Гепатопротекторные свойства флавоноидов

Доркина, Елена Григорьевна

Диссертации по медицине → Фармакология, клиническая фармакология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Гепатопротекторные свойства флавоноидов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Доркина, Елена Григорьевна Волгоград 2010 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 14.03.06

Автореферат диссертации по медицине на тему Гепатопротекторные свойства флавоноидов

На правах рукописи

□□3494114

ДОРКИНА ЕЛЕНА ГРИГОРЬЕВНА

ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА ФЛАВОНОИДОВ (ФАРМАКОДИНАМИКА И ПЕРСПЕКТИВЫ КЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ)

14.03.06 - ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

2 5 МАР 2010

Волгоград 2010

003494114

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Волгоградский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный консультант: доктор медицинских наук,

профессор Тюренков Иван Николаевич Официальные оппоненты:

1. Доктор биологических наук, профессор Дудченко Галина Петровна

2. Доктор биологических наук, профессор Гарибова Таисия Левоновна

3. Доктор медицинских наук, профессор Макляков Юрий Степанович

Ведущая организация:

ГОУ ВПО «Саратовский государственный медицинский университет Росздрава»

Защита состоится « 22 » апреля 2010 г. в 11.°° ч. на заседании Диссертационного Совета Д 208.008.02 ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» (400131, г. Волгоград, пл. Павших борцов,1)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Волгоградский государственный медицинский университет Росздрава» Автореферат разослан « 20 » марта 2010 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, профессор

А.Р. Бабаева

Актуальность проблемы.

Поражения печени различной этиологии являются достаточно широко распространенной патологией [Ильченко Л.Ю. с соавт., 2002, Маев И.В. с соавт., 2004, Полонский В.М., 2005, Дроговоз С.М. с соавт., 2008]. Среди широкого круга препаратов, используемых в комплексной терапии заболеваний печени, выделяют сравнительно небольшую группу «истинных» гепатопротекторов [Скакун Н.Г1. с соавт.,

1995, Ушкалова Е.А., 2004, Машковскин М.Д., 2005, Оковитый C.B. с соавт., 2006, Ильченко Л.Ю. с соавт., 2007], эффективность которых не всегда удовлетворяет клиницистов [Саратиков A.C. с соавт., 2000, Буеверов А.О., 2001, Ушкалова Е.А., 2004, Никитин И.Г., 2007, Muriel P. et ai., 2007].

В патогенезе поражений печени (токсической, алкогольной и другой этиологии) большое значение отводится окислительному стрессу [Буеверов А.О., 2002, Скворцов В.В., 2003, Ипатова О.М., 2005, Оковитый C.B., 2007, Feriiandes-Checa J. С., 2003, Lieber C.S., 2004, Dey A., Cederbaum A.I., 2006]. При окислительном стрессе, в первую очередь, наблюдается сдвиг про-/антиоксидантного равновесия в сторону усиления прооксидантной составляющей, снижение резервов мобилизации ан-тиоксидантной защиты, что сопряжено с нарушением энергообеспечения клетки, детоксикационных механизмов, активацией апоптоза, провосналительных цитоки-нов и др. [Дубинина Е.Е., 1998, Шаповал P.C. с соавт., 2003, Меныцикова Е.Б. с соавт., 2006, Сазонтова Г.Г. с соавт., 2007, Ланкин В.З. с соавт., 2009, Han D. et al., 2006]. Окислительный стресс инициирует повреждение гепатоцитов и нарушение кровоснабжения печени (повреждение эндотелия сосудов и синусоидов печени с изменением выработки оксида азота, ухудшение реологических свойств крови, состояния микроциркуляторного русла и пр.), что усугубляет течение патологического процесса [Дубовая Т.К. с соавт., 1996, Пауков B.C., 1996, Каримов Х.Я с соавт.,

1996, Скворцов В.В., 2003, Bouneva I. et al., 2003, Karaa A. et al., 2005, Babal P. et al., 2006].

более 40 видов фармакологической активности, в т.ч. и антиоксидантное действие [Зенков Н.К. с соавт., 2003, Меныцикова Е.Б. с соавт., 2006, Arora A. et al., 1998, Peng I.W., Kuo S.V., 2003, Middleton E. et al., 2000]. Множество работ посвящено исследованию гепатозащитных свойств флавоноидов, однако сравнительного изучения эффективности их действия не проводилось. Не выяснены до конца и механизмы их гепатопротекторной активности. Большинство авторов считает, что ее основой является антиоксидантное действие [Сорокина И.В.с соавт., 1997, Венгеровский А.И., 2002, Куркин В.А., 2003, Колхир В.К. с соавт., 2004, Саратиков А.С., 2004, Middleton Е. JR. et al., 2000, Fernandes E. et al., 2003, Hewawasam R.P., 2004, Terkey N. et al., 2005]. В последние годы все большее внимание уделяется исследованию состояния эндогенных систем антиоксидантной защиты и антиоксидантного статуса, как совокупности про- и антиоксидантных процессов [Чучалин B.C., 2003, Макаров В.Г. с соавт., 2004, Кравченко Л.В. с соавт., 2005, Frei В., 2003, Gupta М. et al., 2004, Moskaug et al., 2005].

Поэтому сегодня актуальным является не только поиск новых эффективных и безопасных гепатозащитных препаратов, но и сравнительное изучение особенностей фармакодинамики и интимных механизмов действия уже известных гепатопротек-торов.

Исходя из этого, следует считать важным как с научной, так и с практической точки зрения комплексное и сравнительное изучение гепатопротекторного действия флавоноидов, их влияния на про-/антиоксидантный баланс, системы антиоксидантной защиты, детоксикации и энергообеспечения, эндотелиальную дисфункцию, продукцию оксида азота и печеночный кровоток, что и явилось предметом настоящей работы.

Цель и задачи работы.

Экспериментально обосновать создание новых эффективных отечественных гепатопротекгоров на основании комплексной и сравнительной оценки влияния флавоноидов на основные метаболические и гемодинамические патогенетические процессы при токсических поражениях печени.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести изучение в сравнительном аспекте влияния лечебно-профилактического введения гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина, кар-сила и сухого экстракта (СЭ) из горошка обрубленного (Vicia abbreviate F¡sh. ex Spreng. (Vicia truncatula Fish. ex. Bieb.), содержащего флавицин на:

- развитие синдромов цитолиза, холестаза, мезенхималыюго воспаления и ге-патодепрессии;

- гистологическую картину печени;

- интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ);

- состояние систем антиоксидантной защиты (АОЗ), энергообеспечения и де-токсикации при экспериментальном остром поражении печени CCI4 и этанолом.

2. Изучить антиоксидантное действие исследуемых флавоноидоз in vitro и влияние на интенсивность ПОЛ, состояние систем АОЗ, энергообеспечения и деток-сикации in vivo при их курсовом введении в условиях нормы.

3. Провести сравнительное изучение влияния флавоноидов на содержание N0 у интактных животных и при его избыточной продукции, индуцированной ССЦ, методом ЭПР.

4. Изучить в сравнительном аспекте влияние флавоноидов на печеночный кровоток и функцию эндотелия в условиях нормы и моделирования эндотелиальной дисфункции.

5. Провести комплексное изучение энергетического обмена, интенсивности НОЛ и состояния АОЗ, а также изменения печеночных показателей и гистоморфо-логической картины данного органа в ходе хронической алкоголизации и при лечебном применении наиболее активного гепатопротектора в сравнении с карсилом.

6. Изучить влияние наиболее активного гепатопротектора на:

- развитие фиброза при хроническом поражении печени СС14 и отдаленные результаты его лечения;

- желчеобразовательную функцию печени в норме и при экспериментальном гепатите.

Научная! новизна полученных результатов.

Впервые проведено сравнительное, комплексное изучение механизмов гепа-топротекторного действия индивидуальных флавоноидов, флавицина и СЭ из травы горошка обрубленного, их влияние на процессы ПОЛ, системы АОЗ, детоксикации и энергообмена в условиях нормы и экспериментальной патологии печени. Впервые установлена гепатозащитная активность флавицина, выделенного из надземной части V.abbreviata, и продемонстрировано в различной степени выраженное нормализующее влияние гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина на основные патологические синдромы (цитолиз, холестаз, мезенхимальное воспаление, пече-ночно-клеточную недостаточность) при токсических поражениях печени СС14 и этанолом. Впервые показано существование тесной корреляционной взаимосвязи между выраженностью гепатозащитного действия и степенью восстановления про-антиоксидантного равновесия за счет не только прямого антиоксидантного действия флавоноидов, но и повышения активности эндогенной системы АОЗ в печени.

Впервые выявлено, что курсовое введение исследуемых флавоноидов оказывает стимулирующее влияние на активность НАДФ+-редуктазных ферментов, принимающих участие в регенерации восстановленного глутатиона, а применение диосмина, флавицина и кверцетина повышает содержание GSH, участвующего в механизмах повышения неспецифической резистентности организма к экстремальным факторам среды.

. Впервые показано, что введение гесперидина и флавицина увеличивает печеночный кровоток в условиях нормы. Впервые проведено сравнительное изучение корригирующего влияния флавоноидов на органный кровоток в условиях эндотели-альной дисфункции, очевидно связанного с активацией eNOS и повышением продукции N0. Методом ЭПР показано повышение под влиянием флавоноидов содержания N0 в норме, и его снижение в условиях индукции окислительного стресса введением СО4, что свидетельствует об их модулирующем влиянии на продукцию N0.

лечебном применении, который связан с преодолением окислительного стресса и восстановлением про-/антиоксидантного равновесия за счет поддержания функционирования эндогенной системы АОЗ, нормализации энергопродукции и процессов детоксикации, с торможением процесса фиброгенеза при хронической патологии, восстановлением желчеобразовательной функции печени.

Впервые показано, что в ходе хронической алкоголизации развивается адаптационно-защитная реакция в виде повышения активности ферментов ИАДФН-GSH-зависимой системы, что значительно более выражено при лечебном применении СЭ из Vic-ia abbreviate. Получено 2 патента на изобретение.

Практическая значимость. На основании полученных результатов выявлено в разной степени выраженное влияние флавоноидов на патологические синдромы, патогенегические механизмы поражения гепатоцитов: ПОЛ, систему АОЗ, детоксикации и энергообразования, кровоснабжение печени, эндотелиальнуго дисфункцию. Такие данные позволяют разработать рекомендации по дифференцированному применению флавоноидов, как гепатопротекторов, при определенном характере течения заболевания печени. Сумма, содержащая арабиноглюкозид и ксилоглюкозид диос-метина, которая условно названа флавицином, может быть рекомендована для дальнейшей разработки в качестве лекарственного средства для лечения поражений печени. СЭ из V. abbreviata, оказывающий выраженное гепатозащитное действие при острых и хронических токсических поражениях печени, превосходящее карсил, а также препятствующий развитию фиброза и стимулирующий секрецию желчи, может быть использован для создания лекарственного препарата. Полученные данные о тесной связи эффективности гепатозащитного действия с восстановлением баланса в системе ПОЛ/АОС свидетельствуют о том, что к применению антиоксидантов необходимо подходить с таких позиций, чтобы эти вещества не только подавляли ПОЛ, но и способствовали бы более легкому и быстрому возврату биосистем в состояние про-/антиоксидантного равновесия. При применении флавоноидов в качестве гепатопротекторов необходимо учитывать их индуцирующее влияние на активность некоторых микросомальных ферментов.

Практические рекомендации. Учитывая селективную токсичность ряда лекарств по отношению к эндотелиальным ¡слеткам синусоидов печени и наиболее выраженное положительное действие гесперидина на эндотелиальную функцию и печеночный кровоток, данное соединение может быть рекомендовано для коррекции сосудистых поражений печени и эндотелиальной дисфункции при циррозе. Более эффективное нормализующее влияние диосмина на холестаз может быть основанием для его рекомендации при заболеваниях печени, сопровождающихся нарушением желчеобразования. Кверцетин может быть рекомендован при поражениях печени, сопровождающихся выраженным цитолизом и мезенхимальным воспалением. Флавицин и СЭ, являющиеся высокоэффективными гепатопротекторами при поражениях печени СС14 и алкоголем, могут быть рекомендованы для разработки на их основе лекарственных средств для лечения и профилактики заболеваний печени при острых и хронических отравлениях гепатотоксическими ядами.

Уровень внедрения результатов исследования.

По данным, полученным автором, подготовлены информационные письма, материалы которых включены в планы НИР кафедр технологии лекарств (акт внедрения от 03.09.2007 г.), органической химии (акты внедрения от 07.09.2007г. и от 04.11.2009), фармакогнозии (акт внедрения от 03.11.2009), фармакологии (акт внедрения от 29.08.2007 г.) и ботаники (акт внедрения от 10.11.2009) Пятигорской ГФА Росздрава. Результаты работы включены в лекционный материал для студентов различных факультетов на кафедрах фармакологии, фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ, Курского государственного медицинского университета, Ставропольской государственной медицинской академии. Данные по изучению механизма действия и гепатозащитной активности сухого экстракта из горошка обрубленного вошли в комплект документов, переданных в ООО «Флора Кавказа» для представления в ФК МЗ и СР на получение разрешения к проведению клинических испытаний.

Связь с планом НИР ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава».

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» по проблеме

«Изучение биохимических основ защитного действия флавоноидов при экспериментальном поражении печени» (номер государственной регистрации 01.200.11. 7645), а также п соответствии с планом научно-исследовательских работ Волгоградского Государственного медицинского университета, номер государственной регистрации 01 200 800 804.

Апробация полученных результатов.

Основные положения диссертационной работы изложены на 55-й - 65-ой научных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2000-2010 гг.), на десятой Российской конференции «Гематология сегодня» (Москва, 2005 г.), на международной конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005 г.), на IV конференции гастроэнтерологов Южного Федерального округа (Кисловодск, 2005г.), на международной научной конференции «Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем» (Минск, 2006 г.), на IX Украинском биохимическом съезде (Харьков, 2006 г.).

Положения, выносимые на защиту.

1. При острых поражениях печени СС14 и этанолом исследуемые флавоноиды и СЭ из V. abbreviate (truncatula) оказывают гепатозащитное действие, которое отличается по степени нормализующего влияния на развитие цитолиза, холестаза, ме-зенхималыюго воспаления и печеночно-клеточной недостаточности при лечебно-профилактическом применении в установленных эффективных дозах, что может служить основанием для их дифференцированного клинического применения с учетом особенностей течения заболевания.

2, Наиболее выраженной гепатозащитной активностью, превышающей таковую карсила, при острых токсических поражениях печени обладают флавицин и СЭ из V. abbreviate (truncatula), поскольку практически полностью устраняют основные патологические синдромы, а также в большей степени восстанавливают про-антиоксидантное равновесие, энергетический обмен и активность систем детокси-кации.

3. Флавицин in vitro по силе антиоксидантного действия уступает кверцетину, но в большей степени активирует АОЗ и превосходит кверцетин по эффективности гепатопротекции и поддержанию равновесия в системе ПОЛ/АОС. Отмечается достаточно тесная корреляционная связь между выраженностью гепатопротекции и коэффициентом окислительного стресса, характеризующим про-антиоксидантный баланс, что свидетельствует о важном значении для защиты печени не просто снижения и подавления ПОЛ, а устранения дисбаланса в системе ПОЛ/АОС.

4. В результате курсового введения исследуемых флавоноидов в эффективных гепатопротекторных дозах наблюдается активация ферментов, принимающих участие в регенерации восстановленного глутатиона, и повышается содержание GSH в печени, что увеличивает неспецифическую резистентность органа к действию повреждающих факторов.

5. Исследуемые флавоноиды в норме и при эндотелиальной дисфункции увеличивают продукцию N0, вероятно, путем активации eNOS и повышают печеночный кровоток, а также ограничивают гиперпродукцию NO iNOS в печени, стимулированную CCIчто в определенной степени обусловливает гепатопротективные свойства флавоноидов. В отношении повышения мощности системы синтеза N0 лидерами являются гесперидин и кверцетин.

6. СЭ из Vicia abbreviate (truncatula) в дозе 300 мг/кг обладает более выраженным лечебным действием, чем карсил, при поражении печени, вызванном хронической алкогольной интоксикацией и усиливает развивающуюся адаптационно-приспособительную защитную реакцию, более существенно повышая активность ферментЪв НАДФИ-ОБН-зависимой системы, чем это наблюдается при введении только этанола.

7. СЭ в дозе 300 мг/кг при лечебном применении на модели хронического ССЦ-гепатита уменьшает развитие фиброза, а также улучшает желчеобразователь-ную функцию печени в норме и при экспериментальном поражении печени СС14.

8. Высокая эффективность СЭ, связанная с воздействием на основные звенья патогенеза острых и хронических поражений печени, наличие у него более выра-

женного лечебного действия, чем у карсила, позволяет рекомендовать СЭ в качестве субстанции для создания нового гепатопротекторного препарата.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 45 печатных работ, из них 12 статей в научных журналах, которые входят в перечень рекомендованных ВАК РФ, получено 2 патента.

Структура и объём диссертации. Диссертационная работа изложена на 311 страницах текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований (8 глав), заключения, общих выводов, списка литературы, приложений А, Б и В (54 страницы). Работа иллюстрирована 31 таблицей и 88 рисунками. Библиографический список включает 632 источника, из которых 383 публикации иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В качестве объектов исследования служили индивидуальные флавоноиды: кверцетин (фирмы Merk), диосмин, геснеридин, выделенные из растительного сырья (Vicia tanuifolia (variabilis) Roth, и кожуры цитрусовых), сумма, содержащая араби-ноглюкозид и ксилоглюкозид диосметина, которая условно названа флавицином и СЭ, полученные из надземной части горошка обрубленного — Vicia abbreviate Fish, ex Spreng.(Vicia truncatula Fich. ex Bieb.), сем. Бобовых - Fabaceae на кафедре органической химии ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» под руководством доктора фармацевтических наук, профессора Э.Т. Оганесяна. С помощью физико-химических методов анализа: температуры плавления, УФ-, ИК- и ПМР- спектроскопии, тонкослойной (ТСХ) и бумажной (БХ) хроматографии, пробы смешения подтверждено строение выделенных веществ [Андреева О.А., 1986, Хочава М.Р., 2001, Шаренко О.М., 2005]. СЭ представляет собой порошок темно-коричневого цвета с приятным специфическим запахом, содержащий 5,12 - 5,67% флавицина [Шаренко О.М., 2005]. Для стандартизации предложен метод количественного спек-трофотометрического определения суммы флавоноидов в сухом извлечении при 410 нм, ошибка которого находится в пределах 3,09-3,55%. В качестве препарата сравнения использовали карсил (Sopharma®) [Хабриев Р.У., 2005].

Опыты проведены на 1080 белых беспородных и линии \Vistar половозрелых крысах обоего пола массой 170-240 г. (по 10-12 животных контрольных групп и 6-8 опытных групп) и 80 белых мышах обоего пола массой 25-30 г. (по 10 мышей в группе). Животные содержались в условиях вивария Пят ГФА, Волгоградского государственного медицинского университета и государственного учреждения «Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ» г. Москва, с естественным световым режимом на стандартной диете [ГОСТ Р 5025892], с соблюдением Европейской конвенции «О защите позвоночных животных, используемых для экспериментов или в иных научных целях», ЕТЭ N 123, 1986 г. и правил лабораторной практики при проведении доклинических исследований в РФ [ГОСТ Р 51000.3-96, ГОСТ Р 51000.4-96]. Забой животных проводился согласно требованиям «Международных рекомендаций по проведению медико-биологических исследований с использованием животных», 1985 г.

Определение эффективной дозы проведено на модели острого СС14 -гепатитогепатоза, который воспроизводили путём введения рег оз с помощью зонда 3 раза через день 50% раствора СС14 в вазелиновом масле в дозе 0,15 мл/100 г массы тела животного [Блюгер А.Ф., Карташова О.Я., 1983]. Гесперидин, диосмин, флави-цин, кверцетин исследовали в диапазоне доз 25, 50, 100 и 200 мг/кг, СЭ - 100, 200, 300 и 500 мг/кг при пероральном введении в виде водной суспензии по лечебно-профилактической схеме: в течение 7 дней до СС14, а затем на фоне воспроизведения модели (5 дней). Исследуемые флавоноиды и СЭ вводили ежедневно в одно и то же время до кормления животных за 1 час до введения гепатотоксина. Установленные эффективные дозы были выбраны для дальнейших исследований и составили для индивидуальных веществ -100 мг/кг (менее 1/60 от ЬО50), для СЭ - 300 мг/кг (менее 1/20 от ЫЭ30). Карсил изучали в дозе 100мг/кг [Хабриев Р.У., 2005].

Острое поражение печени этанолом воспроизводили курсовой алкоголизацией крыс-самок путём 2-х кратной внутрибрюшинной инъекции 33% раствора этанола в сутки в дозе 0,75 мл/100г массы тела животного в течение 7 дней [Спрыгин В.Г., Кушнерова Н.Ф.,2002]. Исследуемые флавоноиды, СЭ и карсил животным вво-

дили в эффективных дозах за 5 дней до введения этанола, а затем совместно с ним (7 дней).

Курсовое поение здоровых животных флавоноидами, СЭ и карсилом осуществляли в течение 12 дней в эффективных гепатопротекторных дозах.

Хроническую алкоголизацию проводили путем перорального введения 40% этилового спирта в дозе 14 мл/кг [Мансурова И.Д., 1985] в течение 60 дней. Лечебное действие СЭ изучали в дозе 300 мг/кг в сравнении с карсилом в дозе 100 мг/кг. Через сутки после 60-дневной алкоголизации (исходный контроль), через 7, 14 и 21 день лечебного применения СЭ и карсила проводили забой животных опытных и соответствующих контрольных групп. Контролем служили животные, которые продолжали получать только 40% этанол в дозе 14 мл/кг также 7,14 и 21 день.

Оценку эффективности гепатозащитного действия проводили по степени нормализации биохимических показателей основных патологических синдромов, наблюдающихся при поражениях печени: цитолиза - активности в сыворотке АлАт, АсАт, КФ, ФЛА2, ГДГ, соотношению АсАт/АлАт; холестаза - активности в сыворотке крови 1ДФ, у-ГТП, содержанию билирубина и его фракций (прямого И непрямого билирубина), мезенхимального воспаления - определение белковых фракций, соотношения альбумины/глобулины и тимоловой пробы в сыворотке крови; пече-ночно-клеточной недостаточности, характеризуя состояние белково-синтетической и метаболической функций печени по показателям белкового (содержание общего белка, альбуминовой фракции и активности ХЭ, содержанию мочевины в сыворотке крови), углеводного (содержание глюкозы в крови и гликогена в печени) и ли-пидного (содержание холестерина, ТРГ в сыворотке крови, содержание ТРГ и ФЛ в печени) обменов. В качестве маркеров хронизации патологического процесса в печени определяли компоненты соединительной ткани: содержание в печени общего оксипролина (ОП) и содержание гликозаминогликанов (ГАГ) в сыворотке крови. Кроме этого, изучали гистоморфологическую картину органа при окраске препаратов гематоксилином и эозином, пикрофуксином по Ван-Гизону для выявления компонентов соединительной ткани и Суданом III для выявления липидов. Микрофотосъемку гистологических препаратов производили на микроскопе MICROS AUS-

TRIA (Австрия) цифровой фотокамерой «Olympus» (Япония). Об эффективности ге-патозащитного действия судили также по гибели животных контрольных групп и животных, получавших гепатопротекторы.

Для сравнения эффективности гепатозащитного действия исследуемых фла-воноидов, СЭ и карсила рассчитывали процент гепатопротекции [Rajesh et al., 2004] по изученным биохимическим показателям в отдельности и в целом с учетом всех

o-n\

показателей по формуле: H

х 100% , где H - коэффициент гепатопро-

.к-л].

текции, О — значение показателя в опытных группах, получавших совместно гепато-токсин и гепатопротекторы, К - значение показателя у животных, получавших только гепатотоксин (патологический контроль), N - значение показателя у интактных животных (нормальный контроль). Чем больше величина данного критерия приближалась к 100 %, тем более эффективным считалось гепатозащитное действие.

Интенсивность ПОЛ изучали по содержанию ТБК-активных продуктов в печени и сыворотке крови, диеновых конъюгатов (ДК) в печени, интенсивности спонтанного и Ре2+-аскорбатиндуцированного ПОЛ в постьядерной фракции печени (ПФП). Оценку антиоксидантной системы (АОС) проводили путём определения активности в ПФП каталазы, супероксиддисмутазы (СОД), глутатион-Б-трансферазы (Г-Б-Т), глутатионредуктазы (ГР), глутатионпероксидазы (ГП): общей, 8е-зависимой и 8с-независимой, НАДФ+-редуктазы при использовании в качестве субстратов ма-лата (МДГ), глюкозо-6-фосфата (Г-6-ФДГ) и изоцитрата (ИЦЦГ), содержанию йБН в печени, по общей антиокислительной активности (АОА) сыворотки крови и резистентности эритроцитов к спонтанному гемолизу. Для количественной оценки дисбаланса в системе ПОЛ/АОС рассчитывали коэффициент окислительного стресса как отношение произведения показателей ПОЛ к произведению показателей АОС, выраженных в относительных единицах к норме [Давыдов Б.В., 1991], принимая, что при сохранении баланса в системе ПОЛ/АОС коэффициент (К) = 1.

Состояние энергообмена изучали по содержанию глюкозы, гликогена, пирува-та, л астата, АТФ в печени и активности сукцинатдегидрогеназы (СДГ), цитохром-с-оксидазы (ЦТО) и 2+ -АТФ-азы в митохондриальной фракции печени. Антиток-

сическую функцию печени оценивали, измеряя активности ферментов метаболической трансформации ксенобиотиков - НАДН:Кз[Р'е(СЫ)б]-редуктазы, НАДФН: не-отетразолий (НТ) - редуктазы, N-деметилазы, n-гидроксилазы в микросомапыюй фракции печени.

Изучение антиоксидантного действия гесперидина, диосмина, флавицина и кверцетина in vitro проведено на модели Ре2+-индуцированного ПОЛ в липосомаль-ной системе, полученной на основе яичного фосфатидилхолина [Теселкин Ю.О. с соавт., 1996].

Изучение влияния флавоноидов на содержание радикалов N0 в печени и в организме в целом проводили методом ЭПР при использовании Ре3+ДЭТК2 и Fe3+Mrflz в качестве ловушек в норме и после индукции ПОЛ СС14.

Изучение влияния гесперидина и флавицина на печеночный кровоток проведено в норме при их пероральном введении в дозе 100 мг/кг.

Эндотелийпротективное действие гесперидина, диосмина, флавицина и кверцетина изучено в условиях нарушенной эндотелийзависимой вазодилятации и анти-тромботической функции эндотелия. Исследуемые вещества вводили перорально в течение 4-х недель в дозе 100 мг/кг. Препаратом сравнения служил сулодексид с доказанной эндотелиопротективной активностью в дозе 30 ЕВЛ/кг (единицы высвобождения липопротеидлипазы). Вазодилатирующую и антитромботическую функцию эндотелия оценивали по реакции сосудов на введение ацетилхолина (0,01 мг/кг), L-аргинина (100 мг/кг), нитро-Ь-аргинина (10 мг/кг) и нитроглицерина (0,007 мг/кг), и скорости формирования тромба в сосудах, вызванного аппликацией на стенку общей сонной артерии 50% раствора хлорида железа (III).

Измерение кровотока осуществлялось на предварительно наркотизированных этаминал-натрием (40 мг/кг) крысах с помощью ультразвукового допилерографа, датчика УЗОП-010-01 (рабочая частота 25МГц) и компьютерной программой ММ-Д-KMinimax Doppler v. 1.7. (Санкт-Петербург, Россия).

Определение вязкости крови, агрегации тромбоцитов, индуцированной АДФ (5 мкМ) и индекс агрегации эритроцитов проводили с использованием реологических методов с применением регистрирующей аппаратуры: анализатор крови реоло-

гический (APn-Oî, Россия), двухканапьный лазерный анализатор агрегации (НПФ «Биола» LA-230-2, Россия), лазерный коагулометр («Минилаб-701 », Россия).

Антифибротическое действие СЭ исследовали на модели хронического поражения печени ССЬ, (пероральное введение 50% масляного раствора СС14 9 раз, дважды в неделю в дозе 2,0 мл/кг массы тела) [Венгеровский А.И., 1999] при его лечебном применении в дозе 300 мг/кг в сравнении с карсилом в дозе 100 мг/кг по измерению биохимических маркеров соединительной ткани (ОП и ГАГ) и обнаружению ее элементов на гистологических препаратах печени через 7, 14 и 21 день лечения. Отдаленные результаты лечения были изучены через 2 месяца после 21-дневного курса лечения.

Для оценки желчеобразовательной функции печени СЭ вводили в дозе 300 мг/кг 12 дней здоровым животным, а также на фоне острого поражения печени ССЬ: 50% масляный раствор СС14 вводили подкожно в дозе 0,4 мл/100 г массы тела, 1 раз в сутки, 4 дня [Шаушеков 3. К. с соавт., 2005]. Определяли объем и состав (содержание желчных кислот - ЖК и холестерина) выделенной желчи с расчетом холато-холестеринового коэффициента.

Статистическую обработку результатов исследования осуществляли с помощью пакетов программ «Microsoft Office Excel 2003» (Microsoft, США) и «Statistica 6,0» (StatSoft, Inc., США). В зависимости от характера данных использовались непараметрический U-критерий Манна-Уитни и параметрический t- критерий Стьюдента с учетом предварительной проверки выборок на нормальность распределения. Для выявления взаимосвязи между эффектами рассчитывали коэффициенты корреляции [Серпов Л.Н., Г'ацура В.В., 2000]. Статистически значимыми расценивались эффекты при Р<0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ 1. Сравнительное изучение эффективности гепатозащитного действия флаво-ноидов, СЭ из V. abbreviate (truncatula) и их влияния на развитие окислительного стресса в условиях острого поражения печени тетрахлорметаном

Тетрахлорметан является наиболее известным гепатотоксином, применяемым для моделирования заболеваний печени. Он подвергается микросомальному окисле-

нию при участии цитохрома Р450 с образованием электрофильных апкилирующих интермедиатов и свободных радикалов, способных индуцировать ПОЛ и модифицировать биомолекулы в результате ковалентного связывания с ними. Как установлено в наших исследованиях, в результате введения СС14 наблюдался сдвиг про-антиоксидантного равновесия в сторону усиления ПОЛ (повышение содержания ТБК-продуктов и ДК, интенсивности Ре2<-аскорбатиндуцированного ПОЛ ПФП) с истощением АОЗ (падение активностей СОД, каталазы, ГП, Г-й-Т, НАДФ+-редуктаз, содержания вЗН, АОА сыворотки крови), развитие гипоксического состояния с усилением анаэробного гликолиза и нарушением аэробной продукции энергии на уровне митохондрий (повышение соотношения лактат/пируват, снижение содержания глюкозы и гликогена в печени, снижение активности СДГ, ЦТО и повышение \^2+-АТФазы), угнетение реакций микросомального окисления (снижение активностей N -деметилазы, п-гидроксилазы, НАДФН - НТ- редуктазы). Это сопровождалось развитием тяжелого поражения печени с проявлениями синдромов цитолиза (повышение активности ФЛА2, КФ, АлАт, АсАт и снижение соотношения АсАт.'АлАт), холестаза (повышение активности ЩФ, у-ГТП, содержания общего билирубина, особенно фракции прямого билирубина), мезенхимального воспаления (диспротеинемия с увеличением глобулиновой фракции белков сыворотки крови и повышение тимоловой пробы), жировой дистрофии (увеличение количества ТРГ при снижении ФЛ в печени) и печеночно-клеточной недостаточности (уменьшение общего белка и особенно альбуминов в крови, снижение активности ХЭ, повышение фракции прямого билирубина в крови и содержания мочевины). На гистоморфоло-гической картине также обнаруживались изменения, характерные для поражения печени СС)4: жировая и белковая дистрофия, очаги некроза, локализованные преимущественно в центральной зоне печеночной дольки, признаки воспалительной реакции (инфильтрация мононуклеарами), нарушения кровообращения в микрососудах (агрегация эритроцитов, стазы крови), поражения эндотелия синусоидов. На основании полученных данных можно говорить, что при введении крысам тетра-хлорметана в печени развивался острый токсический активный гепатит с очаговой

жировой дистрофией гепатоцитов (гепатитогепатоз). Количество погибших животных в этой группе составило 62,5%.

Лечебно-профилактическое применение флавоноидов, СЭ и карсила в эффективных дозах на фоне острого СС^-гепатитогепатоза в разной степени влияло на восстановление биохимических показателей основных патологических синдромов поражения печени СС14, что отражает таблица 1, в которой знаком «+» обозначена полная нормализация показателя, отнесенного к тому или иному синдрому, «±» -неполная нормализация и «-» - отсутствие эффекта (показатель достоверно не отличается от такового у животных с патологией), а также указаны средние проценты гепатопротекции по синдромам.

Таблица 1 Восстановление показателей основных патологических синдромов при лечебно-профилактическом введении флавоноидов, СЭ и карсила в условиях острого СС1г

гсттитогепатот у крыс

\ Синдро-\ мы Цитолиз (ЛлЛт, Холестя» (1ЦФ, Мек'нхн-малмюе Псченочио-клст очная Недостаточность

Л с А г, КФ, ФЛЛ2) г-гтп, III.) ПОС1!Я.'1С1ШС (глобулины, альбумины /глобулины, ТП) синтетическая функция (обм.белок, альбумины, ХЭ) обезвреживающая функция (моче-шш, 1Ш1.) метаболическая функция (глгокота сып., гликоген исч., ТРГсыо., ТРГ печ., ФЛ неч.)

Всщесгпя \

Гссисрмднн, 100 мг/кг ± - ± + + - + ±± - ±±± - + -±±± +

% поссгйновлсшш 64,3 65,6 46,0 61,0 56,8 71,0

Дносмлк, 100 мг/кг ± - + + + + + + + ± + + ± + +

% воссгаиоплсннн 82,9 91,2 73,8 78,6 105,3 79,0

Флашшнп, 100 мг7кг + -(- + + + + + + + ± + + + + + + + ± ±+

% носстяноилення 89,9 98.5 75,7 83,4 107,5 101,1

Кпс|щст1Н(, 100 мг/кт + + + + - ± ± + + + + + ± + - + + ± ± ±

% восстановления 95,3 45,4 93,1 77,7 67,6 77,2 '

Сухой экстракт, 300 мг/кг + + + + + + + 4- + + + + + + + + + + + +

% восстановления 93,5 99,6 96,7 88,3 104,6 99,2

Каре ил, 100 мг/кг + + + + ±-± + + + + + ± + - - - ±± +

% восстановления 93,6 48,4 96,7 71,0 65,1 36,3

Применение «+»- полная нормализация показателя; «±» - неполная нормализация; «-»- отсутствие эффекта

Видно, что и отношении устранения синдрома цитолиза флавицин, кверцетин и карсил проявили более выраженное действие, чем гесперидин и диосмин. Но флавицин, диосмин и гесперидин превосходили кверцетин и карсил по влиянию на развитие холестаза. Активацию мезенхимы кверцетин и карсил предупреждали более эффективно, чем флавицин, диосмин и гесперидин. Но флавицин и диосмин превышали действие кверцетина, гесперидина и карсила по влиянию на развитие синдрома печеночно-клеточной недостаточности. СЭ практически полностью нормализовал все изученные показатели.

Дпя количественной сравнительной оценки эффективности гепатозащитного действия флавоноидов, СЭ и карсила в целом были рассчитаны средние значения коэффициентов гепатопротекции с учетом всех биохимических показателей. Исходя из среднего процента гепатозащитной активности, наибольшей эффективностью в условиях ССЦ-гепатитогспатоза обладают флавицин (92%) и сухой экстракт (95%), что достоверно превышает действие карсила (61%) в 1,5-1,6 раза и кверцетина (77%) в 1,2 раза, и подтверждается процентом выживших животных, составившим для флавицина, диосмина и сухого экстракта 100%, кверцетина - 92%, гесперидина и карсила - 83%.

Гистоморфологические исследования также свидетельствуют о более высоком защитном действии флавицина и СЭ, при применении которых отмечались наименьшие патогистологические изменения в печени крыс. В гистологической картине печени крыс, получавших карсил, имелись признаки более выраженного воспаления, нарушения микроциркуляции и жирового перерождения, а также отмечалось наличие ступенчатых некрозов и нарушение цитоархитектоники печёночных балок.

При анализе влияния исследуемых веществ, обладающих различной степенью гепатозащитного действия, на систему ГТОЛ/АОС (рисунок 1) при остром ССЬ- ге-патитогепатозе было обнаружено, что флавицин, кверцетин и СЭ более эффективно снижали интенсивность ПОЛ (содержание ТБК-активных продуктов в печени и крови, ДК в печени и накопление МДА при Ре2+-аскорбатиндуцированном ПОЛ ПФП), чем гесперидин, диосмин и карсил. Восстановлению активности ферментов АОС при остром поражении печени ССЦ в большей степени способствовали флавицин и

'h 100-1 90 • 80 • 70 -60 -60 40 30 20 10 0

Показатели НОЛ

интактные животные ЕаЗ тесперидин Идиосмин ЕЗфлаеицин [1 сухой экстракт йкоерцегин ЕЗкарсип

ТБК-акт. продукты ДК печени ПОЛ ПФП ТБК-акт. продукты

печени сыв. крови

ДК - диеновые конъюгаты

ПОЛ перекисное окисление липидов

ПФП ■ постъядерная фракция, печени

Показатели ДОС

□ интак7ные животные ЕЗгесперидин Едиосмин Ифлавицин 33сухой экстракт Якверцетин Бкарсил % 450 ■

СОД катапам ГП общ. Г-S-T GSH общ. НАДФ+-

редуктаза

Примечание: 100% - контроль - ССЦ-гепатитогепатоз 4 - достоверно но отношению к интактным значениям * - достоверно по отношению к патологическому контролю

Рисунок 1 - Влияние флавоноидов, СЭ и карсила на систему ПОЛ — АОС. при остром СС14-гепатитогепатозе у крыс

СЭ, чем кверцетин, гесперидин, диосмин и карей л. При введении флавицина и СЭ наблюдалась полная нормализация активностей СОД, ГП, Г-8-ТР, НАДФ+- редук-таз. Кверцетин не увеличивал активности СОД, каталазы и Г-Б-ТР, диосмин - Г-б-ФДГ, гесперидин - Г-Б-ТР, Г-6-ФДГ и ИЦЦГ, карсил - СОД, ГП, Г-Б-ТР, МДГ. Полное восстановление содержания в печени, которое снижалось под влиянием СС14, наблюдалось только под влиянием флавицина.

Оценка восстановления про-антиоксидантного равновесия с помощью расчета коэффициента окислительного стресса показала, что его значения стали почти равными единице в результате применения флавицина и СЭ, проявляющих более выраженную гепатозащитную активность (таблица 2).

Таблица 2 - Значения коэффициента окислительного стресса и процента гепатопротещии у

животных с СС'ч-гепатитогепатозом и при введении флавоноидов, СЭ и карсила

Группы ЖИВОТНЫХ Прооксидлшы ! П>К- акт. продукты печ. х ДК печ.), в отн. сд. к норме Антноксндангы {СОД х каталаэа * ГП х Г-З-Т печ.), в отн. ед. к норме К, про-/антпокемд. % гепато-протекцин

Интактные I [ 1

ее*«- гепатитогеля гоз 34,8 6,091 382

Введение геспери-дина, 100 мг/кг 5,38 0,31 17,4 65

Введение дносми-на, 100 мг/кг 2,98 0,48 6,2 84

Введение флавицина, 100 мг/кг 0,92 0,78 1,2 92

Введение кверце- тина, 100 мг/кг 0,54 0,16 3,4 77

Введение СЭ, 100 мг/кг 1,07 0,56 1,9 95

Введение карсила, 100 мг/кг 1,75 0,16 10.7 61

Наиболее высокие коэффициенты имели животные, получавшие гесперидин (17,4) и карсил (10,7), для которых установлена и меньшая эффективность гепатоза-щитного действия. При этом выявлена тесная обратная корреляция между коэффициентом окислительного стресса и процентом гепатопротекторной активности (г= -0,85±0,26, Р<0,05). Можно сделать вывод, что выраженность гепатозащитного действия существенным образом связана со степенью восстановления про-

/аитиоксидантного равновесия: чем больше степень восстановления баланса в системе ПОЛ-АОС, тем выше степень защитного действия. Обращает на себя внимание, что прооксидантную составляющую окислительного стресса кверцетин снижал в большей степени (до 0,54), чем флавицин (0,92) и СЭ (1,07), но коэффициент окислительного стресса при его «ведении был почти в 2 раза выше (3,4) из-за недоста-' точного восстановления АОС. Это свидетельствуют в пользу того положения, что большое значение для защиты печени имеет не просто снижение и подавление ПОЛ, а восстановление той регуляции интенсивности свободнорадикального окисления и поддержание того равновесия в системе ПОЛ/АОС, которые существуют в норме.

Исследуемые нами флавоноиды. и СЭ при их лечебно-профилактическом применении в условиях острого СС14-гепатитогепатоза, так же, как и карсил, тормозили анаэробные процессы и улучшали аэробный путь производства энергии. При применении гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина и СЭ достоверно уменьшалось соотношение лактат/пируоат на 37%, 66%, 87%, 79% и 85% соответственно, повышались активности митохондриальных ферментов: СДГ на 86%, 113%, 239%, 119% и 119%; ЦТО - на 131%, 379%, 402% и 228% соответственно и содержание АТФ в печени на 41%, 63%, 67%, 112% и 64% соответственно. Видно, что в наибольшей мере снижали процессы анаэробиоза и повышали содержание АТФ в печени кверцетин, флавицин и СЭ. Карсил уступал этим веществам и СЭ по снижению соотношения лактат/пируваг (-78%), увеличению активное™ ЦТО и содержанию АТФ в печени (+191% и +22% соответственно) и не влиял на активность СДГ.

Помимо улучшения процессов энергообеспечения, преодолению окислительного стресса способствовало также и то, что исследуемые вещества восстанавливали работу микросомальной монооксигеназной и редуктазной электрон-транспортных цепей при СС14-гепатитогепатозе, что позволяет нормализовать детоксикационную функцию печеии. Более выраженное повышение активностей Ы-деметилазы и п-гидроксилазы наблюдалось при применении кверцетина, флавицина и СЭ.

2. Сравнительное изучение эффективности гепатозащитного действия флаво-ноидов, СЭ из V. abbreviate (truncatula) и их влияния на развитие окислительного стресса при остром алкогольном поражении печени

Как известно, алкогольное поражение печени в большой степени обусловлено окислительной деградацией этанола, протекающей в этом органе [Буеверов А.О., 2002, Калинин A.B., 2005, French S. W., 2000, Lieber C.S., 2005] при участии алко-гольдегидрогеназы и микросомальной монооксигеназной системы. Избыточное поступление этанола приводит к накоплению ацетальдегида и повышению образования свободных радикалов в микроссмальных е"-транспортных цепях, что приводит к усилению ПОЛ, истощению антиоксидантных ресурсов и повреждению биомембран свободными радикалами и продуктами ПОЛ.

Было установлено, что в результате 7-дневной алкоголизации наблюдалось повышение N-деметилазной и НАДФН-НТ-редуктазной активностей на 145% и 57%, вероятно, вследствие индукции изоформы цитохрома Р450 2Е I, участвующей в окислении этанола [Мальцев А.Н. и др., 2001]. Одновременно было выявлено повышение интенсивности индуцированного ПОЛ ПФП на 128% и содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови на 114%, хотя в печени содержание ТБК-активных продуктов и ДК достоверно не изменилось. Это сопровождалось падением эффективности АОЗ на различных уровнях - снижением активности СОД на 41%, каталазы на 50%, общей активности ГП на 51%, Г-S-T на 38%, содержания GSH на 48%, а также произошло снижение активности основных ферментов, поставляющих восстановительные эквиваленты для глутатионредуктазной реакции: МДГ - на 43%, Г-6-ФДГ - на 75% и ИЦДГ - на 57%. При этом коэффициент окислительного стресса увеличился до 62,5, что указывало на развитие синдрома пероксидации. Наряду с этим, как и при остром СС14-гепатитогепатозе, происходило формирование тканевой гипоксии, о чём свидетельствовало более чем пятикратное увеличение соотношения лактат/пируват, снижение содержания в печени глюкозы и гликогена, являющееся результатом высокой интенсивности анаэробного гликолиза и гликогенолиза, а также падение активности ферментов митохондрий (СДГ и ЦТО) и интенсивности процесса окислительного фосфорилирования (рост М°2+-АТФазной активности) и, как

следствие, уменьшение содержания АТФ (-59%).Выявленные изменения биохимических показателей в результате 7-дневного введения 33% этанола крысам-самкам свидетельствовали о развитии поражения печени с проявлением признаков тех же основных патофизиологических синдромов, что и при СО^гепатитогепатозе: цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления и печеночной недостаточности. Данные изменения были выражены в меньшей степени, чем при воздействии СС14, и во многом совпадали с теми, которые наблюдаются у больных с разными формами алкогольной болезни печени [Гриневич В.Б. с соавт., 2004].

При исследовании гистологических препаратов также выявлялись определённые морфологические признаки, характерные для алкогольного поражения печени: перивенулярное поражение гепатоцитов с баллонной дистрофией и некрозом с превалированием признаков "эозинофильной дегенерации", хотя телец Мэллори, явлений жировой дистрофии, а также перицеллюлярного фиброза обнаружено не было, что свидетельствовало о развитии острого токсического поражения печени умеренной степени тяжести.

Исследуемые флавоноиды и СЭ при алкогольном поражении печени также проявили гепатозащитные свойства (таблица 3). Как и при СС14-гепатитогепатозе, наиболее выраженным гепатозащитным действием обладали флавицин и СЭ, которые практически полностью нормализовали биохимические показатели, отражающие развитие основных патологических синдромов при лечебно-профилактическом введении в эффективных дозах, а в наименьшей степени - гесперидин, при введении которого сохранялись признаки всех синдромов. Кверцетин и карсил превышали действие диосмина на цитолиз и мезенхимапьное воспаление, но диосмин был более эффективным, чем кверцетин и карсил, по воздействию на холестаз и восстановление показателей углеводного и липидного обменов, что отчетливо видно по средним процентам восстановления показателей соответствующих синдромов. По коэффициенту гепатопротекции с учетом всех биохимических показателей исследуемые вещества по эффективности гепатопротекторного действия при остром алкогольном поражении печени можно расположить в следующей последовательности: сухой экстракт (97%), флавицин (96%), диосмин (78%), кверцетин (70%), карсил (69%) и

гесперидин (38%). Флавицин и СЭ имеют достоверно более высокие коэффициенты гепитопротскции, чем квсрцстин (70%) и кнрсйл (69%) в 1,4 раза. Процент выживших животных при применении карсила в ходе 7-дневной алкоголизации был ниже (66,7%), чем при применении диосмина (83,3%), флавицина (100%) и сухого экстракта (100%).

Таблица 3 Восстановление показателей основных патологических синдромов при лечебно-профилактическом введении флавоноидов, СЭ и карсила в условиях острого алкогольного пора-

жения печени у крыс

\ Сицдро-\ мы ВеществаЧ \ Цитолиз (АлАт, АсАт, КФ, ФЛА2) Холсстаз (1ЦФ, г-гтп, ПБ) М сзенхнмалыюс воспаление (глобулины, альбумины /глобулины, ТП) Печеночно-клеточная недостаточность

белково- синтетичсскао функция (обих.белок, альбумины, ХЭ, мочевина) метаболическая функция (глюкоза сыв., гликоген неч., ТРГ сыв., ТРГ печ., ФЛ печ.)

Гесперидин, 100мг/кг + - + + - -± ±-- ±-± ±- . .. + .

% восстановления 63,4 26,1 16,3 26,5 35,7

Дносмии, 100 мг/кг + + + -I- - + + + ± ± + ± 4- ± ++ + + +

% восстановления 93,4 84,4 54,9 54,5 84,3

Флавицнн, 100 мг/кг + + + + + + + + ± + + + +± + + + + +

% восстановления 115,6 101,9 82,9 65,6 107,6

Кверцетин, 100 мг/кг + + + + -± + + - ± + + + ± + ± + + -

% восстановления 100,8 55,2 67,2 59 75,3

Сухой экстракт, 300 мг/кг + + + + + + + + + + + + + + + + + + +

% восстановления 96,3 94,8 105,1 94,6 95,0

Карсил, 100 мг/кг + + + + + - + + ± ± + + ± + -- + + -

% восстановления 108,7 65,3 84,1 56,3 29,0

Примечание «+» - полная нормализация показателя; «±» - неполная нормализация; «-» - отсутствие эффекта

Как и при ССи-гепатитогепатозе, при алкогольном поражении печени, иссле-

дуемые флавоноиды, СЭ и карсил способствовали нормализации интенсивности ПОЛ и активности АОС (рисунок 2). При этом во всех случаях наблюдалась полная

Показатели ПОЛ

□ интактные животные Штесперидин ЕЗдиосмин Вфлазицин О сухой экстракт Нкверцетин Вкарсип

ТБК-акт. продукты ДК печени ПОЛ ПФП ТБК-акт. продукты

печени сыв. крови

Показатели ЛОС

□ интактные животные Шгесперидин ЕЗдиосмин (Зфпавицин ЕПсухой экстракт Икверцетин Вкарсил % 300 -1

250

НАДФ+-

редуктаза

Примечание: 100% -контроль - алкогольное поражение печени 1 - достоверно но отношению к интакгным значениям * - достоверно по отношению к контролю Обозначения как на рис. 1

Рисунок 1 — Влияние флавоноидов, СЭ и карсила на систему ПОЛ — ЛОС при остром алкогольном поражении у крыс

нормализация содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови и накопления МДА при Ре2'аскорбатиндуцированном ПОЛ ПФП, за исключением животных, получавших гесперидин (накопление оставалось выше нормы на 62%).

В отношении восстановления ферментативной АОЗ можно отметить значительное сходство в действии диосмина, флавицина и СЭ. При применении флавици-на и СЭ при алкогольной интоксикации на уровне нормальных значений находились практически все показатели АОС: СОД, каталаза, ГП общ., Г-Э-Т, СБН, общая НАДФН^-редуктазная активность (малатНтлкжозо-6-фосфат+изоцнтрат) с выраженной степенью подъема Г-6-ФДГ. Лишь активность ИЦЦГ при применении СЭ не достигала интактных значений, но при этом активность Г-8-Т и ГР были достоверно выше нормы и контроля соответственно. Действие диосмина характеризовалось несколько меньшей эффективностью: из перечисленных показателей не полностью восстановились общая НАДФ+-редуктазная активность ( в основном из-за ИЦДГ) и активность ГП. То же самое можно отметить и в действии кверцетина, но, кроме этого, не полностью восстанавливалась активность каталазы и оставались на низком уровне активности Г-Б-'Г, ГР и ИЦДГ. Под влиянием гесперидина и карсила наблюдалась полная нормализация СОД и каталазы, практически в равной мере повышалось содержание СБН. При действии гесперидина отмечалось некоторое увеличение активности ГП, но при введении карсила активность данного фермента не изменилась по сравнению с животными, получавшими только этанол. В то же время, гесперидин не повлиял на активность Г'-Б-Т, а карсил нормализовал ее. В отношении НАДФ+-редуктазных активностей при применении гесперидина отмечалось увеличение до нормы МДГ при неизмененной активности ИЦДГ. В то же время карсил усиливал активность ИЦДГ, не влияя на МДГ и Г-6ФДГ. В силу этого и общая НАДФ+-редуктазная активность при их введении восстанавливалась не в полной мере.

Коэффициент окислительного стресса в результате применения флавоноидов, СЭ и карсила при остром алкогольном поражении печени значительно уменьшился по сравнению с животными, получавшими только алкоголь (таблица 4). Наиболее высокие показатели коэффициента окислительного стресса, как и в опытах с пора-

жением печени ССЛ4, имели животные, получавшие гесперидин (3,26) и карсил (3,2), для которых установлена и меньшак эффективность гепотозащитного действия. При введении же флавицина и СЭ данный коэффициент был наиболее близок к 1. Таким образом, вывод о важности восстановления про-/антиоксидантного равновесия и значимости усиления собственных механизмов АОЗ при действии повреждающих факторов нашел свое подтверждение и в опытах с алкогольным поражением печени.

Таблица 4 - Значения коэффициента окислительного стресса и процента гепатопротек-

цииу животных с алкогольной интоксикацией и при введении флавоноидов, СЭикарсила

Группы животных Прсокецдинты (ТБК- акт. продукты сыв. х ТБК-акт. продукты печ. х ДК пен.л НОЛ ПФП), р отн. ед, к норме Антиокснданты (СОД х кдталаза х ГПх Г-S-T печ.), в отн. ед. к норме К, про-/антноксид. % re п а го-протек щш

Пнгакгньсе 1 1 I

Алкогольная интоксикация 5,6 0.0896 62,5

Введение гесперидин«, 100 мг/кг 1,18 0,36 3,26 3S

Введение диосмина, 100 мг/кг 1,34 0,60 2,23 7S

Введение флавицина, í«0 мг/кг 0,79 1,13 0,70 96

Введение кверцстн-иа, 1С0 мг/кг 0,58 0,22 2,63 70

Введение СЭ, 100 мг/кг 0,91 ¡,44 0,63 97

Введение карсила, 1С0 мг/кг 1,28 0,40 3,20 69

Корреляция между коэффициентом окислительного стресса и процентом гепа-

топротекции составила -0,81 ±0,29, Р<0,05, доказывая наличие достаточно существенной связи между эффективностью гепатозащитного действия и степенью восстановления про-антиоксидантного равновесия.

Интенсивность анаэробного пути окисления углеводов при алкогольном поражении печени на фоне применения флавоноидов, СЭ и карсила была значительно снижена, а также наблюдались восстановительные процессы в митохондриях пе че-ни и повышалось содержание АТФ. Более выраженное восстановление показателей энергетического обмена наблюдалось у животных под влиянием флавицина и СЭ, применяемых на фоне 7-дневной алкоголизации: соотношение лактат/пируваг снк-

зилось на 88% и 91%, содержание АТФ увеличилось на 127% и 106%, активности СДГ - на 135% и 137% и ЦТО - на 63% и 55% соответственно по отношению к контролю, что достоверно не отличалось от соответствующих значений у интактных животных.

В условиях алкогольной интоксикации было выявлено индуцирующее влияние флавонондов на цитохром-Р450-зависимые реакции: гесперидина и карсила - на N-деметилазную (+22% и +97%) и n-гидроксилазную активности (+289% и +420%); кверцешна - на N-деметилазную активность (+131%); СЭ - на п-гидроксилазную активность (+519%). При применении флавицина и диосмина все те изменения в данных реакциях микросомального окисления, которые были вызваны введением этанола, полностью устранялись: снижалась активность N-деметилазы (-51% и -42%) и повышалась активность п-гидроксилазы (+153% и +150%) до уровня нормы (указаны проценты изменения по сравнению с контролем, получавшим только этанол).

Таким образом, полученные результаты позволяют заключить, что выраженность гепатозащитного действия флавоноидов и СЭ при острых токсических поражениях печени тесно связана со способностью восстанавливать про-/антиоксидантное равновесие за счет повышения эффективности эндогенной системы АОЗ и сопряженных с ней процессов энергообеспечения и детоксикации, что является существенным в механизме гепатопротекторной активности флавоноидных соединений и СЭ из V. abbreviate.

3. Изучение аитноксидантного действия флавоноидов, сухого экстракта из V. abbreviate (truncatula) и карсила in vitro и их влияния на системы АОЗ, энергетического обмена и детоксикации in vivo в условиях нормы

Исследования, проведённые in vitro и на здоровых животных после курсового введения флавоноидов, СЭ и карсила в эффективных гепатопротекторных дозах, позволили установить следующее: 1. Гесперидин, диосмин и флавицин подавляют Ке2+-индуцированное ПОЛ в системе липосом и являются менее сильными антиок-сидантами, чем кверцетин (1С50 равно соответственно 7,0-10"2М, 4,9-10"2М, 4,9-¡0 3М и 6,3-10 5М). II. В результате курсового введения исследуемых флавоноидов в орга-

низме животных регистрируется: 1) снижение ТБК-активных продуктов крови (более выраженное при введении флавицина и кверцетина); снижение активности антирадикальных и антиперекисных ферментов (СОД и ГП); 2) усиление глутатионо-вой системы печени - увеличение содержания вБН и активности ГР (диосмин, фла-вицин, кверцетин), а также активности НАДФт-редуктаз: МДГ( гссперидин и кар-сил), Г-6-ФДГ (флавицин), ИЦДГ (диосмин); 3) снижение соотношения лак-тат/пируват и содержания глюкозы в печени; 4) повышение активности М§2+АТФазы в митохондриях печени без снижения АТФ в этом органе; 5) повышение активности некоторых ферментов микросомального окисления.

Повышение НАДФ+-редуктазиых активностей при введении исследуемых флавоноидов, восстанавливающих НАДФ+, по нашему мнению, позволяет обеспечивать и более высокую скорость регенерации СБН, когда возе,икает в этом необходимость (усиливается использование СБН). Это формирует как бы своеобразный скрытый резерв, усиливающий эффективность работы системы АОЗ при развитии оксидативного стресса.

Об этом свидетельствуют результаты, полученные в условиях острых токсических поражений печени. Так, при введении флавицина и СЭ выявлено выраженное повышение Г-6-ФДГ (алкогольное поражение печени) и даже стимуляция ИЦДГ (СС14-гепатитогепатоз) при одновременной нормализации активности ферментов 1-ой линии обороны и содержания СБН. Диосмин, который в меньшей степени влиял на НАДФ+-редуктазные активности, не в полной мере восстанавливал и активность ГП. Гесперидии, кверцетин и карсил не оказали влияния на определенные звенья регенерации восстановительных эквивалентов (ИЦДГ, или МДГ, или Г-6-ФДГ), и одновременно на ряд ферментов, обеспечивающих детоксикацию перекисных продуктов (СОД, каталаза, ГП и Г-Б-ТР). В целом, благодаря комплексному изучению всех основных звеньев системы АОЗ, можно видеть, что чем эффективнее восстанавливается звено АОС, обеспечивающее регенерацию ОБН, тем эффективнее функционируют и ферменты 1-ой линии обороны, использующие его в качестве кофактора для детоксикации токсических продуктов (в.т.ч. перекисей). Это также согласуется с данными о том, что в конечном итоге эффективное преодоление окие-

лительного стресса определяется не самим содержанием (18Н как такового, а активностью ферментов, принимающих участие в его регенерации и использующих С^Н для процессов детоксикации.

Многие из выявленных эффектов флавоноидов проистекают, на наш взгляд, из природы химических свойств этих соединений, а именно способности участвовать в обратимых окислительно-восстановительных превращениях, проявляя как водород-донорные, так и водородакцепториые свойства. В силу этого флавопоиды могут формировать самостоятельные редокс-системы типа фенол-семихинон-хинон, что дает им возможность снижать количество и/или образование свободных радикалов и интенсивность ПОЛ и, вероятно, позволяет создавать в клетке резерв окисленных никотинамидных коферментов (НАД+; НАДФ+), что может обеспечить усиление МАДФ'-редуктазиых активностей и поддержание пула восстановленного ОБИ. Формирование самостоятельных редокс-систем и усиление энергопродукции в ходе гликолиза может определять антнгипоксическое действие флавоноидов, что помогает устранить усугубляющее влияние гипоксии и энергодефицита при развитии окислительного стресса.

Таким образом, исходя из полученных результатов, можно заключить, что механизм защитного действия флавоноидов против окислительного стресса, развивающегося при токсических поражениях печени, является многоплановым и многообразным. Это и прямое антиоксидантное действие в силу антирадикальных и хела-тирующих свойств данных соединений. Это и непрямая защита путём активирования эндогенной системы АОЗ и детоксикации, а также повышение неспецифической устойчивости путём улучшения энергопродукции, защиты митохондрий и БН-групп белков от окислительного повреждения. Такое опосредованное повышение активности естественных защитных систем может иметь немаловажное значение в ускорении адаптации организма к действию повреждающих факторов среды. Следует подчеркнуть, что более значимым, вероятно, является активирование эндогенной защитной системы и оптимизация ее работы, чем собственная АОА соединений. Так, флавицин является менее эффективным антиоксидантом, чем кверцетин, но в большей степени восстанавливает активность ферментов АОС и коэффициент окис-

лительного стресса, обладая при этом более выраженной гепатозащитной активностью. По мнению Макарова В.Г., Макаровой М.Н., 2004, нет необходимости добиваться максимального антирадикального эффекта, учитывая и возможные проокси-дантные эффекты, и нарушение регуляции защитных механизмов. Чрезмерное снижение уровня АКМ может привести и приводит к блокированию целого ряда механизмов защитного характера. Согласно последним данным [Меньшикова Е.Б. и др., 2006, Masella R. Et al., 2005, Moskaug J. et al., 2005, Myhrstad M.C., 2006], активирование флавоноидами эндогенной системы АОЗ может достигаться через антиокси-дант-реслонсивный элемент (ARE), присутствующий в промоторах многих индуци-бельных генов, экспрессия которых усиливается в ответ на окислительный и химический стресс.

4. Изучение влияния флавоноидов на эндотелиальную дисфункцию, продукцию N0, органный кровоток и гемореологические свойства крови

В настоящее время значительная роль в регуляции тонуса сосудов и реологических свойств крови отводится эндотелиальной функции и ъ условиях нормы и при патологии. Многими авторами высказывается предположение о том, что возможно, многие сосудистые эффекты флавоноидов связаны с их влиянием на эндотелийзави-симые процессы [Benito S., 2002, Kowalczyk Е., 2002, Lorenz М.,2004, Leikert J.F.,2002, Wallerath Th„ 2005].

При тестировании эндотелиальной функции путем регистрации кровотока у крыс с эндотелиальной дисфункцией, получавших исследуемые флавоноиды в течение месяца в дозе 100 мг/кг, было установлено улучшение эндотедиозависимой ва-зодилатации: более выраженное увеличение кровотока в ответ на введение ацетил-холина - стимулятора синтеза эндогенного N0 и более выраженное снижение кровотока в ответ на введение блокатора NO-синтазы - нитро-Ь-аргинина, чем у животных контрольной группы. Кроме этого, у животных с эндотелиальной дисфункцией, получавших флавоноиды, при многократном введении ацетилхолина отмечался более выраженный прирост кровотока по сравнению с контрольной группой животных, что косвенно свидетельствует о большей мощности NO-синтезирующей системы. По влиянию на эндотелийзависимую вазодилатацию исследуемые флаво-

ноиды располагаются в следующей последовательности: гесперидин > кверцетин > дносмин >флавицин.

Эндотелинпротективное действие флавоноидов проявлялось и в том, что они улучшали антитромботическую функцию эндотелия, увеличивали время тромбооб-разования, которое значительно снижалось у животных с дисфункцией эндотелия. По эффективности антитромботичсского действия они располагаются в следующем порядке кверцетин>флавицин>диосмин>гесперидин.

Кроме того, флавоионды на фоне эндотелиальной дисфункции оказывали корригирующее действие на вязкость крови, уменьшали индекс агрегации эритроцитов и тромбоцитов и увеличивали индекс дезагрегации тромбоцитов (таблица 5).

Таблица 5 - Влияние флавоноидов на агрегацию тромбоцитов крови крыс

Группы животных Индекс агрегации Индекс дезагрегации Максимальный ник.юн

тромбоцитов тромбоцитов

Мнтактные животные 4,8±1,52 63,216,09 18,9+1,14

Животные с Iмлн u nia.il.пой 15,6±3,51* 54,4+6,99 53,0±0,76*

дисфункцией +53% -14% + 180%

Гесперидин Ю.4±],63* -33% 60,0+7.00 + 10% 35,5±1,14* -33%

Флаыщнн 10,5±0,?0» -33% 64,5+7,24 + 19% 42,6±4,9|* -20%

К'псржтим 12,8±0.52* -18% 69,4±3,!3* +28% 38,3±2,95* -28%

Дносмин 13,6+0,60 -13% 61,0+8,22 + 12% 44,9±4,82* -15%

С'у.чодскснд 9,6+4,9* -37% 79,7±7,М* +47% 25,6+0,76* -52%

Примечания

1 *- данные достоверны по отношению к тпакткым животным (Р<9,05), критерий Мэнма-Уииш,

2 * - данные достоверны по отношению к животным с эндотелиальной дисфункцией (Р<0,05), критерий Млн-па-Уиши

Способность флавоноидов положительно влиять на функционирование сосудистого эндотелия имеет значение для улучшения органного кровотока и микроциркуляции. В опытах на наркотизированных крысах-самцах установлено усиление печеночного кровотока при введении гесперидина и флавнцина, а также показано, что данная реакция обусловлена их влиянием на эндотелий с активацией выработки N0.

Повышение содержания N0 выявлено и методом ЭПР в организме животных, получавших гесперидин (100 мг/кг, 5 дней). О повышении уровня К'О свидетельст-

вовало увеличение компонентов сигнала парамагнитного аддукта 1ЯО-Ре2+-МГД2 в спектрах ЭПР мочи животных после применения гесперидина по сравнению с таковыми у интактных крыс (рисунок 3).

ЗН 316 318 320 322 324 321

Магнитное поле, мТп

Рисунок 3- Влияние гесперидина на образование аддуктов N0 в организме здоровых животных

Магнитное попе. мТп

Примечания 1 Интактные животные;2 Введение CCU; 3 Кверцетин+СС!4;4 Гсспсрндип+ССЦ Рисунок 4- Спектры ЭПР образцов печени крыс из разных экспериментальных групп при температуре жидкого азота

В результате инъекции ССЦ в печени наблюдался значительный рост интенсивности генерации радикалов N0, регистрируемой методом ЭПР с использованием Fe3+- ДЭТК2 в качестве ловушки N0 (рисунок 4), вероятнее всего, вследствие активации ÏNOS. Усиление экспрессии ¡NOS под действием СС14, возможно, связано с

тем, что тетрахлорметан способен индуцировать ПОЛ и связанную с ним продукцию супероксидного анион-радикала (02"), который является активатором синтеза N0 индуцибсльной NO-синтетазной системой [Коваленко О.А. и др., 1996, Реутов Н.П., 2000, Данилович Ю.В., 2001,0kamoto Т., 2000].

Повышение содержания в печени NO под действием ССЬ может вносить дополнительный вклад в развитие окислительного стресса и в проявление гепатоток-сического действия CCI4, поскольку NO может функционировать и как ингибитор токсического действия О2', и как источник образования более опасных NOO' радикалов [de Vera М.Е., 1995]. Предварительное введение флавоноидов кверцетина и гесперидина перед инъекцией CCI4 значительно снизило амплитуды 3-х компонентов сигнала аддукта МО-Ге21-ДЭТК2 в образцах печени (рисунок 4).

У животных, которым вводили диосмин и флавицин на фоне стимуляции продукции оксида азота СС14, выявить их влияние на процесс образования NO в печени крыс не удалось. В ЭПР спектрах образцов печени этих животных доминировал интенсивный синглентный сигнал, не связанный с образованием парамагнитных аддуктов NO-Fe2^3TK2- Снижение содержания NO в организме животных, которым вводили флавицин и диосмин, удалось установить при использовании в качестве ловушки Рс3'-МГД2 по подавлению соответствующих компонентов сигнала аддукта NO-Fe2+-Mr/(2 в спектрах ЭПР мочи животных, получавших на фоне СС14 флавицин и диосмин, по сравнению с контрольными животными (введение только CCI«).

Подавление продукции N0 флавеноидами, скорее всего, связано с их антиок-сидантной активностью и способностью тормозить образование свободных радикалов. Кроме того, показано, что флавоноиды уменьшают экспрессию ¡NOS в макрофагах, индуцированную липополисахаридами [Chen Y. et al., 2000, Cheon В.S. et al., 2000, Chi Y. et al., 2001] через торможение связывания фактора транскрипции NF-кВ, который контролирует индукцию экспрессии генов iNOS.

Таким образом, эндотелий протективное действие исследуемых флавоноидов, улучшение гемореологических свойств крови, повышение продукции N О сосудистым эндотелием и увеличение печеночного кровотока, а также снижение гипер-

продукции МО в печени индуцибельной NO-синтазой могут быть дополнительными факторами защиты печени от повреждения.

5. Изучение гепатозащитного действия СЭ из V. abbreviate (truncatula) при хронической экспериментальной патологии печени

Лечебное действие СЭ при хронической алкоголизации в дозе 300 мг/кг в сравнении с карсилом в дозе 100 мг/кг изучали после 60-дневного введения 40% этанола через 7,14 и 21 день их совместного применения.

Было установлено, что в результате 60-дневного введения алкоголя наблюдалось падение эффективности системы ДОЗ и нарушение про-/антиоксидантного равновесия с преобладанием прооксидантной составляющей. При этом отмечался рост содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови на 135%, в печени на 175% и повышение количества ДК в печени на 332%. Одновременно регистрировалось снижение в печени активности основных антиоксидантных ферментов: СОД -на 55%, каталазы -- на 45%, ГП - на 47%, ГР - на 41% и Г-S-TP - на 48%, а также Г-6-ФДГ - на 88%. Кроме этого, отмечалось усиление анаэробиоза (повышалось соотношение лактат/пируват на 100%) и падение содержания АТФ (-52%), т.е. развивался энергодефицит.

У крыс после 60-дневиой алкоголизации регистрировалось достоверное повышение в сыворотке крови активности АлАт (+134%) и ЩФ (+72%), содержания общего билирубина (+53%), показателя ТП - на 104%, увеличивалось содержание ТРГ в сыворотке крови (+132%) и в печени (+70%), снижалась активность ХЭ в сыворотке крови на 48%. Такие показатели, как содержание ГАГ в сыворотке крови и ОП в печени, увеличивались на 15% и 35% соответственно, но достоверных отличий от нормы выявлено не было.

При дальнейшем приеме только алкоголя выявлена активация адаптационно-приспособительных механизмов, направленных на защиту против повреждающего фактора (рисунок 5). Это проявилось, прежде всего, в том, что повышались активности ГП и Г-S-TP, снижалось содержание GSI-I в печени и увеличивались активности Г-6-ФД и ГР. При лечебном применении СЭ наблюдалась более выраженная активация ГП и Г-S-TP. В то же время у животных, леченных карсилом, отсутствовала

Шоцитратздтм.'фогсшпа Общяя ИЛДФ'-ргд.укгдлмы активность

—• — •• - контроль

......«........- экстракт

• - кареил

• достоверно по отношению к исходному контролю;

• на оси ординат - уровень интактных животных

- достоверно постношению к шпакткым животным; № - достоверно по отношению к контролю I

Рисунок ^-Влияние лечебного применения СЭ на НАДФН-СЗИ-зависимую систему печени крыс при хронической алкоголизации

активация Г-Б-ТР и наблюдалась менее выраженная активация ГП. В результате уже через )4 дней лечения сухим экстрактом наблюдалась полная нормализация со-

держания продуктов ПОЛ, в то время как при лечении карсилом нормализация их содержания происходила только к окончанию срока лечения. У крыс, получавших только этанол, хотя и регистрировались изменения, направленные на восстановление ПОЛ, но все же содержание перекисных продуктов оставалось выше нормы, т.е. развивающаяся у них защитная реакция оказалась недостаточной для полного преодоления окислительного стресса.

При этом у крыс, леченных СЭ, наблюдалось более выраженное снижение коэффициента окислительного стресса (1,73), чем у животных, леченных карсилом (7,27), что свидетельствовало о более полном восстановлении про-антиоксидантного равновесия у этих животных.

В отношении восстановления биохимических показателей лечебное действие СЭ оказалось более эффективным, чем карсила. При применении СЭ тормозилось образование элементов соединительной ткани: содержание ОП во все сроки лечения достоверно не отличалось от нормы, а содержание ГАГ в крови достоверно снижалось на 26% по сравнению с соответствующим контролем. Уменьшались и патоги-стологические изменения в печени: отмечалось уменьшение клеточной инфильтрации, признаков дистрофических изменений, отсутствовало фиброзирование портальных трактов, которое выявлялось в контроле на 14-ые сутки; сохранялось лишь умеренное расширение портальных вен и синусоидов.

Влияние СЭ на процесс фиброгенеза изучено также при хроническом СС14-гепатите, при котором было установлено четкое повышение количества ОП в печени по сравнению с нормальными значениями на 82% и ГАГ в крови - на 63%. На

гистоморфологической картине обнаруживалось замещение поврежденных гепато-цитов соединительнотканными тяжами.

В течение трех недель после воспроизведения модели хронического гепатита у нелечснных животных в печени достоверно повышался уровень ОП по сравнению с исходным контролем на 14 и 21 день на 48% и 63% соответственно, а содержание в сыворотке крови ГАГ на 39% и 44% соответственно. Лечение хронического гепатита карсилом и СЭ препятствовало накоплению компонентов соединительной ткани на протяжении всего срока наблюдения. Но у животных, получавших карсил, к концу лечения на 21 сутки сохранялось повышенное количество ОП в гомогенате печени (+25%).

Через два месяца после окончания 21-дневной терапии крыс СЭ все основные биохимические показатели, характеризующие процессы цитолиза, холестаза, жирового перерождения, находились на уровне нормы и тормозился процесс фиброге-неза. В группе животных, получавших карсил, были повышенными концентрация конъюгированного билирубина и активность 1ЦФ в сыворотке крови.

Довольно часто гепатопротекторная активность флавоноидов сочетается с желчегонным эффектом [Николаев СМ. с соавт., 2001,Сыров В.Н. с соавт., 2001, Шаушеков 3.IC. с соавт., 2005, Халилов СМ. с соавт., 2005], что вносит определенный вклад в защиту печени. Нами установлено активирующее влияние СЭ на жел-чеобразовательную функции печени у здоровых животных и у животных с поражением, печени. В условиях острого СС14-гепатоза СЭ. оказал нормализующие, более выраженное, чем у карсила, влияние на процессы образования и выделения желчи: увеличился объем желчи, повысились содержание в желчи ЖК и холато-холестериновый коэффициент. У животных, леченных карсилом, концентрация ЖК не достигала уровня здоровых животных.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Флавоноиды и СЭ из горошка обрубленного (V. abbreviata) оказывают гепатопро-текторное действие при поражении печени CCU и длительной алкоголизации, уменьшая выраженность синдромов, цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления, жировой дистрофии и печеночной недостаточности, препятствуя развитию

окислительного стресса и сопряженных с ним нарушений энергообмена и детокси-кации,

2. На модели острого поражения печени СС14у крыс установлено, что эффективной дозой гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина является доза 100 мг/кг, а СЭ - 300 мг/кг при испытании их в качестве гепатопротекторов.

3. При лечебно-профилактическом введении флавоноидов, СЭ и карсила в эффективных дозах в условиях острого ССЦ-гепатитогепатоза выявлено, что в отношении устранения синдрома цитолиза флавицин, кверцетин и карсил проявляют более эффективное действие, чем гесперидин и диосмин. Гесперидин, диосмин и флавицин превосходят кверцетин и карсил по влиянию на развитие холестаза. Активацию мезенхимы кверцетин и карсил предупреждают более эффективно, чем флавицин, диосмин и гесперидин. Флавицин и диосмин превышают действие кверцетина, карсила и гесперидина по влиянию на развитие синдрома печеночно-клеточной недостаточности. СЭ практически полностью нормализует все изученные показатели основных патосиндромов, связанных с поражением печени ССЦ.

4. На фоне алкогольной интоксикации наибольшая эффективность лечебно-профилактического действия отмечается у флавицина и СЭ, которые практически полностью устраняют признаки поражения печени, а введение гесперидина в наименьшей мере нормализует показатели всех патологических синдромов, наблюдающихся при остром алкогольном поражении печени. Кверцетин и карсил превышают действие диосмина на цитолиз и мезенхимальное воспаление, но диосмин более эффективен, чем кверцетин и карсил по влиянию на холестаз и восстановление показателей углеводного и липидного обменов.

5. При острых СС14- и алкогольном поражениях печени самые высокие и близкие коэффициенты гепатопротекции имеют СЭ (95% и 97%) и флавицин (92% и 96%), а наименьший - гесперидин (65% и 38%). По этому показателю флавицин и СЭ при ССЬ-гепатитогепатозе достоверно превышают в 1,5 -1,6 раза действие карсила (61%) и кверцетина (77%) в 1, 2 раза. При поражении печени этанолом флавицин и СЭ достоверно превышают эффективность гепатопротекторного действия и карсила (69%) и кверцетина (70%) в 1,4 раза. Наиболее выраженное гепатозащитное дейст-

вие флавицина и СЭ подтверждается гистоморфологическими исследованиями и регистрацией конечной точки (100% выживаемость).

6. При лечебно-профилактическом введении in vivo при острых токсических поражениях печени СС14 и этанолом флавоноиды, а также СЭ и карсил отличаются по степени нормализующего влияния на ферментативное звено АОЗ. Флавицин и СЭ способствуют восстановлению практически всех показателей АОС, стимулируя активности ферментов, участвующих в регенерации НАДФН (ИЦЦГ, Г-6-ФДГ, ГР). Диосмин в меньшей степени влияет на восстановление НАДФ+-редуктазной активности при обеих патологиях. Гесперидин, кверцетин и карсил не оказывают влияния не только на определенные звенья регенерации восстановительных эквивалентов (ИЦЦГ, или МДГ, или Г-6-ФДГ, или ГР), но и ферменты, обеспечивающие детокси-кацию перекисных продуктов (СОД, каталаза, ГП и Г-S-TP).

7. Наиболее эффективное восстановление энергообмена, устранение анаэробиоза и нормализация систем детоксикации в условиях острых поражений печени СС14 и этанолом наблюдается при лечебно-профилактическом введении флавицина и СЭ.

8. Гесперидин, диосмин и флавицин обладают антиоксидантным действием in vitro, подавляя интенсивность Ре24-индуцированного ПОЛ липосом в модельной системе, и по эффективности действия значительно уступают кверцетину: 1С5о равно соответственно 7,0-10"2М, 4,9-10'2М> 4,9-10 "3М и 6,3-10'5М.

9. Курсовое введение флавоноидов здоровым животным в дозе 100 мг/кг снижает содержание ТБК-активных продуктов в крови, наиболее выраженное при введении флавицина и кверцетина, и оказывает стимулирующее влияние на глутатионовую систему печени, повышая содержание GSH и активируя ферменты, участвующие в регенерации GSH (ГР и НАДФ+-редуктазы), а также приводит к усилению некоторых реакций микросомального окисления (N-деметилазной, n-гидроксилазной и НАДН-редуктазной активностей).

10. Установлена тссная обратная корреляция между коэффициентом окислительного стресса и процентом гепатопротекции, что указывает на первостепенное значение восстановления про-антиокеидантного равновесия в механизме гепатозащитного действия флавоноидов. В его восстановлении важное значение имеет поддержание

активности эндогенной ферментативной системы АОЗ, энергообеспечения и деток-сикации.

11. При помощи метода ЭПР и косвенным путем показано, что флавоноиды увели-' чивают содержание NO в норме и ограничивают гиперпродукцию N0, стимулированную CCI4, а также обладают эндотелий протективным действием и повышают образование N0, сниженное в условиях моделирования эндотелиальной дисфункции. В отношении повышения мощности системы синтеза N0 лидерами являются гесперидин и кверцетин. Фармакологическая модуляция синтеза NO флавоноидами может иметь существенное значение для проявления гепатозащитиых свойств.

12. СЭ в дозе 300 мг/кг обладает выраженным лечебным и лечебно-профилактическим действием при острых и хронических поражениях печени СС14 и этанолом, усиливает адаптационно-приспособительную защитную реакцию, более существенно повышая активности ферментов НАДФИ-ОБН-зависимой системы, чем это наблюдается при хронической алкоголизации; восстанавливает про-антиоксидантное равновесие, энергообмен, строение, метаболизм и функции печени, замедляет процесс фиброзирования, усиливает желчеобразовательную функции печени в норме и в условиях патологии. По гепатозащитному действию СЭ превышает действие карсила, что позволяет рекомендовать его для разработки нового ге-патопротекторного средства.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Доркина Е.Г., Оганесян Э.Т., Хочава М.Р., Мальцев Ю.А.Влияние флавоноидов растительного происхождения на перекисное окисление липидов // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы Междунар. съезда (4; 29 июня-1 июля 2000 г; Великий Новгород). - СПб., 2000. - С.155 - 157.

2. Доркина Е.Г., Хочава М.Р., Оганесян Э.Т., Фролова Л.М., Парфентьева Е.П., Москаленко C.B., Саджая J1.A., Репс В.Ф., Скульте И.В., Андреева O.A., Бобылев О.В. Исследование защитного действия суммы флавоноидов из кожуры цитрусовых при остром токсическом поражении печени CCI4// Человек и лекарство: тез. докл. 8 Рос. нац. конгресса 2-6 апреля 2001 г.-М.,2001.-С. 561.

3. Доркина Е.Г., Хочава М.Р., Оганесян Э.Т., Василенко Ю.К., Фролова Л.М., Парфентьева Е.П., Репс В.Ф., Москаленко C.B., Саджая Л.А., Скульте И.В., Андреева O.A., Бобылев О.В. Сравнительное изучение гепатозащитного действия индивидуальных и суммарных флаво-

ноидов из кожуры цитрусовых // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы...-Пятигорск: ПятигорскаяГФА,2001.- С.189- 191.

4. Доркина Е.Г., Хочава M.F., Оганесян Э.Т., Василенко ¡O.K., Фролова Л.М., Парфентьева Е.П., Репс В.Ф., Москаленко C.B., Саджая Л.А., Скульте И.В., Бобылев О.В. Исследование защитного действия гееперидина и его сочетанного применения с аминокислотами при остром токсическом поражении печени тстрахлормстаном // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы... - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2001. - С. 192 - 194.

5. Хочава М.Р., Доркина Е.Г., Оганесян Э.Т. Антиоксидаитные и гепатозащитные свойства флавоноидов цитрусовых // Фундаментачьные науки и прогресс клинической медицины: материалы Рос. конф. молодых ученых России с междунар. участием (2; 24-28 апреля 2001 г; Москва). - М., 2001. - Т.2. - С. 250.

6. Доркина Е.Г., Василенко Ю.К., Терехов А.Ю., Андреева O.A., Парфенгьева Е.Г1., Саджая Л.А., Репс В.Ф., Москаленко C.B., Скульте И В. Изучение гепатозащитиого действия различных субстанций из растений рода бархатцы // Человек и лекарство: тез. докл. 9 Рос. нац. конгресса 8-12 апреля 2002 г. - М., 2002. - С.609.

7. Доркина Е.Г., Оганесян Э.Т., Андреева O.A., Шаренко О.М., Терехов А.Ю. Изучение гепатозащитиого действия флавоноидиых соединений из растений рода Вика Паллиативная медицина и реабилитация к здравоохранении: материалы конгр с междунар. участием (4; апрель 2002 г; Средиземноморье). - М., 2002. - № 2-3.

8. Доркина Е.Г., Оганесян Э.Т., Хочава М.Р., Андреева O.A., Василенко Ю.К, Парфентьева Е.П., Скульте И.В., Саджая Л.А., Москаленко C.B., Постникова Н.В., Ващенко Т.Н. Выделение гееперидина и суммарной флавоноидиой фракции из отходов цитрусовых и экспериментальное изучение их использования в качестве гепатозащитных средств //Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2002. -31с. деп. в ВИНИТИ 11.07.9.2002, № 1308-В2002. - Библ. указ.: Деп. науч. работы. - 2002. - №. 9 (367). - С. 8 (72).

9. Оганесян Э.Т., Доркина Е.Г., Хочава М.Р., Тускаев В.А., Мальцев Ю.А.Использование квантово-химичсских методов для обоснования антирадикального (ОН ) действия полигид-роксихалконов // Хим.-фармац. ж урн. - 2002. - Т.36, № 12. - С. 21 - 25.

10. Доркина Е.Г., Терехов А.Ю., Оганесян Э.Т., Андреева O.A., Парфентьева Е.П., Василенко Ю.К., Саджая Л.А, Скульте И.В. Изучение гепатозащитиого действия различных субстанций из цветков бархатцев распростертых // Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2003. - 9 с. -Деп. в ВИНИТИ 24.06.2003, № 1209-В2003. - Библ. указ.: Деп. науч. работы (Есгеств. и точные науки, техника). - 2003. - № 8 (378). - С. 12 (97).

11. Доркина Е.Г. Изучение гепатозащитного действия природных флавоиоидных соединений //Эксперим. и клшшч. фармакология. - 2004. -Т.67, №6. -С. 41- 45.

12. Доркина Е.Г., Агаджанян З.С., Паукова Е.О., Шаренко О.М., Андреева O.A., Оганесян Э.Т. Сравнительное изучение эффективности гепатозащитного действия флавона диосмина и флавонона гесиеридина при отдельном и сочетанном применении у крыс с ССЦ-гепатоюм // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб.науч.тр.-Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2004. - Вып.59.-С.266-268.

13. Доркина Е.Г., Саджая Л.А., Биляч ЯМ.. Вашенко Е.С. Изучение влияния гликозидов диос-метина и геспериднна на микросомальное окисление в норме и при с СС14-гепатозе у крыс // Рэзработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб.науч.тр,-Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2004. - Вып.59.- С.270-271.

14. Доркина Е.Г., Андреева O.A., Шаренко О.М., Паукова Е.О., Агаджанян З.С., Биляч Я.И., Ващенко Е.С., Агаджанян B.C. Изучение влияния растительных флавоноидоп на показатели энергетического обмена при остром CCI 4-гепатозе// Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы Междунар. съезда: «Фитофарм 2004»(8; 21-23 июня 2004г, Миккели, Финляндия).- СПб.: ВВМ. 2004,- С.173-176.

15. Доркина Е.Г., Терехов А.Ю., Оганесян Э.Т., Андреева О.А, Парфентьева Е.П., Василенко Ю.К., Саджая Л.А., Скульте И.В. Гепатозащитное действие цветков бархатцев // Фармация. - 2004. - № 2. - С. 33-35.

16. Оганесян Э.Т., Доркина Е.Г., Андреева O.A., Шаренко О.М., Терехов А.Ю. Г епатозащитное действие флавоноидов вики изменчивой и вики обрубленной// Фармация. - 2004. ■ № 4. -С. 41-42.

17. Оганесян Э.Т., Доркина Е.Г., Андреева O.A., Шаренко О.М., Терехов А.Ю., Паукова Е.О., Агаджанян З.С., Самойленко Е.С., Буравова М.Г. О биологически активных веществах некоторых представителей рода Vicia // Современные наукоёмкие технологии: сб. науч. тр. -М., 2004. - №6. - С. 108-109.

18. Доркина Е.Г., Агаджанян З.С., Паукова Е.О., Шаренко О.М, Андреева O.A., Скульте И.В., Биляч Я.И., Ващенко Е.С., Агаджанян B.C. Изучение эффективности гепатозащитного действия флавицина и СЭ из вики обрубленной (Vicia truncatula Fish ex Bieb.) на модели острого тетрахлормстанового гепатоза у крыс // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб.науч.тр.- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2005. - Вып.60. -С.330-333.

19. Доркина Е.Г., Паукова Е.О., Агаджанян З.С., Парфентьева Е.П., Оганесян Э.Т., Андреева O.A., Шаренко О.М. Защитное действие флавоноидных антиоксидантов кверцетина, геспе-

ридина, диосмииа и флавицина при тетрахлорметановом индуцированном оксидативном стрессе в печени крыс. //Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб.науч.тр,- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2005. - Вып.60. -С.333-336.

20. Доркина Е.Г., Паукова Е.О., Агаджанян З.С., Саджая Л.А., Павлова Л.М. Антиоксидантное и мембраностабилизирующее действие природных флавоноидов при остром экспериментальном теграхлорметановом гепатозе. // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции : сб.науч.тр,- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2005. - Вып.60. -С.336-338.

21. Доркина Е.Г., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Шаренко О.М., Паукова Е.О., Андреева O.A., Оганесян Э.Т. Влияние антиоксидантов флавоноидной природы на перекисное и ми-тохондриалыюе окисление и антиоксидантный статус у крыс при остром ССЦ-гспатозе // Актуальные проблемы создания новых лекарственных препаратов природного происхождения: материалы Междунар. съезда «Фитофарм 2005» н Конф. молодых ученых Европ. фитохим. общества «Растения к Здоровье» (9, 22-25 июня 2005 г; Санкт-Петербург).-СПб.:НИИХ СПбГУ, 2005. - С. 77-80.

22. Доркина Е.Г., Паукова Е.О., Шаренко О.М., Андреева O.A. Гепатозащитное действие анги-опротекторов флавоноидной природы //Гепатология сегодня: материалы Десятой Рос. конф. 28-30 марта 2005 г, Москва/ Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопрокто-логии. - 2005. -Т.15.- №1. - Приложение №24.-С.Ю0.

23. Доркина Е.Г., Терехов А.Ю., Паукова Е.О., Шаренко О.М., Андреева O.A., Саджая Л.А. Использование растительных экстрактов для устранения синдрома холестаза при экспериментальном поражении печени // Известия высших учебных заведений. Сев.-Кавк. регион. Гастроэнтерология. Естествен, науки. - Спецвыпуск. - 2005. - С. 86 - 87.

24. Доркина Е.Г., Тимошин. A.A., Паукова Е.О., Ванин А.Ф. Кверцетин и гесперидин подавляют продукцию NO-радикалов в условиях строго ССЦ-гепатоза // Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека: сб.тр.нац.науч.-практ.конф. с междунар. участием (4; 26-30 сент.2005 г; Смоленск).- Смоленск, 2005. - C.172-I74.

25. Тимошин A.A., Доркина Е.Г., Паукова Е.О., Ванин А.Ф. Кверцетин и гесперидин подавляют образование радикалов оксида азота в печени и сердце крыс в условиях острого гепатоза // Биофизика. - 2005,- Т.50, №6. - С. 1145 - 1149.

26. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Шаренко О. М. Влияние био-флавоиоидов на про-/антиоксидантное равновесие при остром алкогольном отравлении // Гепатология сегодня: материалы Одиннадцатой Рос. конф. 27-29 марта 2006 г. //Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2006. - Т. 16. - №1. - Приложение №27. - С. 68.

27. Доркина Е.Г., Оганесян Э. Г., Сергеева Е.О., Шаренко О.М., Андреева O.A., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте Л.А. Влияние биофлавоноидов на мнкросомалыгое и митохонд-риальное окисление при СОг-генатозе // Человек и лекарство: тез. докл. 13 Рос. нац. конгр. 3-7 апр. 2006 г. - М„ 2006. - С. 520-521.

28. Шаренко О.М, Андреева O.A., Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Крикова A.B., Самойленко Е.С.Фитохимическое изучение состава надземной части расгений вики изменчивой (Vicia variabilis Freyn et Sint) и вики Гроссгейма (Vica Grossheimii Frcyn et Sint) // Человек и лекарство: тез. докл. 13 Рос. нац. конгр. 3-7 апр. 2006 г. -М., 2006. - С.609.

29. Доркина Е.Г., Василенко Ю.К., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте И.В., Мазурина М.В., Паукова Е.О. Изучение биохимических основ защитного действия флавоноидов при экспериментальном поражении печени // Отчет НИР(закл.)/ГОУВПО Пятигорская гос. фармац. академия. - Сб. реф. НИР и ОКР. Серия: Медицина. - М.: ВНТИЦентр, 2006. - № 11.-С.121.

30. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Оганесян Э.Т., Парфентьева Е.П., Скульте И.В., Ващенко Е.С., Биляч Я.И, Шаренко О.М., Андреева O.A. Изменение некоторых биохимических показателей у крыс при остром алкогольном отравлении и действии биофлавоноидов// Разработка, исследование и маркетинг новой фармац. продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2006.-Вып.61.-С 347-349.

31. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Саджая Л.А., Павлова Л.М. Мембраностабилизирующеё действие биофлавоноидов при остром алкогольном отравлении у крыс // Разработка, исследование и маркетинг новой фармац. продукции: сб. науч. тр. / Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2006. - Вып.61.-С. 382-383.

32. Доркина Е.Г., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А. Изучение механизмов гепатозащитного действия биофлавоноидов при остром алкогольном отравлении у крыс // Укращсьх. öioxiM. з'ид. (9; 24-27 животня 2006 г; Харьков): матер1али...- Харью'в, 2006.-Т.2,- С.50.

33. Пархоменко А.Ю., Оганесян Э.Т., Андреева O.A., Доркина Е.Г., Паукова Е.О., Агаджанян З.С. Амброзия полыннолистная - источник фармакологически активных соединений. Сообщение 2 // Хим.-фармац. журн. - 2006. - Т.40, №11,- С.46 -51.

34. Тимошин A.A., Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Ванин А.Ф., Оганесян Э.Т. Влияние геспери-дина на уровень оксида азота (NO) в организме крыс в норме и при остром поражении печени тегграхлорметаном // Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем: материалы Междунар. науч. конф.; Седьмой съезд Белорус, общественного объединения фотобиологов и биофизиков, Минск 21-23 июня 2006 г.- Минск.: ИООО «Право и экономика», 2006. -Т.2.- С.261-263.

35. Тюренков И.Н., Воронков A.B., Доркина Е.Г. Влияние гесперидина и флавицина на печеночный кровоток в норме и в условиях стимуляции и блокады синтеза эндогенного оксида азота //Регионарное кровообращение и микроциркуляция. - 2006. - Т.5. - С. 84 - 87.

36. Пат. 2270686 Российская Федерация, МКИ А61К 36/28. Способ получения гепатоиротек-торного и гипохолестеренимнческого средства / Э.Т. Оганесян, А.Ю. Пархоменко, O.A. Андреева, Е.Г. Доркина, З.С. Лгаджанян, Е.О. Паукова (РФ). - № 200419481/15; за-явл.29.03.2004; опубл. 27.02.2006, Бюл. № 6. - 9с.

37. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Оганесян Э.Т., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Терехов А.Ю., Скульте И.В., Духанина И,В., Шарснко О.М., Андреева О.А.Влияние биофлавоноидов на перекиснос окисление липидов и антиоксидаптные системы печени крыс при остром алкогольном отравлении // Вестник ВолГ'МУ,- 2007 - Т.23, №3 .- С. 50-52.

38. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте Л.А., Оганесян Э.Т., Шаренко О.М., Андреева O.A., Духанина И В. Коррекция биофлавоноидами биохимических показателен печени прн остром алкогольном отравлении у крыс// Гепатология сегодня: материалы Двенадцатой Рос. конф. 19-21 марта 2007г. // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2007. - Т. 17, №1. - Приложение № 29.-С.64.

39. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Терехов А.Ю., Скульте И.В. Влияние флавоноидов на псрекисное окисление липидов и антиоксидаптные ферменты в печени крыс I! Фармация из века в век. Часть V. Синтез биологически активных веществ для создания фармацевтических субстанций. Фармаколог, исследования: труды науч,-практ. конф. - СП 6., 2008. - С. 67-71.

40. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Терехов АЛО., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте И.В. Изучение влияния биофлавоноидов на показатели энергетического обмена при курсовой алкоголизации у крыс // Гепатология сегодня: материалы Тринадцатой Рое. конф. 17-19 марта 2008 г. // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2008. -Т. 18, №1. - Приложение № 31 .-С.54.

41. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Саджая Л.А., Парфентьева Е.П., Терехов А.Ю., Скульте И.В., Андреева O.A., Шареико О.М. Изучение гепатозащитного действия СЭ из вики обрубленной (Vicia truncatula Fish ex Bieb.) при остром тетрахлорметановом гепатозе у крыс //Разработка, исследование и маркетинг новой фармац. продукции: сб. науч. тр.- Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. -Вын.63.- С. 409-412.

42. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Саджая Л.А., Шаренко О.М., Андреева O.A. Изучение влияния флавоноидов на систему детоксикации ксенобиотиков в норме и при токсических поражениях печени у крыс //Разработка, исследование и маркетинг новой фармац. продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2008. -Вып.63- С. 412-414.

43. Пат. 2336893 Российская Федерация МКИ А61К 36/28. Способ получения гепатозащитного средства из цветков бархатцев распростертых (TAGETES PATULA L.) /Э.Т. Оганесян, Е.Г. Доркина, А.Ю. Терехов, Ж.В. Подгорная (РФ). - №2007110014/15; заявл. 19.03.2007; опубл. 27.10.2008, Бюл.№ 30. -5с.

44. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Терехов А.Ю., Парфентьева Е.П., Саджая Л.А., Скульте И.В. Изучение влияния флавоноидов на системы детоксикации ксенобиотиков при курсовой алкоголизации у крыс // Гепатология сегодня: материалы Четырнадцатой Рос. конф. 16-18 марта 2009 г.// Рос. журн. гастроэнтерологии, гепзтологии, колопроктологии. - 2009. - Т.19, №1. - Приложение № 33.- С.74.

45. Доркина Е.Г., Сергеева Е.О., Терехов А.Ю., Саджая Л.А., Парфентьева Е.П., Скульте И.В., Духанина И.В. Влияние флавицина на механизмы, участвующие в развитии окислительного стресса при курсовом введении здоровым животным //Разработка, исследование я маркетинг новой фармац, продукции: сб. науч. тр. - Пятигорск: Пятигорская ГФА, 2009. -Вып,64,-С. 418-421.

46. Тюрешсов И.Н., Воронков A.B., Слиецанс A.A., Доркина Е.Г. Изучение влияния геспериди-на на эндотелиальную функцию животных с экспериментально вызванным сахарным диабетом //Бюлл. Волгогр.научного центра РАМН. -2009. - №1. - С. 19-22.

47. Доркина Е.Г. Влияние лечебного применения сухого экстракта из Vicia truncatula на НАДФН-ОЗН-зависимую систему печени крыс при хронической алкоголизации //Эксперим. и клииич. фармакол. - 2010. - Т.73, № 4. - С. (принято в печать).

Благодарности:

Выражаю искреннюю благодарность зав. кафедрой органической xtuiuu ПятГФА, д.фж, профессору Оганесяну Э.Т. и сотрудникам кафедры к.х.н. Андреевой O.A., к.ф,н. Хочава М.Р., к.ф.н. Шаренко О.М. за предоставленные для исследования вещества; научному сотруднику лаборатории фармакологии сердечно-сосудистых средств НИИ ВолГМУ, к. м. н. Ворон-кову A.A., ст. научному сотруднику лаборатории физико-химических методов исследования отдела биохимии НИИЭК ГОУ «Российский кардиологический научно-производственный комплекс Минздрава РФ» к. физ.-.чат, к. Тимошину A.A., преподавателю кафедры патологической анатомии ВолГМУ, к м. н. Шмидту М.В., ст. преподавателю кафедры биологии, физиологии и патологии ПятГФА, к. м. н. Огурцову Ю.А., а также всем моим коллегам по кафедре биологической химии и микробиологии ПятГФА и ученикам за оказанную помощь при выполнении диссертационной работы.

ДОРКИНА ЕЛЕНА ГРИГОРЬЕВНА

ГЕПАТОПРОТЕКТОРНЫЕ СВОЙСТВА ФЛАВОНОИДОВ (ФАРМАКОДИНАМИКА И ПЕРСПЕКТИВЫ КЛИНИЧЕСКОГО ИЗУЧЕНИЯ)

14.03.06 - ФАРМАКОЛОГИЯ, КЛИНИЧЕСКАЯ ФАРМАКОЛОГИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ ДОКТОРА БИОЛОГИЧЕСКИХ НАУК

Подписано в печать «-¿5"» марта 2010 г. Формат 60x84/16. Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл.печ.л.2,0 Тираж 100 экз. Заказ №

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Оглавление диссертации Доркина, Елена Григорьевна :: 2010 :: Волгоград

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Современные представления о патогенезе токсических поражений печени. 13 Роль окислительного стресса

1.2 Механизмы действия флавоноидов и их применение при токсических пора- 36 жениях печени

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Характеристика объектов исследования

2.2 Постановка опытов и основные экспериментальные серии

2.3 Методы исследования 76 2.3.1 Оценка поражения печени по биохимическим показателям

2.3.2. Оценка интенсивности перекисного окисления липидов

2.3.3. Оценка состояния эндогенной антиоксидантной системы

2.3.4 Определение активности ферментов микросомальной системы печени

2.3.5 Оценка состояния энергетического обмена в печени

2.3.6 Определение содержания NO-радикалов методом ЭПР

2.3.7 Выделение постъядерной, микросомальной и митохондриальной фракций 85 печени

2.3.8 Определение антиоксидантной активности флавоноидов в модельной сис- 86 теме

2.3.9 Изучение гистоморфологической картины печени

2.3.10 Оценка желчеобразовательной функции печени

2.4 Используемые реактивы

2.5 Статистическая обработка результатов эксперимента

ГЛАВА 3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ЭФФЕКТИВНОЙ ДОЗЫ ФЛАВОНОИДОВ И СУ- 89 ХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ГОРОШКА ОБРУБЛЕННОГО НА МОДЕЛИ ОСТРОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ СС14 У КРЫС

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 4 СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОЗАЩИТНОГО ДЕЙСТ- 106 ВИЯ ФЛАВОНОИДОВ И СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ГОРОШКА ОБРУБЛЕННОГО НА МОДЕЛИ ОСТРОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ СС14 У КРЫС

4.1 Характеристика острого поражения печени тетрахлорметаном

4.2 Сравнительная оценка эффективности и особенности гсиатозащитного дсй- 113 ствия флавоноидов и сухого экстракта при остром СС14-генатитогепатозе ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 5 СРАВНИТЕЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ГЕПАТОЗАЩИТНОГО ДЕЙСТ- 128 ВИЯ ФЛАВОНОИДОВ И СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ГОРОШКА ОБРУБЛЕННОГО ПРИ ОСТРОМ АЛКОГОЛЬНОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ У КРЫС

5.1. Характеристика острого алкогольного поражения печени

5.2 Сравнительная оценка эффективности и особенности гепатозащитного дей- 133 ствия флавоноидов и сухого экстракта при остром алкогольном поражении печени

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 6 ВЛИЯНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ГО- 146 РОШКА ОБРУБЛЕННОГО НА ОСНОВНЫЕ ЗВЕНЬЯ ПАТОГЕНЕЗА ОСТРОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ ЧЕТЫРЁХХЛОРИСТЫМ УГЛЕРОДОМ

6.1 Влияние флавоноидов и сухого экстракта на про-антиоксидантное равнове- 146 сие при остром СС1.<-гепатитогепатозе

6.2 Влияние флавоноидов и сухого экстракта на энергетический обмен в печени 156 при остром СС14-гепатитогеиатозе

6. 3 Влияние флавоноидов и сухого экстракта на систему микросомального 161 окисления в печени при остром СС14-генатитогепатозе

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 7 ВЛИЯНИЕ ФЛАВОНОИДОВ И СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ГО- 165 РОШКА ОБРУБЛЕННОГО НА ОСНОВНЫЕ ЗВЕНЬЯ ПАТОГЕНЕЗА ОСТРОГО АЛКОГОЛЬНОГО ПОРАЖЕНИЯ ПЕЧЕНИ

7.1 Влияние флавоноидов и сухого экстракта на про-/антиоксидантное равнове- 174 сие при остром алкогольном поражении печени

7.2 Влияние флавоноидов и сухого экстракта на энергетический обмен при 178 остром алкогольном поражении печени

7.3 Влияние флавоноидов и сухого экстракта на систему микросомального 183 окисления при остром алкогольном поражении печени

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 8 ИЗУЧЕНИЕ АНТИОКСИДАНТНОГО ДЕЙСТВИЯ ФЛАВОНОИ- 184 ДОВ, СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ГОРОШКА ОБРУБЛЕННОГО И КАРСИЛА IN VITRO И IN VIVO И ИХ ВЛИЯНИЯ НА ЭНЕРГЕТИЧЕСКИЙ ОБМЕН И

МИКРОСОМАЛЬНОЕ ОКИСЛЕНИЕ В УСЛОВИЯХ НОРМЫ

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 9 ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ФЛАВОНОИДОВ НА ЭНДОТЕЛИАЛЬ- 199 НУЮ ДИСФУНКЦИЮ, ПРОДУКЦИЮ N0, ОРГАННЫЙ КРОВОТОК И ГЕ-МОРЕОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ КРОВИ

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

ГЛАВА 10 ИЗУЧЕНИЕ ЛЕЧЕБНОГО ДЕЙСТВИЯ СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ 219 ГОРОШКА ОБРУБЛЕННОГО ПРИ ХРОНИЧЕСКОМ ПОРАЖЕНИИ ПЕЧЕНИ И ЕГО ВЛИЯНИЯ НА ЖЕЛЧЕОБРАЗОВАТЕЛЬНУЮ ФУНКЦИЮ ПЕЧЕНИ

10.1 Изучение гепатозащитного действия сухого экстракта при хронической ал- 219 коголизацип у крыс в сравнении с карсилом

10.2 Изучение влияния сухого экстракта на развитие фиброза при хроническом 236 поражении печени СС14 в сравнении с карсилом

10.3 Изучение биохимических показателей печени при хроническом СО4- 240 гепатите через 2 месяца после лечения сухим экстрактом и карсилом

10.4 Изучение влияния сухого экстракта на желчеобразовательную функцию 241 печени в сравнении с флампном и карсилом

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Доркина, Елена Григорьевна, автореферат

Актуальность проблемы.

Поражения печени различной этиологии являются достаточно широко распространенной патологией [87, 121, 166]. По данным ВОЗ в мире около 2 млрд. человек с патологией печени [70]. Среди широкого круга препаратов, используемых в комплексной терапии заболеваний печени, выделяют сравнительно небольшую группу «истинных» гепатопротекторов [86, 129, 155, 193, 219], эффективность которых не всегда удовлетворяет клиницистов [15, 144, 184,219, 329, 504].

В патогенезе поражений печени (токсической, алкогольной и другой этиологии) большое значение отводится окислительному стрессу [14, 91, 154, 196, 328, 378, 481]. При окислительном стрессе, в первую очередь, наблюдается сдвиг про-антиоксидантного равновесия в сторону усиления прооксидантной составляющей, снижение резервов мобилизации антиоксидантной защиты, что сопряжено с нарушением энергообеспечения клетки, детокси-кационных механизмов, активацией апоптоза, провоспалительных цитокинов и др. [71, 151, 180, 235, 244, 494]. Окислительный стресс инициирует повреждение гепатоцитов и нарушение кровообращения (повреждение эндотелия сосудов и синусоидов печени с изменением выработки оксида азота, ухудшение реологических свойств крови, состояния микроциркуля-торного русла и пр.), что усугубляет течение патологического процесса [83, 96, 128, 155, 160,196, 260, 465].

Многофакторность патогенеза поражений печени требует, чтобы и защита осуществлялась на различных уровнях и структурах, что определяет перспективность поиска новых гепатопротекторов среди флавоноидов, для которых выявлено более 40 видов фармакологической активности, в т.ч. и антиоксидантное действие [44, 81, 151, 349, 395, 429, 432, 496, 497^500, 522, 525, 552, 555, 626, 629]. Множество работ посвящено исследованию гепатоза-щитных свойств флавоноидов, однако сравнительного изучения эффективности их действия не проводилось. Не выяснены до конца и механизмы их гепатопротекторной активности. Большинство авторов считают, что ее основой является антиоксидантное действие [20, 54, 59, 178, 223, 411, 413,418, 496, 497, 557]. В последние годы все большее внимание уделяется исследованию состояния эндогенных систем антиоксидантной защиты и антиоксидантного статуса, как совокупности про- и антиоксидантных процессов [11,110, 112, 159, 196, 233, 248, 270, 378, 387, 396, 535].

Поэтому сегодня актуальным является не только поиск новых эффективных и безопасных гепатозащитных препаратов, но и сравнительное изучение особенностей фармакоди-намики и интимных механизмов действия уже известных гепатопротекторов.

Исходя из этого, следует считать важным, как с научной, так и с практической точки зрения, комплексное, сравнительное изучение гепатопротекторного действия флавоноидов, их влияния на про-антиоксидантный баланс, системы антиоксидантной защиты, детоксика-ции и энергообеспечения, эндотелиальную дисфункцию, продукцию оксида азота и печеночный кровоток, что и явилось предметом настоящей работы.

Цель и задачи работы.

Экспериментально обосновать создание новых эффективных отечественных гепато-протекторов на основании комплексной и сравнительной оценки влияния флавоноидов на основные метаболические и гемодинамические патогенетические процессы при токсических поражениях печени.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Провести изучение в сравнительном аспекте влияния лечебно-профилактического действия гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина, карсила и сухого экстракта (СЭ) из горошка обрубленного (Vicia abbreviate Fish, ex Spreng. (Vicia truncatula Fish. ex. Bieb.)), содержащего флавицин на:

- развитие синдромов цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления и гепатоде-прессии;

- гистологическую картину печени;

- интенсивность перекисного окисления липидов (ПОЛ);

- состояние систем антиоксидантной защиты (АОЗ), энергообеспечения и детоксика-ции при экспериментальном остром поражении печени ССЦ и этанолом.

2. Изучить антиоксидантное действие исследуемых флавоноидов in vitro и их влияние на интенсивность ПОЛ, состояние систем АОЗ, энергообеспечения и детоксикации in vivo при курсовом введении в условиях нормы.

3. Провести сравнительное изучение влияния флавоноидов на содержание NO у ин-тактных животных и при его избыточной продукции, индуцированной CCI4, методом ЭПР.

5. Провести комплексное изучение энергетического обмена, интенсивности ПОЛ и состояния АОЗ, а также изменения печеночных показателей и гистоморфологической картины данного органа в ходе хронической алкоголизации и при лечебном применении наиболее активного гепатопротектора в сравнении с карей лом.

6. Изучить влияние наиболее активного гепатопротектора на:

- развитие фиброза при хроническом поражении печени ССЦ и отдаленные результаты его лечения;

- желчеобразовательную функцию печени в норме и при экспериментальном гепатите.

Научная новизна полученных результатов.

Впервые проведено сравнительное, комплексное изучение механизмов гепатопротек-торного действия индивидуальных флавоноидов, флавицина и СЭ из травы горошка обрубленного, их влияние на процессы ПОЛ, системы ДОЗ, детоксикации и энергообмена в условиях нормы и экспериментальной патологии печени. Впервые установлена гепатозащитная активность флавицина, выделенного из надземной части V.abbreviata, и продемонстрировано в различной степени выраженное нормализующее влияние гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина на основные патологические синдромы (цитолиз, холестаз, мезенхимальное воспаление, печеночно-клеточную недостаточность) при токсических поражениях печени CCI4 и этанолом. Впервые показано существование тесной корреляционной взаимосвязи между выраженностью гепатозащитного действия и степенью восстановления про-антиоксидантного равновесия за счет не только прямого антиоксидантного действия флавоноидов, но и повышения активности эндогенной системы АОЗ в печени.

Впервые выявлено, что курсовое введение исследуемых флавоноидов оказывает стимулирующее влияние на активность КАБР+-редуктазных ферментов, принимающих участие в регенерации восстановленного глутатиона, а применение диосмина, флавицина и кверцетина повышает содержание GSH, участвующего в механизмах повышения неспецифической резистентности организма к экстремальным факторам среды.

Впервые показано, что введение гесперидина и флавицина увеличивает печеночный кровоток в условиях нормы. Впервые проведено сравнительное изучение корригирующего влияния флавоноидов на органный кровоток в условиях эндотелиальной дисфункции, очевидно связанное с активацией eNOS и повышением продукции N0.

Методом ЭПР показано повышение под влиянием флавоноидов содержания N0 в норме, и его снижение в условиях индукции окислительного стресса введением CCI4, что свидетельствует об их модулирующем влиянии на продукцию N0.

Впервые установлено, что СЭ из Vicia abbreviata, содержащий 5,12 - 5,67 % флавицина, обладает более эффективным гепатопротекторным действием, чем препарат сравнения карсил. Изучен механизм действия СЭ при профилактическом и лечебном применении, который связан с преодолением окислительного стресса за счет поддержания функционирования эндогенной системы АОЗ, нормализации энергопродукции и процессов детоксикации, торможением процесса фиброгенеза при хронической патологии, восстановлением желчеоб-разовательной функции печени.

Впервые показано, что в ходе хронической алкоголизации развивается адаптационно-защитная реакция в виде повышения активности ферментов NADPH-GSH-зависимой системы, что значительно более выражено при лечебном применении СЭ из Vicia abbreviate.

Практическая значимость. На основании полученных результатов выявлено различное по эффективности влияние флавоноидов на определенные патологические синдромы, а также патогенетические механизмы поражения гепатоцитов: ПОЛ, систему АОЗ, детокси-кации и энергообразования, кровоснабжение печени, эндотелиальную дисфункцию. Такие данные позволяют разработать рекомендации по дифференцированному применению флавоноидов, как гепатопротекторов, при определенном характере течения заболевания печени. Сумма, содержащая арабиноглюкозид - и ксилоглюкозид диосметина, которая условно названа флавицином, может быть рекомендована для дальнейшей разработки на ее основе лекарственного средства для лечения поражений печени. СЭ из V. аЬЬге\ча1а, оказывающий выраженное гепатозащитное действие при острых и хронических токсических поражениях печени, превосходящее действие карсила, а также препятствующий развитию фиброза и стимулирующий секрецию желчи, может быть использован для создания лекарственного препарата. Полученные данные о тесной связи эффективности гепатозащитного действия с восстановлением баланса в системе ПОЛ/АОС свидетельствуют о том, что к применению антиоксидантов необходимо подходить с таких позиций, чтобы эти вещества не только подавляли ПОЛ, но и способствовали бы более легкому и быстрому возврату биосистем в состояние про-/антиоксидантного равновесия.

Практические рекомендации. Учитывая селективную токсичность ряда лекарств по отношению к эндотелиальным клеткам синусоидов печени и наиболее выраженное положительное действие гесперидина на эндотелиальную функцию и печеночный кровоток, данное соединение может быть рекомендовано для коррекции сосудистых поражений печени и эн-дотелиальной дисфункции при циррозе. Более эффективное нормализующее влияние диос-мина на холестаз может быть основанием для его рекомендации при заболеваниях печени, сопровождающихся нарушением желчеобразования. Кверцетин может быть рекомендован при поражениях печени, сопровождающихся выраженным цитолизом и мезенхимальным воспалением. Флавицин и СЭ, являющиеся высокоэффективными гепатопротекторами при поражениях печени ССЦ и алкоголем, могут быть рекомендованы для разработки на их основе лекарственных средств для лечения и профилактики заболеваний печени при острых и хронических отравлениях гепатотоксическими ядами.

Уровень внедрения результатов исследования.

По данным, полученным автором, подготовлены информационные письма, материалы которых включены в планы НИР кафедр технологии лекарств (акт внедрения от 03.09.2007 г.), органической химии (акты внедрения от 07.09.2007г. и от 04.11.2009), фармакогнозии (акт внедрения от 03.11.2009), фармакологии (акт внедрения от 29.08.2007 г.) и ботаники (акт внедрения от 10.11.2009) Пятигорской ГФА Росздрава. Результаты работы включены в лекционный материал для студентов различных факультетов на кафедрах фармакологии, фармакологии и биофармации ФУВ ВолГМУ, Курского государственного медицинского университета, Ставропольской государственной медицинской академии. Данные по изучению механизма действия и гепатозащитной активности СЭ из горошка обрубленного вошли в комплект документов, переданных в ООО «Флора Кавказа» для представления в ФК МЗ и CP на получение разрешения к проведению клинических испытаний.

Связь с планом НИР ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава».

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава» по проблеме «Изучение биохимических основ защитного действия флавоноидов при экспериментальном поражении печени» (номер государственной регистрации 01.200.11. 7645), а также в соответствии с планом научно-исследовательских работ Волгоградского Государственного медицинского университета и соответствует проблеме, номер государственной регистрации 01 200 800 804.

Апробация полученных результатов.

Основные положения диссертационной работы изложены на 55-й - 65-ой научных конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2000-2010 гг.), на десятой Российской конференции «Гепатология сегодня» (Москва, 2005 г.), на международной конференции «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» (Смоленск, 2005 г.), на IV конференции гастроэнтерологов Южного Федерального округа (Кисловодск, 2005г.), на международной научной конференции «Молекулярные, мембранные и клеточные основы функционирования биосистем» (Минск, 2006 г.), на IX Украинском биохимическом съезде (Харьков, 2006 г.).

Положения, выносимые на защиту.

1. При острых поражениях печени CCU и этанолом исследуемые флавоноиды и СЭ из V. abbreviate (truncatula) оказывают гепатозащитное действие, которое отличается по степени нормализующего влияния на развитие цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления и печеночно-клеточной недостаточности при лечебно-профилактическом применении в установленных эффективных дозах, что может служить основанием для их дифференцированного клинического применения с учетом особенностей течения заболевания.

2. Наиболее выраженной гепатозащитной активностью, превышающей таковую кар-сила, при острых токсических поражениях печени обладают флавицин и СЭ из V. abbreviate (truncatula), поскольку практически полностью устраняют основные патологические синдромы, а также в большей степени восстанавливают про-антиоксидантное равновесие, энергетический обмен и активность систем детоксикации.

3. Флавицин in vitro по силе антиоксидантного действия уступает кверцетину, но в большей степени активирует АОЗ и превосходит кверцетин по эффективности гепатопро-текции и поддержанию равновесия в системе ПОЛ/АОС. Отмечается достаточно тесная корреляционная связь между выраженностью гепатопротекции и коэффициентом окислительного стресса, характеризующим про-антиоксидантный баланс, что свидетельствует о важном значении для защиты печени не просто снижения и подавления ПОЛ, а устранения дисбаланса в системе ПОЛ/АОС.

4. В результате курсового введения исследуемых флавоноидов в эффективных гепа-топротекторных дозах наблюдается активация ферментов, принимающих участие в регенерации восстановленного глутатиона, и повышается содержание GSH в печени, что увеличивает неспецифическую резистентность органа к действию повреждающих факторов.

5. Исследуемые флавоноиды в норме и при эндотелиальной дисфункции увеличивают продукцию N0, вероятно, путем активации eNOS и повышают печеночный кровоток, а также ограничивают гиперпродукцию NO iNOS в печени, стимулированную CCI4, что в определенной степени обусловливает гепатопротективные свойства флавоноидов. В отношении повышения мощности системы синтеза N0 лидерами являются гесперидин и кверцетин.

6. СЭ из Vicia abbreviate (truncatula) в дозе 300 мг/кг обладает более выраженным лечебным действием, чем карсил, при поражении печени, вызванном хронической алкогольной интоксикацией и усиливает развивающуюся адаптационно-приспособительную защитную реакцию, более существенно повышая активность ферментов NADPH-GSH-зависимой системы, чем это наблюдается при введении только этанола.

7. СЭ в дозе 300 мг/кг при лечебном применении на модели хронического ССЦ-гепатита уменьшает развитие фиброза, а также улучшает желчеобразовательную функцию печени в норме и при экспериментальном поражении печени ССЦ.

8. Высокая эффективность СЭ, связанная с воздействием на основные звенья патогенеза острых и хронических поражений печени, наличие у него более выраженного лечебного действия, чем у карсила, позволяет рекомендовать СЭ в качестве субстанции для создания нового гепатопротекторного препарата.

Публикации . По теме диссертации опубликовано 45 печатных работ, из них 12 статей в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ, получено 2 патента.

Структура и объём диссертации. Диссертационная работа изложена на 311 страницах текста компьютерного набора и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, результатов собственных исследований (8 глав), заключения, общих выводов, списка литературы, приложений А, Б и В (54 страницы). Работа иллюстрирована 31 таблицей и 88 рисунками. Библиографический список включает 632 источников, из которых 383 публикации иностранных авторов.

Заключение диссертационного исследования на тему "Гепатопротекторные свойства флавоноидов"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Флавоноиды и СЭ из горошка обрубленного (V. abbreviata) оказывают гепатопротекторное действие при поражении печени ССЦ и длительной алкоголизации, уменьшая выраженность синдромов цитолиза, холестаза, мезенхимального воспаления, жировой дистрофии и печеночной недостаточности, препятствуя развитию окислительного стресса и сопряженных с ним нарушений энергообмена и детоксикации.

2. На модели острого поражения печени ССЦ у крыс установлено, что эффективной дозой гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина является доза 100 мг/кг, а СЭ - 300 мг/кг при испытании их в качестве гепатопротекторов.

3. При лечебно-профилактическом введении флавоноидов, СЭ и карсила в эффективных дозах в условиях острого СС14-гепатитогепатоза выявлено, что в отношении устранения синдрома цитолиза флавицин, кверцстин и карсил проявляют более эффективное действие, чем гесперидин и диосмин. Гесперидин, диосмин и флавицин превосходят кверцетин и карсил по влиянию на развитие холестаза. Активацию мезенхимы кверцетин и карсил предупреждают более эффективно, чем флавицин, диосмин и гесперидин. Флавицин и диосмин превышают действие кверцетина, карсила и гесперидина по влиянию на развитие синдрома печеночно-клеточной недостаточности. СЭ практически полностью нормализует все изученные показатели основных патосиндромов, связанных с поражением печени ССЦ.

4. На фоне алкогольной интоксикации наибольшая эффективность лечебно-профилактического действия отмечается у флавицина и СЭ, которые практически полностью устраняют признаки поражения печени, а введение гесперидина в наименьшей мере нормализует показатели всех патологических синдромов, наблюдающихся при остром алкогольном поражении печени. Кверцетин и карсил превышают действие диосмина на цитолиз и ме-зенхимальное воспаление, но диосмин более эффективен, чем кверцетин и карсил по влиянию на холестаз и восстановление показателей углеводного и липидного обменов.

5. При острых ССЦ- и алкогольном поражениях печени самые высокие и близкие коэффициенты гепатопротекции имеют СЭ (95% и 97%) и флавицин (92% и 96%), а наименьший -гесперидин (65% и 38%). По этому показателю флавицин и СЭ при ССЦ-гепатитогепатозе достоверно превышают в 1,5-1,6 раза действие карсила (61%) и кверцетина (77%) в 1,2 раза. При поражении печени этанолом флавицин и СЭ достоверно превышают эффективность ге-патопротекторного действия и карсила (69%) и кверцетина (70%) в 1,4 раза. Наиболее выраженное гепатозащитное действие флавицина и СЭ подтверждается гистоморфологическими исследованиями и регистрацией конечной точки (100% выживаемость).

6. При лечебно-профилактическом введении in vivo при острых токсических поражениях печени ССЦ и этанолом флавоноиды, а также СЭ и карсил отличаются по степени нормализующего влияния на ферментативное звено АОЗ. Флавицин и СЭ способствуют восстановлению практически всех показателей АОС, стимулируя активности ферментов, участвующих в регенерации КАЭРН (ИЦДГ, Г-б-ФДГ, ГР). Диосмин в меньшей степени влияет на восстановление ЫАБР+-редуктазной активности при обеих патологиях. Гесперидин, кверцетин и карсил не оказывают влияния не только на определенные звенья регенерации восстановительных эквивалентов (ИЦДГ, или МДГ, или Г-б-ФДГ, или ГР), но и ферменты, обеспечивающие детоксикацию перекисных продуктов (СОД, каталаза, ГП и Г-Б-ТР).

7. Наиболее эффективное восстановление энергообмена, устранение анаэробиоза и нормализация систем детоксикации в условиях острых поражений печени ССЦ и этанолом наблюдается при лечебно-профилактическом введении флавицина и СЭ.

8. Гесперидин, диосмин и флавицин обладают антиоксидантным действием т укго, подавляя интенсивность Ре2+-индуцированного ПОЛ липосом в модельной системе, и по эффективности действия значительно уступают кверцетину: ГС50 равно соответственно 7,0-10" М, 4,9-10" 2М, 4,9-10"3М и 6,3-10'5М.

9. Курсовое введение флавоноидов здоровым животным в дозе 100 мг/кг снижает содержание ТБК-активных продуктов в крови, наиболее выраженное при введении флавицина и кверцетина, и оказывает стимулирующее влияние на глутатионовую систему печени, повышая содержание вБН и активируя ферменты, участвующие в регенерации ОБН (ГР и МАОР+-редуктазы), а также приводит к усилению некоторых реакций микросомального окисления (Ы-деметилазной, п-гидроксилазной и 1ЧАБН-редуктазной активностей).

10. Установлена тесная обратная корреляция между коэффициентом окислительного стресса и процентом гепатопротекции, что указывает на первостепенное значение восстановления про-антиоксидантного равновесия в механизме гепатозащитного действия флавоноидов. В его восстановлении важное значение имеет поддержание активности эндогенной ферментативной системы АОЗ, энергообеспечения и детоксикации.

11. При помощи метода ЭПР и косвенным путем показано, что флавоноиды увеличивают содержание N0 в норме и ограничивают гиперпродукцию N0, стимулированную ССЦ, а также обладают эндотелий протективным действием и повышают образование N0, сниженное в условиях моделирования эндотелиальной дисфункции. В отношении повышения мощности системы синтеза N0 лидерами являются гесперидин и кверцетин. Фармакологическая модуляция синтеза N0 флавоноидами может иметь существенное значение для проявления гепа-тозащитных свойств.

12. СЭ в дозе 300 мг/кг обладает выраженным лечебным и лечебно-профилактическим действием при острых и хронических поражениях печени ССЦ и этанолом, усиливает адаптационно-приспособительную защитную реакцию, более существенно повышая активности ферментов НАОРН-ОБН-зависимой системы, чем это наблюдается при хронической алкоголизации; восстанавливает про-антиоксидантное равновесие, энергообмен, строение, метаболизм и функции печени, замедляет процесс фиброзирования, усиливает желчеобразователь-ную функции печени в норме и в условиях патологии. По гепатозащитному действию СЭ превышает действие карсила, что позволяет рекомендовать его для разработки нового гепа-топротекторного средства.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Среди достаточно широкого круга препаратов, используемых в комплексной терапии заболеваний печени, выделяют сравнительно небольшую группу «истинных» гепатопротек-торов, оказывающих избирательное действие на печень [129, 154], эффективность которых не всегда оказывается достаточной [11, 60, 110, 504], что определяет актуальность поиска новых гепатопротективных средств.

Перспективной группой в этом отношении являются флавоноиды, обладающие разнообразным спектром активности и низкой токсичностью. Об этом свидетельствует уже тот факт, что среди официальных гепатопротекторов имеются препараты, принадлежащие к данной группе (легалон, карсил, силимарин, катерген и др.). Опубликованы многочисленные данные, демонстрирующие гепатозащитные свойства растительных экстрактов, содержащих флавоноиды, суммарных флавоноидных комплексов, отдельных индивидуальных соединений, но сравнительного изучения эффективности их действия не проводилось. Не известны до конца и механизмы гепатозащитной активности данной группы природных веществ.

К так называемым биофлавоноидам цитрусовых относятся кверцетин, рутин, геспери-дин, диосмин и др. [280, 302]. На сегодняшний день хорошо установленным фактом является их положительное влияние на сердечно-сосудистую систему: капилляроукрепляющее, гипотензивное, антитромбическое действие, улучшение реологических свойств крови [8, 69, 330, 399, 576]. Гесперидин и диосмин входят в состав таких популярных флебопротекторов, как детралекс (Дафлон), диовенор-600 (флебодиа), оказывающих нормализующее влияние на кровоток и микроциркуляцию при хронической венозной недостаточности [138, 281, 474]. В экспериментальных исследованиях установлено, что кверцетин, гесперидин, диосмин способны уменьшать токсическое действие на печень циклофосфана, парацетамола и винбла-стина, СС14, этанола [361, 418,461, 598].

В нашей работе проведено комплексное сравнительное изучение гепатозащитной активности и механизмов действия кверцетина (фирма Merk), гесперидина из кожуры цитрусовых, диосмина из надземной части горошка изменчивого (Vicia variabeles), нового соединения, условного названного флавицином и являющегося аналогом диосмина, а также СЭ, которые были выделены из надземной части горошка обрубленного (V. abbreviata Fish, ex Spreng.) на кафедре органической химии ПятГФА под руководством профессора Оганесяна Э.Т. В качестве препарата сравнения был использован карсил.

В опытах по определению эффективной дозы на модели острого поражения печени ССЦ при лечебно-профилактическом введении гесперидина, диосмина, флавицина и кверцетина в дозах 25, 50, 100 и 200 мг/кг, а также СЭ в дозах 100, 200, 300 и 500 мг/кг установлено, что степень нормализации ряда биохимических маркеров поражения печени увеличивается в интервале доз от 25 до 100 мг/кг для индивидуальных флавоноидов и от 100 до 300 мг/кг для СЭ и в дальнейшем практически не изменяется. Коэффициенты гепатопротекции, рассчитанные для исследованных биохимических показателей и характеризующие процент их восстановления, с повышением доз гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина от 25 до 100 мг/кг и СЭ от 100 до 300 мг/кг повышаются, достигая максимума при дозах 100 мг/кг и 300 мг/кг для индивидуальных флавоноидов и СЭ соответственно. Наибольший процент выживших животных (100%) отмечается при применении индивидуальных флавоноидов в дозе 100 мг/кг, а СЭ - в дозе 300 мг/кг. При увеличении дозы гесперидина, диосмина, флавицина и кверцетина до 200 мг/кг, а СЭ до 500 мг/кг, данный показатель либо не изменяется и остается равным 100% (флавицин и диосмин), либо снижается до 87,5% (кверцетин и СЭ).

Таким образом, эффективными дозами гесперидина, диосмина, флавицина, кверцетина и СЭ при исследовании их в качестве гепатопротекторов на модели острого поражения печени CCI4 являются 100 мг/кг и 300 мг/кг для индивидуальных флавоноидов и СЭ соответственно, что составляет менее 1/60 и 1/20 от LD50 для флавицина и СЭ соответственно.

Сравнительное изучение гепатозащитного действия флавоноидов и СЭ было проведено при острых токсических поражениях печени CCI4 и этанолом, которые сопровождались развитием основных патологических синдромов [91], таких как цитолиз, холестаз, мезенхи-мальное воспаление и печеночно-клеточная недостаточность.

В целом, выявленные нарушения биохимических показателей свидетельствовали о менее выраженном поражении печени при алкогольной интоксикации, чем при затравке ССЦ, что подтверждалось гистоморфологическими исследованиями. При остром алкогольном поражении печени у крыс изменение биохимических показателей во многом соответствовали тем, которые наблюдаются у больных АБП (выраженное повышение активности у-ГТП, коэффициент де Ритиса (АсАт/АлАт) > 1, повышение содержания мочевины в крови) [3]. На гистологической картине печени крыс, которым вводили CCI4, выявлялся некроз, жировая дистрофия, макрофагальная инфильтрация, нарушения кровообращения и поражение эндотелия. Наибольшая выраженность цитолитических процессов в 3-ей зоне ацинуса печеночной дольки, формирование жировых кист, топология эндотелиоцитов и клеток Купффера были специфичны для поражения печени ССЦ и оценивались как 3-4 степень тяжести повреждения печени. На гистологических препаратах печени крыс, получавших эанол, не было обнаружено телец Мэллори, явлений жировой дистрофии, перицеллюлярного фиброза, но выявлялись определенные признаки, характерные для алкогольного поражения печени: перивенулярное поражение гепатоцитов с баллонной дистрофией и некрозом с превалированием признаков «эозинофильной дегенерации».

Было установлено, что гесперидин, диосмин, флавицин и кверцетин, относящиеся к различным структурным группам флавоноидов (соответственно к флаванонам, флавонам и флавонолам) при лечебно-профилактическом введении в эффективных дозах в разной степени воздействовали на восстановление биохимических показателей основных патологических синдромов при острых поражениях печени ССЦ и этанолом.

Сравнительный анализ изменения биохимических маркеров повреждения печени, а также средние проценты гепатопротекции, рассчитанные по показателям, относящимся к соответствующим синдромам, свидетельствовали о том, в отношении устранения синдрома цитолиза (АлАт, АсАт, АсАт/АлАт, КФ, ФЛАг) и мезенхимального воспаления (глобулины, альбумины/глобулины, ТП) флавицин, кверцетин и карсил (препарат сравнения) проявили более эффективное действие, чем гесперидин и диосмин, как при СС Ц-гепатитогепатозе, так и алкогольном поражении печени. Но диосмин и гесперидин превосходили кверцетин и кар-сил по влиянию на развитие холестаза (ЩФ,у-ГТП, ПБ) при ССЦ-гепатитогепатозе. Диосмин был более эффективен, чем кверцетин и карсил по воздействию на холестаз и при остром алкогольном поражении печени, а также по влиянию на восстановление показателей углеводного и липидного обменов (глюкоза, гликоген, ТРГ, ФЛ) при обеих патологиях.

Наиболее выраженной гепатозащитной активностью, превышающей таковую карсила, при острых токсических поражениях печени обладали флавицин и СЭ, поскольку практически полностью устраняли проявления всех основных патологических синдромов.

Для СЭ и флавицина установлены наиболее высокие средние проценты гепатопротекции, рассчитанные с учетом всех биохимических показателей: 95% и 97% соответственно при ССЦ-гепатитогепатозе и 92% и 96%> соответственно при остром алкогольном поражении печени. При поражении печени ССЦ по среднему коэффициенту гепатопротекции флавицин и СЭ были более эффективны, чем карсил (61%) в 1,5-1,6 раза и кверцетин (77%) в 1,2 раза, а при алкогольном поражении печени - в 1,4 раза, чем карсил (69%) и кверцетин (70%).

Это подтвердили и результаты учета количества животных, погибших в ходе эксперимента и гистоморфологические исследования. При применении флавицина и СЭ выживаемость животных при обеих патологиях составила 100%, тогда как кверцетина - 92% и 66,1% и карсила - 83% и 66,1%. При применении флавицина и СЭ отмечались и наименьшие пато-гистологические изменения в печени крыс. В то же время, в гистологической картине печени крыс, получавших карсил, имелись признаки более выраженного воспаления, нарушения микроциркуляции и жирового перерождения, а также отмечалось наличие колликвационного некроза и нарушение балочного строения печёночных долек.

Поскольку (как было показано в обзоре литературы) в патогенезе повреждений печени участвует оксилительный стресс, как состояние, при котором АОС клетки неспособны противостоять образованию и накоплению в ней свободных радикалов, для выяснения механизмов гепатозащитного действия флавоноидов и СЭ изучено их влияние на интенсивность ПОЛ, систему АОЗ, энергетический обмен и микросомальное окисление при токсических поражениях печени СС14 и этанолом при такой же схеме введения.

Полученные результаты показали, что при СС14-гепатитогепатозе более эффективно снижали интенсивность ПОЛ флавицин, кверцетин и СЭ, чем гесперидин, диосмин и карсил. Как и при СС14-гепатитогепатозе, при алкогольном поражении печени, исследуемые флаво-ноиды, СЭ и карсил способствовали нормализации интенсивности ПОЛ. При этом во всех случаях наблюдалась полная нормализация содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови и уменьшение накопления МДА при Ре2+аскорбатиндуцированном ПОЛ ПФП, за исключением животных, получавших гесперидин (накопление оставалось выше нормы на 62%).

Восстановлению активности ферментов АОС при остром поражении печени ССЦ в большей степени способствовали флавицин и СЭ, чем кверцетин, гесперидин, диосмин и карсил. Кверцетин не увеличивал активности СОД, каталазы и Г-Э-ТР, диосмин - Г-6-ФДГ, гесперидин - Г-Э-ТР, Г-6-ФДГ и ИЦДГ, карсил - СОД, ГП, Г-Б-ТР, МДГ. Полная нормализация содержания вБН в печени, которое снижалось под влиянием СС14, наблюдалось под влиянием флавицина.

В отношении восстановления ферментативной АОЗ при алкогольном поражении печени наблюдалось значительное сходство в действии диосмина, флавицина и СЭ. При применении флавицина и СЭ на уровне нормальных значений находились практически все показатели АОС: СОД, каталаза, ГП общ., ГП I, ГП II, Г-Э-Т, ОЗН, общая НАЭР+-редуктазная активность (малат+глюкозо-6-фосфат+изоцитрат) с выраженной степенью подъема Г-6-ФДГ. Лишь активность ИЦДГ при применение СЭ не достигала интактных значений, но при этом активности Г-Э-Т и ГР были даже выше нормы. Действие диосмина характеризовалось несколько меньшей эффективностью: из перечисленных показателей не полностью восстановились общая КАОР+-редуктазная активность (в основном из-за ИЦДГ) и активность ГП (особенно из-за ГП II). То же самое отмечалось и в действии кверцетина, но, кроме этого, не полиостью восстанавливалась активность каталазы и оставались на низком уровне активности Г-Б-Т, ГР и ИЦДГ. Под влиянием гесперидина и карсила наблюдалась полная нормализация СОД и каталазы, практически в равной мере повышалось содержание ОЭН. При действии гесперидина отмечалось определенное улучшение со стороны активности ГП, но карсил не оказал такового действия: ГП общ., ГП I и ГП II находились на уровне патологического контроля. В то же время гесперидин не повлиял на активность Г-Б-Т, а карсил нормализовал ее. В отношении КАОР+-редуктазных активностей при применении гесперидина отмечалось увеличение до нормы МДГ при неизмененной активности ИЦДГ. В то же время карсил усиливал активность ИЦДГ, не влияя на МДГ и Г-6ФДГ. В силу этого и общая КАБР+-редуктазная активность при их введении восстанавливалась не в полной мере.

Анализируя влияние исследуемых веществ на развитие окислительного стресса при острых токсических поражениях печени, можно видеть различные варианты и степень изменения прооксидантной и антиоксидантной составляющей данного процесса. Это требует интегральной оценки обеих составляющих, проведенной нами по коэффициенту окислительного стресса, который представляет собой отношение произведения показателей ПОЛ к произведению показателей АОС, выраженных в относительных ед. к норме [157, 161]. В качестве показателей ПОЛ были использованы — содержание ТБК-активных продуктов и ДК, накопление МДА в ПФП, в качестве показателей АОС - активности основных антиоксидантных ферментов (СОД, каталаза, ГП и Г-Б-Т) в печени. При сохранении баланса в системе ПОЛ-АОС данный коэффициент (К) = 1. Использование этого интегрального показателя позволяет одновременно оценить состояние, как процесса ПОЛ, так и АОС и выявить степень дисбаланса в системе ПОЛ-АОС.

Оценка восстановления про-антиоксидантного равновесия с помощью расчета коэффициента окислительного стресса показала, что его значения были почти равными единице в результате применения флавицина и СЭ при обеих патологиях. При этом выявлена тесная корреляция между коэффициентом окислительного стресса и процентом гепатопротекторной активности (г = - 0,85+0,26, Р<0,05 и -0,81 ±0,29, Р<0,05). Можно сделать вывод, что выраженность гепатозащитного действия существенным образом связана со степенью восстановления про-антиоксидантного равновесия: чем в большей степени наблюдается восстановление баланса в системе ПОЛ-АОС, тем выше степень защитного действия.

Исследуемые нами флавоноиды и СЭ при их лечебно-профилактическом применении в условиях острого ССЦ-гепатитогепатоза, так же, как и карсил, тормозили анаэробные процессы и улучшали аэробный путь производства энергии. При применении гесперидина, ди-осмина, флавицина, кверцетина и СЭ достоверно уменьшалось соотношение лактат/пируват на 37%, 66%, 87%, 79% и 85% соответственно, повышались активности митохондриальных ферментов: СДГ на 86%, 113%, 239%, 119% и 119%; ЦТО - на 131%, 379%, 402% и 228% соответственно и содержание АТФ в печени на 41%, 63%, 67%, 112% и 64% соответственно. Видно, что в наибольшей мере снижали процессы анаэробиоза и повышали содержание АТФ в печени квсрцетпн, флавицин и СЭ. Карсил уступал этим веществам и СЭ по снижению соотношения лактат/пируват (-78%), увеличению активности ЦТО и содержанию АТФ в печени (+191% и +22% соответственно) и не влиял на активность СДГ.

При алкогольном поражении печени интенсивность анаэробного пути окисления углеводов на фоне применения флавоноидов, СЭ и карсила также была значительно снижена, наблюдались восстановительные процессы в митохондриях печени, и повышалось содержание АТФ. Более выраженное восстановление показателей энергетического обмена наблюдалось у животных под влиянием флавицина и СЭ: соотношение лактат/пируват снизилось на 88% и 91%, содержание АТФ увеличилось на 127% и 106%, активности СДГ - на 135% и 137% и ЦТО- на 63% и 55% соответственно по отношению к контролю, что достоверно не отличалось от соответствующих значений у интактных животных.

Помимо улучшения процессов энергообеспечения, преодолению окислительного стресса при применении флавоноидов способствовало также и то, что исследуемые вещества при токсических поражениях печени оказали восстанавливающее влияние на работу микро-сомальной монооксигеназной и редуктазной электрон-транспортных цепей, что позволяет нормализовать как продукцию свободных радикалов, так и детоксикациоиную функцию печени. Наиболее значительный подъем активностей Ы-деметилазы и п-гидроксилазы в условиях ССЦ-гепатитогепатоза наблюдалось при применении кверцетина, флавицина и СЭ.

В условиях алкогольной интоксикации было выявлено индуцирующее влияние на ци-тохром-Р450-зависимые реакции: гесперидина и карсила - на Ы-деметилазную (+22% и +97%) и п-гидроксилазную активности (+289% и +420%); кверцетина - на Ы-деметилазную активность (+131%);СЭ - на п-гидроксилазную активность (+519%). При применении флавицина и диосмина все те изменения в данных реакциях микросомального окисления, которые были вызваны введением этанола, полностью устранялись: снижалась активность >1-деметилазы (-51% и -42%) и повышалась активность п-гидроксилазы (+153%) и +150%)>до уровня нормы.

Таким образом, полученные результаты позволяют заключить, что выраженность ге-патозащитного действия флавоноидов и СЭ при острых токсических поражениях печени тесно связана со способностью восстанавливать про-/антиоксидантное равновесие за счет повышения эффективности эндогенной системы АОЗ и сопряженных с ней процессов энергообеспечения и детоксикации, что является существенным в механизме гепатопротекторной активности флавоноидных соединений и СЭ из V. abbreviata.

Закономерно возникает вопрос, каким образом или за счет каких свойств флавоноиды осуществляют восстановление необходимого баланса в системе ПОЛ/АОС? Хорошо изученным и установленным фактом является антиоксидантная активность флавоноидов и многие исследователи объясняют их защитное действие при окислительном стрессе улавливанием свободных радикалов и подавлением усиления ПОЛ (см.обзор литературы). С другой стороны показано, что флавоноиды могут взаимодействовать и оказывать влияние на внутриклеточные антиоксидантные агенты [265, 276, 344, 370, 387, 396, 411, 440, 511, 527, 597] и препятствуют развитию заболеваний при употреблении их в тех количествах, когда в организме не создается концентраций достаточных для проявления антиоксидантного действия [283, 316, 387, 407, 426, 489, 582, 624]. Для ответа на поставленный вопрос исследований, проведённых в условиях патологии, явно недостаточно, поскольку воздействие веществ на сво-боднорадикальные процессы при патологии, когда имеют место структурно-функциональные повреждения и нарушения метаболизма, может существенно отличаться от нормы.

Было проведено изучение АОА гесперидина, диосмина, флавицина и кверцетина in

О Аvitro в системе Fe -индуцированного ПОЛ липосом, а также влияние флавоноидов, СЭ и карсила на АОС, энергообмен, микросомальное окисление in vivo при курсовом введении животным (12 дней) в эффективных дозах.

Исследования, проведённые in vitro показали, что гесперидин, диосмин и флавицин являются менее сильными антиоксидантами прямого действия, чем кверцетин (IC50 равно соответственно 7,0-10"2М, 4,9-10"2М, 4,9-10"3М и 6,3-10"5M). Сравнение 1С50 кверцетина с такими же показателями для гесперетина (5,2-10"4М) и диосметина (8,6-10"5М), установленныг ми раннее проведенными исследованиями [35, 231] в системе Бе2+-индуцированного ПОЛ ПФП также выявляет большую эффективность кверцетина, что соответствует закономерностям взаимосвязи структура-активность для флавоноидов: 1) две ОН-группы в положениях i /

Сз и С4; 2) двойная связь между 2 и 3 атомами углерода, желательно совместно с карбонильной группой в положении С4; 3) ОН-группы в положениях Сз и С5 совместно с карбонильной группой [151, 315, 386, 395, 454, 550, 620 ]. Антиоксидантная активность кверцетина, имеющего 3',4'-диоксигруппу в B-кольце, выше, чем диосметина, у которого в 4'-положении находится метоксигруппа, а активность гесперетина, отличающегося от диосметина только отсутствием 2,3-двойной связи, практически на порядок ниже, чем у этого фла-вона. Корреляция между IC50 и процентом гепатопротекции составила -0,81+0,32 и -0,88±0,25.

В результате курсового введения исследуемых флавоноидов, СЭ и карсила in vivo выявлено снижение ТБК-активных продуктов в крови (более выраженное при введении флавицина и кверцетина), снижение активности антирадикальных и антиперекисных ферментов (СОД и ГП), усиление глутатионовой системы печени - увеличение содержания GSH и активности ГР (диосмин, флавицин, кверцетин), а также активности NАБР+-редуктаз: МДГ (гесперидин и карсил), Г-6-ФДГ (флавицин), ИЦДГ (диосмин); снижение соотношения лак-тат/пируват и содержания глюкозы в печени, повышение активности 1^2+АТФазы в митохондриях печени без снижения АТФ в этом органе, повышение активности некоторых ферментов микросомального окисления.

Активация NADP+ -редуктазных активностей (МДГ, ИЦДГ, Г-6-ФДГ) при введении исследуемых флавоноидов и активности ГР, по нашему мнению, позволяет обеспечивать и более высокую скорость регенерации GSH, когда возникает в этом необходимость (например, усиливается использование GSH при активации ПОЛ). Это формирует как бы своеобразный скрытый резерв, усиливающий эффективность работы системы АОЗ при развитии оксидативного стресса.

Так, в условиях патологии при введении флавицина и СЭ нами было выявлено выраженное повышение Г-6-ФДГ (алкогольное поражение печени) и даже стимуляция ИЦДГ (ССЦ-гепатитогепатоз), одновременно наблюдалась нормализация и ферментов 1-ой линии обороны и содержания GSH. Диосмин, который в меньшей степени влиял на NADP+-редуктазные активности, не в полной мере восстанавливал и активность ГП. Гесперидин, кверцетин и карсил не оказали влияния на определенные звенья регенерации восстановительных эквивалентов (ИЦДГ, или МДГ, или Г-6-ФДГ), и одновременно на ряд ферментов, обеспечивающих детоксикацию перекисных продуктов (СОД, каталаза, ГП и Г-S-TP). В целом, благодаря комплексному изучению всех основных звеньев системы АОЗ, можно видеть, что чем эффективнее восстанавливается звено АОС, обеспечивающее регенерацию GSH, тем эффективнее функционируют и ферменты 1-ой линии обороны, использующие его в качестве кофактора для детоксикации токсических продуктов (в.т.ч. перекисей). Это согласуется с данными работы [137], свидетельствующими о том, что в конечном итоге эффективное преодоление окислительного стресса, вероятно, определяется не самим содержанием GSH как такового, а активностью ферментов, принимающих участие в его регенерации, либо использующих GSH для процессов детоксикации, а также демонстрирует наличие взаимодействия как между различными звеньями и компонентами АОЗ, так между ними и флавоноидами, что показано и другими авторами [108, 114, 151, 371].

Таким образом, важный вклад в восстановление равновесия, а следовательноно, и ге-патозащитного действия, вносит, как антиоксидантная активность флавоноидов, так и повышение эффективности эндогенной АОЗ (особенно, вероятно, NAD Р+-ре д уктаз но го звена). Наиболее сильный антиоксидант кверцетин менее эффективно, чем флавицин восстанавливает активность ферментов АОС и коэффициент окислительного стресса, и обладает при этом менее выраженной гепатозащитной активностью. На основании этого можно сказать, что большее значение для защиты печени имеет не просто снижение и подавление ПОЛ, а восстановление той регуляции интенсивности свободнорадикального окисления и поддержание того равновесия в системе ПОЛ/АОС, которое существуют в норме. По мнению Макарова В.Г., Макаровой М.Н., 2004 [124], нет необходимости добиваться максимального антирадикального эффекта, учитывая и возможные прооксидантные эффекты и нарушение регуляции защитных механизмов. Чрезмерное снижение уровня АКМ может привести и приводит к блокированию целого ряда механизмов защитного характера. Наши исследования подтверждают точку зрения о том, что к применению антиоксидантов, в первую очередь, необходимо подходить с таких позиций, чтобы эти вещества способствовали бы более лёгкому и быстрому возврату биосистем в состояние про-/антиоксидантного равновесия [124].

Повышение активности ЫАОР+-редуктаз, возможно, обусловлено способностью фла-воноидов создавать в клетке резерв окисленных никотинамидных коферментов (NAD+; NADP+), что продемонстрировано в работах [глава 8] и о чем косвенно может свидетельствовать установленное в наших исследованиях снижение соотношения лактат/пируват, отражающее увеличение цитоплазматического соотношения NAD+/NADH. Это может проистекать, на наш взгляд, из природы химических свойств данных соединений, которые принимают участие в обратимых окислительно-восстановительных реакциях и формируют самостоятельные редокс-системы типа семихинон-хинон-гидрохинон [151], что доказано методом ЭПР [289], выступая в качестве как доноров, так и акцепторов водорода. Именно в силу про-тонофорных свойств флавоноидов, по мнению Спрыгина В.Г. и соавт. [174, 208, 209], возникает возможность формирования пула восстановленного глутатиона, что повышает мощность эндогенной АОС. Формирование самостоятельных редокс-систем, как считает Александрова А.Е., 2004 [2],определяет свойство флавоноидов влиять на транспорт электронов в дыхательной цепи митохондрий и их частичное разобщающее действие в отношении процесса окислительного фосфорилирования. Таковое действие, установленное и в отношении исследумых нами флавоноидов, которые повышали активность Mg2+-ATФaзы митохондрий, может быть одним из механизмов, снижающих продукцию ROS [197].

Активация ряда редокс-чувствительных факторов транскрипции, включая ARE, что продемонстрировано для ряда флавоноидов [282, 385, 511, 534, 535] и объясняет повышение содержания GSH в результате усиления транскрипции у-ГЦС, также может быть связана с формированием флавоноидами редокс-систем и их влиянием на сдвиг редокс-баланса в клетке, что модулирует сигнальные пути, управляющие экспрессией генов. При этом, как показано [535], индукция транскрипции не всегда связана с наиболее выраженной АОА флавоноидов. Таким образом, выявляется новая сторона в механизме действия флавоноидов: они оказывают стимулирующее влияние на физиологическую систему АОС не только потому, что, как экзогенные антиоксиданты, снижают потребление и «нагрузку» на эндогенные компоненты АОЗ, поддерживая и восстанавливая их активность [48, 124], но и вполне допустимо предположить, что это достигается через экспрессию генов, индукция которых происходит в ответ на окислительный или химический стресс [282, 385, 511,534, 535, 579].

Таким образом, исходя из полученных результатов и данных литературы, можно заключить, что механизм защитного действия флавоноидов против окислительного стресса, развивающегося при токсических поражениях печени, является многоплановым и многообразным и осуществляется на различных уровнях и структурах. Это и прямое антиоксидант-ное действие в силу антирадикальных и хелатирующих свойств данных соединений. Это и непрямая защита путём активирования эндогенной системы АОЗ и детоксикации, а также повышение неспецифической устойчивости путём улучшения энергопродукции, защиты митохондрий и БН-групп белков от окислительного повреждения. Такое опосредованное повышение активности естественных защитных систем может иметь немаловажное значение в ускорении возврата системы в состояние про-/антиоксидантного равновесия при действии повреждающих факторов. Следует подчеркнуть, что более значимым при этом, вероятно, является активирование эндогенной защитной системы и оптимизация ее работы, чем собственная АОА соединений.

Учитывая то обстоятельство, что поражения печени гепатотоксинами, судя по гисто-морфологической картине, сопровождались нарушением микроциркуляторного русла, а также то, что состояние микроциркуляции тесно связано с состоянием эндотелия, в повреждении которого немаловажное значение принадлежит окислительному стрессу, было изучено I эндотелийпротективное действие флавоноидов при моделировании дисфункции сосудистого эндотелия и их влияние на печеночный кровоток в условиях нормы.

На модели дисфункции эндотелия установлено, что у животных, получавших исследуемые флавоноиды в течение месяца в дозе 100 мг/кг, наблюдалось улучшение реакции сосудов на АЦХ, а также более выраженное снижение кровотока в ответ на введение Ь-ЫИА по сравнению с экспериментальной патологией. Кроме этого, у животных, получавших флавоноиды, выявлено увеличение по сравнению с контролем степени прироста кровотока (геспе-ридин>кверцетин>диосмин>флавицин) в ответ на многократное введение АЦХ, что позволяет сделать вывод об увеличении продукции N0 эндотелиальными клетками под влиянием флавоноидов.

Эндотелий протективное действие флавоноидов проявлялось и в том, что они увеличивали время тромбообразовапия, которое значительно снижалось у крыс с дисфункцией эндотелия, располагаясь по эффективности своего действия в следующем порядке кверце-тин>флавицин>диосмин>гесперидин.

Кроме того, флавоноиды на фоне эндотелиальной дисфункции оказывали корригирующее действие на вязкость крови, уменьшали индекс агрегации эритроцитов и тромбоцитов и увеличивали индекс дезагрегации тромбоцитов, устраняли нарушение механических свойств эритроцитов.

В опытах на наркотизированных крысах-самцах продемонстрировано улучшение печеночного кровотока при введении гесперидина и флавицина, а также показано, что данная реакция обусловлена их влиянием на эндотелий с активацией выработки N0.

Повышение содержания N0 выявлено и методом ЭПР в организме животных, получавших гесперидин (100 мг/кг, 5 дней). О повышении уровня N0 свидетельствовало увеличение компонентов сигнала парамагнитного аддукта NO-Fe2+-Mr7b в спектрах ЭПР мочи животных после применения гесперидина по сравнению с таковыми у интактных крыс.

В результате инъекции ССЦ в печени наблюдался значительный рост интенсивности

А + генерации радикалов N0, регистрируемой методом ЭПР с использованием Fe - ДЭТК2 в качестве ловушки N0, вероятнее всего, вследствие активации iNOS. Усиление экспрессии iNOS под действием ССЦ, возможно, связано с тем, что тетрахлорметан способен индуцировать ПОЛ и связанную с ним продукцию супероксидного анион-радикала (Ог' "), который является активатором синтеза N0 индуцибельной NO-синтетазной системой [68, 175, 210, 515]. Повышение содержания в печени N0 под действием ССЦ может вносить дополнительный вклад в развитие окислительного стресса и в проявление гепатотоксического действия ССЦ, поскольку N0 может функционировать и как ингибитор токсического действия О2 \ и как источник образования более опасных 0N00" радикалов [618].

Предварительное введение флавоноидов кверцетина и гесперидина перед инъекцией ССЦ значительно снизило амплитуды 3-х компонентов сигнала аддукта NO-Fe -ДЭТК2 в образцах печени.

У животных, которым вводили такие флавоноидные соединения, как диосмин и фла-вицин на фоне стимуляции продукции оксида азота ССЦ, выявить их влияние на процесс образования NO в печени крыс не удалось. В ЭПР спектрах образцов печени этих животных доминировал интенсивный синглентный сигнал, не связанный с образованием парамагнитных аддуктов МО-Ре2+-ДЭТК2. Снижение содержания NO в организме животных, которым вводили флавицин и диосмин, удалось установить при использовании в качестве ловушки Ре3+-МГД2 по подавлению соответствующих компонентов сигнала аддукта NO-Fe2+-MI7b в спектрах ЭПР мочи животных, получавших на фоне ССЦ флавицин и диосмин, по сравнению с контрольными животными (введение только ССЦ).

Подавление продукции NO флавоноидными соединениями, скорее всего, связано с их антиоксидантной активностью и способностью тормозить образование свободных радикалов. Кроме того, показано, что флавоноидные соединения уменьшают экспрессию iNOS в макрофагах, индуцированную липополисахаридами [304, 306, 360] через торможение связывання фактора транскрипции ОТ-кВ, который контролирует индукцию экспрессии генов ¡N08.

Таким образом, эндотелий протективное действие исследуемых флавоноидов, улучшение гемореологических свойств крови, повышение продукции N0 сосудистым эндотелием и интенсификация печеночного кровотока, а также подавление ими образование N0 в печени ¡N08 и предотвращение возможного цитотоксического действия оксида азота могут быть дополнительными факторами защиты печени от повреждения. Проведенные исследования показали, что в отношении повышения мощности системы синтеза N0 сосудистым эндотелием лидерами являются гесперидин и кверцетин, а в отношении антитромбической функции — флавицин и кверцетин.

В клинической практике препараты чаще используют на фоне уже сформировавшейся патологии. Поэтому представляло интерес изучить лечебное действие СЭ, содержащего флавицин, как наиболее эффективный гепаопротектор, но который можно получить более простым и доступным методом, чем индивидуальное вещество, при хронической патологии печени и оценить его влияние на пролиферацию соединительной ткани, являющуюся серьезным осложнением хронического процесса, приводящего к развитию фиброза и цирроза печени. Лечебное действие СЭ при хронической алкоголизации в дозе 300 мг/кг в сравнении с карсилом в дозе 100 мг/кг изучали через 7, 14 и 21 день их применения после 60-дневного введения 40% этанола и затем совместно с ним.

Было установлено, что в результате 60-дневного введения алкоголя наблюдалось падение эффективности системы АОЗ и нарушение про-/антиоксидантного равновесия с преобладанием прооксидантной составляющей, т.е. развитие окислительного стресса. При этом отмечался рост содержания ТБК-активных продуктов в сыворотке крови на 135%, в печени на 175% и повышение количества ДК в печени на 332%. Одновременно регистрировалось снижение в печени активности основных антиоксидантных ферментов: СОД - на 55%, ката-лазы - на 45%, ГП (общая активность) - на 47%, ГР - на 41% и Г-Э-ТР - на 48%, а также Г-6-ФДГ - на 88%, участвующей в обеспечении глутатионредуктазной реакции восстановительными эквивалентами. Кроме этого, отмечалось усиление анаэробиоза (повышалось соотношение лактат/пируват на 100%) и падение содержания АТФ (-52%), т.е. развивался энергодефицит, что, как известно, способствует дополнительной стимуляции свободно-радикального окисления и может вызвать необратимые изменения и гибель клетки.

У крыс после 60-дневной алкоголизации регистрировалось достоверное повышение в сыворотке крови активности АлАт (+134%) и ЩФ (+72%), содержания общего билирубина (+53%), показателя ТП - на 104%, увеличивалось содержание ТРГ в сыворотке крови (+132%) и в печени (+70%), снижалась активность ХЭ в сыворотке крови на 48%. Эти изменения свидетельствовали о развитии цитолиза и холестаза гепатоцитов, жировой дистрофии, снижении белково-синтетической функции печени, развитии воспаления в этом органе и активации мезенхимы. Такие показатели, как содержание ГАГ в сыворотке крови и ОП в печени, увеличивались на 15% и 35% соответственно, но достоверных отличий от нормы выявлено не было.

При дальнейшем приеме алкоголя наблюдалось повышение активности ферментов 1-ого звена АОС, таких как СОД, ГП и Г-Б-ТР, нейтрализующих свободные радикалы и пере-кисные продукты. В ответ на это, содержание С8Н в печени, который является кофактором ГП и Г-Б-ТР, резко падало, что служило, в свою очередь, сигналом для повышения активности ферментов, участвующих в его регенерации. Увеличивалась активность Г-б-ФДГ и ГР при одновременном, вероятно компенсаторном, снижением активности ИЦДГ. Когда содержание ОБН в печени восстанавливалось, активность этих ферментов возвращалась на уровень нормы.

Таким образом, был установлен на наш взгляд, важный факт, что после того, как в ходе 60-дневной алкоголизации в печени сформировалось состояние окислительного стресса с определенными патологическими сдвигами, происходило «включение» адаптационно-приспособительных механизмов, направленных на защиту против повреждающего фактора, что подтверждает участие АКМ в защите и адаптации живых организмов к агрессивным воздействиям окружающей среды.

Подобная защитная реакция развивалась при лечебном применении на фоне алкоголизации СЭ. Со стороны антирадикальных и антиперекисных ферментов, формирующих 1-ую линию обороны, она была значительно более усиленной и длительной: наблюдалась более выраженная активация СОД, ГП и Г-Б-ТР без падения их активности к окончанию срока наблюдения. Со стороны изменения активности ферментов, обеспечивающих восстановление ОБИ, выявлялись те же самые закономерности, что и в контроле (практически по всем позициям отсутствовали достоверные отличия по сравнению с соответствующими контрольными группами), но эти изменения были несколько менее выраженными, чем в контроле, что, возможно, отражает менее напряженную метаболическую ситуацию в клетке.

В то же время у животных, леченных карсилом, развивающаяся защитная реакция была несколько другой. Во-первых, совершенно отсутствовала активация Г-Б-ТР, важнейшего фермента детоксикации, во-вторых, наблюдалась менее выраженная активация ГП и ГР, активность которых затем падала и становилась ниже' нормы, в-третьих, активировалась не только Г-б-ФДГ, но ИЦДГ, что, в принципе, позволяло вернуть уровень ОБН до нормы, но затем активности данных ферментов достаточно резко снижались, что свидетельствовало о «срыве» в данной системе.

Таким образом, наши результаты подтверждают положение о том, что хроническая интоксикация является многофазным процессом, в ходе которого могут неоднократно активироваться защитные механизмы и неоднократно сменять друг друга фаза компенсированной патологии и декомпенсации [63]. Значительный интерес представляет, как на данном фоне «работают» вещества, призванные защитить от действия повреждающего фактора. В отношении СЭ видно, что данная субстанция способствовала усилению и более полной реализации тех защитных механизмов, которые «включались» в ответ на хроническое воздействие этанола. В результате наблюдалась полная нормализация интенсивности свободноради-кального ПОЛ. В то же время у крыс, потреблявших только этанол, хотя и регистрировались изменения, направленные на восстановление ПОЛ и даже отмечалось некоторое снижение количества продуктов ПОЛ, но все же их содержание продолжало превышать норму. На основании этого можно предположить, что сила развивающейся адаптационно-приспособительной реакции у этих животных была недостаточной для того, чтобы преодолеть окислительный стресс.

В ходе лечения карсилом восстановление интенсивности процесса ПОЛ происходило более медленно, чем это наблюдалось при лечении СЭ. Содержание ТБК-активных продуктов в печени через 7 и 14 дней оставалось еще достоверно выше нормы и нормализовалось лишь через 21 день. Следовательно, те механизмы, которые направлены на преодоление окислительного стресса при действии карсила, оказались не столь эффективными, как при действии СЭ. При этом наблюдалось истощение звена АОС, поставляющего восстановительные эквиваленты для глутатионовой системы.

СЭ и карсил в ходе лечебного применения способствовали восстановлению содержания АТФ (устраняли энергодефицит), вероятнее всего, за счет оптимизации функций митохондрий, препятствуя их повреждению свободно-радикальным ПОЛ, в результате чего устранялся сдвиг энергообмена в сторону анаэробиоза и ацидоз.

Но у крыс, леченных сухим экстрактом, наблюдалось более выраженное снижение коэффициента окислительного стресса (1,73), чем у животных, леченных карсилом (7,27), что свидетельствовало о более полном восстановлении про-антиоксидантного равновесия у этих животных и возвращении организма в состояние гомеостаза.

На гистоморфологической картине печени контрольных животных выявлялись определенные патологические изменения, наиболее выраженные на 7-ой и 14-ый день дополнительного поения, но на 21 день эти изменения оказывались минимальными. Наличие восстановительных процессов нашло отражение и в изменении биохимических показателей состояния печени (снижение активности АлАт, некоторое снижение содержания ТРГ), но большинство показателей все же оставалось достоверно более высоким, чем в норме и, кроме того, в некоторой степени нарастали явления фиброгенеза - увеличивалось содержание в печени ОП и в сыворотке крови - ГАГ. В отношении восстановления биохимических показателей лечебное действие СЭ оказалось более эффективным, чем карсила. При применении СЭ тормозилось образование элементов соединительной ткани: содержание ОП во все сроки лечения достоверно не отличалось от нормы, а содержание ГАГ в крови достоверно снижалось на 26% по сравнению с соответствующим контролем. Уменьшались и патогистологиче-ские изменения в печени: отмечалось уменьшение клеточной инфильтрации, фиброзирова-ние портальных трактов, которое выявлялось в контроле на 14-ые сутки дополнительного введения этанола, отсутствовали признаки дистрофических изменений, и сохранялось лишь умеренное расширение портальных вен и синусоидов.

Полученные результаты позволяют предположить, что в механизме гепатозащитного действия СЭ при хронической алкоголизации большое значение имеет усиление эндогенных компонентов клеточной защиты, участвующих в поддержании гомеостаза, в частности активация МАБРН-ОБН-зависимой системы печени, что способствует преодолению окислительного стресса и не сопровождается последующим истощением данной системы.

Влияние СЭ на процесс фиброгенеза изучено также при хроническом ССЦ-гепатите, при котором было установлено четкое повышение количества ОП в печени по сравнению с нормальными значениями на 82% и ГАГ в крови - на 63%. На гистоморфологической картине обнаруживалось замещение поврежденных гепатоцитов соединительнотканными тяжами.

В течение трех недель после воспроизведения модели хронического гепатита у нелеченых животных в печени достоверно повышался уровень ОП по сравнению с исходным контролем на 14 и 21 день на 48% и 63% соответственно, а содержание в сыворотке крови ГАГ на 39% и 44% соответственно. Лечение хронического гепатита карсилом и сухим экстрактом препятствовало накоплению компонентов соединительной ткани на протяжении всего срока наблюдения. Но у животных, получавших карсил, к концу лечения на 21 сутки сохранялось повышенное количество ОП в гомогенате печени (+25%).

Через два месяца после лечения сухим экстрактом сохранялся стойкий лечебный эффект, полученный после окончания терапии — все основные биохимические показатели, характеризующие процессы цитолиза, холестаза, жирового перерождения, находились на уровне нормы, а также тормозился процесс фиброгенеза. В группе животных, получавших карсил, сохранялись повышенными концентрация конъюгированного билирубина и активность ЩФ в сыворотке крови.

Довольно часто гепатопротекторная активность флавоноидов сочетается с желчегонным эффектом, что вносит определенный вклад в защиту печени. Нами установлено, что в условиях острого СС14-гепатоза СЭ оказал нормализующие, более выраженное, чем у карсила, влияние на процессы образования и выделения желчи: увеличился объем желчи, произошла полная нормализация содержания в желчи ЖК и значения холато-холестеринового коэффициента. У животных, леченных карсилом, концентрации ЖК не достигала уровня здоровых животных. СЭ обладал способностью стимулировать желчеобразовательную функции печени и у здоровых животных. При этом, в отличие от фламина, который усиливал лишь сам процесс выделения желчи, СЭ улучшал и литогенные свойства желчи. Нормализация образования и транспорта желчи под влиянием СЭ может вносить существенный вклад в предотвращении развития внутрипеченочного холестаза, что имеет большое значение для проявления, в целом, гепатозащитного действия СЭ.

Таким образом, проведенные исследования показали, что исследуемые флавоноиды и СЭ из горошка обрубленного обладают гепатозащитным действием при острых и хронических токсических поражениях печени. Они обладают не только прямым антиоксидантным действием, но и регулируют индукцию антиоксидантных ферментов, обмен энергии, состояние клеточных мембран, ферментов детоксикации, кровоснабжение печени, устраняют эндотелиальную дисфункцию, модулируют продукцию N0.

Гесперидин, диосмин, флавицин и кверцетин отличаются по эффективности влияния на восстановление показателей определенных патологических синдромов, что позволяет разработать рекомендации по дифференцированному применению флавоноидов, как гепато-протекторов, при определенном характере течения заболевания печени. Учитывая селективную токсичность ряда лекарств по отношению к эндотелиальным клеткам синусоидов печени и наиболее выраженное положительное действие гесперидина на эндотелиальную функцию и печеночный кровоток, данное соединение может быть рекомендовано для коррекции сосудистых поражений печени, а также для устранения повышенного микрососудистого тонуса при циррозе, что связано с ухудшением продукции N0 еКОБ. Более эффективное нормализующее влияние диосмина на холестаз может быть основанием для его рекомендации при заболеваниях печени, сопровождающихся нарушением желчеобразования. Кверцетин может быть рекомендован при поражениях печени, сопровождающихся выраженным цитолизом и мезенхимальным воспалением. Флавицин, обладающий наибольшей гепатопротек-торной активностью при поражениях печени ССЦ и алкоголем, связанной с воздействием на основные патогенетические звенья, может быть рекомендован для разработки на его основе лекарственного средства для лечения и профилактики заболеваний печени при острых и хронических отравлениях гепатотоксическими ядами. СЭ из V. аЬЬгеу1а1а, оказывающий выраженное гепатозащитное действие при острых и хронических токсических поражениях печени, превосходящее действие карсила, также может быть использован для создания нового гепатопротекторного препарата.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Доркина, Елена Григорьевна

1. Алкогольная болезнь печени. 4.1: Алкогольный гепатоз и алкогольный гепатит: (клиника, диагностика, принципы терапии): метод, рек. / В.Б. Гриневич и др..-Петрозаводск: Интелтек.- 2004.- 64 с.

2. Андреева O.A. Фенольные соединения некоторых видов рода Вика и их встречный синтез: дисс. . канд. химич. наук: 02. 00.03 / Андреева Ольга Андреевна. Ташкент, 1986. -168 с.

3. Антиоксидантное действие дигидрокверцетина при тетрахлорметановом гепатите у крыс / Ю.О. Теселкин и др. // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии. 1999.- №3.- С.44-47.

4. Антиоксидантные свойства простагландина Ег при алкогольном стеатозе печени / А.Н. Мальцев и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2001.- Т.64, №3.- С.61-63.

5. Антитромбогенная и антитромбоцитарная активность экстракта из древесины маакии амурской / A.M. Плотникова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 2009.-Т.147, N.2.- С.164-167.

6. Антицитолитическая активность убихинона-10 при поражении печени хлорированными углеводородами / Л.Ф. Виноградова и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 1994.- Т. 57, №6.- С.54-57.

7. Бабак, О.Я. Окислительный стресс, воспаление и эндотелиальная дисфункция-ключевые звенья патогенеза сердечно-сосудистой патологии при прогрессирующих заболеваниях почек /О.Я. Бабак, И.И. Топчий // Укр. терапевт, журн.- 2004.- №4.- С.10-17

8. Батаков Е.А. Влияние масла растороиши и легалона на перекисное окисление липидов и антиоксидантные системы печени крыс при отравлении четыреххлористым углеродом /Е.А. Батаков // Эксперим. и клинич. фармакология. 2001.- Т.64, №4.- С.53-55.

9. Брюне, Б. Апоптическая гибель клеток и оксид азота: механизмы активации и антагонистические сигнальные пути / Б. Брюне, К. Сандау, А.фон Киетен // Биохимия. 1998. -Т.63, вып.7. - С.966-975.

10. Буеверов, А.О. Алкогольная болезнь печени / А.О. Буеверов // Consilium medicum. Приложение.- 2002.- С.23-26.

11. Буеверов, А.О. Место гепатопротекторов в лечении заболеваний печени / А.О. Буеверов // Болезни органов пищеварения. 2001. - №1. - С. 16-18.

12. Буеверов, А.О. Оксидативный стресс и его роль в повреждении печени / А.О. Буеверов // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии и колопроктологии.- 2002.- №4.- С.21-25.

13. Ванин, А.Ф. Оксид азота в биомедицинских исследованиях / А.Ф. Ванин // Вестн. Рос. акад. мед наук. 2000. - № 4. - С.3-5.

14. Венгеровский, А.И. Доклиническое изучение гепатозащитных средств / А.И. Венгеровский, И.В. Маркова, А.С. Саратиков // Ведомости Фармакол. ком.- 1999.- №2.- С.9-12.

15. Венгеровский, А.И. Улучшение биоэнергетики печени гепатопротекторами при экспериментальном ингибировании Р-окисления жирных кислот / А.И. Венгеровский, В.А. Ха-занов, М.С. Тимофеев // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2007.- №4.- С.31-34.

16. Венгеровский, А.И. Фармакологические подходы к регуляции функций печени / А.И. Венгеровский // Бюл. сибир. мед.- 2002.- №1.- С.25-29.

17. Владимиров, Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты / Ю.А. Владимиров // Вестн. Рос. акад. мед. наук.- М.: Медицина, 1998.-Вып. 7.- С.43-51.

18. Влияние водных извлечений из некоторых гепатотропных лекарственных растений на процессы свободно-радикального окисления / М.А. Рыжикова и др. // Эксперим. и клинич. фармакология,- 1999.- Т. 62, №2.- С.36-38.

19. Влияние кардиопротектора мексикора на окислительный стресс при остром инфаркте миокарда /А.П. Голиков и др. // Кардиология. 2005. - Т.45, №7. - С.22-26.

20. Влияние легалона и лохеина на эффекты преднизолона при экспериментальном токсическом гепатите / А.И. Венгеровский и др. // Хим.-фармац. журн.- 1998. №9.- С. 12-14.

21. Влияние лекарственного растительного сбора «диг-да-ши-тан» на течение тетрацик-линового гепатита у белых крыс / Ж.Б. Дашинамжилов и др. // Раст. ресурсы.- 2000.- Т. 36, №3.- С.78-83.

22. Влияние некоторых флавонов на энергетический метаболизм митохондрий (сообщение 2) / Р.П. Рустамова и др. // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2006.- №2.- С. 16-20.

23. Влияние никотинамида, метионина и а-токоферола на активность коньюгирующей и монооксигеназной систем печени и перекисное окисление липидов при гепатозогепатите у крыс / Легонькова и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 1997.- Т. 60, №2.- С.68-71.

24. Влияние озона на состояние печени при экспериментальном хроническом гепатите / К.Н. Конторщикова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 1996.- Т. 122, № 8.-С.238-240.

25. Влияние перфторана на течение экспериментального гепатита / А.Ю. Ковеленов и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2001.- Т. 64, №3,- С.41-44.

26. Влияние стимуляции и депрессии макрофагов на развитие острого токсического гепатита у крыс, вызванного парацетамолом /О.А. Леквина и др. // Эксперим. и клинич. фармакология,- 2003.- Т. 66, №1.- С.57-59.

27. Влияние убихинона Qio и витаминов антиоксидантов на свободнорадикальное окисление фосфолипидов биомембран печени крыс / А.К. Тихазе и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 2005.- Т. 140, №1.- С.146-149.

28. Влияние убихинона-10 на энергетический обмен и ПОЛ в миокарде крыс при ишемии / В.Н. Крылов и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 2000.- Т. 130, №7.- С.35-38.

29. Влияние фосфатидилхолинхолестериновых липосом на рост некоторых бактериальных культур / Л.П. Мельянцева и др. // Журн. микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 1994. - №2. - С. 14 - 17.

30. Влияние экстракта левзеи сафлоровидной на реологические свойства крови у крыс с артериальной гипертензией / М.Б. Плотников и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.-2001.- Т. 646, №6.- С.45-47.

31. Влияние энтеросорбции на ферментный спектр печени при экспериментальном токсическом гепатите / И.В.Косникова и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия.-1997,-№4. С.20-22.

32. Влияние эссенциале и рибоксина на иммуномодулирующие свойства эритроцитов при токсическом поражении печени / Б.С. Утешев и др. // Эксперим. и клинич. фармакология -1997.- Т. 60, №4.- С.53-56.

33. Внутрипечёночный холестаз / Э.П. Яковенко и др. //Практикующий врач.-1998. -Т. 2, №13.- С.20-23.

34. Выделение диосмина из растений рода вика и иссопа лекарственного и его влияние на свертывание крови / М.Н. Ивашев и др. // Хим.-фармац. жури.- 1995.- №9.- С.39-41.

35. Выделение, химический состав и гиполипидемическая активность суммы флавоноидов из Thermopsis altherniflora // З.А. Хушбактова и др. // Хим.-фармац. журн.-2001,- Т. 35, №3.- С.35-38.

36. Выделение, химический состав, гепатопротекторная и желчесекреторная активность суммарных флавоноидных препаратов из Thermopsis dolichocarpa и Vexibia alopecuroides / В.Н. Сыров и др.. // Хим-фармац. журн.- 2001.- Т. 35, №1.- С.29-32.

37. Гемореологические свойства экстрактов из некоторых растений, содержащих флаво-ноиды / М.Б. Плотников и др. // Раст. ресурсы.- 1998.- Вып. 1.- С.48-52.

38. Гепатозащитное действие гранул сухого экстракта горечавника бородатого / С.М. Николаев и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2001.- Т. 64, №1.- С.49-52.

39. Гепатозащитное действие лекарственного растительного сбора «диг-да-ши-тан» при повреждение печени этанолом / Ж.Б. Дашинамжилов и др. // Раст. ресурсы.- 2007.- Т. 43, Вып. 1.- С. 130-135.

40. Гепатозащитное действие фитосредства норбу-дун-тан при экспериментальном алкогольном гепатите / Ж.Б. Дашинамжилов и др. // Практическая фитотерапия. -2004.-№2,- С.8-11.

41. Гепатозащитное действие флавоноидов вики изменчивой и вики обрубленной / Э.Т. Оганесян и др. // Фармация.- 2004,- № 4.- С.41-42.

42. Гепатозащитное действие цветков бархатцев/ Е.Г. Доркина и др. // Фармация.- 2004.-№2.- С.33-35.

43. Гепатопротективные свойства липроксола / А. С.Саратиков и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2002.- Т. 65, №2.- С.31-33.

44. Гепатопротективные свойства лохеина (экстракта Salsola collina Pall.) / А. С.Саратиков и др. //Раст. ресурсы.- 2004.- Вып. 2.- С. 133-138.

45. Гепатопротекторное действие наркофита при алкогольном гепатите / Ж.Б. Дашинамжилов и др. // Фармация.- 2004.- №6.- С.36-38.

46. Гепатопротекторное и иммуномодулирующее действие филлохинона при токсическом поражении печени / E.H. Конопля и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.-1997.- Т. 60, № 3.- С.75-77.

47. Гепатопротекторные свойства водного экстракта пятилистника кустарникового при хроническом гепатите / М.А. Колпаков и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.-2001.- Т. 131, №5.- С.554-556.

48. Гепатопротекторные свойства иридоидных гликозидов при остром токсическом поражении печени гелиотрином у мышей / В.Н. Сыров и др. // Хим.-фармац. журн.- 1999.Т. 33, №8.- С. 10-11.

49. Гепатопротекторные свойства полифенольных комплексов из древесины и клеточной культуры маакии амурской / A.C. Саратиков и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.-2005,- Т. 68, №2.- С.51-54.

50. Гепатопротекторные свойства эриксина при острых лекарственных гепатитах / Ш. С.Асатова и др. // Хим.-фармац. журн.- 2003.- Т. 37, №2,- С. 13-15.

51. Гепатопротекторы препятствуют токсическому действию циклофосфана на печень крыс при ССЦ-гепатите / A.B. Ратькин и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2005.Т. 68, №2,- С.47-50.

52. Гипотензивная активность флавоноидов вики Баланзы и люпина многолетнего / O.A. Андреева и др. // Хим.- фармац. журн.- 1992.- Т. 126, №7-8.- С.62-64.

53. Голиков, С.Н. Общие механизмы токсического действия / С.Н. Голиков, И.В. Саноцкий, JI.A. Тиунов.- Л.: Медицина, 1986.-280 С.

54. Гордиенко, А.Д. Гепатозащитное действие липофена нового комбинированного фосфолипидного препарата природного происхождения / А.Д. Гордиенко// Эксперим. и клинич. фармакология - 2001.- Т. 64, №3.- С.45-47.

55. Гордиенко, А.Д. Фармокинетика липофена нового комбинированного фосфолипидного гепатопротектора природного происхождения / А.Д. Гордиенко, А.И. Божков // Эксперим. и клинич. фармакология - 2001.- Т. 64, №1.- С.66-67.

56. Данилович, Ю.В. Взаимосвязь образования N0 и Н2О2 и их роль в регуляции ионного гомеостаза клеток / Ю.В. Данилович // Укр. 6íoxím. журн. -2001. Т.73, № 3. - С. 5-17.

57. Диквертин эффективный ингибитор агрегации тромбоцитов флавоноидной природы / A.A. Кубатиев и др. // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.-1999.- №3.- С.47-51.

58. Дроговоз, С.М. Современные подходы к терапии заболеваний гепатобилиарной системы / С.М. Дроговоз, Е.Г. Щекина, А. Ушакова // Провизор.- 2008.- №8.- С.28-31.

59. Дубинина Е.Е. Активные формы кислорода и их роль в развитии оксидативного стресса / Е.Е. Дубинина // Фундаментальные и прикладные аспекты современной биохимии: сб. науч. тр. СПб., 1998. -Т.2. - С. 386-401.

60. Желчегонные и гепатопротекторные свойства густого экстракта из плодов Rosa Laxa (Rosaceae) / З.К. Шаушеков и др. // Раст. ресурсы- 2005,- №3.- С.117-125.

61. Зайцев, В.Г. Методологические аспекты исследований свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы организма / В.Г. Зайцев, В.И. Закревский // Вест. Волгоградской мед. академии.- 1998.- Вып.4.- С.49-53.

62. Зайцев, В.Г. Связь между химическим строением и мишенью действия как основа классификации антиоксидантов прямого действия/ В.Г. Зайцев, О.В. Островский, В.И. За-кревский// Эксперим. и клинич. фармакология.- 2003.- Т. 66, №4.- С.66-70.

63. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений: учеб. пособие для биол. специальностей ун-тов / М.Н. Запрометов.- М.: Высш. шк., 1974.- 214 с.

64. Зарубина, И.В. Влияние беметила на глутатионовую систему в печени крыс при острой гипоксии / И.В. Зарубина, О.П. Миронова // Эксперим. и клинич. фармакология.-2002.-Т. 65, №3,- С.28-30.

65. Защитное действие комбинации эссенциале с диэтилникотинамидом на монооксиге-назы и глюкуронил-, глутатионтрансферазы печени крыс при тетрахлорметановом поражении / М.И. Бушма и др. // Эксперим. и клинич. фармакология,- 1994.- Т. 57, №4.- С.62-63.

66. Зезеров, Е.Г. Биохимические механизмы острого и хронического действия этанола на организм человека / Е.Г. Зезеров // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 1998.- №2,- С.47-55.

67. Земцова, Г.Н. Флавоноиды как лекарственные препараты / Г.Н. Земцова, В.А. Бандю-кова// Фармация,- 1982.- №3.- С.68-70.

68. Зенков, Н.К. Окислительный стресс (Биохимические и патофизиологические аспекты) / Н.К. Зенков, В.З. Ланкин, Е.Б. Меньщикова,- М.: Медицина, 2001.-217 с.

69. Ивашкин, В.Т. Все ли мы знаем о лечебных возможностях антиоксидантов? / В.Т. Ивашкин, Н.Ю. Ивашкина, Ю.О. Шульпекова // Русск. мед. журн.- 2000,- Т. 8, № 4,- С.105-108.

70. Изменение морфофункционального состояния печени крыс при острой интоксикации тетрахлорметаном и их коррекция антигипоксантами, антиоксидантами и актопротекторами / Т. К. Дубовая и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 1996.- Т. 59, №4.- С.51-54.

71. Измеров, Н.Ф. Параметры токсикометрии промышленных ядов при однократном воздействии: справочник / Н.Ф. Измеров, И.В.Саноцкий, К.К. Сидоров. М.: Медицина, 1977.196 С.

72. Изучение гепатозащитного действия суммарного флавоноидного комплекса из цветков Tagetes patula / Е.Г. Доркина и др. //Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): материалы.- Пятигорск, 2002.- С. 159-161.

73. Ильченко, Л.Ю. Гепатопротекторы при хронических заболеваниях печени /Л.Ю. Ильченко, Т. И. Карлович // Фарматека,- 2007.- №8/9.- С.54-58.

74. Ильченко, Л.Ю. Повреждение клеточных мембран при алкогольном и неалкогольном стеатогепатитах и их коррекция / Л.Ю. Ильченко, Е.В. Винницкая // Эксперим. и клинич. га-строэнтерол.- 2002.- №1.- С.64-65.

75. Ильченко, Л.Ю. Принципы лечения неалкогольного и алкогольного стеатогепатита /Л.Ю. Ильченко // Фарматека.- 2005.- №14.- С.21-24.

76. Индекс антиокислительной активности биологического материала / В.Б. Мартынюк и др. // Лаб. дело,-1991.- №3.- С. 19-22.

77. Иноятов, Ф.Ш. Влияние перфторана на параметры биохимической детоксикации у крыс с острым токсическим поражением печени / Ф.Ш. Иноятов // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2000.- Т. 63, №2,- С.67-70.

78. Ипатова, О.М. Фосфоглив: механизм действия и применение в клинике / О.М. Ипато-ва.- М.: ГУ НИИ БМХ РАМН, 2005.-318 с.

79. Исследование терапевтических свойств нового производного таурина при хронической патологии печени / Л.К. Хныченко и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия,-2002.- №1.- С.6-8.

80. Калинин, A.B. Алкогольная болезнь печени / A.B. Калинин // Фарматека.- 2005.- №1.-С.48-54.

81. Калянова, H.A. Особенности нарушения процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы при острых отравлениях психотропными, снотворными препаратами / H.A. Калянова // Токсикол. вестн.- 2002.- №6.- С.18-22.

82. Каримов, Х.Я. Динамическая вязкость крови и микроциркуляция печени при аллокса-новом диабете в сочетании с токсическим гепатитом / Х.Я. Каримов, Б.У. Ирискулов, Х.А. Аскаров // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 1996.- Т. 122, №1.- С.20-22.

83. Карнозин и антиоксиданты природного происхождения как средства профилактики острого посленагрузочного окислительного стресса / Е.А. Рожкова и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2007.- Т. 70, №5.- С.44-46.

84. Катикова, О.Ю. Влияние мексидола на состояние гомеостаза и перекисное окисление липидов при интоксикации парацетамолом / О.Ю. Катикова // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2002.- Т. 65, №6.- С.53-56.

85. Катикова, О.Ю. Гепатопротекторное действие препаратов растительного происхождения / О.Ю. Катикова, Я.В. Костин, В.С.Тишкин // Эксперим. и клинич. фармакология,- 2002.Т. 65, №1.- С.41-43.

86. Катикова, О.Ю. Эффективность галстены при повреждении печени противотуберкулезными средствами / О.Ю. Катикова, Я.В. Костин // Эксперим. и клинич. фармакология.-2002.- Т. 65, №2.- С.64-66.

87. Кислородотранспортная функция крови и прооксидантно-антиоксидантное состояние при реперфузии печени / В.В Зинчук и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия.-2002.- №4,- С.8-13.

88. Клиническая биохимия / под ред. В.А.Ткачука. М.: ГЕОТАР-МЕД, 2002. - 360 с.

89. Колб, В.Г. Справочник по клинической химии / В.Г. Колб, В. С.Камышников.- Минск : Беларусь, 1982,-336 С.

90. Колганова, К.А. Применение гепатопротекторов в клинической практике / К.А. Колганова.- Электрон, дан. (1 файл).- Режим доступа: http://www.rmj.rn/articles 5954.htm.-Загл. с экрана.

91. Комплексное исследование токсического действия циклоплатама на почки и печень / Н.В. Любимова и др. // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2000.- №3.- С.38-44.

92. Коновалова, Г.Г. Антиоксидантная активность парафармацевтиков, включающих природные ингибиторы свободнорадикальных процессов / Г.Г. Коновалова, А.К. Тихазе, В.З. Ланкин // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 2000,- Т. 130, №7.- С.56-58.

93. Коррекция ацетилцистенном нарушений окислительных процессов при токсическом поражении печени /Я.И. Гонский и др. // Эксперим. и клинич. фармакология,- 1995.- Т.58, №6,- С.64-66.

94. Коррелятивные связи между активностью супероксиддисмутазы, каталазы и глутатионпероксидазы / Х.К. Мурадян и др. // Укр. биохим. журн.- 2003.-Т.75, №1-С.33-37.

95. Кудрин, A.B. Микроэлементы и оксид азота полифункциональные лиганды / A.B. Кудрин // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2000,- №1.- С.3-5.

96. Куркин В.А. Расторопша пятнистая источник лекарственных средств (обзор) / В.А. Куркин // Хим.-фармац. журн.- 2003.- Т.37, №4.- С.27-41.

97. Кушнерова, Н.Ф. Влияние комплексного полифенольного препарата каприм на биохимические показатели печени крыс в хроническом эксперименте / Н.Ф. Кушнерова, В. Г. Спрыгин //Раст. ресурсы.- 2001.- Вып.2,- С.62-69.

98. Панкин, В.З. Роль антиоксидантных ферментов и антиоксиданта пробукола в антирадикальной защите р-клеток поджелудочной железы при аллоксановом диабете / В.З. Ланкин и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 2004.- Т. 137, N.I.- С.27-30.

99. Лемешко, В.В. Перекисное окисление липидов в постъядерной и микросомальной фракциях гомогенатов печени крыс при старении организма / В.В. Лемешко, Г.А. Калиман, Ю.В. Никитченко // Биохимия.- 1981.-Т.46, №4.- С.620-627.

100. Лемешко, В.В. Ферменты антиоксидантной системы печени крыс при старении / В.В. Лемешко, Ю.В. Никитченко, П.А. Калиман // Укр. биохим. журн.- 1982.- Т.55, №5,- С.523-528.

101. Литвинчук, М.Д. Точный и быстрый метод оценки активности желчегонных средст в на крысах / М.Д. Литвинчук, З.И. Новосилец // Бюл. эксперим. биологии и медицины,- 1980.-№6.- С.750 752.

102. Лукманова, К.А. Коррекция действия гепатотоксинов фитопрепаратом из люцерны /К.А. Лукманова, Р.Ф. Шангареева // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2001.- Т.64, №5.-С.53-55.

103. Лукьянова, Л.Д. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции / Л.Д. Лукьянова// Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1997.- Т. 124, №9.- С.244-254.

104. Маев, И.В. Заболевания желчевыводящих путей и печени: лечение препаратом гепа-бене / И.В. Маев, Е.Д. Саечникова // Фарматека.- 2004.- №5.- С.28-31.

105. Маев, И.В. Хронический гепатит и современные методы его лечения / И.В. Маев, А.А. Самсонов, И.Н. Никушкина// Фарматека.- 2005.- №7.- С. 15-22.

106. Маевская, М.В. Алкогольная болезнь печени / М.В. Маевская// Клинич. перспективы в гастроэнтерологии, гепатологии.- 2001.- №1.- С.4-8.

107. Макарова, М.Н. Антирадикальная активность флавоноидов и их комбинация с другими антиоксидантами / М.Н. Макарова, В.Г. Макаров, И.Г. Зенкевич // Фармация.- 2004, №2.-С.30-32.

108. Макеева, A.B. Изменение активности глутатионовой системы и некоторых NADPH-генерирующих ферментов под влиянием тиоктовой кислоты при ишемии миокарда у крыс /

109. A.B. Макеева, Т. Н. Попова, В.Г. Артюхов // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2007.-№3,- С.54-56.

110. Манойлов, С.Е. К вопросу о механизме окисления сукцината в печени белых крыс / С.Е. Манойлов, Н.В. Седых // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 1996.- Т. 121, №5.-С.524-525.

111. Марков, Х.М. Оксидативный стресс и дисфункция эндотелия / Х.М. Марков // Патол. физиология и эксперим. терапия.- 2005.- №4,- С.5-9.

112. Машковский, М.Д. Лекарственные средства. / М.Д. Машковский.- 15-е изд., перераб., испр. и доп.- М.: Новая Волна, 2005.- 1200 с.

113. Меркулов, Г.А. Курс патологогистологической техники / Г.А. Меркулов.- Л.: Медгиз, 1969.-424 с.

114. Метод определения активности каталазы /М.А. Королюк и др. // Лаб. дело.- 1988.-№1.- С.16-19.

115. Метод определения субклеточной генерации супероксиданиона у здоровых животных при токсическом повреждении печени / Г.Н. Близнецова и др. // Вестн. ВГУ. Сер.: Химия. Биология. Фармация,- 2004.- №2.- С. 108-111.

116. Методы биохимических исследований / под ред. М.И. Прохоровой.- Л.: Изд-во Ленинград, ун-та, 1982,- 272 С.

117. Методы исследований в профпатологии (биохимические) / под ред. О.Г. Архиповой.-М.: Медицина, 1988,- 208 С.

118. Методы ТЭС-терапии и ВЛОК в лечении хронических диффузных заболеваний печени / A.B. Тумаренко и др..- Электрон, дан.- 1 электрон, опт. диск (CD-ROM)-(Электронная книга).- Загл. с экрана.

119. Механизмы гепатотоксического действия противоопухолевого препарата вепезида / Т.

120. B. Ветошкина и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 1998.- Т. 61, №1.- С.54-56.

121. Мещинен, И.Ф. Влияние этония на состояние глутатионовой системы печени при токсическом гепатите./ И.Ф. Мещинен// Фармакология и токсикология. 1989.- №3.- С.80-82.

122. Моисеев С. В. Хроническая венозная недостаточность эффективны ли венотропные средства?/ C.B. Моисеев // Клинич. фармакология и терапия. - 1998. - №7. - С. 75-79.

123. Моисеев, C.B. Лекарственная гепатотоксичность / C.B. Моисеев // Клинич. фармакология и терапия.- 2005.- Вып.14, №1,- С.10-14.

124. Моргунова, Т. В. Влияние лекарственных средств на свободно-радикальное окисление / Т. В. Моргунова, Д.Н. Лазарева // Эксперим. и клинич, фармакология.- 2000.- Т.бЗ, №1.-С.71-75.

125. Мурашов, Б.Ф. Содержание гликозаминогликанов сыворотки крови при вирусном гепатите / Б.Ф. Мурашов, М.А. Осадчук, В.М. Капустин// Лаб. дело.- 1986.- №12.- С.715-717.

126. Нагоев, Б. С. Показатели ПОЛ и свободно-радикального окисления у больных острыми вирусными гепатитами / Б.С.Нагоев, М.Т. Абидов, М.Р. Иванова // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 2002. Т. 134, №12.- С.645-646.

127. Недогода В.В. Диагностика и лечение хронических гепатитов и циррозов печени электронный ресурс.- Режим доступа: http://www/volgadmin.ru/vorma/archive/7/7.htm.- Загл. с экрана.

128. Никитин, И.Г. Гепатопротекторы: мифы и реальные возможности /И.Г. Никитин // Фарматека. 2007. - № 13. - С. 14 - 18.

129. Новиков, В.Е. Возможности фармакологической протекции функций печени / В.Е. Новиков, Е.И. Климкина // Вестн. Смоленской медицинской академии.- 2005.- №3,- С. 100116.

130. Новиков, К.Н. Роль активных форм кислорода в биологических системах при воздействии факторов окружающей среды: автореф. дисс. . д-ра биол. наук: 03.00.16;03.00.02./ Новиков Кирилл Николаевич.- М., 2004.- 45 С.

131. О влиянии биологически активных веществ на антиоксидантную активность фитопрепаратов / Е.И. Шкарина и др. // Хим.-фармац. журн.- 2001.- Т. 35, №6.- С.40-47.

132. О возможности повышения устойчивости организма к тетрахлорметану под влиянием нейтрального анолита/ А.Р. Гутникова и др. // Токсикол. вестн.- 2005.- №1.- С.32-35.

133. Окислительный стресс при острых отравлениях веществами прижигающего действия / М.В.Белова и др.// Токсикол. вестн.- 2007.- №6.- С.33-36.

134. Окислительный стресс у больных первичной лёгочной гипертензией / Н. Л. Иродова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 2002.- Т. 133, №6.- С.668-671.

135. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты / Е.Б. Меньшикова и др..-М.: Слово, 2006.- 556 С.

136. Оковитый, C.B. Клиническая фармакология антиоксидантов / C.B. Оковитый // Фарминдекс Практик.-2003.- № 5.- С.85-111.

137. Оковитый, C.B. Клиническая фармакология антигипоксантов (часть I) / C.B. Оковитый // Фарминдекс Практик.- 2004.- №6.- С.30-39.

138. Оковитый, C.B. Клиническая фармакология гепатопротекторов / C.B. Оковитый, С.Н. Шуленин. Спб.: Б.и., 2006. - 80 с.

139. Оковитый, C.B. Клиническая фармакология гепатопротекторов Электронный ресурс.: статья в журнале / Оковитый C.B.- Электрон, дан.- М.: Фарминдекс Практик.-Вып.З, 2002.- 1 электрон, опт. диск (CD-ROM).- Загл. с экрана.

140. Определение содержания желчных кислот и холестерина в желчи / В.П. Мирошниченко и др. // Лаб. дело.- 1978.- №3.- С. 149-153.

141. Особенности окислительного стресса в остром периоде химической болезни / М.В. Белова и др. // Токсикол. вестн.- 2007.- №2.- С. 12-16.

142. Оценка антиокислительной активности плазмы крови с применением желточных липопротеидов / Г.И. Клебанов и др. // Лаб. дело.- 1988.- №5.- С.59-62.

143. Оценка антиоксидантной и антитоксической эффективности природного флавоноида дигидрокверцетина / Л.В. Кравченко и др. // Токсикол. вестн,- 2005.- №1.- С. 14-20.

144. Пауков, B.C. Пато- и морфогенез алкогольной болезни / B.C. Пауков // Бюл. эксперим. биологии и медицины,- 1996.- Т. 122.- С.604-610.

145. Перекисное окисление липидов у больных с ожоговой травмой, осложненной кровотечением электронный ресурс. // Комбустиология. 1999, №1.- Режим доступа: http://www/burn.ru/all /number /show/id=3473.- Загл. с экрана.

146. Подопригорова, В.Г. Оксидативно-антирадикальные параметры контроля течения. бронхиальной астмы // В.Г. Подопригорова, A.A. Бобылев, Т.С. Макарова // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2007.- №3.- С.44-49.

147. Подымова, С.Д. Механизмы алкогольных повреждений печени и их коррекция эссенциальными фосфолипидами / С.Д. Подымова // Фарматека.- 2005.- №14.- С.25-31.

148. Подымова, С.Д. Эффективность легалона при хронических заболеваниях печени / С.Д. Подымова// Клинич. фармакология и терапия.- 1996.- Т. 5, №1.- С.40-43.

149. Покровский, В.И. Оксид азота, его физиологические и патофизиологические свойства /В.И. Покровский, H.A. Виноградов // Терапевт, арх.- 2005.- №1.- С.82-87.

150. Полонский, В.М. Применение препарата ЛИВ.52 при токсических, алкогольных и лекарственных поражениях печени / В.М. Полонский // Фарматека.- 2005.- №7.- С.23-29.

151. Полунина, Т. Е. Лекарственные поражения печени / Т. Е. Полунина // Леч. врач.-2005.-№3.- С.69-72.

152. Посохова, Е.А. Микросомальная ферментная система печени и патология печени / Е.А. Посохова// Эксперим. и клинич. фармакология.-1996,- Т. 59, №4.- С.73-76.

153. Потапович, А.И. Сравнительное исследование антиоксидантных свойств и цитопро-текторной активности флавоноидов / А.И. Потапович, В.А. Костюк // Биохимия,- 2003.- Т. 68, №5.- С.632-638.

154. Препарат максар из дальневосточного растения маакии амурской / С.Ф. Федоров и др. // Хим.-фармац. журн.- 2004,- Т. 38, №11.- С.22-26.

155. Реутов, В.П. Медико-биологические аспекты циклов оксида азота и супероксидного анион-радикала /В.П. Реутов // Вестн. Рос. акад. мед наук. 2000. - № 4. - С.35-41 .

156. Роль альфа-липоевой кислоты (тиоктацида) в терапии метаболических заболеваний печени / Э.П. Яковенко и др. // Фарматека.- 2005.- №3.- С.42-46.

157. Роль ингибиторов фосфодиэстеразы цАМФ в фармакотерапии гштоксического синдрома / В.Д. Лукьянчук и др. // Эксперим. и клинич. фармакология,- 1998.- Т. 61, №6.-С.36-38.

158. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободно-радикальному окислению / И.В.Сорокина и др. // Аналитический обзор.-Новосибирск, 1997.- Вып.46.- 67 С.

159. Румянцева, Ж.Н. Поиски гепатопротекторов среди препаратов растительного происхождения / Ж.Н. Румянцева//Раст. ресурсы.- 1993.-Т.29, Вып.1.- С.88-97.

160. Сазонтова, Т. Г. Значение баланса прооксидантов и антиоксидантов равнозначных участников метаболизма / Т.Г. Сазонтова, Ю.В. Архипенко // Патол. физиология и эксперим. терапия - 2007.- №3.-С.2-18.

161. Сайтфутдинов, P.P. Влияние эктсракта шлемника байкальского на окисление янтарной кислоты митохондриями головного мозга крыс при гипоксии / P.P. Сайтфутдинов, В.А. Хазанов // Эксперим. и клинич. фармакология.- 1998.- Т.6, №5.- С.27-29.

162. Саратиков, A.C. Новые гепатопротекторы природного происхождения /A.C. Сарати-ков, А.И. Венгеровский // Эксперим. и клинич. фармакология.- 1995.- Т.58, № 1.- С.8-11.

163. Саратиков, A.C. Экстракт солянки холмовой (лохеин) эффективная защита печени / A.C. Саратиков. - Томск: STT, 2000. - 114 с.

164. Саратиков, A.C. Эффективность ферментиндуцирующих средств при токсическом поражении печени D-галактозамином / A.C. Саратиков, Т. П. Новожсева // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2003.- №1.- С.26-28.

165. Саратиков, A.C. Эффективность ферментиндуцирующих средств при экспериментальном поражении печени тетрахлорметаном / A.C. Саратиков, Т. П. Новожеева, А.И. Венгеровский // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2003.- Т.66, №4.- С.47-49.

166. Саркисов, Д.С. Микроскопическая техника: руководство/ Д.С. Саркисов, Ю.Л. Перов: под ред. Д.С. Саркисова и Ю.Л. Перова.- М.: Медицина, 1996.- 544 с.

167. Свободно-радикальное окисление и сердечно-сосудистая патология: коррекция анти-оксидантами /А.П. Голиков и др. // Леч. врач.- 2003.- №4.- С.13-16.

168. Сергеева Е.О.Влияние флавоноидов на механизмы развития окислительного стресса при токсических поражениях печени: дис. . канд.фармац.наук: 14.00.25/ Сергеева Елена Олеговна.- Пятигорск, 2007.- 160 С.

169. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии / Л.Н. Сернов, В.В. Гацура. -М., 2000.-352 с.

170. Система антиоксидантной защиты организма и старение /A.A. Подколзин и др. // Профилактика старения.- 2000.- №3.- С. 15-22.

171. Скакун, Н.П. Использование антиоксидантов для лечения больных туберкулезом / Н.П. Скакун // Фармакология и токсикология 1991. - Т.54, № 1. — С. 80- 84.

172. Скакун, Н.П. Клиническая фармакология гепатопротекторов / Н.П. Скакун, В.В. Шманько, Л.К. Охримович. — Киев, 1995. — 335 с.

173. Скакун, Н.П. Экспериментальная фармакотерапия поражений печени, вызванных ин-дометацином / Н.П. Скакун, Е.В. Климнюк // Фармакология и токсикология. 1990. - Т.53, №6.-С. 52-53.

174. Скакун, Н.П. Эффективность антиоксидантов при комбинированном поражении печени четыреххлористым углеродом и этанолом /Н.П. Скакун, С.Ф. Ковальчук // Фармакология и токсикология. 1987. - Т.50, №3. - С. 97 - 99.

175. Скворцов, В.В. Пероксидация липидов и антиоксидантная система в гепатологии / В.В. Скворцов // Гепатология,- 2003.- №3.- С.7-13.

176. Скулачёв, В.П. Нефосфорилирующее дыхание как механизм предотвращения образования активных форм кислорода / В.П. Скулачёв // Молекул, биология.- 1995.- Т.29, №6.- С. И 99-1209.

177. Современные методы в биохимии / под ред. В.Н. Ореховича.- М.: Медицина, 1968.370 с.

178. Современные методы в биохимии / под ред. В.Н. Ореховича.- М.: Медицина, 1977.392 С.

179. Соколовская, А.Н. Влияние лохеина на меаболизм печени при острой интоксикации, вызванной парацетамолом и D-галактозамином / А.Н. Соколовская // Бюл. Сиб. медицины.-2006.- №3.- С.48-52.

180. Сопоставление антиоксидантных свойств новых препаратов, производных: флавоноидов и дубильных веществ / JI.B. Яковлева и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2001.- Т.64, №2.- С.55-59.

181. Состояние биохимических показателей печени и газообмена у экспериментальных животных в условиях острой нитробензольной интоксикации и коррекции новым интраорганным средством митохондрином / Л.П. Широбокова и др. // Токсикол. вестн.-2003.- №2,- С.6-9.

182. Состояние глутатион-зависимой антирадикальной системы и процессов перекисного окисления липидов в различных тканях лабораторных животных при острых отравлениях тиопенталом натрия / С.И. Глушков и др. // Токсикол. вести.- 2002.- № 1.- С. 11 -16.

183. Состояние дыхательной цепи митохондрий печени крыс с экспериментальным токсическим гепатитом /А.П. Ширяева и др. // Цитология.- 2007.-Т.49, №2.- С.125-132.

184. Состояние процессов перекисного окисления липидов и антиоксидантной системы у пострадавших с тяжелой сочетанной травмой / В.И. Картавенко и др. // Патол. физиология и эксперим. терапия. -2004. № 4. - С. 8-10.

185. Состояние системы глутатиона и активность некоторых NADPH-генерирующих ферментов в печени крыс при действии мелатонина в норме и при токсическом гепатите / А.Н. Пашков и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины,- 2005.- Т. 139, №5.- С.520-524.

186. Спрыгин, В.Г. Природные олпгомерные протоантоцианидины перспективныен регуляторы метаболических нарушений / В.Г. Спрыгин, Н.Ф. Кушнерова // Биология моря.-2006,-Т. 32, 2.-С. 115-124.

187. ССЦ как индуктор L-аргининзависимого синтеза N0 / O.A. Коваленко и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины,- 1996.- Т. 122, №4.- С.414-416.

188. Структурно-функциональный анализ радиопротекторной и антиокислительной активности флавоноидов / Э.П. Кемертелидзе и др. // Химия природ, соединений.- 2000.- №1.-С.42-46.

189. Сумма гликозидов диосметина вики обрубленной: выделение и изучение биологической активности / O.A. Андреева и др. // Хим.-фармац. журн,- 1998.- Т. 132, №11.- С.28-30.

190. Технология получения очищенной суммы флавоноидов из корней Pseudosophora alopecuroides и оценка ее гепатопротекторной и желчесекреторной активности // P.M. Хали-лов и др. // Хим.-фармац. журн.- 2005,- Т. 39, №2,- С.25-27.

191. Тужилин, С.А. Метод определения фосфолипазы А в сыворотке крови / С.А. Тужи-лин, А.И. Салуэнья // Лаб. дело,- 1975.- №6,- С.334-335.

192. Турищев, С.Н. Фитотерапия заболеваний гепатобилиарной системы / С.Н. Турищев // Фармация.- 2003,- №1.- С.47-48.

193. Тюренков, И.Н. Методический подход к оценке эндотелиальной дисфункции в эксперименте / И.Н. Тюренков, A.B. Воронков // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2008.- Т. 71, №1,- С.49-51.

194. Ушкалова, Е.А. Пентоксифиллин при алкогольных и неалкогольных поражениях печени / Е.А. Ушкалова // Фарматека.- 2006.- №9.- С.24-28.

195. Ушкалова, Е.А. Проблемы применения гепатопротекторов /Е.А. Ушкалова // Фарматека.- 2004,- №6,- С.45-55.

196. Фармакологическая активность мексидола при стрессорных повреждения печени / Т. А. Девяткина и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2003.- Т.66, №3.- С.56-58.

197. Фармакологическая регуляция антиоксидантами цитолиза гепатоцитов при острой интоксикации D-галактозамина хлоридом / Л.Ф. Виноградова и др. // Бюл. эксперим. биологии и медицины,- 1998.- Т.25, №4.- С.417- 419.

198. Фармакотерапевтическая эффективность сухого экстракта из комплексного растительного средства тибетской медицины «Норбу-дун-тан» при повреждении печени этанолом / З.Г. Самбуева и др. // Раст. ресурсы.- 2001.- Вып.2 С.75-79.

199. Флавоноиды V. abbreviata Fish.ex Bieb. и их фармакологические свойства / O.A. Андреева и др. // Раст. ресурсы. 1987. - Вып. 1. - С. 96 - 100.

200. Флавоноиды листьев малины и ежевики и их антиоксидантная активность / В. С. Никитина и др. //Хим.-фармац. журн.- 2000,- Т.34, №11.- С.25-27.

201. Флавоноиды надземной части горошка тонколистного и их антиоксидантная активность / Э.Т. Оганесян и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы. Пятигорск, 2001. - С. 207-208.

202. Хазанов, А.И. Функциональная диагностика заболеваний печени / А.И. Хазанов.- М.: Медицина, 1988,- 302 с.

203. Хазанов, В.А. Митохондриальные эффекты в механизме антигипоксического действия экстракта шлемника байкальского / В.А. Хазанов, Р.Р Сайфутдинов // Бюл. эксперим. биологии и медицины.- 1999.- Т. 128, №9.- С.327-329.

204. Харкевич, Д.А. Венотропные (флеботропные) средства / Д.А. Харкевич // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2004.- Т.67, №1.- С.69-77.

205. Харченко, Н.В. Опыт применения цитраргинина в лечении пациентов с хроническими заболеваниями печени / Н.В. Харченко, Н.Д. Опанасюк // Сучасна гастроентерол.- 2002.-№2.- С.73-75.

206. Хочава М.Р. Химико-технологическое обоснование создания флавоноидных препаратов с использованием отходов цитрусовых: дис. . канд. фармац. наук.: 15.00.02 / Хочава Медея Рудиковна. Пятигорск, 2001. - 143 с.

207. Чумаков, В.Н. Количественный метод определения активности цинк-, медь-зависимой супероксидцисмутазы в биологическом материале / В.Н.Чумаков, Л.Ф. Осинская // Вопр. мед. химии.- 1977.-№5.- С.712-716.

208. Чучалин, B.C. Фармакологические и токсикологические аспекты разработки новых гепатотропных препаратов природного происхождения: автореф. дис. . д-ра фармац. наук: 14.00.25, 15.00.01 / Чучалин Владимир Сергеевич,- Пятигорск, 2003.- 43 С.

209. Шакиров, Д.Ф. Состояние системы перекисного окисления липидов в организме экспериментальных животных после воздействия циклических углеводородов /Д.Ф. Шакиров, Д.А. Еникеев // Патол. физиология и эксперим. терапия.- 2003.- №1.- С.26-28.

210. Шаповал, Г. С. Механизмы антиоксидантной защиты организма при действии активных форм кислорода /Г. С.Шаповал, В.Ф. Громовая // Укр. биохим. журн.-2003.-Т. 75, №2.- С.5-11.

211. Шараев, П.Н. Метод определения свободного и связанного оксипролина в сыворотке крови / П.Н. Шараев // Лаб. дело,- 1981,- №5,- С.283-285.

212. Шарипов, К.О. Роль органических производных селена в регуляции антиокислительных процессов в печени при экспериментальном токсическом гепатите / К.О. Шарипов // Вопр. биологич., мед. и фармац. химии.- 2002.- №3.- С.40-44.

213. Шилина, Н.М. Роль пищевых веществ в функционировании системы антиоксидантной защиты организма/ Н.М. Шилина, И.Я. Конь // Вопросы детской диетологии.- 2003.- Т.1, №3.- С.53-57.

214. Шимановский, H.A. Роль оксида азота в механизмах действия лекарственных веществ /H.A. Шимановский, К.С. Гуревич // Международ, мед. журн. 2000. - № 1. - С. 104 - 108.

215. Ширяева А.П. Функциональное состояние дыхательной цепи митохондрий гепатоцитов крыс при экспериментальном токсическом гепатите: автореф. дис. . канд. биол. наук.: 03.00.25 /А.П. Ширяева,- СПб, 2008,- 25 с.

216. Шульпекова, Ю.О. Препараты растительного происхождения в лечении заболеваний печени / Ю.О. Шульпекова // Рус. мед. журн.- 2006.- Т. 14, №4.- С.337-342.

217. Экспериментальная и клиническая оценка антиокислительной эффективности многокомпонентного антиоксидантного препарата / В.З. Ланкин и др. // Терапевт, арх.-2004.-№8.- С.10-15.

218. Экспериментальное исследование эффективности препарата биомелан при остром отравлении тетрахлорметаном / A.M. Шаяхметова и др. [электронный ресурс] // Режим доступа: http://www.mrdved.kiev.ua/arhivmg/st2002/02l16.hym- Загл. с экрана.

219. Энтеросорбенты усиливают гепатозащитное действие эплира при экспериментальном токсическом гепатите/ А.И. Венгеровский и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.-2001.- Т.64, №1.- С.46-48.

220. Эффективность препарата бакстим в устранении нарушения функции моноокисгеназной системы печени при экзотоксемии / К.А. Махмудов и др. // Эксперим. и клинич. фармакология.- 2002.- Т.65, №1.- С.65-67.

221. Эффективность растительного полифенольного препарата пифламина при лекарственном поражении печени / Л.В. Яковлева и др. // Эксперим. и клинич. фармакол.-1998,- Т.61,№6.- С.48-50.

222. Яремий, И.Н. Гепатозащитные свойства экстракта родиолы жидкого / И.Н. Яремий, Н.Ф. Григорьева // Эксперим. и клинич. фармакол.- 2003,- Т.65, №6.- С.57-59.

223. A blend of phenolic compounds explains the stimulatory effect of red wine on human endothelial NO synthase / Th.Wallerath et al. //Nitric Oxide. 2005. - N.12. - P. 97-104.

224. A flavonoid-rich diet increases nitric oxide production in rat aorta / S. Benito et al. // Br. J. Pharmacol. -2002. Vol.135, N.4. -P.910-916.

225. Action of quercetin on gluconeogenesis and glycolysis in the rat liver / F.R. Gasparin et al. //Xenobiotica. 2003. - Vol.33, N.9. - P.603-911.

226. Action of quercetin on glycogen catabolism in the rat liver / F.R. Gasparin et al. // Xenobiotica. 2003. - Vol.33, N.6.- P.587-602.

227. Activation of endothelial nitric oxide synthase by red wine polyphenols: impact of grape cultivars, growing area and the vinification process / T. Rathel et al. // J Hypertens. 2007.-Vol.25, N3,- P.759-765.

228. Active oxygens generation by flavonoids / Y.H. Miura et al. // Biol. Pharm. Bull.- 1998.-Vol.21, N2.- P.93-96.

229. Activity of monomeric, dimeric, and trimeric flavonoids on NO production, TNF-a secretion, and NF-KB-dependents gene expretion in RAW 264.7 macrophages / Y. Ch. Park et al. // FEBS Letters.- 2000,- Vol.465, N. 2-3.- P. 93 97.

230. Adachi, M. Role of mitochondria in alcoholic liver injury / M. Adachi, H. Ishii // Free Radie. Biol. Med. 2002. - Vol.32, N.6. - P.487-491.

231. Agli, M. D. Vascular effects of wine polyphenols / M. D. Agli, A. Busciala, E. Bosisio // Cardiovascular Research. 2004. - Vol.63, N.4. - P.593-602.

232. Alcoholic liver disease /1. Bouneva et al. // Hosp. Physician. 2003. - Vol.39. - P.31 -38.

233. Alcohol-induced free radicals in mice: direct toxicants or signaling molecules? / M. Yin et al. // Hepatology. 2001. - Vol.34, N.5. - P.935-942.

234. Ali, B.H. The effect of water extract and anthocyanins of hibiscus sabdariffa L. on. paracetamol-induced hepatoxicity in rats / B.H. Ali, H.M. Mousa, S. El-Mougy // Phytother. Res. -2003.-Vol.17, N.l. P.56-59.

235. Amaro, M.J. Hepatitis B virus X protein transactivates the inducible nitric oxide synthase • promoter /M.J. Amaro, J. Bartolome, V. Carreno //Hepatology.- 1999.- Vol.29, N3,-P.915-923.

236. Amelioration effects of phytoestrogens on CCI4 -induced oxidative stress in the livers of male Wistars rats/ R. Aneja et al. // Artif. Cells Blood Substit. Immobil. Biotechnol. 2005. -Vol.33, N.2.-P.201-213.

237. An antioxidant / polyphenolic-rich fruit juice reduces oxidative DNA damage and increases glutathione level in healthy probands / T. Weisel et al. // Biotechnol J. 2006. - Vol.1, N.4.-P.388-397.

238. Andrade J.E. Effect of the citrus flavanone naringenin on oxidative stress in rats / J.E. Andrade, J.R. Burgess // J. Agric. Food Chem. 2007. - Vol.55, N6. - P.2142-2148.

239. Anthocyanins an adjunct to cardiovascular therapy? / E. Kowalczyk et al. // Kardiol. Pol. - 2002. - Vol.57, N.IO.- P.332-336.

240. Antiallergic activity of hesperidin is activated by intestinal microflora / N.K.Lee et al. // Pharmacology. -2004. Vol.71, N.4. - P. 174-180.

241. Antioxidant activity of natural flavonoids is governed by number and location of their aromatic hydroxyl groups / Z.Y. Chen et al. // Chemistry and Physics of Lipids. 1996. - N.79.-P.157-163.

242. Antioxidant and hepatoprotective effect of Bauhinia racemosa agains paracetamol and carbon tetrachloraide indused liver damage in rats / M. Gupta et al. // Iranian J. Pharmacol.Therap. 2004. - Vol.3, N.l. - P.12-20.

243. Antioxidant and pro-oxidant actions of flavonoids: effects on DNA damage indused by nitric oxide, peroxynitrite and nitroxyl anion / H. Ohshima et al. //Free Radic. Biol. Med. 1998. -Vol.25, N.9.-P.1057-1065.

244. Antioxidant galloylated flavonol glycosides from Calliandra haematocephala / F.A. Moharram et al. // Nat. Prod. Res. 2006. - Vol.20, N.10. - P.927-934.

245. Antioxidant status and mineral contents in tissues of rutin and baicalin fed rats / Z.Gao et al. // Life Sci. 2003. - Vol.73, N.12. - P.1599-1607.

246. Antioxidant, a pro-oxidant and cytotoxic effects of Achyrocline satureioides extracts / M. Polydoro et al. // Life Sci. 2004. - Vol.74, N.23. - P.2815-2826.

247. Antioxidative action of flavonoids, quercetin and catechin, mediated by the activation of glutathione peroxidase / H. Nagata et al. // Nokai. J. Exp. Clin. Med. 1999. - Vol.24, N.l.- P.l-11.

248. Antioxidative effects of quercetin-glycosides isolated from the flower buds of Tussilago farfara L / M. R. Kim et al. // Food Chem Toxicol. 2006. - Vol.44, N.8. - P. 1299-1307.

249. Arora, A. Structure-activity relationships for antioxidant activities of a series of flavonoids in a liposomal system / A. Arora, M.G. Nair, G.M. Strasburg // Free Radic. Biol. Med. 1998. -Vol.24, N.9.-P.1355-1363.

250. Bao, M. Flavonoids from seabuckthorn protect endothelial cell (EA. hy 926) from oxidized low-density lipoprotein induced injuries via of LOX and eNOS expression / M. Bao, Y. Lou // J. Cardiovasc. Pharmacol.- 2006.- Vol.48, N. 1.- P.834-841.

251. Benavente-Garsia, O. Update on uses and properties of citrus flavonoids: new findings in anticancer, cardiovascular, and anti-inflammatory activity / O. Benavente-Garsia, J. Castillo // J. Agric. Food Chem. -2008. Vol.56, N.l5. - P.6185-6205.

252. Bergan, J.J. Chronic venous insufficiency and the therapeutic effects of Daflon 500 mg / J.J. Bergan// Angiology. 2005. - Vol.56, N.l. - P.S21-S24.

253. Bilberry extracts induce gene expression through the electrophile element / M. Myhrstad et al. //Nutr. Cancer. 2006. - Vol.54, N.l. - P.94-101.

254. Bioavailability and bioefficacy of polyphenols in humans. I. Review of 97 bioavailability studies / C. Manach et al. // J. Clin. Nutr. 2005.-Vol.81, N.l. - P.230S-242S.

255. Bioavailability is improved by enzymatic modification of the citrus flavonoid hesperidin in humans: a randomized, double-blind, crossover trial / F. Nielsen et al. // J. Nutrition. 2005.-Vol.136, N.2.- P.404-408.

256. Bioavailability of dietary doses of 3H-labelled tea antioxidants (+)-catechin and (-)-epicatechin in rat / F. Catterall et al. // Xenobiotica. 2003.- Vol.33, N.7.- P.743-753.

257. Biological effects of hesperidin, a Citrus flavonoid (note II): hypolipidemic activity on experimental hypercholesterolemia in rat / M.T. Monforte et al. // Farmaco. 1995. - Vol.50, N9.-P.595-599.

258. Black and green tea polyphenols attenuate blood pressure increases in stroke-prone spontaneously hypertensive rats. / H. Negishi et al. // J. Nutr. 2004. - Vol.134, N.l.- P.38-42.

259. Black tea polyphenols modulate xenobiotic-metabolizing enzymes, oxidative stress and adduct formation in a rat hepatocarcinogenesis model / R.S. Murugan et al. // Free Rad. Res. -2008. Vol.42, N.10. - P.873-884.

260. Bors, W. Electron paramagnetic resonance studies of radical species of proanthocyanidins and gallate esters / W. Bors, C. Michel, K. Stettmaer // Arch. Biochem. Biophys. 2000. - Vol.374, N.2. - P.347-355.

261. Boveris, A. Inhibition by wine polyphenols of peroxynitrite-initiated chemiluminescence and NADH oxidation / A. Boveris, L. Valdes, S. Alvarez // Ann. NY Acad. Sci.- 2002.- Vol.957, N.6.- P.90-102.

262. Bragdon, J.H. Method for extraction of serum-lipids / J.H. Bragdon, P.W. Sunderman // Lipids and the steroid hormones in clinical medicine. Philodelphia, Monreal, 1960. - P.278.

263. Bredt, D. S. Nitric oxide: a physiological messenger molecule / D. S. Bredt, S.H. Snyder //Ann. Rev. Biochem. 1994. - N. 63. - P. 175-195.

264. Breinholt, V. Differential effects of dietary flavonoids on drug metabolizing and antioxidant enzymes in female rat / V. Breinholt, S.T. Lauridsen, L.O. Dragsted // Xenobiotica.- 1999.- Vol.29, N.12.- P.1227-1240.

265. Buxton, N.D.Vascular actions of the polyphenolic catechin gallate EGCG: endothelium-dependent contraction and relaxation / N.D. Buxton, R.A. Kaiser, I.L. Buxton // Proc. West. Pharmacol. Soc. 2003. - Vol.46, N.3. - P.37-38.

266. Cao, G. Antioxidant and prooxidant behavior of flavonoids: structure-activity relationships / G. Cao, E. Sofic, R.L. Prior// Free Radic. Biol. Med. 1997. - Vol.22, N.5. - P.749-760.

267. Caro, A.A. Oxidative stress, toxicology, and pharmacology of CYP2E1 / A.A. Caro, A.I. Cederbaum// Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. 2004. - Vol.44, N.l. - P.27-42.

268. Central nervous system depressant action of flavonoid glycosides / S.P.Fernandez et al. // Eur. J. Pharmacol. -2006. Vol.539, N.3. - P.168-176.

269. Characterization of pathogenic and prognostic factors of nonalcoholic steatohepatitis associated with obesity / C. Garcia-Monzon et al. // J. Hepatol. 2000. - Vol.33, N.5. - P.716-724.

270. Chemical studies of the antioxidant mechanism of tea catechins: radical reaction products of epicatechin with peroxyl radicals / S. et al. // Bioorg. Med. Chem. 2003. - Vol.11, N.l6. - P. 3371-3378.

271. Chemistry and pharmacology of the Citrus bioflavonoid hesperidin / A. Garg et al. // Phytother. Res. -2001. Vol.15, N.8. - P.655-669.

272. Chemoprevention of aflatoxin Bl-induced gcnotoxicity and hepatic oxidative damage in rats by kolaviron, a natural bioflavonoid of Garcinia kola seeds / E.O. Farombi et al. // Eur. J. Cancer. Prev. 2005. - Vol. 14, N.3. - P.207-214.

273. Chen, Y. Oroxylin A inhibition of lipopolysaccharide-induced iNOS and COX-2 gene expression of nuclear factor-kappa В activation / Y. Chen, L.Yang, T.J. Lee // Biochem. Pharmacol. 2000. - Vol.59, N.ll. - P. 1445-1457.

274. Cherubini, A. Black tea increases the resistance of human plasma to lipid peroxidation in vitro, but not ex vivo / A. Cherubini, M.F. Beal, B. Frei // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol.27, N. 3/4.-P.381-387.

275. Cho, J. Antioxidant and neuroprotective effects of hesperidin and its aglycon hesperetin /J. Cho // Arch. Pharm. Res. 2006. - Vol.29, N.8. - P.699-706.

276. Choi, E. The prooxidant, rather than antioxidant, acts of daidzein in vivo and in vitro: daidzein suppresses glutathione metabolism / E.J. Choi // Eur. J. Pharmocol. 2006. - Vol. 542, N. 7.- P.162-169.

277. Coadjustment of quercetin and hydrogen peroxide: the role of ROS in the cytotoxicity of quercetin / J.-H. Chen et al. // Pharmazie. 2004. - Vol.59, N.2. - P. 155-158.

278. Comparative effects of flavonoids and model inducers on drug- metabolizing enzymes in rat liver/M.C. Canivenc Lavier et al. //Toxicology.-1996. Vol.114, N.l. - P. 19-27.

279. Comparative studies of some phenolic compounds (quercetin, rutin, and ferulic acid) affecting hepatic fatty acid synthesis in mice / T.O. Odbayar et al. // J. Agric. Food Chem. 2006,-Vol.54, N.21.- P.8261-8265.

280. Consequences of quercetin methylation for its covalent glutathione and DNA adducts formation / H. van der Woude et al. // Chem. Biol. Interact. 2006. - Vol.160, N.3. - P.193-203.

281. Cotelle, N. Role of flavonoids in oxidative stress / N. Cotelle // Curr. Top. Med. Chem.-2001.- Vol.1, N.6.-P.569-590.

282. Crespy, V. A review of the health effects of green tea catechins in in vivo animal models / V. Crespy, G. Williamson//J. Nutr.- 2004,- Vol.134, N.l2. P.3431S-3440S.

283. Cunningham, C.C. Energy availability and alcohol-related liver pathology / C.C. Cunningham, C.G. Van Horn // Alcohol. Res. Health. 2003. - Vol.27, N.4. - P.291-299.

284. CYP2E1 is not involved in early alcohol-induced liver injury / H. Kono et al. // Am. J. Physiol. 1999. - Vol.40, N.6. - P. 1259-1267.

285. CYP2E1 -dependent toxicity and oxidative stress in HepG2 cells / A.I. Cederbaum et al. // Free Radic. Biol. Med. 2001. - Vol.31, N.12. - P. 1539-1543.

286. Cytochrome P450 CYP2E1, but not nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidase, is required for ethanol-induced oxidative DNA damage in rodent liver / B.U. Bradford et al. // Hepatology.- 2005.- Vol.41, N.2.- P.336-344.

287. Cytoprotective mechanism of baicalin against endothelial cell damage by peroxynitrite / D. Kim et al. //J. Pharm. Pharmacol. 2005. - Vol.57, N.-12. - P.1581-1590.

288. Das, S.K. Monitoring oxidative stress in patients with non-alcoholic and alcoholic liver diseases / S.K. Das, D.M. Vasudevan // Indian J. Clin. Biochem. 2005. - Vol.20, N.2. - P.24-28.

289. Das, S.K. Protective effects of Silymarin, a milk thistle (Silibium marianum) derivative on ethanol-induced oxidative stress in liver / S.K. Das, D.M. Vasudevan // Indian J. Biochem. Biophys. 2006. - Vol.43, N.5. - P.306-311.

290. Degradation of flavonoid aglyeones by rabbit, rat and human fecal flora / Y.T. Lin et al. // Biol. Pharm. Bull. 2003. - Vol.26, N.5. - P.747 - 751.

291. Deng, Y.Q. The state of insulin resistance in patients with nonalcoholic fatty liver and the intervention with Gankangyin /Y.Q. Deng, X.F. Fan, J.P. Li // Chin. J. Integr. Med. 2005. -Vol.11, N.2.-P.117-122.

292. Detection of serum nitrite and nitrate in primary biliary cirrhosis: possible role of nitric oxide in bile duct injury / A. Hokari et al. // J. Gastroenterol. Hepatol.-2002. Vol.17, N.3. -P.308-315.

293. Development of an intragastric enteral model in the mouse: studies of alcohol-induced liver disease using knockout technology / H. Kono et al. // J. Hepatobiliary Pancreat. Surg. 2000. -Vol.7, N.4.- P.395-400.

294. Dey, A. Alcohol and oxidative liver injury / A. Dey, A.I. Cederbaum // Hepatology. 2006.-Vol.43, N.2 Suppl 1,- P.63-74.

295. Dhiman, R.K. Herbal medicines for liver diseases / R.K. Dhiman, Y.K. Chawla // Dig. Dis. Sci.-2005. Vol.50, N.10. - P.1807-1812.

296. Dietary flavanols and procyanidin oligomers from cocoa (Theobroma cacao) inhibit platelet function /K.J. Murphy et al. // Am. J .Clin. Nutr. 2003. - Vol.77, N.6. - P.1466-1473.

297. Dietary flavonoids modulate PCB-induced oxidative stress, CYP1A1 induction, and AhRDNA binding activity in vascular endothelial cells / P. Ramadass et al. // Toxicol. Sci. 2003. -Vol.76, N.I.-P. 212-219.

298. Dietary modification on drug- metabolizing enzymes activities: dose-response effect of flavonoids / M.H. Siess et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 1992. - Vol.35, N.3. - P.141-152.

299. Dietary supplementation of grape polyphenols to rats ameliorates chronic ethanol-induced changes in hepatic morphology without altering changes in hepatic lipids / G.Y. Sun et al. // J. Nutr. 1999. - Vol.129, N.10. - P.1814-1819.

300. Differential effects of nonhydroxylated flavonoids as inducers of cytochrome P450 1A and 2B isozymes in rat liver / M. C. Canivenc Lavier et al. // Toxicol.-Appl.-Pharmacol.-l 996.-Vol.136, N.2.- P. 348 -353.

301. Direct activation of the mitochondrial calcium uniporter by natural plant flavonoids / M. Montera et al. // Biochem J. 2004. - Vol.15, N. 384. - P. 19-24.

302. Direct effect of quercetin on impaired reactivity of spontaneously hypertensive rat aortae: comparative study with ascorbinic acid / M. Ajay et al.'. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2006. -Vol.33, N.4. - P.345-350.

303. Distinct roles of tumor necrosis factor-alpha and nitric oxide in acute liver injury induced by carbontetrachloride in mice / L.A. Morio et al. // Toxicol. Appl. Pharmacol.-2001. Vol.172, N.I.-P.44-51.

304. Distinctive antioxidant and antiinflammatory effects of flavonols / L. Wang et al. // J. Agric. Food Chem. 2006. - Vol.54, N.26. - P.9798-9804.

305. Distribution of nitric syntase in normal and cirrhotic human liver / L. Me Naughton et al. // Proc. Natl. Acad. Sei. USA. 2002. - Vol.99, N.26. - P.17161-17166.

306. Dragsted, L.O. Antioxidant actions of polyphenols in humans/ L.O. Dragsted // Int. J. Vitam. Nutr. Res. 2003. - Vol.73, N.2. - P.112-119.

307. Dröge, W. Free radical in the physiological control of cell function / W. Dröge // Physiol. Rev.- 2002.- Vol.82, N.I.- P.47-95.

308. Dubey, S.K. Hepatoprotective activity from ethanol fraction of Thuja occidentalis Linn / S.K. Dubey, A. Batra // Asian J. Research. Chem. 2008. - Vol.1, N1. - P.32-35.

309. Duration of the hemodynamic effects of NG-Nitro-L-arginine methyl ester in vivo / E. M. Conner et al. //Nitric Oxide: Biology and Chemistry. 2000. - Vol.4, N.2. - P.85-93.

310. Dvorak, Z. Silybin and dehydrosilybin ihibit cytochrome P450 1A1 catalytic activity: a study in human keratinocytes and human hepatoma cells / Z. Dvorak, R.Vrzal, J. Ulrichova // Cell. Biol. Toxicol. 2006. - Vol.22, N. 2. - P.81-90.

311. Effect of anthocyanins contained in blackberry extract on the circulatory failure and multiple, organ dysfunction caused by endotoxin in rat / L. Sautebin et al. // Planta Med. 2004. - Vol.70, N.8.- P.745-752.

312. Effect of dietary baicalin supplementation on iron overloadmouse liver oxidative injury/ Y. Zhao et al. // Eur. J. Pharmacol. 2005. - Vol.509, N.2-3. - P. 195-200.

313. Effect of flavonoids on glutathione level, lipid peroxidation and cytochrome P450 CYP1A1 expression in human laryngeal carcinoma cell lines / K. Durgo et al. // Food Technol. Biotechnol.-2007.- Vol.45, N1.- P.69-79.

314. Effect of Ginkgo biloba extract on the rat mitochondrial function / S. Trumbeckaite et al. // Ethnopharmacol. 2007. - Vol.111,N. 3. - P.512-516.

315. Effect of naturally occurring flavonoids on lipids peroxidation and membrane permeability transion of mitochondria / A.C. Santos et al. // Free Radie. Biol. Med. 1998.- Vol.24, N 9.- P. 1455-1461.

316. Effect of naturally occurring flavonoids on nitric oxide production in the macrophage cell line RAW 264,7 and their structure-activity relationship / H.K. Kim et al. // Biochem. Pharmacol. 1999. - Vol.58, N.5. - P.759-765.

317. Effect of quercetin on lipid peroxidation and changes in lung morphology in experimental influenza virus infection / P. Kumar et al. // Int. J. Exp. Pathol. 2003. - Vol.84, N.3. - P.127-133.

318. Effect of silybin and its glycosides on the expression of cytochrome P450 1A2 and 3A4 in primary cultures of human hepatocytes / P. Kosina et al. // Biochem. Mol. Toxicol. 2005. -Vol.19, N.3. - P.149-153.

319. Effect of the flavonoid quercetin on cadmium-induced hepatotoxicity / C. Vicente-Sanchez et al. // Food Chem. Toxicol. 2008. - Vol.46, N.6. - P.2279-2287.

320. Effects of citrus flavonoids on lipid metabolism and glucose-regulating enzyme mRNA levels in type-2 diabetic mice / U.J. Jung et al. // J. Biochem. Cell Biol. 2006. - Vol.38, N.7.-P.1134-1145.

321. Effects of citrus flavonoids on redox homeostasis of toxin-injuried liver in rat / E. Rapavi et al. //Acta. Biol. Hung. 2006. - Vol.57, N.4. - P.415-422.

322. Effects of hesperetin on vessel structure formation in mouse embryonic stem (mES) cells / E.J. Choi et al. // Nutr. 2006. - Vol.22, N.9. - P.947-951.

323. Effects of hesperidin on cyclic strain-induced endothelin-1 release in human umbilical vein endothelial cells / C-S. Chiou et al. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. 2008. - Vol.35, N.8. -P.938-943.

324. Effects of naringin on hydrogen peroxide-induced cytotoxicity and apoptosis in P388 cells / S. Kanno et al. // J. Pharmacol. Sei. 2003. - Vol.92, N.2. - P.166-170.

325. Effects of polyphenolic antioxidants on exercise-induced oxidative stress/ J.M. Morillas-Ruiz et al. // Clin. Nutr. 2006. - Vol.25, N.3. - P.444-453.

326. Effects of prenylated flavonoids and bioflavonoids on lipopolysaccharide-induced nitric oxide production from the mouse macrophage cell line RAW 264.7 / B.S. Cheon et al. // Planta Med.- 2000.- Vol.66, N.7.- P.596-600.

327. Effects of quercetin on liver damage in rats with carbon tetrachloride-induced cirrhosis / A. Pavanato et al. // Dig. Dis. Sei. 2003. - Vol.48, N.4. - P.824-829.

328. Effects of rutin and quercetin on monooxygenase activities in experimental influenza virus infection/ V.M. Savov et al. //Exp. Toxicol. Pathol. 2006. - Vol.58, N.l. - P.59-64.

329. Effects of Silymarin on UDP-glucuronic acid and glucuronidation activity in the rat isolated hepatocytes and liver in relation to D-galactosamine toxicity / V.J. Chrungoo et al. // Indian J. Exp. Biol. 1997. - Vol.35, N.3. - P.256-263.

330. El-Beshbishy, H.A. Hepatoprotective effect of Green Tea (Camellia sinesis) extract against tamoxifen-induced liver injury in rats / H.A. El-Beshbishy // J. Biochem. Mol. Biol. 2005.-Vol.38, N.5.- P.563-570.

331. Enchanced expression of endothelial nitric oxide syntase and caveolin-1 in human cirrhosis / H. Yokomori et al. // Liver 2002. - Vol.22, N.2. - P. 150-158.

332. Epigallocatechin gallate causes oxidative damage to isolated and cellular DNA / A. Furukawa et al. // Biochem. Pharmacol. 2003. - Vol.66, N.9. - P. 1769-1778.

333. Epigallocatechin gallate preserves endothelial function by reducing the endogenous nitric oxide synthase inhibitor level / W. Tang et al. // Can J. Physiol. Pharmacol. 2006. - Vol.84, N.2. - P.163-171.

334. Epigallocatechin-3-gallate protects mice from concanavalin A-induced hepatitis through suppressing immune-mediated liver injury / Y. Wang et al. // Clin. Exp. Immunol. 2006. -Vol.145, N/3.-P.485-492.

335. Epigallocatehin-3-gallate ameliorates alcohol-induced liver injury in rats / G. Yuan et al. // Int. J. Moi. Sei. 2006. - Vol.7, N.7. - P.204-219.

336. Erden, I. Bénéficiai effects of quercetin on oxidative stress induced by ultraviolet A / I. Erden, A. Kahraman, T. Koken //Clin. Exp. Dermatol. 2001. - Vol.26, N.6. - P.536-798.

337. Essential requirement of reduced glutathione (GSH) for the anti-oxidant effect of the flavonoid quercetin / R. Ferraresi et al. // Free Radie. Res. 2005. - Vol.39, N.l 1. - P.1249-1258.

338. Ethanol consumption affects stress response and -insulin binding in tissues of rats / L. Macho et al. // Endoer. Regul. 2003. - Vol.37, N.4. - P.195-202.

339. Ethanol potentiates oxygen uptake and toxicity due to menadione bisulfite in perfused rat. liver/ P.E. Ganey et al. // Mol. Pharmacol. 1990. - Vol.38, N.6. - P.959-964.

340. Ethanol-indused inhibition of testosterone biosynthesis in rat Leydig cells: central role of mitochondrial NADH redox state/ A.K.Orpana et al. // J. Steroid. Biochem. 2005. - Vol.36, N.6.-P.603-608.

341. Evaluation of nitric oxide (NO) levels in hepatitis C (HCV) infection: relationship to schistosomiasis and liver cirrhosis among Egyptian patients / M.I. Hassan et al. // Dis. Markers. -2002.-Vol.18, N.3. -P.137-142.

342. Experimental evidence that flavonoid metal complexes may act as mimics of superoxide dismutase / V.A. Kostyuk et al. // Arch. Biochem. Biophys. 2004. - Vol.428, N.6. - P.204-208.

343. Fenugreek (Trigonella foenum Graecum) seed extract prevents ethanol induced toxicity and apoptosis in chang liver cells / S. Kaviarasan et al. // Alcohol Alcohol. 2006. - Vol.41, N.3. -P.267-273.

344. Fernandes-Checa, J.C. S-Adenosyl-L-methionine and mitochondrial reduced glutathione depletion in alcoholic liver disease / J.C. Fernandes-Checa, A. Cotell, C. Garsia-Ruiz // Alcohol.-2002.- Vol.27, N.3.- P.179-183.

345. Finotti, E. Di Majo D. Influence of solvents on the antioxidant property of flavonoids / E. Finotti, D. Di Majo //Nahrung. 2003. - Vol.47, N.3. - P. 186-187.

346. Fisetin inducers transcription of NADPH: quinone oxidoreductase gene through an antioxidant responsive element-involved activation / D.X. Hou et al. // Int. J. Oncol. 2001. -Vol.18, N.9.-P.1175-1179.

347. Flavonoids as peroxynitrite scavengers: the role of the hydroxyl groups / C.G. Heijnen et al. // Toxicol. In Vitro. 2001. - Vol.15. - P. 3-6.

348. Flavonoids as scavengers of nitric oxide radical / S. A. B. E. van Acker et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. - Vol.214, N.3. - P.755-759.

349. Flavonoids differentially modulate nitric oxide production pathways in lipopolysaccharide-activated RAW264,7 cells / A. Kim et al. // Arch. Pharm. Res.- 2005.- Vol.28, N.3.- P.297-304.

350. Flavonoids from Artichoke (Cynara scolymus L.) up-regulatate endothelial-type nitric-oxyde synthase gene expression in human endothelial cells / H. Li et al. // J. Pharmacol.Exp. Ther.- 2004.- Vol.10, N.3.- P.926-932.

351. Flavonoids increase the intracellular glutathione level by transactivation of the gamma-glutamylcysteine synthetase catalytical subunit promoter / M.C. Myhrstad et al. // Free Radic. Biol. Med. 2002. - Vol.32, N.5. - P.386-393.

352. Free radicals scavenging efficiency of few naturally occurring flavonoids: a comparative study / M. Rajendran et al. // J. Agric. Food. Chem. 2004. - Vol.52, N.24. - P.7389-7394.

353. Frei, B. Antioxidant activity of tea polyphenols in vivo: evidence from animal studies/ B. Frei, J.V. Higdon // J. Nutr. 2003. - Vol.133, N.10. - P.3275-3284.

354. French, S.W. Biochemistry of alcoholic liver disease / S.W. French // Crit. Rev. Clin. Lab. Sei. 1992. - Vol.29, N.2. - P.83-115.

355. French, S.W. Mechanisms of alcoholic liver injury / S.W. French // Can. J. Gastroenterol.-2000.- Vol.14, N.4.- P.327-332.

356. Fruit juice consumption modulates antioxidative status, immune status and DNA damage / A. Bub et al. // J. Nutr. Biochem. J. 2003. - Vol.14, N.2. - P.90-98.

357. Gadolinium chloride blocks alcohol-dependent liver toxicity in rats treated chronically with intragastric alcohol despite the induction of CYP2E1 / D.R. Koop et al. // Mol. Pharmacol. 1997. - Vol.51.-P.944-950.

358. Glucosyl hesperidin prevents endothelial dysfunction and oxidative stress spontaneously hypertensive rats / M. Yamamoto et al. // Nutrition. 2008. - Vol.24, N.5. - P.470-476.

359. Glutathione-mediated mechanisms of defence against oxygen free radical-induced hepatotoxicity / G. Bellomo et al. // Human Toxicology. 1989. - Vol.8, N.9. - P.152-156.

360. Glycosilic flavonoids as rat-liver injury preventing compounds from green tea / S. Wada et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2000. - Vol.64, N.10. - P.2262-2265.

361. Gordon, M.H. Antioxidant activity of flavonoids isolated from Licorice / M.H. Gordon, J. An// J. Agric. Food Chem. 1995. - Vol.43, N.7. - P.1784-1788.

362. Grape seed procyanidins prevent oxidative injury by modulating the expressions of antioxidant enzyme systems / F. Puiggros et al. // J. Agric. Food Chem. 2005. - Vol.53, N. 15.-P.6080-6086.

363. Green tea as an antioxidant which protects against alcohol induced injury in rats a histopathological examination / M. Baltaziak et al. // Folia Morphol. - 2004. - Vol.63, N.l. -P.123-126.

364. Green tea as potent antioxidant in alcohol intoxication / E. Skrzydlewska et al. // Addict. Biol. 2002. - Vol.7, N.3. - P.307-314.

365. Green tea epigallocatechin-3- gallate inhibits platelet signaling pathway triggered by both proteolytic and non- proteolytic agonists / R. Deana et al. // Thromb. Haemost.- 2003.- Vol.89, N.5.- P.866-874.

366. Green tea epigallocatechin-3-gallate is an inhibitor of mammalian histidine decarboxylase / C. Rodriguez-Caso et al. // Cell Mol. Life Sci.- 2003,- Vol.60, N.8.- P. 1760-1763.

367. Green tea modulation of the biochemical and electric properties of rat liver cells that were affected by ethanol and aging /1. Dobrzynska et al. // Cell. Mol. Biol. Lett. 2004. - Vol.9, N.4b. -P.709-721.

368. Green tea polyphenols prevent toxin-induced hepatotoxicity in mice by down-regulating inducible nitric oxide derived prooxidants / J.-H. Chen et al. // Am. J. Clin. Nutr. - 2004. -Vol.80, N.3. - P.742-751.

369. Green tea protects against ethanol-induced lipid peroxidation in rat organs / J. Ostrowska et al. // Alcohol.-2004. Vol.32, N.l. - P.25-32.

370. Gross, S. S. Nitric oxide: pathophysiological mechanism / S.S.Gross, M. S.Wolin // Ann. Rev. Physiol. 1995. - N.57. - P.737-769.

371. Grover, P.L. Glutatione-S-transferases in detoxication / P.L. Grover // Biochem. Soc. Trans.-1982.- Vol.10, N.5.- P.80-82.

372. Haenen, G.R. Nitric oxide radical scavenging of flavonoids / G.R. Haenen, A. Bast // Methods Enzymol. 1999. - Vol.301, Pt.3. - P.490-503.

373. Halliwell, B. Health promotion by flavonoids, tocopherols, tocotrienols, and other phenols: direct or indirect effects? Antioxidant or not? / B. Halliwell, J. Rafter, A. Jenner // Am. J. Clin. Nutr. 2005. - Vol.81, N. 1. - P.268S-276S.

374. Hanasaki, Y. The correlation between active oxygen scavenging and antioxidative affects of flavonoids / Y. Hanasaki, S. Ogawa, S. Fukui // Free Radic. Biol. Med. 1994. - Vol.16, N.6. -P.845 - 850.

375. Hepatic and intestinal cytochrome P450 and conjugase activities in rat treated with black tea threafulvins and threaflavins / F. Catterall et al. // Food Chem. Toxicol. 2003. - Vol.41, N.8. -P.1141-1147.

376. Hepatic metabolism and biliary excretion of Silymarin flavonolignans in isolated perfused rat livers: role of multidrug resistance-associated protein 2 (Abcc2) / S.R. Miranda et al. // Drug. Metab. Dispos. 2008. - Vol.36, N.l 1. - P.2219-2226.

377. Hepatoprotective activity of polyhydroxylated 2-styrylcliromones against tert-butylhydroperoxide induced toxicity in freshly isolated rat hepatocytes / E. Fernandes et al. // Arch. Toxicol. 2003. - Vol.77, N.9. - P.500-505.

378. Hepatoprotective effect of Combretum quadrangulare and its constituents / A.H. Banskota et al. // Biolog. Pharm. Bull. 2000. - Vol.22, N. 4. - P.456-460.

379. Hepatoprotective effect of Epaltes divaricata extract on carbon tetrachloride-induced hepatotoxicity in mice / R.P. Hewawasam et al. // Indian J. Med. Res. 2004.- Vol.120, N.7.-P.30-34.

380. Hepatoprotective effect of flavonol glycosides rich fraction from Egyptian Vicia calcarata Desf. against CC14 -induced liver damage in rats / A.N. Singab et al. // Arch. Pharm. Res. Bull. 2005. Vol.28, N. 7. - P.791-798.

381. Hepatoprotective effect of mbiadin, a major constituent of Rubia cordifolia Linn / G.M. Rao et al. // J. Ethnophamacol. 2006. - Vol.103, N. 3. - P.284-289.

382. Hepatoprotective effect of total flavonoids from" Laggera alata against carbon tetrachloride-induced injury in primary cultured neonatal rat hepatocytes and in rats with hepatic damage / Y. Wu etal. //J. Biomed. Sei. 2006. - Vol.13, N.4. - P.569-578.

383. Hesperetin: a potent antioxidant against peroxynitrite / J.Y. Kim et al. // Free Radic. Res.2004. Vol.38, N.7. - P.761-769.

384. Higdon, J.V. Tea catechins and polyphenols: health effects, metabolism, and antioxidant functions / J.V. Higdon, B. Frei // Crit. Rev. Food Sei. Nutr. 2003. - Vol.43, N.l. - P.89-143.

385. Hispidulin: antioxidant properties and effect on mitochondrial energy metabolism / P. Dabaghi-Baraoza et al. // Free Radic. Res. 2005. - Vol.39, N.12. - P.1305-1315.

386. Hoek, J.B. Ethanol, oxidative stress, and eytokine-induced liver cell injury / J.B. Hoek // Alcohol. 2002. - Vol.27, N.l. - P.63-68.

387. Hon, W.M. Nitric oxide in liver diseases: friend, foi or just passerby? / W.M. Hon, K.H. Lee, H.E. Khoo // Ann. N.Y. Acad. Sei. 2002. - Vol.962. - P.275-295.

388. Horvathova, K. The free radical scavenging activity of four flavonoids determined by the comet assay / K. Horvathova, L. Novotny, A. Vachalkova // Neoplasma.- 2003.- Vol.50, N.4.-P.291-295.

389. Hou, Y.N. Effect of baicalin on liver microsomal cytochrome P450 system / Y. N. Hou, X. Zhu, G. Cheng // Yao Xue Xue Bao.- 2000.- Vol.35, N.12.- P.890-892.

390. Hu, C. Luteolin and luteolin-7-0- glucoside from dandelion flower supprise iNOS and COX -2 in RAW264,7 cells / C. Hu, D.D. Kitts // Mol. Cell Biochem.- 2004.- Vol.265, N.l-2,- P. 107113.

391. Human metabolic pathways of dietary flavonoids and cinnamates / G. Williamson et al. // Biochem. Soc. Trans. 2000. - Vol.28, N.l. - P. 16-22.

392. Husain, K. Interaction of exercise training and chronic ethanol ingestion on hepatic and plasma antioxidant system in rat / K. Husain, S.M. Somani // J. Appl. Toxicol. 1997. - Vol.17, N.3. - P.189-194.

393. Identification and antiradical properties of anthocyanins in fruits of Viburnum dilatatum thunb / M.Y. Kim et al. // J. Agric. Food Chem. 2003. - Vol.51, N.21. - P.6173-6177.

394. Ilavarasan, R. Anti-inflamatory and antioxidant activities of Cassia Linn bark extract / R. Ilavarasan, M. Mallika, S. Venkataraman // Afr. J. Trad.- 2005 -N.2.- P. 70 85.

395. In vitro peroxynitrite scavenging activity of 6-hydroxykynurenic acid and other flavonoids from Gingko biloba yellow leaves / S. Hyun et al. // Arch. Pharm. Res.- 2006.- Vol.29, N.12.-P.1074-1079.

396. Increasing dimethylarginine levels are associated with adverse clinical outcome in severe alcoholic hepatitis / R.P. Mookerjee et al. // Hepatology. 2007. - Vol.45, N.l.- P.62-71.

397. Inducible nitric oxide synthase expression in chronic viral hepatitis. Evidence for a virus-induced gene upregulation / P.L. Majano et al. // J. Clin. Invest. 1998. - Vol.101, N.7. - P.1343-1352.

398. Inducible nitric oxide synthase is required in alcohol-induced liver injury: studies with knockout mice / S.E. McKim et al. // Gastroenterology. 2003. - Vol.125, N.6. - P.1834-1844.

399. Induction of human NAD (P)H: quinone oxidoreductase 1 (NQOl) gene expression by the flavonol quercetin/ L.G. Valerio et al. // Toxicol. Lett. 2001.-Vol.119, N.l. - P.49-57.

400. Induction of monooxygenase and tranferase activities in rat by dietary administration of flavonoids / M.H. Siess etal. //Xenobiotica. 1989. - Vol.19, N. 12. - P. 1379-1386.

401. Influence of quercetin and rutin on growth and antioxidant defense system of human hepatoma cell line (HepG2) / M. Alia et al. // Eur. J. Nutr. 2006. - Vol.45, N.l. - P.19-28.

402. Inhibition of glutathione reductase by flavonoids. A structure-activity stady / A. Elliott et al. // Biochem.Pharinacol. 1992. - Vol.20, N.44. - P.1603-1608.

403. Inhibition of inducible isoforms of cyclooxygenase and nitric oxide synthase by flavonoid hesperidin in mouse macrophage cell line / K. Sakata et al. // Cancer. Lett. 2003. - Vol.199, N.2.-P.139-145.

404. Inhibition of inducible nitric oxide synthase and cyclooxygenase-2 expression by flavonoids in macrophage J774A.1 / G.M. Raso et al. // Life Sci. 2001. - Vol.68, N. 8. - P.921-931.

405. Inhibition of inducible nitric-oxide synthase expression by silymarin in lipopolysaccharide-stimulated macrophages / J.S. Kang et al. // J. Pharmacol. Exp. Ther. 2002.- Vol.302, N.l. -P.138-144.

406. Inhibition of lipopolysaccharide-induced nitric oxide production by flavonoids in RAW264.7 macrophages involves heme oxygenase-1 / H.Y. Lin et al. // Biochem. Pharmacol. -2003. Vol.66, N.9. - P. 1821-1832.

407. Inhibition of myeloperoxidase-catalyzed tyrosylation by phenolic antioxidants in vitro / Y. Kato et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. - Vol.67, N.5. - P.l 136-1139.

408. Inhibition of nitric oxide biosynthesis by anthocyanin fraction of blackberry extract / C. Pergola et al. //Nitric oxide. 2006. - Vol.15, N.l. - P.30-39.

409. Inhibition of nitric oxide production increases dimethylnitrosamine-induced liver injury in rats/ S. Nagase etal. //J. Hepatol. 1995. - Vol.23, N.5. - P.601-604.

410. Inhibition of nitric oxide synthase expression by a methanolic extract of Crescentia alanta and its derived flavonols / G. Autore et al. // Life Sci. 2001. - Vol.70, N.5. - P.523-534.

411. Inhibition of nitric oxide synthesis enhances the expression of inducible nitric oxide synthase mRNA and protein in a model of chronic liver inflammation / H. Luss et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1994. - Vol.204, N.2. - P.635-640.

412. Inhibition of pro-inflammatory markers in primary bone marrow-derived mouse macrophages by naturally occurring flavonoids: analysis of the structure-activity relationship / M. Comalada et al. //Biochem Pharmacol. 2006. - Vol.72, N.8. - P. 1010-1021.

413. Inhibition of rat liver UDP-glucuronosyltransferase by silymarin and the metabolite silibinin glucuronide / V. D'Andrea et al. // Life Sci.- 2005.- Vol.77, N.6.- P.683-692.

414. Inhibitory activity of flavonoids from Prunus davidiana and other flavonoids on total ROS and hydroxyl radical generation / H.A. Jung et al. // Arch. Pharm. Res. 2003. - Vol.26, N.10. -P.809-815.

415. Intracellular metabolism and bioactivity of quercetin and its in vivo metabolites / J.P.E. Spencer et al. // Biochem. J. 2003. - Vol.372, Pt.l.- P. 173-181.

416. Intrahepatic accumulation of nitrotyrosine in chronic viral hepatitis is associated with, histological severity of liver disease / C. Garcia-Monzon et al. // J. Hepatol. 2000.- Vol.32, N.2.-P.331-338.

417. Involvement of nuclear factor-kappaB in the inhibition of interleukin-12 production from mouse macrophages by baicalein, a flavonoid in Scutellaria baicalensis / B.Y. Kang et al. // Planta Med. 2003. - Vol.69, N.8. - P.687-691.

418. Isorhamnetin glycosides with free radical and ONOO'scavenging activities from the stamens of Nelumbo nucifera / S. K. Hyun et al. // Arch. Pharm. Res. 2006. - Vol.29, N.4. - P.287-292.

419. Jaeschke, H. Reactive oxygen and mechanisms of inflammatory liver injury / H. Jaeschke // J. Gastroenterol. Hepatol. 2001. - Vol.15, N.7. - P.718-724.

420. Janbaz, K.H. Studies on the protective effects of caffeic acid and quercetin on chemical-induced hepatotoxiciy in rodents / K.H. Janbaz, S.A. Saeed, A.H. Gilani // Phytomedicine.- 2004.-Vol.ll, N.5.- P.424-430.

421. Kachadourian, R. Flavonoids-unduced glutathione depletion: potential implications for cancer treatment / R. Kachadourian, B. Day // Free Radic. Bio. Med. 2006.- Vol. 1, N.41.- P.65-76.

422. Kanaze, F.I. A validated HPLC determination of the flavone aglycon diosmetin in human plasma / F.I. Kanaze, M.I. Bounartzi, I. Niopas // Biomed. Chromatogr. 2004. - Vol.18, N.10. -P.800-804.

423. Kandemir, O. Inducible nitric oxide syntase expression in chronic viral hepatitis and its relation with histological severity of disease / O. Kandemir, A. Polat, A. Kaya // J. Viral Hepat.-2002.- Vol.9, N. 6,- P. 419-423.

424. Karaa, A. Chronic ethanol sensitizes the liver to endotoxin via effects on endothelial nitric oxide synthase regulation / A. Karaa, W.S. Kamoun, M.G. Clemens // Shock.- 2005.- Vol.24, N.5.-P.447-454.

425. Kaur, G. Beneficial effect of hesperedin on lipopolysaccharide-induced hepatotoxicity / G. Kaur, N. Turkey, K. Chopra // Toxicology.- 2006,- Vol.226, N.2-3.- P. 152-160.

426. Kaviarasan, S. Fenugreek (Trigonella foenum graecum) seed polyphenols protect liver from alcohol toxicity: a role on hepatic detoxification system and apoptosis / S. Kaviarasan, C.V. Anuradha // Pharmazie. 2007. - Vol.62, N.4. - P. 299-304.

427. Keppler, K. Metabolism of anthocyanins and their phenolic degradation products by the intestinal microflora / K. Keppler, H.U. Humpf// Bioorg. Med. Chem. 2005. - Vol.13, N.17. -P.5195-5205.

428. Kessova, I. CYP2E1: biochemistry, toxicology,"regulation and function in ethanol-induced liver injury /1. Kessova, A.I. Cederbaum // Curr. Mol. Med. 2003. - Vol.3, N.6. - P.509-518.

429. Kinetics of radical- scavenging activity of hesperetin and hesperidin and their inhibitory activity on COX-2 expression / A. Hirata et al. // Anticancer Res. 2005. - Vol.25, N.57. - P.3367-3374.

430. Kmiec, Z. Cooperation of liver cells in health and disease / Z. Kmiec // Adv. Anat. Embriol. Cell Biol. 2001 .-Vol. 161, N.III-XIII. - P. 1 -151.

431. Kukielka, E. Increased production of reactive oxygen species by rat liver mitochondria after chronic ethanol treatment / E. Kukielka, E. Dicker, A.I. Cederbaum // Arch. Biochem. Biophys. -1994. Vol.309, N.2. - P.377-386.

432. Labrid, C. Pharmacologic properties of Daflon 500 mg / C. Labrid // Angiology. 1994. -Vol. 45, N.6 Pt.2. - P.524-530.

433. Lake-Bakaar, G. Nitric oxide and chronic HCV and HIV infections / G. Lake-Bakaar, D. Sorbi, V. Mazzoccoli//Dig. Dis. Sci. -2001. Vol.46,N.5. - P.1072-1076.

434. Lasker, J.M. In vitro and in vivo activation of oxidative drug metabolism by flavonoids / J.M. Lasker, M.T. Huang, A.H. Conney // J. Pharmacol. Exp. Ther. 1984. - Vol.229, N.l. - P. 162 -170.

435. Le Bon, A. Inhibition of microsome mediated binding of benzoa.pyrene to DNA by flavonoids either vitro or after dietary administration to rats / A. M. Le Bon, M. Siess, M. Suschetet // Chen-Bio- Interact.- 1992.- Vol.15, N. 83.-P. 65-71.

436. Lee, J.S. Supplementation of Pueraria radix water extract on changes of antioxidant enzymes and lipid profile in ethanol-treated rats / J.S. Lee // Clin. Chim. Acta. 2004. - Vol.347, N.l-2. -P. 121-128.

437. Lewinsky, R.H. Glucuronidation of bioflavonoids by human UGT1A10: structure-function relationships / R.H. Lewinsky, P.A. Smith, P.I. Mackenzie // Xenobiotica. 2005. - Vol.35, N.2. -P.l 17-129.

438. Lieber, C.S. Alcohol and the liver: metabolism of alcohol and its role in hepatic and extrahepatic disease / C.S. Lieber // Mt. Sinai J. Med. 2000. - Vol.67, N.l. - P.84-94. .

439. Lieber, C.S. Alcoholic fatty liver: its pathogenesis and mechanism of progression to inflammation and fibrosis / C.S. Lieber // Alcohol. 2004. - Vol.34, N.l. - P.9-19.

440. Lieber, C.S. Pathogenesis and treatment of alcoholic liver disease: progress over the last 50 years / C.S. Lieber // Rocz. Akad. Med. Bialymst. 2005. - Vol.50. - P.7-20.

441. Lieber, C.S. Role of oxidative stress and antioxidant therapy in alcoholic and nonalcoholic liver disease / C.S. Lieber // Adv. Pharmacol. 1997. - Vol.38. - P.601-628.

442. Lieber, C.S. The discovery of the microsomal ethanol oxidizing system and its physiologic and pathologic role / C.S. Lieber // Drug. Metab. Rev. 2004. - Vol.36, N.3-4. - P.511-529.

443. Lin, R. Protection of vascular endothelial cells from TNF-alpha induced injury by quercetin / R. Lin, W. Gan // Zhong Yao Cai. 2004. - Vol.27, N. 8. - P.597-599.

444. Lin, W.S. Superoxide and traditional Chinese medicines / W.S. Lin, W.C.L. Chan, C. S. Hew// J. Etlinopharmacol.-1995.-Vol.48,N.3. -P.165-171.

445. Loguercio, C. Oxidative stress in viral and alcoholic hepatitis / C. Loguercio, A. Federico // Free Radic. Biol. Med. 2003. - Vol.34, N.l. - P. 1-10.

446. Long-term combined administration of quercetin and daidzein inhibits quercetin-induced suppression of glutathione antioxidant defenses / E.J. Choi et al. // Food Chem. Toxicol. 2005. -Vol.43, N.5.- P.793-798.

447. Lotito, S.B. Relevance of apple polyphenols as antioxidants in human plasma: contrasting in vitro and in vivo effects / S.B. Lotito, B. Frei // Free Radic. Biol. Med. 2004. - Vol.36, N.2.-P.201-211.

448. Mantey, J.A. Biological properties of citrus flavonoids pertaining to cancer and inflammation / J.A. Mantey, K. Grohmann, N. Gutrie //Curr. Med. Chem. 2001. - Vol.8, N.2. -P.135 -153.

449. Masutani, H. Oxidative stress and redox imbalance in acetaminophen toxicity / H. Masutani // Pharmacogenomics J. 2001. - Vol.1, N.3. - P.165-166.

450. Mechanism of endothelium-dependent vasodilation and the antihypertensive effect of Brazilian red wine/ R.S. de Moura et al. // J. Cardiovasc. Pharmacol. 2004. - Vol.44, N.3. -P.302-309.

451. Mechanisms of apigenin 7- glucoside as a hepatoprotective agent / Q.S. Zheng et al. // Biomed. Environ. Sci. - 2005. - Vol.18, N.l. - P.65-70. .

452. Mechanisms of liver injury. III. Role of glutathione redox status in liver injury / D. Han et al. // Am. J. Physiol. Gastrointest. Liver Physiol. 2006. - Vol.291, N1. - P.G1-G7.

453. Mice lacking inducible nitric oxide synthase show strong resistance to anti-Fas antibody induced fulminant hepatitis / B. Chang et al. //Arch. Biochem. Biophys. 2003. - Vol.411, N. 1. -P. 63-72.

454. Middleton, E. Jr. Biological properties of plant flavonoids: an overview/ E. Jr.Middleton // Int. J. Pharmacognosy. 1996. - Vol.34, N. 5. - P.344-348.

455. Middleton, E. Jr. The effects of plant flavonoids on mammalian cells: implications for inflammation, heart disease, and cancer / E. Jr. Middleton, C. Kandaswami, T. Theoharides // Pharmacol. Rev. 2000. - Vol.52, N.4. - P.673-751.

456. Mihm, S. Hepatic expression of inducible nitric oxide synthase transcripts in chronic hepatitis C virus infection: relation to hepatic viral load and liver injury/ S. Mihm, A.Fayyazi, G.Ramadori // Hepatology. 1997,- Vol.26, N.2.- P. 451 - 458.

457. Mitochondrial function in liver disease / J. Sastre et al. // Front Biosci. 2007. - Vol.12, N.4. - P.1200-1209.

458. Miyake, T. Antioxidative activities of natural compounds found in plants / T. Miyake, T. Shibamoto // J. Agric. Food Chem. 1997. - Vol. 45, N.5. - P. 1819-1822.

459. Modulation of hepatic lipoprotein synthesis and secretion by taxifolin, a plant flavonoid / A. Theriault et al. // J. Lipid Research. 2000. - Vol.41, N. 7. - P. 1969-1978.

460. Modulation of peroxynitrite induced fibroblast by hesperetin: A role for intracellular scavenging and modulation of ERK signaling synergism / E. Susan et al. // Biochem. Biophysic. Res. Com. 2006. - Vol.347, N.3. - P.916-923.

461. Mohamadin, H. Green tea extract attenuates ciclosporine A- induced oxidative stress in rats / H. Mohamadin , A. El-Beshbishy, V. El-Mahdy // Pharmocol. Research. 2005. - Vol.51, N.l. -P.51-57.

462. Muriel, P. Beneficial drugs for liver diseases / P. Muriel, Y. Rivera-Espinoza // J. App. Toxicol. 2007. - Vol.28, N.2. - P.93-103.

463. Murota, K. Antioxidative flavonoid quercetin: implication of its intestinal absorption and metabolism / K. Murota, J. Terao // Arch. Biochem. Biophys. 2003. - Vol.417, N.l. - P.12-17.

464. NADPH oxidase-derived free radicals are key oxidants in alcohol-induced liver disease / H. Kono et al. // J. Clin. Invest. 2000. - Vol.106, N.7. - P.867-872.

465. Neutrophil-derived superoxide anion induces lipid peroxidation and stimulates collagen synthesis in human hepatic stellate cells: role of nitric oxide / A. Casini et al. // Hepatology. -1997. Vol.25, N.2. - P. 361 - 367.

466. New potent antioxidative hydroxyflavanones produced with Aspergillus saitoi from flavonone glycoside in citrus fruit / Y. Miyake et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. -Vol.67,N.7. -P. 1443-1450.

467. Niketic, V. Regulation of cell processes by reactive oxygen and nitric oxide species-mechanism of reactions / V. Niketic, S. Stojanovic, M.B. Spasic / Iugoslav. Physiol. Pharmacol. Acta. 1998. - Vol.34, N.2. - P.463-477.

468. Nitric oxide synthase expression is induced in hepatocytes in vivo during hepatic inflammation / D.A. Geller et al. // J. Surg. Res. 1993. - Vol.55, N.4. - P.427-432.

469. Ohkawa, H. Assay for lipid peroxides in animal tissues by thyobarbituric acid reaction / H. Ohkawa, N. Ochihi, K. Vagi // Anal. Biochem. 1979. - Vol.95, N.2. - P.351-358.

470. Oi, N. Metabolic conversion of dietary quercetin from its conjugate to active aglycone following the induction of hepatocarcinogenesis in fisher 344 rats / N. Oi, T. Hashimoto, K. Kanazava // J. Agric. Food Chem.- 2008,- Vol.56, N2.- P.577-583.

471. Okamoto, T. Expression of the inducible form of the nitric oxide synthase gene in the livers of mice with chronic hepatitis/ T. Okamoto, K.Yamamura, O. Ilino // Int. J. Mol. Med.- 2000.-Vol.6, N.3.- P.315-317.

472. Ong, KS. Insulinomimetic effects of myricetin on lipogenesis and glucose transport in rat adipocytes but not glucose transport translocation / K.S. Ong, H.E. Khoo // Biochem. Pharmacol. -1996. Vol.51, N.4. - P. 423-429.

473. Ouyang, M.A. Anti-oxidative activity of glycosides from Ligustrum sinense / M.A. Ouyang, Z.D. He, C.L. Wu //Nat. Prod. Res. 2003. - Vol.17, N.6. - P. 381-387.

474. Overexpression of manganese superoxide dismutase prevents alcohol-induced liver injury in the rat / M.D. Wheeler et al. // J. Biol. Chem. 2001. -Vol.276, N.39. - P.36664-36672.

475. Oxidation and rearrangements of flavanones by mammalian cytochrome P450 / H. Kagawa et al. // Xenobiotica. 2004. - Vol.34, N.9. - P.797-810.

476. Oxidative stress, metabolism of ethanol and alcohol-related diseases / T. Zima et al. // J. Biomed. Sci. 2001. - Vol.8, N.l. - P.59-70.

477. Oxidized quercetin reacts with thiols rather than with ascorbate: implication for quercetin supplementation / A.W. Boots et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2003. - Vol.308, N.3. -P.560-565.

478. Ozgova, S. Different antioxidant effects of polyphenols on lipid peroxidation and hydroxyl radicals in the NADPH-, Fe-ascorbate- and Fe-microsomal system / S. Ozgova, J. Hermanek, I. Gut // Biochem. Pharmacol. 2003. - Vol.66, N.7. - P. 1127-1137.

479. Pari, L. Influens of naringenin on oxytetracycline mediated oxidative damage in rat liver / L. Pari, M. Gnanasoundari // Basic Clin. Pharmaco. Toxicol. 2006. - Vol.98, N. 5. - P.456-461.

480. Paulikova, H. The effects of quercetin and galangin on glutathione reductase / H. Paulikova, E. Berczelova // Biomed. Pap. Med. Fac. Univ. Palacky. Czech. Repub. 2005. - Vol. 149, N.2. -P.497-500.

481. Peng, I.W. Flavonoid structure affects the inhibition of lipid peroxidation in Caco-2 intestinal cells at physiological concentrations / I.W. Peng, S.M. Kuo // J. Nutr.- 2003.- Vol.133, N.7.- P. 2184-2187.

482. Pharmacological effects of flavonoids from Scutellaria baicalensis / E. Kowalczyk et al. // Przegl. Lek. 2006. - Vol.63, N.2. - P.95-96.

483. Phenolics-rich extracts from Silybin marianum and Prunella vulgaris reduce a high-sucrose diet inducedoxidative stress in hereditary hypertriglyceridemic rats / N. Skottova et al. // Pharmacol Res. 2004. - Vol.50, N.2. - P.123-130.

484. Pietta, P.G. Flavonoids as antioxidants / P.G. Pietta // J. Nat. Prod. 2000. - Vol.63, N.7.-P. 1035-1042.

485. Plant-derived polyphenols attenuate lipopolysaccharide-induced nitric oxide and tumour necrosis factor in murine microglia and macrophages / K. Shanmugam et al. // Mol. Nutr. Food Res. 2008. - Vol.52, N.4. - P.427-438.

486. Plasma kinetics and urinary excretion of the flavanones naringenin and hesperetin in humans after ingestion of orange juice and grapefruit juice / I. Erlund et al. //J. Nutr. 2001. - Vol.131, N.2. - P.235-241.

487. Plasma quercetin metabolites: structure-antioxidant activity relationships / G.C. J. Moskaug et al. // Arch. Biochem. Biophys. 2004. - Vol.432, N.l. - P. 109-121.

488. Polyphenol antioxidants in citrus juices: in vitro and in vivo studies relevant to heart disease / J.A. Vinson et al. // Adv. Exp. Med. Biol. 2002. - Vol.505, N.2. - P. 113-122.

489. Polyphenols and endogenous antioxidant defences: effects on glutathione and polyphenol related enzymes /C. Giovannini et al. //Ann. 1st. Super. Sanita. 2006. - Vol.42, N.3. - P.336-347.

490. Polyphenols and glutathione synthesis regulation / J. Moskaug et al. // Am. J. Clin. Nutr. -2005. Vol.81, N.l.- P.277-283.

491. Potapovich, A.I. Comparative study of antioxidant properties and cytoprotective activity of flavonoids / A.I. Potapovich, V.A. Kostyuk // Biochemistry (Mosc). 2003. - Vol.68, N.5. - P.514-519.

492. Pradhan, S.G. Hepatoprotective herbal drug, silymarin from experimental pharmacology to clinical medicine / S.G. Pradhan, C. Girish // Indian J. Med. Res. 2006. - Vol.124, N.5.- P.491-504.

493. Prenylated flavonoids from the roots of Sophora flavescens with tyrosinase inhibitory activity / J.K. Son et al. // Planta Med. 2003. - Vol.69, N.6. - P. 559 - 561.

494. Prevention of reactive oxygen species-induced oxidative stress in human microvascular endothelial cells by green tea polyphenol / D.K. Rah et al. // Toxicol Lett. 2005. - Vol.155, N. 2.-P.269-275.

495. Prior, R.L. Fruits and vegetables in the prevention of cellular oxidative damage / R.L. Prior // Am. J. Clin. Nutr. 2003. - Vol.78, N.3.- P.570-578.

496. Prooxidant toxicity of polyphenolic antioxidants to HL-60 cells: description of quantitative structure-activity relationships / E. Sergediene et al. // FEBS Letters. 1999. - Vol.462, N.3. -P.392-396.

497. Pro-oxidative properties of flavonoids in human lymphocytes / G.C. Yen et al. // Biosci. Biotechnol. Biochem. 2003. - Vol.67, N.6. - P.1215-1222.

498. Protection against acetaminophen-induced liver injury and lethality by interleukin 10: role of inducible nitric oxide syntase / M. Bourdi et al. // Hepatology. 2002. - Vol.35, N.2. - P.289-298.

499. Protective effects of a purified flavonoid fraction against reactive oxygen radicals. In vivo and in vitro study /M. Lonchampt et al. // Arzneimittelforschung. 1989. - Vol.39, N.8. -P.882-885.

500. Protective effects of baicalein on tert-butyl hydroperoxide-induced rat hepatotoxicity / J.M. Hwang et al. // Arch. Toxicol. 2005. - Vol.79, N.2. - P. 102-109.

501. Protective effects of cyanidin-3-O-glucoside from blackberry extract against peroxynitrite-induced endothelial dysfunction and vascular failure /1. Serraino et al. // Anticancer Res. 2003. -Vol.73,N.9.-P. 1097- 1144.

502. Protective effects of flavonoids contained in the red vine leaf on venular endothelium against the attack of activated blood components in vitro / S. Nees et al.// Arzneimittelforschung. -2003,- Vol.73, N.12. P. 1599- 1607.

503. Puntarulo, S. Interaction of 1-hydroxyethyl radical with antioxidant enzymes / S. Puntarulo, D.A. Stoyanovsky, A.I. Cederbaum // Arch. Biochem. Biophys. 1999. - Vol.372, N.2. - P.355-359.

504. Puppo, A. Effect of flavonoids on hydroxyl radical formation by fenton-type reactions; influence of the iron chelator / A. Puppo // Phytochemistry. 1992. - Vol.31, N.l. - P.85-88.

505. Quantitative structure-activity relationship analysis of phenolic antioxidants / E.J. Lien et al. // Free Radic. Biol. Med. 1999. - Vol.26, N.3/4. - P.285-294.

506. Quercetin decreases oxidative stress, NF-kappaB activation, and iNOS overexpression in liver of streptozotocin-induced diabetic rats / A.S. Dias et al. // J. Nutr. 2005. - Vol: 135, N.10. -P.2299-2304.

507. Quercetin is recovered in human plasma as conjugated derivatives which retain antioxidant properties / C. Manach et al. // FEBS Lett. 1998. - Vol.426, N.3. - P. 331-336.

508. Quercetin prevents DNA single strand breakage and cytotoxicity caused by tert-butylhydroperoxide: free radical scavenging versus iron chelating mechanism / P. Sestili et al. // Free Radic. Biol. Med. 1998. - Vol.25, N.2. - P. 196-200.

509. Quercetin, a flavonoid antioxidant, prevents and protects against ethanol-induced oxidative stress in mouse liver / M.F. Molina et al. // Biol. Pharm. Bull.- 2003.- Vol.26, N.10.- P.1398-1402.

510. Quercitrin, a glycoside form of quercetin, prevents lipid peroxidation in vitro / C. Wagner et al. // Brain Res. 2006. - Vol.1107, N.l. - P. 192-198.

511. Rajesh, M.G. Protective activity of Glycyrrhiza glabra Linn, on carbon tetrachloride-induced peroxidative damage / M.G. Rajesh, M.S. Latha // Indian J. Pharmacol.- 2004.- Vol.36, N.5.- P. 284-287.

512. Ramaiah, S.K. Role of neutrophils in the pathogenesis of acute inflammatory liver injury / S.K. Ramaiah, H. Jaeschke // Toxicol. Pathol. 2007. - Vol.35, N. 6. - P. 757 - 766.

513. Rammelet, A.A. Daflon 500mg: symptoms and edema clinical update / A.A. Rammelet // Angiology. -2005. Vol.56, N.l. - P.25-32.

514. Reactivity of flavonoids with 1-hydroxyethyl radical: a y-radiolysis study / A. Marfak et al. // Biochim. Biophys. Acta. 2004. - Vol.1670, N.l. - P.28-39.

515. Red wine polyphenols enhance endothelial nitric oxide synthase expression and subsequent nitric oxide release from endothelial cells / J.F. Leikert et al. // Circulation.- 2002,- N.106.- P.1614 -1617.

516. Red wine polyphenols prevent endothelia damage induced by CCI4 administration / P. Babal et al. // Physiol. Res. 2006. - Vol.55, N.3. - P.254-251.

517. Regulative actions of dietary soy isoflavone on biological antioxidative system and lipid metabolism in rats / Y. Kawakami et al. // J. Agric. Food Chem. 2004. - Vol.52, N.6.- P. 17641768.

518. Relative bioavailability of the antioxidant flavonoid quercetin from various foods in man / P.C. Hollman et al. // FEBS Letter. 1997. - Vol.418, Nl-2! - P.152-156.

519. Rice-Evans, C. Flavonoid antioxidants / C. Rice-Evans // Curr. Med. Chem. 2001. - Vol.8, N.7. - P.797-807.

520. Role of naringinin supplement in regulation of lipid and ethanol metabolism in rats / H.G. Seo et al. // Life Sci. 2003. - Vol.73, N.7. - P.933-946.

521. Role of nuclear factor-kB and heme oxygenase-1 in the mechanism of acion of an antiinflammatory chalcone derivative in RAW 264,7 cells / M. Alcaraz et al. // Br. J. Pharmacol.-2004,- Vol.142, N.7. P.l 191-1199.

522. Sahu, S.C. Lipid peroxidation and DNA damage induced by morin and naringenin in isolated rat liver nuclei / S.C. Sahu, G.C. Gray // Food Chem. Toxicol.- 1997.-Vol.35, N.5.- P.443-447.

523. Sahu, S.C. Pro-oxidant activity of flavonoids: effects on glutathione and glutathione S-transferase in isolated rat liver nuclei / S.C. Sahu, Gray G.C. // Cancer. Lett. 1996. - Vol.104, N.I.-P.193-196.

524. Santos, M. Protection by flavonoids against peroxynitrite-mediated oxidation of dihydrorhodamine / M. Santos, L. Mira // Free Radic. Res. 2004. - Vol.38, N.9.- P.1011-1018.

525. Scalbert, A. Dietary intake and bioavailability of polyphenols / A. Scalbert, G. Williamson // J. Nutr. 2000. - Vol.130, N.8S. - P.2073S-2085S.

526. Sedeghipour, M. Flavonoids and tyrosine nitration: structure-activity relationship correlation with enthalpy of formation / M. Sedeghipour, R. Terreux, J. Phipps // Toxicol. In Vitro. 2005. -Vol.19, N.2. - P.155-165.

527. Select flavonoids and whole juice from purple grapes inhibit platelet function and enhance nitric oxide release / J.E. Freedman et al. // Circulation. 2002. - Vol.103, N.23. - P.2792-2798.

528. Seyoum, A. Structure-radical scavenging activity relationships of flavonoids / A. Seyoum, K. Asres, F.K. El-Fiky // Phytochem.- 2006,- Vol.67, N/11.- P. 2058-2070.

529. Shisheva, A. Quercetin selectively inhibits insulin receptor function in vitro and the bioresponses of insulin and insulinomimetic agents in rat adipocytes/ A. Shisheva, Y. Shechter // Biochem.- 1992.- Vol.31, N.34.- P.80-59.

530. Short-term administration of (-)-Epigallocatechin gallate reduces hepatic steatosis and protects against warm hepatic ishemia/reperfusion injury in steatotic mice / R.N. Fiorini et al. // Liver Transpl. 2005. - Vol.11, N.3. - P.298-308.

531. Silybin-beta-cyclodextrin in the treatment of patients with diabetes mellitus and alcoholic liver disease. Efficacy study of a new preparation of an anti-oxidant agent / F. Lirussi et al. // Diabetes Nutr. Metab. 2002. - Vol.15, N.4. - P.222-231.

532. Simultaneous detection of the antioxidant and pro-oxidant activity of dietary polyphenolics in a peroxidase system / T.S. Chan et al. // Free Radic. Res. 2003. - Vol.37, N.7.- P.787-794.

533. Spencer, J.P. Metabolism of tea flavonoids in the gastrointestinal tract / J.P. Spencer // J. Nutr. 2003. - Vol.133, N.10. - P.3255-3261.

534. Stamler, J.S. Biochemistry of nitric oxide and its redox-activate forms / J.S. Stamler, D. J. Singel, J.Loscalzo // Science.- 1992.- N. 258,- P. 1898-1902.

535. Structure-activity relationship of novel inhibitor of glyceraldehydes-3-phosphate dehydrogenese / A. Leitao et al. // Bioorg. Med. Chem. Lett. 2004,- Vol.14, N.9.- P.2199-21204.

536. Structure-property studies on the antioxidant activity of flavonoids present in diet / S. Teixeira et al. // Free Radic. Biol. Med. 2005. - Vol.39, N.8. - P. 1099-1108.

537. Studies on protective effect of total flavonoids of Astragalus on liver damage paracetamol-inducedby / D.Q. Wang et al. // Zhongguo Zhong Yao Za Zhi. 2001. - Vol.26, N.7. - P.483-486.

538. Superoxide radical and peroxynitrite - scavenging activity of anthocyanis; structure-activity relationship and their synergism / M. Rahman et al. // Free Radie. Res. - 2006. - Vol.40, N.9. - P.993-1002.

539. Supression of inducible cyclooxygenase and nitric oxide synthase through activation of peroxicome proliferator-activated receptor-gamma by flavonoids in mouse macrophages / Y.C. Liang et al. // FEBS Lett. 2001. - Vol.496, N.l. - P. 12-18. '

540. Sureshkumar, S.V. Hepatoprotective effect of extracts from Pergularia daemia Forsk / S.V. Sureshkumar, S.H. Mishra // J. Ethnopharmacol. 2006. - Vol.107, N.2. - P.164-168.

541. Szewczyk, A. Mitochondria as a pharmacological target / A. Szewczyk, L. Wojtczak // Pharmacol. Rev. 2002. - Vol.54, N.l. - P.101-127.

542. Tang, Z.J. Alterations in insulin receptor in injured rats and the effects of dexamethasone and silybin / Z.J. Tang // Zhonghua Zheng Xing Shao Shang Wai Ke Za Zhi. 1991. - Vol.7, N.3. -P.214-217.

543. Taxifolin ameliorates cerebral ischemia-reperfusion injury in rats through its anti-oxidative effect and modulation of NF-kappa B activation / Y.H. Wang et al. // Biomed Sci. 2006. -Vol.13, N.l.-P.127-141.

544. The action of quercetin on the mitochondrial NADH to NAD (+) ratio in-the isolated perfused rat liver / G.D. Buss et al.//Planta Med. -2005. Vol.71, N.12. - P.1118-1122.

545. The course of induction of rat hepatic drug metabolizing enzyme activities following dietary administration of flavonoids / M.H. Siess et al. // J. Toxicol. Environ. Health. 1996. - Vol.49, N.5.- P.481-496.

546. The effect of citrus flavonoids on the redox state of alimentary-induced fatty liver in rats / E. Rapavi et al. // Nat. Prod. Res. 2007.- Vol.21, N.3.- P.274-281.

547. The effect of flavonoids on rat heart mitochondrial function / S. Trumbeckaite et al. // Biomed. Pharmacoter. 2006.- Vol.60, N.5.- P.245-248.

548. The effect of polyphenolic extract from pine bark, on the Pycnogenol level of glutathione in children suffering from attention deficit hyperactivity disorder (ADHD) / M. Dvorakova et al. // Redox Rep.- 2006.- Vol.11, N.4.- P.163-172.

549. The flavonoids effect against vinblastine, cyclophosphamide and paracetamol toxicity by inhibition of lipid-peroxidation and increasing liver glutathione concentration / M. Lahouel et al. // Pathol. Biol (Paris). 2004.- Vol.52, N.6.- P.314-322.

550. The hepatic inffammatory response after acetaminophen overdose: role of neutrophils / J.A. Lawson et al. // Toxicol.Sci. 2000. - Vol.54, N.l. - P.509-516.

551. The hypoglycemic effects of hesperidin and naringin are partly mediated by hepatic glucose-regulating enzymes in C57BL/KsJ-db/db mice / U.J. Jung et al. // J. Nutr. 2004. - Vol.134, N.10.- P.2499-2503.

552. The immunomodulation of endotoxin-induced acute lung injury by hesperidin in vivo and in vitro / C.-C.Yeh etal. //Life sci. -2007. Vol.80,1.20.-P. 1821-1831.

553. The interaction of flavonoids with mitochondria: effects on energetic processes / D.G. Dorta et al. // Chem. Biol. Interact. 2005. - Vol.152, N.2-3. - P.67-78.

554. The interaction of new plant flavonoids with rat liver mitochondria: relation between tue anti- and pro-oxydant effect and flavonoids concentration / M. Lahouel et al. 11 Therapie. 2006.-Vol.61, N.4.- P.347-355.

555. The intestinal anti-inflammatory effect of quercetin is associated with an inhibition in NOS expression / D. Camuesco et al. // Br. J. Pharmacol. 2004. - Vol.143. - P.908-918.

556. The mitochondrial permeability transition contributes to acute ethanol-induced apoptosis in rat hepatocytes / H. Higuchi et al. // Hepatology. 2001. - Vol.34, N.2. - P.320-328.

557. The multiple organ dysfunction syndrome caused by endotoxin in the rat: attenuation of liver dysfunction by inhibitors of nitric oxide synthase / C.Thiemermann et al. // Br. J. Pharmacol. 1995. - Vol.116, N.7. - P.2845-2851.

558. The phytoestrogen equol increases nitric oxide availability by inhibiting superoxide production: an antioxidant mechanism for cell-mediated LDL modification / J. Hwang et al. // Biol. Pharm. Bull. 2003. - Vol.26, N.5. - P.747-751.

559. The plant flavonoid wogonin suppresses death of activated C6 rat glial cells by inhibiting nitric oxide production / H. K. et al. //Neurosci. Lett. 2001. Vol.309, N.I.- P.67-71.

560. The procyanidin-induced pseudo laminar shear stress response: a new concept for the reversal of endothelial dysfunction / R. Corder et al. // Clin. Sci. 2004. - Vol.107, N.5. - P.513-517.

561. The reaction of flavonoids metabolites with peroxynitrite /S. Pollard et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. 2006. - Vol.350, N.4. - P.960 -968.

562. The structure-activity relationship of flavonoids as scavengers of peroxynitrite / J.S. Choi et al. // Phytother. Res.- 2002,- Vol.16, N.3.- P.232-235

563. The structure-activity relationships of flavonoids as inhibitors of cytochrome P-450 enzymes in rat liver microsomes and the mutagenicity of 2-amino-3-methyl-imidazo4,5f. guinoline / H. Lee [et al.] // Mutagenesis.-1994.-Vol.9, N. 2,- P.101-106.

564. Thirunavukkarasu, V. Protective effect of fenugreek seeds in experimental ethanol toxicity / V. Thirunavukkarasu, C.V. Anuradha, P. Vismanathan // Phytother. Res. 2003. - Vol.17, N.7.-P.737-743.

565. Treatment of metastatic melanoma B16F10 by the flavonoids tangeretin, rutin and diosmin / Martinez C.C. et al. //J. Agric. Food. Chem. 2005. - Vol.53, N.17. - P.6791-6797.

566. Uchiyama, M. Determination of Malonaldehyde Precursor in Tissues by Thiobarbituric Acid Test / M. Uchiyama, M. Mihara // Anal. Biochem. 1978. - Vol.94, N.86. - P.271-278.

567. Uses and properties of Citrus flavonoids / O. Benavente-Garcia et al. // J. Agr. and Food Chem. 1997. - Vol.45, N.12. - P.4506-4514.

568. Vera, M.E. Hepatic inducible oxide synthase: regulation and function / M.E. de Vera, D.A. Geller, T.R. Billiar// Biochem. Soc. Trans. 1995. - Vol.23, N.l. - P.1008-1013.

569. Victorrajmohan, C. Influence of silymarin administration on hepatic glutathione-conjugating enzyme system in rats treated with antitubercular drugs / C. Victorrajmohan, K. Pradeep, S. Karthikeyan // Drags R. D.- 2005.- Vol.6, N.6.- P.395-400.

570. Wang, H. Structure-activity relationships of quercetin in antagonizing hydrogen peroxide-induced calcium dysregulation in PC 12 cells / H. Wang, J.A. Joseph // Free Radic. Biol. Med. -1999. Vol.27, N.5/6.- P.683-694.

571. Wang, Y.K. Protective effects of silybin on human umbilical vein endothelial cell injury induced by H2O2 in vitro / Y.K. Wang, Y.J. Hong, Z.Q. Huang // Vascul. Pharmacol. 2005. -Vol.43, N.4. - P. 198-206.

572. Wheeler, M.D. Endotoxin and kupffer cell activation in alcoholic liver disease / M.D. Wheeler// Alcohol Res. Health. 2003. - Vol.27, N.4. - P.300-306.

573. Wilmsen, P.K. Antioxidant activity of the flavonoid hesperidin in chemical and biological systems / P.K. Wilmsen, D.S. Spada, M. Salvador // J. Agric. Food Chem. 2005. - Vol.53, N.12. -P.4757-4761.

574. Wine polyphenols and ethanol do not significantly scavenge superoxide nor affect endothelial nitric oxide production / A. Huisman et al. // J. Nutr. Biochem. 2004. - Vol.15, N.7. -P.426-432.

575. Woo, A.Y. Baicalein protects rat cardiomyocytes from hypoxia/reoxygenation damage via a prooxidant mechanism / A.Y. Woo, C.H. Cheng, M.M. Waye // Cardiovasc. Res. 2005. - Vol.65, N.l. - P.244-253.

576. Woodman, O.L. Vasorelaxant and antioxidant activity of flavonols and flavones: structure-activity relationship / O.L. Woodman, W.F. Meeker, M. Boujaoude // J Cardiovasc Pharmacol. -2005. Vol.46, N.3.- P.302-309.

577. Wu, D. Alcohol, oxidative stress and free radical damage / D. Wu, A.I. Cederbaum // Alcohol Res. Health. 2003. - Vol.27, N.4. - P.277-284.

578. Yamamoto, M. Short-term effects of glucosyl hesperidin and blood pressure and vascular endothelial function in spontaneously hypertensive rats / M. Yamamoto, A. Suzuki, T. Hase // J. Nutr. Sci. Vitaminol. 2008. - Vol.54, N.l. - P.95-98.

579. Yamanaka, N. Gren tea catechins such as (-) epicatechin and (-) epigallocatechin accelerate Cu -induced low density lipoprotein oxidation in propagation phase / N. Yamanaka, O.Oda, S. Nagao S. // FEBS Lett.- 1997.- Vol.401, N.2-3.- P.230-234.

580. Yen, G.C. Inhibition of reactive nitrogen species effects in vitro and in vivo by isoflavones and soy-based food extracts / G.C. Yen, H.H. Lai // J. Agric. Food Chem.- 2003.- Vol.51, N.27.-P.7892-7900.

581. Zhang, L. Involvement of UDP-glucuronosyltransferases in the extensive liver and intestinal first-pass metabolism of flavonoid baicalein / L. Zhang, G. Lin, Z. Zuo // Pharm. Res.- 2007.-Vol.24, N.l.- P.81-89.

582. Zima, T. Oxidative stress and signal transduction pathways in alcoholic liver disease / T. Zima, M. Kalousova//Alcohol Clin. Exp. Res. 2005. - Vol.29, N.l 1,- P.110S-115S.

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.06) на тему:Гепатопротекторные свойства флавоноидов

Автореферат диссертации по медицине на тему Гепатопротекторные свойства флавоноидов

Оглавление диссертации Доркина, Елена Григорьевна :: 2010 :: Волгоград

Введение диссертации по теме "Фармакология, клиническая фармакология", Доркина, Елена Григорьевна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Гепатопротекторные свойства флавоноидов"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Доркина, Елена Григорьевна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций