БИОДЕСТРУКЦИЯ ЗУБНЫХ ПРОТЕЗОВ ИЗ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ (экспериментальное исследование

Автандилов, Георгий Александрович

Диссертации по медицине → Стоматология

Автореферат и диссертация по медицине (14.01.14) на тему:БИОДЕСТРУКЦИЯ ЗУБНЫХ ПРОТЕЗОВ ИЗ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ (экспериментальное исследование

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Автандилов, Георгий Александрович Москва 2013 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.01.14

Автореферат диссертации по медицине на тему БИОДЕСТРУКЦИЯ ЗУБНЫХ ПРОТЕЗОВ ИЗ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ (экспериментальное исследование

На правах рукописи

005050747

Автандилов Георгий Александрович

БИОДЕСТРУКЦИЯ ЗУБНЫХ ПРОТЕЗОВ ИЗ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ (экспериментальное исследование)

14.01.14- Стоматология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

11 МАР 2013

Москва - 2013

005050747

Работа выполнена в Государственном бюджетном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Московский государственный медико-стоматологический университет имени

А.И. Евдокимова» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Научные руководители:

заслуженный деятель науки РФ, доктор медицинских наук, профессор Лебеденко Игорь Юльевич

доктор медицинских наук, профессор Царёв Виктор Николаевич Официальные оппоненты:

Арутюнов Сергей Дарчоевич - заслуженный врач Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор (ГБОУ ВПО МГМСУ имени А.И. Евдокимова Минздрава России, заведующий кафедрой стоматологии общей практики и подготовки зубных техников ФПДО); Олесова Валентина Николаевна - заслуженный врач Российской Федерации, доктор медицинских наук, профессор (заведующая кафедрой клинической стоматологии и имплантологии Института повышения квалификации ФМБА России).

Ведущее учреждение:

ГБОУ ДПО «Российская медицинская академия последипломного образования» Министерства здравоохранения России.

Защита состоится « 2013 г. в __часов на заседании

диссертационного совета Д 208.041.03, созданного на базе ГБОУ ВПО МГМСУ имени А.И. Евдокимова Минздрава России, по адресу: 127473, Москва, ул. Долгоруковская д. 4.

Почтовый адрес: 127473, Москва, ул. Делегатская 20, стр. 1

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Московского государственного медико-стоматологического университета имени А.И. Евдокимова (127206, г. Москва, ул. Вучетича, д. 10а).

Автореферат разослан 4?/ (^¿^¿¿оС^ 2013 г.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Гиоева Юлия Александровна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы.

Современные технологии и жесткий контроль за применяемыми в ортопедической стоматологии конструкционными материалами существенно улучшили качество протезирования.

Материалы, используемые для протезирования, должны обладать достаточной механической прочностью, высокой износостойкостью, устойчивостью к физико-химическим факторам воздействия в полости рта, быть биосовместимыми и безопасными для организма человека. Совокупность этих свойств обеспечивает долговечность протезов, улучшает качество жизни пациентов. Исследования последних лет свидетельствуют о необходимости учитывать характер взаимодействия материалов для протезирования с микроорганизмами полости рта [Царёв В.Н., 2008].

В этой проблеме выделяют несколько важных аспектов:

- колонизация бактерий на поверхности зубопротезных материалов;

- разрушение пластмасс и металлических сплавов под воздействием микроорганизмов;

образование токсических для организма человека продуктов в результате разрушения микроорганизмами стоматологических материалов;

разработка эффективных способов борьбы с патогенными микроорганизмами на поверхности зубных протезов и разработка резистентных к микробной колонизации материалов;

разработка способов эрадикации микроорганизмов с поверхности съемных протезов при их эксплуатации;

формирование дисбиоза и очагов хронической инфекции в ротовой

полости.

В перечне проблем, касающихся взаимодействия микроорганизмов ротовой полости с зубопротезными материалами, влияние микроорганизмов на полимерные компоненты протезов изучены недостаточно. Для характеристики разрушающего воздействия микроорганизмов на полимерные материалы принят термин «биодеструкция» [Tirpak G.,1969].

Фундаментальной основой для изучения процессов биодеструкции является применение различных микроскопических методов (световой, люминесцентной, сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии) [Рыбальченко О.В., 2003]. Методы микроскопии позволяют одновременно анализировать структуры зуботехнических материалов и колонизирующих их микроорганизмов, проводить оценку действия антимикробных препаратов при обработке зубных протезов.

Цель работы — с помощью электронно-микроскопических методов изучить биодеструкцию базисных пластмасс, используемых для изготовления съемных зубных протезов и предложить способы ее профилактики.

Задачи исследования

1. Провести анализ поверхностей образцов базисных пластмасс при различных способах их обработки.

2. Изучить в сравнительном аспекте динамику процесса колонизации микроорганизмами полости рта образцов полиуретановых и акриловых базисов зубных протезов и дать количественную оценку этого процесса.

3. Проанализировать характер изменений поверхностей образцов зубных протезов из различных базисных пластмасс при бактериальной и грибковой колонизации.

4. Выявить очаги персистенции микроорганизмов в образцах пластмассовых базисов зубных протезов.

5. Обосновать целесообразность применения сканирующей электронной микроскопии для оценки качества стоматологических базисных пластмасс съемных зубных протезов и степени их биодеструктивных изменений.

6. Предложить способы эрадикации микроорганизмов, локализованных на пластмассовых базисах зубных протезов.

Научная новизна

Впервые с помощью микроскопических методов исследования выявлена взаимосвязь между этапами бактериальной колонизации и структурными изменениями поверхности полиуретановой и полиметилметакрилатных пластмасс съемных зубных протезов.

Убедительно доказана более высокая степень деструктивных изменений образцов базисной пластмассы «Денталур» на основе полиуретана по сравнению с базисными пластмассами на основе полиметилметакрилата «Фторакс», «Пластмасса бесцветная».

Определена роль биопленок, формирующихся на поверхности пластмассовых базисов зубных протезов, как очагов персистенции микроорганизмов, и разработаны подходы для их эрадикации.

Показано, что образование глубоких дефектов в зубопротезных пластмассах в результате взаимодействия с микроорганизмами-биодеструкторами приводит к формированию очагов персистенции патогенной микрофлоры в виде биопленки внутри материала пластмасс,

представляя реальную угрозу как источник инфекции и являясь причиной дисбиоза в ротовой полости.

Впервые с применением режима резки ионным пучком при исследовании в сканирующем двулучевом электронном микроскопе Quanta 200 3D (FEI Company USA) изучена структура подповерхностного слоя образцов базисных пластмасс и выявлена распространенность биодеструктивных изменений в акрилатах и полиуретане.

Разработаны подходы для детекции и оценки бактериальной колонизации полимерных зуботехнических материалов и оценки эффективности способов эрадикации биопленок с их поверхности с помощью сканирующей электронной микроскопии (СЭМ).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Методами сканирующей электронной микроскопии установлено явление биодеструкции полимерных зубопротезных материалов с образованием дефектов на их поверхности и в подповерхностном слое под влиянием Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Candida albicans.

2. Полиуретановый базисный материал «Денталур» по устойчивости к биодеструкции не имеет преимуществ перед акриловыми базисными пластмассами «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная».

3. Наиболее уязвимыми для микробной колонизации являются участки образцов полимерных зубных протезов, имеющие механические повреждения поверхности, образуемые при их клинической коррекции с укорочением границ или с истончением базиса.

4. Биоповреждающий потенциал бактерий реализуется при формировании ими биопленки, а для грибов Candida albicans — на этапе адгезии хламидоспор к поверхности образцов съемных пластмассовых зубных протезов.

Практическая значимость

Выявлена высокая информативность метода сканирующей электронной микроскопии в оценке качества полимерных зубопротезных материалов.

Показана необходимость проведения экспертизы устойчивости базисных стоматологических пластмасс к микробной колонизации.

Показано, что профилактика биодеструктивных изменений зубопротезных полимерных материалов должна проводиться до образования на их поверхностях бактериальной биопленки, а для грибов рода Candida albicans уже на этапе адгезии хламидоспор.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что ультразвуковая обработка образцов съемных зубных протезов является

эффективным способом борьбы с биопленками и, соответственно, с биодеструкцией зубопротезных пластмасс.

Личный вклад автора Автором лично проведены все экспериментальные исследования, включая работу на двулучевом сканирующем электронном микроскопе нового поколения Quanta 200 3D (FEI Company, USA), на трансмиссионном электронном микроскопе JEOL 100В (Jeol ltd, Japan), подготовлены экспериментальные образцы для количественной оценки биообрастания образцов зубопротезных пластмасс, адаптирована и применена компьютерная программа для измерений "Scandium" (Olympus Japan), проведена статистическая обработка полученных результатов, сформулированы основные положения и выводы диссертации, написаны статьи, диссертация и автореферат.

Внедрение в практику Результаты исследования внедрены в учебный процесс кафедры госпитальной ортопедической стоматологии МГМСУ им. А.И.Евдокимова.

Апробация работы Материалы диссертации доложены, обсуждены и одобрены на:

- конференциях общества молодых ученых МГМСУ (Москва, 2010, 2011, 2012 гг.);

- на 3-й Архангельской международной медицинской научной конференции молодых ученых (Архангельск, 2010);

- научно-практической конференции СНО стоматологического факультета Первого МГМУ им. И.М.Сеченова (Москва, 2011);

- на XVII Российском симпозиуме (с международным участием) по растровой электронной микроскопии и аналитическим исследованиям твердых тел «РЭМ-2011»(г. Черноголовка МО, 2011г.) и на совместной конференции кафедры госпитальной ортопедической стоматологии, кафедры стоматологии общей практики и подготовки зубных техников ФПДО, лаборатории материаловедения НИМСИ МГМСУ.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ, из которых 4 статьи -в журналах, рекомендованных ВАК для публикации материалов диссертаций и 1 в зарубежном издании.

Структура и объем диссертации Диссертация состоит из введения, четырех глав (обзор литературы, материалов и методов, изложения результатов экспериментальной части и обсуждения полученных результатов), выводов, практических рекомендаций, списка литературы и приложения. Работа изложена на 15 стр.

машинописного текста, содержит 12 таблиц и 92 рисунка. Список литературы включает 56 отечественных авторов и 55 — иностранных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

Для решения поставленных задач были проведены исследования специально отобранных стоматологических материалов: акриловых пластмасс для базисов съемных зубных протезов «Фторакс» ТУ 64-2-120-82 («АО Стома, Украина»), «Пластмасса бесцветная» ТУ 64-2-236-78 (АО Стома, Украина) и полиуретана - «Денталур» ТУ 9391-026-00152164-2006 (ОАО НИИР, Россия).

При изготовлении образцов из материалов «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» базисы готовили по общепринятой методике со строгим соблюдением инструкции по применению.

Базисный стоматологический материал «Денталур» представлял собой двухкомпонентную полиуретановую систему и перерабатывался в изделие методом жидкого формования (свободного литья) по инструкции завода изготовителя.

Готовые образцы пластмасс размером 20x40x2 мм были подвергнуты шлифовке и полировке по стандартной методике. При этом одна из сторон образцов оставалась неполированной. Для изучения состояния поверхностей образцов с помощью сканирующего электронного микроскопа от первично изготовленных образцов при помощи стального стоматологического сепарационного диска были вырезаны фрагменты размером = 5x5x3 мм. Для каждого исследования было подготовлено по 3 образца каждой базисной пластмассы. Изучали 4 поверхности у каждого образца: полированную, шероховатую (неполированную), спил (от сепарационного диска), скол (при помощи крампонных щипцов).

Для изучения процессов взаимодействия микроорганизмов с образцами базисных пластмасс были выбраны клинические изоляты -Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Enterococcus faecium, Candida albicans, как наиболее значимые микроорганизмы в развитии воспалительных процессов в полости рта. Для работы были использованы суточные бульонные культуры бактерий в концентрации 10б/мл.

Для изучения этапов формирования биопленки на базисных материалах с последующим исследованием методом сканирующей электронной микроскопии (СЭМ) были взяты образцы стоматологических материалов и помещены в питательный LB (Luria-Bertrani) бульон, в который предварительно засевали культуру клинических изолятов бактерий или

при ускоряющих напряжениях 5, 10, 25 кВ. Перед исследованием проводилось напыление нанослоем золота толщиной 5 нм в напылительной установке (SPI Inc., USA). Съемка образцов производилась на увеличениях в диапазоне от х 40 до х 20 ООО.

Образцы базисных пластмасс после инкубации с микроорганизмами были фиксированы по двум методам: Ito-Karnovsky и в 10% формалине.

После инкубации микроорганизмов с образцами пластмасс из инкубационной среды путем центрифугирования при 8 ООО об/мин были получены осадки культур, которые были изучены методом электронной трансмиссионной микроскопии на микроскопе JEOL-lOO В (Jeol Ltd, Japan) при ускоряющем напряжении 80 кВ.

Для оценки подповерхностных изменений структуры базисных пластмасс под воздействием бактерий была произведена резка ионным (галлиевым) пучком контрольных и опытных образцов в двулучевом сканирующем микроскопе Quanta 200 3D. На поверхности опытных образцов выбирали участки, покрытые массивным слоем образовавшейся биопленки.

Изучение химического состава пластмасс проводили методом рентгеновского микроструктурного анализа с помощью приставки к СЭМ Genesis ХМ2 EDAX (USA). Для набора спектра излучения потенциально выявляемых микроэлементов ускоряющее напряжение составляло 10 и 25 кВ.

Для дезинфекции и эрадикации сформировавшейся биопленки на поверхности полимерных зубопротезных материалов использовали метод ультразвуковой обработки в ванночке (фирма «Геософт-дент» (Россия), мощностью 25 Вт), генерирующей ультразвуковые волны частотой 50/60 Гц. Эффективность воздействия вышеуказанного метода на биопленку поверхности пластмасс после их инкубации с микроорганизмами, оценивалась в сканирующем электронном микроскопе. Интактные образцы пластмасс (контроль), также подвергали ультразвуковой обработке на тех же режимах и анализировали в СЭМ Quanta 200 3D (FEI Company, USA).

Для оценки площади обрастания биопленкой образцов зубопротезных пластмасс применяли программу "Scandium" (Olympus, Japan). Выделенное поле поверхности образцов зубопротезных пластмасс и область биообрастания контурировали с помощью инструмента «лассо». Площадь выделенных областей измерялась в пикселях. Всю площадь поля принимали за 100%. Соответственно, области биообрастания составляли искомую долю в процентном выражении.

Статистический анализ полученных данных проводили по общепринятой методике с помощью электронной таблицы Microsoft Excel с

использованием программного пакета «81аЙ51юа 6.0». Табличные данные представлены в виде средних значений, среднеквадратического отклонения и ошибки выборки.

Экспериментальная часть исследования была выполнена в ФГБУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалея МЗ РФ на базе «Лаборатории анатомии микроорганизмов» (зав. лабораторией, д.м.н. Диденко Л.В.).

Основные результаты исследования

По данным исследования методом СЭМ структурная организация гладкой, шероховатой поверхностей, поверхностей спила и скола у всех изученных базисных пластмасс «Денталур», «Фторакс», «Пластмасса бесцветная» принципиально одинакова.

Полированная поверхность интактных образцов была относительно гладкой, с единичными мелкими крошками на поверхности. Следы механических повреждений, образующиеся при полировке, выглядели как неглубокие царапины (Рис.2а). Шероховатая поверхность была неровной, с выступающими гребнями и большим количеством крошки (Рис.2 б). Спил выглядел как волокнистая структура, практически с параллельным расположением волокон и частицами пластмассы в виде крошек разной величины (Рис.2в). Скол образцов пластмасс «Денталур», «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» имел относительно гладкую поверхность, в рельефе наблюдались участки неодинаковой высоты, но при этом царапин и крошек не отмечалось (Рис. 2г). У всех образцов в отдельных участках полированной поверхности выявлялись дефекты в виде округлых «вздутий» и их разрывов, внутри которых была видна гладкая поверхность. Скорее всего, причиной появления такого рода дефектов является локальная термическая нагрузка на образец при полировке. Аналогичные изменения происходили под влиянием электронного пучка при исследовании в СЭМ. Механические повреждения пластмасс в процессе их обработки, границы раздела поверхностей являются объектом для успешной колонизации бактериями и грибами. В последнюю очередь микроорганизмы колонизируют гладкую поверхность.

Рис.2 Микроскопическая картина поверхностей пластмассовых образцов: а - гладкая поверхность (х2000), б -шероховатая поверхность (х2000), в -спил (х2000), г - скол (х2000), д - вздутия на гладкой поверхности (х8000)

Химический состав базисных пластмасс, изученный с помощью рентгеновского микроструктурного анализа, показал, что основными химическими элементами базисных пластмасс являются углерод, кислород, (водород этим методом не определяется). Кроме этого были выявлены примеси азота, кальция, кремния, а в базисной пластмассе «Фторакс» - фтор. Применение этого метода при изучении процессов биодеструкции является важным моментом, поскольку различные примеси в материалах могут являться источником необходимых питательных веществ для микроорганизмов, или же обладать биоцидным действием, а также влиять на заряд поверхности. Принято считать, что совокупный заряд поверхности полимеров отрицательный, поэтому отрицательно заряженным микроорганизмам необходимо преодолеть силы отталкивания. По последним данным, поверхность полимеров состоит из мозаики наноскопических областей, имеющих разные по знаку заряды. Причины, по которым возникают области с другим зарядом, до сих пор изучены крайне недостаточно [Baytekin Н. Т. et all., 2011]. Обнаружение примесей в базисных пластмасах может являться ключевым моментом для изучения процессов биодеструкции и в разработке способов ее профилактики.

При исследовании в сканирующем электронном микроскопе Quanta 200 3D образцов пластмасс, инкубированных с грамположительными и грамотрицательными бактериями, можно было четко проследить следующие этапы:

1. Появление налета на поверхности (безмикробная пленка).

2. Адгезия бактерий к поверхности.

3. Образование микроколоний (объединение нескольких бактериальных клеток в единую группу).

4. Слияние отдельных микроколоний между собой при одновременной инициации синтеза клетками экзоклеточного матрикса.

5. Формирование зрелой биопленки, полностью покрытой экзоклеточным матриксом.

6. Образование номад - отпочковывание от зрелой биопленки бактерий, покрытых экзоклеточным матриксом.

7. Растрескивание биопленки и выход бактерий из нее.

Скорость образования биопленки, интенсивность обрастания поверхности, формирование номад и растрескивание биопленки зависит от вида бактерий, разновидности базисной пластмассы и характеристик ее поверхности (гладкая, шероховатая, спил, скол, наличие повреждений).

Стафилококки адгезировали и формировали микроколонии на поверхности пластмасс на ранних сроках взаимодействия с пластмассами. К 7 суткам инкубации происходило слияние микроколоний и образование биопленок.

Плотный экзоклеточный матрикс формировал ветвистые структуры, в которых были хорошо видны округлые отверстия. С увеличением срока инкубации происходило объединение биопленок между собой, и дальнейшее увеличение ее суммарной биомассы происходило за счет ее толщины.

При растрескивании стафилококковой биопленки можно было оценить ее толщину, которая составляла несколько микрон (от 1 до 5 мкм). Помимо этого происходила отшнуровка от материнской биопленки округлых образований, представляющих собой совокупность бактерий, заключенных в экзоклеточный матрикс (номады). Выход бактерий из зрелой биопленки при растрескивании и отшнуровка номад обеспечивают распространение бактерий в окружающей среде.

Синегнойная палочка также, как и стафилококки, активно колонизировала поверхность зубопротезных пластмасс. В отличие от стафилококка колонизация происходила посредством скользящего роста бактерий по поверхности пластмассы, что обеспечивало быстрое обрастание поверхности искусственного материала. Образование биопленки бактериями наступало по мере истощения питательных веществ в инкубационной среде.

По сравнению с культурой Staphylococcus aureus на ранних сроках (24 и 48 час) в культуре Pseudomonas aeruginosa при инкубации с пластмассами менее интенсивно синтезировался экзоклеточный матрикс, то есть образование биопленки наступало несколько позже. С течением времени формировалась ярко выраженная биопленка, на поверхности которой формировались номады. Также наблюдалось растрескивание биопленки, которое было менее выражено по сравнению со стафилококковой биопленкой.

При инкубации пластмасс с Enterococcus faecium на сроках 24 — 48 часов на гладкой и шероховатой поверхности базисных полимеров обнаруживались единичные клетки. К 14 дню инкубации на поверхностях

можно было видеть отдельно лежащие скопления бактерий, с минимально выраженным экзоклеточным матриксом, и только к 1,5 месяцам наблюдения можно было видеть биопленки на поверхности пластмасс, которые занимали очень незначительную площадь по сравнению с биопленками, образованными стафилококками и синегнойной палочкой.

При инкубации полиуретана с Candida albicans к 7 дню вся поверхность покрывалась налетом разной электронной плотности, в котором обнаруживались адгезированные хламидоспоры. Биопленок,

морфологически подобных тем, что образовывали грамположительные и грамотрицательные бактерии, грибы на ранних сроках не образовывали. Было обнаружено, что на этих сроках экзоклеточный матрикс только частично покрывал дрожжевые клетки.

На поверхности базисных полиметилметакрилатных пластмасс грибы формировали гифы и псевдомицелий. К 1,5 месяцам инкубации на поверхности пластмасс образовывалась плотная пленка с включениями частиц полимеров, и кроме этого на ее поверхности визуализировались псевдогифы и хламидоспоры. Подобно бактериальным биопленкам, у Candida albicans при формировании биопленки сохраняется возможность распространения в окружающей среде посредством хламидоспор, которые, как было установлено в данном исследовании, активно колонизируют искусственные поверхности.

Последовательность развития бактериальных биоповреждений у всех изученных видов пластмасс можно представить в следующем виде:

1. Бактерии при взаимодействии с материалами на ранних этапах (24, 48 час) концентрировались в участках с механическими повреждениями поверхности (царапины, микротрещины и.т.п.). Единичные адгезированные бактерии, как правило, не вызывали разрушение поверхности пластмасс.

2. Минимальные повреждения пластмасс визуализировались при появлении микроколоний. Они характеризовались увеличением линейных размеров царапин, трещин, углублений и сопровождались выкрашиванием материала.

3. Наиболее выраженные биоповреждения были выявлены при появлении на поверхности пластмасс биопленок. По периферии биопленок, в основном, можно было видеть трещины, а при удалении ультразвуком с поверхности образцов биопленок в подбиопленочном пространстве были выявлены грубые дефекты в виде глубоких трещин и каверн.

4. На поздних сроках наблюдения (1,5 мес) с поверхности пластмасс происходила десквамация биопленок с интегрированными в них частицами полимера.

Рис. 5. Биодеструкция базисных пластмасс под действием Pseudomonas aeruginosa: а,б - образование «крошек» на поверхности пластмассы (а- х60), (б - х5000), в - образование «звездочек» (х500), г - углубления, трещины, фенестрация поверхности (х 14000).

Следует также отметить появление на поверхности дефектов в виде царапин. При большем увеличении царапины представляли собой участки слущивания материала пластмасс в виде тонких пластин, причем образовавшаяся поверхность после слущивания выглядела как поверхность скола в контрольных препаратах, то есть была практически гладкой.

На поздних сроках инкубации во всех исследованных образцах пластмассовых зубных протезов выявлялись ярко выраженные дефекты

Рис.4. Ультратонкие срезы Staphylococcus aureus: а - контрольный препарат, б - после инкубации с «Денталур», частицы пластмассы в области расслоения клеточной стенки, в — частицы пластмассы на поверхности клеточной стенки и внутри цитоплазмы.

При биодеструкции, обусловленной синегнойной палочкой, характерным являлось образование большого числа разных размеров частиц в виде отдельных крошек и их скоплений. При большем увеличении скопления крошек представляли собой конгломераты из частиц пластмассы и биопленки (Рис. 5 а, б). Кроме этого, на гладкой поверхности в участках, прилежащих к краю образцов «Денталур», «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная», появлялся своеобразный рельеф в виде гребней, расположенных в форме «звездочек» (Рис. 5 в). В области гребневидных дефектов поверхности происходило образование углублений, трещин, фенестрация поверхности и десквамация частиц пластмассы. (Рис. 5 г).

Рис.13. Динамика обрастания биоплёнкой гладкой поверхности образцов базисной пластмассы "Фторакс" микроорганизмами.

Рис.14. Динамика обрастания биоплёнкой гладкой поверхности образцов базисной пластмассы "Денталур" микроорганизмами.

Рис.15. Динамика обрастания биоплёнкой гладкой поверхности образцов "Пластмасса бесцветная".

Было показано, что обработка образцов съемных пластмассовых зубных протезов ультразвуком в водной среде является эффективным способом борьбы с микроорганизмами, колонизирующими их поверхность, поскольку удаляет адгезированные микроорганизмы и биопленки (Рис.16).

Рис. 16. Эффективность профилактики биодеструкции зубных протезов из полиуретана «Денталур»: а - поверхность «Денталур» после инкубации со St. aureus (1,5 мес) (хЮО); б — после обработки ультразвуком в течение 3 мин (х20000); в - обрастание биопленкой (Ps. aerugenosa) поверхности «Денталур» (1,5 мес) (х8000); г - после обработки ультразвуком в течение 3 мин (х20000); д - колонизация и формирование биопленки Candida albicans (1,5 мес) на поверхности «Денталур» (х4000); е - после обработки ультразвуком в течение 3 мин (х2000).

Выводы

1. Современными методами электронной микроскопии в эксперименте убедительно доказано явление биодеструкции образцов съемных зубных протезов из пластмасс: «Денталур», «Фторакс», «Пластмасса бесцветная» под действием микроорганизмов полости рта (Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans).

2. Динамика колонизации образцов базисных зубных протезов на ранних сроках максимальна для грибов Candida albicans, минимальна для Enterococcus faecium.

3. Степень микробного обрастания образцов съемных зубных протезов к 1,5 мес инкубации практически одинакова у Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и гриба Candida albicans. Enterococcus faecium на этом сроке инкубации выявляется на поверхности образцов в виде единичных микроколоний.

4. Степень деструкции поверхности полированных образцов базисов пластмассовых зубных протезов зависит от срока инкубации, вида микроорганизма, химической природы базисной пластмассы.

5. Данные о внутреннем строении образцов базисных пластмасс, полученные с помощью резки ионным пучком в сканирующем электронном микроскопе Quanta 200 3D - свидетельствуют о распространении биодеструкции с поверхности материала вглубь - в подповерхностный слой.

6. Очаги персистенции микроорганизмов локализуются в дефектах поверхности (трещинах и кавернах) образцов базисов зубных протезов, а десквамированные частицы полимера с локализованными на них биоплёнками могут приводить к диссеминации инфекционных агентов.

8. Установлено, что применение ультразвуковой очистки образцов базисов зубных протезов является эффективным способом профилактики колонизации их микроорганизмами и, соответственно, их биодеструкции.

Практические рекомендации:

1. Выявленная биодеструкция образцов базисных стоматологических пластмасс для съемных зубных протезов («Денталур», «Фторакс» «Пластмасса бесцветная») требует тщательного соблюдения разработанных методов очистки зубных протезов в процессе их использования. Особенно тщательно следует контролировать эффективность ухода за зубочелюстными протезами и протезами обтураторами из полиуретана «Денталур», так как в диссертации убедительно показано разрушение пластмассовых образцов и поглощение частиц полиуретана стафилококками Staphylococcus aureus.

2. Для профилактики биодеструкции необходимо тщательно полировать поверхность базиса протеза, в том числе и после проведенного сошлифовывания границ готового протеза при припасовке или коррекции.

3. Не выявлено преимуществ базисной пластмассы на основе полиуретана («Денталур») перед акриловыми пластмассами («Фторакс» и «Пластмасса бесцветная») по устойчивости к биодеструкции, что не позволяет отдавать ей предпочтение при протезировании больных с первичными и вторичными иммунодефицитными состояниями.

4. Применение режима резки ионным пучком при исследовании в сканирующих микроскопах нового поколения (типа Quanta 200 3D, FEI Company, USA) позволяет изучать структуру подповерхностного слоя и глубину распространения биодеструктивных изменений различных полимерных зубопротезных материалов.

6. Применение ультразвуковой обработки полимерных зубопротезных материалов является перспективным способом профилактики биодеструкции и сопряженных с нею негативных последствий.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Автандилов Г.А., Лебеденко И.Ю., Диденко Л.В., Анализ процесса взаимодействия бактерий с поверхностью металлических сплавов и полимерных пластмасс, применяемых в ортопедической стоматологии, методом сканирующей электронной микроскопии. Бюллетень СГМУ г.Архангельск - 2010. - №1. - С.64.

2. Диденко Л.В.,Боровая Т.Г., Шевлягина Н.В., Автандилов Г.А., Кост Е.А. (Москва). Качество изображений обезвоженных и необезвоженных биологических образцов в сканирующем электронном микроскопе Quanta 200 3D. Морфология - 2011. -№5. - С. 83.

3. Автандилов Г.А. Ультраструюурное исследование процесса взаимодействия Staphylococcus aureus с полиуретаном. Dental forum. — 2011. -№3. —С. 11-12.

4. Автандилов Г.А. Исследование процесса взаимодействия Staphylococcus aureus с полиуретаном при помощи сканирующего электронного микроскопа Quanta 3D FEI. Сборник трудов научно-практической конференции СНО ПМГМУ имени И.М. Сеченова, посвященной памяти академика РАМН, профессора Николая Николаевича Бажанова Москва -

2011.-С. 3-4

5. Диденко Л.В., Садретдинова О.В., Шевлягина Н.В., Автандилов Г.А., Новокшонова И.В., Карпова Т.И., Груздева О.А., Тартаковский И.С. Морфологические особенности биоплёнок в потенциально опасных водных системах. Эпидемиология. Инфекционные болезни — 2012. -№1. С. 15-19.

6. Автандилов Г.А., Смирнова Т.А., Шевлягина Н.В., Шустрова Н.М., И.Ю.Лебеденко Ультраструктурное исследование биодеструкции полиуретана под воздействием Staphylococcus aureus. Dental Forum -

2012.-№2,-С. 28-34.

7. Didenko L.V. Avtandilov G.A., Shevlyagina N.V., Smirnova T.A., Lebedenko I.Y., Tatti F., Savoia C., Evans G. and Milani M. Biodestruction of polyurethane by Staphylococcus aureus (an investigation by SEM, ТЕМ and V\B).Current microscopy contributions to advances in science and technology, 2012. A. Mendez-Vilas (Ed.), Microscopy Series №5;V.l, p. 323-334.

Отпечатано в РИО МГМСУ 127473, г. Москва, ул. Делегатская, д. 20, стр. 1. Заказ № 264. Тираж 100 экз.

Оглавление диссертации Автандилов, Георгий Александрович :: 2013 :: Москва

Введение 6

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Полимерные материалы, применяемые для изготовления зубных протезов 11

1.2 Биодеструкция пластмасс 15

1.3. Оценка свойств искусственных материалов зубных протезов с помощью электронно-микроскопических методов 1 о 1 о

1.4. Микрофлора полости рта в норме и при различных инфекционно-воспалительных заболеваниях 20

1.5. Биопленки - особая форма существования микроорганизмов

1.5.1. Характеристика биопленки 22

1.5.2. Динамика образования биопленки 23

1.5.3. Биопленка на зубах (зубная бляшка). 27

1.6. Роль биопленок в развитии биодеструкции зуботехнических материалов 31

1.7. Проблема профилактики образования биопленок и их разрушения, как стратегия борьбы с биоповреждениями в 33 ортопедической стоматологии

Глава 2. Материалы и методы исследований

2.1.Характеристика исследованных конструкционных материалов. Методика подготовки образцов зубопротезных пластмасс. 37

2.2. Методика подготовки клинических изолятов культур микроорганизмов.

2.3. Экспериментальная модель «биопленка - базисные пластмассы» 41

2.4. Оценка структурных характеристик образцов зубопротезных пластмасс с помощью методов электронной микроскопии

2.4.1. Метод сканирующей электронной микроскопии 45

2.4.2. Методика исследования подповерхностной структуры образцов посредством резки ионным пучком в двулучевом сканирующем микроскопе Quanta 200 3D

2.4.3. Изучение химического состава зубопротезных пластмасс с помощью рентгеновского микроструктурного анализа

2.4.4. Метод трансмиссионной электронной микроскопии

2.5. Способ ультразвуковой эрадикации микроорганизмов с поверхности полимерных пластмасс

2.6. Применение программы "Scandium" для оценки площади обрастания биопленкой образцов зубопротезных пластмасс. Методика статистического анализа 48

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1. Сравнительная характеристика структуры интактных поверхностей пластмассовых образцов (гладкой, шероховатой поверхности, поверхностей спила и скола), изготовленных из полиуретана ("Денталур") и полиметилметакрилатных базисных пластмасс - «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» 49

3.2. Результаты исследования химического состава образцов пластмасс методом рентгеновского микроструктурного анализа 53

3.3. Структура поверхности образцов пластмасс, инкубированных в питательном ЬВ-бульоне и в фиксирующих растворах 57

3.4. Результаты исследования процессов колонизации грамположительными {Staphylococcus aureus, Enterococcus faecium), грамотрицательными бактериями {Pseudomonas aeruginosa) и грибом {Candida albicans) образцов базисных пластмасс

3.4.1. Результаты исследований процессов колонизации поверхности полиуретана «Денталур» Staphylococcus aureus в динамике, на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца. 60

3.4.2. Результаты исследований процессов колонизации поверхности пластмасс «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» Staphylococcus aureus в динамике, на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца 63

3.4.3. Результаты исследований процессов колонизации поверхности полиуретана «Денталур» Enterococcus faecium в динамике, на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца. 65

3.4.4. Результаты исследований процессов колонизации поверхности пластмасс «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» Enterococcus faecium в динамике, на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца 67

3.4.5. Результаты исследований процессов колонизации поверхности полиуретана «Денталур» Pseudomonas aeruginosa в динамике, на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца 68

3.4.6. Результаты исследований процессов колонизации поверхности пластмасс «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» Pseudomonas aeruginosa в динамике, на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца 73

3.4.7. Результаты исследований процессов колонизации поверхности полиуретана «Денталур» Candida albicans в динамике на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца 77

3.4.8. Результаты исследований процессов колонизации поверхности пластмасс «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» Candida albicans в динамике на сроках инкубации 24, 48 часов, 7,14 суток и 1,5 месяца. 84

3.5. Сравнительный анализ процесса формирования биопленки на поверхности исследованных зубопротезных пластмасс грамотрицательными {Pseudomonas aueroginosa), грамположительными бактериями {Staphylococcus aureus) и грибами Candida albicans 87

3.6. Результаты изучения образцов полиуретана «Денталур» и «Фторакс» (интактных и инкубированных со Staphylococcus aureus) при резке ионным (галлиевым) лучом в сканирующем электронном микроскопе Quanta 200 3D 90

3.7. Сравнительный анализ изменений структуры поверхности зубопротезных пластмасс при бактериальной и грибковой колонизации 93

3.8. Оценка площади обрастания биопленкой поверхности зубопротезных пластмасс с помощью программы «Scandium» 110

3.9. Морфофункциональная характеристика Staphylococcus aureus и Pseudomonas auerogenosa после взаимодействия с пластмассами 120

3.10. Ультразвуковая обработка съемных пластиночных протезов, как способ профилактики образования биопленок 122

Глава 4. Обсуждение результатов исследования 128

Введение диссертации по теме "Стоматология", Автандилов, Георгий Александрович, автореферат

Актуальность проблемы.

Современные технологии и жесткий контроль за применяемыми в ортопедической стоматологии искусственными материалами существенно улучшили качество протезирования.

Материалы, используемые для протезирования, должны обладать механической износостойкостью, устойчивостью к физико-химическим факторам воздействия, быть биосовместимыми и безопасными для организма человека. Совокупность этих свойств обеспечивает долговечность протезов, улучшает качество жизни пациентов [36].

Помимо перечисленных требований к искусственным материалам для протезирования необходимо учитывать характер их взаимодействия с микроорганизмами полости рта [2].

В проблеме взаимодействия микроорганизмов полости рта с зуботехническими материалами можно выделить несколько важных аспектов:

- колонизация бактерий на поверхности искусственных материалов;

- разрушение пластмасс и металлических сплавов под воздействием микроорганизмов;

- формирование дисбиоза и очагов хронической инфекции в ротовой полости;

- образование токсических для организма человека продуктов в результате разрушения микроорганизмами искусственных материалов; разработка эффективных способов борьбы с патогенными микроорганизмами, колонизирующими искусственные материалы, (поиск резистентных к микробной колонизации материалов, профилактических и лечебных препаратов);

- разработка способов эрадикации микроорганизмов с поверхности искусственных съемных протезов при их эксплуатации

-7В перечне проблем, касающихся взаимодействия микроорганизмов ротовой полости с искусственными материалами, наименее изучено влияние микроорганизмов на полимерные компоненты протезов. Для характеристики разрушающего воздействия микроорганизмов на полимерные материалы принят термин «биодеструкция» [115].

Фундаментальной основой для изучения процессов биодеструкции является применение совокупности разных микроскопических методов (световой, люминесцентной, сканирующей и трансмиссионной электронной микроскопии).

Методами микроскопии возможен одновременный анализ структуры зуботехнических материалов и колонизирующих их микроорганизмов. Микроскопический контроль является наиболее объективным для оценки действия антимикробных препаратов, используемых для обработки поверхности различных материалов, применяемых для изготовления стоматологических протезов.

Цель работы - с помощью электронно-микроскопических методов изучить биодеструкцию базисных пластмасс, используемых для изготовления съемных зубных протезов, и предложить способы ее профилактики.

Задачи исследования:

1. Провести анализ поверхности образцов базисных пластмасс при различных способах их обработки.

2. Изучить в сравнительном аспекте динамику колонизации микроорганизмами полости рта образцов полиуретановых и акриловых базисов зубных протезов и дать количественную оценку этого процесса.

4. Выявить очаги персистенции микроорганизмов в образцах пластмассовых базисов зубных протезов.

-85. Обосновать целесообразность применения сканирующей электронной микроскопии для оценки качества стоматологических базисных пластмасс съемных зубных протезов и степени их биодеструктивных изменений.

6. Предложить способы эрадикации микроорганизмов, локализованных на пластмассовых базисах зубных протезов.

Научная новизна

Впервые с применением режима резки ионным пучком при исследовании в сканирующем электронном микроскопе Quanta 200 3D изучена структура подповерхностного слоя образцов базисных пластмасс и выявлена распространенность биодеструктивных изменений в акрилатах и полиуретане.

Положения, выносимые на защиту

1. Методами сканирующей электронной микроскопии установлено явление биодеструкции полимерных зубопротезных материалов с образованием дефектов на их поверхности и в подповерхностном слое под влиянием пародонтопатогенных микроорганизмов Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa и Candida albicans.

4. Биоповреждающий потенциал бактерий реализуется при формировании ими биопленки, а для грибов Candida albicans - на этапе адгезии хламидоспор к поверхности образцов съемных пластмассовых протезов.

Практическая значимость

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что ультразвуковая обработка образцов съемных зубных протезов является эффективным способом борьбы с биопленками и соответственно с биодеструкцией зубопротезных пластмасс;

Личный вклад автора

Автором лично проведены все экспериментальные исследования, включая работу на двулучевом сканирующем электронном микроскопе нового поколения Quanta 200 3D (FEI Company USA), на трансмиссионном электронном микроскопе JEOL 100В (Japan), подготовлены экспериментальные образцы для исследований для количественной оценки биообрастания образцов зубопротезных пластмасс, адаптирована и применена компьютерная программа для измерений "Scandium" (Olympus Japan), проведена статистическая обработка полученных результатов, сформулированы основные положения и выводы диссертации, написаны статьи, диссертация и автореферат.

Заключение диссертационного исследования на тему "БИОДЕСТРУКЦИЯ ЗУБНЫХ ПРОТЕЗОВ ИЗ ПОЛИМЕРНЫХ МАТЕРИАЛОВ (экспериментальное исследование"

- 141 -Выводы

1. Современными методами электронной микроскопии в эксперименте убедительно доказано явление биодеструкции образцов съемных зубных протезов из пластмасс: «Денталур», «Фторакс», «Пластмасса бесцветная» под действием микроорганизмов полости рта {Staphylococcus aureus, Pseudomonas aeruginosa, Candida albicans).

7. Применение сканирующего электронного микроскопа Quanta 200 3D в комплексе с трансмиссионным электронным микроскопом Jeol 100В позволило выявить поглощение десквамационных частиц базисных пластмасс Staphylococcus aureus. 8. Установлено, что применение ультразвуковой очистки образцов базисов зубных протезов является эффективным способом профилактики колонизации их микроорганизмами и, соответственно, их биодеструкции.

Практические рекомендации:

1. Выявленная биодеструкция образцов базисных стоматологических пластмасс для съемных зубных протезов «Денталур», «Фторакс» «Пластмасса бесцветная» требует тщательного соблюдения разработанных методов очистки зубных протезов в процессе их использования. Особенно тщательно следует контролировать эффективность ухода за зубочелюстными протезами и протезами обтураторами из полиуретана, так как в диссертации убедительно показано разрушение пластмассовых образцов и поглощение частиц полиуретана стафилококками Staphylococcus aureus.

2. Для профилактики био деструкции необходимо тщательно полировать поверхность базиса протеза, в том числе и после проведенного сошлифовывания границ готового протеза при припасовке или коррекции.

3. Не выявлено преимуществ базисной пластмассы на основе полиуретана «Денталур» перед акриловыми пластмассами «Фторакс» и «Пластмасса бесцветная» по сопротивлению к биодеструкции, что не позволяет отдавать ей предпочтение при протезировании больных с первичными и вторичными иммунодефицитными состояниями.

5. Для оценки биоповреждений полимерных стоматологических материалов использование метода сканирующей электронной микроскопии является оптимальным. На основе этой оценки возможна экспертиза новых материалов с точки зрения их устойчивости к биодеструкции и разработка профилактических мер по устранению негативного влияния биодеструкции. 6. Применение ультразвуковой обработки полимерных зубопротезных материалов является перспективным способом профилактики биодеструкции и сопряженных с нею негативных последствий.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2013 года, Автандилов, Георгий Александрович

1. Авакян A.A., Кац J1.H.,Павлова И.Б // Атлас анатомии бактерий, патогенных для человека и животных М.: Медицина, 1972.-183 с.

2. Агапов B.C., Арутюнов С.Д., Шулакова В. В. // Инфекционные воспалительные заболевания челюстно-лицевой области Медицинское информационное агентство, 2004.184 стр.

3. Альтер Ю.М., Огородников М.Ю. Съемные зубные протезы с базисом из полиуретана //Учебное пособие для врачей стоматологов-ортопедов и зубных техников. Москва. 2009 г. с. 25.

4. Арутюнов A.C., Царев В.Н., Седракян А. Н., Сулемова P. X., Комов Е.В. Сравнительный анализ адгезии микробной флоры рта к базисным материалам зубных протезов на основе полиуретана и акриловых пластмасс // Пародонтология. 2008. т. 49. № 4. с. 3-8.

5. Бакерникова Т. М. Дефекты зубных рядов у детей и сравнительная оценка различных методик протезирования.// Автореф. дисс. канд.наук. 2009. 25 с.

6. Быстров Г. А., Гальперин В.Б., Титов Б.П. Обезвреживание и утилизация отходов в производстве пластмасс// JI., Химия, 1982, 264 с.

7. Ван Нурт Ричард. // Основы стоматологического материаловедения. Elsvier Science Limited, 2002.- с.221-230.

8. Вольф А.Г. Микробная флора полости рта: пути заселения, распространения и распределения по биотопам полости рта в норме и патологии // Стоматологическое обозрение, №1, 2004, С 7-10.

9. Гаврилов Е.И., Оксман И.М. Ортопедическая стоматология // М. Медицина, 1979, 460 с.

10. Гернер М.М. Батовский В.Н., Шарчилев В.И. Нападов М.А. Основы материаловедения по стоматологии // М.: Медицина. 1969. 295 с.

11. Гожая Л.Д. Аллергические заболевания в ортопедической стоматологии //М. Медицина, 1988.-160 с.

12. Гожая Л.Д. Аллергические и токсикохимические стоматиты, обусловленные материалами зубных протезов.// Методическое пособие для врачей стоматологов. М. 2000, 17 с.

13. Гожая Л.Д., Руденко П.Р. Исследование изнашивания стоматологических материалов // Стоматология. 1986. № 1. - с. 1315.

14. ГОСТ Р 51830-2001 Оценка биологического действия медицинских стоматологических материалов и изделий. Классификация и приготовление проб.

15. Грудянов А. И., Овчинникова В. В. Частота выявления различных представителей пародонтопатогенной микрофлоры при пародонтите разной степени тяжести// Стоматология. 2009 т.88, №3, с.34-37

16. Дойников А.И., Синицын В.Д. Зуботехническое материаловедение // М. Медицина, 1986.-208с.

17. Жадько С.И. Клиническая и лабораторная оценка съемных пластиночных протезов, изготовленных прессованием и центробежным литьем: Автореф. дисс. канд. мед. наук. Калинин 1987; 24 с.

18. Заболоцкий Я.В., Макеев В.Ф., Корень В.Н. и др. Влияние съёмных пластиночных протезов и материалов, из которых они изготовлены, на организм экспериментальных животных и человека ///Львов, мед. Ин-т. Львов, 1989. 28 с.

19. Зайченко О.В. Влияние биодеструкции съемных пластиночных протезов из различных акриловых пластмасс на ткани ротовой полости// Авторефер. дисс. канд. мед. наук. Москва 2005, 25 с.

20. Земская Е.А, Сыдыгалиев К.И. Состояние местных защитных факторов полости рта у больных, пользующихся съемными протезами нз акриловых полимеров// М.: Медицина, 1982. Вып. №5. с.60-63.

21. Ильина Т.С., Романова Ю.М., Гинцбург A.JI. Биопленки как способ существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина: феномен, генетический контроль и системы регуляции их развития. // Генетика. 2004. т.40. №11. с. 1445-1456.

22. Кисельникова Л.П., Кириллова Е.В., Царев В.Н., Артемова В.О// МГМСУ «Стоматология детского возраста и профилактика» 2009. № 4, с.86-94

23. Копейкин В.Н., Миргазизов М.З. Ортопедическая стоматология // М. Медицина, 2001 г. 624 с

24. Курдиш И.К.Закономерности взаимодействия микроорганизмов с твердыми материалами // Мжробюл. журн., 2001. т.63. - № 6. - С. 7188.

25. Ламант Р.Д., М.С. Лантц, Р.А.Берне, Д.Д.Лебланк Микробиология и иммунология для стоматологов пер. с англ. Под ред. Леонтьева В.К. // Москва. Практическая медицина. 2010, 504 с.

26. Лебеденко И. Ю., Серебров Д. В., Воронов А.П., Царев В.Н. Адгезия микрофлоры полости рта к стоматологическим полимерам холодного отверждения // Российский стоматологический журнал. 2003. N5.

27. Лесовой B.C., Липницкий Ф.И.Очкурова О.М. Кандидоз ротовой полости// Проблемы медицинской микологии. 2003.Т.5. №.1 с.21-24.

28. Липатов Ю. С. , Керча Ю. Ю., Сергеева Л. М. Структура и свойства полиуретанов // Киев: «Наукова думка», 1970, 79 с.

29. Маркин П.Ю. Сравнительная оценка эксплуатационных и физико-механических свойств акриловых пластмасс холодного отверждения для перебазировки и починки съемных зубных протезов.//Российский стоматологический журнал. 2006, № 3. — с. 12-13.

30. Маянский А.Н., Чеботарь И.В. Стафилококковые биопленки: структура, регуляция, отторжение// Ж. микробиол. 2011. № 1. с. 101108

31. Международный стандарт ИСО № 10993 разделы I-XII «Биологические методы оценки стоматологических материалов», 2007 г.

32. Огородников М. Ю. Улучшение свойств базисных материалов, использующихся в ортопедической стоматологии: этапы развития, совершенствования и перспективные направления// Стоматология. 2004. т. 83, N6. с. 69-74.

33. Платэ А.Н. Итоги науки и техники. // М.Химия.1976. т. 10 с. 204

34. Пхакадзе Г. А. Морфологические и биохимические аспекты биодеструкции полимеров. Киев: Наукова Думка, 1986. 152 с.

35. Семенов С.А., Гумаргалиева К.З., Заиков Г.Е. Биоповреждения материалов и изделий техники // в кн. Горение, деструкция и стабилизация полимеров, под ред. Заикова Г.Е. 2008 г. 422 с

36. Сулемова Р. X. Сравнительная характеристика динамики микробной колонизации микробной колонизации съемных зубных протезов с базисами из полиуретана и акриловых пластмасс// Авторефер. Дисс.канд.мед.наук. 2008, 24 с.

37. Сыдыгалиев К. Клинико-лабораторное исследование нового базисного материала «Бакрил» //Автореф. дисс. канд. мед. наук. М., 1982, 23с.

38. Тимербаев М.А., Шипунова О.В., Мошкевич С.А. Деструкция стоматологических полимеров и ее роль в этиологии протезных стоматитов// Стоматология 1989; 1: 68-70

39. Трезубов В. Н., Мишнев Л. М., Жулев Е. Н. Ортопедическая стоматология. Прикладное материаловедение под ред. Проф Трезубова

40. B.Н. // 5-е изд. испр. и доп. Издательство: М.МЕДпресс-информ. 2008 г. 384 с.

41. Трезубов В.Н., Штейнгарт М.З., Машнев Л.М.

42. Ортопедическое стоматологическое материаловедение и использование его достижений в клинической практике// М., 1994.1. C. 90-91.

43. Хисамов P.C., Газизов A.A., Газизов А.Ш. Увеличение охвата продуктивных пластов воздействием. Москва ОАО ВНИИОЭНГ 2003 с. 566

44. Царев В. Н. Микробиология, вирусология и иммунология, под ред. В. Н. Царева// М. : Практическая медицина : ГЭОТАР-Медиа, 2009. 540 е., 40. л. ил.

45. Энциклопедии полимеров, т. 1 — 3, гл. ред. В. А. Каргин, М., 1972 — 1977; 235 с.

46. Юдина Н.А., Курочкина А.Ю. Контроль биопленки в современной стратегии профилактики и лечения стоматологических заболеваний // Стоматология 3, 2009, с. 77-81

47. Юшин В. Д., Бунова Г. 3. Методы контроля и анализа веществ: учеб. Пособие // М-во образования и науки Рос. Федерации, Самар. гос. аэрокосм, ун-т им. С. П. Королева. Самара : СГАУ, 2004. - 63 с.

48. Ягафарова Г.Г. Экологическая биотехнология в нефтегазодобывающей и нефтеперерабатывающей промышленности // Учеб. пособие. -Уфа: Изд-во УГНТУ, 2001. 214 с.

49. Aamer A. S., Hasan F., Hameed A., Ahmed S. Biological degradation of plastics: A comprehensive review Biotechnology Advans. 2008. № 26.p. 246-265.

50. Aas A. J. Paster, Lauren N. Stokes, lngar Olsen, and Floyd E. Dewhirst. Defining the Normal Bacterial Flora of the Oral Cavity //Journal of Clinical Microbiology. 2005, Vol.43. N11. p.5721-5732 .

51. Arbuthnott J.P., Smith C.J. Bacterial adhesion by host/ pathogen interaction in animals // Adhesion of microorganisms to surface. London- New York -1979. p. 165-198.

52. Baytekin H. T., Patashinski A. Z., Branicki M., Baytekin B., Soh S., Grzybowski B. A. . The Mosaic of Surface Charge in Contact Electrification // Science. 2011. V. 333. p. 308-312.

53. Capitelli F., Sorlini C. Microorganisms attack synthetic polymers in items representing our cultural heritage//Appl. Environ. Microbiol. 2008. V .74. N.3. p.564-569.

54. Chaturvedi T.P. An overview of the corrosion aspect of dental implants (titanium and its alloys) // Indian J. Dent. Res. 2009. V.20, N1, p. 91-98.

55. Coghlan, A. "Slime City", New Scientist 15 (2045), pp 32-36 (August 31, 1996).

56. Costerton J.W., Stewart P.S., Greenberg E.P. Bacterial biofilm: a common cause of persistent infections // Sciens. 1999, 284. p. 318-322.

57. Cortizo C., Lorenzo M.F. Evalution of early stages of oral Streptococci biofilm growth by optical microscopy// Effect of antimicrobial agents .2007. Comm. Current Res.a. Educ. Topics a. Trends in Appl. Microbiol. Mendez-Vilas (Ed.).

58. Da Rocha S.S., Bernardi A.C.A., Pizzoloto A.C., Adabo G. L, Pizzoloto E.L. Streptococcus mutans attachment on a cast titanium surface.// Mat. Res. 2009.V.12, N1, p.1-7

59. Danese P. N., Pratt L. A., Kolter R. Exopolysaccharide production is required for development of Escherichia coli K-12 biofilm architecture // J. Bacteriology March 2000,Jun;182 (12) 3593-6.

60. Davey M. E., O'Tooi G. A . Microbial biofilm: from ecology to molecular genetics // Microbiol, a. Mol. Biol. Rev. 2000. V.64. N4. p.847-867.

61. Donlan R. M. Biofilms: Microbial life on surfaces // Emerg. Infect Dis. 2002. V. 8. p. 1-20.

62. Dreeszen, P.H. Biofilm: The Key to Understanding and Controlling Bacterial Growth in Automated Drinking Water Systems (2nd edition), Edstrom Industries Inc. (June 2003), 230 p.

63. Dunny M.W. Bacterial adhesion: seen any good biofilm lately? //Clin. Microbiol. Rev. 2002.V.15. p. 155-166.

64. El-Soth A.A., Pietrantoni C., Bhat A., Okada M., Zambon J., Aquilina A., E. Berbary. Colonization dental plaque A reservoir of respiratory pathogenfor hospital-acquired pneumonia in institutionalized elder// Chest. 2004. V.126.N 5. p. 1575-1582.

65. Elter C., Heuer W.,DemlingA. ,Hanning M.,HeidenblutT., Bach W.F.,Stiesch -Shlotz M. Supra- and subgingival biofilm formation on implant abutments with different surface characteristics// Intern. J. Oral a. Maxill. Implant. 2008.V.23. N2. p.327-333.

66. Erlandsen S.L., KristichC.J., Dunny M.Ultrastructure of Enterococcus feacalis biofilms // Biofilms. 2004. V.l. p. 131-137.

67. Froeliger H. E. Fives-Taylor. Streptococcus parasanguis fimbria-assciated adhesin Fapl is required for biofilm formation. // Infect. Immun. 2001. V. 69. N.4. p.2512- 2519.

68. Fusayama T. " New Concepts in Operative Dentistry"// Quintessence.Publ.Berlinetc.1980.164 p.

69. Fusayama T. "Two layers of carious dentin, diagnosis and treatment. // Op. Dent.1979, N2, 63-70

70. Gordon R,. Martinez J P., Löpez-Ribot J. L.Candida biofilms on implanted biomaterials: a clinically significant problem //Fems yest. Res. 2006.1. N 7. p.970-986.

71. Götz F. Stafilococcus and biofilms // Mol .Microbiol. 2002.V.43.p.l3671 o^o ±3 /O.

72. Handley P. S., A.E. Jacob Same structure and physiological properties of fimbriae of Enterococcus feacalis // J.Gen. Microbiol. 1981 .V 127. p.2 87293.

73. Howard.G.T. Biodegradation of polyuretan a review //Internat.Biodeterior. a. Biodegrad. 2002.V.49. p.245-252

74. Hubble T.S., HattonJ.F., Nallapareddy R.S., Murray B. E. Gillespie M.J. Influence of Enterococcus feacalis proteases and the collagen-binding protein Ace on adhesion to dentine // Oral microbial. Immun. 2003.V. 18 . p.121-126.

75. Ian W. Sutherlandl Biofilm exopolysaccharides: a strong and sticky framework // Microbiology 2001, 147, p.3-9

76. Ise N.and I. S. Sogami, Structure Formation in Solution: Ionic Polymers and Colloidal Particles, (ISBN-10 3-540-25271-1. Springer, New York, 2005).

77. Ito S. and Karnovsky M.J. (1968) Formaldehyde/glutaraldehyde fixatives containing trinitro compounds // J. Cell Biol. 39, p.168a 169a.

78. Jonson M.C. ,Bozzola J.J. ,Shechmeister I.L. Morphological study of of Streptococcus mutans and two extracellular polysacharide mutans

79. J. Bacteriol. 1974 .V .118.N.l.p. 304-311.

80. Kawai F. Bacterial degradation of acrylic oligomers and polymers//Appl. Microbiol. Biotechnol. 1993 .V.39, p. 382-385.

81. Klotz A., Drutz D. J., Zajic J. E. Factors governing adherence of Candida species to plastic surfaces// Infect, a Immun, . 1985, V. 50, N. l.p. 97-101

82. Koltenbrader P. E., Palmer R.J., Periasami S., Jacubovich N.S. Oral multispecies biofilm development and key role of cell-cell distance// Nat. Rev Microbiol. 2010 Jul;8(7):471-80.

83. Komiyama K, B. F. Habbick, R. J. Gibbons Interbacterial adhesion between Pseudomonas aeruginosa and indigenous oral bacteria isolated from patients with cystic fibrosis //Canad. J. Microbiol 1987, V.33. N1. p. 27-32.

84. Kuramitsu H. K., X. He Lux X., Anderson, M. H., Shi W. Interspecies interactions within oral microbial communities// Microbiology and Molecular Biology Reviews .2007. Vol. 71, No. 4 p. 53-670

85. Latasa C., Solano C., Penades J.R., Lasa I. Biofilm-associated protein// C.R. Biol. 2006. V.329. p.849-857

86. Le Chevallier, M.W., Lowry, C.D., Lee, R.G., & Gibbon, D.L. "Examining the Relationship between iron corrosion and the distribution of biofilm bacteria"// Journal AWWA 85, pp. 111-123 (July 1993).

87. Lejeune P. Contamination of abiotic surfaces: what a colonizing bacterium sees and how to blur it. //Trend in microbial. 2003. V.l 1. № 4 p. 179-184.

88. Levesque C. Vadenboncouer C., Chandad F., Frenette M. Streptococcus salivarius fimbriae are composed of glycoprotein containing repeated motif assembled into filamentous nondissociable structure// J. Bacteriol. 2007.V.183 . N 9. p. 2724-2732.

89. Marsh P.D. Dental plaque as microbial biofilm // Caries Res. 2004. V. 38.p.204-211.

90. Maruthamuthu S., Rajasekar A., Sathiyanarayanan S., Muthukumar N,.Paianiswamy N.i. Electrochemical behaviour of microbes on orthodontic wires.// Curr. Sci.2005. V.89. N 6.p. 988-996.

91. Nallapareddy R.S., .Singh K. , Sillnpaa J. , Garsin D., Hook M., Erlandes S. L. , Murray B. E. Endocarditis and biofilm -associated pili Enterococcus feacalis // J. Clin . Invest. 2006 .V. 116. N 10. P.2799-2807.

92. Newman, G.R., Jasani, B. and Williams, E.D. (1982) The preservation of ultrastructure and antigenicity. // J. Microscopy, 127, p.5-6

93. Noar H. J., Evans R. D., Wilson D., Costello J., Ioannou E., Aveni A., Mordan N, J., Wilson M., Pratten J. An in vitro study into the corrosion of intra oral magnets in the presence of dental amalgam //Europ. J. of ortodont.2003. V. 25, p.615 - 619.

94. Ohgushi K, Fusayama T ¡"Electron microscopic structure of the two layers of carious dentine". // J. Dent. Res. 1975; 54: 1019-1026

95. Palmer R J., Gordon, J. O Jr., S. M. Cisar, P. E. Paul E. Kolenbrander Coaggregation-Mediated interactions of Streptococci and Actinomyces detected in initial human dental plaque // J. Bacteriol. 2003. Vol. 185. No. 11 p. 3400-3409.

96. Premaj R., Doble M. Biodégradation of polymers // Ind. J. biotechnol. 2005. V. 4.p. 186-193.

97. Reynolds E.M.The use of lead citrate at high pH as an electron -opaque stain in electron microscopy. // Cell Biol. 1963 April 1; 17(1): 208-212.

98. Rickard A .P , Peter Gilbert P, High N J, Kolenbrander P. E , Handley P. S. Bacterial coaggregation:an integral process in the d evelopment of multi-species process in the development // Trends in microbial.2003.V.ll. N.2. p.94-100.

99. Sarkonen N. Oral Actinomyces species in health and disease: identification, occurrence and importance of early colonization. Publication of National Health Institute (8) 2007. Helsinki. 46 p.

100. Sesma N., Lagana D. C., Morimoto S., Gil C. Effect of denture surfaces glazing on denture plaque formation // Brazilian Dent. J. 2005. V.16 N.2 . p. 129-134.

101. Simoncini R. Cancer is a fungus // Review by Nexus Magazine Edizioni Lampis, Rome, Italy, 2007, p.12 -16.

102. Smith A .J., Jackson M.S., Bagg J. The ecology of Staphylococcus species the oral cavity // J. Mol. Microbiol. 2001 V.50. p.940-946

103. Tirpak. G. Microbial degradation of plastized P VC//Sp. Journ. Physiol Rev, 1969, 49(2), 163-239.

104. Van der Borden A.J., van der Werf H., van der Mei H.C., Bussher H.J. Electric Current-Induced Detachment of Staphylococcus epidermidis Biofilms from Surgical Stainless Steel. //Appl.Environ. Microbiol. 2004 November; 70(11): 6871-6874.

105. Van der Hocven J. S., De Jong M.H., .H. Rogers A.H and Camp P.J.M. A conceptual model for the co-existence of Streptococcus Spp. and Actinomyces Spp. in dental plaque // J. Dent. Res. 1984.V. 63. N.3. p. 389392.

106. Videla H.A., Gomez S.G., Preventing MIC through Microbial Adhesion Inhibition// Saravia University of la Plata Guiamet, INIFTA, Corrosion 98, March 22-27, 1998, San Diego NACE International

107. Wu C., Mishra A., Yang J., Cisar J. O., A. Das A., and Ton-That Hung, Dual function of a tip fimbrillin of Actinomyces in Fimbrial assembly and receptor binding// J. of Bacteriology. 2011, Vol. 193, No. 13 p. 3197-3206.

108. Ximenez-Fyvie L.A.,Haffaejee A.D. Microbial composition of supra- and subgingival plaque in subjects with adult periodontitis // J. Clin.Periodontol. . 2000. V.27.p.722- 732.

109. Рыбальченко O.B. Морфо-физиологические аспекты взаимодействий микроорганизмов в микробных сообществах.// автореф. Дисс. докт.биол.наук. 2003. 337 с