Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов

Козина, Людмила Семеновна

Диссертации по медицине → Геронтология и гериатрия

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.53) на тему:Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Козина, Людмила Семеновна Санкт-Петербург 2009 г.

Ученая степень: доктора биологических наук

ВАК РФ: 14.00.53

Автореферат диссертации по медицине на тему Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов

ииа4Б7053

КОЗИНА Людмила Семеновна

АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ГЕРОПРОТЕКТОРНЫХ ПЕПТИДНЫХ БИОРЕГУЛЯТОРОВ

14.00.53 - геронтология и гериатрия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Санкт-Петербург - 2009

003467053

Работа выполнена в лаборатории биохимии Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии Северо-Западного отделения РАМН

Научный консультант:

член-корреспондент РАМН, доктор медицинских наук, профессор Хавинсон Владимир Хацкелевич

Официальные оппоненты:

академик РАН, доктор биологических наук, профессор Ноздрачев Александр Данилович

доктор медицинских наук, профессор Малинин Владимир Викторович

доктор биологических наук, профессор Розенгарт Евгений Викторович

Ведущая организация:

ФГУ «Российский научно-исследовательский институт геронтологии» ФАЗСР Росз драва РФ

диссертационного Совета Д601.001.01 при Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН по адресу: 197110 Санкт-Петербург, пр. Динамо, д .3.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН {197110 Санкт-Петербург, пр. Динамо, д. 3).

Защита состоится «_

Автореферат разослан

2009 г.

Ученый секретарь

диссертационного Совета

доктор медицинских наук, профессор

Рыжак Г. А.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы

Свободнорадикальная теория старения, предложенная в 50-е г.г. прошлого столетия Д. Харманом и получившая дальнейшее развитие в многочисленных работах зарубежных и отечественных исследователей, к которым относятся в первую очередь Н.М. Эммануэль и его школа, до настоящего времени считается одной из самых перспективных теорий, объясняющих механизмы старения и связанных с ним патологических процессов.

Известно, что процессы старения организма и формирования возрастной патологии обусловлены ростом молекулярных повреждений, вызываемых свободными радикалами, а также нарушением функции системы антиоксидантной защиты организма. При этом наблюдается дисбаланс показателей антиоксидантной и прооксидантной систем, определяющий интенсивность патологических процессов. Оксидативные реакции приводят к нарушению регуляции клеточного гомеостаза, что способствует развитию заболеваний или индуцирует процесс преждевременного старения [Зенков Н.К. и соавт.,2001; Хавинсон В.Х. и соавт., 2003; Дубинина Е.Е., 2006]. В основе этих нарушений лежат процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые носят каскадный характер, окислительной модификации белков и ДНК.

Наряду с этим установлено, что одной из наиболее важных регуляторных функций эндогенных пептидов (глутатион, карнозин и его производные, некоторые нейропептиды) является ограничение чрезмерной активации свободнорадикальных процессов, прежде всего ПОЛ, и поддержание способности системы антиоксидантной защиты противодействовать окислительному стрессу, развивающемуся в организме при патологических процессах, действии неблагоприятных факторов внешней среды и старении [Болдырев A.A., 1998; Хавинсон В.Х. и соавт., 2003; Лысенко A.B. и соавт., 2005]. Принимая во внимание разнообразие физиологических эффектов регуляторных пептидов, легко представить, что уменьшение их продукции может привести к нарушению механизмов пептидной регуляции и постепенному угасанию функций в стареющем организме.

В Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН выделено из тканей животных большое количество геропротекторных полипептидных препаратов, представляющих собой низкомолекулярные соединения пара- и аутокринной природы, выполняющие функции внутри- и межклеточных мессенджеров. Они, как и многие синтезированные на основе изучения их аминокислотного состава короткие пептиды, принимают участие в переносе информации между группами клеток, регулируют их активность и обладают полифункциональным действием в организме. Широкий спектр фармакологической активности этих соединений связан с их влиянием на ряд наиболее общих механизмов, лежащих в основе разнообразных патологичес-

ких процессов. Установлено, что они способствуют увеличению продолжительности жизни, тормозят развитие опухолей, обладают иммуномодулирующим действием и т.д. [Анисимов В.Н., 2003; 2008]. Существует представление о том, что соединения пептидной природы могут осуществлять свои функции на уровне межклеточного взаимодействия между геномом и структурно-функциональными элементами нейроиммуно-эндокринной регуляции [Хавинсон В.Х., Кветной И.М. и соавт., 2003; Пальцев М.А., Кветной И.М., 2008]. По-видимому, пептиды, обладающие антиоксидантной активностью, способны корректировать нарушения подобного взаимодействия в условиях окислительного стресса, возникающего при старении вследствие развития различных патологических процессов (сердечно-сосудистые заболевания, нарушение мозгового кровообращения, злокачественный рост, нейродегенеративные болезни и т.д.).

Механизмы действия регуляторных пептидов до настоящего времени объясняют с позиций существования пептидного каскада, сформулированных в гипотезе о функциональном континууме пептидов [Ашмарин И.П., Каменская М.А., 1988; Ашмарин И.П., Каразеева Е.П., 1996; Ашмарин И.П., Королева С.В, 2003]. Каждый пептид имеет спектр биологической активности, определяемый, во-первых, его непосредственным действием и, во-вторых, его способностью индуцировать выход эндогенных регуляторов, в том числе и других регуляторных пептидов. В свою очередь, каждые из них также могут служить индукторами выхода следующей группы пептидов и т.д., благодаря чему формируется сложный каскадный процесс. Гипотеза о существовании такой системы регуляции позволяет преодолеть серьезные противоречия, возникающие при попытках объяснения относительно длительных физиологических эффектов короткоживущих пептидов. Другим, механизмом действия регуляторных пептидов считается их процессинг, в результате которого становится возможным в короткие сроки путем активации определенных протеолитических ферментов образовывать в нужном месте необходимое количество требуемых пептидов [Гомазков O.A., 1995]. Образующиеся короткие фрагменты из 3-4 аминокислотных остатков, полностью лишенные гормональной активности, могут оказаться значительно более эффективными, чем исходные соединения.

Известно, что любая клетка наделена системой защиты от АФК и продуктов перекисного окисления, которые способны нанести ей непоправимый вред. Значительная часть этой защитной системы локализована в митохондриях и микросомах и представлена такими ферментами, как супероксиддисмутаза, каталаза и глутатионпероксидаза. Ингибирование избыточного свободнорадикального окисления (СРО) играет особо важную роль в функционировании митохондрий, мембрана которых несет на своей поверхности комплексы ферментов, осуществляющих транспорт электронов, цикл трикарбоновых кислот и процессы фосфорилирования.

Нормальная деятельность ферментных систем митохондрий выполняет важную роль в осуществлении физиологических функций клетки, работа которой во многом определяется состоянием проницаемости, пассивного и активного транспорта, а также стабильностью митохондриальных мембран [Скулачев В.П., 1997; Skulachev V.P., 2000; 2002]. Отсюда правомочно заключить, что даже незначительные структурные и функциональные сдвиги в митохондриальных мембранах, возникшие вследствие усиления процессов перекисного окисления, могут существенно нарушать функции клетки. Вместе с тем регуляторные пептиды, ингибируя кислородозависимые процессы в мембране, способствуют сохранению ее целостности и обеспечивают нормальное функционирование клетки. В этой связи перспективной представляется гипотеза о вызываемой пептидными регуляторами длительной модификации характера экспрессии генов, кодирующих белки митохондриальных мембран [Khavinson V. Kh. et al., 2002, 2007].

Пептидный компонент регуляции проявляется на всех уровнях функционирования организма [Гомазков O.A., 1995; Шерстнев В.В. и соавт, 1999]. Одним из наиболее важных механизмов реализации разнообразных эффектов биологически активных пептидов является их нормализующее влияние на интенсивность свободнорадикального окисления в органах и тканях, что, как правило, сопровождается усилением клеточного и гуморального иммунитета, улучшением коагулогических показателей, повышением нейрональной активности, оптимизацией когнитивных функций и т.д. [Лысенко A.B. и соавт., 2005]. Особое значение приобретает пептидная регуляция при коррекции нарушений, вызванных воздействием на организм стрессорных факторов, способствующих ускоренному старению. В связи с этим можно рассматривать пептидные биорегуляторы как перспективные фармакологические средства, способствующие замедлению возрастных и стресс-индуцированных изменений в организме.

Исходя из вышеизложенного, весьма актуальным представляется проведение экспериментального изучения влияния коротких пептидов как антиоксидантов на интенсивность свободнорадикальных процессов на клеточном уровне, а также в различных органах при воздействии стресса и при старении. Это позволит выявить и оценить антиоксидантные эффекты коротких пептидов и возможные механизмы их реализации, что представляет значительный научно-практический интерес.

Цель и задачи исследования

Целью исследования являлось изучение влияния на свободнорадикальные процессы ряда геропротекторных препаратов, разработанных на основе коротких пептидов (эпиталон, вилон, пинеалон и др.) и возможных механизмов их антиоксидантного действия.

В рамках указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить возрастную динамику основных показателей свободнорадикального окисления и системы антиоксидантной защиты в крови, мозге и печени крыс.

2. Исследовать влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в сыворотке крови и тканях крыс.

3. Изучить влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в условиях действия экстремальных факторов (гипоксия, гипокинезия).

4. Оценить антиоксидантную активность и мембранопротекторные свойства коротких пептидов в модельных экспериментах:

• исследовать прямую антиоксидантную активность коротких пептидов;

• исследовать влияние коротких пептидов на Ре2+-индуцированное окисление липопротеинов крови и скорость осмотического гемолиза эритроцитов;

• изучить действие коротких пептидов на нейрональные клетки мозжечка.

5. Изучить механизмы защитного действия пептидных биорегуляторов при гипоксии:

• исследовать влияние коротких пептидов на устойчивость крыс к воздействию гипобарической гипоксии;

• исследовать влияние коротких пептидов (пинеалон) на состояние потомства крыс, подвергнутых воздействию гипобарической гипоксии;

• исследовать влияние пинеалона на поведенческие реакции крысят, перенесших пренатальную гипоксию;

• исследовать влияние пинеалона на нейрональные клетки мозжечка потомства крыс, подвергнутых воздействию гипобарической гипоксии;

• исследовать влияние коротких пептидов на клетки нейробластомы человека при гипоксическом воздействии.

Научная новизна работы

этом выявлено заметное повышение уровня содержания в белках карбонилпроизодных аминокислот, что свидетельствует об использовании активных форм кислорода в реакциях окислительной модификации белков. Возрастная динамика свободнорадикального окисления в гомогенатах мозга аналогичных изменений не претерпевает, однако впервые выявлена интенсификация свободнорадикальных процессов в митохондриях, выделенных из ткани коры больших полушарий и гипоталамуса старых крыс (24 мес.) по сравнению с молодыми животными (3 мес.). Обобщены данные, полученные в отношении действия коротких пептидов (эпиталон и его структурные аналоги, вилон и кортаген) на свободнорадикальные процессы и основные системы антиоксидантной защиты в крови, печени и мозге лабораторных животных. Впервые показано, что исследуемые пептидные препараты особенно эффективны как антиоксиданты при старении животных. Наиболее выраженные антиоксидантные свойства были выявлены у эпиталона, эффективность которого еще более возрастает при воздействии на организм экстремальных факторов (гипоксия, гипокинезия).

Впервые проведено изучение антиоксидантной активности и мембранопротекторных свойств эпиталона, вилона и других коротких пептидов (везуген, пинеалон) в модельных экспериментах in vitro. Установлено, что исследуемые пептиды не обладают прямой антиоксидантной активностью, но способны защищать липопротеиновые комплексы плазмы крови от Ре2+-индуцированного окисления и подавлять осмотический гидролиз эритроцитов.

Приоритетными являются исследования, проведенные в области изучения антигипоксических свойств коротких пептидов. Выявлена способность пинеалона, а также эпиталона и вилона защищать нейроны мозжечка потомства крыс, подвергнутых гипоксическому воздействию, от окислительного стресса, индуцируемого перекисью водорода или лигандом NMDA-рецепторов глутамата М-метил-О-аспартатом. Нейропротекторное действие коротких пептидов показано также в экспериментах с использованием клеток нейробластомы человека, культивируемых в условиях гипоксии. Установлено, что эпиталон и, отчасти, вилон проявляют антигипоксический эффект, препятствуя подавлению экспрессии металлопептидаз (неприлизина и инсулин-деградирущего фермента), участвующих в катаболизме Р-амилоидного пептида, играющего исключительно важную роль в патогенезе весьма распространенной в пожилом и старческом возрасте болезни Альцгеймера.

Практическая ценность работы

биорегуляторов, поскольку ослабление мощности антиоксидантных систем организма является одной из ведущих причин развития возрастной патологии и преждевременного старения.

Показана возможность использования эпиталона и вилона в качестве стресспротекторных соединений при воздействии на организм таких сопутствующих старению неблагоприятных экологических факторов, как гипоксия и гипокинезия.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что ряд исследуемых коротких пептидов (пинеалон, везуген, эпиталон и вилон) обладают выраженными нейропротекторными свойствами, что проявляется в защите нервных клеток от окислительного стресса, развивающегося в результате гипоксического воздействия. Детальное изучение нейропротекторной роли указанных соединений создает предпосылки для разработки на их основе лекарственных средств для профилактики и терапии различных нейродегенеративных заболеваний, ассоциированных с возрастом. Особенно перспективны в этом отношении трипептиды пинеалон и везуген, которые могут быть использованы в качестве средств, способствующих улучшению качества жизни и активного долголетия человека.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Короткие пептиды (эпиталон, кортаген, вилон, пинеалон и везуген) обладают антиоксидантными свойствами в экспериментах от vivo и in vitro.

2. Антиоксидантные эффекты коротких пептидов (эпиталон, вилон) особенно наглядно проявляются при старении и в условиях действия на животных экстремальных факторов (гипокинезия, гипоксия).

3. Короткие пептиды (эпиталон, вилон, везуген и, особенно, пинеалон) обладают антигипоксическим действием, что выражается в повышении устойчивости животных к гипобарической гипоксии.

4. Пинеалон повышает активность антиоксидантных ферментов в мозгу и печени беременных самок крыс, подвергнутых воздействию гипобарической гипоксии, и обеспечивает защиту потомства от ее последствий.

5. Короткие пептиды (пинеалон, эпиталон и вилон) при гипоксическом воздействии оказывают протекторное влияние на нейроны мозжечка крыс и клетки нейробластомы человека.

Апробация работы

международной научно-практической конференции «Медико-психологическая реабилитация: современное состояние и перспективы развития» (Санкт-Петербург, 2004), международном симпозиуме «Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» (Тюмень, 2005), Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» (Санкт-Петербург, 2005, 2006), IV национальном конгрессе геронтологов и гериатров Украины «Проблемы старения и долголетия» (Киев, 2005), 4-й, 5-й и 6-й национальных научно-практических конференциях с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота» (Смоленск, 2005, 2006, 2007), II и III Российском симпозиуме по химии и биологии пептидов (Санкт-Петербург, 2005, 2006),

I Съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005), 4-й Российской конференции с международным участием «Гипоксия, механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2005), научной конференции с международным участием «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), региональных научных конференциях «Геронтология: от кардиологии к социально-экономическим аспектам» (Сыктывкар, 2005, 2006), Всероссийской научной конференции «Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических целях» (Сочи-Адлер, 2006), международной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» (Астрахань, 2006), VII Всероссийской конференции с международным участием «Биоантиоксидант» (Москва, 2006), Международном симпозиуме «Биологические механизмы старения» (Харьков, Украина. 2006, 2007), научно-практической конференции, посвященной 20-летию первой в России кафедры гериатрии («Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии», Санкт-Петербург, 2006), III и IV Всероссийских научно-практических конференциях "Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов" (Москва, 2006, 2007), Научно-практической конференции «Пожилой больной» (Москва, 2006), международной конференции 4th Bologna International Meeting "Affective, behavioral and cognitive disorders in the elderly-ABCDE"(Bologna, Italy, 2006), международных конференциях «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Ялта-Гурзуф, Судак, Крым, Украина, 2007, 2008),

II Международном конгрессе "Социальная адаптация, поддержка и здоровье пожилых людей в современном мире" (Санкт-Петербург, 2007), XIV Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007), III, IV научно-практических геронтологических конференциях с международным участием, посвященной памяти Э.С. Пушковой, "Пушковские чтения" (Санкт-Петербург, 2007, 2008), XII Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2007), Межрегиональной научно-практической конференции «Медицинские проблемы пожилых» (Йошкар-Ола),

III Российском симпозиуме «Белки и пептиды» (Пущино, 2007), II Международном конгрессе "Социальная адаптация, поддержка и здоровье пожилых людей в современном мире" (Санкт-Петербург, 2007), П-м Санкт-

Петербургском международном экологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008), конференции с международным участием «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» (Санкт-Петербург-Колтуши, 2008), Конгрессе «Экотоксины и здоровье» (Санкт-Петербург, 2008), а также международных форумах: International conference "Free radicals and antioxidants in the development and functions of the central nervous system: from fetus to aging» (Saint-Petersburg, 2001), 18th World Congress of Gerontology (Rio de Janeiro, Brazil, 2005), International Symposium «Interaction of the nervous and immune systems in health and disease» (Saint-Petersburg, 2007), 21st Biennial Meeting of International Society for Neurochemistry and the 38th Annual Meeting of the American Society for Neurochemistry (Cancun, Mexico, 2007), 4th International Peptide Symposium, 7th Australian Peptide Symposium, 2nd Asia-Pacific International Peptide Symposium "Discovery to Drugs: The Peptide Pipeline" (Cairns, Queensland, Australia, 2007), VI European Congress International association of gerontology and geriatrics (Saint-Petersburg, 2007).

Реализация результатов исследования

Результаты исследований используются в научной и практической деятельности Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН, Научного центра неврологии РАМН (Москва), ГУН НИИ онкологии им. проф. Н.Н. Петрова Росмедтехнологий (Санкт-Петербург), ГУ НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН (Санкт-Петербург), Южно-Федерального Университета, (Ростов-на-Дону), Института молекулярной и клеточной биологии Университета (Лидс, Великобритания).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 77 работ, в том числе 22 статьи в журналах и в сборниках научных трудов (из них 12 статей в журналах, включенных в перечень ВАК Минобрнауки РФ), 1 монография, 54 тезиса докладов.

Связь с научно-исследовательской работой Института

Диссертационная работа является научной темой, выполняемой по основному плану НИР Санкт-Петербургского института биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН.

Структура и объем диссертации

Диссертация состоит из введения, 4 глав обзора литературы, главы описания материалов и методов исследования, 5 глав результатов собственных исследований, главы обсуждения результатов, заключения, выводов, практических рекомендаций и указателя литературы. Текст диссертации

изложен на 227 страницах, содержит 6 таблиц и иллюстрирован 38 рисунками. Указатель литературы содержит 507 источников, из которых отечественных -189, зарубежных - 318.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Экспериментальные животные и исследуемые препараты

Исследование процессов СРО и антиоксидантной активности пептидных биорегуляторов проводили в экспериментах in vivo и in vitro. Эксперименты были поставлены на молодых (3 мес) и старых (24 мес) крысах линии ЛИО, а также половозрелых крысах линий Wistar (6 мес) и мышах линии СБА (18 мес). Животных содержали в пластмассовых клетках, они получали стандартный в условиях вивария корм и воду без ограничений.

В качестве пептидных препаратов были использованы синтетические короткие пептиды эпиталон (Ala-Glu-Asp-Gly), кортаген (Ala-Glu-Asp-Pro), вилон (Lys-Glu), везуген (Lys-Glu-Asp) и пинеалон (Glu-Asp-Arg). В экспериментах in vivo пептидные препараты вводили в течение 5 дней внутрибрюшинно в дозе 2,5-10 мкг/кг массы (эпиталон, вилон, кортаген, везуген и пинеалон). Дозы и интервалы времени применения препаратов соответствовали тем, что были отработаны ранее [Малинин В.В., 2001].

Экспериментальные модели стрессовых воздействий

В качестве экспериментальных моделей стресса были выбраны гипокинезия и гипобарическая гипоксия:

1. Гипокинезию у крыс модулировали путем помещения их в тесные пластиковые пеналы из оргстекла, добиваясь резкого ограничения движения животных [Федоров И.В., 1987; Лысенко A.B. и соавт., 2001].

2. Модель острой гипобарической гипоксии вызывали, помещая крыс в барокамеру проточно-вытяжного типа при атмосферном давлении 0,029 МПа, что соответствует подъему на высоту 9000 м над уровнем моря [Вальдман A.B. и соавт., 1989]. В барокамеру были вмонтированы поглотители углекислоты и влаги. Животные находились в ней в условиях свободного наблюдения в течение 3 ч. под постоянным наблюдением. Затем крыс декапитировали, брали кровь, извлекали мозг и выделяли на льду кору головного мозга. В отдельных сериях экспериментов использовали модель острой сублетальной гипобарической гипоксии, модулируя ее в барокамере с регулируемым притоком воздуха для предотвращения развития гиперкапнии [Boldyrev A.A. et al., 1997]. С помощью вакуумного насоса давление в барокамере снижали за

1 мин. до конечного значения 0,125 атм.; в таких условиях животных выдерживали до остановки дыхания, после чего возвращали в условия нормального давления, постепенно подавая в камеру атмосферный воздух. Эту же модель использовали для исследования потомства беременных самок крыс, подвергнутых гипоксическому воздействию пренатальной гипоксии (пренатальная гипоксия). В этих опытах крысы были подвергнуты гипобарической гипоксии на 10-й день беременности - в срок, при котором у потомства происходит закладка нервной системы [Федорова Т.Н. и др., 2006].

Физиологические методы исследования

Разделение экспериментальных животных на группы устойчивых и чувствительных к гипоксии проводили в условиях стандартной методики открытого поля [Буреш JI. и соавт., 1991; Вербицкий Е.В., 2003]. Регистрировали частоту вертикальных и горизонтальных локомоций, груминга, болюсов, выходов в центр открытого поля, что отражало физиологическую активность подопытных животных.

При оценке гипоксического воздействия регистрировали следующие параметры:

1- время потери дыхания "на высоте" (с);

2- время восстановления позы (с), то есть период времени от остановки дыхания до момента, когда животное после "спуска с высоты" и восстановления дыхания в условиях нормобарии принимало нормальную позу;

3- время реституции (с), которое составляло общую продолжительность периода восстановления физиологической активности после гипоксического воздействия.

Для определения эффективности защитного действия исследуемых пептидов использовали такие параметры, как смертность, необходимость применения процедуры искусственного дыхания, «коэффициент реституции», выражающий отношение продолжительности времени реституции ко времени до остановки дыхания в барокамере.

Биофизические и биохимические методы исследования

Интенсивность ПОЛ оценивали по количеству малонового диацетальдегида - МДА (ТБК-активных продуктов), диеновых конъюгатов (ДК) и шиффовых оснований (ШО), а также показателям Н202-индуцируемой люминолзависимой или Ре2+-индуцируемой хемилюминесценции (XJI), которую измеряли на хемилюминометрах Emilitte -1105 (Россия) и LKB-1251 (Швеция). В хемилюминометрических исследованиях регистрировали светосумму и высоту вспышки XJI, величина которых определяет интенсивность свободнорадикальных реакций и расходования свободных радикалов вследствие их взаимодействия с природными антиоксидантами, содержащимися в биосубстрате [Арутюнян A.B. и соавт., 2000]. МДА определяли спектрофотометрически по интенсивности окраски

образующегося в реакции с тиобарбитуровой кислотой триметинового комплекса с максимумом поглощения при длине волны 535 нм. Для экстракции ДК из сыворотки крови использовали смесь изопропилового спирта и гептана (1:1), содержащую бутилированный гидрокситолуол (0,5 г в 100 мл смеси), концентрацию ДК определяли спектрофотометрически при длине волны 232 нм в гептановой фазе [Dillard С.J., Tappel A.L., 1989]. ШО определяли по флюоресценции с максимумом возбуждения при длине волны 370 нм и максимумом излучения при длине волны 450 нм [Арутюнян A.B. и соавт., 2000].

Уровень окислительной модификации белков оценивали по содержанию карбонильных производных аминокислот в белках. В основе метода лежит взаимодействие белков, полученных после осаждения трихлоруксусной кислотой и обработки осадка смесью этилового спирта и этилацетата (1:1) с 2,4- дифенилгидразином. Карбонильные производные после растворения белкового осадка в 8 М растворе мочевины при температуре 37° определяли при длине волны 363 нм, используя коэффициент молярной экстинкции 22х103М'см [Levine R.L. at al., 1981; Арутюнян A.B. и др., 2000].

Активность системы антиоксидантной защиты оценивали, определяя уровень общей антиокислительной активности (ОАА) и активность антиоксидантных ферментов супероксиддисмутазы (СОД),

глутатионпероксидазы (ГП) и каталазы (КАТ). Для определения ОАА использовали хемилюминесцентную реакцию рибофлавина с перекисью водорода в присутствии двухвалентного железа, измеряя светосумму в течение 2 мин. при 37° С' [Арутюнян A.B. и др., 2000]. ОАА выражали в условных единицах на мг белка, рассчитывая ее по формуле:

ОАА= (1-СС0П./ССк.) /А, где СС0П. - величина светосуммы опытного образца; ССК - величина светосуммы конторольной пробы; А - содержание белка в реакционной смеси, который определяли методом [Lowry О.Н. et al., 1951]. Активность Си,2п-супероксидцисмутазы определяли с использованием системы, обеспечивающей восстановление нитросинего тетразолия, а активность глутатионпероксидазы с использованием гидроперекиси третичного бутила и восстановленного глутатиона [Арутюнян A.B. и соавт., 2000]. Активность каталазы определяли в плазме и эритроцитарном лизате по методу, основанному на способности перекиси водорода образовывать с солями молибдена стойкий окрашенный комплекс [Королюк М.А. и соавт., 1988]. Определение содержания церулоплазмина основано на его оксидазной активности в реакции окисления пара-фенилендиамина [Atanasiu R.L.et al., 1998].

О состоянии эритроцитарных и лейкоцитарных мембран судили по количеству внеэритроцитарного гемоглобина [Меньшиков В.В. и соавт., 1987], который определяли с помощью тест-набора производства «Olvex

Diagnosticum» (Санкт-Петербург) и суммарной пероксидазной активности [Внуков В.В., 1978]. Мембрано-стабилизирующее действие пептидных соединений в опытах in vitro исследовали на модели осмотического гемолиза эритроцитов крови крыс или здоровых доноров [Pribush A. et al., 2002].

В отдельной серии экспериментов оценивали прямую антиоксидантную активность исследуемых пептидных биорегуляторов по их способности восстанавливать стабильный радикал 1,1-дифенил-2-пикрилгидразил (ДФПГ), измеряя скорость убыли ДФПГ-радикалов спектрофотометрически при длине волны 519 нм [Schlesier К. et al., 2002].

Молекулярно-биологические методы исследования

1. Культура клеток мозжечка крыс

Действие пептидных препаратов на образование активных форм кислорода (АФК) гранулярными клетками мозжечка крыс исследовали методом проточной цитометрии [Boldyrev А.А. et al., 1997; Болдырев А.А., 2000]. Использовали первичную культуру нейронов, выделенную из мозжечка 9-дневных крыс линии Wistar. Клетки получали путем обработки измельченного мозжечка в растворе Тироде с 0,2% диспазой - коллагеназой для разрушения межклеточных контактов (30 мин при 33°С) с последующим отмыванием кусочков ткани, их взмучиванием и фильтрованием полученной суспензии через тефлоновый фильтр с размером пор 50 мкм. Полученная суспензия содержала около 2 млн клеток в 1 мл. Цитометрический анализ проводили на приборе FacStar ("Becton Dickinson", США), исследуя популяцию NMDA-чувствительных клеток, которую выделяли гейтом, соответствующим размеру гранулярных клеток (около 10 мк). Полученные результаты анализировали с помощью компьютерной программы WinMDI 2.7.

Исходные вещества (эпиталон, вилон, везуген и пинеалон) в концентрации 10 мМ были растворены в буфере HEPES (10 мМ, рН 7,4), карнозин и N-ацетилцистеин (NAC) растворяли в воде и доводили рН до 7,4. Все вещества использовали в конечной концентрации 1 мМ, добавляя их к клеткам непосредственно после выделения. После 120 мин. преинкубации клетки на1ружали в течение 40 мин при 37°С флуоресцентным красителем DCFH2DA в конечной концентрации 0,1 мМ для определения АФК. Затем клетки стимулировали Н2О2 (10 мМ) в течение 30 мин. при 37°С. За 1 мин до измерения флуоресценции к суспензии клеток добавляли пропидий иодид в конечной концентрации 10 мкг/мл для оценки доли нежизнеспособных.

2. Клетки нейробластомы человека

Клетки нейробластомы NB7 культивировали в стандартной среде RPMI-1640 (Sigma, Англия), содержавшей 10% эмбриональной сыворотки телят, 5% пенициллина/стрептомицина и 5% L-глутамина. Клетки выращивали в 30 мл среды во флаконах с площадью 175 см2 при 37°С в 5% (по объему) С02 до достижения ими 70% конфлюэнтности, после чего культуральную среду

заменяли на среду, не содержащую сыворотку, в которую добавляли тестируемые компоненты (вилон и эпиталон добавляли до конечной концентрации 50 нМ, или антиоксидант экстракта зеленого чая эпигаллокатехин-3-галлат - до концентрации 50 мкг/мл). К контрольным образцам добавляли такое же количество фосфатного буфера (20 мМ, рН 7.4). После добавления среды клетки содержали или в стандартных условиях, как описано выше, или при пониженном содержании кислорода. Для создания гипоксии использовали О2/СО2 инкубатор (МС0-175М, Sanyo, Япония), в котором содержание кислорода поддерживалось на уровне 1% при помощи замещения его азотом. Содержание СО2, влажность и температура в инкубаторе, поддерживались на стандартном уровне — 37°С, 5% (по объему)

С02.

Выделение РНК из культивируемых клеток с использованием набора реагентов (Mini-prep RNeasy purification kit, Qiagen Sussex, Англия) и полимеразную цепную реакцию полученных препаратов РНК с применением набора TITANIUM (One-Step RT-PCR Kit, BD Biosciences, Англия) проводили согласно протоколу производителя

Все эксперименты с клетками повторяли 3 раза, а анализ мРНК осуществляли 3-5 раз в зависимости от воспроизводимости результатов. Все количественные параметры стандартизировали по мРНК актина.

Статистическая обработка результатов исследования Полученные в экспериментах результаты подвергали статистической обработке с помощью компьютерной программы STATISTIC А 5.0 (Statsoft). Использовали методы параметрической и непараметрической статистики: t- критерий Стьюдента, U-критерий Манна-Уитни, корреляционный тест Спирмена и регрессионный анализ. Статистическую обработку проводили,

используя пакет программ "BIOSTAT" [Гланц С., 1999].

* * *

Лабораторная база для проведения исследований была предоставлена кафедрой биохимии МГУ им. М. В. Ломоносова, Научным центром неврологии РАМН, НИИ акушерства и гинекологии им. Д.О. Отта РАМН и лабораторией протеолиза Института молекулярной и клеточной биологии Университета г. Лидс, Великобритания.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ Возрастная динамика ряда показателей свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы

Литературные данные о динамике процесса генерации АФК при старении носят противоречивый характер. Многие авторы считают твердо

установленным фактом, что продукция АФК при старении возрастает, и связывают это с окислительным повреждением митохондриальных мембран и нарушением функционирования электрон-транспортной цепи митохондрий [Скулачев В.П., 1997; Ozawa Т.,1997; Allen R.G., Tresini М., 2000]. При старении усиливается образование промежуточного продукта восстановления коэнзима Q (убихинона), способного неферментативным путем передавать (сбрасывать) электроны на молекулярный кислород с образованием супероксидного радикала. По мнению других авторов, при старении образование АФК уменьшается вследствие общего снижения интенсивности окислительно-восстановительных процессов (окислительного метаболизма). Одновременно наблюдается снижение активности СОД и других компонентов антиоксидантной защиты, по крайней мере, при отсутствии выраженной возрастной патологии [Кольтовер В.К., 1998; 2000, 2005, 2007].

В ряде работ описано снижение общей антиокислительной активности у мышей при старении, причем оно происходит с неодинаковой интенсивностью у животных разных линий [Эммануэль Н..М, 1982]. Показано также, что старые крысы и черви нематоды утрачивают способность к индукции СОД и других антиоксидантных ферментов при гипероксии и становятся более чувствительными к токсическому действию кислорода [Darr D., Fridovich I., 1995; Гусев В.А., Панченко Л.Ф.,1997].

Представление о снижении уровня генерации АФК и активности антиоксидантой системы в процессе старения нашло подтверждение в наших исследованиях. Согласно полученным нами данным, уровень АФК снижается в сыворотке старых крыс по сравнению с молодыми почти на 50%, а в печени более чем в 5 раз. При этом не наблюдается заметных изменений в уровне содержания продуктов ПОЛ, однако достоверно (р<0,05) возрастает уровень содержания белковых карбонилов (1, 86 мкмоль и 5 мкмоль/мг белка в сыворотке крови и 1,53 и 2,39 мкмоль/мг белка в сыворотке крови и печени молодых и старых крыс соответственно). Полученные нами результаты полностью соответствуют литературным данным о большей чувствительности белковых молекул к окислительному повреждению, по сравнению с липидами при старении [Хавинсон и соавт., 2003; Дубинина Е.Е., 2006; Pacifici R.E., Davies K.J,A., 1991]. В наших экспериментах было установлено, что снижение уровня генерации АФК у старых крыс сопровождается подавлением активности СОД, что наиболее наглядно проявляется в печени, отличающейся наиболее высоким содержанием этого фермента [Tian L. et al.,1998]. Активность СОД в печени молодых крыс составляла 116,0 ±8,5отн.ед., тогда как у старых 48,3 ±6,4 отн. ед.(р<0,001). В мозгу исследуемые показатели не претерпевают заметных возрастных изменений, за исключением СОД, активность которой у старых животных несколько понижается. Эти данные также согласуются с литературными сведениями о сопряженном и однонаправленном характере изменений уровня генерации АФК и показателей

системы антиоксидантной защиты при старении [Кольтовер В.К., 1998; 2000, 2005,2007; Sohal R.S. et al., 2006].

Влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели

свободнораднкального окисления и антиоксидантной системы

Многочисленные исследования, проведенные в 70-е-90-е годы прошлого столетия, показали, что комплексный препарат эпифиза эпиталамин обладает выраженным геропротекторным действием и стимулирует функциональную активность репродуктивной, иммунной и эндокринной систем организма [Анисимов В.Н., 1973; Лабунец И.Ф., Бутенко Г.М., 1992; Кузник Б.И. и соавт., 1998; Хавинсон В.Х. и соавт., 1998; Anisimov V.N. et al., 1982, 1994]. Вместе с этим, было установлено, что эпиталамин проявляет антиоксидантные свойства в экспериментах in vivo и in vitro [Анисимов В.Н и соавт. 1995, 1996, 1997; Дятлов Р.В. и соавт., 1997; Мыльников C.B. и соавт., 2000].

Выполненные нами эксперименты посвящены изучению антиоксидантного действия тетрапептида эпиталона, сконструированного на основе исследования аминокислотного состава эпиталамина, а также некоторых других коротких пептидов, оказывающих сходные с эпиталоном биологические эффекты (кортаген, вилон) и играющих важную роль в пептидергической регуляции гомеостаза.

Было проведено сравнительное изучение влияния эпиталона и кортагена на процессы СРО в сыворотке крови и мозге половозрелых крыс (Wistar). Характерно, что в мозге эпиталон оказывал более выраженное по сравнению с кортагеном ингибирующее действие на процесс ПОЛ, вызывая достоверные изменения в содержании как начальных (ДК), так и конечных (ШО) продуктов ПОЛ. Под влиянием кортагена статистически достоверно снижалось содержание ДК, тогда как в отношении ШО наблюдалась лишь тенденция к их снижению. В сыворотке крови отмечается избирательное влияние обоих пептидов на начальные этапы ПОЛ, что выражалось в статистически достоверном снижении уровня ДК и некоторой тенденции к уменьшению содержания ШО. Полученные данные свидетельствуют также о том, что исследуемые пептиды ингибируют наряду с ПОЛ также и процесс окислительной модификации белков (ОМБ), причем наиболее наглядно это проявляется в ткани мозга. В сыворотке крови некоторое снижение интенсивности ОМБ (около 15%) наблюдалось только под влиянием кортагена. Можно полагать, что в этих условиях ШО образуются не только путем последующего превращения ДК, но и при взаимодействии бифункциональных продуктов ПОЛ типа МДА с различными соединениями, содержащими свободные аминогруппы, прежде всего аминокислотными остатками белков, что приводит к их окислительной модификации с образованием карбонильных групп [Дубинина Е.Е., 2006].

При изучении влияния исследуемых пептидов на антиоксидантную активность было установлено, что кортаген вызывал подавление ОАА в сыворотке крови, а эпиталон как в сыворотке крови, так и в головном мозге. Снижение ОАА сопровождалось ингибированием активности антиоксидантных ферментов: под влиянием эпиталона и кортагена подавлялась активность глутатионпероксидазы мозга, а введение животным кортагена вызывало статистически достоверное понижение активности СОД в сыворотке крови; активность фермента в мозге, так же как и под влиянием эпиталона, при этом не изменялась. Структурное сходство эпиталона и кортагена обуславливает их аналогичные эффекты в отношении большинства изученных нами показателей свободнорадикального окисления.

Полученные данные позволяют полагать, что действие эпиталона и кортагена может быть связано с подавлением образования продуктов ПОЛ и ОМБ и компенсаторным снижением антиокислительной активности. Ранее было установлено, что антиоксидантное действие полипептидного препарата эпифиза эпиталамина проявляется в повышении активности антиоксидантных ферментов [Козина Л.С., Арутюнян A.B., 2007; Arutjunyan A.V. et al., 2001]. Приведенные выше результаты исследований, свидетельствующие об отсутствии изменений в активности ферментативного звена антиоксидантной защиты под влиянием исследуемых пептидов, подтверждают отличие механизмов антиоксидантного действия эпиталона и кортагена от эпиталамина.

Антиоксидантное действие эпиталона особенно наглядно проявлялось в экспериментах на старых животных (крысы, мыши). Эпиталон в сыворотке крови старых крыс оказывал выраженное ингибирующее влияние на ПОЛ, заметно снижая уровень ДК, и вызывал при этом некоторое подавление процесса ОМБ. При этом у них отсутствовали сдвиги в активности антиоксидантных ферментов и антиокислительной активности в целом. В головном мозге старых крыс под влиянием эпиталона также наблюдалось подавление образования продуктов ПОЛ и уровня ОМБ. Вместе с тем, при отсутствии изменений в активности ГП при введении эпиталона отмечалось отчетливое повышение активности СОД (43,5±7,6 отн.ед./мг белка по сравнению с 24,8±2,8 отн.ед./мг белка в контроле).

В экспериментах, поставленных на мышах линии СВА, проведено сравнительное изучение влияния эпиталона и вилона на свободнорадикальные процессы. Наиболее отчетливое антиоксидантное действие было характерно для эпиталона; на фоне повышенного уровня образования АФК в сыворотке крови оно было сопоставимо по величине с ингибирующим действием мелатонина, являющегося эффективным природным антиоксидантом, вырабатываемым эпифизом. Наряду с этим, под влиянием эпиталона и мелатонина наблюдалось заметное повышение ОАА. Эпиталон, так же как и мелатонин, проявлял тенденцию к уменьшению образования АФК в головном мозгу и при этом значительно повышал ОАА. Вилон не действовал на уровень образования АФК в сыворотке крови, печени и ткани головного мозга.

Эпиталон не оказывал заметного влияния на образование АФК и уровень ОАА в печени, не влиял на интенсивность ПОЛ в сыворотке крови, но был эффективен качестве ингибитора ПОЛ в головном мозге и печени мышей. Применение вилона ни в одном случае не вызывало статистически достоверных изменений в уровне содержания продуктов ПОЛ и показателей антиоксидантной системы. Мелатонин, напротив, всегда вызывал ингибирование процесса ПОЛ. Под влиянием исследуемых пептидов, а также мелагонина не было выявлено каких-либо изменений в активности СОД, хотя при определении ОАА наблюдалось ее повышение в сыворотке крови и головном мозге при хроническом воздействии на мышей эпиталона и мелатонина.

Таким образом, введение эпиталона, в отличие от вилона, приводит к заметному снижению интенсивности свободнорадикальных процессов в крови и тканях мышей СВА. Преимущественное влияние эпиталона на начальные этапы ПОЛ (уровень ДК) в печени и сыворотке крови и, напротив, его терминальную стадию (уровень ШО) в головном мозге может быть обусловлено влиянием тетрапептида на процесс взаимодействия образующихся из ДК бифункциональных продуктов ПОЛ типа МДА с низко- или высокомолекулярными соединениями, содержащими свободные аминогруппы (фосфатидилсерин и фосфатидилэтаноламин, нуклеотиды и прежде всего аминокислоты, пептиды и белки).

Влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в условиях действия экстремальных факторов (гипокинезия, гипоксия)

Гипокинезия вследствие ограничения общей двигательной активности является фактором, способствующим преждевременному старению и одним из основных симптомов, ассоциированных с возрастом нейродегенеративных заболеваний, в частности паркинсонизма [Charlton С., Crowell В., 1995].

Результаты проведенных нами исследований показали, что 24-часовая гипокинезия вызывала у крыс прирост светосуммы ХЛ плазмы крови с одновременным достоверным увеличением суммарной пероксидазной активности крови, что указывает на начальные стадии активации ПОЛ. В коре головного мозга при этом показатели ХЛ снижались, что, вероятно, свидетельствует о достаточной мощности антиоксидантных систем мозга на данном этапе этого довольно сильного стрессорного воздействия. Вместе с тем, гипокинезия приводила к интенсификации ПОЛ в мозге, о чем можно судить по увеличению содержания МДА.

Предварительное введение крысам перед началом сеанса гипокинезии эпиталона приводило к достоверному снижению показателей ХЛ и суммарной пероксидазной активности (СПА) в плазме крови. При этом наблюдалось

некоторое снижение уровня внеэритроцитарного гемоглобина и заметное повышение содержания церулоплазмина, а также активности каталазы в плазме и гемолизате эритроцитов. Церулоплазмин является одним из важнейших компонентов антиоксидантной системы крови, который, помимо окисления Fe2+, обладает супероксиддисмутазной активностью и способностью нейтрализовать наиболее реакционноспособные гидроксильные радикалы [Погосян Г.Г., Налбандян P.M., 1983; Бобырев В.Н. и соавт., 1994; Atanasiu R.L. et al., 1998]. Наряду с этим, при введении эпиталона наблюдалось снижение СПА, уровня содержания МДА, показателей XJI и повышение активности СОД в растворимой фракции коры головного мозга, по сравнению с показателями при стрессе.

Предварительное введение крысам вилона приводило к сходным по направленности действия, но гораздо менее выраженным по сравнению с эпиталоном, изменениям в регуляции свободнорадикальных процессов при гипокинезии. Он был менее эффективен в отношении показателей XJI в плазме крови и коре мозга, несколько повышал уровень внеэритроцитарного гемоглобина, почти не влиял на активность СОД в коре головного мозга. При этом вилон так же как эпиталон, снижал уровень СПА и МДА в коре головного мозга и повышал активность церулоплазмина в плазме крови.

В следующей серии экспериментов нами было исследовано влияние гипоксии на интенсивность свободнорадикальных процессов крови и коре мозга половозрелых крыс. Гипоксия включает в себя весь комплекс процессов в организме, обусловленных кислородной недостаточностью. Она является неотъемлемым элементом стрессорного действия гипокинезии, физического перенапряжения и служит одной из важных причин развития возрастной патологии (атеросклероз, ишемические поражения сердца и мозга, болезнь Альцгеймера и т.д.) [Лысенко A.B. и соавт., 2005].

Проведенными нами исследованиями установлено, что в условиях гипоксической гипоксии в плазме крови и коре головного мозга показатели ХЛ, за исключением величины светосуммы ХЛ в мозгу, заметно возрастали, при этом уровень содержания МДА в мозгу почти не изменялся. Не претерпевал также достоверных изменений уровень СПА в плазме крови и мозгу при гипоксии. Введение эпиталона перед сеансом гипоксии способствовало нормализации показателей ХЛ в плазме крови и несколько снижало уровень содержания МДА в мозгу, что было статистически достоверно по отношению к интактным животным. Под влиянием эпиталона происходило также снижение уровня СПА как в плазме крови, так и коре мозга крыс, подвергнутых воздействию гипоксии.

Предварительное введение вилона подопытным животным вызывало аналогичные, но менее наглядные, по сравнению с эпиталоном, изменения исследуемых показателей свободнорадикального окисления.

Таким образом, представленные результаты свидетельствуют о том, что антиоксидантные и мембраностабилизирующие свойства вилона при

воздействии гипокинезии и гипоксии проявлялись гораздо слабее, чем у эпиталона. Известно, что при воздействии стрессорных факторов на организм происходит активация функции эпифиза, что можно отнести к защитным антистрессовым механизмам, поскольку вырабатываемый эпифизом мелатонин, будучи мощным эндогенным антиоксидантом, обладает разнообразными нейропротекторными свойствами [Хавинсон В.Х. и соавт., 2003]. В связи с этим полученные нами данные об антиоксидантных эффектах эпиталона представляют значительный интерес, поскольку предполагают, что при острой гипоксии в антистрессовой защите нервной системы и всего организма принимают участие пептиды эпифиза.

Оценка антиоксидантной активности и мембранопротекторных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах in vitro

Исследование прямой антиоксидантной активности коротких пептидов

Результаты анализа антирадикальной активности исследуемых коротких пептидов (эпиталон, вилон, везуген и пинеалон) показали, что ни одно из исследуемых, соединений в диапазоне концентраций 0,5-1 мМ, за исключением эпиталона, не обладает способностью взаимодействовать с ДФПГ-радикалом. Между тем N-ацетилцистеин (NAC) уменьшает оптическую плотность проб, содержащих ДФПГ, проявляя сильное антиоксидантное действие уже в концентрации 0,25 мМ. Карнозин в этой системе выступает как слабый антиоксидант. Действие эпиталона проявляется еще слабее по сравнению с карнозином. Везуген и пинеалон даже несколько увеличивают оптическую плотность проб, что может служить косвенным указанием на возможность их взаимодействия с ДФПГ с образованием промежуточных продуктов. Условно эта способность, наиболее заметная в случае везугена, может быть названа «прооксидантной», природа которой остается неизвестной.

Действие коротких пептидов на Fe2*-индуцированное окисление

липопротеинов крови и скорость осмотического гемолиза эритроцитов

Внесение FeS04 в кювету, содержащую фракцию липопротеинов, инициирует быструю вспышку хемилюминесценции (XJI), пропорциональную количеству предобразованных гидроперекисей липидов (h), ее величина уменьшается в присутствии антиоксидантов, способных взаимодействовать с гидроперекисями (Рис. 1). Последующая лаг-фаза (т) характеризует собственный антиоксидантный потенциал системы (АОП), который исчерпывается по мере превращения двухвалентного железа в трехвалентное. После истощения собственного АОП вспыхивает волна хемилюминесценции, и скорость этого процесса отражает скорость окисления липидного материала [Vladimirov Yu., 1991]. Величина латентного периода т тем больше, чем выше

АОП системы. При этом, как правило, более высокие значения АОП коррелируют с более низкой скоростью окисления [Федорова Т.Н. и др., 1996].

800 -600400 I 200 0^

/ Н 1 I i

h" Ii/??™-; 1 1 ... Время, мин

■ -- • • -г--* 0 ...... ~ .■'»•■- ......• -г 5 10 15 20 25

IШ

Рис. 1. Кинетическая кривая, характеризующая Ре2+-индуцированную хемилюминесценцию липопротеинов сыворотки крови.

Как было установлено нами в отдельной серии экспериментов, сами исследуемые вещества не подвергаются окислению в данных условиях, так что изменения, наблюдаемые в их присутствии, отражают их прямое действие на окисление липидного материала. Из приведенных в таблице 1 данных видно, что исследуемые соединения в разной степени влияют на окисляемость липопротеинов. Эффект вилона и эпиталона несколько слабее эффекта карнозина, а везуген лишь незначительно снижает скорость окисления, практически не влияя на величину т. В то же время, все исследованные соединения способны эффективно связывать гидроперекиси липидов дозо-зависимым способом, что отражается в снижении величины h. Полученные результаты указывают на способность исследуемых соединений препятствовать окислительному повреждению липидов.

С учетом того, что исследуемые соединения не проявляют способности нейтрализовать радикальные молекулы, их эффект можно объяснить стабилизирующим влиянием на структуру липопротеинов. Эти данные указывают на то, что короткие пептиды способны осуществлять защиту надмолекулярных комплексов не по принципу антиоксидантного действия, а за счет их структурных перестроек.

Исследуемые соединения по-разному влияли на течение осмотического гемолиза эритроцитов крыс. NAC не оказывал влияния на осмотический гемолиз, что закономерно, поскольку в развитие осмотической неустойчивости мембран свободнорадикальные процессы не вовлекаются. Карнозин понижал

скорость гемолиза на 35-40% уже в концентрации 0,4 мМ, что объясняется его мембранопротекторными свойствами. Все исследованные короткие пептиды проявляли двойной эффект: при концентрациях 1-2 мМ они несколько увеличивали скорость гемолиза эритроцитов крысы, а при повышении концентрации стимулирующий эффект сменялся подавлением процесса гемолиза. Сходные эффекты исследуемых соединений наблюдались и на эритроцитах человека - при концентрации, равной 3,0 мМ, исследуемые соединения повышали скорость гемолиза (особенно выраженным - в 2,5 раза по сравнению с контролем - было действие эпиталона), тогда как повышение концентрации до 5,0 мМ вызывало противоположное действие - возрастание устойчивости эритроцитов к осмотическому гемолизу. Полученные результаты указывают на проявление исследуемыми соединениями мембранопротекторных свойств, не связанных с прямой антиоксидантной активностью.

Таблица 1

Влияние исследуемых соединений на параметры Ге2+-нндуцированной хемилюминесцеицин липопротеинов сыворотки крови здоровых доноров (в процентах по отношению к контролю)

Название вещества Концентрация вещества в пробе Па раметры Ре2+-индуцированной ХЛ

Ь,% т,% Н, % Скорость окисления, %

Карнозин 0,5 мМ 53±6 133±8 94±б 75±10

1 мМ 40±5 189±9 88±8 66±8

Вилон 0,5 мМ 66±6 93±10 92±7 86±6

1 мМ 43±4 120±11 87±6 78±б

Эпиталон 0,5 мМ 69±6 116±9 94±б 83±7

1 мМ 49±4 120±10 97±8 77±5

Везуген 0,5 мМ 54±4 100±8 94±5 92±6

1 мМ 50±6 100±8 104±11 75±5

Пинеалон 0,5 мМ 54±4 105±10 94±9 81±5

1 мМ 50±6 111±12,0 88±8,5 75±7

Действие коротких пептидов на нейрональные клетки мозжечка

Использование метода проточной цитометрии позволило оценить влияние исследуемых соединений на состояние гранулярных клеток мозжечка крыс и генерацию ими АФК в условиях окислительного стресса, вызываемого перекисью водорода.

Действие коротких пептидов в условиях индукции АФК проявляется различным образом (табл. 2). Прединкубация клеток с 10 мМ Н2С>2 в течение 190 мин вызывала увеличение внутриклеточного уровня АФК в 7 раз. В присутствии карнозина увеличение уровня АФК происходило несколько слабее (только в 4 раза), что указывает на то, что карнозин выступает как антиоксидант прямого действия, препятствуя накоплению АФК. NAC в этой же концентрации был гораздо менее эффективен, чем карнозин. Вилон сам по себе вызывал увеличение внутриклеточного уровня АФК (в 1,6 раз по сравнению с контролем). На этом фоне, тем не менее, наблюдалось некоторое ограничение роста АФК под действием Н2О2 (на 16%). Эпиталон вызывал наиболее значительное увеличение внутриклеточного уровня АФК, сравнимое с тем, что достигается перекисью водорода (в 6,6 раз по сравнению с контролем), но при этом не влиял на гибель нейронов (Рис. 2). Добавление 10 мМ Н202 на этом фоне не приводило к дополнительному росту АФК. Везуген увеличивал исходный уровень АФК в 2 раза, и на его фоне происходило дальнейшее увеличение уровня АФК в ответ на преинкубацию с 10 мМ Н2О2 (в 1,4 раза). Пинеалон увеличивал исходный уровень АФК в 2,5 раза, на его фоне происходило дальнейшее увеличение уровня АФК в ответ на преинкубацию с 10 мМ Н2О2 (в 2 раза), однако достигаемое значение было ниже контрольного (на 32%).

Таким образом, исследуемые короткие пептиды увеличивали продукцию АФК в клетках. На этом фоне эффективность индукции АФК перекисью водорода снижалась пинеалоном на 32%, вилоном и эпиталоном - на 20%. Везуген увеличивал индуцированный перекисью водорода уровень АФК на 40%. Приведенные данные согласуются с описанными нами ранее результатами экспериментов с ДФПГ о наличии «прооксидантной составляющей» в механизме действия исследуемых пептидов на нейрональные клетки.

Действие перекиси водорода на фоне вилона, везугена и пинеалона сопровождалось уменьшением количества нейронов в анализируемом гейте на 40-50%, причем доля мертвых клеток в исследуемой популяции снижалась

(Рис. 2). Полученные результаты позволяют предположить, что регуляторные пептиды способны вовлекаться в механизм регуляции процессов апоптоза/некроза нейронов головного мозга в условиях индуцированного ПОЛ. При этом можно ожидать, что в условиях irt vivo их эффективные концентрации при направленном действии на мозг могут быть значительно ниже, чем в модельных экспериментах.

Таблица 2

Сравнение действия исследуемых соединений на уровень АФК в нейронах крыс

Используемое соединение Флуоресценция DCFH2DA, отн. ед. Флуоресценция DCFH2DA, % по отношению к контролю Количество мертвых клеток, %

-Н202 +Н202 -н2о2 +н2о2 -н2о2 +Н202

Контроль (без добавок) 21,6±2,0 158,7±14,6 100 100 9,6 15,0

Карнозин, 1 мМ 23,2±1,9 105,3±8,9* 108 66 4,3 6,5

NAC, 1 мМ 21,9±3,1 127,б±5,1 101 80 5,5 15,2

Вилон, 1 мМ 34,9±3,0* 134,5±9,1 161 84 6,4 10,2

Эпиталон, 1 мМ 144,0±9,8** 131,1±12,5 666 83 10,9 5,5

Везуген, 1 мМ 41,5±4,1* 221,7±12,5* 192 140 6,0 2,4

Пинеалон, 1 мМ 54,2±3,9* 108,6±3,0 250 68 6,5 ЗД

Примечание: *р<0,005; **р<0,001 по сравнению с контролем.

•.•я®*"

! ^Ш?;. :

10" 87.4%

101

Контроль

10" 10'

10'

ад%

• "Л-:';'

10^ П.1

Вилон

10» 10°

ап% 87.6%

10' 10'

Эпиталон

3°

10° 83.3%

.' а?: '

10'

10* м

■

1 ■ и;

О* 10°

0.0% 93.0%

ю'

Пинеалон

10' П.1

104

0.0%

Везуген

Примечание: живые клетки располагаются в нижнем левом квадранте, мертвые - в верхнем левом квадранте.

Рис.2. Влияние коротких пептидов на гибель нейронов мозжечка крыс.

Антигипоксические свойства коротких рсгуляторных пептидов

Влияние коротких пептидов на устойчивость крыс к воздействию гипоксии и на состояние их потомства

При воздействии на крыс острой сублетальной гипобарической гипоксии дольше всего дыхательную активность в барокамере сохраняли крысы, получавшие инъекции пинеалона. Удовлетворительные результаты были получены также при применении вилона и эпиталона. Для животных, которым вводили пинеалон и эпиталон, были характерны наименьшие значения коэффициента реституции, что свидетельствует о их лучшей адаптированности к гипоксическому воздействию. Исходя из этого, пинеалон был выбран в качестве наиболее перспективного протектора от гипоксии, в связи с чем в следующей серии экспериментов его антигипоксические эффекты были исследованы на модели пренатальной гипобарической гипоксии. Беременные крысы по чувствительности к гипоксии были разделены на 2 группы. Крысы 1-ой группы характеризовались высокой чувствительностью к гипоксии, что проявлялось в остановке дыхания через 61-285 с после достижения заданного остаточного давления в барокамере. 2-я группа животных была представлена устойчивыми к гипоксии животными, сохранявшими дыхательную активность в барокамере на протяжении всего периода гипоксического воздействия. У чувствительных к гипоксии животных (группа 1) наблюдалась также потеря позы продолжительностью 140 - 340 с. В ходе сеанса гипоксии у животных, устойчивых к гипоксии (2-я группа), потери позы не наблюдалось.

Значительный интерес представляют данные о влиянии пинеалона на активность антиоксидантных ферментов в мозге и печени устойчивых и чувствительных к гипоксии крыс. Оказалось, что в ткани мозга устойчивых к гипоксии крыс активность СОД и ГП в 2 раза выше, чем у животных, чувствительных к гипоксии (рис.3,4а). В печени же подопытных животных подобной разницы в активности антиоксидантных ферментов между двумя группами не отмечалось (Рис. 3,4б), что соответствует представлениям о том, что мозг наиболее подвержен гипоксическому воздействию. Вместе с тем, полученные нами данные отчетливо показали, что введение чувствительным к гипоксии животным пинеалона приводит к значительному повышению активности СОД в тканях мозга и печени (рис. За,б). Причем, в ткани мозга он достигает уровня, сопоставимого с таковым у животных, устойчивых к гипоксии. Активность ГП под влиянием пинеалона возрастает только у крыс, чувствительных к гипоксии (рис. 4а,б). Характерно, что пинеалон не вызывает достоверных изменений в активности антиоксидантных ферментов в мозге и печени крыс, устойчивых к гипоксии.

Полученные данные свидетельствуют о том, что у устойчивых к гипоксии крыс высокая активность наиболее значимых антиоксидантных ферментов СОД и ГП обеспечивает защиту от гипоксического воздействия и не нуждается в дополнительной стимуляции со стороны пинеалона и, возможно, других коротких регуляторных пептидов.

Численность потомства от животных, перенесших гипоксию, составляла 9±3 особи, а в группе, получавшей пинеалон - 14±2 особи (р<0,05), что приближалось к нормальному физиологическому уровню, типичному для интактных животных. На 12-й день часть подросших животных была декапитирована, и их мозжечок был использован для цитометрического анализа. Оставшихся животных в возрасте 4 недель использовали для оценки поведения в тесте «открытое поле». При этом в течение 3 мин поминутно регистрировали горизонтальную активность животных (ГА) - количество пересеченных квадратов, вертикальную активность (ВА) - количество стоек, количество обследованных норок, характеризующее исследовательскую активность животных, число эпизодов груминга, выход в центр поля, количество болюсов, характеризующие тревожность и эмоциональную активность животных. Потомство животных, разделенное по реакции их матерей на гипобарическую гипоксию в период беременности на 2 разные группы - чувствительную к гипоксии и устойчивую к ней, анализировали по отдельности. Данные представлены в таблице 3.

Таблица 3

Физиологические параметры, характеризующие поведение животных в тесте «открытое поле»

Параметр Чувствительные к гипоксии (п=6) Чувствитель-ные к гипоксии + пинеалон (п=11) Устойчивые к гипоксии (п=9) Устойчивые к гипоксии + пинеалон (п=12)

ГА 36±6,9 53±5,1* 45±3,3 57±3,3*

ВА 2±0,8 5±0,8* 2±0.6 6±1,1*

Норковая активность 1,5±0,5 1,5±0,6 2,7±0,7 3±0,5

Число эпизодов груминга 1,5±0,8 3,5±1,2 8,7±2,9 10±2,4

Кол-во болюсов 2,7±0,4 1,8±0,6 2,0±0,7 4,1±0,8

Число выходов в центр поля 0,01±0,1 0,27±0,1 0,17±0,1 0,13±0,1

Примечание:* р<0,05 - характеризует достоверность по отношению к группе

гипоксических животных без применения пинеалона.

Активность СОД (мозг)

УЕ/мгбепка

Чувст. Устойч.

Ш Гипоксия ■ Гипоксия + пинеалон

Рис. 3 а. Влияние пинеалона на активность супероксиддисмутазы в мозге чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс.

*р<0,01 - отличия между животными, чувствительными к гипоксии, получавшими и не получавшими пинеалон;

** р<0,001- отличия между чувствительными и устойчивыми к гипоксии животными.

Активность СОД (печень)

УЕ/мг белка

Чувст. Устойч.

I ш Гипоксия ■ Гипоксия + пинеалон I

Рис. 3 б. Влияние пинеалона на активность супероксиддиммутазы в печени чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс. * р<0,05 - отличия между животными, чувствительными к гипоксии, получавшими и не получавшими пинеалон.

Активность ГП (мозг)

Чувст. Устойч.

ИГмпоксия ЕЭГипоксия + пинеалон

Рис.4 а. Влияние пинеалона на активность глутатиопероксидазы в мозге чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс.

Примечание: * р<0,05 - отличия между животными, чувствительными к гипоксии, получавшими и не получавшими пинеалон,

** р<0,01 - отличия между чувствительными и устойчивыми к гипоксии животными. Активность ГП (печень)

0,35

<0 °'3 5 0,25

I 0,2

I 0,15

(5 0,1 5 0,05 0

Чувст. Устойч.

I Р Гипоксия ЕШ Гипоксия + пинеалон I

Рис. 4 б. Влияние пинеалона на активность глутатиопероксидазы в печени чувствительных и устойчивых к гипоксии крыс.

У потомства как чувствительных, так и устойчивых к гипоксии крыс, получавших пинеалон, как ГА, так и ВА были достоверно выше, чем у потомства крыс, подвергшихся гипоксии и не получавших этого пептида. При этом у потомства, полученного от устойчивых к гипоксии крыс, ГА была

несколько выше, чем от чувствительных к гипоксии крыс, поэтому эффект пинеалона проявлялся более выражено в группе чувствительных к гипоксии животных. На исследовательскую активность (обследование норок) достоверного влияния пинеалон не оказывал.

У потомства чувствительных к гипоксии крыс пинеалон заметно увеличивал частоту груминга и количество выходов в центр открытого поля, хотя это увеличение, так же как изменение количества болюсов (актов дефекации) было недостоверным вследствие разброса показателей индивидуальной реакции животных. В противоположность этому, действие эпиталона на потомство устойчивых к гипоксии животных не проявлялось.

Проведенные нами исследования показали, что ряд коротких пептидов (пинеалон, карнозин) способны осуществлять защиту потомства от токсического действия гипергомоцистеинемии. Обнаружено, что при введении этих пептидов беременным самкам наблюдается увеличение среднего веса потомства, выращенного в условиях пренатальной гипергомоцистеинемии до контрольного уровня (22-25 г.). Оценка пространственной ориентации крысят, т.е. способности к обучению в тесте Морриса (поиск платформы при передвижении в бассейне) выявила некоторое улучшение под влиянием исследуемых пептидов возможностей их обучения и запоминания, нарушенных в результате перенесенной пренатальной гипергомоцистеинемии.

Действие пинеалона на нейрональные клетки мозжечка потомства крыс, подвергнутых воздействию гипобарической гипоксии

Инкубация нейронов с перекисью водорода (20 мМ в течение 20 мин) или с (1 мМ в течение 40 мин) вызывала резкое возрастание гибели

нейрональных клеток (Рис. 5). При этом в суспензии нейронов крысят, рожденных от самок, подвергнутых гипоксии, но не получавших пинеалон, наблюдалось двукратное увеличение гибели клеток, вызываемое перекисью водорода, в то время как для нейронов, выделенных из мозжечка потомства самок, получавших пинеалон, эта величина не превышала 40%. Исходный уровень мертвых нейронов в первичной культуре также был почти вдвое ниже в случае нейронов, выделенных из мозжечка животных, получавших пинеалон. Менее выраженные, но аналогичные изменения наблюдались при инкубации нейронов мозжечка с ЫМОА. Таким образом, клетки, выделенные из мозжечка животных, рожденных от крыс, получавших пинеалон, демонстрируют большую устойчивость к окислительному стрессу.

Рис. 5. Доля мертвых клеток в первичной культуре нейронов мозжечка крыс при инкубации с перекисью водорода (слева) или с NMDA (справа).

Примечание: Инкубация с 20 мМ перекиси водорода - 20 мин, с 1 мМ NMDA - 40 мин

Рис. 6. Уровень активных форм кислорода в первичной культуре нейронов при инкубации с перекисью водорода (слева) или ИМБА (справа). Обозначения те же, что на Рис.5.

Исследование уровня АФК в тестируемых клетках обнаружило, что гипоксия приводит к резкому (почти в 3 раза) увеличению исходного (стационарного) уровня АФК. На этом фоне индукция окислительного стресса у нейронов с помощью неспецифического фактора (перекиси водорода) вызывает прирост свободных радикалов, который мало отличается в обеих группах гипоксических животных (получавших и не получавших пинеалон).

В то же время, по реакции на ЫМЮА нейроны этих животных существенно различались. На фоне высокого стационарного уровня АФК ИМТОА не вызывал дополнительного роста свободных радикалов в нейронах потомства гипоксических крыс, как это наблюдается в случае интактных нейронов, а в нейронах потомства гипоксических крыс, получавших пинеалон, даже понижал его (Рис. 6). Этот факт свидетельствует о том, что пинеалон защищает нейрональные клетки от экзайтотоксического действия ЫМОА.

Влияние коротких пептидов на клетки нейробластомы человека при гипоксии

В данном исследовании при инкубации клеток нейробластомы в условиях гипоксии было обнаружено снижение уровня мРНК инсулиндеградирующего фермента (ИДФ) и неприлизина (НЕП), участвующих в деградации Р-амилоидного пептида, на 30-35% и 25-30%, соответственно (Рис. 7, 8)

%от

контроля

140

мРНК ИДФ

Г*

I 2 з Нормоксия

* я

& > '•Л

4 5 Гипоксия

■

Рис. 7. Уровень содержания мРНК металлопептидазы ИДФ в клетках нейробластомы человека N157, культивируемых в нормоксических или гипоксических условиях.

Примечание: Здесь и на Рис.8 по оси ординат - % от контроля. Содержание мРНК в контрольных клетках принято за 100%. Нормоксия: 1 - контроль (без введения агентов), 2 - эпиталон 50 нМ, 3 - вилон 50 нМ. Гипоксия: 4 - контроль (без введения агентов), 5 - эпиталон 50 нМ, 6 - вилон 50 нМ, 7 - ЭГКГ 25 мкг/мл.

* - р < 0.05 по сравнению с контролем;

# - р < 0.05 по сравнению с гипоксией.

Нормоксия Гипоксия

Рис. 8. Уровень содержания мРНК НЕП в клетках нейробластомы человека N87, культивируемых в нормоксических или гипоксических условиях.

При добавлении в инкубационную среду 50 нМ эпиталона он препятствовал снижению уровня экспрессии ИДФ и НЕП, вызванному гипоксией, а в случае НЕП приводил даже к увеличению его экспрессии на 30%. В аналогичных условиях эксперимента вилон не оказывал влияния на уровень экспрессии ИДФ при гипоксии, но предотвращал подавление экспрессии НЕП. Изучение влияния вилона и эпиталона на уровень экспресии НЕП и ИДФ в клетках нейробластомы человека NB7 при нормоксии не выявило заметных изменений в уровне содержания их мРНК, хотя в случае мРНК ИДФ наблюдалось незначительное (10-15%) его повышение (Рис. 7).

Для сравнения нами было исследовано действие антиоксиданта экстракта зеленого чая, эпигаллокатехин-3 галлата (ЭГКГ) на уровень экспрессии мРНК НЕП и ИДФ в клетках нейробластомы NB7 в условиях гипоксии. Известно, что ЭГКГ вызывает увеличение экспрессии НЕП на уровне белкового продукта в клетках нейробластомы SH-SY5Y [Yasojima К. et al., 2005]. Оказалось, что ЭГКГ также способен предотвращать снижение уровня экспрессии НЕП в нашем эксперименте, однако он был менее эффективен в отношении ИДФ (Рис.7, 8).

Анализируя полученные нами данные, можно заключить, что эпиталон является оптимальным по величине антигипоксического эффекта в отношении уровня экспрессии НЕП и ИДФ, а вилон, не влияя на экспрессию ИДФ, несколько уступает ЭГКГ в стимулировании уровня экспрессии НЕП.

Заключение

В экспериментах, проведенных in vivo установлено, что короткие пептиды (эпиталон, кортаген и вилон) при введении животным (крысы линий ЛИО, Wistar мыши линии СВА) оказывают антиоксидантное действие, которое выражается в снижении интенсивности свободнорадикальных процессов (перекисного окисления липидов и окислительной модификации белков). Антиоксидантные свойства коротких пептидов проявляются в экспериментах как на интактных половозрелых животных, так и особенно наглядно при старении или действии экстремальных факторов внешней среды (гипоксия, гипокинезия). Наиболее сильным антиоксидантом является эпиталон, слабее всего антиоксидантные свойства выражены у вилона.

Модельные эксперименты in vitro показали, что, наряду с эпиталоном и вилоном, антиоксидантным действием обладают трипептиды пинеалон и везуген. Так же как эпиталон и вилон, при применении в концентрациях до 5 мМ они не взаимодействуют со стабильным радикалом ДФПГ, т.е. не относятся к группе антиоксидантов прямого действия, таких как аскорбиновая кислота и тиоловые соединения. Вместе с тем, исследуемые пептиды, особенно эпиталон и вилон, оказывают мембраностабилизирующее действие, подавляя в той или иной степени окисляемость липопротеиновых комплексов плазмы крови и препятствуя осмотическому гидролизу эритроцитов. Мембранопротекторные свойства коротких пептидов были выявлены также и в экспериментах in vivo при воздействии на животных гипокинезии и гипобарической гипокинезии, что выражалось в снижении под влиянием эпиталона и вилона уровня содержания внеэритроцитарного гемоглобина и суммарной пероксидазной активности в плазме крови. Установлено также стимулирующее влияние исследуемых пептидных препаратов на стационарный уровень активных форм кислорода в изолированных гранулярных клетках мозжечка, наряду со снижением доли погибших клеток в популяции нейронов.

Изучение в тесте «открытое поле» поведенческой активности и характеристики когнитивных функций у потомства самок крыс, подвергшихся во втором триместре беременности воздействию острой сублетальной гипобарической гипоксии, выявило защитное влияние пинеалона на исследуемые физиологические показатели. Известно, что одной из значимых причин развития хронической внутриутробной гипоксии плода и фетоплацентарной недостаточности на поздних сроках беременности является гипергомоцистеинемия. При этом наблюдается картина генерализованной микроангиопатии, проявляющейся в виде позднего токсикоза (гестоза),

следствием которого является тяжелая нефроиатия и развитие аутоиммунных процессов у матери и снижение функциональных резервов всех жизнеобеспечивающих систем новорожденного [Уо1Ьег Б.Е., 2000, Wotherspoon Р., О., 2003]. Полученные нами данные свидетельствуют о

том, что одним из факторов, обуславливающих антигипоксическое действие исследуемых нами пептидов (пинеалон, карнозин) на потомство крыс в условиях пренатальной гипоксии, может быть осуществляемая ими защита от нейротоксического влияния гипергомоцистеинемии.

В экспериментах с нейронами, выделенными из мозжечка животных, рожденных от крыс, получавших пинеалон, установлены нейропротекторные свойства коротких пептидов, обуславливающие устойчивость клеток к окислительному стрессу, индуцируемому перекисью водорода или лигандом глутаматных рецепторов М-метил-В-аспартатом. Поскольку не было обнаружено аналогии между уровнем смертности нейронов и ростом АФК при индукции окислительного стресса, можно заключить, что защита клеток от гибели осуществляется пинеалоном не путем прямого ограничения продукции АФК. Возможно, это обусловлено механизмом, связанным с повышением устойчивости мембран, как это наблюдалось нами ранее в модельных экспериментах с осмотическим гемолизом эритроцитов, индуцируемым в присутствии пинеалона.

Полученные нами данные позволяют предположить, что синтетические пептиды эпиталон и, в меньшей степени, вилон обладают нейропротекторыми антигипоксическими свойствами в отношении уровня экспрессии таких металлопептидаз, как НЕП и ИДФ. Известно, что при старении и ишемии мозга также наблюдается снижение уровня экспрессии НЕП и ИДФ в коре и гиппокампе [Сассато А. е1 а!., 2005]. В связи с этим можно полагать, что эпиталон и вилон способны оказывать защитный нейропротекторный эффект на нервные клетки этих структур путем стабилизации активности этих ферментов, играющих важную роль в катаболизме амилоидного пептида, и препятствовать его накоплению в токсических для клеток концентрациях.

Приведенные в работе результаты исследований об антиоксидантном действии исследуемых пептидных препаратов, которое проявляется на различных уровнях, начиная от клеток до организма в целом, в зрелом возрасте и при старении, в условиях действия экстремальных факторов внешней среды, свидетельствуют о важной роли коротких пептидов в механизмах регуляции гомеостаза при старении.

ВЫВОДЫ

1. В сыворотке крови и печени старых крыс уровень генерации активных форм кислорода по сравнению с молодыми животными снижается, что сопровождается интенсификацией процесса окислительной модификации белков, некоторым увеличением образования продуктов ПОЛ и значительным ингибированием активности СОД. В мозге не выявлено существенных возрастных изменений показателей свободнорадикалыюго окисления, за исключением снижения активности СОД.

2. Введение половозрелым крысам эпиталона и кортагена в дозах 2,5-10 мкг/кг массы тела приводит к снижению уровня содержания продуктов ПОЛ и окислительной модификации белков в сыворотке крови и коре головного мозга. Антиоксидантное действие эпиталона особенно наглядно проявляется в экспериментах на старых животных, у которых при его введении более чем вдвое повышается активность СОД коры головного мозга.

3. Сравнительное исследование влияния эпиталона и вилона на свободнорадикальные процессы у 18-мес. мышей линии СВА показало, что введение эпиталона, в отличие от вилона, приводит к заметному снижению интенсивности свободнорадикальных процессов в крови и тканях; при этом он оказывает преимущественное влияние на начальные этапы ПОЛ (уровень ДК) в печени и сыворотке крови и, напротив, его терминальную стадию (уровень ШО) в головном мозге. Эффекты эпиталона в большинстве случаев сопоставимы с действием мелатонина.

4. Предварительное введение крысам эпиталона и вилона в дозах 2,5- 10 мкг/кг массы тела перед началом сеанса гипокинезии или гипоксии способствует нормализации свободнорадикальных процессов в плазме крови и коре мозга крыс благодаря антиоксидантным и мембраностабилизирующим свойствам коротких пептидов, которые у вилона выражены гораздо слабее по сравнению с эпиталоном.

5. При определении прямой антиоксидантной активности тестируемых соединений вилон и эпиталон не проявляют способности к взаимодействию со стабильным свободным радикалом 1,1'-дифенилпикрилгидразилом, что позволяет классифицировать их как соединения, не обладающие прямой антиоксидантной активностью.

6. Исследование индуцированного окисления липопротеинов плазмы крови человека показало, что короткие пептиды способны защищать липопротеиновые комплексы от Ре2+-индуцированного окисления, причем вилон и эпиталон обеспечивают заметное увеличение резистентности к окислению, а везуген и пинеалон существенно снижают скорость окислительного процесса.

при высоких (5 мМ) концентрациях пептидных препаратов, протекторная активность которых была приблизительно равноценной.

8. Вилон, везуген и пинеалон повышают стационарный уровень активных форм кислорода в изолированных гранулярных клетках мозжечка на 61-155%, на этом фоне перекись водорода не только не вызывает роста внутриклеточного уровня АФК, но и приводит к понижению уровня радикалов в нейронах. При этом эти вещества, подобно карнозину, вызывают уменьшение доли мертвых клеток в популяции исследуемых нейронов. Эпиталон вызывал наибольшее увеличение уровня АФК в нейронах (до 666%), хотя не влиял на гибель нейронов.

9. Введение вилона, везугена, эпиталона, и пинеалона в дозе 10 мкг/кг массы тела самкам крыс перед созданием гипобарической гипоксии, оказывает антигипоксическое действие на животных. Среди исследуемых пептидов наиболее эффективным является пинеалон, введение которого повышает устойчивость животных к гипоксии и обеспечивает частичную защиту от вызываемого ею окислительного стресса. Это проявляется в повышении активности антиоксидантных ферментов (СОД и глутатионпероксидазы) в мозге и печени чувствительных к гипоксии крыс.

10. Введение пинеалона в дозе 10 мкг/кг массы тела беременным крысам после сеанса гипобарической гипоксии способствует увеличению численности потомства и обеспечивает его защиту от последствий гипоксической атаки развивающегося мозга. Защитный эффект пинеалона выражается в улучшении показателей поведения крысят в тесте «открытое поле», а также в увеличении устойчивости выделенных из их мозжечка нейронов к окислительному стрессу, индуцируемому перекисью водорода или №метил-0-аспартатом.

11. Эпиталон и в меньшей степени вилон оказывают нейропротекторное действие, препятствуя снижению уровня экспрессии металлопептидаз неприлизина инсулиндеградирующего фермента в клетках нейробластомы человека ЫВ7 в условиях гипоксии. Это позволяет рассматривать исследуемые короткие пептиды в качестве перспективных нейропротекторных соединений, препятствующих накоплению Р-амилоида в нервных клетках.

12. Полученные данные о наличии антиоксидантных, антигипоксических и нейропротекторных свойств коротких пептидов вносят существенный вклад в понимание механизма их геропротекторного действия.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Принимая во внимание экспериментальные данные об антиоксидантных свойствах эпиталона и других коротких пептидов, целесообразно провести клинические испытания их в качестве антиоксидантных геропротекторных препаратов.

2. Исходя из полученных результатов об антигипоксическом и нейропротекторном действии пинеалона и везугена, целесообразно использовать их в качестве биорегуляторов, способствующих профилактике развития возрастной патологии и ускоренного старения.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в журнале по перечню ВАК Министерства образования и науки Российской Федерации:

1. Арутюнян А. В. Механизмы свободнорадикального окисления и его роль в старении / A.B. Арутюнян, Л.С. Козина // Успехи геронтологии. - 2009. - Т. 22. - № 1. - С. 104-11 б.

2. Влияние пептидов вилон и эпиталон на уровень экспрессии неприлизина и инсулин-деградирующего фермента в клетках нейробластомы человека в норме и при гипоксии /Л.С. Козина, Е.Г. Кочкина, H.H. Наливаева, Н.Д. Беляев, Э. Тернер, A.B. Арутюнян // Нейрохимия. - 2008. - Т.25, № 1 - 2. - С. 82- 85.

3. Влияние пептидных препаратов эпифиза на пролиферативные процессы в органотипической культуре преоптической области гипоталамуса/Ю.П. Милютина, Л.С. Козина, A.B. Арутюнян, Н.И. Чалисова., В.В. Лесняк // Успехи геронтологии. -2007. - Т. 20. - № 4. - С. 61- 63.

4. Возрастные изменения состояния коронарного кровотока и биохимических показателей крови/И. М. Кириченко, Л. С. Козина, К. Л. Козлов//Успехи геронтологии - 2008. - Т. 21.

- № 4. - С. 640-642.

5. Изучение антиоксидантных и мембранопротекторных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах/Л.С. Козина, С.Л. Стволинский, Т.Н. Федорова, В.А. Арутюнов, Е.Р. Булыгина, Е.С. Арзуманяи, A.B. Арутюнян,

B.Х. Хавинсон//Вопр. биол., мед. и фармацевт, химии. - 2008, № 6. - С. 31-36.

6. Козина Л.С. Исследование антигипоксических свойств коротких пептидов/ Л.С. Козина//Успехи геронтологии. - 2008. - Т.21, № 1. - С. 61 - 67.

7. Козина Л.С. Антиоксидантное действие пептидных препаратов эпифиза и мелатонина/ Л.С. Козина// Вест. Санкт-Петербургской государственной медицинской академии им. И.И. Мечникова.- 2007,- Т. 8, №1 - С. 140-143.

8. Козина Л.С. Влияние биологически активных тетрапептидов на свободнорадикальные процессы/Л.С. Козина//Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 2007. - Т. 143, № 6. -

C. 690-692.

9. Оценка биологической активности регуляторпых пептидов в модельных экспериментах in vitro/R.C. Козина, A.B. Арутюнян, С.Л. Стволинский, В.Х. Хавинсон//Успехи геронтологии. - 2008. -Т.21, № 1. - С. 68- 73.

10. Пренатальная гипергомоцистеинемия как модель окислительного стресса мозга / A.B. Махро, А.П. Машкина, O.A. Соленая, O.A. Трунова, Л.С. Козина, A.B. Арутюнян, Е.Р. Булыгина//Бюлл. эксперим. биологии и медицины. - 2008.- Т. 146, № 7. -С. 37-39.

11. Регуляторные пептиды защищают нейроны мозга от гипоксии в экспериментах от vivo/ Л.С. Козина, A.B. Арутюнян, С.Л. Стволинский, М.С. Степанова, В.Х. Хавинсон// Докл. акад. наук. - 2008. - Т. 418, №3, - С. 419-422.

12. Стресс, старение, гипоталамо-гипофизарно-адреналовая система и надежность антиоксидантной ферментной защиты /Н. Д. Гончарова, В. Ю. Маренин, Т. Э. Оганян, А. В. Шмалий, Т. Н. Богатыренко, Л. С. Козина, В. М. Прокопенко//Успехи геронтологии.

- 2008. - Т. 21. - № 4. - С. 548-554.

Монографии

13. Пептидная регуляция адаптации организма к стрессорным воздействиям/ A.B. Лысенко, A.B. Арутюнян, Л.С. Козина. - СПб.: ВМедА - 2005. -207 с.

Статьи

14. Антиоксидантные механизмы стресс- и геропротекторных эффектов дельта-сон индуцирующего пептида и его аналогов у крыс разного возраста /A.B. Лысенко, Л.С. Козина, Р.Г. Шейхова, A.A. Алиев//Новые лекарственные препараты. - 2007.- Т. 34, №3,-С. 44-56.

15. Арутюнян A.B. Антиоксидантное действие коротких пептидов при старении и экстремальных воздействиях/А.В. Арутюнян, Л.С. Козина// Матер, докл. Международной конф. «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» Украина, Крым, Ялта-Гурзуф, 31 мая - 9 июня 2007 г. -С. 409-411.

16. Арутюнян А. В. Модулирующее влияние геропротекторных пептидов эпифиза, обладающих аптиоксидантными свойствами, на репродуктивную систему/ A.B. Арутюнян, Л.С. Козина, Хавинсон В.Х.// Международный симпозиум « Молекулярные механизмы регуляции функции клетки» 12-16 сентября 2005г., Тюмень. -2005.-С. 209-211.

17. Арутюнян A.B. Хронобиология регуляции репродуктивной функции при старении / A.B. Арутюнян, Л.С. Козина, Ю.П. Милютина//Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических целях: Матер. Всеросс. научн. конф. - Сочи-Адлер- 2006. - С. 276 -281.

18. Влияние эпиталона на возрастные изменения эндокринной функции пинеальной железы и активность ферментов антиоксидантной защиты у самок макак резусов/ А. В. Шмалий, Н. Д. Гончарова, Л.С. Козина, A.A. Венгерин// Перспективные направления использования лабораторных приматов в медико-биологических целях: Матер. Всеросс. научн. конф. - Сочи-Адлер - 2006. - С. 293 -298.

19.Козина Л.С. Влияние интенсивности окислительных процессов в организме на продолжительность жизни/ Л.С. Козина, A.B. Арулонян//«Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии» Сб. трудов юбилейной научно-практической конференции «XX лет первой в России кафедре гериатрии» (под ред. проф. А.Л. Арьева) СПб МАПО, 27-28 апреля 2006 г., СПб. - 2006. - С. 272-278.

20. Козина Л.С. Исследование антиоксидантных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах in vitro/ Л.С. Козина, А. В. Арутюнян, Б.Л. Стволинский // Матер. 5-ой национальной научно-практической конференции с международным участием «Активные формы кислорода, оксида азота, антиоксиданты и здоровье человека», 18-22 сентября, 2007, Смоленск, 2007. С. 334-337.

21. Козина Л.С. Роль пептидов в регуляции свободнорадикальных процессов при старении/ Л.С. Козина, A.B. Арутюнян, В.Х. Хавинсон //Матер. Международной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение», 2-3 ноября 2006 г., Астрахань. - 2006. - С. 15-20.

22. Kozina L.S. Antioxidant properties of geroprotective of the pineal gland/ L.S.Kozina, A.V. Arutjunyan, V.Kh. Khavinson// Arch. Gerontol. Geriatr. Suppl. 1. - 2007. - P. 213-216.

23. The effects of vilon and epithalon peptides on the expression of neprilysin and insulin -degrading enzyme in human neuroblastoma NB7 cells under normal and hypoxic conditions /L.S. Kozina, E.G. Kochkina, N.N. Nalivaeva, N.D. Belyaev, A. J. Turner, A.V. Arutjunyan // Neurochemical. Journal. - 2008. - Vol.2.- No. 1-2. - P. 82- 85.

Тезисы

1. Антигипоксическое действие коротких регуляторных пептидов/JI.C. Козина, A.B. Арутюнян, С.Л. Стволинский, В.А. Арутюнов, М.С. Степанова// Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г., С-Петербург. - 2007. - С. 176.

2. Антиоксидантные и мембранопротскторные свойства коротких пептидов в экспериментах in vitro /Л.С. Козина, A.B. Арутюнян, С.Л. Стволинский, В.Х. Хавинсон// Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г., С-Петербург. - 2007. -

С. 177.

3. Антиоксидантные свойства геропротекторных пептидов эпифиза/ A.B. Арутюнян, Л.С. Козина, Т.В. Харитонова, Ю.П. Милютина // 4-й Национальный конгресс геронтологов и гериатров Украины «Проблемы старения и долголетия», Киев. - 2005. - Т. 14. - С. 71-72.

4. Антиоксидантные свойства эпиталона и его структурных аналогов / Козина Л.С., A.B. Арутюнян, В.М. Прокопенко, Т.И. Опарина, Ю.П. Милютина// Тез. докл. VII Всероссийской конференции с международным участием «Биоантиоксидант», 25-26 ноября 2006 г., Москва.

- 2006. - С. 47- 48.

5. Арутюнян A.B. Антиоксидантные свойства геропротекторных пептидных препаратов эпифиза и вилочковой железы /A.B. Арутюнян, Л.С. Козина// Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» 25-26 ноября 2006 г., Санкт-Петербург. -2006.-С. 11-12.

6. Арутюнян A.B. Влияние геропротекторных пептидов на свободнорадикальные процессы/А.В. Арутюнян, Л.С. Козина// Тез. докл. 4-ой Крьмской конференции «Окислительный стресс и свободнорадикальные патологии» Судак, Крым, Украина. - 2008.

- С. 7- 8.

7. Арутюнян A.B. Нейропротекторное действие пептидных биорегуляторов при гипоксии/ A.B. Арутюнян, Л.С. Козина, В.А. Арутюнов// Тез. докл конф. с международным участием «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» Сапкт-Петербург-Колтуши, 10-12 сентября 2008г., СПб. - С. 11-12.

8. Арутюнян A.B. Окислительная модификация белков и старение/ A.B. Арутюнян, Л.С. Козина, В.В. Лесняк//Сб. тез. конф ./«Проблемы геронтологии и гериатрии», 20-22 апреля. 2006г., Сьжтывкар. - 2006.- С. 68.

9. Арутюнян A.B. Полифункциональное антиоксидантное действие мелатонина/ A.B. Арутюнян, Козина Л.С.//Тез. докл. Всерос. научно-практической конф. «50 лет мелатонину: Итоги и перспективы исследований» - Санкт-Петербург, 24-25 апреля 2008.-С. 4-5.

10. Влияние пептидов на адаптационные возможности организма и уровень тревожности/ A.B. Лысенко, Е.В. Моргуль, Р.Г. Шейхова, Л.С. Козина, A.B. Арутюнян//Тез. докл. XX съезда физиологического общества им. И.П. Павлова, 4-8 июня 2007 г., Москва. - 2007. - С. 315.

11. Возрастные аспекты стресспротекторной эффективности коротких пептидов при гипоксии /A.B. Лысенко, Козина Л.С., Руденко Т.Н. Арутюнян A.B.// Матер. 4-й Российской конференции «Гипоксия: механизмы, адаптация, коррекция» (с международным участием), 12-14 октября 2005 г., Москва. - 2005. - С. 70-71.

12. Возрастные особенности показателей стрессоустойчивости у работников железнодорожного транспорта с различным уровнем тревожности/Т.А. Финоченко, A.B. Лысенко, В.А. Мамченко, Л.С. Козина// Матер. Межрегиональной научно-практической

конференции «Медицинские проблемы пожилых», 20 ноября 2007 г., Йошкар-Ола - 2007. -С. 58-60.

13. Возрастные особенности взаимосвязи личностной тревожности с уровнем здоровья и стрессоустойчивости/А.В. Лысенко, Т.А. Финоченко, В.А. Мамченко, JI.C. Козина// Матер. IV научно-практической геронтологической конф. с международным участием, посвященной памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 20-21 ноября 2008 г., С-Петербург. -2008. - С. 55.

14. Гипоталамическая регуляция репродуктивной функции и ее нарушение под влиянием нейротоксических ксенобиотиков/ A.B. Арутюнян, М.Г. Степанов, A.B. Кореневский, JI.C. Козина//Сб. научных трудов I съезда физиологов СНГ, Сочи, Дагомыс, 19-23 сентября 2005. -Москва,- 2005. - Т. 1. - С. 116.

15. Защитная роль мелатонина и пептидных препаратов эпифиза лри воздействии экотоксикантов на репродуктивную функцию/А.В. Арутюнян, Ю.П. Милютина, A.B. Кореневский, М.Г. Степанов, JI.C. Козина, В.Х. Хавинсон// Матер. Конгресса «Экотоксины и здоровье», 1-4 июля 2008, Санкт-Петербург. Вестник Российской Военно-медицинской академии, 2008, № 3 (23) Приложение 2.Часть I. - С. 65.

16. Захарченко И. В. Адаптивное значение возрастных изменений углеводного обмена в печени при иммобилизационном стрессе/ И.В.Захарченко, Л.С. Козина//Матер. конф. «Забота, помощь, милосердие», 21-24 марта 2007г., С-Петербург- 2007. - С. 66-67.

17. Кириченко И.М. Зависимость результатов ангиографии коронарных артерий у лиц пожилого и старческого возраста от показателей липидного обмена и внутрисосудистой активации тромбоцитов / И.М. Кириченко, Л.С. Козина// Тез. докл. Всероссийской конф. «Перспективы фундаментальной геронтологии» 25-26 ноября 2006 г., Санкт-Петербург. -2006.-С. 53-54.

18. Кириченко И.М. Зависимость результатов ангиографии коронарных артерий от наличия инфаркта миокарда в анамнезе у пациентов пожилого и старческого возраста /И.М. Кириченко, Л.С. Козина //Матер. IV научно-практической конференции «Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов», 21 -22 мая 2007г., Москва - 2007 - С. 51.

19. Кириченко И.М. Зависимость результатов ангиографии коронарных артерий от индекса массы тела у пациентов пожилого и старческого возраста/ И.М. Кириченко, Л.С. Козина, К.Л. Козлов //Матер, конф. «Забота, помощь, милосердие», 21-24 марта 2007г., С-Петербург,-2007. - С. 66-67.

20. Козина Л.С. «Антигипоксические эффекты коротких пептидов»/ Л.С. Козина, A.B. Лысенко// Матер. XII Международного симпозиума «Эколого-физиологические проблемы адаптации», 30-31 января 2007 г., Москва. - 2007. - С. 235-236.

21. Козина Л.С. Влияние вилона и эпиталона на процессы свободнорадикального окисления при старении у мышей линии СВА /Л. С. Козина, A.B. Арутюнян//Матер. III Всесоюзной научно-практической конф. «Общество, государство и медицина для пожилых», 25-26 мая 2006г., Москва. - 2006. - С. 53.

22. Козина Л.С. Возрастная динамика показателей свободно-радикальных процессов и антиоксидантной системы / Л.С. Козина, В.В. Лесняк //«Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии» Сб. трудов юбилейной научно-практической конференции «XX лет первой в России кафедре гериатрии» (под ред. проф. А.Л. Арьева) СПб МАПО, 27-28 апреля 2006 г., СПб.-2006.-С. 288-289.

23. Козина Л.С. Возрастные изменения в интенсивности биорадикальных процессов при развитии сердечно-сосудистой патологии/Л.С. Козина, Т.В. Харитонова//Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г., С-Петербург-2007.-С. 101-102.

24. Козина Л. С. Возрастные изменения перекисного окисления белков эритроцитов и плазмы крови/Л. С. Козина, A.B. Арутюнян// Матер, научно-практической конф. «Пожилой больной» Москва, 2004. - ж. Клиническая геронтология. - Т. 10, № 9. - С. 76.

25. Козина Л.С. Возрастные особенности процессов свободнорадикального окисления в печени крыс при иммобилизационном стрессе/Л.С Козина, И.В. Захарченко //Матер, конф. «Забота, помощь, милосердие», 21-24 марта 2007г., С-Г1етербург.- 2007. - С. 67.

26. Козина Л.С. Изучение возрастных изменений в интенсивности биорадикальных процессов при развитии сердечно-сосудистой патологии/ Л.С. Козина, Т.В. Харитонова// 4-я национальная научно-практическая конференция с международным участием. «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» Смоленск, Россия, 26-30 сентября 2005 г., Смоленск, - 2005. - С. 394-395.

27. Козина Л.С. Изучение прямого антиоксидантного действия коротких пептидов / Л.С. Козина, С.Л. Стволинский, A.B. Арутюнян// Тез. докл III Российского симпозиума «Белки и пептиды», 16-21 сентября 2007 г., Пущино. 2007. - С. 121-122.

28. Козина Л.С. Исследование антиоксидантных свойств коротких пептидов в модельных экспериментах in vitro/Л.С. Козина, A.B. Арутюнян, С.Л. Стволинский//5-я национальная научно-практическая конференция с международным участием. «Активные формы кислорода, оксид азота, антиоксиданты и здоровье человека» Смоленск, Россия, 18-22 сентября 2007 г., Смоленск. - 2007. - С. 334-335.

29. Козина Л.С. Регуляция свободнорадикальных процессов пептидными препаратами эпифиза при старении/Л.С. Козина,А.В. Арутюнян//Сб. докл.УИ Междунар. симп. «Биологические механизмы старения», 24-27 мая 2006 г., Харьков, Украина. - 2006 - С. 3031.

30. Козина Л.С. Роль возрастных изменений функциональной активности митохондрий в развитии сердечно-сосудистой патологии/Л.С. Козина, Т.В. Харитонова, И.М. Кириченко// Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии» 25-26 ноября 2006 г., Санкт-Петербург. - 2006. - С. 59 - 60.

31. Козина Л.С. Роль свободнорадикальных процессов в развитии атеросклероза/ Л.С. Козина, Т.В. Харитонова, A.B. Арутюнян//Сб. научных трудов «Актуальные вопросы внутренних болезней» СПб государственная медицинская акад. им. И.И. Мечникова, Санкт-Петербург. -2006. - С. 60 - 61.

32. Козина Л. С. Роль пептидов эпифиза в регуляции свободнорадикальных процессов при старении/Л. С. Козина, A.B. Арутюнян// Матер, научно-практической конф. «Пожилой больной» Москва, 2004. - ж. Клиническая геронтология. - Т.10, № 9. - С. 78.

33. Козина Л.С. Экспериментальное изучение влияния геропротекторных пептидов эпифиза на антиоксидантную систему /Л. С. Козина, A.B. Арутюнян// Матер, научно-практической конф. «Пожилой больной» Москва, 2006. - ж. Клиническая геронтология. - Т. 12, № 9. - С. 88.

34. Козина Л.С. Ингибирование активности холинэстераз в клетках нейробластомы человека SH-SY5Y под влиянием вилона и эпиталона /Л.С. Козина, Н.З. Макова, H.H. НаливаеваДГ Кочкина., В.А. Арутюнов, А. Тернер, И.А. Журавин, A.B. Арутюнян// Сб. докл.VIII Международный симпозиум «Биологические механизмы старения», 21-24 мая 2008 г., Харьков, Украина. - 2008. - С. 65 - 66.

35. Козина Л.С. Эффект геропротекторных пептидов на активность холинэстераз в клетках нейробластомы человека SH-SY5Y/II.C. Козина, Н.З. Макова, H.H. Наливаева, Е.Г Кочкина., В.А. Арутюнов, А. Тернер, И.А. Журавин, A.B. Арутюнян// Матер. V Всероссийской научно-практической конф. «Общество, государство и медицина для пожилых», 3-4 июня 2008г., Москва. - 2008. - С. 35.

36. Лысенко A.B. Применение эпиталона для коррекции метаболических и функциональных нарушений при ' физической нагрузке у спортсменов/А.В. Лысенко,

Л.С. Козина//Тез. докл. «XIV Российский национальный Конгресс «Человек и лекарство», 16-20 апреля 2007 г., Москва. - 2007 - С. 400.

37. Оксидативный стресс у пожилых пациентов с артериальной гипертензией и пути его коррекции/ Т.В. Харитонова, Л.С. Козина, К.Л. Козлов, Н.В. Багрова// Матер. IV научно-практической геронтологической конф. с международным участием, посвященной памяти Э.С.Пушковой (Пушковские чтения), 20-21 ноября 2008 г., С-Петербург. - 2008. - С. 147.

38. Оценка безопасности использования нанопрепаратов пептидной природы/ А.В. Лысенко, Т.А. Финоченко, Р.Г. Шейхова, Л.С. Козина, А.В. Арутюнян//Матер. П-го Санкт-Петербургского международного экологического форума, 1-4 июля 2008, Санкт-Петербург. Вестник Российской Военно-медицинской академии, 2008, № 3 (23) Приложение 2.Часть II. -С. 486

39. Сравнительное изучение антиоксидантных свойств тетрапептидов/Л.С. Козина, А.В. Арутюнян, В.М. Прокопенко, Т.И. Опарина, Т.В. Харитонова//Тез. докл. «2-й Российский симпозиум по химии и биологии пептидов», 25-27 мая 2005 г., Санкт-Петербург. - 2005. -С. 66.

40. Участие биогенных аминов гипоталамуса в регуляции репродуктивной системы женского организма/ А.В. Арутюнян, М.Г. Степанов, А.В. Кореневский, Г.О. Керкешко, Л.С. Козина //Сб. тез. докл. «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты». Научн. конф. 14-16 марта 2005 г., Москва. - 2005. - С. 77.

41. Харитонова Т.В. Характеристика показателей про- и антиоксидантных систем крови при старении / Т.В. Харитонова, Л.С. Козина // Тез. докл. «Геронтология: от кардиологии к социально-экономическим аспектам», Сыктывкар. - 2005. - С. 75.

42. Харитонова Т.В. Показатели про- и антиоксидантных систем крови при старении/ Т.В. Харитонова, Л.С. Козина// Матер. III научно-практической геронтологической конференции с международным участием, посвященная памяти Э.С. Пушковой (Пушковские чтения), 8-9 ноября 2007 г., С-Петербург. - 2007. - С. 135-136.

43. Arutjunyan А. V. In -vivo protection of the organism from oxidative stress by small natural regulatory peptides/A.V. Arutjunyan, A.A. Boldyrev, L.S. Kozina//Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. 2007. - Vol. 20, № 3 - P. 17.

44. Arutjunyan A. V. Geroprotective peptides of the pineal gland and antioxidative defence system/ A.V. Arutjunyan, L.S. Kozina, V.Kh. Khavinson// 4th Bologna International Meeting "Affective, behavioral and cognitive disorders in the elderly-ABCDE". Bologna, Italy. - 2006. - P. 68.

45. Chalisova N.I. Modulatory effect of amino acids on the liver tissue culture of young and old rats/

N. I. Chalisova, L.S. Kozina, V.V. Lesnyak// Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. - 2007. - Vol. 20, № 3 - P. 25.

46. Effect of synthetic regulatory peptides on expression of neprilysin in human neuroblastoma NB7 cells/N.N. Nalivaeva, , E.G. Kochkina, N. Makova, N.D. Belyaev, A.J. Terner L.S. Kozina,V.A. Arutyonov, A.V. Arutjunyan // Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. 2007. - Vol. 20, № 3 - P. 59.

47. Khavinson КАТг.Geroprotective peptides of the pineal gland and antioxidative protection system/ V.Kh. Khavinson, A.V. Arutjunyan, L.S. Kozina//Abstr. 18th World Congress of Gerontology,

Rio de Janeiro, Brazil, June 26-30,2005. - J. Gerontology. - P. 106.

48. Kozina L.S. Age dependent changes in lipid metabolism and thrombocytes intravascular aggregation in cardiovascular pathology development/L.S Kozina, T.V. Kharitonova, I.M. Kirichenko// Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans»

International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. -2007.-Vol. 20, №3,-P. 46.

49. Kozina L.S. The influence of geroprotective peptides on the phagocytic activity of leucocytes in hypokinesia/L.S. Kozina, A.V. Lysenko, A.V. Arutjunyan//Abstr. International Symposium "Interactuion of the nervous and immune systems in health and disease, May 31 - June 2, 2007. Saint-Petersburg. - 2007. - P. 38- 39.

50. Kozina L.S. The role of pineal gland peptides in regulation of free radical rocesses in aging/ L.S.Kozina, V.Kh. Khavinson, A.V. Arutjunyan //Abstr. of the 8th ECNP regional Meeting Moscow, Russia, April 14-16, 2005//European Neuropsychopharmacology - 2005- Vol. 15. Supplement 2. -2005. - S. 208-209.

51. Protective effect of the peptides vilon and epitalon against hypoxia induced changes in amiloid-degrading enzymes/ N.N. Nalivaeva, N. Makova, E.G. Kochkina, D. John, N.D. Belyaev, L.S. Kozina, A.V. Arutjunyan, A.J. Terner //Abstr. 21st Biennial Meeting of International Society for Neurochemistry and the 38th Annual Meeting of the American Society for Neurochemistry/ Cancun, Mexico, 19-24 August, 2007. J. Neurochemistry. - Vol. 102. Supplement 1. - 2007. -P. 134.

52. Study of the effects of regulatory peptides on expression of amyloid-degrading enzymes/ N.N. Nalivaeva, N.Z. Makova, L.R. Fisk, E.G. Kochkina, N.D. Belyaev, I.A. Zhuravin, L.S. Kozina, A.V. Arutjunyan, A.J. Terner// Abstr.4th International Peptide Symposium, 7th Australian Peptide Symposium, 2nd Asia-Pacific International Peptide Symposium "Discovery to Drugs: The Peptide Pipeline", 21-25 October, 2007, Caims, Queensland, Australia.- 2007. - P. 126.

53. The disturbance of free radical processes in rat brain during toluene and dioxane chronic inhalation/ Burmistrov S.O., Kerkesyko G.O., Stepanov M.G., Kozina L.S., Korenevsky A.V.// Abstr. International conference "Free radicals and antioxidants in the development and functions of the central nervous system: from fetus to aging». April 18-20, 2001. Saint-Petersburg, Russia. Adv. in Gerontology, 2001. - Vol. 6. -P. 45.

4. The effect of regulatory peptides on aging intensity in rats with different anxiety level/ A.V. Lysenko, E.V. Morgul, R.G. Sheykhova, T.A. Finochenko, L.S. Kozina//Abstr. VI European Congress «Healthy and active ageing for all Europeans» International association of gerontology and geriatrics, 5-8 July, 2007. Adv. in Gerontology. - 2007. - Vol. 20, Ks 3 - P. 53.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ, ИСПОЛЬЗУЕМЫХ В АВТОРЕФЕРАТЕ

ОАА - общая антиокислительная активность

АОП - антиоксидантный потенциал системы

АФК - активные формы кислорода

ГП - глутатионпероксидаза

ДК - диеновые конъюгаты

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ДФПГ - 1,1'-дифенил -2 - пикрилгидразил

ИДФ - инсулиндеградирующий фермент

МДА - малоновый диацетальдегид

мРНК - матричная рибонуклеиновая кислота

НЕП - неприлизин

ОМБ - окислительная модификация белков ПОЛ - перекисное окисление липидов СОД - супероксиддисмутаза СПА - суммарная пероксидазная активность СРО - свободнорадикальное окисление ТБК - тиобарбитуровая кислота

ТБК-АП - ТБК-активные продукты, то есть реагирующие с ТБК

ШО - Шиффовы основания

ХЛ - хемилюминесценция

ЭТЦ - электронтранспортная цепь

Н2О2 — перекись водорода

NAC - N-ацетилцистеин

NMDA - N-метил-В-аспартат

Козина Л.С. АНТИОКСИДАНТНОЕ ДЕЙСТВИЕ ГЕРОПРОТЕКТОРНЫХ ПЕПТИДНЫХ БИОРЕГУЛЯТОРОВ//Автореф. дне. ... докт. биол. наук: 14.00.53. - СПб., 2008. 45 с.

Подписано в печать 18.03.2009. Формат 60*84 1/16. Бумага офсетная. Печать офсетная. Печ. л. 1,0.

_Тираж 150 экз. Заказ 43 ._

Отпечатано с готового оригинал-макета. ЗАО «Принт-Экспресс» 197101, С.-Петербург, ул. Большая Монетная, 5 лит. А

Оглавление диссертации Козина, Людмила Семеновна :: 2009 :: Санкт-Петербург

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Биологическая активность геропротекторных пептидных 17 биорегуляторов

1.2. Современные представления о механизмах свободнорадикального 28 окисления и его роли в процессах старения

1.2.1 .Основные источники образования свободных радикалов при 30 старении

1.2.1.1. Митохондриальные источники

1.2.1.2. Немитохондриальные источники 37 1.2.2. Состояние антиоксидантных систем организма при старении

1.2.2.1. Ферментативное звено антиоксидантной защиты

1.2.2.2. Неферментативное звено антиоксидантной защиты

1.3. Воздействие стрессорных факторов на процессы свободно- 53 радикального окисления и антиоксидантную систему организма

1.4. Использование природных и синтетических антиоксидантов для 63 профилактики преждевременного старения и продления жизни

1.4.1. Синтетические антиоксиданты

1.4.2. Биоантиоксиданты

1.4.3. Комплексное применение антиоксидантов

Глава 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Экспериментальные животные и исследуемые препараты

2.2. Экспериментальные модели стрессовых воздействий 80 (гипокинезия, острая гипобарическая гипоксия)

2.3. Физиологические методы исследования

2.4. Биофизические и биохимические методы исследования1 82 2.4'. 1. Определение интенсивности перекисного окисления липидов

2.4.2. Исследование окислительной модификации белков

2.4.3. Исследование системы антиоксидантной защиты

2.4.4. Исследование состояния мембран эритроцитов и лейкоцитов

2.5. Молекулярно-биологические методы исследования

2.5.Г. Культура клеток мозжечка крыс 87 2.5.2. Клетки нейробластомы человека

2.6. Статистическая обработка результатов* исследования 91 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Глава 3. Возрастная динамика ряда показателей свободнорадикального 92 окисления и антиоксидантной системы

Глава 4. Влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы

4.1. Сравнительное исследование антиоксидантных свойств эффекты 99 эпиталона и кортагена

4.2. Влияние эпиталона на свободнорадикальные процессы у крыс при 104 старении

4.3. Воздействие коротких пептидов и мелатонина на интенсивность 108 свободнорадикальных процессов у мышей линии СВА

Глава 5. Влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в условиях действия экстремальных факторов гипокинезия, гипоксия)

Глава 6; Оценка антиоксидантной активности и мембранопротекторных свойств коротких пептидов в экспериментах in vitro

6.1. Исследование прямой антиоксидантной активности коротких 122 пептидов

6.2. Действие коротких пептидов на Бе -индуцированное окисление 125 липопротеинов крови

6.3. Влияние коротких пептидов на скорость кислотного и 127 осмотического гемолиза эритроцитов

6.4. Действие коротких пептидов на нейрональные клетки 132 мозжечка

Глава 7. Антигипоксические свойства коротких регуляторных пептидов

7.1. Влияние коротких пептидов на устойчивость крыс к воздействию 136 гипобарической гипоксии

7.2. Влияние коротких пептидов на состояние потомства 140 7.2.1 Действие пинеалона на поведенческие реакции крысят, перенесших 142 пренатальную гипоксию

7.2.2. Действие пинеалона на нейрональные клетки мозжечка потомства крыс, подвергнутых воздействию гипобарической гипоксии

Глава 8. Влияние коротких пептидов на клетки нейробластомы человека при гипоксии

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ

Введение диссертации по теме "Геронтология и гериатрия", Козина, Людмила Семеновна, автореферат

Актуальность проблемы

Свободнорадикальная теория старения, предложенная в 50-е г.г. прошлого столетия Д. Харманом [Harman D., 1956] и получившая дальнейшее развитие в многочисленных работах зарубежных и отечественных исследователей, к которым относятся в первую очередь Н.М.

Эмануэль и его школа [Эмануэль Н.М. и соавт., 1958], до настоящего времени считается одной из самых перспективных теорий, объясняющих механизмы старения и связанных с ним патологических процессов. , Известно, что процессы старения организма и формирования возрастной патологии обусловлены ростом молекулярных повреждений, вызываемых свободными радикалами, а также нарушением функции системы- антиоксидантной защиты организма: При этом наблюдается* дисбаланс показателей антиоксидантной и прооксидантной систем, I определяющий интенсивность патологических процессов. Оксидативные ■ реакции приводят к нарушению' регуляции клеточного гомеостаза, что I способствует развитию заболеваний или индуцирует процесс преждевременного старения [Зенков Н.К. и соавт.,2001; Хавинсон В.Х. и i \ соавт., 2003; Дубинина Е.Е., 2006]. В основе этих нарушений лежат процессы перекисного окисления липидов (ПОЛ), которые носят каскадный характер, окислительной модификации белков и ДНК.

Наряду с этим установлено, что одной из наиболее важных регуляторных функций эндогенных пептидов (глутатион, карнозин и его производные; некоторые нейропептиды) является ограничение чрезмерной активации свободнорадикальных процессов, прежде всего ПОЛ, и i !

I поддержание' способности системы антиоксидантной защиты противодействовать окислительному стрессу, развивающемуся в организме при патологических процессах, действии неблагоприятных факторов внешней среды и старении [Болдырев A.A., 1998; Хавинсон В.Х. и соавт.,

I i

2003; Лысенко A.B. и соавт., 2005]. Принимая во внимание разнообразие физиологических эффектов регуляторных пептидов, легко представить, что уменьшение их продукции может привести к нарушению механизмов пептидной регуляции и постепенному угасанию функций в стареющем организме.

В Санкт-Петербургском институте биорегуляции и геронтологии СЗО РАМН выделено г из тканей животных большое количество геропротекторных полипептидных препаратов, представляющих собой низкомолекулярные соединения пара- и аутокринной природы, выполняющие функции внутри- и межклеточных мессенджеров. Они, как и многие синтезированные на основе изучения, их аминокислотного состава короткие пептиды, принимают участие в переносе информации между группами клеток,, регулируют их активность и обладают полифункциональным действием в организме. Широкий спектр фармакологической-активности этих соединений связан с их влиянием на ряд наиболее общих механизмов, лежащих в основе разнообразных патологических процессов. Установлено, что они способствуют увеличению продолжительности жизни, тормозят развитие опухолей, обладают иммуномодулирующим действием и т.д. [Анисимов В.Н., 2003, 2008]. Существует представление о том, что соединения пептидной природы могут осуществлять свои функции на уровне межклеточного взаимодействия между геномом и структурно-функциональными элементами нейроиммуно-эндокринной регуляции [Акмаев И.Г., 1996, 1997; Хавинсон В.Х. и соавт., 2003, Пальцев М.А., Кветной И.М., 2008]. По-видимому, пептиды, обладающие антиоксидантной активностью, способны корректировать нарушения подобного < взаимодействия в условиях окислительного стресса, возникающего при старении вследствие развития различных патологических процессов (сердечно-сосудистые заболевания, нарушение мозгового кровообращения, злокачественный рост, нейродегенеративные болезни).

Механизмы действия регуляторных пептидов до настоящего времени объясняют с позиций существования пептидного каскада, сформулированных в гипотезе о функциональном континууме пептидов, [Ашмарин И:П., 1984, 1986; 1997; Ашмарин И.П., Каменская М.А., 1988; Ашмарин И.П., Каразеева Е.П. 1996; Ашмарин И:П., Королева С.В, 2003]. Каждый пептид имеет спектр биологической активности, определяемый, во-первых, его непосредственным действием и, во-вторых, его способностью индуцировать выход эндогенных регуляторов, в том числе и других регуляторных пептидов. В свою очередь, каждые из них также могут служить индукторами выхода, следующей группы пептидов- и т.д., благодаря чему формируется сложный каскадный процесс. Гипотеза о существовании- такой системы регуляции позволяет преодолеть серьезные противоречия,, возникающие при попытках объяснения относительно длительных физиологических эффектов короткоживущих пептидов. Другим механизмом действия регуляторных пептидов считается' их процессинг, в результате которого становится возможным в короткие сроки путем активации определенных протеолитических ферментов- образовывать в нужном месте необходимое количество требуемых пептидов [Ашмарин И.П., 1988; Гомазков O.A., 1995, 2006]. Образующиеся короткие фрагменты из 3-4 аминокислотных остатков, полностью лишенные гормональной активности, могут оказаться значительно более эффективными, чем исходные соединения.

Нормальная деятельность ферментных систем митохондрий выполняет важную роль в осуществлении физиологических функций клетки, работа которой во многом определяется состоянием проницаемости, пассивного и активного транспорта, а также стабильностью митохондриальных мембран [Скулачев В.П., 1997; 2007; Skulachev V.P., 2000; 2002; 2008]. Поэтому правомочно заключить, что даже незначительные структурные и функциональные сдвиги в митохондриальных мембранах, возникшие вследствие усиления процессов перекисного окисления, могут существенно нарушать функции клетки. Вместе с тем регуляторные пептиды, ингибируя кислородозависимые процессы, в мембране, способствуют сохранению ее целостности и обеспечивают нормальное функционирование клетки. В этой связи перспективной представляется гипотеза о вызываемой пептидными регуляторами длительной* модификации характера экспрессии генов, кодирующих белки митохондриальных мембран [Khavinson V. Kh. et al., 2002, 2007].

Пептидный компонент регуляции проявляется на всех уровнях функционирования организма [Гомазков O.A., 1995; 2006; Шерстнев В.В. и соавт, 1999]. Одним из наиболее важных механизмов реализации разнообразных эффектов биологически активных пептидов является их нормализующее влияние на интенсивность свободнорадикального окисления в органах и тканях, что, как правило, сопровождается усилением клеточного и гуморального иммунитета, улучшением коагулогических показателей, повышением нейрональной активности, оптимизацией когнитивных функций и т.д. [Лысенко A.B. и соавт., 2005]. Особое значение приобретает пептидная регуляция при коррекции нарушений, вызванных воздействием на организм стрессорных факторов, способствующих ускоренному старению.

В связи с этим можно» рассматривать пептидные биорегуляторы как перспективные фармакологические средства, способствующие замедлению возрастных и стресс-индуцированных изменений в организме.

Исходя из вышеизложенного; весьма актуальным представляется проведение экспериментального изучения влияния коротких пептидов как антиоксидантов на интенсивность свободнорадикальных процессов на клеточном уровне, а также в различных органах при воздействии стресса и при старении. Это позволит выявить и оценить антиоксидантные эффекты коротких пептидов и возможные механизмы их реализации, что представляет значительный научно-практический интерес.

Цель и задачи исследования

Целью исследования являлось изучение влияния на свободнорадикальные процессы ряда геропротекторных препаратов, разработанных на основе коротких пептидов (эпиталон, вилон, пинеалон и др.), и возможных механизмов их антиоксидантного действия.

В рамках указанной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить возрастную динамику основных' показателей СРО и системы антиоксидантной защиты в крови, мозге и печени крыс.

2. Исследовать влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели свободнорадикального окисления и антиоксидантной системы в сыворотке крови.и тканях крыс.

3. Изучить влияние геропротекторных пептидных препаратов на показатели свободнорадикального окисления и. антиоксидантной системы в условиях действия экстремальных факторов (гипоксия, гипокинезия).

• исследовать прямую антиоксидантную активность коротких пептидов;

• изучить действие коротких пептидов на нейрональные клетки мозжечка.

5. Изучить механизмы защитного действия пептидных биорегуляторов при гипоксии;

• исследовать влияние коротких пептидов на устойчивость крыс к воздействию гипобарической гипоксии;

• исследовать влияние пинеалона на поведенческие реакции крысят, перенесших пренатальную гипоксию;

• исследовать влияние коротких пептидов на клетки нейробластомы человека при гипоксическом воздействии.

Научная новизна работы

Установлено, что в печени и сыворотке крови крыс при старении снижается уровень генерации активных форм кислорода, что сопровождается значительным подавлением активности системы антиоксидантной защиты. При этом выявлено заметное повышение уровня содержания в белках карбонилпроизодных аминокислот, что свидетельствует об использовании активных форм кислорода в реакциях окислительной модификации белков.

Возрастная динамика свободнорадикального окисления в гомогенатах мозга аналогичных изменений не претерпевает, однако впервые выявлена интенсификация свободнорадикальных процессов в митохондриях, выделенных из ткани коры больших полушарий и гипоталамуса старых крыс (24 мес.) по сравнению с молодыми животными (3 мес.). Обобщены данные, полученные в отношении действия- коротких пептидов (эпиталон и его структурные аналоги, вилон и кортаген) на свободнорадикальные процессы и основные системы антиоксидантной защиты в крови, печени и мозге лабораторных животных (белые крысы линий ЛИО и Wistar, мыши линии СВА). Впервые'показано, что исследуемые пептидные препараты особенно-эффективны- как антиоксиданты при старении животных. Наиболее выраженные антиоксидантные свойства были выявлены у эпиталона. На примере эпиталона показано, что эффективность антиоксидантного действия пептидных биорегуляторов еще более возрастает при воздействии на организм экстремальных факторов (гипоксия, гипокинезия).

Приоритетными являются исследования, проведенные в области изучения антигипоксических свойств коротких пептидов. Выявлена способность пинеалона, а также эпиталона и вилона защищать нейроны мозжечка потомства крыс, подвергнутых гипоксическому воздействию, от окислительного стресса, индуцируемого перекисью водорода или лигандом NMDA-рецепторов глутамата М-метил-Б-аспартатом. Нейропротекторное действие коротких пептидов показано также в экспериментах с использованием клеток нейробластомы человека, культивируемых в условиях гипоксии. Установлено, что эпиталон и, отчасти, вилон проявляют антигипоксический эффект, препятствуя подавлению экспрессии металлопептидаз (неприлизина и инсулин-деградирущего фермента), участвующих в катаболизме р-амилоидного пептида, играющего исключительно важную роль в патогенезе весьма распространенной в пожилом и старческом возрасте болезни Альцгеймера.

Практическая ценность работы

Выявление антиоксидантной активности ряда коротких пептидов (эпиталон, вилон, кортаген, пинеалон и везуген) дает основание полагать, что она играет важную роль в механизмах геропротекторного действия этих биорегуляторов, поскольку ослабление мощности антиоксидантных систем организма является одной из ведущих причин развития возрастной патологии и преждевременного старения.

Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что ряд исследуемых коротких пептидов (пинеалон, везуген, эпиталон и вилон) обладают выраженными нейропротекторными свойствами, что проявляется в защите нервных клеток от окислительного стресса, развивающегося в результате гипоксического воздействия. Детальное изучение нейропротекторной роли указанных соединений создает предпосылки для разработки на их основе лекарственных средств для профилактики и терапии различных нейродегенеративных заболеваний, ассоциированных с возрастом. Особенно перспективны в этом отношении трипептиды пинеалон и везуген, которые могут быть использованы как биологические добавки к пище, способствующие улучшению качества жизни и активного долголетия человека.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Короткие пептиды (эпиталон, кортаген, вилон, пинеалон и везуген) обладают антиоксидантными свойствами в экспериментах in vivo и in vitro.

3. Короткие пептиды (эпиталон, вилон, везуген и, особенно, пинеалон). обладают антигипоксическим действием, что выражается-в повышении' устойчивости животных к гипобарической гипоксии.

Апробация работы

Материалы исследования доложены и обсуждены на международной конференции "Free radicals and antioxidants in the development and functions of the central nervous system: from fetus to aging» (Saint-Petersburg, 2001), международной научно-практической конференции «Медико-психологическая реабилитация: современное состояние и перспективы развития» (Санкт-Петербург, 2004), международном симпозиуме «Молекулярные механизмы, регуляции функции клетки» (Тюмень, 2005), Всероссийской конференции «Перспективы фундаментальной геронтологии»

Санкт-Петербург, 2005, 2006), IV национальном конгрессе геронтологов и гериатров Украины «Проблемы старения и долголетия» (Киев, 2005), 4-й, 5-й и 6-й национальных научно-практические конференциях с международным участием «Активные формы кислорода, оксид азота» (Смоленск, 2005, 2006, 2007), П и III Российском симпозиуме по химии и биологии пептидов (Санкт-Петербург, 2005, 2006), I Съезде физиологов СНГ (Сочи, Дагомыс, 2005), 4-й Российской конференции с международным участием «Гипоксия, механизмы, адаптация, коррекция» (Москва, 2005), научной конференции с международным участием «Нейрохимия: фундаментальные и прикладные аспекты» (Москва, 2005), региональных научных конференциях «Геронтология: от кардиологии к социально-экономическим аспектам» (Сыктывкар, 2005, 2006), Всероссийской научной конференции «Перспективные направления^ использования лабораторных приматов в медико-биологических целях» (Сочи-Адлер, 2006), международной научной конференции «Свободные радикалы, антиоксиданты и старение» (Астрахань, 2006), VII Всероссийской конференции с международным участием «Биоантиоксидант» (Москва, 2006), VII Международном симпозиуме «Биологические механизмы старения» (Харьков, Украина. 2006, 2007), научно-практической конференции, посвященной 20-летию первой в России кафедры гериатрии («Актуальные проблемы геронтологии и гериатрии», Санкт-Петербург, 2006), Ш и IV Всероссийских научно-практических конференциях "Общество, государство и медицина для пожилых и инвалидов" (Москва, 2006, 2007), Научно-практической конференции «Пожилой больной» (Москва, 2006), международной конференции 4th Bologna International Meeting "Affective, behavioral and cognitive disorders in the elderly-ABCDE"(Bologna, Italy, 2006), международной конференции «Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии» (Ялта-Гурзуф, Крым, Украина, 2007), II Международном конгрессе "Социальная адаптация, поддержка и здоровье пожилых людей в современном мире" (Санкт-Петербург, 2007), XIV Российском национальном Конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2007), III, IV научно-практических геронтологических конференциях с международным участием, посвященной памяти Э.С. Пушковой, "Пушковские чтения" (Санкт-Петербург, 2007, 2008), XII Международном симпозиуме «Эколого-физиологические проблемы адаптации» (Москва, 2007), Межрегиональной научно-практической конференции «Медицинские проблемы пожилых» (Йошкар-Ола),' III Российском симпозиуме «Белки и пептиды» (Пущино, 2007), II Международном конгрессе "Социальная адаптация; поддержка и здоровье пожилых людей в современном мире"' (Санкт-Петербург, 2007), П-м Санкт-Петербургском международном экологическом форуме (Санкт-Петербург, 2008), конференции с международным участием «Нейрохимические механизмы формирования адаптивных и патологических состояний мозга» (Санкт-Петербург-Колтуши,2008), Конгрессе «Экотоксины и здоровье» (Санкт-Петербург, 2008), а также международных форумах: International conference "Free radicals and1 antioxidants in the development and functions of the central nervous system: from fetus to aging» (Saint-Petersburg, 2001), 18th World Congress of Gerontology (Rio de Janeiro, Brazil, 2005), International Symposium «Interaction of the nervous and immune systems in health and disease» (Saint-Petersburg, 2007), 21st Biennial Meeting of International Society for Neurochemistry and the 38th Annual Meeting of the American Society for Neurochemistry (Cancun, Mexico, 2007), 4th International Peptide Symposium, 7th j

Australian Peptide Symposium, 2 Asia-Pacific International Peptide Symposium "Discovery to Drugs: The Peptide Pipeline" (Cairns, Queensland, Australia), VI European Congress International association of gerontology and geriatrics (Saint-Petersburg, 2007).

Заключение диссертационного исследования на тему "Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов"

ВЫВОДЫ

1. В сыворотке крови и печени старых крыс уровень генерации активных форм кислорода по сравнению с молодыми животными снижается, что сопровождается интенсификацией процесса окислительной модификации белков, некоторым увеличением образования продуктов ПОЛ и значительным ингибированием активности СОД. В мозге не выявлено существенных возрастных изменений показателей свободнорадикального окисления, за исключением снижения активности СОД.

5. При определении прямой антиоксидантной активности тестируемых соединений вилон и эпиталон не проявляют способности к взаимодействию со стабильным свободным радикалом 1,Г-дифенилпикрилгидразилом, что позволяет классифицировать их как соединения, не обладающие прямой антиоксидантной активностью.

7. Вилон, везуген, эпиталон и пинеалон примерно в равной степени оказывают мембраностабилизирущее влияние, подавляя осмотический гемолиз эритроцитов крысы и человека, хотя этот защитный эффект проявляется лишь при высоких (5 мМ) концентрациях пептидных препаратов, протекторная активность которых была приблизительно равноценной.

8. Вил он, везуген и пинеалон повышают стационарный уровень активных форм кислорода в изолированных гранулярных клетках мозжечка на 61155%, на этом фоне перекись водорода не только не вызывает роста внутриклеточного уровня АФК, но и приводит к понижению уровня радикалов в нейронах. При этом эти вещества, подобно карнозину, вызывают уменьшение доли мертвых клеток в популяции исследуемых нейронов. Эпиталон вызывал наибольшее увеличение уровня АФК в нейронах (до 666%), хотя не влиял на гибель нейронов.

11. Эпиталон и в меньшей степени вилон оказывают нейропротекторное действие, препятствуя снижению уровня экспрессии металлопептидаз неприлизина инсулиндеградирующего фермента в клетках нейробластомы человека N137 в условиях гипоксии. Это позволяет рассматривать исследуемые короткие пептиды в качестве перспективных нейропротекторных соединений, препятствующих накоплению (З-амилоида в нервных клетках.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Козина, Людмила Семеновна

1. Абрамова Ж. И., Оксенгендлер Г. И. Человек и противоокислительные вещества. Л.: Наука. — 1985. — 230 с.

2. Айрапетянц М. Г., Гуляева Н. В. Роль свободнорадикального окисления липидов в механизме адаптации // Вестник АМН СССР. 1988. — №11. -С. 49-55.

3. Акмаев КГ. Взаимодействие основных регулирующих систем (нервной, эндокринной и иммунной) и клиническая манифестация их нарушений// Клиническая медицина. 1997. - № 11. - С. 8 - 14.

4. Акмаев И. Г. Нейроэндокринология. Ее место в системе нейронаук // Вестник РАМН. 1993. -№ 7. - С. 55 - 59.

5. Акмаев И. Г. Современные представления о взаимодействии регулирующих систем: нервной, эндокринной и иммунной // Успехи фи-зиологич. наук 1996. -Т. 27, № 1. - С. 3-19.

6. Андреева Л. И., Хавинсон В. X. Рубомициновая кардиомиопатия у крыс и возможность терапии пептидным препаратом из сердца // Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 1993. - Т. 116, № 9. - С. 233 - 235.

7. Анисимов В. Н. Молекулярные и клеточные механизмы старения//В кн.: Молекулярные и физиологические механизмы старения (изд. 2-е, дополненное). СПб.: Наука. - 2008. - Т. 1. - С. 107 - 268.

8. Анисимов В. Н. Фармакологические средства, увеличивающие продолжительность жизни //В кн.: Молекулярные и физиологические механизмы старения (изд. 2-е, дополненное). СПб.: Наука. - 2008. - Т. 2. -С. 144 - 254.

9. Анисимов В.Н. Молекулярные и физиологические механизмы старения. СПб.: Наука. - 2003. - 468 с.

10. Анисимов В. Н. Эволюция концепций в геронтологии: достижения и перспективы // Успехи геронтологии. 1999. - Вып. 3. - С. 32 - 53.

11. Анисимов В. Н. Средства профилактики преждевременного старения (геропротекторы)//Успехи геронтологии. 2000. - Вып. 4. - С. 55 - 74.

12. Анисимов В. Н. Физиологические функции эпифиза (геронтологический аспект) // Российский физиол. журн. им. И.М.Сеченова. — 1998. — Т.83, №8. -С. 1 10.

13. Анисимов В.Н. Возрастные изменения функции эпифиза//В кн.: «Мелатонин в норме и патологии», М. 2004. - С. 20 - 33.

14. Анисимов В. Н., Арутюнян А. В., Хавинсон В. X. Влияние мелатонина и эпиталамина на активность системы антиоксидантной системыу крыс//Докл. РАН. 1997. -Т. 352.-С. 831-833.

15. Анисимов В. Н., Арутюнян А. В., Хавинсон В. X. Мелатонин и эпиталамин угнетают процесс перекисного окисления липидов у крыс//Докл. РАН. 1996. - Т. 348. - С. 765-767.

16. Анисимов В. Н., Мыльников С. В., Опарина Т. И., Хавинсон В. X. Влияние мелатонина и эпиталамина на продолжительность жизни и перекисное окисление липидов у Вгозоркйа те1апо§аз1ег1РАН. 1997. -Т. 352.-С. 704-707.

17. Анисимов В. Н., Хавинсон В. X., Морозов В. Г. Роль пептидов эпифиза в регуляции гомеостаза: 20-летний опыт исследования//Успехи соврем, биологии.-1993.-Т. 113, №6. -С. 752-762.

18. Анисимов В. Н., Хавинсон В. X., Морозов В. Г., Дилъман В. М. Снижение порога чувствительности гипоталамогипофизарной системы к действию эстрогенов под влиянием экстракта эпифиза у старых самок крыс // Докл. АН СССР. 1973.-Т. 213. -С. 483-486.

19. Арутюнян А. В., Дубинина Е. Е., Зыбина Н. Н. Методы оценки свободно-радикального окисления и антиоксидантной системы организма. Методические рекомендации. СПб.: ИКФ «Фолиант». 2000. - 104 с.

20. Арутюнян A.B., Козина JI.C. Механизмы свободнорадикального окисления и его роль в старении//Успехи геронтологии. 2009. - Т. 22.1.-С. 104-116.

21. Арутюнян A.B., Козина JI.C. Антиоксидантные свойства геропротекторных пептидных препаратов эпифиза и вилочковой железы//«Перспективы фундаментальной геронтологии», 25-26 ноября 2006 г., Санкт-Петербург. Тез. докл. Всеросс. конф.-СПб.-2006. С. 11-12.

22. Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды, происхождение и иерархия // Журн. эволюц. биохимии и физиологии. — 1982. Т. 18, № 1. - С. 3 - 10.

23. Ашмарин И.П. Перспективы практического применения и некоторые фундаментальные исследования малых регуляторных пептидов // Вопр. мед. химии. 1984. - Т. 30, вып. 3. - С. 2 - 7.

24. Ашмарин И.П. Регуляторные пептиды сильного и быстрого действия // Патол. физиология и эскперим. терапия. — 1988. Вып. 3. - С. 3 - 8.

25. Ашмарин И.П. Элементы патологической физиологии и биохимии.-Изд-во МГУ. 1997. - 238 с.

26. Ашмарин И.П., Обухова М. Ф. Регуляторные пептиды, функционально-непрерывная совокупность // Биохимия. 1986. - Т. 51, № 4. - С.531-545

27. Ашмарин И.П., Каменская М.А. Нейропептиды в синаптической передаче //Итоги науки и техники. ВИНИТИ, Сер. Физиология человека и животных.- 1989.-Т. 34 184 с.

28. Ашмарин И.П., Каразеева Е.П. Нейропептиды // В кн: Нейрохимия (под ред. Ашмарина И.П.). М. -1996. С. 78 - 96.

29. Биленко М.В. Ишемические и реперфузионные повреждения органов. М.: Медицина. - 1989. - 368 с.

30. Боголепов H.H. Ультраструктура мозга при гипоксии. М.: Медицина. -1979.-163 с.

31. Боголепов H.H. Ультраструктура межнейронных связей и некоторые механизмы пластичности мозга//в кн.: Методологические аспекты науки о мозге. -М.: Медицина.-1983.-С. 40 48.

32. Болдырев A.A. Роль свободных радикалов в функциональной активности нейронов (под ред. С.А. Дамбиновой и A.B. Арутюняна). Изд. СПбГУ. -2003. С. 301 - 317.

33. Болдырев А. А. Двойственная роль свободных радикалов кислорода в ишемическом мозге // Нейрохимия. 19956. - Т. 12, № 3. - С. 3 - 13.

34. Болдырев А. А. Парадоксы окислительного метаболизма мозга // Биохимия. -1995а. Т. 60, № 9. - С. 1536 -1542.

35. Болдырев А. А., Куклей М. П. Свободные радикалы в нормальном и ишемическом мозге // Нейрохимия. 1996. - Т. 13, № 4. - С. 271 - 278.

36. Болдырев А. А., Юнева М. О., Сорокина Е. В. и др., Антиоксидантные системы в тканях мышей линии SAM (Senescence Accelerated Mice), характеризующейся ускоренным процессом старения // Биохимия. 2001.-Т. 66, Вып. 10.-С. 1430- 1437.

37. Болдырев A.A. Дискриминация между апоптозом и некрозом нейронов под влиянием окислительного стресса// Биохимия. 2000 - Т.65. -С. 981 -990.

38. Болдырев A.A. Карнозин и защита тканей от окислительного стресса. М.: «Диалог-МГУ».- 1999. 362 с.

39. Болдырев A.A. Карнозин. Биологическое значение и возможности применения в медицине. М: Изд-во МГУ. -1998.- 320 с.

40. Болдырев A.A., Кяйвяряйнен Е.И., Илыоха В.И. Биомембранология. Петрозаводск. 2006. - 225 с.

41. Бречко В.В. Влияние гипокинезии на показатели антиоксидантной системы и свободно-радикального окисления у крыс//Патологич. физиол. и эксперимен. терапия. 1983. - №5. - С. 177 - 178.

42. Буреш Я., Бурешова О., Хьюстон Дж. Методики и основные эксперименты по изучению мозга и поведения. М., 1991. - 399 с.

43. Валъдман A.B., Александровский Ю.А. Психофармакотерапия невротических расстройств. М.: Медицина. - 1987. - 288 с.

44. Валъдман A.B., Воронина Т.А. Фармакология ноотропов. — М.: Медицина. 1989. - 140 с.

45. Вербицкий Е.В. Психофизиология тревожности. Ростов-на-Дону: Изд-во РГУ. - 2003. - 192 с.

46. Викторов И.В. Нейрохимические механизмы гипоксических/ ишемических повреждений нейронов. Роль возбуждающих аминокислот и свободных радикалов//Нурох1а Medical J. 1996. - № 2. - Р. 22-23.

47. Владимиров Ю. А., Азизова О. А., Деев А. И. и др., Свободные радикалы в живых системах//Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М.: ВИНИТИ. -1991.-Т. 29.-252 с.

48. Владимиров Ю. А., Шерстнев М. П. Хемилюминесценция клеток животных //Итоги науки и техники. Сер. Биофизика. М.: ВИНИТИ.-1989. -Т.24.-244 с.

49. Владимиров Ю. А., Шерстнев М. П., Азимбаев Т. К. Оценка антиокислительной и антирадикальной активности веществ и биологических объектов//Биофизика. 1992. - Т. 37. - С. 1041- 1047.

50. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы и антиоксиданты// Вест. РАМН. 1998. - № 7. - С. 43 - 50.

51. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биомембранах. М.: Наука. - 1972. — 252 с.

52. Внуков В.В. Железосодержащие белки и протеолитическая активность в сыворотке крови при гипероксии и защитном действии мочевины//Автореф. дис. канд. биол. наук. Харьков, 1978. - 26 с.

53. Воскресенский О. Н., Жутаев И. А., Бобырев В. Н., Безуглый Ю. В. Антиоксидантная система, онтогенез и старение // Вопр. мед. химии. 1982. -Т. 28, Вып. 1.-С. 14-17.

54. Газиев А. И., Ушакова Т. Е., Подлуцкий А. Я. и др. Диетические антиоксидан-ты увеличивают продолжительность жизни мышей, снижают частоту мута-ций и увеличивают экспрессию защитных генов//Успехи геронтологии. 1997. - Т. 1. - С. 80 - 84.

55. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с англ. Издательский дом «Практика». М. - 1999. - 459 с.

56. Гомазков O.A. Нейротрофическая регуляция и стволовые клетки мозга. М.: Икар.- 2006. -331 с.

57. Гомазков O.A. Физиологически активные пептиды: справочное руководство. -М.: ИПГМ. 1995. - 144 с.

58. Гончарова Н.Д., Хавинсон В.Х., Лапин Б.А. Пинеальная железа и возрастная патология (механизмы и коррекция). СПб.: Наука, - 2007. - 168 с.

59. Гончарова Н.Д., Хавинсон В.Х., Лапин Б.А. Регулирующее влияние эпиталона на продукцию мелатонина и кортизола у старых обезьян//Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2001. - Т. 131, № 4. - С. 466 - 468.

60. Гродзинский Д. М., Войтенко В. П., Кутлахмедов Ю. А., Колътовер В. К. Надежность и старение биологических систем. Киев: «Наукова думка». — 1987.- 172 с.

61. Гуляева Н.В., Лузина Н.Л., Левишна И.П., Крыэ/сановский Г.Н. Стадия ингибирования перекисного окисления липидов при стрессе//Бюлл. эксперим. биол. и мед.- 1988.- № 12.- С. 660 663.

62. Гуляева Н.В. Перекисное окисление липидов в мозге при адаптации к стрессу // Дис. докт. биол. наук. М., 1989. - 450 с.

63. Гуляева Н.В., Степаничев М.Ю. Биохимические корреляты индивидуально-типологических особенностей поведения крыс// Журн. высш. нерв. деят. 1997. - Т. 47. - №2. - С. 329 - 338.

64. Гусев В. А., Панченко Л. Ф. Современные концепции свободно-радикальной теории старения // Нейрохимия. 1997. - Т. 14, № 1. — С. 14-29.

65. Гусев В. А., Панченко Л. Ф. Супероксидный радикал и супероксиддисмутаза в свободнорадикальной теории старения // Вопр. мед. химии. 1982 - № 4. -С. 8 - 24.

66. Гусев В.А. Свободнорадикальная теория старения в парадигме геронтологии//Успехи геронтологии. -2000. Вып. 4.- С. 41-49.

67. Дубина Т.Л., Разумович А.Н. Введение в экспериментальную геронтологию. Минск: Наука и техника. 1975. — 168 с.

68. Дубинина Е. Е. Продукты метаболизма кислорода в функциональной активности клеток (жизнь и смерть, созидание и разрушение). Физиологические и клинико-биохимические аспекты. СПб.: «Медицинская пресса». - 2006. - 400 с.

69. Дятлов Р. В., Красовская И. Е., Ехвалова Т. В. и др. Сравнение антиоксидантных свойств мелатонина, эпиталамина и глютатиона методомлюминолзависимой хемилюминесценции in vitro // Докл. РАН. 1997. Т. 356. С. 129-131.

70. Егоров С. Н, Курелла Е. Г., Болдырев А. А. и др. Тушение синглетного молекулярного кислорода карнозином и анзерином в водных растворах // Биоорг. хим. 1992. Т. 18. С. 169 172.

71. Журавин H.A., Дубровская Н.М., Туманова H.JI. Постнатальное физиологическое развитие у крыс после острой пренатальной гипоксии//Росс. Физиол. журн. Им. И.М. Сеченова. 2003. —Т. 89 — С. 522 - 532.

72. Заморский Н.И., Пишак В.П. Влияние мелатонина на содержание циклических нуклеотидов на интенсивность ПОЛ в гиппокампе головного мозга крыс при острой гипоксии//Бюл. эксперим. биол. мед. — 2000 — Т. 136. №8.-С. 168-171.

73. Западнюк В. И. Гериатрическая фармакология. Киев: Здоров'я. 1977.-167 с.

74. Зенков Н.К., Панкин В.З., Менъщикова Е.Б. Окислительный стресс: биохимический и патофизиологический аспекты. М.: МАИК «Наука/Интерпериодика». - 2001. - 343 с.

75. Зенков Н.К., Менъщикова Е.Б., Вольский H.H., Козлов В. А. Внутриклеточный окислительный стресс и апоптоз// Успехи соврем, биол. -1999.-Т. 119, №5,- С. 440-449.

76. Кайдашев И. П. Использование полипептидного препарата почек в экспериментальной терапии // Регуляторные пептиды в норме и патологии (цитомедины): Сб. науч. работ / Под ред. Б.И. Кузника; Читан. Гос. Мед. Инт. Чита, 1991. С. 24-25.

77. Козина JI.C. Влияние биологически активных тетрапептидов на свободнорадикальные процессы//Бюлл. эксперим. биологии и медицины. -2007. Т. 143, № 6. - С. 690 - 692.

78. Козина JI.C. Арутюнян A.B., Стволинский С. JI., Хавинсон В. X. Исследование антигипоксических свойств коротких пептидов //Успехи геронтологии. 2008. - Т. 21, № 1. - С. 61 - 67.

79. Козина Л.С., Арутюнян A.B., Стволинский С.Л., Степанова М.С., Хавинсон В.Х. Регуляторные пептиды защищают нейроны мозга от гипоксии в экспериментах in vzW/Докл. акад. наук 2008 - Т. 418, №3. - С. 419-422.

80. Козина Л.С., Арутюнян A.B., Стволинский С.Л., Хавинсон В.Х. Оценка биологической активности регуляторных пептидов в модельных экспериментах in vitroll Успехи геронтологии. 2008а. - Т.21, № 1. -С. 68 - 73.

81. Колътовер В.К. Свободнорадикальная теория старения и антиоксид анты: ревизия//Тез. докл. XX съезда физиологического общества им. И.П. Павлова, 4-8 июня 2007 г., Москва. 2007. - С. 78.

82. Колътовер В. К. Надежность электронного транспорта в биологических системах и роль свободных радикалов кислорода в старении//Проблемы управления. 2004. - № 4. - С. 40-45.

83. Колътовер В. К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк // Успехи геронтологии. 2000. — Вып. 4. - С. 33 - 40.

84. Колътовер В. К. Свободнорадикальная теория старения: современное состояние и перспективы//Успехи геронтологии-1998 -Вып. 2.- С. 37- 42.

85. Колътовер В. К. Надежность митохондриальных электрон-транспортных мембран и роль супероксидных радикалов в старении // Хим. физика.-1996.-Т. 15.-С. 101-106.

86. Колътовер В. К Надежность электрон-транспортных мембран и роль анион-радикалов в старении: Дис. д-ра биол. наук. Киев 1988. - 351 с.

87. Колътовер В. К. Теория надежности, супероксидные радикалы и старение // Успехи соврем, биологии. 1983. - Т. 96, № 1 (4). - С. 85 - 100.

88. Колътовер В. К, Ноль X. В. Возрастные особенности генерирования супероксидных радикалов митохондриями сердца крыс//Проблемы старения и долголетия. Киев. 1992. - Т. 2. - С. 355 - 361.

89. Коркушко О.В., Хавинсон В.Х., Бутенко Г.М., Шатило В.Б. Пептидные препараты тимуса и эпифиза в профилактике ускоренного старения. — СПб.: «Наука». 2002. - 202 с.

90. Коркушко О. В., Хавинсон В. X, Шатило В. Б. Пинеальная железа: пути коррекции при старении // СПб.: Наука. 2006. - 204 с.

91. Коркушко О. В., Хавинсон В. X, Шатило В. Б., Магдич Л. В. Влияние пептидного препарата эпиталамина на суточный ритм мелатонин-образующей функции эпифиза у людей пожилого возраста // Бюлл. эксперим. биол. и медицины. 2004. - Т. 137, № 4. - С. 441- 443.

92. Коркушко О. В., Хавинсон В. X, Шатило В. Б., Магдич Л. В., Лабунец И. Ф. Суточные ритмы мелатонин образующей функции эпифиза у людей пожилого возраста // Успехи геронтологии. — 2004. Вып. 15.1. С. 70 75.

93. Королюк М.А., Иванова Л.И., Майорова И.Г., Токарев В.Е. Метод определения активности каталазы//Лаб. Дело. 1988. - №1. — С. 16 -19.

94. Кузник Б. И., Морозов В. Г., Хавинсон В. X. Цитомедины и их роль в регуляции физиологических функций // Успехи соврем, биологии. -1995. -Т. 115, № 3. — С. 353 -367.

95. Кузник Б. И., Морозов В. Г., Хавинсон В. X. Цитомедины: 25-летний опыт экспериментальных и клинических исследований. СПб.: Наука — 1998. -310 с.

96. Кулинский В. И. Активные формы кислорода и оксидативная модификация макромолекул: польза, вред и защита // Соросовский образовательный журнал. Биология. — 1999. — 120 с.

97. Кулинский В. И., Колесниченко Л. С. Обмен глутатиона//Успехи биол. химии. М.: Наука. 1990. - Т.31. - С. 157 - 179.

98. Лукьянова ЛД. Биоэнергетическая гипоксия: понятие, механизмы и способы коррекции// Бюл. эксперим. биологии и медицины.-1997.-Т. 124, №9. С. 244 - 254.

99. Лулинский В.И., Колесниченко Л.С. Биологическая роль глутатионаУ/Успехи соврем, биол. -1990.- Т.110. С.20-33.

100. Лысенко A.B., Арутюнян A.B., Козина Л.С. Пептидная регуляция адаптации организма к стрессорным воздействиям. СПб.: «Изд-во BMA». -2005.-208 с.

101. Лысенко A.B., Карантыш Г.В., Менджерицкий A.M. Участие моноаминов в изменении представленности основных форм поведения крыс разного возраста при гипокинезии // Нейрохимия 2001 - Т. 18, №2. -С. 132-141.

102. Малинин В.В. Механизмы действия синтетических пептидных тимомиметиков// Автореф. дисс. д.м.н. СПб. - 2001. - 35 с.

103. Махро A.B., Машкина А.П., Соленая O.A., Трунова О. А., Козина Л.С., Арутюнян A.B., Булыгина Е.Р. Пренатальная гипергомоцистеинемия как модель окислительного стресса мозга//Бюлл. эксперим. биологии и медицины. 2008. - Т. 146, № 7. - С. 37 - 39.

104. Меерсон Ф.З. Физиология адаптационных процессов. М.: Наука. -1986.-639 с.

105. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца. М.: Медицина. - 1984. - 272 с.

106. Меньшиков В.В., Делекторская Л.Н. Золотницкая Р.П. Лабораторные методы исследования-в клинике: справочник. М.: Медицина. - 1987. - 368с.

107. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К. Окислительный стресс при воспалении// Успехи современной биологии. 1997. - Т. 117.- С. 155-171.

108. Меньщикова Е.Б., Ланкин В.З., Зенков Н.К. и др. Окислительный стресс. Прооксиданты и антиоксиданты. — М.: Слово. 2006. - 556 с.

109. Меньщикова Е.Б., Зенков Н.К., Панкин В.З.,. и др. Окислительный стресс. Патологические состояния и заболевания. Новосибирск. Изд-во «Арта». - 2008. -281 с.

110. Микоян В. Д., Кубрина JI. Н., Манухина Е. Б. и др. Различия в стимуляции синтеза N0 при тепловом шоке у крыс генетически различных популяций // Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1996. Т. 121. № 6. С. 634637.

111. Мищенко В. П., Силенко Ю. И., Хавинсон В. X. и др. Влияние цито-медина пародонта на состояние перекисного окисления липидов и гемостаз при спонтанном пародонтите у крыс//Стоматология 1991. - № 5.- С. 12-14.

112. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Новый класс биологических регуляторов многоклеточных систем цитомедины // Успехи соврем, биологии. - 1983. -Т. 96, вып. З.-С. 339-352.

113. Морозов В. Г., Хавинсон В. X. Роль клеточных медиаторов (цитомединов) в регуляции генетической активности//Изв. АН СССР. Сер. биол.- 1985.-№4.-С. 581 -587.

114. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Пептидные биорегуляторы (25-летний опыт экспериментального и клинического изучения). СПб.: Наука. - 1996. -74 с.

115. Морозов В. Г., Хавинсон В. X. Пептидные биорегуляторы в профилактике и лечении возрастной патологии // Успехи геронтологии. -1997. -Вып.1. С. 74-79.

116. Морозов В.Г., Хавинсон В.Х. Малинин В.В. Пептидные тимомиметики. СПб.: Наука. - 2000. - 158 с.

117. Нагорнев В. А., Зота Е. Г. Цитокины, иммунное воспаление и атеросклероз // Успехи соврем, биологии.-1996.-Т. 16, вып. 3-С. 320 323.

118. Наливаева H.H. Роль гипоксии и ишемии мозга в метаболизме амилоидного пептида и патогенезе болезни Альцгеймера: Дис. д-ра биол. наук. С-Петербург. - 2006. - 187 с.

119. Наливаева H.H., Клементьев Б.И., Плеснева С.А. и др. Влияние гипоксии на состояние клеточных мембран правого и левого полушария мозга эмбрионов крыс//Журн. эвол. биохим. физиол. 1998. -Т. 34. -С. 485 -491.

120. Ноздрачев А.Д., Баженов Ю.И., Баранникова И.А., Батуев А.С.и др. Начала физиологии: Учеб. для вузов / под ред. акад. А.Д. Ноздрачева. -СПб.: Лань.- 2002. 1088 с.

121. Ноздрачев А.Д., Филиппова Л.В., Панасюк Н.В., Зубжицкая Л.Б., Арутюнян A.B. Интенсивность процессов свободно-радикального окисления и генерации оксида азота при воздействии антигенаУ/Докл. акад. наук. — 2001. -Т. 377.-№ 1.-С. 139-141.

122. Г. Обухова Л. К. Вклад академика Н.М. Эмануэля в развитие отечественной геронтологии: свободнорадикальные механизмы в процессе старения//Успехи геронтологии. 1999. - Вып. 3. - С. 27 - 31.

123. Обухова Л.К, Эмануэль Н.М. Роль свободнорадикальных реакций окисления в молекулярных механизмах старения живых организмов// Успехи химии. 1983. - Т. 52. - С. 353 - 372.

124. Осипов А. Н, Азизова О. А., Владимиров Ю. А. Активные формы кислорода и их роль в организме // Успехи биол. химии. М.: Наука. 1990. -Т. 31.-С. 180-208.

125. Павлов А.П., Ревина A.A., Дупин A.M. и др. Взаимодействие карнозина с супероксидными радикалами в водных растворах// Бюл. эксп. Биол. мед. -1990. Т. 110, № 10. - С. 391 - 393.

126. Пальцев М.М., Кветной KM. Руководство по нейроиммуноэндокринологии. 2-е изд. М.: ОАО Издательство «Медицина».- 2008. - 512 с.

127. Погосян Г.Г., Налбандян P.M. Ингибирование липидной пероксидации супероксиддисмутазой и церулоплазмином// Биохимия. 1983. — Т. 48, Вып. 7. -С. 1129- 1134.

128. Попов И.П. Влияние цитохрома С на активность ферментов лизосом в печени крыс при гипобарической оксигенации //Укр. биохим. журнал.-1981.-53, N5. -С.103 -106.

129. Рыжак Г.А., Коновалов С. С. Геропротекторы в профилактике возрастной патологии. — СПб.: «Прайм-ЕВРОЗНАК». 2004. - 160 с.

130. Рыжак Г.А., Малинин В.В., Платонова Т.Н. Кортексин и регуляция функций головного мозга. — СПб.: ИКФ «Фолиант». 2003. — 200 с.

131. Скулачев В. П. Нефосфорилирующее дыхание как механизм, предотвращающий образование активных форм кислорода // Мол. биология. 1995. Т. 29, № 6. - С. 1199 - 1209.

132. Скулачев В. П. О биохимических механизмах эволюции и роли кислорода//Биохимия. 1998.-Т. 63, № 11.- С. 1570- 1579.

133. Скулачев В. П. Старение организма особая биологическая функция, а не результат поломки сложной живой системы: биохимическое обоснование концепции Вейсмана // Биохимия. - 1997. Т. 62, № 11. — С. 1369 - 1399.

134. Скулачев В. П. Феноптоз: запрограммированная смерть организма// Биохимия. 1999. -Т. 64, № 12. - С. 1679 - 1688.

135. Скулачев В. П. Явления запрограммированной смерти. Митохондрии, клетки и органы: роль активных форм кислорода// Сорос, образоват. журн. -2001.-Т. 7, №6.-С. 4-10.

136. Скулачев В. П. Попытка биохимиков атаковать проблему старения: «мегапроект» по проникающим ионам. Первые итоги и перспективы// Биохимия.-2007.-Т. 72., № 12.-С. 1700-1714.

137. Соколовский В. В. Антиоксиданты в профилактике и терапии заболеваний // Международные медицинские обзоры. 1993. - № 1. — С. 11-14.

138. Соколовский В. В. Окислительно-восстановительные процессы в биохимическом механизме неспецифической реакции организма на действие экстремальных факторов // Антиоксиданты и адаптация. JL: ЛСГМИ. -1984.- С. 5-19.

139. Соколовский В. В. Тиоловые антиоксиданты в молекулярных механизмах неспецифических реакций организма на экстремальные воздействия // Вопросы мед. химии. 1988. - № 6. - С. 2 - 11.

140. Соловьева A.C., Блюхтерова Н.В., Жижина Г.Л., Обухова Л.К. Влияние ß-каротина и коэнзима Qjo на продолжительность жизни и эндогенное окисление ДНК при радиационном и физиологическом старении мышей// Цитология. 1999. - Т. 41. - С. 790.

141. Соловьева Д.В., Хавинсон В.Х. Применение тималина и эпиталамина для коррекции возрастных нарушений гомеостаза у женщин/ЛОшнич. геронтология. 2000. - Т. 6, № 7-8. - С. 106.

142. Тюлина О.В., Стволииский С.Л., Каган В.Е., Болдырев A.A. Влияние карнозина и его природных производных на хемилюминисценцию лейкоцитов, активированных BaS04// Нейрохимия. 1995. — Т. 12, №. 1. -С. 46-51.

143. Уайт А., Хендлер Ф., Смит Э. Основы биохимии. М.: Мир. 1981. — Т. 1. -532 с.

144. Федоров И.В. О динамике изменений белкового обмена у крыс в течение длительной гипокинезии // Косм. биол. и мед. — 1970. № 3. — С. 18-21.

145. Федоров И.В. Обмен веществ при гиподинамии. М.:-1982. 276 с.

146. Федорова Т. Н., Реброва О.Ю., Ларский Э.Г. Микромодификация метода определения активности процессов свободнорадикального окисления// Лаб. Дело. -1991- № 3. С. 37 - 39.

147. Федорова Т. Н., Маклецова М. Г., Куликов А. В., Степанова М. С., Болдырев А.А. Карнозин защищает от окислительного стресса, вызванного пренатальной гипоксией// Докл. Росс. акад. наук 2006. - Т. 48. -С.132-135.

148. Формазюк В. Е., Горшкова Т. Ю., Болдырев А. А. и др. Характеристика хлораминовых комплексов карнозина с гипохлорит-анионом//Биохимия. -1992.-Т. 57, №9.-С. 1324- 1329.

149. Фролъкис В. В. Старение и увеличение продолжительности жизни. Л.: Наука.- 1988. -239 с.

150. Фролъкис В. В., Мурадян X. К. Экспериментальные пути продления жизни. Л: Наука. 1988. - 248 с.

151. Хавинсон В.Х. Увеличение продолжительности жизни с помощью пептидных биорегуляторов. // Клинич. геронтология. 2000. - Т. 6, № 7-8. -С. 107.

152. Хавинсон В.Х. Пептидная регуляция старения. // Вестн. РАМН. 2001. -№ 12.-С. 16-20.

153. Хавинсон В.Х., Анисимов В.Н. Пептидные биорегуляторы и старение -СПб.: «Наука». 2003. -223 с.

154. Хавинсон В. X., Аъимарин И. П., Малинин В. В. Возрастная динамика регуляторных пептидов // Наука долголетия. 2001. - № 1. - С. 18 - 22.

155. Хаеинсон BX., Баринов В. А., Арутюнян A.B., Малинин В.В. Свободнорадикальное окисление и старение. СПб.: «Наука». -2003.-327 с.

156. Хаеинсон В. X, Голубев А. Г. Старение эпифиза // Успехи геронтологии.- 2002. Вып. 9. - С. 67 -72.

157. Хаеинсон В.Х., Кветной И.М: Пептидные биорегуляторы ингибируют апоптоз// Бюлл. эксперим. биол. и мед. 2000.- Т. 130, №12.- С. 657 - 659.

158. Хаеинсон В.Х., Кветной ИМ., Южаков В.В., Попучиев В.В., Коновалов С.С. Пептидная регуляция гомеостаза- СПб.: «Наука». 2003. - 194 с.

159. Хаеинсон В.Х., Лежава Т.А, Малинин В.В. Влияние коротких пептидов на хроматин в лимфоцитах лиц старческого возраста // Бюлл. эксперим. биол. мед.-2004.-Т. 137, № 1.-С. 89-93.

160. Хаеинсон В.Х., Малинин В.В. Механизмы геропротекторного действия пептидов//Бюлл. эксперим. биол. мед. 2002. - Т. 133, № 1.-С.4-10.

161. Хаеинсон В. X., Морозов В. Г. Применение пептидов тимуса в качестве геропротекторных средств // Пробл. старения и долголетия. -1991. — Т. 1, № 2. С. 123 - 128.

162. Хаеинсон В.Х., Морозов В.Г. Препараты эпифиза и тимуса в геронтологии. — СПб. 1992. - 50 с.

163. Хаеинсон В.Х., Морозов В.Г. Пептидная регуляция гомеостаза при старении // Успехи геронтол. 2000а. - Вып. 4. - С. 75-79.

164. Хаеинсон В.Х., Морозов В.Г. Результаты и перспективы применения пептидных биорегуляторов в геронтологии // Клинич. медицина. 2000. — №8.-С. 81-84.

165. Хаеинсон B.X., Морозов В.Г. Пептиды эпифиза и тимуса в,регуляции старения // СПб.: Фолиант. 2001. - 160 с.

166. Хаеинсон ВХ, Морозов В.Г. Геропротекторная эффективность тималина и эпиталамина // Успехи геронтол. 2002. - Вып. 10. - С. 74 - 84.

167. Хаеинсон ВХ., Морозов В.Г., Анисгшов В.Н. Влияние эпиталамина на свободнорадикальные процессы у человека и животных//Успехи геронтологии. 1999. - №3. - С. 133 -142.

168. Хаеинсон В. X., Морозов В. Г., Соловьева Д. В., Малинин В. В. Применение эпиталамина для профилактики и лечения генетически детерминированной возрастной патологии //Успехи геронтологии. 1998. -Вып. 2.-С. 103 -106.

169. Хаеинсон В.Х., Мыльников C.B., Опарина Т.И., Арутюнян A.B. Влияние пептидов на генерацию активных форм кислорода в субклеточных фракциях Drosophyla melanogasterll Бюлл. эксперим. биол. мед. — 2001 — Т. 132, №7. — С. 84-87.

170. Хаеинсон В. X., Мыльников С. В. Влияние тетрапетида эпифиза насостояние антиоксидантной защиты у Drosophila melanogaster II Бюл.эксперим. биол. и мед. 2000а. - Т. 129, № 4. - С. 420 - 422.

171. Хаеинсон В.Х., Мыльников C.B. Влияние эпиталона на возрастнуюдинамику ПОЛ у Drosophila melanogaster // Бюл. экспер. биол. и мед. -20006. -№11. С. 585 - 588.

172. Хаеинсон В.Х., Яковлева H Д., Попучиев В.В. и др. Репаративное действие эпиталона на ультраструктуру пинеальной железы гамма-облученных крыс// Бюл. экспер биол и медицины. 2001. - Т. 131, № 1. -С. 98 - 104.

173. Хачатурьян M.JT., Гукасов В.М., Комаров П.Г. и др. Показатели перекисного окисления липидов органов крыс с различной устойчивостью к гипоксии//Бюл. эксперим. биологии и медицины. 1996. - Т. 121, №1. -С. 26 - 29.

174. Черкес JI. А., Аптекарь С. Г., Волгарев М. Н. Опухоли печени, вызванные селеном//Бюл. эксперим. биол. и медицины. —1962 — Т. 3, № 3. -С. 78- 83.

175. Шахламов В А., Сороковой В.И. Реакция клеток на гипоксию//Архив анат., гистол., эмбриол. -1983. 85. -N7. - С.12 - 25.

176. Шерстнев В.В., Сторожева З.И., Груденъ М.А., Прошин А.Т. Участие нейротрофических факторов в центральных механизмах поведения у взрослых животных// Рос. физиол. журнал им. И.М. Сеченова. Т. 85, Вып. 1.- 1999.- С. 21 -28.

177. Шестаков В. А., Бойчевская Р.С., Шерстнев М.П. Хемилюминесценция плазмы крови в присутствии перекиси водорода// Вопр. мед. химии. 1972. -№2. - С. 132 - 137.

178. Эмануэль Н. М. Антиоксиданты в пролонгировании жизни//Биология старения. Л.: Наука. 1982. - С. 569 - 585.

179. Эмануэль Н. М. Некоторые молекулярные механизмы и перспективы профилактики старения// Изв. АН СССР, сер. биол.-1975. № 4-С. 785 - 794.

180. Юнева М.О., Гусева Н.В., Болдырев А.А. Линия мышей SAM как модель процесса старения, вызываемого активными формами кислорода//Успехи геронтологии. 2000. - Вып. 4. - С. 147 - 152.

181. Abiaka С., Al-Awadi F., Al-Sayer Н. et al. Serum antioxidant and cholesterol level in patients with different types of cancer//J. Clin. Lab. Anal. -2001.-V. 295.-P. 230-234.

182. Agrawal A.K., Shapiro B.H. Constitutive and inducible hepatic cytochrome P450 in senescent male and female rats and response on low dose Phenobarbital// Drug Metabolism Dispos. 2003. - V.31. - P. 612 - 619.

183. Agarwal S., Sohal R. S. Aging and proteolysis of oxidized protein // Arch. Biochem. Biophys. 1994. -V. 309. - P. 24 - 28.

184. Agarwal S., Sohal R. S. Relationship between aging and susceptibility to protein oxidative damage //Biochem. Biophys. Res. Commun. 1993. -V. 194-P. 1203 - 1206.

185. Akerboom Т., Jartner M., Sies H. Cellular hydroperoxide metabolism: the roles of glutathione peroxidases and catalase in liver // Bull. Eur. Physiopathol. Respirat. 1981.-V. 17 (Suppl.). - P. 221 - 227.

186. Allegra M., Reiter R.J., Tan D.X., Tesoriere L., Livrea M.A. The chemistry of melatonin interaction with reactive species// J. Pineal Res. 2003. - V. 34. -P. 1 - 10.

187. Allen R.G., Tresini M. Oxidative stress and gene regulation// Free radic. Biol. Med. 2000. - V. 28. - P. 463 - 499.

188. Allen R. G., Tresini M. Oxidative Stress and Gene Regulation // Free Radic. Biol. Med. 2000. - V. 28. - P. 463 - 499.

189. Ames В., Catheart R., Hochsteun E. Uric acid provides an antioxidant defence in humans against oxidant and radical-caused aging and cancer // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. -1981.-V. 78. P. 6858 - 6862.

190. Ames B.N., Shigenaga M.K., Hagen T.M. Mitochondrial decay in aging. Biochem. Biophys. Acta. 1995. -V. 1271. - P. 165 - 170.

191. Anisimov V. N. Carcinogenesis and Aging. Vol. 1 & 2. Boca Raton: CRC Press, 1987. 165 p; 148 p.

192. Anisimov V. N. Premature ageing prevention: limitations and perspectives of pharmacological interventions/ Current Drug Res.-2006. -V. 7. P. 1485 - 1504.

193. Anisimov V. N., Arutjunyan A. V., Khavinson V. Kh. Effects of pineal gland preparation Epihalamin on free-radical processes in humans and animals // Neuroendocrinol. Lett. 2001. - V. 22. - P. 9 - 18.

194. Anisimov V.N., Khavinson V.K., Mirhalski A.I., Yashin A.I. Effect of synthetic thymic and pineal peptides on biomarkers of ageing, survival and spontaneous tumour incidence in female CBA mice// Mech. Ageing Dev. 2001a. -V. 122.-P. 41 -68.

195. Anisimov V.N., Popovich I.G., Zabezhinski M.A. et al. Melatonin as antioxidant, geroprotector and anticarcinogen// Biochim. Biophys. Acta. 2006. -V. 1757.-P. 573 -589.

196. Araki N.N., Ueno В., Chakrabarti Y. et al. Immunochmical evidence for the presence of advanced glycation end products in human lens proteins and its positive con-elation with aging//J. Biol. Chem. -1992.-V.267.-P.10211- 10214.

197. Aruoma О. I. Free radicals and foods // Chem. Br. 1993. V. 29. -P. 210-214.

198. Aruoma О. I. Free radicals, oxidative stress, and antioxidants in human health and disease // JAOCS. 1998. - V. 75, N 2. - P. 199 - 212.

199. Atanasiu R.L, Stea D., Mateescu M.A., Vergely C.et al. Direct evidence of caeruloplasmin antioxidant properties// Mol Cell Biochem 1998. - V.189. -P. 127- 135.

200. Babich H. Butylated hydroxytoluene (BHT): a review // Environm. Res. -1982.-V. 29. -P. 1-29.

201. Barja G. Mitochondrial free radical production and aging in mammals and birds. Ann. NY Acad. Sci. 1998. - V. 854. - P. 224 - 238.

202. Barja G., Cadenas S., Rojas C., Lopez-Torres M., Perez-Campo R. A decrease of free radical production near critical targets as a cause of maximumlongevity in animals//Comp. Biochem. Phisiol. Mol. Biol. -1994. — V. 108. -P. 501-512.

203. Barja G. Free radicals and' aging//Trends in Neurosciences.-2004.-V. 27. -P. 595 600.

204. Barja G. Mitochondrial oxygen consumption and reactive oxygen species production are independently modulated: implications for aging studies// Rejuvenation Res. 2007. - V. 10. - P. 215 - 223.

205. Bastianetto S.,Yao Z.-X., Papadopoulos V., Quiron R. Neuroprotective effects of green and black teas and their catechin gallate esters against P-amiloid-induced toxicity// Eur. J. Neurochem. 2006. - V. 23. - P: 55 - 64.

206. Bates T. E., Loesch A., Burnstock G., Clark J. B. Mitochondrial nitric oxide synthase: ubiquitors regulator of oxidative phosphorylation? // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1996. - V. 218. - P. 40 - 44.

207. Bayadas G., Kutlu S., Naziroglu M. et al. Inhibitiory effects of melatonin on neural lipid peroxidation induced by intracerebroventriculary administred homocysteine// J. Pineal. Res. 2003 - V. 34. - P. 36 - 39.

208. Bayadas G., Ozer M., Yasar A. et al. Melatonin improves learning and memory performances impaired by hyperhomocysteinemia in rats//Brain Res. -2005.-V. 1046.-P. 187- 194.

209. Bayadas G., Ozer M., Yasar A. et al. Melatonin prevents oxidative stress and inhibits reactive gliosis induced by hyperhomocysteinemia in rats// Biochemistry (Mosc.) 2006. V. 71. P. 91- 95.

210. Bayadas G., Koz S.T., Tuzcu M. et al. Effects of maternal hyperhomocysteinemia induced by high methionine diet on the learning and memory performance in offspring// Int. J. Devi Neurosci. 2007. - V. 25. -P. 133 - 139.

211. Bayadas G., Koz S.T., Tuzcu M. et al. Melatonin prevents gestational hyperhomocysteinemia-associated alterations in neurobehavioral developments in rats//J. Pineal Res. -2008. -V. 44. P. 181 - 188.

212. Bauer M, Hamrn A.C., Bonaus M., Jacob A., Jaekel J., Shorie H. et al. Starvation response in mouse liver shows strong correlation with life span-prolonging processes// Physiol. Genomics. 2004. -V.17. - P. 230 - 244.

213. Beckman K.B., Ames B.N. The free radical theory of aging matures // Physiol. Rev. 1998. -V. 78. - P. 547 - 581.

214. Berger M.M. Can oxidative damage be treated nutritionally?// Clin. Nutr — 2005.-V. 24. P. 173 - 183.

215. Bielsky B. Chemistry of ascorbic acid radicals//Adv. Chem. Ser. 1982. -V. 200.-P. 81 - 100.

216. Bierbaum T., Bouma S., Huestis W. A mechanism of erythrocyte lysis by lysophosphatidylcholine/ZBiochim. Biophys. Acta. 1979. - V. 555, N 1. -P. 102-110.

217. Bjelakovic G., Nikolava D., Gluud L.L. et al. Mortality in randomized trials of antioxidant supplements for primary and secondary prevention: systematic review and meta-analysis// J. Amer. Med. Assoc.-2007.-V. 297.-P. 842-857.

218. Blackett A. D., Hall D. A. The effects of vitamin E on mouse fit ness and survival // Gerontology.-198l.-V. 27. P. 133 - 139.

219. Bielsky B., Arudi R., Sutherland M. A study of the reactivity of H02/0*2 with unsaturated fatty acids // J. Biol. Chem. 1983. - V. 258. - P. 4759-4761.

220. Bliznakov E. G. Immunological senescence in mice and its reversal by coenzyme Q10 // Mech. Ageing Dev. 1978. - V. 7. - P. 189 - 197.

221. Boldyrev A.A., Stvolinsky S.L., Tyulina O.V. et al. Biochemical and physiological evidence that carnosine is an endogenous neuroprotector against free radicals// Cell. Molec. Neurobiol. 1997. - V. 17. - 259 - 271.

222. Boldyrev A.A., Song R., Dyatlov V.A. Neuronal cell death and reactive oxygen species// Cell. Mol. Neurobiol. 2000. - V. 20. - P. 433' - 450.

223. Borras C., Sastre J., Garcia-Sala D., Lloret A., Pallardo F. V., Vina J. Mitochondria from females exhibit higher antioxidant gene expression and loweroxidative damage than males// Free Radic. Biol. Med. — 2003. -V. 34. -P. 546 552.

224. Boveris A., Costa L.E., Cadenas E., Poderoso J.J. Regulation of mitochondrial respiration by ADP, oxygen, and nitric oxide// Methods Enzymol. 1999.-V. 301.-P. 188- 198.

225. Bronwen M., Mattson M.P., Maudsley S. Caloric restriction and intermittent fasting: Two potential diets for successful brain aging//Ageing Res. Reviews. -2006. -V.5.-P. 332-353.

226. Buard A., Clement M. ,Bourre J.M. et al. Developmental changes in enzymatic systems involved in protection against peroxidation in isolated rat brain microvessels //Neurosci. Lett. 1992 - V. 141. - P. 72 - 74.

227. Caccamo A., Oddo S., Sugarman M.C., Akbari Y., LaFerda F.M. Age-and region-dependent alterations in A|3 -degrading enzymes: implications for A0-induced disorders//Neurobiol. Aging. -2005. -V. 26. P. 645 - 654.

228. Cadenas E., Davies K.J.A. Mitochondrial free readical generation, oxidative stress, and aging// Free Rad. Biol. Med. 2000. - V. 29, N 3 - 4. - P. 222 - 230.

229. Cadet J.L., Brannock C. Free radicals and the pathobiology of brain dopamine systems//Neurochem. Int. 1998.-V. 32, N2. - P. 117 - 131.

230. Carillo M.C., Kanai S., Sato Y, KitaniK. Age-related changes in antioxidant enzyme activities are region and organ, as well as sex, selective in rats// Mech. Ageing Dev.-1992. V. 65.-P. 187- 198.

231. Carlsson L.M., Jonsson J., Edlund T., Marklund S.L. Mice lacking extracellular superoxide dismutase are more sensitive to hyperoxia//Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. - V. 92. - P. 6264 - 6268.

232. Carson J. A, Turner A.J. P-amyloid catabolism: role for neprilysin (NEP) and other metallopeptidases? // J. Neurochem. -2002. V. 81. - P. 1 - 8.

233. Carr D.J., BlalockJ.E. A molecular basis for intersystem communication between the immune and neuroendocrine systems // Int. Rev. Immunol. 1989. -V.4. -N 3. -P. 213 - 228.

234. Carrillo M.C.,Kanai S., Sato Y., Kitani K. Age-related changes in antioxidant enzyme activities are region and organ, as well as sex, selective in the rat// Mech. Ageing Dev. -1992. V. 65. - P. 187 - 198.

235. Charlton C., Crowell B. Striatal dopamine depletion, tremors, and hyfollowing the intracranial injection of S-adenosylmethionine: a possible role of hypermethylation in Parkinsonism // Mol. Chem. Neuropathol. -1995. V.26. -N3.-P. 269-284.

236. Chan P. H. Role of oxidants in ischemic brain damage // Stroke. 1996. -V. 27. -P. 1124- 1129.

237. Chvapic M. Endogenous antioxidants and rate of malondialdegyde formation in central nervous system//Exp. neurol. 1982. - V. 78. - P. 765 - 774.

238. Chen R., Espey M.G., Sun A.Y et al. Ascorbate in pharmacologic concentrations selectively generates ascorbate radical and hydrogen peroxide in extracellular fluid in vivo// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 2007. - V. 104. -P. 8749 - 8754.

239. Cengiz M., Seven M., Suyugul N. Antioxidant system in Down syndrome: a possible role in cataractogenesis//Genet. Couns. 2002. - Vol. 13. -P. 339 - 342.

240. Clapp N. K., Satterfield L. C., Bowles N. D. Effects of the antioxidant butylated hydroxytoluene (BHT) on mortality in BALB/c mice // J. Geront. 1979. V. 34. P. 497-501.

241. Colaco C.A.L.S., Harrington C.R. Inhibitors of the Maillard reaction. Potential in the treatment of Alzheimer's disease//CNS drugs-1996. -V. 6. — P. 167- 177.

242. Comfort A., Youhotsky-Gore I., Pathmanathan K. Effect of ethoxyquin on the longevity of C3H mice// Nature (London). 1971. - V. 229. - P. 254 - 255.

243. Cotgreave S., Moldeus P., Orrenius S. Host biochemical defense mechanisms against prooxidants//Ann. Rev. Pharmacol. Toxicol. 1988. - V. 28. -P. 189-212.

244. Cui P., Luo Z., Zhang H. et al. Effect and mechanism of melatonin's action on the proliferation of human umbilical vein endothelial cells// J. Pineal. Res. -2006.-V. 41. -P. 358-362.

245. Cutler R. G. Oxidative stress: its potential relevance to human disease and longevity determinants // Age. 1995. - V. 18. - P. 91 - 96.

246. Cutler R.G. Oxidative stress and aging: catalase is a longevity determinant enzyme // Rejuvenation. Res. 2005. - V. 8. - P. 138 - 140.

247. Cutler R.G. Genetic stability and oxidative stress: Common mechanisms in aging and cancer// Free Radical and Aging. Basel: Birkhauser Verlag. - 1992. — P. 31-46.

248. Cutler R. G. Human longevity and aging: possible role of reactive oxygen species//Ann.N.Y. Acad. Sci. -1991.-V. 621.-P. 1-28.

249. Cutler R. G. Evolutionary biology of aging and longevity in mammalian species // Aging and cell function / Ed. J.E Johnson. N.Y., L.: Plenum press. -1984.-P. 1 147.

250. Das S., Ray R., Snehlata L. et al. Effect of ascorbic acid on prevention of hypercholesterolemia induced atherosclerosis // Mol. Cell. Biochem. 2006. -V. 285.-P. 143 - 147.

251. Darr D., Fridovich I. Adaptation to oxidative stress in young, but not in mature or old Caenorhabditis elegans // Free Radical Biol. Med. 1995 - V. 18-P. 195 -201.

252. Davies K.J.A. Oxidative stress: the paradox of aerobic life// Biochem. Soc. Symp. 1995. — V. 61. - P. 1-31.

253. De Coursey T.E., Ligeti E. Regulation and termination of NADPH oxidase activity//Cell. Mol. Life Sci.-2005. -V.62. -P. 2173 2193.

254. De Magalhaes J.P., Church G.M. Cells discover fire: employing reactive oxygen species in development and consequences for aging // Exp. Gerontol. -2006.-V. 41.-P. 1-10.

255. Dehaan J.B., Chstiano F., Lanello R.C., Kola I. Cu/Zn-superoxide dismutase and glutathione peroxidase during aging // Biochem. Mol. Biol. Inter. 1995. -V. 35.-P. 1281 - 1297.

256. Del Rio L.A., Sandalino L.M., Palma J.M. A new cellular function for peroxisomes related to oxygen free radicals? // Experientia (Basel) — 1990. — V. 46.-P. 989 992.

257. Descamps O., Riondel J., Ducros V., Roussel A.M. Mitochondrial production of reactive oxygen species and incidence of age-associated lymphoma in OF1 mice: effect of alternate-day fasting//Mech. Ageing Dev. -2005. -V. 126. —1. P. 1185-1191.

258. Dillard C.J., Tappel A.L. Lipid peroxidation products in biological tissues// Free Radic. Biol. Med. 1989. - V.7. -N2. P. 193 - 196.

259. Dhaunsi G.S., Hugou I., Hanevold C.D. Peroxisomal participation in the cellular response to oxidative stress of endotoxin// Mol. Cell. Biochem. 1993. -V. 126.-P. 25 - 35.

260. Diplok A. The role of antioxidant in clinical practice // Br. J. Clin. Pract. -1990. Vol. 44. - P. 257 - 258.

261. Drew B., Leeuwenburgh C. Aging and the role of reactive nitrogen species//Ann. N.Y. Acad. Sci. 2002. - V. 959. - P. 66 - 81.

262. Emanuel N M., Obukhova L. K. Types of experimental delay in aging patterns // Exp. Geront. 1978. - V. 13. - P. 25 - 29.

263. Frank J., Pompella A., Biesalski H.K. Histochemical visualization of oxidant stress// Free Radic. Biol. Med. -2000. V. 29, N 11. - P. 1096 - 1105.

264. Finkel T., Holbrook N.J. Oxidants, oxidative stress and the biology of ageing // Nature. 2000. - V. 408, N9.-P: 239 - 247.

265. FiskL., Nalivaeva N.N., Turner A.J. Regulation of endothelin-converting enzyme-1 expression in human Neuroblastoma cells // Exp. Biol. Med. 2006. -V. 231.-P. 1048-1053.

266. Fish L., Nalivaeva N.N., Boyle J.P., Peers C.S, Turner A.J. Effects of hypoxia and oxidative stress on expression of neprilysin in human neuroblastoma cells and rat cortical neurones and astrocytes// Neurochem Res. -2007. -V. 32, N10.-P. 1741-1748.

267. Franceschi C., Ottaviani E. Stress, inflammation and natural immunity in the aging process. A new theory// Aging (Milano). 1997. - V. 9. - P. 30 - 31.

268. Frank J., Pompella A., Biesalski H.K. Histochemical visualization of oxidant stress// Free Radic. Biol. Med. 2000. - V.29, N 11. - P. 1096 - 1105.

269. Genkinger J.M., Platz E.A., Hoffman S.C. et al. C47T polymorphism in manganese superoxide dismutase (MnSOD), antioxidant intake and survival // Mech. Ageing Dev.-2006.-V. 127.-P. 153 163.

270. Gerschman R., Gilbert D. L., Nye S. V. et al. Oxygen poisoning and X-irradiation: a mechanism in common//Science.-1954. -V. 119. P. 623 - 626.

271. Giardino I., Edelstein D., Browniee M. BCL-2 expression or antioxidants prevent hyperglycemia-induced formation of intracellular advancsd clycation ? endproducts in bovine endothelial cells//J. Clin. Jnvest. 1996. - V. 97.1. P. 1422 1428.

272. Gilka M., Stoian I., Atanasiu V., Virgolici B. The oxidative hypothesis of senescence // J. Postgrad. Med. 2007. - V. 53, No. 3. - P. 207 - 213.

273. Gilca M., Chirila M., Dinu V. Effect of fasting (80 h.) on the luminol enhanced chemiluminescence of the polymorphonuclear leucocytes in healthy human subjects // Rom. J. Intern. Med. 2003. - V. 41. - P.75 -81.

274. Girotti A. W. Lipid hydroperoxide generation, turnover, and effector action in biological systems //J. Lipid Res. 1998. -V. 39, N8. - P. 1529 - 1542.

275. Gomi F., Dooley M., Matsuo M. Effects of oxygen inhalation on the antioxidant capacity of lungs, livers, and brains in normal and vitamin E-deficient rats at various ages // J. Nutr. Sci. Vitaminol. 1995. - V. 41. - P. 139 - 149.

276. Goto S., Takahashi R., Kumiyama A. et al. Implications of protein degradation in aging// Fre Radic. Biol. Med. -2001. V.928. - P. 54 - 64.

277. Grune T., Reinheckel T., Davies K.J.A. Degradation of oxidized proteins in mammalian cells//FASEB J. 1997. - V. 11. - P. 526 - 534.

278. Gsell W., Conrad R., Hickethier M. et al. Decreased catalase activity but unchanged superoxide dismutase activity in brains of patients with dementia of Alzheimer type//J. Neurochem. 1995. -V. 64. -P. 1216 - 1223.

279. Gutteridge J. M. C. Fate of oxygen free radicals in extracellular fluids// Biochem. Soc. Trans. 1982. - V. 10. - P. 71 - 73.

280. Gutteridge J. M. C. Antioxidant properties of caeruloplasmin towards iron and copper dependent oxygen radical formation // FEBS Lett. -1983. V. 157. — P. 30-40.

281. Gutteridge J. M. C. Lipid peroxidation and antioxidants as biomarkers of tissue damage // Clin. Chem. 1995. -V. 41, N 12. -P. 1819 - 1828.

282. Gutteridge J. M. C., Stocks J. Caeruloplasmin: physiological-and pathological perspectives//Crit. Rev. Clin. Lab. Sci. 1981. - V. 14. -P. 257 - 329.

283. Hague W.M. Homocysteine and pregnancy. Best. Pract. Res. Clin. Obstetr. Gynaecol. -2003. -V. 17. P. 459 - 469.

284. Halliwell B. Reactive oxigen species and the central nervous system // Free radicals in the brain (aging, neurological and mental disorders). Berlin: SpringerVerlag. 1992. — P. 21 - 40.

285. Halliwell B. Antioxidants and human disease: a general introduction // Nutr. Rev. 1997. -V. 55. -P. S44 - S52.

286. Halliwell B., Chirico S. Lipid peroxidation: its mechanism, measurement, and significance // Am. J. Clin. Nutr. 1993. Vol. 57, N 5 (Suppl.). P. 715S-724S.

287. Halliwell B., Gutteridge J. M. C. Oxygen toxicity, oxygen radicals, transition metals and disease // Biochem. J. 1984. - V. 219 - P. 1 - 14.

288. Halliwell B., Gutteridge J. M. C. Role of free radicals and catalytic metal ions in human disease: an overview I I Methods Enzymol. -1990. -V. 186. -P. 1 85.

289. Напкеу С. J., Eikelboom J. W. Homocysteine and vascular disease// Lancet -1999. V. 354. P. 407-413.

290. HansfordR.G., Hogue B.A., Mildaziene V. Dependence of H202 formation by rat heart mitochondria on substrate availability and donor age//J. Bioenerg. Biomembr. 1997. - V. 1.-P. 89 -95.

291. Harman D. Aging: A theory based on free radicals and radiation chemistry//J. Geront. 1956. - V. 11. - P. 298 - 300.

292. Harman D. The aging process: major risk factor for disease and death/ZProc. Natl. Acad. Sci. USA. 1991. - V. 88. - P. 5360 - 5363.

293. Harman D. Aging: Prospects for further increases in the functional life span//Age.-1994.-V. 17.-P. 119-146.

294. Harman D. Free-radical theory of aging: increasing the functional life span// Ann. N.Y. Acad. Sci. -1994a.-V. 717. P. 257 - 266.

295. Harman D. Extending functional life span// Exp. Gerontol. 1998. -V. 33.-P. 95- 112.

296. Harman D. Free radical theory of aging: An update: increasing the functional life span // Ann. NY Acad. Sci. 2006. - V. 1067. - P. 10 - 21.

297. Hauptman N., Grimsby J., Shih J.C., Cadenas E. The metabolism of tyramine by monoamine oxidase A/B causes oxidative damage to mitochondrial DNA//Arch. Biochem. Biophys. 1996. -V. 335. - P. 295 - 304.

298. Hensley K., Floid Я.АReactive oxygen species and protein oxidation in aging: a look ahead // Arch. Biochem. Biophys. 2002. - V. 397, N2. -P. 377-383.

299. Herman J.P., Cullinan W.E. Neurocircuitry of stress: central control of the hypothalamo-pituitary-adrenocortical axis// TINS 1997. V. 20. - P. 78 - 83.

300. Hipkiss A. R. Accumulation of altered proteins and ageing: Causes and effects 11 Exp. Gerontol. 2006. -V. 41. - P. 464 - 473.

301. Hipkiss A. R. Glycation, ageing and carnosine: are carnivorous diets beneficial? // Mech. Ageing Dev. 2005. - V. 126. - P. 1034 - 1039.

302. Hipkiss A. R. Carnosine, a protective, anti-aging peptide? // Int. J. Biochem. Cell. Biol. 1998. - V. 30. - P. 863 - 868.

303. Hipkiss A. R., Michaelis J., Syrris P. et al. Non-enzymatic glycosylation of dipeptide carnosine, a potential anti-protein-cross-linking agent // FEBS Letters — 1995.-V. 371.-P. 81 85.

304. Ho Y.S., Magnenat J.K., Bronson R.T. et al. Mice deficient in cellular glutathione peroxidase develop normally and show no increased sensitivity to hyperoia// J. Biol. Chem. 1997. - V. 272.-P. 16644- 16651.

305. Ho P.I., Ortiz D., Rogers E. et al. Multiple aspects of homocysteine neurotoxicity: glutamate excitotoxicity, kinase hyperactivation and DNA damage// J. Neurosci. Res. 2002. - V.70. - P. 694 - 702.

306. Hori N., Carpenter D. Functional and morphological changes induced by transient in vivo ischemia// Exp. Neurol. 1994. - V. 129i - P. 279 - 289.

307. Huang T.T., Carlson E.J., Gillespie A.M. et al. Ubiquitous overexpression of Cu,Zn- superoxide dismutase does, not extend life span in mice // J. Cerontol. A Biol. Sci. Med. Sci. 2000. - V. 55. - P. B5 - B9.

308. Huang J.S., Chuang L.Y.,Guh J.V. et al Effect of taurine on advanced glycation end products-induced hypertrophy in renal tubular epithelial cells //Toxicol. Appl. Pharmacol. 2008. - V. 233, N2. - P. 220 - 226.

309. Hunt C.V., Bottoms M.A., Mitchison M.J. Ascorbic acid oxidation -a potential cause of the elevated severity of atherosclerosis in diabetes-mellitus// FEBS Lett. -1992.-V. 311.-P.161 164.

310. Ito N., Hirose M. The role of antioxidants in chemical carcinogenesis // Jpn. J. Cancer Res.-1987.-V. 78.-P. 1011 1026.

311. Johnson P. Reactive oxygen species and their detoxification in animal tissues // Trends Comp. Biochem. Physiol. 1993. - V. 1. - P. 39 - 54.

312. Johnson P., Hammer J. L. Effect of calpain on antioxidant enzyme activity // Free Rad. Res. 1994. - Vol. 21. - P. 27 - 33.

313. Kachiwata S.J., Harris S.E., Wright A.F., et al., Genetic influences on oxidative stress and their association with normal cognitive ageing// Neurosci. Lett. -2005. -V. 386.-P. 116-120.

314. Kalen A., Appelkvist E.L., Dallner G. Age-related changes in the lipid composition of rat and human tissues//Lipids. 1989. - V. 24. - P. 579 - 584.

315. Kaskow J., Regmi A., Mulchahey J. Changes in brain corticotropin-releasing factor messenger RNA expression in aged Fisher 344 rats//Brain Res — 1999. V. 822, № 1-2. - P. 228 - 230.

316. Khavinson V.Kh, Goncharova N.D., Lapin B.A. Synthetic tetrapeptide epitalon restores distributed neuroendocrine regulation in senescent monkeys// Neuroendocrinol Lett. 2001. - V. 22. - P. 251 - 254.

317. Khavinson V. Kh. Peptides and Ageing/ZNeuroendocrinol. Lett. 2002. -V.23, Suppl. 3. (special issue). - 143 p.

318. Khavinson V.Kh., Malinin V.V. Gerontological Aspects of Genome Peptide Regulation. Karger AG, Basel. 2005. -104 p.

319. Khavinson V. Kh., Peptide regulation of ageing. SPb.: Humanística. -2008.-36 p.

320. Ketterer B. Detoxication reaction of glutathione and gentathione transferases // Xenobiotica. 1986. -V. 16. - P. 957 - 973.

321. Kohn R. Effect of antioxidants on life-span of C57BL mice // J. Geront. -1971.-V. 26.-P. 378-380.

322. Koltover V. K. The antihypoxic action of antioxidant BHT mediated via nitric-oxide: A study of EPR signals in tissues of rats of different ages // Age. — 1995. V. 18,N3.-P. 85-89.

323. Koltover V.K. Antioxidant therapy of aging: the systems reliability overlook// Adv. Gerontol. 2007. - V. 20, №3. - P. 45.

324. Kozina L.S., Arutjunyan A.V., Khavinson V.Kh. Antioxidant properties of geroprotective of the pineal gland//Arch. Gerontol. Geriatr., Suppl. 1. 2007. -P. 213-216.

325. Ku H.H., Sohal R.S. Comparison of mitochondrial pro-oxidant generation and anti-oxidant defenses between rat and pigeon: possible basis of variation in longevity and metabolic potential/ZMech. Ageing. Dev. -1993—V. 72, N 1. -P. 67 76.

326. Kuhn H., Borchert A. Regulation of enzymatic lipid peroxidation: the interplay of peroxidizing and peroxide reducing enzymes// Free Radic. Biol. Med. -2002.-V.33, № 2.-P. 154- 172.

327. Lai M.A., Brismar H., Eklof A-N., Aperia A. Role of oxidative stress in advanced glycation end product-induced mesangial cell activation // Kidney Intern. 2002. - V. 61. - P. 2006 - 2014.

328. Landis G.N., Tower J. Superoxide dismutase evolution and life span regulation // Mech. Ageing Dev. -2005. V. 126. - P. 365 - 379.

329. Lenton K.J., Therriault H., Cantin A.M., et al. Direct correlation of glutathione and ascorbate and their dependence on age and season // Am. J. Clin. Nutr.-2000.-V. 71.-P. 1194- 1200.

330. Leon J., Acuna-Castroviiejo D., Escames G., Tan D.X., Reiter R.J. Melatonin mitigates mitochondrial malfunction // J. Pineal Res. 2005. - V. 38. -P. 1 - 9.

331. Leong S.F., Clark J.B. Regional enzyme development in rat brain. Enzymes of energy metabolism// Biochem. J. 1984. - V. 218. - P.139 - 145.

332. Levine R.L., Carland D., Oliver C.N., Amicin A. et al. Determination of carbonyl content in oxidatevely modified proteins// Methods Enzymol. — 1990. -V. 186. -P.464 478.

333. Levin E.D., Christopher N.C., Crapo J.D. Memory decline of aging reduced by ectracellular superoxide dismutase over expression// Behav. Genet. — 2005.-V. 35.-P. 447-453.

334. Li Y., Schellhorn H.E. Rapid kinetic microassay for catalase activity // J.Biomol. Tech.-2007.-V. 18, N4.-P. 185 187.

335. Linford N. J., Schriner S. E., Rabinovitch P. S. Oxidative damage and aging: spotlight on mitochondria // Cancer Res. 2006. -V. 66. - P. 2497 - 2499.

336. Linnane A.W., Kios V., Vitetta L. Healthy aging: regulation of the metabolome by cellular redox modulation and prooxidant signaling systems: the essential roles of superoxide anion and hydrogen peroxide // Biogerontology. -2007. V. 8.-P. 445 -467.

337. Lipman R. D., Bronson R. T., Wu D. et al. Disease inci dence and longevity are unaltered by dietary antioxidant supple mentation initiated duringmiddle age in C57BL/6 mice // Mech. Ageing Dev. 1998. - V. 103. — P. 269-284.

338. Lowry O.H , Rosebrouch N.I., Farr A.L., Randall R.I. Protein measurement with the Folin phenol reagent // J. Biol. Chem. 1951. -V.193.-P. 265-275.

339. Ma L., Carter R.J., Morton A.J., Nicholson L.F. RAGE is expressed in pyramidal cells of the hippocampus following moderate hypoxic-ischemic brain injury in rats//Brain Res. 2003. - V. 966, N2. - P. 167 - 174.

340. Mabry T., Gold P., McCarty R. Stress. Basic mechanisms and clinical implications. New York. 1995. - P. 512 - 523.

341. Maier C. V., Chan P.H. Role of superoxidedismutases in oxidative damage and neurodegenerative disorders// Neuroscientist. 2002. - V. 8. - P. 323 - 334.

342. Manczak M., Jung Y., Park S., Partovi D., Reddy P.H. Time-course of mitochondrial gene expressions in mice brains: implications for mitochondrial dysfunction, oxidative damage, and cytochrome c in aging//J. Neurochem. 2005. -V. 92. -P. 494-504.

343. Mancuso C., Bates T.E., Butterfield D.A., Calafato S. et al., Natural antioxidants in Alzheimer's disease// Expert Opin. Investig. Drugs. 2007. - V.16, N 12.- P. 1921 - 1931.

344. Manson M. M., Green J. A., Driver H. E. Ethoxyquin alone inducespreneoplastic changes in rat kidney whilst preventing induction of such lesions in liver by aflatoxin B (1) // Carcinogenesis. 1987. - V. 8. - P. 723 - 728.

345. Mao H., Schnetz-Boutaud N.C., Wesenseel J.P., Marnett L.J., Stone M.P. Duplex DNA catalyzes the chemical rearrangement of malondialdehyde deoxyguanisine adduct// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - V. 96. -P. 6615-6620.

346. Marnett L.J. Lipid peroxidation — DNA damage by malondialdehyde//Mut. Res.Fund. Mol. Mech. Mutagen. 1999. - V. 424. - P. 83 - 95.

347. Martin B., Mattson M.P., Maudsley S. Caloric restriction and intermittent fasting. Two potential diets for successful brain aging //Ageing Res. Rev. 2006. -V. 5.-P. 332-353.

348. Martin G.M. Genetic engineering of mice to test the oxidative damage theory of aging//Ann. N.Y. Acad. Sci. 2005. - V. 1055. - P. 26 - 34.

349. Martin G.M. Clonal attenuation of somatic cells in aging mammals: a review of supportive evidence and its biomedical significance// Ann: N.Y. Acad. Sci; -2007.-V. 1119.-P. 1-8.

350. Martin M., Macias M, Escames G. et al. Melatonin-induced increased activity of the. respiratory chain complexes can prevent mitochondrial damage induced by ruthenium red in vivo// J. Pineal. Res. 2000. - V. 16. - P. 242 T 248.

351. Matsuo M., Gomi F., Kuramoto K., Sagai M. Food restriction suppresses an age-dependent increase in the exhalation rate of pentane from rats: a longitudinal study//! Gerontol. 1993. -V. 48. - P. 133 - 138.

352. McCord J. M., Turrens J. F. Mitochondrial injury by ischemia and reperfusion // Current Topics in Bioenerg. 1994. - V. 17. - P. 173 - 195.

353. McElroy M.C., Postle A.D., Kelly F.J. Catalase, superoxide dismutase and glutathione peroxidase activities of lung and liver during human development// Biochim. Biophys. Acta. 1992.-V.l 117.-P. 153 - 158.

354. McCay P. Vitamin E: interactions with free radicals and ascorbatl // Ann. Rev. Nutr. 1985. -V. 5. - P. 23 - 40.

355. McCall M. R., Frei B. Can antioxidant vitamins meteriatly reduce oxidative damage in humans? // Free Radical Biol. Med. -1999. -V. 26. -P. 1034- 1053.

356. Medina D., ShepherdF. Selenium-mediated inhibition of mouse mammary tumorigenesis // Cancer Lett. 1980. -V. 8. - P. 241 - 245.

357. Meister A., Anderson M. Glutathione // Ann. Rev. Biochem. 1983. -V. 52.-P. 711 -760.

358. Melov S., Coskun P., Patel M. et al. Mitochondrial disease in superoxide dismutase 2 mutant mice //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. - V. 96. -P. 846- 851.

359. Melow S. Extension of life span with superoxide dismutase/catalase mimetics // Science. 2000. -V. 289. - P. 1567 - 1569.

360. Melov S., Doctrow S.R., Schneider J.A. et al. Lifespan extension and rescue of spongiform encephalopathy in superoxide dismutase 2 nullizygous mice treated with superoxide dismutase-catalase mimetics // J. Neurosci. 2001. -V. 21.-P. 8348 - 8353.

361. Melzig MF., Janka M. Enhanctment of neutral endopeptidase activity in SK-N-SH cells by green tea extract// Phytomedicine. 2003. -V.10. -P. 494 498.

362. Meng Q., Wong Y.T., Chen J., Ruan R. Age-related changes in mitochondrial function and antioxidative enzyme activity in fischer 344 rats// Mech. Ageing Dev. 2007. - V. 128. - P. 286 - 292.

363. Merry B.J. Molecular mechanisms linking calorie restriction and longevity//.!. Biochem. Cell Biol. -2002. -V. 34.-P. 1340-1354.

364. Michelet F., Gueugen R., Leroy P. et al. Blood and plasma glutathiont measured in healthy subjects by HPLC: relation to sex, aging, biological variables, fnd life habits// Clin. Chem. 1995. -V. 41. - P. 1509 - 1517.

365. Miller A.L. The methionine-homocysteine cycle and its effects in cognitive disorders//Altern. Med. Rev. 2003. - V. 8. - P. 7 - 19.

366. Mocchegiani E., Santarelli L., Tibaldi A. et al. Presence of links between zinc and melatonin during the circadian cycle in old mice: effects on thymic endocrine activity and on the survival // J. Neuroimmunology. -1998. -V. 86. -P. Ill 122.

367. Mulas M.F., Demuro G., Mulas C., Putzolu M., Cavallini G., Donati A. et al. Dietary restriction counteracts age-related changes in cholrsterol metabolism in the rat// Mech. Ageing Dev. 2005. - V. 126. - P. 648-654.

368. Miller A.L. The methionine-homocysteine cycle and its effects in cognitive disorders // Altern. Med. Rev. 2003. - V. 8. - P. 7 - 19.

369. Muller F.L., Lustgarten M.S., Jang Y. et al. Trends in oxidative aging theories//Free Radie. Biol. Med. 2007. - V. 43. - P. 393 - 399.

370. Muller F.L., Song W., Liu Y. et al. Absence of Cu,Zn-superoxide dismutase leads to elevated oxidative stress and acceleration of age-dependent skeletal muscle atrophy // Free Radie. Biol'. Med. 2006. - V. 40. -P. 1993 -2004.

371. Murphy M.P. Does interplay nitric oxide and mitochondria affect hypoxia-inducible transcription factor-1 activity? // Biochem. J. 2003. -V. 376. — P. e5-e6.

372. Nagai K, Suda T., Kawasaki K. et al. Effects of L-carnosine on blood cells and biomembrane//J. Physiol. Soc. Jap. 1990. - V. 52. - P. 339 - 344.

373. Nagai J., Tanaka M., Hibasami H. et al. Effect of vitamin E deficiency on spontaneous development of leukemia in AKR mice // Mie Med. J. 1979. -V. 29.-P. 155 - 158.

374. Nagai K., Suda T., Kawasaki K. et al. Effects of L-carnosine on blood cells and biomembrane // J.Physiol.Soc. Jap. 1990. -V. 52. - P. 339 - 344.

375. Nalivaeva N.N., Fisk L.R., Belyaev N.D., Turner A.J. Amyloid-degrading enzymes as therapeutic targets in Alzheimer's disease // Curr. Alzheimer Res. -2008. V. 5, N 2. - P. 212 - 224.

376. Nalivaeva N.N., FiskL.R., CanetAviles R.M., Plesneva S.A., Zhuravin LA., Turner A.J. Effect of prenatal hypoxia on expression of amyloid precursor protein and' metallopeptidases in the rat brain // Lett. Peptide Sci. 2003. -V. 10.-P. 455 -462.

377. NohlH., Koltover V., Stoize K. Ischemia/reperfusion impairs mitochondrial energy conservation and triggers release as a byproduct of respiration // Free Radical Res. Comms. 1993. -V. 18. - P. 127 - 137.

378. Nyakas C., Buwalda B., Luiten P. G. Hypoxia and brain development// Prog. Neurobiol. 1996. -V. 49. - P. 1 - 51.

379. Nuttall S. L., Martin U., Hutchin T. et al. Increased oxidative stress in ageing and age-related diseases // Age and Ageing. -1998. V. 27(Suppl. 1). -P. 34.

380. Okatani Y, Okamoto K., Hayashi K. et al. Maternal-fetal transfer of melatonin in pregnant women near term// J. Pineal. Res. — 1998. — V. 25. — P. 129- 134.

381. Orr W. С., Sohal R.S. Extension of life-span by overexpression of superoxide dismutase and catalase in Drosophila melanogaster//Science. — 1994.-V. 263.-P. 1128 1130.

382. Orrenius S., McConkey D.J., Bellomo G., Nicolera V. Role of Ca2+ in toxic cell killing//Trends Pharmacol. Sci. 1989. -V. 10. -P. 281 -285.

383. Oyama Y., Carpenter D.,Chikaisa L. et al. Flow cytometric estimation of glutamate and kainate increase in intracellular Ca in brain neurons: a technical aspect // Brain Res. 1995. V. 728. P. 121-124.

384. Ozawa T. Genetic and functional changes in mitochondria associated with aging // Physiol. Rev. 1997. - V. 77, N. 2. - P. 425 - 464.

385. Pacifici R. E., Davies K. J. A. Protein, lipid and DNA repair system in oxidative stress: free radical theory of aging revisited // Gerontology. — 1991. — V. 37.-P. 166- 180.

386. Padmore J. D. Vitamin С exhibits prooxidant properties // Nature. 1998. -V. 392.-P. 559-562.

387. Pasantes-Morales H., Wright C., Ganll G. Taurine protection of lymphablastoid cells from iron-ascorbate induced damage // Biochem. Pharmacol— 1985.-V. 34.-P. 2205-2207.

388. Pavlov A.R., Revina A.A., Dupin A.M. et al. The mechanism of interaction of carnosine with superoxide radicals in water solutions// Biochim. Biophys. Acta. 1993. -V. 1157.-P. 304-312.

389. Phillips J.P., Campbell S.D., Michaud D. et al. Null mutation of copper/zinc superoxide dismutase in Drosophila confers hypersensitive to paraquat and reduced longevity// Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1989. - V. 86. -P. 2761-2765.

390. Perry J.J., Fan L., Tainer J.A. Developing master keys to brain patheology, cancer and aging from the structural biology of proteins controlling reactive oxygen species and DNA repair//Neuroscince. 2007. - V. 145. -. P. 1280 - 1299.

391. Pialoux V.,Mounier R., Brown A.D. et al. Relationship between oxidative stress and HIF-1 alpha during sustained hypoxia in humans// Free Radic. Biol. Med. 2009. -V.46, N2. - P. 321 - 326.

392. Pighetti M. , Tomasselli G.A., D'Elia A., Di Carlo C. et al. Maternal serum and umbilical cord blood leptin concentrations with fetal growth restriction// Obstetr. Gynecol. -2003. -V. 102. -P.535 542.

393. Pinzani P., Petruzzi E., Orlando C., et al. Serum antioxidant capacity in healthy and diabetic subjects as determined by enhanced chemiluminescence// J. Biolumin. Chemilumin. 1998. -V. 13. - P. 321 - 325.

394. Poderoso J. J., Lisdero C., Shopfer F., RiobonN., Carreras M.C., Cadenas E., Boveris A. The regulation of mitochondrial oxygen uptake by redox reactions involving nitric oxide and ubiquinol//J. Biol. Chem. 1999. - V. 274. -P. 37709 -37716.

395. Pollack M., C. Leeuwenburgh Molecular mechanisms of oxidative stress in aging: free radicals, aging, antioxidants and disease// In: Handbook of Oxidantsand Antioxidants in Exercise (C.K.Sen, L.Packer and O.Hanninen, eds.). 2000. - P. 881 -921.

396. Pribush A, Meyerstein D, Meyer stein N. Kinetics of erythrocyte swelling and membrane whole formation in hypotonic media // Biochim. Biophys. Acta — 2002.-V. 1558.-P. 119-132.

397. Principles of Chemoprevention / Ed. by B.S. Stewart, D. McGregor, P. Kleihues. (IARC Sci. Publ. No.139). Lyon: IARC. 1996. - 332 p.

398. Prunet-Marcassus B., Ambid I., Viguerie-Bascands N. et al. Evidence for direct effect of melatonin on mitochondrial genome expression of Siberian hamster brown adipocytes// J. Pineal. Res. 2001. - V. 30. - P. 108 -115.

399. Pryor W. A. Free radical biology: xenobiotics, cancer, and aging // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1982. -V. 393. - P. 1 - 22.

400. Pryor W. A. A festschrift volume celebrating the 20 the anniversory of the discovery of superroxide dismutase I I Free Radic. Biol. Med. 1988- V. 5, N5-6.- P. 271 -273.

401. Pryor W. A., Squadrilo G. L. The chemistry of peroxynitrite: a product from the reaction of nitric oxide with super-oxide // Lung. Cell. Mol. Physiol. -1995.-V. 12.-P. 699-722.

402. Proteggente A.R., England T.G., RehmanA., Rice-Evans C.A., HalliwellB. Gender differences in steady-state levels of oxidative damage to DNA in healthy individuals/ZFree Radic. Res. 2002. - V. 36. - P. 157 -162.

403. Pugh C. W., Ratcliffe P.J. The von Hippel-Lindau tumor suppressor, hypoxia-inducible factor-1 (HIF-1) degradation, and cancer pathogenesis// Semin. Cancer. Biol. -2003. -V. 13. -P. 537 544.

404. Rasmussen U.F., Krustrup P., Kjaer M., Rasmussen H.N. Experimental evidence the mitochondrial theory of aging. A study of isolated human skeletal muscle mitochondria//Exp. Gerontol. 2003. - V. 38. - P. 877 - 886.

405. Reed D. Regulation of reductive processes by glutathione// Biochem. Pharmacol. 1986. -V. 35: P. 7 - 13.

406. Reis E.A., Zugno A.I., Franzon R. et al. Preatreatment with vitamins E and С prevent the impairment of memory caused by homocysteine administration in rats// Metab. Brain Dis. 2002. - V.17. - P. 211 - 217.

407. Reiter R. J. The aging pineal gland and its physiological consequences // Bio Essays. 1992.-V. 14.-P. 169- 175.

408. Reiter R. J. The pineal gland and melatonin in relation to aging: a summary of the theories and of the data // Exp. Gerontol- 1995. V. 30. -P. 199-212.

409. Reiter R. J., Guerrero J. M., Garcia J. J., Acuno-Gastroviejo D. Reactive oxygen intermediates, molecular damage and aging. Relation to melatonin // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1998. -V. 254. - P. 410 - 424.

410. Reiter R. J. Experimental observations related to the utility of melatonin in attenuating age-related diseases // Успехи геронтологии. 1999. - Вып. 3. -С. 121 - 132.

411. Reiter R. J., Caberra J., Sainz R. M. Melatonin as a pharmacological agent against neuronal loss in experimental models of Huntington's disease, Alzheimer's disease and parkinsonism // Ann. N. Y. Acad. Sci. 1999. -V. 890. -P. 471-485.

412. Reiter R.J., Tan D. X., Allegra M. Melatonin: reducing molecular pathology and dysfunction due to free radicals and associated reactant// Neuroendocr. Lett. 2002. - V. 23, Suppl. 1. - P. 3 - 8.

413. Reiter R.J., Tan D.X., Burkhardt S. Reactive oxygen and nitrogen species and cellular and organismal decline: amelioration with melatonin// Mech. Ageing. Dev. -2002.- V. 41. -P. 358 362.

414. Reiter R.J., Tan D.X., Mayo J.C., Sainz R.M., Leon J., Charnocky Z. Melatonin as an antioxidant: biochemical mechanisms and pathophisiological implications // Acta Biochim. Polon. 2003. - V. 50. - P. 1129 -1146.

415. Reiter R.J., Tan D.X., Terron M.P., Flores L.J., Czarnocki Z. Melatonin and its metabolites: new findings regarding their production and their radical-scavenging actions // Acta Biochim. Polon. 2007. - V. 54. - P. 1- 9.

416. Richter C., Park J.W., Ames B.N. Normal oxidative damage to mitochondrial and nuclear DNA is extensive // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.-1988. -V. 85.-P. 6465 -6467.

417. Rodrigues A. B., Marchena J. M., Nagales G. et al. Correlation between the circadian rhythm of melatonin phagocytosis, and superoxide anion levels in ring dove heterophils//!. Pineal Res. 1999. - V. 26. - P. 35 - 42.

418. Rodriguez C., Mayo J.C., Sainz R.M., Antolin I., Herrera F., Reiter R.J. Regulation of antioxidant enzymes: a significant role of melatonin// J. Pineal. Res. 2004.-V. 36.-P. 1-9.

419. Rong Y. EUK 134, a synthetic superoxide dismutase and catalase mimetic, prevents oxidative stress and attenuates kainate induced neuropathology // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1999. -V. 96. - P. 9897 - 9902.

420. Rosenquist T.H., Finnel R.H. Genes, folate and homocysteine in embryonic development// Proc. Nutr. Soc. 2003. - V. 60. - P. 53 - 61.

421. Sack R. L., Levy A. J., Erb D. L. et al. Human melatonin production decreases with age//J. Pineal Res. 1986.- V. 3. - P. 379 - 388.

422. Saito K., Yosnioka H., Cutler R. G. A spin trap, N-tert-butyl-alpha-phenylnitrone, extends the life span of mice // Biosci. Biotechnol. Biochem. -1998.-V. 62.-P. 792-794. ,

423. Schlesier K., Harwat M., Böhm V., Bitsch R. Assessment of antioxidant activity by using different in vitro methods // Free Radic. Res. 2002. -V. 36. -P. 177- 187.

424. Schroeder H.A., Mitchener M. Selenium and tellurium in rats: effect on growth, survival and tumors // J. Nutr. 1971. - V. 101. - P. 1531 - 1540.

425. Sentman M.L., Granstrom M., Jakobson H. et al. Phenotypes of mice lacking extracellular superoxide dismutase and copper-and zinc-containing superoxide dismutase/ J. Biol. Chem. 2006. - V. 281. - P. 6904 - 6909.

426. Sies H., Brigllius R., Akkerboom F. Functions of glutathione // Biochem. Physiol. Toxicol. (Clin. Aspects) / Ed. A. Larsson. N-Y: Raven Press. 1983. -P. 51 -64.

427. Sies H. Oxidative stress from basic research to clinical application //Am. J.Med.-1991.-V. 91. Suppl. 3C. -P.S31-S38.

428. Sibarov D.A., Vol'nova A.B., Frolov D.S., Nozdrachev A.D. Effects of intranasal administration of epitalon on neuron activity in the rat neocortex//Neurosci. Behav. Physiol. 2007. -V. 37, N 9. - P. 889-893.

429. Simm A., Nass N., Bartling B. et al. Potential biomarkers of ageing// Biol. Chem. 2008. - V. 389, N3. - P. 257 - 265.

430. Skulachev V.P.The programmed death phenomena: aging and the Samurai law ofbiology//Exp. Gerontol. -2001. -V. 36. P. 995 - 1024.

431. Skulachev V.P. Programmes death phenomena: from organelle to organism//Ann. N.Y. Acad. Sei. 2002.-V. 959. - P. 214 - 237.

432. Skulachev V.P. How proapoptotic proteins can escape from mitochondria? //Free Radic. Biol. Med. 2000.-V. 29. - P. 1056 - 1059.

433. Skulachev V.P. Aging and the programmed death phenomena// In: Topics in Current Genetics. V. 3. Model Systems in Ageing /Nystrom T., Osiewacz H.D., eds. Berlin: Springer-Ferlag. 2003. - P. 191 - 238.

434. Skulachev V.P. Mitochondria, reactive oxygen species and longevity: some lessons from the Barja group//Aging Cell. -2004. V.3. - P. 17 - 19.

435. Smith Y., Collan Y., Kahu M., Trump B. Changes in mitochondrial lipids of rat kidney during ischemia// Biochem. Biophys. Acta. 1980. - V. 618. - N2. -P. 192-201.

436. Smith Y., Kieval J.Z. Anatomy of the dopamine system in the basal ganglia// TiNS. 2000. - V. 23, N 10. - P. S28 - S 33.

437. Smith M., Collan Y., Kahu M., Trump B. Changers in mitochondrial lipids of rat kidney during ischemia//Biochem. Biophys. Acta. -1980. V. 618, N2.-P. 192-201.

438. Smith M.A., Rottkamp C.A., Nunomura A., Raina A.K., Perry G. Oxidative stress in Alzheimer's disease//Biochim. Biophys. Acta. 2000. -V. 1502, N1. -P. 139-144.

439. Smith C.V. Correlations and apparent contradictions in assessment of oxidant stress status in vivo//Free Radic. Biol. Med.-1992. -V. 10, N 3/4. -P. 217-224.

440. Sohal R. S., Arnold L. A., Sohal B. N. Age-related changes in antioxidant enzymes and prooxidant generation in tissues of the rat with special reference to parameters in two insect species//Free Radical Biol. Med.-1990.-V.9.-P. 495-500.

441. Sohal R. S., Swenson I., Brunk U. T. Hydrogen peroxide production by liver mitochondria in different species // Mech. Ageing Dev.-1990a.-V. 53 — P. 209-215.

442. Sohal R. S., Sohal B. N. Hydrogen peroxide release by mitochondria increases during aging//Mech. Ageing Dev.-1991.-V. 57. P. 187 - 202.

443. Sohal R.S. Hydrogen peroxide production by mitochondria may be a biomarker of aging//Mech. Ageing Dev.-1991.-V. 60. P. 189 - 198;

444. Sohal R.S., Dubey A. Mitochondrial oxidative damage, hydrogen peroxide release, and aging//Free Rad. Biol. Med. 1994. - V. 16. - P. 621 - 626.

445. Sohal R. S., Agarwal S., Sohal B. Oxidative stress and agingf in the mongolian gerbil// Mech. Aging. Dev. 1995. - V. 81. - P. 15 - 25.

446. Sohal R. S., Sohal B. H., Orr W. C. Mitochondrial super- oxide and hydrogen peroxide generation, protein oxidative dam age, and longevity in different species of flies//Free Radical Biol. Med. 1995a.- V. 19.- P. 499 - 504.

447. Sohal R. S., Weindruch R. Oxidative stress, caloric restriction, and aging // Science. 1996. - V. 273. - P. 59 - 63.

448. Sohal R. S. Role of oxidative stress and protein oxidation in the aging process//Free Radic. Biol. Med. 2002.-V. 33, N 1. - P. 37 - 44.

449. Sohal R. S., Kamzalov S., Sumien N. et al. Effect of coenzyme Qio intake on endogenous coenzyme Q content, mitochondrial electron transport chain, antioxidant defences, and life span of mice//Free Radic. Biol. Med. 2006. -V. 40.-P. 480-487.

450. Song E-S., Juliano M.A., Juliano L., Hersh L.B. Substrate activation t of insulin-degrading enzyme (Insulysin) a potential target for drug development//

451. J. Biol. Chem. -2003.- V. 278, N 50. P. 49789 - 49794.

452. Srinivasan V., Pandi-Perumal S.R., Maestroni G.J., Esquijino A.I., HardelandR., Tietz N. W., Shuey D.F., Wekstein D.R. Labotatory values in fit aging individuals-sexagenarians through centenarians//Clin. Chem-1992. — V.38.-P. 1167 1185.

453. Stojan G.M., Atanasiu V.,Virgolici B. The oxidative hypothesis of senescense // J. Postgrad. Med. 2007. - V.53. - P. 207 - 213.

454. Streck E.L., Vieira P.S., Wannmacher C.M et al. In vitro effect of homocysteine on some parameters of oxidative stress in rat hippocampus // Metab. Brain Dis.-2003.-V. 18.-P. 147- 154.

455. Streck E.L., Bavaresko C.S., Netto C.A. et al. Chronic hyperhomocysteinemia provokes a memory deficit in rats in the Morris water maze task//Behav. Brain. Res.-2004.-V. 153. -P. 377-381.

456. Takizawa S., Jzuchara Y., Kitao Y., Hori O. et al. A novel inhibitor of advanced glycation and endoplasmatic reticulum stress reduces infarct volume in rat focal cerebral ischemia/ZBrain Res. 2007. - V. 1183. - P. 124 - 137.

457. Teodoro R.O., Farrell P.H.O. Nitric oxide-induced suspended animation promotes survival during hypoxia// The EMBO J. 2003. - V. 22, N3. -P. 580- 587.

458. Tian L., Cal Q., Wei H. Alterations of antioxidant enzymes and oxidative damage of macromolecules in different organs of rats during aging // Free Radical Biol. Med. 1998. -V. 24. - P. 1477 - 1484.

459. Tietz N.W., Shuey D.F., Wekstein D.R. Laboratory values in fit aging individuals sexagenarians through centenarians// Clin. Chem. - 1992. - V. 38. -P. 1167-1185.

460. Tomas-Zapico C., Coto-Montes A. A proposed mechanism to explain the stimulatory effect of melatonin on antioxidative enzymes// J. Pineal. Res. —2005. -V. 39. P. 99- 104.

461. Toth B., Patil K. Enhancing effect of vitamin E on murine intestinal tumorigenesis by 1,2- dimethylhydrazine dihydrochloride I I J. Natl. Cancer Inst. — 1983. V. 70. - P. 1107- 1111.

462. Toussaint O., Remacle J. Stress and energy metabolism in age related processes// In: Molecular Gerontology. Research Status and Perspectives/Rattan SI., Toussaint O., eds. Plenum Press. N.Y. 1996. - P. 87 -110.

463. Turner A. J., FiskL. Nalivaeva N.N. Targeting amyloid-degrading enzymes as therapeutic strategies in neurodegeneration // Ann. N.-Y. Acad. Sci. -2004-V. 1035,N12.-P. 1-20.

464. Tuzcu M., Bayadas G. Effect of melatonin and vitamin E on diabetes-induced learning and memory impairment in rats// Eur. J. Pharmacol. 2006. -V. 537.-P. 106-110.

465. Tyson Ch., Lunan K., Stephens R. Age-related differences in GSH-shalte enzymes in NO2 or 03-exposed rat lund // Arch. Environ. Health. 1982. - V. 33, N3.-P. 167- 176.

466. Valko M., Leibfritz D., Moncol D., Cronin M.T. et al. Free radicals and antioxidants in normal physiological functions and human disease//Intern. J. Biochem. Cell. Biol. 2007. - V. 39. - P. 44 - 84.

467. Vataserry G.T., Johnson G.J., Krezowski A.M. Changes in vitamin E concentrations in human plasma and platelets with age//J. Am. Coll. Nutr. -1983. -V. 2.-P. 369-375.

468. Vercellotti G.M. A balanced budget-evaluating the iron economy // Clin.Chem. 1996. - V. 42. - P. 657.

469. Vina J., Sastre J., Pallardo F., Borras C. Mitochondrial theory of aging : importance to explain why females live longer than males // Antioxid. Redox. Signal.-2003. -V. 5.-P. 549 556.

470. Wachsman J.T. The beneficial effects of dietary restriction: reduced oxidative damage and enhanced apoptosis//Mutat.Res. — 1996. V. 350. — P. 24-34.

471. Wakatsuki A., Okatani Y.Jzumiiya C. et al. Melatonin protects against ischemia and reperfusion-induced oxidative lipid and DNA damage in fetal rat brain // J. Pineal. Res. 1999. - V. 129 - 134.

472. Wakatsuki A., Okatani Y., Shinohara K. et al. Melatonin protects fetal rat brain against oxidative mitochondrial damage // J. Pineal. Res. 2001. - V. 30. -P. 22 - 28.

473. Weindruch R., Keenan K.P., Carney J.M. et al. Caloric restriction mimetics: Metabolic interventions // J. Gerontol. A. Biol. Sei. Med. Sei. 2001. -V. 56.-P. 20-33.

474. Weinreb O., Mandel S., Amit T.,Youdim M.B. et al. Neurological mechanisms of green tea polyphenols in Alzheimer's and Parkinson's diseases// J. Nutr. Biochem. -2004. -V. 15. -P. 506 515.

475. Wendel A. Enzymes acting against reactive oxygen //Enzymes — Tools and Targets. Basel: Karger. 1988. -P. 161 - 167.

476. Wiese A.G., Pacifici R.E., Davies K.J.A. Transient adaptation to oxidative stress in mammalian cells//Arch. Biochem. Biophys. -1995. V. 318, N.I — P. 231 -240.

477. Winiarska K, Fraczyk T., Malinska D., Drozak J., Bryla J. Melatonin mitigiates diabetes-induced oxidative stress in rabbits//J. Pineal Res. 2006. -V. 40.-P. 168- 176.

478. Wright C., Tallan H., Lin G. Taurine: biological update // Ann. Rev. Biochem. 1986. - V. 55. - P. 427 - 453.

479. Wu Y.H., Swaab D.F. The human pineal gland and melatonin in aging and Alzhemer's disease// J. Pineal. Res. 2005. - V. 38. - P. 145 - 152.

480. Yasojima K., Akiyama H., McGeer E.G., McGeer P.L. Reduced neprilysin in high plague areas of Alzheimer's brain: a possible relationship to deficient degradation of (3-amyloid peptide//Neurosci. Lett.-2001. V. 297. - P. 97 - 100.

481. Yin D., Chen K. The essential mechanisms of aging: irreparable damage accumulation of biochemical side-reactions// Exp. Gerontol. — 2005—V. 40 — P. 455 465.

482. Zamora R., Alaiz M., Hidalgo F.J. Feed-back inhibition of oxidative stress by oxidized lipid/amino acid reaction products// Biochemistry. -1997. V. 36,N50.-P.15765 - 15771.

483. Zhang Y., Marcilat O., Giulivi C., Ernster L., Davies K.J.A. The oxidative inactivation of mitochondrial electron transport chain components and ATPase// J. Biol. Chem. 1990. - V. 265. - P. 16330 - 16336.

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.53) на тему:Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов

Автореферат диссертации по медицине на тему Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов

Оглавление диссертации Козина, Людмила Семеновна :: 2009 :: Санкт-Петербург

Введение диссертации по теме "Геронтология и гериатрия", Козина, Людмила Семеновна, автореферат

Заключение диссертационного исследования на тему "Антиоксидантное действие геропротекторных пептидных биорегуляторов"

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Козина, Людмила Семеновна

Похожие научные работы

Каталог диссертаций