Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Кальций-зависимые нарушения функциональной активности тромбоцитов при сахарном диабете, их механизмы и коррекция (экспериментально-клинические исследования)

а»"® " ~

1 1' ' -

российская академия медицинских наук

научно-исследовательский институт общей патологии и патологической физиологии

На правах рукописи

А ВЛ КЯ Н Татьяна Юрьевна

КАЛЬЦИЙ —ЗАВИСИМЫЕ НАРУШЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ТРОМБОЦИТОВ ПРИ САХАРНОМ ДИАБЕТЕ, ИХ МЕХАНИЗМЫ И КОРРЕКЦИЯ

(экспериментально-клинические исследования) (14.00.16, — патологическая физиология)

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

/ ■ -.9 / .

; ¿у/ж.

Москва 1992

Работа выполнена в лаборатории патофизиологии Научно-исследовательского института педиатрии Российской Академии медицинских наук.

доктор медицинских наук, профессор X. М. Марков.

доктор медицинских наук, профессор П. Н. Александров, доктор медицинских наук, профессор Н. А. Федоров.

Ведущее учреждение — Институт экспериментальной кардиологии Кардиологического научного центра Российской Академии медицинских наук.

года -в « » часов на заседании с , , _..... _ _

ного совета Д.001.03.01 при НИИ общей патологии и патологической физиологии Российской Академии медицинских наук (125315, Москва, ул. Балтийская, д. 8).

С диссертацией можно ознакомляться в научной библиотеке НИИ общей патологии и патологической физиологии Российской Академии медицинских наук.

Научный руководитель

О ф л ци а л ь ны е оппоненты:

Защит иссертации состоится

Автореферат разослан

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат медицинских наук

Л. Н. Скуратовская

РОССЖ^ЖЛЯ |----

ГОСУГ'.Г ч? )...Рт',',я.,._

¿>1! ^С-1' ^¿щдя ХАРАКТЕРИСТИКА

РАБОТЫ

Исследование различных гслэктов патогенеза диабетических еншэтйтиЯ - генерализованных пораханий сосудов при сахарном дисОого - представляет несомненный научный и практический поскольку антиопатии играют вахнуга ро^.ь как в

точении и клчтпвских прояялениях самого сахарного диабэта (СД), так. и сердечно-сосудистых заболеваний, протекающих т ег<э фоне. Метаболические нарушения, гормональный дисбаланс и изменение иммунного стя*уед у вольных СД приводят к повреждению механизмов геыэствзъ « ^роеогока, проявллющзл /ся е нарушении тром0ооСразо$аэдэ И щхргздркуляции |Ферстрата М. и соаот,, 19861. Изменения е звене гемостаза сыракаютйя в увеличении

функциоиздьмОЙ рхп^ностм тромбоцитов что, наряду с изменениями в эндогеямая&иа?** ю ГПдй*омышичных клетках сосудов, представляет собой ЧЦШ ИЗ механизмов патогенеза диабетических

анги.од$ЭД« м 9 настоящее время предметом интенсивных

исследи..jrfi.fi 55300 ]

Дсдамо уэдсгмя 0 процессе свертывания крови.грсмОоциты также явл.»юг,С9 удойэдзД ?.">«<»л*>ной системой при изучении проц< асов И секреторных клвтоя. Они обладают сложной .скалой гумсрэсьно» регуляции, содержат развитую сет» клеточных мемвръп с юемимм» и насосами | Бгевз \Л/,Ш9|. Короткое время

гродОодм^ДО такке является их значительным пр.еи«у4Цес]грси^ пвс&опъху позволяет сгооврсмонно обнаруживать определяющих функциональное состояние этих фор«и«мшы* .^жеад.ч^йэ крови при развитии патологического процесс- и в год.л ¡(Огьстат Не< а1.,10Вб|

Кгиоад/ваа роль яокоо Са2+ в регуляции жизнедеятельности тродфодогов, Э том числе процессов со^яхения активации и «гагфчмого оТ|ввта, перестройки цитосяелета, агрегации, секреции л^гдомосгл ферментов, контролирующих уровень содержания 1рр<*йоцит арных простаиоидов. циклических нуклеотидов и <росфариг.ирсаанив Оелхоа. делает проблему Са - гомеоетаза основополагающей Уровень цитоплазматичвскто

Са2+ в глотках

различны» тканей определяется соотношением постуоген я «она из

_ рх.

вне*я«',очио£;« среди и органелл. сведения Са из клетки и гмхостьо внутриклеточные депо {Болдырев А.А. и соавт., 1085). Под

дейотвиом различных индукторов дер-агамии, взаимодействующих с рецепторами не плазматической мембране тромбоцитов, происходит резкое увеличение, внутриклеточной ксшцект рвции ионов Са2+ вследствие открытия рецептор— ®8вмеяямы* квльцизвых каната [Авдонин П.в. и соавт., 198б]. ОДноз-рвйГбкчо иабгаояастсв снижение содержания цАМФ в функциональном (пуяе, сттгутиия метаболита арахидоновой кислоты и перекисног© оегисламия липидов jSiess W.,'T80; Plstrobon D. et al., 1990]. Удartame избытка ионов Саг+ иэ цитоплазмы тромбоцитов в "основном происходит за счет активного функционирования -зависимой ATФв-ы fBras« XF,t9S5}

При СД наблю. ,аются увеличение- агрегациоикей способности тромбоцитов, изменение количественном ссот ношгкиЯ между циклическими нуклеотидами, проотаноидакл-г » компонентам*» системы антиоксид-н.ной защиты, приводящие к карушеиа& вкткэиости мебрвнносвязанных ферментов, изменению ионного- баланса кп&гки и т.д. [Rosen Р., 1907; Stelner М.,1987]. Очевидно, что иаифоязз поямый анализ молекулярных механизмов сосудистой патояоена *» нару&енкй гемостаза при СД возможен при одновре-маинс»' иссюдевамо* указанных параметров. Кроме того, ряд вопросо® оста&тсв недостаточно изученным и противорачивым, что оОусяо0«®ае-г необходимость дальнейших исследований в этой области

Особую актуальность приобретает поиск возможных путей коррекции измененного функционального состояния тромбоцитов- при данном заболевании. Среди множества фармакологических соединений-, действующих на различные звенья процесса активации кровяных пластинок, особое место занимают антиоксиданты. Наиболее приемлемым из них сегодня является oi-токоферол (витамин Е),поскольку он выполняет в живом ор"анизме целый ряд биологических функций и не обладает токсическим действием jKleljnen j et al., 1989]. Однако масляный, раствор витамина Е,применяемый в медицинской практике, не . удовлетворяет условию быстрого и эффективного распределения по сосудам из-за невозможности его инъекции в кровяное русло. Для этих целей необходима новая лекарственная форма, которой, по нашему мнению, может служить эмульсия »¿-токоферола на основе Сиосовместимых эмульгаторов

Исследование указанных проблем представляет как

г

теоретический, гак и практический интерес, поскольку позволяет получить более полное представление о механизмах нарушений в тромОоцитАрном звена гемостаза при СД, выявить новые диагностические критерии и предложить патогенетически обоснованные методы коррекции функцис альной активности тромбоцитов для профилактики и лечения диабетических ангиопатий и других форм сосудистой патологии.

л

Цель и задачи Целью данной работы было изучение

роли возможных изменений функциональной активности тромбоцитов и определяющих ее механизмов о патогенезе диабетических ангиопатий, а также поиск путей профилактики и лечения сосудистых осложнений СД.

Для достижения цели были постеаявны следующие задали:

I Иссладооать агрегацию тромбоцитов при сахарном диабете;

2. Определить внутриклеточную концентрацию ионов кальция и ' активность Са^-АТФаз в тромбоцитах в норме и при сахар юм

дизйзто;

3. Определить уровень циклических нуклеотидов а тромбоцитах;

4. Исследовать синтез проотвноидов в тромбоцитах и сосудистой стенке, а также жирнокислотный состао мембран тромбоцитов при сахарном диабете:

5. Определить эффективность применения эмульсии токоферола с целью коррекции параметров, определяющих функциональную активность тромбе итов при развитии диабетических ангиопатий.

КаУчцая нопианат Впервые осуществлен комплексный методическиГ подход к изучению функционального состояния тромбоцитов при сахарном диабете, включающий анализ нарушений этого состояния на разных этапах развития патологического процосса и ерзраотных особенностей Сольны*. Показано, что гипэрактивное состояние тромбоцито» при СД обусловлено увеличением внутриклеточной концентрации ионов кальция, одним из главных механизмов которого является снижение активнооти Са2+-АТФаз -основных Са2+-транслортирующих систем клетки, в свою очередь, повышенное содержание в тромбоцитах сопровождается

изменением концентрации циклических нyK/tëвft^Двв| нарушением соотношения ыекду насыщенными и йёнасыщённыыи мирными киолотомц в мембранных фосфолипидах, изменением баланса ыажду простациклином (РсУ 11 тромбоксаноМ в ■ p§йy^ibfйfв

уменьшения образования Рд12 в сосуДШой 6f§HK§ М усиления синтеза ТхА2 в тромбоцитах.

Разработан новый метод опрёДвЛёНйй - АТ ФйзНйй

активности в полых тромйоцигех челсёёХЯ/ ОсНМШ/Ш ИЗ Н£ШЫ§Н§Ыйй каналоформерного антибиотика алаМё+ИЦИна (г!0Лб;!Ш6АвНв@ решение ВНИИГПЭ'на изобретение N 47<?7СЗЗ/125515 2e.12.8Q ).

Впервые мсгсольэоаана эмульсий -^@К0ф§£@ла е ЦёЛЫО

коррекции параметров, определяющих футЦИбНШЬЩв ёМИвНвбЫ тромбоцитов при сахарном диабете. Установлен^ ««а ее§Д§НИЭ нобйП лекарственной . формы витамина , Е киаоТйЫМ & ОД Нормализует пониженное содержание сК-токоферола в тромбозах ы в значи+ольнай стаггони устраняет нарушения функциональной акгньностИ оТИх кЛëttiii кроаи, обусловленные сдвигами в обмена Са^"1", циклических йУклёв1ИДЬ§1 простаноидов и 'Т.п. Получены оригиальныв данные о положйтельНдМ влиянии эмульсии о(-токоферола на антитромбогенные сзойстеа сосудистой стенки при развитии диабетических ангиопатий.

Результаты работы по новому освещают некоторые вопросы патогёназа диабетических ангиопатий и механизмов тромбообразоаанмя.

Теоретическая и практическая значимость заботи. Обнаруженная корреляция мажду, нарушениями активности тромбоцитов и определявшими их внутриклеточными механизмами о одной оторсны, а также различными " проявлениями СД с другой, позволяют судить о тяжести течения СД, возникновения диабетической ангяспатии, ее выраженности и тл, что иожот иметь диагностической и прогностическое »начекив.

Установлены эффективность и порспохп'.скссть . применения оригинальной омульсяи <К-тскоферола для профилактики и лэчония диабетических ангиопатий,

' Разработанный метод определения Саг+-АТ©бзноЯ ектизности • (

тромбоцитов может быть использован для изучэнпп их кальций— транспортирующих систем при различных патологических состояниях.

OcHgpHsra положения, вынооимыа на защиту.

1.Развитие сахарного диабета сопровождается увеличением агрегационной способности тромбоцитов, обусловленным нарушением внутриклеточной концентрации ионов Са2+, синтеза тромбоцитарных лростанондов, циклических нуклиогидо» и некоторых других факторов.

2.Измеианив отмеченных параметров сопряжено с нарушениями в системах внтиоксидантной защиты клетки и жирнокислотного состава тромбоцитерных мембран

3.Введение In vivo амульсии -токоферола, нормализует функциональную активность тромбоцитов и антитромбогенные свойства " сосудистой стенки при денной патологии.

ЙЛЗЕЙЕВИЗ—Основные положения диссертации . были представлены на Всесоюзной конференции "Обмен кальция в физиологии и патологии сердечно-сосудистой системы" (Томск, 1388), Конференции молодых ученых НИИ педиатрии АМН СССР (Москва,1938), Международной конференции "Клеточная патология и фармакология* (Будапешт, 1238), (Y Всесоюзном съезде лзтофизмояогсэ (Кишинев, 1SG8), 7 Международной конференции по простагландинам и родственный соедини»'•>»' (Флоренция, 1990), Научной конференции НИИ педиатрии АМН СССР (Москва,1991), XI Международном симпозиуме "Простагяамйкны.яейкотриены и липоксины" 91" (Вашингтон. 1901), 2-м Bcecoosnot» симпозиуме "Теоретические и прикладные аспекты молекулярной биологии* (Самарканд, 1991).

Материалы диссертации ¡доложены и обсуждены на межяавораториой конференции Института педиатрии АМН (1991 г.).

ПуАгихаиш1 По тем» диссертации опубликовано 9 работ.

дрътл и структура писсеотамш. Диссертация изложена на 219 страницах машинописного текста, содержит 10 таблиц и 34 рисунка. Состоит из введений, обзора литературы, описания методов исследования, изложения полученных результатов и их обсуждения, выводов и списка цитируемой литературы (83 работы отечественны* и 261 - иностранных авторов).

МАТЕРИАЛЫ И МНТОДЫ ИССЯЕДОЗАНИЯ

Экспериментальные исследования проведены на 156 крысах (самцах) ликий Вистар и Бист&р-Киото двухмесячного возраста. Параклинические исследовании выполнены у 40 детей и 20 взрослых, больных сахарным диабетом, и у 50 здоровых доноров.

fir: модвль ниоу/укнаагкснцого сахарного

рмай'йта. Ди&Ззт вызывали у крыо однократной внутрибрюшинной инъекцией сгрелгозотоцина (60 мг/кг массы жиаотного). Заболевание считали развившимся, если уровень глюкозы е кроаи доотмгял 250 мг%. О развитии нефролатии судили по наличию протеину^.,,

Ве^дянив- емул&ояи -гокойшропа в хвостовую вену экспериментальных животных (1 мг/100 г массы животных) проводили о интервалом 48 часов в течение 6 недель.

Получевио суспэняии отмыты;-. тоомОоцитор осуществляли методом дифференциального центрифугирования. Крозь собирали в пробирки с нитратным антикоагулянтом (в соотношении 6:1} и центрифугировали 7 мин при 15Q д. Полученную обогащенную тромбоцитами плазму разводили антикоагулянтом (в соотношении T.1) и центр' фугировали в течение 10 минут при 350 д. Осадок суспендироэали в среда, содержащей 150 wM NaCI; 2,7 Ш КС!; 0,37 мМ NaH2P04; 1 мМ .V,ßCt2; 5 мМ О-глюкозу; 10 мМ HEP5S-NaOH (pH 6,65 при 37°С); 0,35% бычий сывороточный альбумин; апиразу (0,2 ед/мл). Затем тромбоциты внозь осаждали центрифугироганием при 350 g в течение 10 мин и ресуспендироаали в среде аналогичного состава, -содержащей 1 мМ CaCI2, но Ö63 спиразы (pH 7,4 при 37°С).

Пояачэт тромбоцитов осуществляли электрокондуктометрическим методом [Couiter W.H. 1В5б].

Мфагшиа тоомОочитсф проводили по методу Born (1963), ислольеуя дзухканальный агрегомвтр фирмы Peyton Asc.(Ctl)A).

Опрзявдзиий сэя&ажания ссобоанев-о в тромЭоимтах с помощью Quln-2 проводили по методу, .описанному в работе Авдонина (1985). Флуоресценцию регистрировали. на спектрофлуориметре "Hltachi-650" (Япония). Длины волн возбуждения и флуоресценции были равны соответственно 340 и 495 нм. Ширина щелей — 3 им. При расчете

онцентрации Са®* пользовались формулой, предложенной Tslen el ul (1382).

Шмеаеьиа_Ca2t— зависимой А ГФдяной сктирнооти тромбоцитов

человека производили с помощью оригинального метода» основанного на применении антибиотика аламэтицина, в сопряженной ферментной системе на спектрофотометре 'Shlmadzu МР$~501ЛЯпонйя) при 340 им (положительное решение ВНИИГПЭ на изобретение N 4747653/125515 от 26.12.90). В снабженную мешалкой термостаткруемую кварцевую <ююту со средой, содержащей 80 мМ NaCI; 15 мМ KCI; 5 мМ NsN3; _ 3 мМ ^0С12; Ю мМ HEPES (рН 7,2 при 37°С); 0,20 мМ NADH; . 0,25 мМ фосфоенолпируват; 60 икМ АТФ; пируваткинэзу (2 ед.ак.); лзкт8тдегиярогс!!'азу (б ед.вк.); бычий сыэороточкыЯ альбумин (0,5 мг/мл); гепарин (1,5 - 2 ел/мл), помещали тромбоциты (0,4 - -1 х 108 клеток). Затем вносили луСрол РХ (26 мкг/мл), оламдтицин (2 - 2,3 мг%) и, в зависимости от вида исслэдования, 1 мМ ЗГТА или Са^+ - ЭГТА. После этого регистрироаали на самописц« уменьшение оптической плотности, связанное с окислением NA0H Величину АТФазной йктигности, выраженную а нмоль ®н/кин . мг белка тромбоцитов, рассчитывали по формула, призодонной о руководства Кочетов« (1980).

различны) функциональных состояниях определяли по конкурентному связывание с высскоаффинкым белком, используя коммерческие наборы 1ебктизсэ фкрмы Amersham (Великобритания^

осуществляли рвдиоиммунным методом, ссмсоаиным на конкурентном ,эязшании радиоактивного антигена (^l-TxDg) и измеряемого Тх32 с антителами, с использованием стандартных наборов Института иэотслоэ Венгерской Академии наук.

крыс проводили посла инкубации тромбоцитов и сегментов брюшной аорты с арйхидоковой кислотой.

Простаноиды экстрагировали этиловым эфиром уксусной кислоты и разделяли одномерной тонкослойной хроматографией на пластинах *5Ии1оР (Чехословакия) в двух системах: 'бензол: /.метиловый эфир: этанол: уксусная кислота" {50:40:2:0,2) и "бензол: диокевн: уксусная кислота" (60:30:2) при определении биосинтеза тромбоксана

или •этилацетат: уксусная кислота: " гексан: вада"(110:10:20:100) при исследовании Оиосинтеза простациклина. Радиоактивные зоны определяли на радиоизотолном сквннере фирмы "Berthold* (ФРГ), радиоактивность измеряли на жидкостном сцинтилляционном счетчике "Магк-3" (США). Результаты выражали в процентах по отношению к общей радиоактивности на хроматографической пластинке, принятой зе ЮО%.

' Опрэпелянив_жирнокислотного_состав Фос.ФЩШЩЩОа

тромбоцитов. Экстракцию липидое проводили по методу Folch(1957) в присутствии антиоксиданта. Разделение липидов на классы осуществляли тонкослойной хроматографией образцов > а пластинах "Siiufoi" в системе "гексан : диэтиловый эфир : ледяная уксусная кислота" (80:20:1). Фосфолипиды метилировали при 80° 5%-ным раствором HCI в обезвоженном метаноле. Метиловые эфиры жирных кислот зкстрагйровали гексаном, очищали хроматографией на

пластимвк "Siiufoi", экстрагировали смесью "хлороформ : метанол" (Ю:1) и аналилироэалм на газовом хроматографе "F/actovap 4200" ("Carlo Elba", Италия) с пламенноионмзационным детектором в изотермическом режиме на стеклянной колонке, наполненной Ю% CS-1Q на Chfomosorb W-AW .100 -120 меш ("Aiítech", США).

Срдарзханйа -токоферола в тромбоцитах определяли по

матоду Tailor (1976) в модификации С.К.Добриной (1979).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Мопаяяоамнив сахарного диабету у!ур. В проведенном нами исследовании диабетогенный эффект стрептозотоцина в 50% случаев проявлялся уже через сутки после его инъекции. На протяжении всего эксперимента сохранялась стойкая гипергликемия, свидетельствующая о характерном для СД поражении инсулярного аппарате поджелудочной железы, наблюдались потеря в весе и увеличение артериального давления у крыс (рис.1).

(

РисЛИзманбниэ уровня. глюкозы в плазме кроВЙ и массы тела у контрольных животных (1) и крыс с сахарным диаСотяМ (2). По оси абсцисс - недели от момента начала эксперимента.

i 1 ,

На 5~В неделе йксперимш\та в 60% случаев оМечалась протсинурия, которую расценивали Ч рак " проявлений диабетической нефрспатии, обусловленной разлитием сосудистых осложнений (табл.1' При Этом такжо наОлюдалоо^ увеличение суточного количества потребляемой и зыдаляемйй о мочой .жидкости, появление а мочя глюкозы и кетоновых тел. К концу экспериментаа животных приобрела кислую реакцию. Таким образом, воспроизааденнвй модель экспериментального СД сопрозождалась, всеми нарушениями обмена веществ и соматического состояния йиэотмых, характерными для данной патологии.

нчйлюдали увеличение чувствительности отмытых тромбоцитов крыс с СД к индукторам агрегаций, в частности, к АДФ и низким концентрациям тромбина/ При этом характер концентрационной зависимости агрегации в присутствии АДФ не изменялся (рис.2). При, использовании тромбина в качестве индуктора arpe лции выявлялся Соле' сложный; характер зависимости величины агрегации от его концентрации (рис.3). Амплитуда агрегации при низких концентрациях тромбина почти на порядок превышала контрольные значения, а характер концентрационной зависимости агрегации в норме, соответственно, ; отличался от такового при СД. По мнению Born и со.ит. ведущая роль в тромбогенезе In vivo принадлежит АДФ, поскольку только его концентрация в слое, прилежащем к стенке сооуда, достигает величин, обеспечиаающих активацию тромбоцитов.

Таблица т,

Оокоставлэгада горамзхроз сааил-сстаго состотя и тетггтавза сййетэ езссстз у ¡дас при вгэдантгз »$уааека ¿-Ееяе$эрбяа в&чада (А) и а кеетр эксперэшгкха (Б)

показатель шиса тела прирост глюетэа КРОЗЯ прирост выделение с мочой РН

группах. г ) массы ( мг/дл ) содержа- в конце экспери мента мочи

тела ния глю- глюкоза белок кетоновые

животных - А Б А Б козы (мг/дл) (мг/дл) тела

контроль (п-5) 262,0+15.1 448,2+30,3 186.2+22,7 84.9+4,9 107,8+7,2 23,3+6,1 - - - 5,6+0,2

контроль +

витамин Е (п-5) 330.0*15.1 438,0±28,0 108,0+21.5 93.2+9.1 125,8^5,3 32,6+12,2 6.2+0,2

диабет Сп-8) 280,0+22,3 304,4+20,5 22.4+21,0 89,4+6,1 324,0+21.6 234.6+13,8 500 30-100 302 6,4+0,1

диабет +

витамин Е (п-7) 315,7+28,0 299,0*27.9 -16,4+27,9 99,3+9.7 294.7+15,5 195,4+12,6 50°-1000 20% 6,1+0.1

осложнен. диабет+

витамин Е (п-Ю) 266,0±14,4 #50.5+4,1 -6,0+14,2 106,6+5,0 400,3+17,3 292.0+27,4 500-1000 102 6,6+0,2 I

Рма.гЗагшш&оть агрегации тромбоцитов крыс от концентрации АДФ. 1 - контроль,. 2 - сахарный диабет .'

Пагг/чзтш у<( данные показывают, что .склонность к тромбозам при СД воарзагзвг у^йяч^гия чувствительности тромбоцитов как к АДФ,

лриоутетзуощ^И'/ а сосудах в достаточных количествах, так и к небольшим 0991М тромбина, при которых способность "дивбвтичйокик" ТРСМО^итов к агрегации на порядок выше' по сравнению с нормой.

Рис,Зависимость агрегации тромбоцитов крыс от концентрации тромбина. } К6н'г(к1пь. 2 - сахарный диабет

Кроме того, результаты ингибитчв^ого анализе, параллельно проведенного нами о помощью , ферм^тетиэной системы *фоофокреатин /фосфокреатинкиназа" (5 wM и 1Q ед/ыл соответственно), утилизующей оекретируемый АД(Р, и .индометацина 11В мМ), блокирующего синтез тромбоцитарных гростеноидо», указывают на то, что $ реализации повышенной еурегецирнндй способности тромбоцитов, при СД, наряду ,с изменениями н процесса* высвобождения АДгь и ? метабрлизмо драхидоноаой кислоты, принимает участие по меньшей мера еще один механизм, Учишевя, что вктиввция тромбоцитов переменно сопровождав; -я увеличением внутриклеточной концентрации, ирур* Сатим механизмом, на наы взгляд, вполне могут оказаться, м£РУЦ1вмия s ¡Ca2* .мессонцяврной системе и в системах регуляции содержания ионов С,а2+ е цитоплазму тромбоцитов,

судя по получ^дам нами .данным, примерно в 1,5 раза выше, нем у здоровых доноров, .{мс.4}. Однако, как известно, гомеостез ионов Ca2f р неактизиро!).вннь1х тромбоцитах дбеспечизартся ограничением входе Сис из плазмы, tyom. а*тиэ#ргс> удаления из клетки и его

Са^нуолц/я

Рис.4.Содержание ^рнов ,1в тромбоцитах адорояых доноров (1) и больных сахарным дебетом (2).

секвестрацией во внутриклеточные ©ргаивялы

Следовательно, обнаруженной ,,нами факт может являться результатом нарушения какого-нибудь одног.о.мли н&екопьтх из «тих механизме», Зго предположение подтверждается данными ВегдЬ С.Н. и сотр 11988), продемонстрировавшими увеличение вхчуда в покоящиеся

ТрОМЭОЦНГЫ вольных СД ПрММврНО Н9 Зв% ПО вр»ВНвик.'-з й ;<0НГрОлем, в ТО врэмя кок ЛОГЛОЩОМИО платной гуйулррной бистемой"

тромбоцитов, обработанных сапонином, в иорма и при СД было одинаковым,

Пр» аКТИВаЦИИ ТрОМбОЦИТЙЭ СОДвр*«ШЭ Ов^4" уиШтаЗе геп' за счет открытия рецептор-зависимых кензлоа ллазмвточдекый мемораны и иобияи»вции из рнутриклаточных депо {АЬс?й-иИ? ДА, 13631 6 связи с этим мы нвел9лоя®ди »в-зисимость приросте в тромбоцитах

крыв о СД и контрольных животный от концентрации адф (оис.5) и тромбина, <,4,

Р ИС,б-383КвИМ08Т!> содержания

ионов СП тромб->иитй» крыв ОТ »С№4СНТрСЦКИ АДО.

1 " контроле, Я ™ ввилрший диабет

10 4 АДФ.М

<0-6

Полученные результаты свидетельствует £>& у^еличе: 1и поступления Са2* 0 тромбоциты прд действием ДД<3? при данной патологии Приблизительно в 2 ра»Я. Это мох $7 быть с'йязано, в частности, со снижением активности вдонилатцик/шы тромбоцитов при сд, приводящим к уменьшение удержания з них цАМ<^ и оЭуслозлиэающим открытие р®цепгр^ш?исимых Са^+-каналов. Отличий в действии тромбина ив вход 8 тромбоциты крыс в норме и при СД

нами N9 обнаружено, что, ч ч.еетиббт'и, указывав-' на одинаковое количество р^мвлтрр-заеиоимм* каналов в обоих случаях. При этом, учитыэвяу что тромбин «ызыаавт также мобилизацию ионов Са2+ из внутри*лзючшх <де<10, «о»«® Предположить, чтг при СД имеются нарушения, и $ егом зэ^из Са2+-г0меостаза. Эта гипотеза подтвержден©» наших экспериментов по влиянию

внеклеточного ма А^ирасг концентрации этого катиона в

цитоплазма тромбоцит со ¿ддрцдых доноров и больных СД в ответ на тромбин.

другой причиной увеличения ркутрикпвтрчного содержания Ca®'5" в фомбоцитах при сд может являться нарушений функционирования Ca®"1 -насосов, локализованных в тром&оиитарных мемйрвНд* И рсущертеляющи* активное удаление ионов Ca2"' Vil цитсплашн В Пркое и ПОСШ активации jCarafoli Е., 1084; Болдырев A.A., 1005} Поэтому своей дальнейшей задачей мы сочли изучение этих систем (э§Гуля1Ш1 цитопявэмвтического »

тромбоцитах в норме и' при СД.

Суммарная Са2+-. .TPQHSflüitIfljb Функционирование Са2+-транспортирующих мембранных систем тромбоцитов обеспечивается специальным фермимтом " М0г+^39ВЦРИМОЙ, стимулируемой аденозинтрифосфаТаЗОЙ (или Св^'--АТФй99Й), ß фоц/всра исследования нами разработан МРТРД измерения 0©^+-АТЧ>^ЭНОй активности нативных тромбоЦНТЭВ человеке, ЛврММбИПИЗРврННМх каналоформерным антибиотиком алам#жаи»-,а:4- С поймана этсго метода в настоящей работе проведено количастеенире измерение и дана характеристика суммарной мембраннООвяз^мнай здгисимой АТФааной

активности тромбоцитов в норме И ПРИ С/1,. ß Р2ЭРТ9 г<"еК8а предпринята попытка выявить гетерогенность АТОвгнОЙ ЬХГЩИОСТИ С

использованием различных ингибиторе»- В' результате Оылз обнаружено, что мембранносвязанная Са2 + -аэ(?и<;имвя АТФР»Н8Я активность тромбоцитов человека в норма с00*9йля#т 3Q ММОЛМ Ф^/мик'ЫГ белка (при 37°С и концентрации АТФ SO MKMÍ- i*««« было ПОХЗШЮ, НТО Ca2f~ Атшаза тромбоцитов по свл<м обсштевм 'на идентична Ca2* - АТФезе саркоплазм-'.тического ретикупуМа бкелетных МЫШЦ кролике; OHfc болез чувствительна к ингибирующему ¿§ЙРТ(9ИЮ ванвдйте И крерцетинй. Кроме того, Са2Ч"-завиоимай АГФ»»ивя активность тромбоцитов подавлялась SITS и премилэмином. Кальмидазряий (соединение R24571) вызывал 50%--ное ийж&ирорание активности фермента при концентрации 2,5 мМ. ПЪпЫ+Ké ЩЫМНТЪ В тромбоЦИТвх Квяьмодулин-активируемую Са2+^АТ Фйз*у плазматических мембран с помощью соединения R24571- наи&олйе Mworo блокатора кальмодушна {Орлов см., 1987] - оказалась безуспешней, тк. при атом Сыяо обнаружено, что при низких концернрщиях каяьмидвзолий способен о««9мввть прямое ингибирующее aéfíCfsws? не различны© типы Се2+~АТФ«8. Однако внутриклеточной dQßep Ж0НИ« ИОНр® » fROWßOUHTe» В

конечном счет» опрбявп«ется суммарной Се^-зявисимой fr J Фазной

активное*)/-;, которая, судк пй нолучоннйм нами данным, при од снижена в 1,0 раза у дате!*! и почти в 2 раза у взрослы*

(рис.о).

1гнмрлц Ф,

....

мин > мг Овлка

- Контроль -- диабет

00 40

о

1 % щ

м

Риа.б.думмарная Сб8+'-АТ<Ьванвй активнооть тромбоцитом 4е1Т' " взрослы* (0) яри, сахарном диабета. Измерения проводили в] среде, содерждщйй 0з2+-ЗГТА (1 мМ яламатицин (2 мг■%), лубН'1' ' >ч мкг/^л), ДТФ (2! мМ).

СддеаУ^ша-ИИ^ЛИЧесо« нунле&тиаеа .0 ЮО'бсШЩ«- Основанием для проведения этих И®9Я0Д6§<ШИЙ при С5Д палпоГСЯ зависимость систем регуляции гомеостаза ба®'*" (В Чббтнести, рецвнюр-зеоисимых Са^1 -каналов плазматической мембраны ГрамОецигОН и - -насосов, локализованных в тромбоцитэрмЫМ МёМбр&Мйх) ОТ нонцентрации цАМФ и цГМФ в клетке [В1езз W.1 учвбТИЭ цАМФ во 'взаимодействии

тромбоцитов с поврежденной чтецкой ООвуДЙ (распластывание и образование тромбоподобных агрегате^) (ФсрОТраТЙ М. и соавт; 198б|; роль цАМФ в регуляции формы тромйбЦИГОЭ [Антоников И.М. и соавт., 1982]; влияние цГМФ на гидролиз пощфевфэинозитидов"' 1 и1-'реакции высвобождения [МакайЫта Э. а!., 10Я0]| действие циклических

нуклеотидов на биосинтез липидов о тромбоцитах человека [Хейдемаиис К.К. и соавт., 1983] и многие '1 другие' факторы, определяющие функциональную активность кровяных" пластинок.

Мы исследовали содержание циклических' нуклеотидов ^ тромбоцитах крыс с СД до й после агрегации, ' индуцированной АДФ. При этом наблюдалось уменьшение содержания "ЦАМФ и • цГМФ в неактивированных тромбоцитах крыс—диабетиков по сравнению с соответствующими показателями в контрольной1" группе !животных. Агрегация приводила к снижению содержания - цАМФ' в тромбоцитах

8

жипоткл . gêZiîk i-f-yrai, fCbfti; выражен,¡-¡¿¡y fïy» " - -концентраций цП<. ДЗ K8R V Н0|ЗМ«ШНЫК, Так И Atttdv. »t.iC0>'.itx ярма '.';.in этом отепень увв/шенйй ct-дсзрканмя цГМФ пр-з СА г.ззь:^;.*г icu. наолюдаемыэ лши еееёеннас™ в .содержании циклических нуклемилоо в тромбоцитах рои ^д еегмсуютеи с> данными других ûfetôpoa об увеличении ш iOnpyeu48fâ вдеии/шцикмшу îpôMOôlWtOS действия адф .прл сд, снижении автиане&тй гувмилбтцикла»« и раотворимой фосфодиэстеразы цГМФ з TpSMtèuwfû* нрм ^аннэй rtâto/iôrMM [Чирков Ю.Ю. и соав-., 1909; Яр»оп Р, et if„ 1804}. Нарушения в системе циклических нуклеотидов трвмбвцитоо îs чеетноети, уменьшение соотношений цам<г/цгмф, наб/аддашебея и в нашем наследовании) могут иметь разнообразные пислодстзик. Однако самыми еерьэзными из них являются, на наш в$гт&, нарушения цА>М©*»гЁвиоимой регуляции функционирования Са2"®"-йбизлЭВ И ôKïuSHOetM Сб^+"АТФазы. Кроме того, поскольку Са2+-ЛТ®еэс язляэтби типичным . интегральные белком, в регуляции se ектигнсоти еущвотвоннуй par,и деляны играть изменения лтидного ceci ива ызмЭрвн тргмЗсцитсв при СД продемонстрированные ронээ другими 53TO?t;<M [КьешОбй Г,М. и соавг., 190 <]•

Основываяс. на том, что наличии фоифолипиднЁ'ГО ©крукени* яоляотсн необходимым условием функционирования Св^^АТФааь активность которой возрастает с увеличением содержания (^насыщенных жирных кислот в липидном окружении фермента [Бо->аырев ДА к соавч., 1вв5], е также на зависимости функций тромбоцитов от липидмсго ссотаэа их мембран [Андрсонко Г.В. и соанг., 1986], мы

тромбоцитов при окспериментальном СД. Из получанных нами данных следует, что для СД, осложненного протеинурией, характерны изменения, приводящие к сдвигу соотношения между ненасыщенными и насыщенными жирными .ислотеми в сторону увеличения содержания последних (теОл.2). При этом наблюдается достоверное снижение концентрации линолеэой (C-)8;2ng) и линоленойой (С19,3пд) кислот, уме (ьшающих агрэгациокную .способность тромбоцитов, v увеличение содержания ■ дигомо— f-линолановой ¿молоты, обладающей

проагрегационным действием. Снижение содержания арахидоновой '®20:4пб' кислоты о фосфолйпидах тромбоцитов повйдимому.

Таблица 2.

ШфНо:п.:слшч1ыЯ состав фоа^олипвдов мембран г^кыйккпгточ крие Вкстар-Шзото в корью и при экспериментальном

сахарном диабете, осложненном протоииурксй

жирная кислота соответствующий метиловый эфир ( весовые X )

контроль (п-16) сахарный диабет (п-5) Р

14 0 3,43 ± 0,43 3,57 ± 0,42

16 0 23,21 + 1,55 26,30 + 1,09

16:1/17:0 3,76 + 0,48 2,18 1 0,29 0,01

18 0 11,28 + 0,73 15,90 ± 1,83 . 0,05

18 1п9 8,19 + 0,60 8,02 1 0,81

18 2гй 6,02 1 0,85 2,26 + 0,27 0,001

18 ЗпЗ 1,38 + 0,23 0,39 ± 0,10 0,001

20 0 0,60 + 0,19 0,64 ± 0,11

20 2п6 1,44 + 0,32 3,01 + 0,62 0,05

20 Зпб . 0,у? + 0,12 1,45 + 0,08 0,01

20 4пб 11,20 1 0,73 6,64 + 0,85 0,001

20 Зп9 0,41 1 0,16 0,07 + 0,06 0,02

20 5пЗ 0,91 + 0,17 . 0,34 + 0,09 0,01

' 22 4п6 0,52 + 0,13 1,04 ± 0,45

22 5пб 15,27 + 1,59 18,42 ± 1,4Я

22 5пЗ 0,06 + 0,04 0,20 + 0,19

22 6пЗ • 0,13 + 0,05 0,26 + 0,09

24 0 1,60 + 0,23 1,30+0,25

24 1п9 0,06 + 0,03 0,01

ненасыщенные/ насьиценные 1,41 + 0,12 сумма ЖК динолевой серии 37,73 + 2,15 сумма ЖК линоленовой серии 2,32 + 0,28 сумма ЖК олеиновой серии 8,64 + 0,65 0,95 ± 0,08 34,59 + 1,-95 1,12 + 0,29 8,33 ± 0,70 0,02

указывав) на ев усиленную мобилизацию в связи с увеличенным синтезом тромбокоаив Аз при СД [Сиоь]агпа5оп 5., 1987], Весьма существенным преяитявляетой уртановлонное нами уменьшение количестве айкоявпвнтаеноаой кислоты (С20:бПзЬ конечным продуктом циклоокоигвнавного пути метаболизме» которой является тромбоксан А3, и* обладающий лроагрегационными и вазоконстрикторными свойствами. Очевидно, что наблюдаемые нами изменения жирмокиолотмого ог.вктра фосфалипидов тромбоцитов обусловливают и* повышенную агрегацию. Это, в свою очередь, приводит к нарушению контакта тромбоцитоэ б эндотелиальными клетками сосуда и рвзвитию а ендогелии дистрофических процессов, способствуя снижению оиитога простациклина. Таким образом, наблюдается нарушение существующего в норме баланса между тромбоксаном и проотациилином, играющего ключевую роль в процессах гемостаза и развитии сердсчно-соэуд-»гих асЗэг.сзгний, о частности, диабетических «нгишзтий [Рао!оК( Я е{ 1235, Э. е! а1, 1986].

тпомРошугйК.....ьгсрта, ' 1_ГШ._ОД. Увсл^ч-"!«*! внутриклеточной

концентрации ионоэ связано тскжв с сбрсзозеия;^ тромбоксана А2

и вндоперекиоей простагландиноа |&ов1а А. е» а!.. 1988]. Судя по полученным нами данным, содержание тромбоксана А2 в тромбоцитах жиаот»ых-'диеботяко9 было увеличено даже е отсутствие индуктора атрогаци« (табл.Э), Инкубация ¡этих тромбоцитов с 14С~ арахидоновей сиолотсП приводила к повышенному'накоплению мэчегонного громбоксана Ац, соидотельствук об актиаации циклооксигенаэного пути ее метаболизма {рис.7), Стимуляция синтеза тромбоксена А2 в тромбоиитах, в частности, может яаяяться результатом характерного для СД повышения ектиэности фосфолипазы Ад, выщепляющей арахидоновую кислоту из фосфолипидов [ТаКейа Н. е1 а1,' 1981]. Зто предположение подтверждается зависимостью активности фосфолипазы ¿2 от иоиоа а также снижением содержания

арахидоновой кислоты в фоофолипидах тромбоцитов при СД, установленном в наших и других исследованиях [Бужуринэ КМ. и соавт., 1980; ^пе: ав. е1 а!.. 1ваз)

16

|3 отн.ел

1;

I

о

о

ОР - »Гиря шлиоактивность

Я контроль

ЛНвбО»

пп Ни*, мерный диабег

Рд12 ГхА3 ТхАг/Рд12

Рис.7.Биасинтеа простаноидоп ю •^С-^г^лскозоЛ «Ншиим » тромбоцитах и аорте крыо при сахарном диабота, индуцированном гнртцтоюцином.

О нарушении ьнгктромвсгежой актиэнооти сооудисной стенки при СД мы судили по умомъшонию биосинтеза приогациклина в сегментах аорты крыо (рио,7), Пр» агом релниив сосудистых осложнений способствовало ащ,а большему снижении образования этого соединения в сосуда. Указанные изменения ,1 продукции тромбоксана Аг и простациклина приводили к нарушению Оалаисо мпяду ними, более выраженному в группе животных с протеинуриай.

Как известно, синтез простаноадоэ представляет собой один из

*

вариантов ферментативного пути .чнпопвреох'ислонип в клетке, зависящий от айдогенных антиоксидантов. Сряди них основным считается <%. -токоферол (витамин К), предохраняющий ю>амйраны и локализованные в них ферменты от повреждений продуктами окислительных реакций,_[.Ерин А.Н, и соавг., 1985]. Активация перекиокого окисления липйдоз по ®сзм основным показателям при СД продемонстрирована во многих исследованиях [Бобырев ВН., 1989; Старосельцева Л.К. и ' соавт., 1986]. Повреждающее действие липопереохисяений при данной патологии заключается в модификации молекулярной и ультрабтруктурной организации мембран, обусловливающей изменение их функциональных характеристик.

Таблица з ■

•. ч Влияние ангиоксидактной терапки

• Иа. да&шчные параметры, определяйте функциональную активность тромбоцитов

^—-«^группа животных ■показатель " — контроль контроль* витамин Е диабет диабет+ витамин Е осложненный диабет + витамин Е

■¿¿держание-'Токоферола ■ - г Г/ от контроля ) 100.0+2,1 100.0+1,7 60,0+2,9 78,6±2,3 89,2+1,8

■лГ^.айтг. ■ ( % ) . 43 ± 5 45 + 3 б? + 7 60 + 6 48 + 3

цАМФ •. -Чу..- •'; клеток') . ■ 6,6 + 0,6 8,0 + 0,6 3,5 + 0,9 7,0 + 1,3 6,4 + 1,2

• «киодаЬго • 2,03+0,20 1,69+0,25 - 2,43+0.15 2,25+0,10 1.91+0,15

еаоейнтез тгш&сжсана в' ?ро«5оййт' <' %■ 0?*) 7,8+1,? 3,7 ± 1,4 13,0 + 2Л 12.3 + 2.0 6,1 + 1,0

биосинтез простациклина Е- аорте- ( 2 'ОР ) ■ 7,8 + 1.3 .6,6 + 1.2 7,5' + 1.7 8,1 + 1,3 ' 14,1 + 1.1

соотношение тромбоксан /йростаЦиклмнСотн. ед.) 0,99+0,05 1,32+0,03. 1,74+0,07 1,51+0,01 0.43+0,04

*рр оошая радиоактивность

Именно в с,-; ;/льтата перехисного окислахия липидоз нарушается и* Са^ + -транспортйрукэ1Цап способность, активность

мембранносзманных фврыонтов (в том уисле Са^-АТФаз), вязкость мембран и связанная с ней . подвижность рецепторов (Болдырев A.A., 1990J. Следовательно, содержание ei-токоферола в тромбоцитах является важным показателем интенсивности процессов липопереокисления, определяющих функциональную активность этих клеток крови | Stelner М., 1987]. В связи с этим о данной работе нами проведено онрододрнио концентрации ¿-тохабаполй. п laaiiÜQmil&X крыс при СД, а обнаруженное снижение содержания этого важнейшего природно-го антиоксиданта может йВАйться одной из причин акти&оции переписного окислений липидоэ ü громбОЦитах (таОл.З). Кроме того, наблюдаемое истощение системы ан^оксядйнтной защиты в тромбоцитах свидетельствует о cvnt'-.otsc-- stufi г^нципиальной возможности коррекции этого нарушения путем (заедания экзогенного Л-токоферола,

К настоящему времени проведено довольно значительное число исследований по применению этого наиболее. эффективного природного знтисксиданта при экспериментальном и клиническом СД [Gilbert NA. ot ai., 19S3; Steiner M., 19831, Однако, гтроралькый путь введения SMtauMHa Е нельзя рассматривать как оптимальный в связи с его ЗабНсимсстыэ от процессов всасывании о яелудочно-кишячном тракте Эффективной распрвдэлениэ токоферола по осем органам и тканям молот осуществить только кровеносная система, но масляный раствор витамина Е, применяемый в медицинской .практика, при этом использовать нельзя из-за нойозмоанооти его инъекции з кровяное русло. Удовлетворяющей отим условиям могла оказатьоя эмульсия «(-токоферола на основа биосовместимых эмульгаторов, которую мы использоэали в своих дальнейших исследованиях. В связи о этим нем предстояло выяснить, насколько эффективным яэляотсп применение денной лекарственной формы токоферола и какоз механизм ее влияния на инТерооующиа нос пэраматры функциональной активности тромСоцитоэ.

Нами обнаружено значительной улучшениа физического состояния экспериментальных жиаотных, получавших омульсию токоферола Применение антиоксидантной терапии предотвращало или отдаляло

развитие оооуй«атых ССЛОХМСНИЙ у крыс с' СД, нз изменяя, однако, уровня глюкозы 0 идем И мрчв {таблЛ}. Увеличение содержания «¿-токоферола а дамОреха* тромДеиитсз ¿.'рыр С СД коррелировала с изменением таких исследованных нами параметров, , как агрегация тромбоцитов, содер'кемМЗ в ни* цАЫФ и тромбоксана А2 а также с биосинтезом ромОоксана Ад й грсыОоцитех И простациклина в аорт« (табл.З). Полученные нами результаты согласуются с данными других авторов применявших традиционн/ю декарстеинмую форму витамина Е. Кроме того, в нашем исследовании показано, ЧТО б-надельный курс инъекций эмульсии с( -токофзрояе пвпя91СВ епоЛИВ . достаточным для нормализации параметров, характеризующих функциональную активность тромбоцитов и антитро-^богенные рвойотоа сосудистой стенг.и.

ВЫВОДЫ

1.Воспроизведена зкспориментальнея модель ^нсуяинзависимого саха; -юго диабета у крыс, индуцированного стрмтозотоцином. Развитие сахарного диабета сопровождалось всеми * типичными проявлениями заболевания: гипергликемиай, г.пюкоаури&й. полиурней, полидипсией, подъемом артериального давления и потерей еаса у скспериыентйяьных жиоогныи. На 5-6 надело эксперимента у 60% животнык регистрировалась ' протеинурия, свидетельствующая о развитии диаб ти«еской мефролатии.

2.Показано, что г.ри сахарном диабете наблюдается нарушение функциональной активности тромбоцитов, выражающееся в увеличении их агрегационкой способности, что мог.ет обусловливать процессы тромбообразоеания при данной патологии.

З-Обн^ружеко, что функциональные нарушения тромбоцит арного звена гемостаза при евхарчом диабете сопровождаются' повышением вну 1 рикаатоодей концентрации ионов Са2+ а "роыбоцитах, обусловленным увеличением входа Са2+ извне по рэцоп > орзаеисимым квиг>лам и подавлением активного транспорта этг.< ионов из цитоапа^яу. При этом продемонстрировано снижение содержания

гг

цикличаей;,* трамбоц^тах,' которое может являться

СМ&ОПМем /ИЗГНЧЖК! внугрххгогочной концентрации ионов Са2+" и ' способыесна?!» нарушению гомеостаэа о

тртбоцтах тгагхтт.

4Рззр&6о1ви у&1од Определения Са2+-АТОазнои активности и31ивныг< 1ромвоир»т09 человека, основанный на применении яш*зяофор£тсрксто свтйЗштика аламетицина (попокительноо решение ЕЖШФ »Ю («сбрстсиггд ^ 4747953/125515 от 26.12.90). С помощью ото*0 «катода пэйй^стго снмжсмие суммарной зависимой АТОазной

о «■¡кйиОодап'зх детей и взрослых, 'больных сахарным •

дтйатом.

5Я(ЮЯ0в${ха> анализ жирнокислотного состава фосфолипидов трдабс8У*тоя>, сгадательствующий об увеличении соотношения "масы-«чентею/иеивсбквдимме жирные кислоты" при ол* дп^Сате.

&Усг$новпоно уьеличение синтеза проагрегажа тромбоксана п при сахарном диабете и снижение образования антиагре/гзыа «рвстащиклина в сосудистом эндотелии, более выраженное при «ежмшекн'ом течении заболевания. Такое "арушение баланса между эгпы* дв-уйяя проотаноидами мохет лехать в основа тромбоосразования в есегудзх при диабете и развития диабетически* акгиопатий.

7.ГТоказано, что введение животные ■ 0 сахагчым диабетом эмульсии аС -токоферола нормализует исследованные параметры, влиь.ощиег на функциональную активность тромбоцитов, и повышает антитромб'огенные свойства сосудистой стенки, отдаляя или даже предотвращая развитие сосудистых осложнений. Полученные данные свидетельствуют о перспективности использования згой эмульсии о качестве новой лекарственной формы витамина Е

Спша11лгаОш^дуйдш<(штыя_до тет диеаэилшд

1.Агрегация тромбоцитов и Сиосинтез тромбоксана А£ при экспериментальном'сахарном диабете // Обмен кальция в физиологии и патологии сердечно-' сосудистой системы: Тез.докл.Всесоюз.конФ-Томск,1988. -СЗ. (соавт. Задкова Г.Ф, Маркое Х.Ч)

2.Functional changes In plaielejs in diabetes meiiuus ,. / Int.conf.'Cellular petholooy and pharmacology. Budapest, 1988.-P.60. tco auth. Markov Ch.M.)

3.Международная конференция "Клеточная патология и фарма: кология' //Биохимия. - 1989. - Т.4, выл.З. - С. 524 526

(соавт.Авакян Э.А.Ц

п.Жирно-кислотный спектр фосфрлипидов тромбоцитов при экспериментальном сахарном диабете, осложненном лротеинурией // Проблемы эндокринологии. - 1900. - tj 3 - С- 76-61 (соавт Бондарь ВН. Задкоаа Г.Ф., Марков ХМ)

5.Содерг:бни» циклических аз и тромбоксана В^ в

тромбоцитах при сахарном дкаОоге //Теа.дох»). Всесоюзсьеада патофиаиологоз. Кишинев, 1389 ~ О.$252. icoear. ЗкОт-ина А Г.)

8,Blood colls - vascolsf walJ ¡in,lection in slisplozoJocm--mc3uced diabetic normotenslve and spontaneously rats // ти

Int.conf. of prostaglandins and compound;, fioience, 1990 -

P.14B. (co-auth. Zadkova -Q.F., Markov OxM) "

T.lnfluence of pi -tocopherol on fciood ceils - vascuia' //aft Interaction In streptozotocin-lnduced <iiAt>etes in. t&ts in« Spnnj

Sy np. "Prostaglandins, (eukotrfenes iyeshtfig<on,]231 Ico-

auth. Zadkova GJ , Markov Ci%MJ

8.Молекулярные механизмы яатог««еза ди,а0$«1и*ес.*.их ангиопотий и их коррекция // Тоздожл. 2 Эсесоюз с^поэ.и^^а 'Приклаймые и теоретические молекулярной биологии"

Самару • i 1991. {coear. Задкова Г.Ф, Пашк-вьи* Д.Д)

O.EfiactS of etamethicm on the tamer function of oioloo'ca' membrane: // General Phyj'tfksgy. - 1У92 - Voni.Nl (co-.auih Bitov VB, Tyerdislova u el at)

"ojaiKcaac к ссчат? ttv- .¿'г r.

Ъ:раж зпк.

Tv.rrnatM Л