Автореферат и диссертация по медицине (14.00.14) на тему:Иммуноцитохимическое исследование в диагностике и оценке важнейших факторов прогноза злокачественных и доброкачественных образований

На правах рукописи

Савостикова Марина Владимировна

ИММУНОЦИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ В ДИАГНОСТИКЕ И ОЦЕНКЕ ВАЖНЕЙШИХ ФАКТОРОВ

ПРОГНОЗА ЗЛОКАЧЕСТВЕННЫХ И

!

ДОБРОКАЧЕСТВЕННЫХ ОБРАЗОВАНИИ

14.00.14 - Онкология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

МОСКВА 2006

003068042

Работа выполнена в ФГУ «Московский научно-исследовательский онкологический институт имени П.А.Герцена Росздрава» (директор- академик РАМН, профессор В.И.ЧИССОВ)

Научный руководитель: доктор медицинских наук

Надежда Николаевна ВОЛЧЕНКО

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор Ирина Петровна ШАБАЛОВА

доктор медицинских наук,

профессор Владимир Николаевич БОГАТЫРЕВ

Ведущее учреждение - ФГУ «Российский научный центр

рентгенорадиологии Росздрава»

Защита состоится

О^о

часов на заседании диссертационного совета Д 208.047.01 ФГУ Московского научно-исследовательского онкологического института имени ПА.Герцена Росздрава. (125284, г. Москва, 2-ой ¿откинский проезд, 3).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУ Московского научно-исследовательского онкологического института имени П.А.Герцена Росздрава.

Автореферат разослан «/У » 2007.

Ученый секретарь диссертационного ученого совета

доктор медицинских наук, профессор С.А.СЕДЫХ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Цитологический метод исследования в

настоящее время широко применяется в диагностике опухолевых и

неопухолевых заболеваний. Используя только рутинное цитологическое

исследование, возникают непреодолимые трудности при установлении

гистогенеза отдельных опухолей, определении источника метастазирования,

трактовке первично-множественных поражений, уточнении степени

распространенности опухолевого процесса. Определение гистологической

формы опухоли при цитологическом исследовании возможно в 60-70%.

Вместе с тем, результаты цитологического метода определяют лечебную

тактику, в связи с чем имеется необходимость в применении новых

уточняющих методов, одним из которых является иммуноцитохимическое

исследование. Разнообразие моноклональных антител, используемых в

иммуноцитохимических исследованиях тонкоигольных пунктатов, в каждом

конкретном случае позволяет ответить на вопрос, имеет ли данная опухоль

эпителиальное происхождение или является саркомой, меланомой,

лимфомой. (Глузман Д.Ф. и соавт., 2003; Петров C.B., Райхлин Н.Т., 2004;

Jaffe S. et al., 2001; Fletcher D.M. et al., 2002).

ИЦХ помогает в определен.™ источника метастазирования при

невыявленном первичном очаге, хотя лишь три маркера имеют

относительную органоспецифичность. тиреоглобулин для выявления

метастазов и первичной диагностики папиллярного и фолликулярного рака и

кальцитонин - для опухолей из С-клеток щитовидной железы, а также

3

простатоспецифический антиген для диагностики рака предстательной железы. В настоящее время проводится попытка определить органоспецифичность метастазов по экспрессии высоко- и низкомопекулярных цитокератинов. (Савелов Н.А и соавт., 2005).

Степень распространения опухолевого процесса определяет стадию и тактику лечебных мероприятий. Иммуноцитохимический метод увеличивает выявление метастатического поражения лимфатических узлов на 22-24%. (Fetsch Р.А. et al., 2000; Gown A.M., 2002).

Использование иммуноцитохимического метода позволяет выявить на дооперадионном этапе факторы, определяющие ответ опухоли на лечение. Исследование рецепторов эстрогенов и прогестерона, онкопротеина С-егЬВ-2 при раке молочной железы (РМЖ), эндометрия, CD-20 при фолликулярных лимфомах, CD-I 17 при стромальных гастроинтерстицинальных опухолях позволяет проводить эффективную целенаправленную таргетную терапию. Экспрессия ряда маркеров клетками опухоли: рецепторов эстрогенов и прогестерона, онкопротеина С-егЬВ-2, маркера апоптоза р53, пролиферативной активности определяет прогноз заболевания и влияет на лечебную тактику (Jeziorski A., et al., 2000; De Laurentiis M. et al., 2005).

В качестве альтернативы иммуногистохимического метода может быть предложено определение экспрессии молекулярных маркеров на клеточном уровне - иммуноцитохимический метод (ИЦХ) (Глухова Е.И., 2003:

Лукашина М.И.., 2003; Афанасьева З.А. и соавт., 2003; 2004; Bozzetti С. et al.

4

1994, 2000, 2003; ¡^гел Ь. й а1„ 2003; 1ауагат в. ег а1., 2005) Сопоставление результатов экспрессии молекулярных маркеров при иммуноцитохимическом и иммуногистохимическом исследованиях проводилось рядом исследователей и получена хорошая корреляция: совпадение результатов иммуноцитохимического и иммуногистохимического исследований составило от 61% до 92% (Глухова Е.И., 2003; Лукашина М.И., 2003; ВоггеШ С. ег а1., 1994; №ггоН Я. ег а1., 1994, 2000, 2003; Lбfgren Ь. ег а1., 2003; РоНй ЕЛ', а а1., 2005).

Иммуноцитохимическое исследование в ряде наблюдений позволяет устранить необходимость использо зания ряда инвазивных и дорогостоящих диагностических мероприятий. Вместе с тем, остается неясным место иммуноцитохимического метода в современной морфологической диагностике при уточнении гистогенеза, степени распространенности, в определении предсказательных и прогностических факторов при опухоли и опухолеподобных процессах.

Цель исследования - определить возможности иммуноцитохимического метода исследования в диагностике и оценке важнейших факторов прогноза злокачественных и доброкачественных образований.

Для достижения поставленной цели решались следующие задачи:

Изучить преимущества и недостатки использования жидкостной системы СуШБрт приготовления препаратов при ИЦХ исследовании.

Оценить возможности иммуноцитохимического метода в определении гистогенеза некоторых опухолей и метастатических поражений без выявленного первичного очага.

Выявить значение иммуноцитохимического метода в диагностике метастатического поражения лимфатических узлов.

Показать возможности иммуноцитохимического метода и провести сравнительный анализ с иммуногистохимическим исследованием в определении пролиферативной активности (Кл-67), экспрессии рецепторов эстрогенов, прогестерона и онкопротеина С-егЬВ-2 при раке молочной железы.

Изучить экспрессию стероидных гормонов при доброкачественной патологии молочной железы.

Научная новизиа и практическая значимость. Апробирован принципиально новый подход в приготовлении и обработке цитологических препаратов для иммуноцитохимического исследования с использованием жидкостной системы СуЮБрт, позволяющий получить монослой клеток и уменьшить расход сывороток в 6-8 раз, сократить время просмотра препарата. Разработана новая среда накопления, не изменяющая морфологию и биологию клеток, сохраняющая их до 48 часов (патент на изобретение № 2246110 «Питательная среда накопления образца клеток для последующего цитологического и\или иммуноцитохимического анализа», решение о выдаче от 19.05.04).

В работе показаны возможности иммуноцитохимического метода в предоперационной морфологической диагностике опухолей без выявленного первичного очага, при первично множественных поражениях, фенотипировании В- и Т-клеточных лимфом, оценке степени распространения опухолевого процесса.

ИЦХ метод имеет большое значение при оценке некоторых предсказательных и прогностических факторов при исследовании злокачественных и доброкачественных образований молочных желез: рецепторов стероидных гормонов (РЭ и РП), белка пролиферативной активности Кл-67 и онкопротеина С-егЬВ-2. Полученные результаты в равной мере соответствуют и не уступают ИГХ исследованиям, что подтверждается высоким уровнем корреляции между методами и позволяют рекомендовать использование иммуноцитохимических исследований перед назначением неоадъювантной терапии. Использование ИЦХ значительно расширяет возможности цитологического метода в определении гистогенеза новообразований, источника метастазирования опухолей, степени распространения злокачественного процесса, а также на дооперационном этапе позволяет оценить факторы прогноза злокачественных и доброкачественных образований.

Внедрение в практику. Результаты исследования внедрены в практику отделения онкоцитологии МНИОИ им. П.А.Герцена.

По материалам диссертации опубликовано 22 работы. Основные положения выносимые на защиту.

1. Использование жидкостной системы Суюзрт при ИЦХ исследовании.

2. ИЦХ метод в определении гистогенеза некоторых опухолей и метастатических поражений без выявленного первичного очага.

3. Значимость иммуноцитохимического метода в диагностике метастатического поражения лимфатических узлов.

4. Сравнительный анализ иммуноцитохимического и иммуногистохимического методов исследования в определении пролиферативной активности (Кл-67), экспрессии рецепторов эстрогенов, прогестерона и онкопротеина С-егЬВ-2 при раке молочной железы.

5. Результаты экспрессии стероидных гормонов (ИЕ, Ш3) при доброкачественной патологии молочной железы.

Апробация работы. Диссертация апробирована 23 ноября 2006 года на заседании межотделенческой конференции отделений онкоцитологии, патоморфологии, модификаторов и протекторов противоопухолевой терапии, отделения прогноза эффективности консервативного лечения, клинических подразделений МНИОИ им. П.А.Герцена. Результаты исследования доложены на V Всероссийском съезде клинических цитологов в Пскове (1417 июня 2003 г.), на III съезде онкологов и радиологов СНГ в Минске (19 февраля 2004г.), на XXX Европейском конгрессе цитологов в Афинах (12-15 октябя 2004г.), на II Научно-практической конференции врачей онкологов ФМБА РФ (19- 20 октября 2006 г).

Объем и структура диссертации. Материалы диссертации изложены на 207

страницах и состоят из введения, обзора данных литературы, описания

материалов и метода исследования, результатов собственных исследований (4 глав), обсуждения, выводов и указателя литературы, который содержит 77 отечественных и 193 зарубежных источника. Диссертация иллюстрирована 25 таблицами, 4 диаграммами и 52 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования.

В рамках исследования изучен материал при раке и доброкачественных образованиях молочной железы, тимфатических узлов, новообразований щитовидной железы, мягких тканей, кожи, печени, легких, биологических жидкостей от больных, проходивших лечение в МНИОИ им. П.А.Герцена в период с 2002 по 2006 гг. Выполнено 886 иммуноцитохимических исследований на 856 цитоспиновых и 30 рутинных препаратах от 301 больного.

Метод приготовления цитоспиновых препаратов с использованием жидкостной цитологии. Клеточный материал получали при помощи аспирационной биопсии под контролем ультразвукового исследования, либо интраоперационно в виде соскобов с поверхности опухоли, затем его помещали в специальную, питательную среду накопления, в микропробирку, содержащую 800 мкл питательной среды. Взвесь клеток распределяли по 50100 мкл (с учетом два мазка на одно используемое в реакции антитело + два для контроля качества (2п+2)) в контейнеры центрифуги системы СуШБрт-З (БЬапскт, иК) и центрифугировали в режиме 1000 об./мин в течение 5 мин.

Контроль качества проводили окрашиванием двух цитоспиновых препаратов

рутинным методом по Лейшману для цитологического анализа. При наличии в мазках достаточного количества клеточного материала (200 - 300 клеток), проводили ИЦХ исследование на оставшихся неокрашенных цитопрепаратах.

Метод иммуноцитохимического исследования. Иммуноцитохимические исследования проводились непрямым трехступенчатым иммуноферментным LSAB (англ. Labeled streptavidin — biotin, DakoCytomation, LSAB 2 System — HRP) методом визуализации, выявление пероксидазной активности осуществляли с помощью 3,3-диаминобензидина (ДАБ), цитопрепараты докрашивали гематоксилином Майера. Подсчет иммунопозитивных клеток проводили в областях с максимальным проявлением диаминобензидина, при анализе 200 - 300 клеток на микроскопе «Axioskop» (OPTON, West Germany) и DMR (Leica, Germany).

Характеристика используемых в работе первичных антител. В работе

были использованы моноклональные кроличьи и мышиные антитела

(DAKO): к рецептору эстрогена а ( клон 1D5, разведение 1:35), к рецепторам

прогестерона ( клон 636, разведение 1:50), к белку пролиферативной

активности Ki-67( клон MiB-1, разведение 1:50 - 1:75), онкопротеину С-егЬВ-

2 (разведение 1:250 - 1:350), к общим цитокератинам (клон MNF 116,

разведение 1:50 - 1:100), цитокератинам 18 (клон RCK108), эпителиальному

мембранному антигену (клон Е29, разведение 1:50-1:100), десмину (клон

ДЗЗ, разведение 1:50-1:100), виментину (клон V9, разведение 1:50-1:100),

тиреоглобулину (клон DAK-Tg6, разведение 1:50-100), кальцитонину

(разведение 1:150-1:300), общему лейкоцитарному антигену CD-45 ( клон 2В11+РД7/26, разведение 1:50-1:100), CD3 ( Т Cell, клон UCHT1, разведение 1:50-1:200), CD15 (Granulocyte - Associated Antigen, клон СЗД-1, разведение 1:25-1:50), CD20 (В Cell, клон B-Lyl), CD30 (клон Вег-Н2, разведение 1:201:40), меланомному антигену НМВ-45 (разведение 1:50), белку S-100 (NP 020), мезотелиальному антигену НВМЕ-1 (клон НВМЕ-1, разведение 1:50), хромогранину А (клон DAK-A3, разведение 1:50-1:100), синаптофизину (клон SY38, разведение 1:10-1:20), PSA (Prostate-Specific Antigen, клон ER-PR8, разведение 1-25-1:50).

Оценка полученных результатов. Иммуноцитохимические реакции

оценивали как качественно, когда речь шла об уточнении гистогенеза

опухоли, наличии метастаза в лимфатическом узле или другом органе,

иммунофенотипировании лимфом, так и количественно - при анализе

пролиферативной активности, содержании рецепторов гормонов в опухоли и

анализе экспрессии онкопротеина С-егЬВ-2. Ядерная реакция проявлялась

интенсивным окрашиванием ядра при определение экспрессии рецепторов

эстрогенов, прогестерона и белка пролиферативной активности Ki - 67.

Цитоплазменная реакция характеризовалась диффузным окрашиванием

цитоплазмы, или отложением гранул в виде грубых пятен и зерен.

Мембранное окрашивание наблюдается при проведении реакции с

онкопротеином С-егЬВ-2 и ЭМА (эпителиальным мембранным антигеном).

Реакция считалась отрицательной при полном отсутствии или экспрессии

антигена менее чем в 5% опухолевых клеток, слабо положительной - при

11

наличии реакции в 6% - 25% клеток, умеренно положительной - в 26% - 75%, выраженной - более чем в 75% клеток. При оценке иммуноферментной реакции принимали во внимание интенсивность и полноту окрашивания ИЦХ реакции.

Информативность иммуноцитохимического метода оценивали с помощью стандартизованных показателей: достоверности (точности), чувствительности, специфичности и эффективности.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Жидкостная система Су1о8рш при ИЦХ исследовании. Выполнено 120 иммуноцитохимических исследований белка пролиферативной активности (Кл-67) в клетках рака молочной железы: 90 на цитоспиновых препаратах, 30 ИЦХ исследований на мазках, приготовленных обычным рутинным способом.

Проведение первых опытов, показало невозможность использования

предложенной фирмой «811апс1оп» среды накопления, использование которой

вызывало полную деформацию, как ядра, так и цитоплазмы клеток рака

молочных желез. В нашем отделении разработан и запатентован новый

состав среды накопления (заявка №2003113164\15 от 05.05.03, патент на

изобретение Лг° 2246110 «Питательная среда накопления образца клеток для

последующего цитологического и\или иммуноцитохимического анализа»,

решение о выдаче от 19.05.04). Все цитоспиновые препараты, используемые

в цитологических и ИЦХ исследованиях, приготовлены с использованием

данной питательной среды накопления. Результаты наших исследований

12

показали, что морфологических изменений в строении раковых клеток, их структурных образованиях, после пребывания в питательной среде накопления, не наблюдалось, что подтверждалось параллельным цитологическим анализом рутинных мазков у этих же больных. Все цитоспиновые препараты (100%) отличались высоким качеством полученных мазков: клетки располагались в монослое, локально в одном месте -«окошке», сохранялись клеточные структуры, фон из элементов крови и некроза выглядел скудным и не примешивался к отдельно лежащим опухолевым клеткам.

Помимо цитологического анализа проведена серия иммуноцитохимических исследований экспрессии протеина Кл - 67 на рутинных и цитоспиновых мазках от одних и тех же больных. Цитоспиновые препараты готовились из полученной взвеси (среды и клеточного материала) в разные временные промежутки: через час после нахождения в среде, через 3 часа и через 24 часа, после чего сразу проводилось ИЦХ исследование с антителами к белку пролиферативной активности Кл - 67. Сопоставление полученных ИЦХ исследований показало, что пребывание клеток рака в среде не влияет на их иммуноспецифические свойства, кроме того, не активизирует и не снижает пролиферативную активность опухолевых клеток, а всего лишь стабилизирует её

Применение жидкостной цитологии при цитологическом и иммуноцитохимическом исследованиях показало ряд преимуществ этого метода перед рутинным способом приготовления цитопрепаратов:

позволяет получить монослой клеток, обеспечивая сохранность клеточных структур; уменьшает фон, «загрязнение» опухолевых клеток элементами крови и воспаления, облегчая просмотр цитологических препаратов; сокращается время просмотра мазка; монослойные препараты хорошего качества позволяют использовать современные компьютерные технологии обработки изображений, проведения морфометрии, иммуноморфологические исследования; в 6 - 8 раз уменьшается расход дорогостоящих реактивов, что особенно важно при иммуноцитохимических и молекулярно - биологических исследованиях.

Полученная нами питательная среда накопления может быть рекомендована для использования в жидкостной системе приготовления высококачественных цитоспкновых препаратов, с целью последующего проведения цитологических и иммуноцитохимических исследований. ИЦХ метод в определении гистогенеза некоторых опухолей и при метастатическом поражении без выявленного первичного очага. Для уточнения гистогенетической принадлежности опухоли проведено 298 иммуноцитохимических исследований у 96 больных.

Треть исследований (36,5%) выполнялась при заболевании щитовидной

железы с целью уточняющей диагностики гистогенеза опухолевого процесса,

как в образованиях самой железы, так и при метастатических поражениях.

Цитологически диагностированы и иммуноцитохимически подтверждены: у

16 больных медуллярный рак, опухолевые клетки которого экспрессировали

кальцитонин и не экспрессировали тиреоглобулин, у 10 папиллярная и у 3 -

фолликулярная карцинома, что подтверждено положительной экспрессией тиреоглобулина и отрицательной к тьцитонина. Только проведение ИЦХ с четкой положительной экспрессией кальцитонина и тиреоглобулина позволило диагностировать у 2 больных диморфный вариант медуллярно-фолликулярного рака. В 2 исследованиях цитологически поставлен диагноз злокачественной лимфомы: выраженная экспрессия в опухолевых клетках СО-45, С0-30 и СО-2 О и отрицательная СО - 3, СО - 15 и эпителиального мембранного антигена позволила диагностировать В-клеточную крупноклеточную лимфому. В одном наблюдении при исследовании образования из корня языка, экспрессия клетками опухоли тиреоглобулина и кальцитонина позволила подтвердить наличие эктопии ткани щитовидной железы.

По данным наших исследований, точность иммуноцитохимии в определении цитогенеза первичной опухоли в щитовидной железе и ее метастазов составила 86% (30 исследований из 35), тогда как цитологические заключения полностью совпали с данными гистологии в 24 из 35 наблюдений (69%). В нашей работе точность иммуноцитохимии в определении цитогенеза первичной опухоли в щитовидной железе составила 89,5%, в метастазах регионарных лимфатических узлов - 89%, в отдаленных метастазах - 71,4%. Чувствительность и специфичность ИЦХ метода в дифференциальной диагностике новообразований щитовидной железы и их метастазов была 94% и 89,4%.

Иммуноцитохимический анализ гистогенеза новообразований в лимфатических узлах. Изучая гистогенез новообразований лимфатических узлов от 25 больных, проведено 80 иммунодитохимических исследования и диагностированы: 3 наблюдения злокачественной лимфомы с верификацией Т- и В- дифференцировки, в 3 - метастаз злокачественной меланомы, 1 -метастаз медуллярной и 1 - папиллярной карцином щитовидной железы, в 2 исследованиях - диагностирован метастаз мелкоклеточного рака, в 14 наблюдениях при проведении дифференциальной диагностики между раком, саркомой, меланомой, подтверждены метастазы рака. В 1 исследовании исключен метастаз папиллярного рака щитовидной железы, экспрессия тиреоглобулина и цитокератинов отсутствовала. Достоверность ИЦХ исследований подтверждена плановым гистологическим исследованием в 92% наблюдений.

Иммуноцитохимический анализ гистогенеза метастатических

новообразований печени Проведение 17 ИЦХ исследований у 5 больных с

новообразованиями печени позволило диагностировать: карциноидную

опухоль (2 наблюдения), метастаз высокодифференцированной

аденокарциномы (1 наблюдение), у одной пациентки диагностировано

первично-множественное поражение: у женщины 43 лет, при наличии

генерализованного протокового рака молочной железы и пограничной

опухоли яичников, удалось выявить и верифицировать в лимфатических

узлах ворот печени третий опухолевый процесс - В-клеточную

лимфосаркому, что подтверждалось положительной экспрессией общего

лейкоцитарного антигена СО - 45 и СО - 20 и отрицательной ЭМА, СО - 3, СО - 15 и СО - 30. Другое наблюдение - В-клеточная смешанно-клеточная лимфома печени диагностирована у пациентки 35 лет. Все 5 иммуноцитохимических исследования совпали с результатами планового гистологического анализа.

Таким образом, использование иммуноцитохимических методов позволяет расширить возможности современных морфологических методов исследования и на дооперационном этапе уточнить гистогенез, диагностировать первично - множественные поражения и выявить первичный очаг при метастазировании.

Цитологический и иммуноцитохимический методы в диагностике мнкрометастазов в лимфатические узлы. В работе проведен срочный интраоперационный цитологический и иммуноцитохимический анализ 30 гиперплазированных лимфатических узлов от 20 больных. Цитологические и плановые гистологические заключения не выявили метастазов в исследуемых сторожевых лимфатических узлах. Использование иммуноцитохимического метода в интраоперационной диагностике микрометастазов в гиперплазированных лимфатических узлах, позволило выявить

микрометастаз только в единичном случае и улучшить результат всего на 3,3 %, что объясняется хорошо отработанной методикой забора материала, качественным приготовлением цитологических мазков и высоким профессиональным уровнем цитологов.

Сопоставление_результатов_иммуноцитохимического_и

иммуногистохимического_исследований_в_определении

пролиферативной активности №¡-67), онкопротеина С-егЬВ-2, экспрессии рецепторов эстрогена и прогестерона при раке молочной железы.

Пролиферативная активность (Кл-67) при ИЦХ исследовании РМЖ выявлена

в 49 из 59 случаев (83%), при ИГХ - в 57 наблюдениях из 59 (96,6%).

Совпадение результатов ИЦХ и ИГХ исследований в оценке уровня

экспрессии Кл-67 в клетках РМЖ наблюдалось в 83%. Чувствительность,

специфичность и точность иммуноцитохимического исследования белка

пролиферативной активности Кл-67 составили 84,5%, 66,7% и 83%

соответственно, достоверная корреляция двух методов (ИЦХ и ИГХ) г=0,74

(р<0,05). Положительная экспрессия онкопротеина С-егЬВ-2 на

цитоспиновых мазках выявлялась в 65,5%, на гистопрепаратах - в 57,6%

исследований, результат совпадений - 93,2%. Чувствительность,

специфичность и точность иммуноцитохимического анализа онкопротеина

С-егЬВ-2 составили 98,2%, 95,2% и 93,2% соответственно. Положительная

экспрессия РЭ при ИЦХ методе отмечалась в 48,3%, при ИГХ - в 46,7%;

положительная экспрессия РП прр ИЦХ методе выявлялась в 48,3%, при

ИГХ - в 43,3%. В нашем исследовании при сравнительном анализе двух

методов (ИЦХ и ИГХ) совпадение результатов исследований было в 88,3%,

как при экспрессии рецептора эстрогена, так и прогестерона.

Чувствительность, специфичность и точность ИЦХ исследований РЭ

18

составили 90,6%, 88,6% и 88,3% соответственно, РП - 93,5%, 86% и 88,3% , что сопоставимо с данными литературы. Достоверная корреляция ИЦХ и ИГХ методов определения в клетках опухоли молочной железы рецепторов эстрогенов (а) (г=0,97; р<0,05) и прогестерона (г=0,90; р<0,05), белка пролиферативной активности (Ki-67) (г=0,74; р<0,05), онкопротеина C-erbB-2 (г=0,84; р<0,05) позволяет рекомендовать использовать ИЦХ метод в предоперационной диагностике.

ИЦХ исследования экспрессии РЭ и РП в доброкачественных образованиях молочной железы. Результаты ИЦХ исследования показали, что экспрессия РЭ+ выявлялась у 38%, а РП+ у 48% больных, треть пациентов показывала коэкспрессию РЭ+ и РП+ (35%), из них в половине исследований (49%) при фиброзно-кистозной болезни (ФКБ), чуть меньше (43%) - при фиброаденомах (ФА) и 8% при гинекомастиях (ГМ). Степень выраженности экспрессии РЭ и РП имела равные тенденции, в основном преобладала слабая экспрессия (60,5%), треть положительных реакций показывала умеренную степень выраженности, выраженная - наблюдалась в 8,3% исследований. Анализ полученных данных показал, что изменения по типу пролиферации и/или атипии клеток эпителия разной степени выраженности, вплоть до появления очагов карциномы in situ (CIS), в доброкачественных образованиях молочной железы с гормонопозитивным фенотипом (РЭ+, РП+) выявлялись несколько чаще (67%), чем при патологии с отрицательной экспрессией рецепторов РЭ - и РП- (57%): в большей

степени патологические изменения с РЭ+ и РП+ отмечены при ФКБ - в

19

78,5% против 57% с РЭ-, РП-. Факт иммуноцитохимического выявления экспрессии рецепторов эстрогенов и прогестерона при дисгормонально -гиперпластических и доброкачественных новообразованиях молочной железы, связь этой экспрессии в части наблюдений с пролиферативными и диспластическими изменениями в эпителии долек и протоков молочной железы, заставляет искать нетрадиционные подходы в лечение доброкачественных образований и профилактике рака молочной железы, где, возможно, главным направлением лечебного воздействия должна стать антигормональная терапия.

Преимущества пункционной биопсии при ИЦХ методе в сравнении с предоперационной иммуногистохимической диагностикой трепанобиоптатов заключаются в том, что пункционная биопсия более простая, малотравматичная процедура, не сопровождается осложнениями как кровотечение, воспаление, позволяет получить более полноценный клеточный материал, отсутствует потеря и маскировка антигенов при приготовлении препаратов. Использование новых технологий приготовления цитологических препаратов («жидкостная цитология») обеспечивает получение качественных монослойных цитологических мазков с высокой степенью концентрации клеток: клетки располагаются в монослое, сохраняется их архитектоника, уменьшается фон, концентрация клеток в одном месте значительно экономит дорогие сыворотки, улучшается качество иммуноцитохимических результатов. Использование жидкостной цитологии особенно рекомендуется при выполнении ИЦХ исследований.

Иммуноцитохимическое исследование является высокоэффективным, уточняющим, диагностическим методом при цитологическом исследовании мазков и может быть использовано при анализе гормонального статуса доброкачественных и злокачественных образований молочных желез, при определении факторов прогноза опухолей других локализаций, для проведения дифференциальной, уточняющей диагностики недифференцированных новообразований, определения источника метастазирования при невыявленном первичном очаге, а также для оценки степени распространенности опухолевого процесса.

ВЫВОДЫ

1. Жидкостная технология (система СуЮБрт) приготовления цитологических мазков с использованием питательной среды накопления (патент на изобретение № 2246110) способствует получению высококачественных цитологических препаратов, облегчает их просмотр, сокращает количество ложноотрицательных результатов. Использование жидкостной цитологии улучшает результаты иммуноцитохимических исследований на 23,3% и практически в 6 - 8 раз уменьшает расход дорогостоящих реактивов.

2. Иммуноцитохимические исследования при злокачественных недифференцированных новообразованиях позволяют диагностировать рак, меланому и лимфому с точностью до 90,3%, 100% и 87,5% соответственно и повышают достоверность определения гистогенеза новообразований в метастатически пораженных лимфатических узлах с 52% до 92%.

3. Использование иммуноцитохимических исследований улучшает результаты цитологического анализа в диагностике и определении цитогенеза первичной опухоли в щитовидной железе до 89,5%, в метастатически пораженных регионарных лимфатических узлах до 89%, отдаленных метастазах до 71,4%. Чувствительность, специфичность и точность иммуноцитохимического метода исследования в дифференциальной диагностике новообразований щитовидной железы и их метастазов составляет 94%, 89,4 и 86% соответственно.

4. Использование иммуноцитохимического метода в интраоперационной диагностике микрометастазов в лимфатических узлах улучшает результаты цитологического исследования всего на 3,3 %, что практически не влияет на точность морфологической диагностики.

5. Чувствительность, специфичность и точность иммуноцитохимического метода исследования экспрессии рецепторов эстрогенов в клетках рака молочной железы на монослойных цитоспиновых мазках составляет 90,6%, 88,6% и 88,3%, рецепторов прогестерона - 93,5%, 86% и 88,3%, белка пролиферативной активности Кл-67 - 84,5%, 66,7%, 83% и онкопротеина С-егЬВ-2 - 98,2%, 95,2% и 93,2% соответственно.

6. Между иммуногистохнмическим и иммуноцитохимическим методами

определения гормонального рецепторного статуса и некоторых

прогностических показателей при раке молочной железы существует

высокий уровень корреляции: при исследовании рецепторов эстрогенов он

составляет 0,97 (р<0,05), рецепторов прогестерона - 0,90 (р<0,05), белка

пролиферации Ki-67 - 0,74 (р<0,05), онкопротеина C-erbB-2 - 0,84 (р<0,05). 7. Иммуноцитохимический метод имеет большое диагностическое значение в оценке гормонального статуса доброкачественных образований молочных желез: экспрессия РЭ+ отмечается у 38%, а РП+ у 48% больных. Треть опухолей выявляет коэкспрессию РЭ+ и РП+ (35%), из них в половине исследований (49%) при фиброзно-кистозной болезни (ФКБ), чуть меньше (43%) - при фиброаденомах (ФА) и 8% при гинекомастиях. Отмечена связь пролиферации и/или атипии клеток разной степени выраженности, вплоть до появления очагов карциномы in situ (CIS) с гормонопозитивным фенотипом (РЭ+, РП+) при ФКБ - в 78,5% против 57% при гормоноотрицательном фенотипе.

Список опубликованных научных работ по теме диссертации

1. Иммуноморфологическое исследование рака молочной железы //IX Всероссийская конференция онкологов «Гормонозависимые опухоли», Санкт-Петербург, 2002г., с. 46-47 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

2. Immunohistochemical markers for prognosis of average risk pediatric medulloblastomas. The effect of apoptotic index TrKC and c-myc expression // Journal of Neuro-Oncology 58, 2002., p 271-279 ( Korshunov A.G., Ozerov Sergey, Savostikova Marina).

3. Опыт применения иммуноцитохимического исследования в онкологической практике //«Актуальные вопросы онкологии», г.Иркутск, 2003г., с. 35-36 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

4. Иммуноморфологическое исследование рака молочной железы //«Новые направления и разработки в онкоморфологии» (ВОНЦ). IX научная конференция. Москва, 2003г., с. 7-8 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

5. Опыт применения иммуноцитохимического исследования в онкологической практике //«Новые диагностические и лечебные технологии в онкологии», г.Томск, 2003., с. 18 - 19 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

6. Иммуноморфологическое исследование рака молочной железы //«Ранняя диагностика и лечение предраковых и злокачественных заболеваний органов репродуктивной системы», г. Москва, 2003г., с.128 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

7. Возможности иммуноцитохимического исследования в онкологии //Новости клинической цитологии России, 2003г., т.7, №1-2, с. 49 - 50 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

8. Опыт использования иммуноцитохимического исследования в дифференциальной диагностике рака молочной железы // Российский онкологический журнал, №5, 2004 г., с. 41 - 42 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

9. Иммуноцитохимия, как новый метод в онкоцитологии // Материалы 3 съезда онкологов и радиологов СНГ, г. Минск, 2004г., Ч.1., с. 111 - 112 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

10. Immunocytochemical analysis of hormonal status in benign and malignant breast lesions // 30th European Congress of Cytology. Athens, Greece, 12-15 oct. 2004, p. 13 (Volchenko N.N., M.V.Savostikova).

11. Иммуноцитохимический метод в морфологической диагностике опухолевых процессов // «Новости клинической цитологии в России». Материалы VI съезда, т.8, №3-4, Москва 2004г., с. 52 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

12. Иммуноцитохимическое исследование гормонального статуса в доброкачественных и злокачественных образованиях молочной железы // Материалы конференции «Новые технологии в онкологии». 7 - 8 июня, 2005г. Барнаул С. 34. (М.В.Савостикова).

13. Иммуноцитохимическое исследование экспрессии онкопротеина С-егЬВ-2 в доброкачественных образованиях молочной железы // Материалы научно-практической конференции «Актуальные проблемы клинической онкологии». Главный военный клинический госпиталь им. Академика Н.Н.Бурденко. 9-10 декабря 2005г., Москва. С. 51.(М.В.Савостикова).

14. Перспективы использования метода жидкостной цитологии //Материалы научно-практической конференции «Клинические и фундаментальные проблемы клеточных технологий». 1 - 2 декабря 2005г., г. Новосибирск. С. 23. (Е.Н.Славнова, О.В.Борисова, М.В.Савостикова).

15. Иммуноцитохимическое исследование в диагностике и оценке факторов прогноза опухолевых и предопухолевых заболеваний // Практическое пособие. Москва 2005.,с. 1-24 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

16. Иммуноцитохимическое исследование при доброкачественных образованиях молочной железы // Российский онкологический журнал №3, 2006, стр. 22-25 (Н.Н Волченко, М.В Савостикова).

17. Возможности иммуноцитохимического исследования в предоперационной диагностике опухолей // Российский онкологический журнал №5,2006, стр. 22-27 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

18. Сравнительный анализ иммуноцитохимического и иммуногистологического методов исследования при раке молочной железы // Всероссийский семинар «Применение современных технологий в диагностике и лечении рака молочной железы» Москва, 16-17 ноября 2006. (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

19. Иммуноцитохимический метод в морфологической диагностике заболеваний щитовидной железы // Материалы научной конференции, посвященной 160-летию фирмы Carl Zeiss, 28 октября, 2006г., с. (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

20. Иммуноцитохимический метод в морфологической диагностике опухолевых процессов //II Научно-практическая конференция врачей онкологов ФМБА РФ «Актуальные вопросы онкологии и онкологической помощи в системе ФМБА» 19- 20 октября 2006 г., стр.32-34 (Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

21. Использование жидкостной системы в иммуноцитохимическом исследовании // Материалы IV съезда онкологов и радиологов СНГ, 28 сентября - 01 октября 2006 г., Баку, стр.55(Н.Н.Волченко, М.В.Савостикова).

22. Comparative analysis of immunocytochemical and immunohistochemical research methods in breast cancer. 32 nd European Congress of Cytology. Venice,October 1-4, 2006, p 394. (Volchenko N.N., M.V.Savostikova).

Принято к исполнению 22/01/2007 Исполнено 23/01/2007

Заказ № 44 Тираж: 100 экз.

Типография «11-й ФОРМАТ» ИНН 7726330900 115230, Москва, Варшавское ш., 36 (495) 975-78-56 \vww.autoreferat ги

1к1»У'1МЫ(0ст* шиш мссйнЙмшног Цитологический метод исследования в настоящее время широко применяется в диагностике опухолевых а нсопухолсвых заболеваний различных локализаций. Однако, используя только рутинное цитологическое исследование, важгаит непреодолимые трудности при установлении гнетогенен отдельных олухалеИ, определении источника четпстичираванн*, трактовке первично-множественных поражений, определения степени распространенности опухолевого процесса Так определение гистологической формы опухолей при жполъэованки только цитологического метода оказывается возможным в 60-70%, Учитывая тот факт, что цитологический метод исполыугтся. прежде всего, как первичное, »долечебное* диагностическое исследование, результаты его во многом определяют дальнейшею лечебную тактику, и евши с чем возникает необходимости в применении ноны*, дополнительных, уточняющих методов. Незаменимой в таких случаях методикой даиете» иммуиоцитохимичеекое исследование Разнообразие моноклональиых антител, используемых в нммуношпохимнчееккх исследованиях тонкоиюльиых пунктов, в каждом конкретном случае позволяет ответить на вопрос, имеет лн данная опухоль эпителиальное пронгложде нис Или является сархомой, меда номой, лиыфомоЛ. (Глушил Д Ф н соавт, 2003; Петров С.В,, Райклни Н.Т., 2003; Суарсш П. и соавт, 2003; Эндрю Р,Хер«ет н Кении С Гвттер,, 1999; ^Пе е! в!. 200);

Fletcher ОМ. ci at., 20Û2V Применение имыуноылтохммического метола расширяет возможности морфологической диагностики при уейноижин гистогенеза различных опухолей, Разработаны, стишнс уже классическими, схемы Taylor C.R, et Cote RJ. (1994; 1997) дм определения гистогенеза Miutc.iHjjii.HuM и о мойраго паи и il, опухолей мягких тканей и лнмфом

ИЦХ помогает и определяй* нсточиита иегкпонрюящи прн »евмяккмиоч первичном очи*. JWTH лишь три маркера имеют относительную ортамоспсцнфнчносп. тиреопюбулии для выявления метвегазов и перипчнон диагностики папиллярного н фолликулярного рака н кальинтопии ■ лля опухолей из С-клеток щитовидной железы, а также простатоспеинфнческий антиген для диагностики опухолей предстательной железы. В настоящее время проводится попытка определить ор ган ос п е цнф нчностъ метастазов по не пользованию высоко- н кизкомолехулярпых щгтохсратниов. (Гавелов Н.Л и совет,, 2005),

Степень распространения опухолевого процесса определяет стадию н тактику лечебных мероприятий (Mûller p., Schlimok G-, 2000; Bilchik A, et at,f 2000; Oown A,M, 2002) Иымуимштохимнчесшй метод повышает выявление метастатических лимфатических узлов нп 22'24%, {ГлумйШ ДФ н соант., 2003; Крохкиа О.В. и C03FT , 2005; FeWch Patricia A et al. 2000; Gown A^M., 2002).

Использование имыунощгтохимнческого метола позволяет выявить на доопераиионном этапе предсказательные факторы, т.е. факторы, определяющие ответ опухоли на лечение, Исследование peuetrropon эстрогенов и нрогестеро«« при РМЖ, эндометрия, онкоиротеина C-eibB-2 при РМЖ, СОТ

20 при фолликулярных лкмфомох, CD-117 при стромольных гаетроннтерстициальных опухолях позволяет проводить эффективную целенаправленную таргетную терапию. Экспрессия ряда маркеров клетками опухоли: рецепторов ктрогено» и прогестерона, «марпям С-етЬВ-2. маркера алогтги р53, про дифервти иной активности определяет прогноз заболевания н влияет на лечебную тактику (Zheng Wei et al., 200Q; /eziorsfci A„ et al. 2000, De Laurentiis M. el al., 2005),

В качестве альтернативы нммуиогнстохнмнчсского метода может быть предложен метод определения экспрессии молекулярных маркеров на клеточном уровне - имыуношлохнмнчсский метод (ИЦХ) (Эллннндн В.Н. и tOain , 2002; ГНушш Д.Ф. Н соавт., 2003; Глухова Е.И., 2003; Лукашнна М И , 2003; Афанасьева ЗА и соавт-. 2003: 2004; Mafcrb A, et al, 1997; BosswUi С. et al. 1994,2000,2003; Lófgren L, et al., 2003; MuJygin S. eial, 2004; РясЬоиП» Ch, el aí., 20W; Jayaram G. et al., 20Q5), Преимущества пункцнонной биопсии при ИЦХ методе в сравнении с предоперационной иммуногнстохиынчссхой диагностикой трепииобноптатов заключаются в том, что пункшгонная биопсия более простая, малотравмитнчная процедура, не сопровождается осложнениями как кровотечение, воспаление, позволяет получить более полноценный клеточный материал, отсутствует потеря и маскировка антигенов при прнгопгааенин препаратов. (Агапова К.А. 1985: Вопченко Н.Н. н соавт., 2002; Balotia М Л al, 2000; Ping Во et al., 2001; Haug.cn Вгувп R. et al. 2002)- В настоящее время появились новые технологии приготовления цитологи чесжнх препаратов («жидкостная цитология»), обеспечивающие получение 8 качественных монослойных цитологических мазков с высокой степенью концентрации клеток («Catifriit», «Cytospin» и т.д.)- Многие авторы отмечают большие преимущества таких препаратов (Шабадова ИЛ., 2001, Bai Haogwei. et al., 2000; Krane J.F. ei al-, 2001; Limaye A- et al., 2003; Psachoulia Ch. et at. 2004): клетки располагаются • MOHHJttt, сохраняете* h* архитектоника, уменьшается фон. концентрация клеток в одном месте значительно экономит дорогие сыворотки, улучшается качество иммуиошгтохнмичесхнх результатов Использование жидкостной цнтологан особенно рекомендуется при выполнении ИЦХ исследований (Богатырев В.Н , Меньшиков В В., 2005; Guiter G «ai do E. et al.r 1999. Alexopoulou D. et aL, 2004).

Сопоставление результатов экспрессии молекулярных маркеров при яимукошггохнмнческом к мммуногнстохнмнчесхоы исследовании* проводил«;к радом отечественны* и зарубежник исследователей (Глумова ЕЛ. 2003; Лукашина М.И.> 2003; Вогяяй С е» al., 1994; Nizmli lt. et at„ 1994, 2ООО, 2003; Làfgren L. ei al., 2003; Polili E,N, et al„ 2005) и была получена хорошая корреляция: совпадение результатов иммунонитохимического н нммуиогистохнмического нсследованиЛ составило от 61% до 92%.

Иымуиоцигохимнчеекие исследования позволяют устранил, необходимость использования ряда иняазнвных и дорогостоящих диагностических мероприятий.

Вместе с тем, остается неясными место иммуноцитохнмнчсского метода в современной морфологической диагностике при уточнении гистогенеза, степени распространенности, в определении предсказательных и прогностических факторов при опухоли и опухолеподобиых процессах.

Цель настоящей работы - определит* ЮМОКПКП иммуноилтохи.нического метода исследования в диагностике и оценке некоторых флктороп протон злокачественных и доброкачественных образований, АмЬгчи иеслейолаинл:

1. Итучнть преимущества и недостатки использования жидкостной системы Сушарт приготовлены препаратов при ИЦХ исследовании.

2. Оценить возможности ИЦХ метода в определении пктогснсы иекоторы* опухолей и метастатических поражений 6« выявленною первичного очага,

3. Выявить значение нммуиоцитохнмнчккого мстолп » диагностике метастатического поражения лимфатических узлов,

Показать возможности иммуноинтохимического метода и провести сравнительный анализ с нммуногнстохимнчесхим исследованием в определении пролнфератнвной активности (К]-Ф7). эксирсссни рецепторов эстрогенов, прогестерона и онколротенна С-егЬВ-2 при раке молочной железы. 5- Изучить экспрессию стероидных гормонов (РЕ, РП) при доброкачественной патологи и молочной железы. д> ниш киними ■■ пртпичнк» шачимость

Показал принципиально новый подход в приготовлении и обработке цитологических препаратов для нммуноиитохимипсского исследования с использованием жидкостной системы Cytospin, позволяющий получить МОНОСЛОЛ клето* н уменьшит* расход сывороток я 6-8 ран, еокрашая врем* просмотра препарата. Разработана новая среда накопления, не ЮМЯМЮЩйЯ морфологи» и биологию клеток, сохраняя их до 48 часок (патент на изобретение № 2246110 «Питательная среза нпкоштения образца клеток для последующего цитологического н'нлн иммуноцнтохнмическото аналюа«, решение о выдаче от 19.0S.CM),

В работе показаны возможности иммуноцнтохимнческото метода в предоперационной морфололмеекой диагностике опухолей 6ei выявленного первичного очаго. при кермчио множсствятмх поражениях, фенотнпиромнии В- и Т-кдеточпых днмфом. оценке степени распространенности опухолевого процесса.

ИЦХ метод имеет большое значение при оценке некоторых предсказательных н прогностических факторов при исследовании злокачественных и доброкачественных образований молочных желез: рецептаров стероидных гормонов (РЭ и РГТ), белка пролнфератнвиой активности KJ-67 и онкопретениа С-етЬВ-2. Полученные результаты в равной мере соответствуют и не уступают ИГХ исследованиям, что подтверждаете* высоким уровнем корреляции между методами и нтво.ыюг рекомендовать использование нммуноцнтохнчичееких исследований перед назначением исоадъювантной терапии.

Использование ИЦХ шчшомп расширяет ияммкноети цитологического »стола в определении гистогенеза иокобриомииА, источника мстастазнровання опухолей» степени распространенности злокачестасиного процесса, а также на .пооперационном этапе позволяет оценить факторы прогноза элоденепенных и доброкачественных образований.

Объем и Структура диссертации

Материалы диссертации изложены »и 207 страницах и состоят из введения, обзора лднимх литературы, описания материалов и метола »«следования, результатов собственных исследования (J гдав). обсуждении, выводе* и указателя литературы, который содержит 77 Отечественных и 193 зарубежных источника. Диссертация нштюстрирована 25 таблицами, 4 диаграммами н 52 рисунками.

Диссертация выполнена в отделении онкоцнтологнн (рук. отд. - доктор медицине к их наук НН-Волчснко} Московского научно - исследовательского онкологического института им. ПА.Гериена Пути практический решишции

Внедрение полученных результатов в клиническую практику предполагается осуществлять мере» их публикацию в периодической печати.

выводы.

1. Жидкостная технология (система СуЮорш) приготовления цитологических мазко« с использованием питательной среды накопления (патент на изобретение № 2246110} «юсобствует получению высококачественных шгтологических препоратов, облетает их просмотр, сокращает количество ложноотркиательных результатов. Использование жидкостной цитологии улучшает результаты иммуиошпохнмическнх исследований на 23,3% н практически в 6 - 8 раз уменьшает расход дорогостоящих реактивов

2. Иммуноцитохимнческие исследования при злокачественных недифференцированных новообразованиях позволяют диагностировать рак. мелаиому и лнмфому с точностью до 90,3%, 100% и 47,5% соответственно н повышают достоверность определения гистогенеза новообразований в метастатически пораженных лимфатических узлах с 52% до 92%.

3 Использование нммуноиитохнмнчесхих исследований улучшает результаты цитологического анализа в диагностике и определении цитогенем первичной опухоли в щитовидной железе до 89,5%, в метастатически поряженных репюнарных лимфатических узлах до 89%, отдаленных метастазах до 71,4%. Чувствительность, специфичность и точность кмму1юцнтохимического метода исследования в дифференциальной диагностике новообразований щитовидной железы и их метастазов составляет 94%, 89,4 а 86% соответственно

4 Использование иымунонитохнмического метода в иитраоперацнонной диагностике мвдфометастааов в лимфатически* узлах улучшает результаты шгтологнчеекого ^следования всего на 3.3 %. что практически не ммяет ив точность морфологической диагностики.

5. Чувствительность, специфичность и точность нммуиоиитохимического метода исследования экспрессии рецепторов эстрогенов в клетки* рака молочной железы на монослойных щттоспннояых малках составляет 90,6%. 88.6% н 88,3%. рецепторов прогестерона ■ 93.5%. 86% и 88.3%, белка пролнферагивной активности Ki-67 - 84.5%. 66.7%, 83% н онколротеина С-етЬВ-2 - 98,2%, 95,2% н 93.2% соответственно,

6 Между иммуиогистохимнческнм и иммуношггохимическим методами определения гормонального рецеяторного статуса и некоторых прогностических показателей при раке молочной железы существует высокий уровень корреляции: при исследовании рецепторов эстрогенов он составляет 0.97 (р<0.05), рецепторов прогестерона - 0.90 (р<0.05). белка пролиферации Ki-67 - 0,74 (р0.05>, онксифотеина С-етЪВ-2 0,84 (р<0.05). 7. Иммунощитохимичеекий метод имеет большое диагностическое значение в оценке гормонального статуса доброкачественных образований молочных желез: экспрессия РЭ+ отмечается у 38%, а РП+ у 48% больных. Треть опухолей выявляет коэкспрессию РЭ+ и 1'П+ (35%), из лих в половине исследований (49%) при фиброзио-кнетоэиой болезни (ФКБ), чуть меньше (43%) - при фиброаденомах (ФЛ) и 8% при гпнекомзетнях. Отмечена связь пролиферации и'илн лтнпин клеток разной степени выраженности, вплоть до появления очагов карциномы in situ (CIS) с гормонопозитнвным фенотипом

РЭ+. РП+) при ФКР к 78,5% прсггип 57% при гормоиоотрнциельном фенотипе.