том случае, когда измерительное окно полностью перекрывает просвет сосуда, прибор определяет среднюю результирующую скорость движения эритроцитов Уэср. Если величина измерительного окна устанавливается в соответствии с частью просвета сосуда, то регистрируется скорость отдельных слоев клеток (Vaj, V^ ... Уэп), последовательные измерения которых в направлении, перпендикулярном оси кровотока, позволяют получить профиль распределения., скоростей по поперечному сечению сосуда.

В серии модельных экспериментов установлено, что показания прибора MPV-Compact-Vel согласуются с фактическими значениями скорости движения тест-объектов в широком диапазоне скоростей (от 1 до 180 мм/с) с высоким коэффициентом корреляции г = 0.98.

При этом существенно, что не требуется затрат времени на вычисление корреляции между сигналами, как в случае использования двухщелевого метода, и обеспечивается больший диапазон измеряемых скоростей за счет их нижнего предела. Если двухщелевой метод имеет строгие ограничения по диапазону измеряемых скоростей и диаметров сосудов, то данный метод, не обладает такими ограничениями. Существенным достоинством его является возможность изменения в широких пределах размеров измерительного поля без снижения точности измерений, что особенно важно в исследованиях in vivo.

Актуальной для большинства современных методов измерения скорости остается проблема соотношения между измеряемой величиной скорости движения эритроцитов Уэ и реальной скоростью кровотока Ук. Это соотношение зависит от диаметра исследуемого сосуда, вязкости крови и при прочих равных условиях может меняться с изменением скорости кровотока. В наших исследованиях использована установленная Zimmerhackl et al. (1984) эмпирическая зависимость Ук=0.88Уз - 0.11.

2.2. Распределение скоростей кровотока в микрососудистом русле брыжейки

При исследовании различных фармакологических, химических и физических воздействий на систему микроциркуляции, и особенно при изучении патологических состояний важное значение имеют данные об изменениях гемодинамических показателей по ходу микроциркуляторного русла. Одним из таких параметров, характеризующих состояние гемодинамики в норме и при патологических процессах, является скорость кровотока в микрососудах. Однако работы, в которых дается систематическое описание характера изменений СКМ по ходу терминального русла, единичны (К.А.Шошенко,1982; Lipowsky et al., 1974;). Чаще всего данные, приводимые в литературе, либо являются усредненными для всей кровеносной системы, либо относятся только к отдельным звеньям сосудистого русла (Б.Фолков, Э.Нил, 1976; К.Каро и др., 1981; Р.Рашмер, 1981).

В связи с этим, целью данного раздела работы было изучение изменений СКМ в последовательных звеньях микрососудистого русла брыжейки крыс, которое является объектом многих исследований физиологии и патологии микроциркуляции. Экперименты выполнены на 16 беспородных белых крысах-самцах массой 180-250 г под нембуталовым наркозом.

Измерения проводили в пределах сосудистых петель, каждая из которых представляет собой замкнутую гидравлическую систему с одним "входом" (артериола) и одним "выходом" (венула), и являющуюся пространственно организованным комплексом артериол, капилляров, венул и анастомозов -основой функционального элемента органа. При этом соотношение между разными звеньями русла, включенными в исследование, обусловливается его естественным строением и не зависит от субъективного выбора экспериментатора. Число сосудов в отдельных петлях варьировало от 10 до 50. Измерения СКМ и внутреннего диаметра соответствующих МС выполняли последовательно во всех звеньях петли. Всего исследовали 246 сосудов разного типа с внутренним диаметром от 4,5 до 29 мкм.

Все исследованные артериолы, венулы и артериоловенулярные анастомозы были разбиты на группы в зависимости от внутреннего диаметра с шагом 5 мкм. Капилляры составили самостоятельную группу. Полученные величины диаметров МС разных групп приведены в табл. 4, а соответствующие им величины СКМ показаны на рис. 8.

Таблица 4

Значения внутренних диаметров разных отделов микрососудистого русла брыжейки

N Тип Число Диаметр, мкм

группы сосудов сосудов min max M±m

1 К 49 4,5 12,0 7,6 ±0,3

2 А 16 6,9 9,0 8,8±0,2

В 13 7,2 9,9 8,9±0,2

АВА 10 5,0 9,9 7,6±0,4

3 А 40 10,0 14,9 12,7 ±0,2

В 24 10,3 14.8 13,2±0,2

АВА 16 10,7 14,5 12,4 ±0,3

4 А 21 15,2 19,8 17,5 ±0,3

В 29 15,4 19,8 17,2±0,3

АВА 3 15,2 16,5 16,0±0,4

5 А 7 20,4 23,2 21,6±0,9

В, 12 20,2 24,9 22,3 ±0,5

6 В 6 25,1 28,2 26,6±0,4

2-6 А 84 6,9 23,2 13,9±0,1

В 84 7,2 28,2 16,2 ±0,2

АВА 29 5,0 16,5 11,1 ±0,2

При среднем системном давлении крови 113±3 мм рт.ст. (15 кПа) значения СКМ в исследованных артериолах составляли от 0,4 до 4,5 мм/с, в капиллярах - от 0,25 до 1,6 мм/с, в венулах - от 0,3 до 2,7 мм/с, в анастомозах - от 0,2 до 4,7 мм/с. Средние значения СКМ (в мм/с) составили: в артериолах в целом

3.0 10

2.5 .2/ дел

2.0 - V (7 / ^ч! йб 1 *

1. 5 - тР « ^ Ч_] 12 & М -

10 - Г I 1 ;

0.5 ■ Л 1 г 1 1 Н ■ ■ в • 1 1

25 20 15 10 5 7,6 5 10 15 20 25 30

Рис. 8. График распределения средней скорости кровотока в разных звеньях микрососудистого русла брыжейки

ТОНКОЙ КИШКИ крыс. Штриховая лнния - СКМ в анастомозах; Цифры над кривой - число исследованных сосудов. По оси абсцисс - внутренний диаметр микрососудов (мкм); но оси ординат • скорость кровотока (мм/с).

1,9±0,1, в венулах 1,2±0,1, в капиллярах 0,8±0,06, а в анастомозах 1,7±0,2 мм/с. При этом между величинами СКМ в артериолах и венулах различия достаточно велики (р<0,001), они различаются также в венулах и анастомозах (р<0,01). Между СКМ в артериолах и анастомозах различия недостоверны, хотя между средними диаметрами всех трех названных отделов имеется высокая степень различия (р<0,001).

Несмотря на постепенное снижение средних величин СКМ по мере уменьшения диаметра артериол, достоверного изменения скорости в этом участке русла не происходит. Выраженное снижение скорости (50%, р<0,001) возникает лишь в месте перехода артериол в капилляры. Аналогичное, но уже обратное по знаку и несколько меньшее по величине изменение СКМ (на 40%, р<0,05) имеет место при переходе капилляров в венулы. В следующих звеньях русла на протяжении всего исследованного участка венул существенного увеличения СКМ не происходит.

Поскольку артериоловенулярные анастомозы занимают промежуточное положение между приносящими и уносящими кровь сосудами, значения СКМ в них отражены на графике в соответствующих по диаметру группах как артериол, так и венул. Хотя различия в средних величинах скорости для анастомозов разных групп недостоверны, все же заметна тенденция к возрастанию значений СКМ по мере уменьшения диаметра этих сосудов. При этом скорость в более крупных анастомозах заметно меньше, чем в артериолах такого же диаметра (р<0,05), и она практически совпадает со значениями, соответствующими венулам этой же группы. В то же время в анастомозах, ближайших по величине просвета к капиллярам, СКМ достоверно отличается от таковой в капиллярах (р<0,001).

В изученной популяции микрососудов обращает на себя внимание одинаковое число артериол и венул, хотя в разных группах сосудов их соотношение различно. Кроме того, заметно велико число анастомозов. В целом соотношение численности разных элементов исследованного русла составило: А : В : К : АВА = 2,9 : 2,9 : 1,7 : 1.

Исследование показало, что изменения СКМ в терминальном сосудистом русле брыжейки в пределах изменений диаметров артериол от 25 до 7 мкм, а венул от 7 до 30 мкм, не велики. Наиболее существенное снижение СКМ имеет место на весьма ограниченном участке - при переходе артериол в капилляры, а возрастание ее - на стыке между сетью капилляров и венулярным звеном.

2.3. Изменения скорости микрокровотока при острой кратковременной

ишемии кишечника

Важным патогенетическим звеном в развитии ишемических нарушений являются изменения микрогемодинамики, существенным показателем которой является скорость микрокровотока, определяющая уровень метаболических процессов в тканях и органах. Эксперименты по исследованию изменений микрогемодинамики при кратковременной ишемии разной продолжительности выполнены на микрососудистом русле брыжейки 36 крыс Вистар массой 200-ЗООг, находившихся под нембуталовым наркозом.

Ишемию исследуемого региона моделировали пережатием верхней брыжеечной артерии на 1 или 10 мин с помощью специального окклюдора. Регистрацию изучавшихся параметров проводили в артериолах внутренним диаметром от 5 до 40 мкм в течение всего периода окклюзии и в течение 20 мин после ее прекращения. Во всех сериях экспериментов за этот срок исследуемые показатели достигали стабильного уровня и в дальнейшем не претерпевали существенных изменений. Диаметр микрососудов во всех опытах незначительно уменьшался во время окклюзии, а вслед за снятием ее несколько увеличивался. Однако эти изменения были статистически не достоверны.

На рис. 9 представлены результаты двух серий экспериментов: изменение СКМ и системного АД в процессе ишемии продолжительностью 1 и 10 мин и последующей реперфузии. Пережатие артерии сопровождалось практически мгновенным снижением скорости до значений, близких к нулю. АД при этом возрастало на величину около 10% от исходного уровня.

Непосредственно вслед за снятием окклюзии во всех опытах происходило разнонаправленное изменение СКМ и АД: скорость мгновенно нарастала на 4060%, а давление снижалось на 35-45 %. После короткого периода снижения СКМ, обусловленного, повидимому, продолжающимся снижением АД, оба параметра начинают плавно увеличиваться и возвращаются к исходному уровню через 1-2 мин после 1-минутной ишемии и через 10-15 мин - после 10-минутной. Таким образом, показано, что даже непродолжительная (до 10 мин) ишемия оказывает заметное влияние на характер изменений микрогемодинамики в постишемическом периоде.

Если последствия однократной ишемии разной продолжительности изучаются во многих аспектах, то исследования изменений микроциркуляции, возника-

ющих при повторном прекращении кровотока, отсутствуют. В то же время процессы, происходящие при этом в микроциркуляторном русле, представляют интерес не только с теоретической точки зрения, но и имеют практическое значение. Так, в ряде случаев при оперативных вмешательствах, существенное значение имеет решение вопроса: что вызывает меньшие нарушения микроциркуляции - однократное отключение органа на время Т или разделение этого периода на ряд более коротких промежутков (11 + 12 +...+ Ц = Т), чередующихся с периодами включения кровотока.

Ь)

Рис. 9. Характер изменения скорости микрокровотока ( V ) и системного артериального давления ( Р ) во время ишемии разной продолжительности и в периоде реперфузин (в процентах от исходного уровня), а - длительность ишемии 1 мин (п=12); Ь - длительность ишемии 10 мин (п=90.

С целью моделирования таких условий проведены эксперименты, в которых ишемию исследуемого региона продолжительностью 1 мин вызывали повторно до 5 раз с интервалами 20 мин. При сравнении изменений исследуемых

параметров после повторной окклюзии (ишемия II, п = 7) с данными по первой окклюзии не выявляется достоверных различий. Однако после III (п = 5), IV (п = 5) и особенно V (п = 6) периодов ишемии (рис. 10) характер этих изменений становится иным: процесс нормализации АД замедляется, а СКМ вообще не достигает исходного уровня. Сравнение этих результатов с динамикой СКМ при 10-минутной окклюзии (см.рис.9-б) показывает, что нарушение микрогемодинамики оказываются более выраженными после V окклюзии длительностью 1 мин.

Рис. 10. Характер изменения скорости микрокровотока ( V ) и системного артериального давления ( Р ) после 5-го периода повторной ишемии длительностью 1 мин (п=12).

Результаты данной серии экспериментов свидетельствуют о том, что ювторные выключения кровотока вдвое меньшей суммарной продолжительности 5 мин) вызывают большие изменения микрогемодинамики, чем более (родолжительная (10 мин), но непрерывная остановка кровотока.

Возникновение и резкое первоначальное нарастание кровотока в шкрососудах после снятия окклюзии свидетельствуют о том, что (икроциркуляторное русло в ' этот момент проходимо. И хотя системное АД в то время достаточно быстро снижается, его оказывается достаточно, чтобы не олько преодолеть инерцию стаза и "прокачать" через регион, подвергшийся шемии, кровь, находившуюся в нем во время окклюзии, но и пропускать все овые порции свежей крови. Поскольку, несмотря на постепенное осстановление системного АД, микрокровоток в исследованных микрососудах се-таки не восстанавливается, 'можно предположить, что препятствия его олному восстановлению возникают с появлением в микроциркуляторном русле вежих порций крови, т.е. уже в периоде реперфузин. Но, если после днократной остановки кровотока механизмы, ответственные за восстановление :икрогемодинамики, преодолевают эти препятствия, то при повторной ишемии ни оказываются неспособными полностью компенсировать возникшие нарушения.

Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что степень арушений микрогемодинамики определяет не только ишемия, сама по себе, и