Автореферат диссертации по медицине на тему Экспериментальное изучение влияния жирового компонента рациона на некоторые реакции и структуру иммунокомпетентных органов
АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК СССР ИНСТИТУТ ПИТАНИЯ
На правах рукописи УДК 613.2 : 612.017 : 576.2 : 577.1
ХАЙРОВ Хотамбег Сайфндннович
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИЗУЧЕНИЕ ВЛИЯНИЯ ЖИРОВОГО КОМПОНЕНТА РАЦИОНА НА НЕКОТОРЫЕ РЕАКЦИИ И СТРУКТУРУ ИММУНОКОМПЕТЕНТНЫХ
ОРГАНОВ
(14.00.07 — гигиена)
АВТОРЕФЕРАТ
диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук
Москва 1988
Работа выполнена в Институте питания Академии медицинских наук СССР.
Научный руководитель:
член-корреспондент АМН СССР, доктор медицинских паук, профессор М. Н. ВОЛГАРЕВ
Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор Б. Б. ПЕРШИН, доктор медицинских наук В. М. КРАСНОПЕВЦЕВ.
Ведущая организация: Ордена Трудового Красного Знамени Научно-исследовательский институт общей и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысниа.
Защита состоится «............» .............................. 1988 г. в ............час.
на заседании специализированного совета Д 001.02.01 при Институте пптаиня АМН СССР (109240, Москва, Устнпский ирсезд, 2/14).
С дисссртагпен можно ознакомиться в библиотеке Института питания АМН СССР.
Автореферат разослан «............» .................................... 1888 г.
Ученый секретарь специализированного совета
кандидат медицинских наук И. И. КНЯЗЕВ
Актуальность проблемы, Роль ишунной оистевд и иммунологической .реактивности в обеспечении устойчивости гомеостаэа и сохранении здоровья хорошо известна. Многими исследованиями последних лет вскрыты примеры конкретных воздействий питания на состояние и реакции иммунокошетентной системы. В этих исследованиях менее всего изучен характер влияния на иммунную систему той группы нутряентов, которые объединяются названием липиды ' (особенно в сравнении с изученностью влияния на имдунную систему нутряентов, входящих в группу пищевых белков). В проблеме "липвды и иммунный ответ" могут быть выделены несколько актуальных вопросов, касающихся выяснения влияния жиров на конкретные звенья и реакции ишунокомпетентной системы. Особое внимание привлекает вопрос о влиянии жирового компонента в рационе, определяемого наличием различных по количеству и химической формуле а: лийвнасыщешшх жирных кислот (1ПЖК), на характер и функциональное значение реакций иммунокомпетентной системы. Современные публикации (Johnston т.р. , a. Ch'uidra '¡.it,, 1985, Х986) под— твервдают это. Актуальность проблемы "пищевые жиры и реакции иммунной системы" в настоящее время определяется тем, что •еоли роль липидов в возникновении и патогенезе ряда распространенных заболеваний (сердечно-сосудистых, онкологических, диабете и др.) хорошо установлена, то иммунологические механизмы в связи с возможным на них влиянием пищевых жиров пока остаются неизученными.
Целью настоящей работы явилось изучение влияния различных пищевых жиров (сливочное масло; кулинарный жир, содержащий трансизомеры жирных кислот; жир сардин "Иваси"; подсолнечное масло в сочетании с лярдом), отличающихся по количеству и
соотношению в них ПНЖК омега 6 и омега 3, на некоторые функции !г- и В- систем иммунитета (реакции гиперчувствителъности замедленного типа и антителеобразугацих' клеток), а также на бактериальную резистентность кз.турЫшиг 1иа. Наряду с этим исследовалась гистологическая структура отдельных иммунокомпетентных органов-селезенки, пейеровых бляшек и брыжеечных лимфатических узлов.
Научная новизна работы определяется следующими основными ее результатами. Впервые проведено сравнительное изучение состояния иммунной системы и иммунологической реактивности (реакции гиперчувствителъности замедленного типа и антителообразукь щих клеток; бактериальной резистентности RS.Typhiiuurj.Uiii; гистологической структуры иммунокомпетентных органов) и жирнокислот-ного состава тканей лгмфовдшх органов при различных пищевых жирах в экспериментальных диетах, различных уровнях ПНЖК в этих диетах и различных пропорциях в содержании полиненасыщенных жирных кислот семейств омега 6 и омега 3.
Установлено, что даже при низком содержании жира в рационе специфические особенности жирового компонента и величина соотношения содержащихся в нем ПНЖК омега 6 и омега 3 оказывают влияние на иммунную систему организма.
Впервые выявлено, что для реакции аитителообразования существенное значение тлеет не только общее количество ПНЖК в рационе, но и определенные соотношения представителей семейств омега 6 и омега 3.
Обнаружена прямая зависимость мезду выживаемостью экспериментальных животных при их заражении ¡¿.турМ-нгаголиа и уменьшением в .¿ищевом рационе соотношения 1ШК омэга 6 к омега 3.
Между содержанием ПНЖК в рационе и морфологической пере- •. стройкой в иммунокомпетентных органах выявлена обратная зависи-
мость: погашение уровня ПНЖК сопровождалось увеличением площади фолликулов селезенки и лимфатических узлов.
Теоретическое и практическое значение работа. Результаты исследований впервые показывают, что влияние полиненасыщенных жирных кислот на иммунную систему и иммунологическую реактивность определяется не только величиной их суммарного содержания в рационе, но и в неменьшей мере размером соотношения ПНЖК семейств лннолевойаливоленовой кислот. Тем самым устанавливается причинная взаимосвязь глеаду аирами пищи, синтезом простаглавдинов (поскольку определенные жиры влияют на этот синтез) и иммунологической реактивностью.
Заданные изменения в химическом составе жирового компонента должны применяться при разработке жировых продуктов высокой пищевой ценности', специальных лечебных диет, а также могут быть использованы в качестве эффективного иммуно модулируютего воздействия.
Практическая значимость результатов работы соотоит также в получении одного из экспериментальных обоснований для диффе- ' ренцированного нормирования содержания в рационах питания ПНЖК омега 6 и омега 3. Вопрос о необходимости раздельного нормирования ШИК омега 6 и омега 3, обусловленный установлением различий их зссенциальной роли в процессах жизнедеятельности, приобретает в настоящее время актуальность в плане совершенствования рекомендаций по рациональному питанию и становится предметом научного обсуждения на.международной уровне.
Наконец, отмеченные изменения, в иммунологическом статусе могут быть использованы в качестве обоснований критериев при оценке физиологической и клинической адекватности жировой части рационов и диет.
Апробация работы. Основные положения диссертации доложены на конференции "Актуальные вопросы стандартизации лабораторных животных для медико-биологических наследований" (г.Москва, 1987), на Всесоюзном симпозиуме по биохимии липидов (г.Алма-Ата, 1987), на научной мезинститутской конференции молодых специалистов "Актуальные проблемы науки о питании" (г.Москва, 1988). По теме диссертации опубликованы три работы.
Объем и структура диссертации. Диссертация изложена ка 117 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, двух глав результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов и библиографического указателя, включающего 213 источников, из которых IG8 иностранных. Работа иллюстрирована 9 таблицами и 7 рисунками.
СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ
Материалы и методы исследования. В работе были использованы 825 мышей линии СБА и гибриды Gg^Bl/CBA обоих полов с исходной массой 2I¿I г. 4 группы животных получали экспериментальные рационы с одинаковым количеством (из расчета на 100 г сухой смеси) казеина - 22,6 г , крахмала маисового - 63,3 г сухих пивных дрожжей - источник витаминов группы В - 5,7 г и отличались по жировой части исследованных пищевых смесей. Величина вводимого в рационы жира составляла 4,7 г на 100 г смеси, или 10% от общей калорийности рациона. В 1-й группе (контроль) жир был представлен лярдом и подсолнечным маслом в равных соотношениях, П-я группа мышей получала сливочное масло, животные Ш-ей группы содержались на кулинарном жире "Эра", 1У-я группа мышей потребляла жир сардин "Иваси". У-я группа животных содержалась
на малобелковой диете: при том же (кроме белка и углеводов) составе, что к в предыдущих четырех рационах, доля белка была значительно снижена за счет увеличения углеводов (казеин - 3,8 г, крахмал - 81,8 г, сливочное масло - 4,7 г на 100 г смеси). Во все диеты добавлялись жирорастворимые витамины в количестве: 5 мг/ЮО г вит.Е, 8 тыс. ИЕ/100 вит,А, 2,5 тыс. ИЕ/100 г вит. Д, а также необходимые минеральные добавки в виде смеси Джонса-- Фостера - 4 г/100 г смеси.
Содержание 1ШЯК семейства омега 6 и омега 3 в контрольном и опытных рационах представлено в табл. I.
Для оценки функционирования B-системы иммунитета определя*-ли количество антителообразущих клеток селезенки (АОК) по ментолу Coninjh' 1.1 л. л.. , 1965 (модифицированный метод Ерне),
Для оценки Т-системы иммунитета исследовали реакцию гипер-чувствителъности замедленного типа (ГЗТ) ( ые-.v s\v. , 1977)'.
Для изучения бактериальной резистентности мышей после 21 дня кормленая экспериментальными диетами их заражали1 внут-рибрюшшшо (Ю4 микробных клеток на мышь) S.TyphiaurjLua . Учет табеля животных проводили в течение 21 дня посла заражения. Исходя из' данных об избирательном поражении при этой инфекции лимфатического аппарата кишечника и брыжеечных лимфатических узлов, одновременно с бактериальной резистентностью нами исследовался жирокислотный состав тканей иммунокомпетентких органов. Липиды лимфоцитов, брыжеечных лимфатических узлов, селезенки, пейеровых блдаек экотрагирозалггсь смесью хлороформ -метанол (2:1) по Foicti J.,eb ei . (1957). Липвды диет извлекались по аналогичному методу. Из общих липвдных экстрактот получали метиловые эфира жирных кислот по Кейтс Т. (1975)',.
состав которых определяли методом газо-жвдкостиой хроматографии (Герасимова E.H. и др., 1986). Лимфоциты выделяли из сыворотки крови по Чередееву А.Н. (1976).
• Таблица I
Состав ПНЕК омега 6 и омега 3 в рационах (в % суммы всех .жирных кислот)
j Источники жира в рационах
Жирные ---
ииллпти*) I °месь лярда ! сливочное! кулинарный¡рыбий жир 0 ! и подсолнеч-! масло ! жир "Эра" цнир
! ного масла ! ! ¡"Иваси") _!_1_!_]_
18:2м G 35,5 11,6 24,3 13,3
I8i3u3 0,35 0,17 0,7 4,5
20:4w6 0,3 0,6 0,4 следы
20:5w3 следы 0,12 0,1 10,9 (22:6 3,4)
Суша ПНЖКмб 35,8 11,77 24,7 13,3
Суша ШШСозЗ 0,35 0,29 0,8 20,2-
Соотношение Ш5ЖК-~|- 102 40,6 30,8 0,66
31 ^ Код для обозначения «ирных кислот: первое число - количество атомов углерода в молекуле кислоты, второе число - число двойных связей. и> - принадлежность жирной кислоты к семейству.
Для изучения гистологической структуры' кммунокомпетентных органов в каждой группе у 5-6 животных на секции брали кусочки селезенки, пейеровы бляшки и брыжеечные лимфатические узлы, из которых готовили гистологические срезы толщиной 5-6 микрон. Препараты окрашивали гематоксилином-эозином. Для вявления плаз-магических клеток использовали метод Браше. Кроме того, в работе
использован морфометрический меюд исследования фолликулов селезенки, пейеровых бляшек и брыжеечных лимфатических узлов.
Результаты реакций ГЗТ и АОК обработаны статистически по критерию Манна - Уитна (Поллард Д., 1982). Данные выживаемости животных после их заражения з.ТурЬ u-.trаг!з обрабатывались
но методу углового преобразования Фишера (1ублер Е.В., 1978).
РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКС1ШШГГАЛЫШХ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
Злкянио жирового компонента рациона на число автитело-образтоиях клеток (АОК) селезенки шпей
Результаты исследований приведены в табл. 2.
Как видно из таблицы, имеет место достоверное увеличение числа АОК во П п Ш группах животных. Наименьшее число АОК наблюдается в 17 и У группах экспериментальных животных.
Таблица 2
Влияние жиров рациона, отличающихся по соотношению
ПНЗК омега 6 к ПНЕК омега 3, на число АОК селезенки
Группы животных ! I ! п : ! 111 1 1У ! У
ШКыЫ соотношение-! ПНЖКыЗ! 102 { 40,6 | 1 ! | 30,8 | ! ! 0,66 | 40,6
М 2" 'ГО5 2,5-Ю5 2,1'Ю5 1,8'Ю5 1,8-Ю5
т •Ю4 1,4'Ю4 1,7'Ю4 1,3-Ю4 1,2'Ю4'
Р <0,05 <0,05 > 0,05 > 0,05
п 20 20 18 19 21
При анализе особенностей состава жировой части рационов, применявшихся в наших опытах, следует обратить внимание на
содержание в них ПНЖК. Есть данные, что изменения в количестве ПНЖК в экспериментальных диетах могут оказать влияние на величину образования В-клеток - продуцентов антител. Так, оч^пв и>п (1985) и ¿гЛскзоа У.л>. (1983) показал^, что с увеличе-
нием содержания 1ШК в рационе связано подавление образования .В-лимфоцитов. вгхскЕоп V.±\ (1983) наблюдал подобное явление при добавлен™ в рацион кукурузного масла, близкого по содержанию ПНЕК к составу подсолнечного масла.
В наших опытах наименьшее количество всех 1ШК содержалось в рационе со сливочным маслом - 12Д % (П группа), в то время как в контрольном рационе уровень ПНЖК составлял 36,2 %. Данные статистической обработки числа АОК в обеих упомянутых группах (I и II) показывают четкую обратную корреляционную зависимость ( г = -0,57) между числом АОК и содержанием ПНЖК семейства омега 6 в этих рационах, характеризующуюся высокой степенью достоверности (Р < 0^01) для данного числа наблюдений (н =37). Данная зависимость сохраняется также при сравнении числа АОК и суммарного количества ПНЖК семейства омега 6 в исследованных лвмфо-дцных органах, в частности, в лимфатических узлах брыжейки и пейеровых бляшках кишечника у животных этих групп (табл. 3).
В наших опытах у животных, получавших сливочное масло как источник насыщенного жира с субнормальным уровнем ПНЖК, число АОК при снижении суммы ПНИ возрастало.
В диете Ш группы животных в качестве жирового компонента входил кулинарный жир, который по содержанию ПНЕК занимал промежуточное положение между рационами I и П групп.
Особый интерес представляют данные 17 группы. Сумма ПНЖК жировой части рациона этой группы животных составляла 33,5$ от' общего количества жирных кислот и была представлена как ПНЖК се-
Число АОК в зависимости от содержания ПНЕК семейства омега 6 в экспериментальных диетах и некоторых лимфо-идных тканях
--
ИШ Вид показателя ! ! !
Объект
!
Ввд жира в диете
лярд+под-! солнечное!сливочное масло ! масло
<Р
I. АОК селезенка 1,99.Ю5 2,55« Ю5 -0,57 ' 0,01
2. Суша ПНЖК ыб + ооЗ (#) диета 36,2 12,1 -0,57 0,01
3. Суша ПНЕК омега 6 (%) диета . 35,8 11,8 -0,57 0,01,
4. Содержание ли- брыжеечные нолевой к-ты(#) лимф.узлы 20,1 13,1 -0,57 0,01
5. Суша ПЩ омега 6 (%) 21,5 14,2 -0,57 0,01
6. Содержание арахидоновой кислоты {%) пейерова . бляшка 14,0 4,3 -0,57 0,01
7. Суша ШШК омега 6 (%) 29,6 13,9 -0,57 0,01
мейства омега 6 - линолевая кислота - 13,3$, так и ШШК семейства омега 3 - линоленовая, эйкозалентаеновая и докозагексаеновая кислоты - 20,2%. При близком с контрольной группой общим количестве ШШК в рационе (соответственно 33,5 и 36,2 % в данной' группе отмечалось уменьшение числа АОК. Это уменьшение было более выраженным при сопоставлении с данными П группы, хотя доли ПНЯК омега 6 в этих группах (т.е. группы П и 17) были близкими и составили II,В% и 13,3$ соответственно.
Таким образом, в лаптах опытах впервые установлено, что не только общее количество 11НЖК, но и соотношение представителей ПН1К семейства омега 6 и омега 3 имеет существенное значение в образовании АОК.
- 12 -
Наша исследования не дают пока ответа на вопрос о механизме влияния ПН2К на реакцию АОК. 3 литературе высказано предположение, что снижение доли ПК£К влияет на биосинтез простагланди-нов, по-видимому, ответственных за подавление В-кяеток (згхск-аоа у.Р.еЪ г 1., 1983). При этом большую роль играют, очевидно, простагландины, являющиеся производными ШШК семейства омега 6, а ПНЖК семейства омега 3, возможно,'оказывают определенное конкурентное влияние. Последнее подтверждается данными п-уга.; с.н.,еъ ,-а. (1980) к ьг.псЗз г/.у.м. (1981), изучавшими соотношение ПНЖК в организме и синтез прсстагландшов и установивши!,ш, что снижение содержания арахидоновой кислоты (20:4 и; 6), связанное как с ограничением поступления ее предшественника (лк-нолевой кислоты - 18:21«6) в рацион, так и при конкурентном влиянии линоленовой (18:ЗюЗ), эйкозапентаеновой (20:5юЗ) и доко-загексаеновой (22:6соЗ), приводит к снижению синтеза ПГ и увеличении числа антителообразующих клеток;
Обращают на себя внимание данные по влиянию на число АОК в У группе. Жировая часть рациона в этой группе такая же, как во П группе, однако белка в этом рационе значительно меньше - всего 4% (во П группе - 24$). При таком снижении уровня белка влияние жира (сливочное масло) не проявилось, хотя можно проследить определенную тенденцию к снижению АОК.
Оценивая полученные данные, можно считать, что вашими факторами, определяющими число образующихся АОК,очевидно, являются специфические особенности жира рациона и содержание в нем ШШК семейства омега 6 и омега 3. Отсутствие выраженного влияния жировой части рациона У группы мышей на реакцию АОК, по-видимому, связано с.низким содержанием в этом рационе белка, поскольку белковая недостаточность угнетает функциональные показатели ,
имэдунокомпетентных органов (Мороз А.П., 1974; Наиби М., 1970; вас1жап Я. 197?; гг.;.опа с.1. . 1980; Водгарев М.Н. и
др., 1985).
Влияние типового компонента рациона па оеакцка ГЗТ у экспериментальных жизотных .
Результаты проведенных исследований приведены в табл. 4.
Как видно из таблица, имеет место достоверное увеличение ин—
декса реакция ГЗТ в Щ группе животных по сравнению с контролем.
Таблица 4
Влияние жирового компонента рациона на реакцию ГЗТ
Группа животных по ! ! " ! ■ !
составу жиров в ! I ! П ! Ш ! 1У ! 7
рационе * ! ! ! ! f
3,69±0'5 3,52i°'4 19±0,3 3,76.0,4 Зб56±
Р > 0,05 < 0,05 > 0,05- > 0,05 h_ 21_22_21_20 19
Рацион животных этой группы в качестве жирового компонента содержал кулинарный жир "Эра", в составе которого часть-жирных кислот находился в транс-форме. По-видимому, увеличений индекса реакции ГЗТ связано с особенностями жирнокисдартного состава лим-фоидной ткани, в частности, с низким содержанием', по сравнению с контролем, доли арахвдоновой кислоты в липидах пейеровых бляшек. Включение в рацион одинарного жира создало' ситуацию, аналогичную дефициту поступления линолевой кислоты в организм, но не в результате отсутствия ее предшественника в рационе, а вследствие чр^тич-ного блока, создаваемого в результате невозможности транс-изомеров линолевой кислоты превращаться' й' арахедоновую в той же степени, что ее естественные изомеры1 в' цис-форые (Кулакова С.К., 1985)
- 14 -
У животных П и У групп существенной разницы в индексах данной реакции не отмечалось.
Полученные данные (группа Ш) Позволяют также высказать суждение, что даже при низком содержании жира в рационе (10$ от общей калорийности)-специфические особенности жирового компонента к сочетаемость в нем ПНКК омега биомегаЗ могут оказывать статистически значимое влияние на проявление реакции ГЗТ.
Влияние ,тдра рациона и сочетания в нем ШЕК омега 6 и
омега 3 на бактериальную резистентность экспериментальных аивотных к з."\ур'пц-.цг1у-,и.
В качестве экспериментальной модели был выбран инфекционный процесс, возникающий при внутрибрюшинном заражении мышей з.турьз.-
иигхшн . Наряду с выживаемостью животных в этих опытах изучали влияние исследуемых дает на жирокислотный состав тканей лимфовд-ных органов подопытных мышей. Как видно из табл. 5, во всех изученных наш липвдах тканей иммунокомпетентных органов отмечены изменения, зависимые от .жирового компонента использованного в рационе. Характер наблюдаемых изменений и степень их выраженности в различных липвдах были неодинаковы. Изменения в состава жирных кислот липадов брыжеечных лимфатических узлов касались содержания ПННК обоих семейств (омега 6 и омега 3). Уменьшение доли лшолевой кислоты (18:2ы6) в липвдах лимфоузлов животных, получавших с рационами сливочное масло и рыбий жир, зависело от низкого уровня этой кислоты в данных рационах. Включение в рацион . рыбьего жира вызывало небольшое по абсолютной величине увеличение ПНЖ семейства омега 3 в составе тканевых липадов, в. то время как относительная их доля увеличивалась в 2-3 раза по сравнению с другими группами.
В липвдах селезенки мышей, потреблявших рыбий жир, доля
ПЖНК с 20 и 22 углеродными атомами была выше, чем в липвдах лим-
Состав Ш1ЕК в лшидах иотлуноког.иетвнтккх органов и лимфоцитах крови мнаей в зависимости от особенностей жировой части рациона
(в %% суммы всех жирных кислот)
г- - Жишше ! Вид жира в рационе
Липи- ДЫ лярд и подсол нечное масло Т 1 г 1 1 г сливочное ;кулинао- | " ! масло !ный ™Р ! ! ! ! рыбий жир 1 |сливочное ;масло и низший уровень ( белка
о
<о
У л ж
31 е; И Г)« <з! т^Ю ¡4
к к п<
(-; XX)
18:2ги 6 20,1+1,5 13,1+0,8 18,6+0,75 8,16+0,6 10,6+0,82 20:41.16 1,4+0,1 1,1+0,12 2,(¿0,14 1,75+0,1 1,85+0,13
18:3^3 следи 0,08^0,01 0,05^0,005 0,26+0,03 0,77+0,002 20:5и 3 0,09+0,01 0,03+0,001 0,02+0,001 0,43+0,02 0,01+0,001
22:6и'3 0,17+0,01 0,17+0,01 0,18+0,02 0,91+0,07 0,27+0,02
18:2со 6 12,4+0,84 6,7+0,53
' 20:4IV6 ■ 9,5+0,65 9,0+0,70
! 18:3а. 3 0,08+0,004 0,08+0,003
| 20:5(03 0,04+0,001 1,34+0,11
22:6^3 1,43+0,1 5,9+0,39
18:2ы В 15,6+1,1 9,6+0,05 19,4+1,4 1С,6+С{7 .13,9+1,1 20:4(о 6 14,0+1,0 4,3^0,51 8,2+0,55 8,0+0,65 П,3±0,9 18:3^3 следы 0,07±0,003 0,02+0,001 0,04+0,002 0,С?+0,003 20:5иЗ 0,16+0,02 0,02+0,001 0,03+0,001 1,5+0,12 0,1+0,01 22:6^3 1,9&н0,15 0,82+0,09 .1,55+0,11 5,75+0,21 2,(¿0,17
л т в р
и,х
о а «; « и ч со
31
ь
9м
о м •в-в
а а-
18:2со 6 11,4+0,93 20:4ю6 7,2+0,48 18:3«6 0,07+0,002 20:5ыЗ следы 22:6ыЗ 1,1+0,09
4,6+0,35 2,0+0,14 0,5+0,03 0,14+0,01 0,8+0,07
Код для обозначения жирных кислот: первое число - количество атомов углерода в молекуле кислоты; второе число - число двойных связей. и>- принадлежность жирной кислоты к семейству.
фоузлов. Одновременно выявлено снижение в них дсди ШШК с 18 углеродными атомами. Выраженные изменения обнаружены в составе жирных кислот семейства омега 3, в частности, резко увеличилась доля эйкозапентаековой и докозагексаековой кислот (20:5^3 и 22:ЗсоЗ).
В составе жирных кислот пейеровых бляшек отмечена прямая зависимость содержания 18:2со6 от величины присутствия этой жирной кислоты в рационе. Доля арахидоновой кислоты (20:4^6) претерпевала существенные изменения в зависимости от характера жира в рационе: от 14$ в контрольной груше до 4,3 в группе со сливочным маслом. Обращает на себя внимание снижение, по сравнению с контролем, доли арахидоновой кислоты в лишках бляшек мышей, получавших кулинарный жир, что связано с проявлением влияния трано-изомеров у.ирных кислот, ограничивающих, как отмечалось выше, превращение лднолевой кислоты (18:2ы6) в арахидоновую (20:4^6). Наличие ПНЕК омега 3 в рационе с рыбьим жиром вызвало отчетливое повышение в липвдах бляшек доли эйкозапентаеновой (20:5^3) и докозагексаеновой кислоты (22:6соЗ)»
В липвдах лимфоцитов мышей, получавших рыбий жыр, были рез- ' ■ ко снижена доля ПНВК омега 6 - 18:2 и 20:4 по сравнению с контрольной группой. Достоверного изменения содержания ШШК омега 3 не наблюдалось»
Давая обобщенную характеристику изменениям, жирнокислотного состава лицщиз исследованных лимфоидных органов и лимфоцитов, необходимо, прежде всего, обратить внимание на различную степень влияния изменения соотношения ПШК омега 6 и омега 3 в рационе на состав ПНЖК тканей этих органов и клеток. Менее изменчивыми были липады, выделенные из лимфатических узлов брыжейки. В них
главным образом отражалось влияние количества линолевой кислоты (I8:2tj6) в рационе и в меньшей мере влияло присутствие в рационе жирных кислот омега 3, В липидах селезенки при введении в рацион рыбьего икра увеличивалось только количество 11НЖК омега 3, а в липидах лимфоцитов происходило снижение доли ПННК семейства омега 6. Наиболее глубокие изменения наблюдались в липидах пейе-., рових бляшек: снижение доли ПНЖ омега 6, сопряженное с увеличением доли ПШК семейства шега 3.
Таким образом, к моменту заражения инфекцией о.ТурМдиглиш имели место достаточно глубокие изменения жирнокислотного состава лимфоидных тканей, которые можно оценить как изменения количества и соотношения предшественников биосинтеза прсстагландинов ■ различных линий в лимфоидных органах и клетках. Помимо этого возможного влияния подобные изменения оказывают влияние и на функциональные свойства клеточных мембран. Наличие такой связи показано при сравнении изменений жирнокислотного состава сплено-цитов и мембран В- и Т-клеток ( р.к. ,ct el. . 1987).
Результаты влияния особенностей жирового компонента рациона на выживаемость мышей после заражения их сальмонеллами з.Typhi -murium приведены в табл. 6.
Как видно из табл. 6, больше всего выжило животных в группе, получавшей жир сардин "Иваси" и кулинарный жир "Эра". Рассматривая механизм такого защитного действия этих жиров, необходимо отметить, что не представляется-возможным объяснить- его снижением доли арахвдоновой кислоты, как предшественника простаглавдинов, являющихся медиаторами воспаления. Из всех лимфоидных органов и клеток "снижение доли этой кислоты при использовании рыбьего жира было достаточно выраженным лишь в липидах лимфоцитов. В Петровых бляшках отмечалось также снижение доли арахидоковой кисло-
Влияние жирового компонента рациона на выживаемость мышей, зараженных сальмонеллами
.Показатели
Вид жкпа в рационе; группа опита
ляpд+пoд-^cл^шoчf кули-¡рыбий,сливочное масло солнечное"кое " нар- ! ¡с низким уровнем масло ¡масло !шн жир > Iбелка (4$Г) (I) ! (П) !(Ш) ЩУ)! (У)
Количество зараженных животных 75 76 74 75 79
Количество павших
на 21 день опыта 46 44 33 36 49
% выживших 38,6 42,1. 55 52 38
Р ' > 0,05<0,05 < 0,05 >0,05
'ты, как предшественника простагландннов, являвшихся медиаторами воспаления. Из всех лимфоидных органов и клеток снижение доли этой кислоты при использовании рыбьего жира было достаточно выраженным лишь в липидах лимфоцитов. В пейеровых бляшках отмечалось также снижение доли арахвдоновой кислоты (20:4ы6), но оно было менее выраженным, чем при других видах жиров. Примечательно, что при самом низком уровне арахвдоновой кислоты с лимфовдных тканях мышей, получавших сливочное масло, выживаемость в этой группе была также низкой. В группе с кулинарным жиром, содержащим высокий уровень арахвдоновой кислоты, выживаемость была выше и сопоставима с выживаемостью в группе о рыбьим жиром. В то же время в контрольной группе животных, содержавших значительную долю арахвдоновой кислоты л тканях, выживаемость была самой низкой.
В то же время необходимо особо отметить, что выживаемость животных во всех группах распределилась в таком порядке, в каком убывает величина соотношения ШИК омега 6/омега 3 в рационе.
- 19 -
На основании сопоставления этих данных можно предположить, что ведущим в механизме защитного действия рыбьего жира при саль-монеллезной инфекции является повышение доли ПНЖК омега 3 в ля-пидах лимфоидных органов. Подтверждение этого суждения мы нахо--дим в наблюдениях ряда авторов на моделях некоторых патологических процессов: волчанка ( y<e.-:ch ±=.v.,eb al. , 1982), артрит , ( Lusli С. ч., ot r.X. , 1985).
Возникает вопрос, реализуется ли влияние ШШК смега 3 на этапе синтеза простагландинов { Johnston P.v. , 1985; Lands v.b.si,, 1986) или структурно-функциональной интеграции мембран (Лева-чев М.М., 1986), как и вопрос о том, какое соотношение ПНЕК омега 6 /омега 3 является в рассматриваемых процессах оптимальным.
Очевидно, что !эти важные вопросы требуют дальнейших исследований. Однако не вызывает сомнения, что направленные изменения в количестве и соотношении ПНЖ семейства линолевой и линолено-вой кислот в рационе открывают новые возможности для повышения устойчивости организма к инфекции, равно' как и возможности для эффективной модуляций иммунного ответа. Этот подход может оказаться плодотворным не только при разработке жировой части продуктов питания, но также при поиске путей совершенствования диетотерапии тех заболеваний, патогенез которых, в частности, связан с реакциями иммунокомпетентной системы.
Морфологическая перестройка органов иммуногенеза при использовании в экспериментальных диетах различных пищевых жиров
Сравкителькое морфологртеское изучение селезенки, пейеровых бляшек и регионарных-лимфатических узлов было осуществлено в опытах,.в которых животные не заражались's.Typhulurirm . Это позволило выявить определенные общие и частные особенности клеточных
реакций у различных групп экспериментальных животных, свидетельствующих о характере влияния жировых диет на структуру перечисленных органов. Так, во всех группах экспериментальных животных отмечалась различная степень выраженности реакции со стороны со--судистого русла. У животных подопытных' групп наблюдалась гиперплазия фолликулов в селезенке, наиболее ярко выраженная во П и 1У группах, жировой компонент которых включал в себя сливочное масло и рыбий жир.
В гиперплазированных фолликулах было обнаружено исчезновение характерного рисунка зародышевых центров в результате уменьшения количества бластннх форм лимфоидных клеток, уменьшение количества средних и малых лимфоцитов, что по-видимому, связано со снижением функциональной активности этих центров. В то -же время отмечалось увеличение количества плазматических клеток в суб-капсулярной зоне и по ходу трабекул. Оценивая морфологические изменения в селезенке опытных животных, необходимо ввделить наличие в этом органе выраженных макрофагальных реакций, особенно у тех, которые получали сливочное тело на фоне малобелковой диеты.
Подобные изменения наблюдались также в пейеровых бляшках и прилегающей к ним стенке кишечника. В них отмечалось набухание эпителиальной выстилки и отек подслизистого слоя в зоне бляшки. В эпителии ворсинок, прилежащих к пейеровкм бляшкам, отмечалось увеличение количества бокаловидных клеток. В отечном подслизи-стом слое преобладали нейтрофильные лейкоциты и лимфовдные клетки. Количество 'макрофагов было незначительным.
По периферии фолликулов выявились плазматические клетки, которые дифференцировались не.только по морфологическим признакам, но и по степени активности реакции на РНК.. Описанные измене-
ния били наиболее выражены у животных П и Ш групп, которые в качестве жирового компонента получали сливочное масло и кулинарный
жир.
Гистологическое изучение брыжеечных лимфатических узлов у ' контрольных и опытных животных не выявило каких-либо морфологических различий в их структуре, за исключением гиперплазии фол- ,, ликулов в брыжеечных лимфоузлах у животных П группы, что подтверждалось морфометрически в виде статистически достоверного увеличения их площади. Результаты морфометрических исследований представлены в таблице 7.
Таблица 7
Результаты морфометрических исследований органов иммуногенеза под влиянием развличных жиров в рационе
Вид жира в рационе Площадь фолликулов селезенки в микронах . ! Площадь фолли-! кулов брыжееч-! ных лимфатичес-! ккх узлов в ! микронах ¡Площадь ( ! кулов пе! <бляшек в 1 | хшш- ;еровых микронах
м £ т ! Р ! М*т ! Р | М + т ! р
Смесь лярда и подсолнечное масло (I гр.) 147417* 11088 54155* 3915 99635* 12402
Сливочное 167825* масло (П гр.) 12989 А 0,05 91271* 7092 < 0,05 150457* 14374 < 0,05
Кулинарный жир № гр.) 152344* 14431 > 0,05 6002.2*' 4929 > 0,05 153719* 19853 < 0,05
Рыбий жир Ш гр.) 157608* 12026 > 0,05 . 61935* 3184 > 0,05 225461* ' 26156 < .0,05
Сливочное масло на фоне малобелко вой диеты-(У гр.) 144792* 10179 ■> 0.05 49626* 28165 > 0,05 168611+ 14005 < 0,05
- 22 -
На основании полученных: данных ;-.тно высказать следующее мнение, что, чем меньше содержится в диетах iffiiK, те,л щра&еннее реакция со стороны селезенки и брыжеечных лимфатических узлов в виде увеличения площади кх фолликулов. лак видно из табл. ?, данные 1У группы мышей близки к данный III группы, хотя они разнят-, ся по количеству ШйК в рационах этих групп. Ио-в^дшо:.^, данное несоответствие вызвано разнородностью семейств ШЩ в рационе животных 1У группы, данные У груши согласуются о литературными данньмл (Мороз A.n., 1970; HwmgD.K,, 1^60; Friend j.v. ,1У80; De Wille j.VT., ХУ81) об угнетении шрфофункциональных показателей органов июдуногенеза при низкой уровне белка в рационе.
Анализ результатов измерений площади фолликулов в пейеровых бляшках Показал, что с увеличением количества 1ШИК в рационе' площади фолликулов увеличивались. Исключение ооотавляат данные I и У групп животных.
ВЫВОДЫ
I. Изокалорийные низкожировш рационы (10$ от общей калорийнооти), отличающиеся по составу включенных в них киров: оллвочное мао-ло, кулинарный жар, рыбий жир, подсолнечное'масло в сочетании ' с лярдом - существенно влияют на монологическую реактивность и инфекционную резистентность животных к возбудителю. Z. Число антитедообразуюидах клеток зависит как от суммарного содержания 1ШЖ в рационе, так и от абсолютного иоличеотва представителей отдельных семейств ПН&К (омега 6 и омега 3). 3. Вийвлака достоверная обратная корреляционная зависимость между суммарным содержанием Шйл оемейства омега 6 в рационе, в лим-фопдаш: тканях животных (брыжеечных, лимфоузлах и пейеровых* бдясках) а числом ангителообразующпх клеток в селезенке при иммунизации жквотши эритроцита:,ш барана.
- 23 -
4. Включение в рацион животных кулинарного- жира, содержащего транс-изомеры жирных кислот, приводит к достоверному увеличению у животных индекса реакции гшерчувствительности замедленного типа.
5. Рационы с различным составом пищевого жира вызывают морфологические изменения иммунокомпетенткых органов (селезенки, брыжеечных лимфатических узлов, пейеровых бляшек), сопровождающиеся выраженной макрофагальной реакцией в них, сочетающейся
в ряде случаев с гиперплазией фолликулов,' уменьшением в зародышевых центрах количества бластных форм, плазматических клеток, средних и малых лимфоцитов. Степень выраженности изменений зависит от органа и состава исследуемого рациона.
6. Морфометрическое изучение органов иммуногенеза при воздействии различными пищевыми жирами выявило увеличение площади фолликулов селезенки и брыжеечных лимфатических узлов при снижении в рационах уровня ПНЖК. В пейеровых бляшках четкой завишшос-ти мезду изменением площади фолликулов я содержанием ПНЖ в рационах не установлено. Однако имеет место тенденция к увеличению значения этого морфометрического показателя при повышении уровня ШИК в рационе.
7. Достоверное повышение выживаемости животных при заражении их э.тур)л1пигЗ-ши сопровождается уменьшением доли ПВ$К семейства
■ омега 6 и увеличением доли ПНЖ' семейства омега 3 в липидах " лимфодных органов животных, что зависало от уменьшения в пищевом рационе величины соотношения содержания ПНЖ семейств омега 6 к омега 3; ' •
СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ
1. Хайров Х.С., Кулакова С.Н., Медведев Ф.А. Сергеева К.В. Особенности включения ШШК семейства омега 6 и омега 3 в липиды лимфоидных тканей // Материалы Всесоюзного симпозиума по биохимии липидов. - Алма-Ата, 1987'. - С. 221.
2. Хайров Х.С., Винник А.Л, Влияние количественных и качественных изменений жирового состава рациона на некоторые показатели иммунитета мышей линии СВА // Материалы конференции "Актуальные вопрооы стандартизации лабораторных животных для медико-<5иологичеоких исследований". -М., 1987. - С. 71.
3. Волгарев М.Н., Хайров Х.С., Кулакова С.Н. и др. Повышение резистентности мышей (линии СБА) к инфекции, вызванной.
б , ТурЫтигхит , в зависимости от характера жира в рационе // Вопр. питания. - й 6. - 1988.