Автореферат и диссертация по медицине (14.00.36) на тему:Анализ популяций эозинофилов и других лейкоцитов периферической крови при обострении атопического дерматита и хроническом описторхозе

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ И ПРИБОРОСТРОЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИНСКИЙ ГОСЗДАРСТВЕНННИ МЕДИЦИНСКИЙ ИНСТИТУТ

РГБ ОД

- 5 СЕН 19.94

На правах рукописи

ПОПОВА СВЕТЛАНА ДМИТРИЕВНА

НДК 616.5+616.995.122.21:612.017.1.

АЯАЛИЗ ПОПЗЛЯЦИИ Э03ИН0Ш0В И ДРУГИХ ЛЕЙКОЦИТОВ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ОБОСТРЕНИИ АТОПИЧЕСКОГО ДЕРМАТИТА И ХРОНИЧЕСКОМ 0ПИСТ0РХ03Е

14.00.36 - аллергология я икнунологня

А ВТО РЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Челябинск - 1994

Работа выполнена в Челябинской государственном медицинской институте Министерства здравоохранения и приборостроения Российской Федерации и Екатеринбургской областной научно-практической центре медико-социальной реабилитации детей с аллер-годерматозами.

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор С.НДеплова Научный консультант:

доктор медицинских наук, профессор Н.П.Торопова Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор В.Б.Сперанский

доктор медицинских наук, профессор И.И.Долгувин

Ведущее учреждение: Российский медицинский университет

Защита состоится "____"_____________ 1994 г.

в "___" часов на заседании специализированного Ученого Совета

К.084.04.03 Челябинского государственного кедицкнского института (454092, г.Челябинск, ул.Воровского, 64).

С диссертацией моено ознакомиться в библиотеке Челябинского медицинского института.

Автореферат разослан "____"____________ 1994 г.

Ученый секретарь специализированного Совета

кандидат медицинских наук Н.И.Еигалова

-} -

АКТУАЛЬНОСТЬ ИССЛЕДОВАНИЯ,посвященного анализд популяций зо-зинофилов в норне и при некоторых формах "малых зозннофилий",определяется вааной рольз данной линии клеток в патогенезе развития достаточно распространенных в настоящее время аллергических и паразитарных заболеваний.По имевшимся данным,разные проявления аллергии ииеет до 10-20Х населения,а среднее число глистных инвазий на одного человека составляет в Европе 0.33,в Азии - 1.23, нередким является их сочетание (К.П.Торопова с соавт.,1993; Б.Т.Велич-ковскнй,i991; В.П.Сергиев,1991; Krause, 1986).

Обцей чертой в патогенезе таких разнородных по этиологии заболеваний,как атопический дерматит и хронический описторхоз явля-этся воздействие чуаеродного антигена как пускового момента инициации иммунопатологии и в развитии клинической картины заболевания, йнтиген In situ взаимодействует с макрофагами,лимфоцитами и запускает ряд реакций,направленных на уничтояение и элинннацив чуяерод-ioro антигена,наруоавщего иммунный гомеостаз.Одной из вазнейяих :оставляЕцих цитотоксического и злиаинационного процесса при этом звляптся реакции,опосредованные эозннофилами,которые обладавт бо-пее моцним цитотоксическии потенциалом в сравнении с другими клетками крови,что объясняет первостепенное значение зозинофилов в ан-гипаразитарных реакциях и их поврекдапцуз роль при аллергии :Н.Д.Беклениаев, 1986; Х.В.Кит, 1988; Hardlau е.а.,1987).

Зирокое внедрение в практику современных методов дифференциального центрифугирования в непрерывных градиентах плотности поз-5оляет в настояцее время проводить не только сепарация отдельных 1ИНИЙ клеток периферической крови на основе их различий по удель-loay весу, но и выявить плоткостнуп неоднородность клеток з преде-!ах одной линии. Популяционный анализ полиаорфноядерннх лейкоцитоз (а основа разделения з градиентах плотности оказался плодотворном три изучении патогенеза воспалительных и аллергических зайолезл-шй, при которых выявлены суцестзенние изменения з распределении

нейтрофилов на разных градиентах плотности (Mlyagava,199i; Harvat е.а., 1982). при пшерзозинофильных состояниях, при которых установлено появление зозинофилов легкой плотности, в норме не встречавшихся у человека в периферической крови (Kloprogge е.а., 1989; Hardlau е.а., 1987).Сделано предположение,что легкоплотные эозине Филы, которые отличаются от норыоплоткых своим более низким удель ним весом могут быть недостаточно зрелыми клетками, активно мигри рующими в кровоток при гиперзозинофилии. Имеется альтернативное предположение,что легкоплотные эозинофилы являются вполне зрелыми клетками, опустошенными в результате преджествующей дегрануляции зозинофилов при их вовлечении в патологический процесс (Kroegel е.а., 1994; Fukuda е.а., 1989). Б свете этих данных, изучение раз личных по плотности популяций зозинофилов, их фенотипических и Функциональных характеристик представляется целесообразным не только при гиперзозинофилии, но и при глистных инвазиях и аллергн ческих состояниях, не сопровождающихся резким возмущением зозино-филопоэза и выходом зтих клеток в циркуляцию, когда число зозинофилов периферической крови, а, следовательно, темп миграции зтих клеток в кровоток и кинетика эозинофилов практически не отличавте или мало отличаются от нормы,

Бопрос о популяционном составе зозинофилов при патологиях, н сопровождающихся значительным увеличением зтих клеток в циркуляции, при которых трудно получить популяции клеток в достаточных количествах, остается мало исследованным. Одним из направлений в анализе популяционного разнообразия зозинофилов в этих условиях может быть определение их фенотипических особенностей на основе экспрессии клетками различных мембранных рецепторов, которых на зозинофилах описано около 30. В наиих исследованиях в качестве та кого рецептора избран рецептор к эритроцитам барана, который виро ко представлен на популяциях разных клеток крови: лимфоцитах, нейтрофилах и, как было показано в настоящем исследовании, на не-

орых популяциях эозинофилов. Данный рецептор во многой является логом С02, который, как предпояагант. воспринимает наряду с ре-торами СБ28, С066 и другими, не столько специфические стимулы 3), сколько фоновые воздействия, возникающие при межклеточных тактах и отражает способность клеток, экспрессируацих рецепто-к клеточно-клеточным адгезивным взаимодействиям ШзМкаиа 1992; Р1иааз е.а., 1991; НаггпеИ е.а., 1990; бгапдеие 1999). Анализ спонтанного и индуцированного фармакологи-киыи и биологическими стимулами Е-РОК-образования также был ользован нами для изучения фенотипической и функциональной не-ородности эозинофилов в норме и патологии.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ: анализ количества и свойств популяций эозинофи- > , полученных на основе градиентного центрифугирования вместе с гими лейкоцитами, в норме, при обострении атопического дерма-з и.при хроническом описторхозе.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ: 1. Оценка популяций эозинофилов и других {оцитов, полученных на непрерывных градиентах плотности фикол-зерографина у больных атопическим дерматитом, хроническим :торхозом в отсутствии выраженной эозинофилии, а также у здоро-лиц.

2. Оценка количества ДНК в обцих популяциях лейкоцитов, по-¡иных при градиентном центрифугировании, в расчете на одну ■ку.

3. Тестирование ответа эозинофилов различных градиентных по-щнй на фармакологические и биологические стимулы в реакции ткообразования с эритроцитами барана.

4. Установление обцих и специфических особенностей популяци-го распределения эозинофилов у больных атопическим дераатн-

хроническим описторхозом и здоровых лиц. НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Установлено, что зозинофилы, подобно другим аы клеток крови, являются неоднородными н состоят из популяций,

- б -

отличавшихся дрдг от друга по своей плотности, другим ©енотипич кии и функциональный свойствам. Новыми является данные, что в у: ловиях нормы наиболее функционально активной является популяция зозинсфилов нормальной плотности (1.120 г/мд), содервацаз клетю способные к спонтанному Е-РОК-образованив и выраженноиу ответу 1 понижающее и повывающее воздействие фармакологических и биологических стимулов.

Впервые показано, что при атопическок дерматите и, осойенш хронической описторхозе, при которых число эозинофилов в циркул: ции,соответственно,было несколько увеличенным и нормальным,проис ходит нарастание популяцмонной гетерогенности эозинофилов за счс клеток с малой плотность». Впервые показано, что при хроническое описторхозе при отсутствии выраженного возмущения эозинофилолоэ; что отражает нормальный уровень эозинофилов в кровотоке, появляется самая легкая по плотности популяции (1.082 г/мл), которая ь обнаруживалась у здоровых и у больных атопическим дерматитом, со держащая больсое число спонтанно образующих Е-РОК и минимальное число эозинофилов, способных к индуцированной экспрессии мембран ных рецепторов, что может подтверждать существуйте предположен« о происхождении части легкоплотных эозинофилов из дегранулировав эих десенситизированных клеток,участвующих в развитии хроническо процесса, либо об особой дефекте зозинофнлопоэза в этих условиях

ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ работы состоит в обосновании попула-ционных различий в градиентной распределении эозинофилов в норне к особенно в патологии, характеризующихся превалированием нормоп лотннх зспшофилов и нарастанием в патологии гетерогенности за счет достоверного увеличения доли легкоплотных клеток.

ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ работы заключается в обосновании попу ляцконных изменений эозинофилов при хрокическои описторхозе. при их нормальной количественном содержании в периферической крови, отличавшемся от уровне здоровых лиц, что, с одной стороны, нонет

- ? -

свидетельствовать об участии аозкнофнлоа легкой плотности в патогенезе развития данного заболевания, а, с другой, мояет быть диагностический маркером латентно текущего хронического опнсторхоза, который в наиих исследованиях всегда обнаруживался случайно с по-иоцьи копрологических методов.

Практический интерес представляет обнаружение высокой проли-феративной активности лейкоцитов,выделенных на различных градиентах плотности,при хронической описторхозе в отсуствие зозинофилии.

ВНЕДРЕНИЕ. Методы исследования внедрены в практику ГКБ Н 6 г.Екатеринбурга, иммунологического отдела ЦНИЛ Уральского медицинского института.

ОСНОВНЫЕ П0Л01ЕНИЯ, ВННОСИМЫЕ НА ЗАЩИТИ:

1. Популяционная неоднородность зозинофилов крови типична для условий норны и изучаемой патологии.

2. Нарастание гетерогенности зозинофилов крови при обострении утопического дерматита и при хроническом описторхозе в сравнении от здоровншг лвдьыи происходит за счет увеличения доли зозинофилов латкой плотности и появления среди легкоплотннх клеток активных зозинофилов, способных к вырааенной спонтанной и индуцированной экспрессии мембранных рецепторов.

3. Нарастание гетерогенности зозинофилов и появление клеток легкой плотности при хроническом описторхозе аоает происходить в сегщмгствни зозинофилии.

4'-. Для атопичаского дернатита и хронического описторхоза характерно' увеличение обцеп пролифератнвной активности лейкоцитоз, выделенных на всех градиентах плотности.

АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Основные положения диссертации долозени ;! хйсугденц на научно-практической конференции дериато-венерологов ^-Рз.тз, СнСири н Плпкмог-п йлгтпкз г Екэт?р.чно<,грг, нзучно-

1рактичзских конференциях в г-.Сочи (.1392, 199<Ь, на мевдунэроднои сонзеренции "Ятопкчесюн! дернатнт у дзген" '. £г,ат?р>!.1&црг , 1994 ;,

на провидимы* аи алану мЗ сф республиканских курсах повмшниу квалификации педиатров и дерматологов (Екатеринбург.1994); заседании Свердловского научного общества дермато-вен'ерологов от 27 февраля 1992 г.

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликовано 6 работ.

ОБЪЕМ И СТРУКТУРА ДИССЕРТАЦИИ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, одной главы результатов исследования, заключения, выводов и указателей литературы и сокращений. Содержит {Щ страниц мавинохшсного текста, иллюстрирована таблицами и 23 рисунками.

Библиографический указатель включает 4$ работ отечественных и иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Всего под наблюдением находилось 98 человек, из которых у 46 диагностировано обострение атопического дерматита (АД), у 25 больных хронический описторхоз (ХО). Группу контроля составили 27 человек без клинических и анамнестических признаков аллергии или паразитарных заболеваний.

Б группу больных АД вовли 18 мужчин и 28 хенцин. На момент обследования у всех больных наблюдались кожные высыпания различной степени распространенности и выраженности. В зависимости от клинической картины и тяжести течения конного процесса и уровня зозино-филии все больные были разделены на три группы.

В первую группу вовли 14 пациентов, у которых в период наблюдения кожный процесс носил ограниченный характер (занимал < 52 поверхности тела). Течение АД у больных данной группы было благоприятным, с нечастыми (до 2-3 раз в год) обострениями, быстрокупи-рувцимися, полными ремиссиями, уровень зозинофилов - 4.8% (270.0+ 62.4 клетки/мкл). Сочетание АД и лямблиоза выявлено у 4 (28,6%) больных этой группы.

Коеные проявления у больных 14 больных II группы занимали

ольиуа плоцадь. У пациентов этой группа каблздалось течении АД редней тяаестя. Обостренна рвгистрировалнсь 4-5 раз з год. Ре-иссии били неполными, конные высыпания полностью не регрессиро-зли, уровень зозинофилии - 11.8% (684.8+124.0 кяеток/нкл). Лямб-иоз был диагностирован g 9 (64.3%) больных.

Изменения коми у 18 больных III группы носили диффузный или знерализованный характер. Кожный процесс с трудом поддавался лезвии, обострения регистрировались 6-8 и более раз в год, ремис-!н были неполными, кратковременными иди отсутствовали. Течение ] было тяжелым, уровень зозинофилии - 18.4% (1433.7+489.4 кле-ж/мкл). При копрологичоском исследовании цисты лямблий обнарузэ-I у 8 (44.4%) больных, микст-инвазия описторхисамн и лямблиями.у (11.Ш.

Сравнительный анализ подгрупп с наличием или отсутствпам шблкоза в каждой выделенной группе не выявил различий в клнни-¡ской картине и содержании эозинофилов в циркуляции. В случае сования АД с лямблиозом и описторхозом несколько более были зыра-¡ны мнкроциркуляторные нарувениа.

Сопутствуйте заболевания со стороны внутренних органов набрались у всех больных АД: воспалительные заболевания органов щеваритедьной системы (хронический холецистит, хронический гас-юдуоденит, хронический колит) у 84,7%, дискинезии аелчевыводя-!й системы у 32,6%, очаги хронической инфекции в ЛОР-органах у ',4%, те или иные расстройства со стороны нервной системы у 21,7%. [истно-протозойные инвазии обнаружены у 52,2% больных, из них :карндоз у 2,2%, лааблиоз у 45,6%, сочетанное инфицирование. опис-|рхами и лямблиями у 4,3% пациентов. Нави данные о высокой часто! развития обострения атопического дараатита на фоне сопутствув-[X лямблиоза и воспалительных процессов в аелудочно-кинечноа акте соответствувт литературным данным (Н.П.Торопова с соавт., 93).

- iO -

Ë группу больных XG вовлн 8 мужчин и 17 аенщин. На момент исследования все больные страдали ХО, подтвержденным в 100% обна-ружениен яиц описторхисов в желчи или фекалиях. Установить длительность заболевания представляло затруднение в связи с отсутствием стадии острого описторхоза или наличием ее стертых фори. Чис ло зозинофилов не выходило за пределы нормы и состалало 2.4% (133.1+19.6 клеток/ынл). При обследовании наиболее часто у наблв-даемых больных отмечались явление холецистита (92%). хронического гепатита (60%), холангита (40%), панкреатита (36%), реже определялась клиника гастродуоденита и энтероколита (16% и 20%); Бессимптомно описторхоз протекал у 12 больных (48%).

Для оценки состояния зозинофилов и других лейкоцитов периферической крови у доноров и больных изучались:

- общее количество лейкоцитов и лейкоцитарная формула (определялись стандартный методами);

- выделение популяций лейкоцитов на непрерывных градиентах плотности фиколла-верографина: 1.082 г/ил, 1.096 г/нл, 1.115 г/ил, 1.120 г/мл (В.П.Лозовой с соавт., 1986; Г.Фримель. 1987; Hansel

е.а., 1990);

- пролиферативная активность лейкоцитов методом проточной ци-тометрии (Г.Н.Козинец с соавт., 1988; Uindelav е.а., 1989);

- фенотип зозинофилов методом спонтанного Е-РОК-образования (3ondal,1972);

- функциональная активность свежевыделенних зозинофилов методом спонтанного стимулированного фармакологическими препаратами и биологическим» агентами розеткообразования.

Статистическая обработка данных исследования проводилась методами вариационной статистики с использованием прикладных программ для расчета ка микрокалькуляторе "Электроника ИК-71".

РЕЗУЛЬТАТ И 0БШДЕНИЕ ПОДУЧЕННЫХ ДАННЫХ

Популяциснный анализ зозинофилов периферической крови прове-

ден у 27 доноров в техника центрифугирования на непрерывных градиентах плотности с характеристикой плотности: 1.120 г/мл, 1.115 г/ал. 1.096 г/ил, 1.082 г/ал. При относительном содеряашш зозино-филов б периферической крови доноров 2.8% и абсолптном 185.4+14.6 в 1 мкл эти клетки в непрерывных градиентах плотности фиколла-ве-рографина имеют типичное для состояния сохранного иммунного и зо-зинофильного гомеостаза распределение, описанное и другими авторами (Рикиёа. Ые1сЬ, 1989; 5ЬиН е.а., 1988; Рг1п е.а., 1986). Эо-зннофильные гранулоциты доноров характеризуйся минимальной гетерогенностью по плотности и представлены всего двумя популяциями. Иаксимум зозинофилов (96.2%) выделялся на градиенте плотности 1.120 г/мл, это эозннофилы нормальной плотности (ЭНП) по принятой в литературе классификации (Рикис1а е.а., 1989). Нинимум (3.8%) зозинофилов у доноров выделено на следуицем по плотности градиенте -1.115 г/мл, это эозинофилы легкой плотности (ЗЛП). Распределение представлено на рисунка 1.

\ о» ч-

3

£

1.082

1006

1115

ав

1 1А у/уу/уМ&уйУЛ^М^^^^ 2

О 10 20 30 40 50 60 70 ВО й

откос— ное с од-мил эо2-аих>ф\1и,чУй

Рис. 1 Хараггторцст:сл р&спределеяна по плсгпхес-хи зозлнофплсз адсрспьп: лиц

Спонтанное E-PQK-образование выявлено только в преобладав^ популяции зозинофилов (1.120 г/ыл) и составило 11.4+0.42 клеток oi всей эозинофильной популвцнн ка данной градиенте, Эозинофильные клетки на градиенте плотности 1.115 г/ил не образовывали розеток < зритроцнтаыи барака, что в свете литературных данных о значении этих рецепторов может отражать отсутствие активных эозинофилов ' среди клеток с плотностьи 1.115 г/ил, обладавших выраженной спонтанной способностью к неспецифическим клеточно-клеточныи_взаимодействиям в условиях сохранения гоиеостаза организма.

Воздействие адреналина in vitro приводило к достоверному уценьиенив числа зозинофилов нормальной плотности, образующих розетки с эритроцитами барана (3.3Z). Инкубация с обзиданом вызывала увеличение содержания клеток С21.52), несуцих поверхностные Е-ре-цепторы.

Адреналин и обзидан является антагонистами, их воздействие не одни и те Ее бета-рецепторы вызывает разнонаправленные эффекты. Адреналин, являясь бета-агонистом, действует ка бета-рецепторы и через аденилатциклазу изменяет уровень циклических нуклеотидов. Повыаение цАНФ тормозит активации эозинофилов, выделение ими ней-ротоксина, медиаторов аллергической реакции, стабилизирует проницаемость лизосоыальных ыембран, ыенает экспрессии разных рецепторов. Обзидан снигает чувствительность бета-рецепторов к* адреналину, торыозит его эффекты (Н.И.Бересная с соавт., 1981).

Культивирование ЭНП здоровых лиц с сывороткой больных АД увеличивало дола зозинофилов экспрессирувцих Е-рецепторк. Сыворотка больно: Х0 практически не влияла на этот показатель,что свидетельствует,вероятно,о больней содергании биологически активных вецест£ е сыворотке крови больных с обостренней АД в сравнении с Х0.

далее был проведен анализ зозинофилов у больных с обострение! АД. Уровень зозинофилии у больных, в навнх «следованиях колебался

эт 4.8% (270.0+62.4 клеток/икл) при легкой течения заболевания, до 11.8% (684.8+124.0 клеток/мкл) при средней тязести и 18.4% 1433,7+489.4 клеток/икл) при тяяелом течения.

Эозинофильные гранулоциты у больных выделялись на трех градн-ттах плотности: 1.096 г/ал, 1.115 г/ал, 1.120 r/ил, то есть отлк-[ались больней плотностной гетерогенностьп, чем у здоровых лиц за чет появления менее плотной, чей в норне популяция клеток на гра-иенте плотности 1.090 г/ал. Как видно из таблица 1, при АД при сех вариантах клинического течения доля эозинофилов норнальной лотности (1.120 г/ил) бала, как и у доноров, иаксимальной (от 0.6 до 79.6% от всех клеток), но была существенно ниве, чен у до-оров, у которых она составляет 96.8%. Следуацей по численности ыла популяция, выделенная на градиенте 1.115 г/ил, т.е. саиая низкая по своему удельному весу к ЭНП, эта популяция составляла г 15.91% до 35.15% всех клеток при разной тззести болезни. Шши-зльной была доля более легких эозинофилов, выделенных на градизн-з плотности 1.096 г/ал, которые не обнарушшазтся з перифзри-

Таблнца I,

Характеристика эозинофилов по плотности у больных атопичесшш дерматитом разной степени тяпости

Группа Градиент плотности

1.120 г/ал 1.115 г/мл 1.096 г/ил

I 62.7% 30.8% 6.5%

II 79.6% 15.9% 4.5%

III 60.6% 35.1% 4.3%

- 14 -

ческой крови доноров, их доля составляла 4.3-6.5%.

Как видно из таблицы 1 относительные показатели не отражавт зависимости распределения клеток от тяжести состояния в разных градиентах плотности, но за счет нарастания уровня зозинофилии с утяжелением клинического течения заболевания растет абсолвтное со держание клеток, более легких, чем аозинофилы нормальной плотности. У больных первой группы абсолвтное число зозинофилов легкой плотности было 100.7+23.3 клеток/мкл, во второй группе - 133.7+ 25.3 клеток/мкл, в третьей - 564.3+192.8 клеток/мкл.

Доля популяции ЗИП при АД, экспрессирувщих рецепторы к эритроцитам барана составила 18.1+1.5%, что выве, чем у здоровых лиц. В отличие от эозинофилов доноров при АД клетки, относящиеся к лег коплотныы"популяциям, также содержали эозинофилы, экспрессирувцие Е-рецепторы. Доля Е-РОК среди эозинофилов с плотностью 1.115 г/их составила 19.7+1.4%, с плотностьв 1.096 г/мл 7,3+0.6%.

При АД формирование популяционной гетерогенности зозинофилоЕ по плотности, уровне спонтанной экспрессии Е-рецепторов сопровождалось также проявлениями функциональной гетерогенности клеток в тестах с индуцированным Е-РОК-образованием. Снижение числа клетн экспрессирувщих рецепторы к эритроцитам барана со стороны эозинофилов после предварительной инкубации с адреналином обнаружено в тех случаях, когда уровень спонтанного Е-РОК-образования был выс( кик: достоверное снижение Е-РОК-образования под влиянием адренал! на обнаружено у эозинофилов с градиента плотности 1.120 г/мл (12.0+1.4%) и 1.115 г/мл (9.6+1.1%), т.е. ответ на адреналин со стороны ЗЛП был значительно ниве.

Действие обзидана не проявляло четкой закономерности на поп; ляцконнуа зкспрессиЕ рецепторов к эритроцитам барака и было вияв. но только со стороны популяции ЭНП, как у доноров.так и больных I Оно проявлялось повивениен содержания клеток, экспрсссирузд!« ре цепторв к эритроцитам барана почти вдвое па сразнепиэ со спонтан

ним уровнем.

В целой полученные данные свидетвльствуат. что зозннофялн нормальной и близкой к ним плотности при ЙД содераат больпее число активных зозинофилов, чей популяция более логкой плотности. Это проявляется в более высокой представительстве популяций эозинофи-лов со спонтанной экспрессией Е-рецепторов и в их более высоком ответе на поннзавцев и познзащзе воздействие Оариакологических стимулов типа адреналин и обзидан в отноаенин индуцированного Е-РОК- образования.

В отличие от АД, нами не выявлена зозинофилия у больных ХО. что соответствует литературный данным (Ю.А.Легоньков с соавт., 1989). Абсолвтное и относительное содерзание зозинофильных грану-яоцитов в периферической крови составило 133.1+19.6 клеток/мкл и 2.4%. соответственно. Различия набладались в отноаенин распределе-та зозинофилов по градиента« плотности. Я больных ХО они выделяюсь на четырех градиентах плотности: 1.082 г/ил, 1.096 г/ил, 1.115 г/мл, 1,120 г/мл. Количество ЗИП (80.42) было достоверно ни-ie, чеа у здоровых лиц. Основнуи дола ЭЛП (13.2%) составили зози-юфильные гранулоцита градиента плотности 1,082 г/мл (Рис.2).

У больных Х0 удалось определить Е-РОК среди зозинофильных ранулоцитов, полученных на всех градиентах плотности. Максиыаль-:ай уровень Е-РОН-образованиз набладался у ЭНП и практически не тличался от уровня Е-РОК-образования зозинофилов этой зе плот-ости здоровых лиц. Среди ЭЛП у больных с Х0 частота спонтанного -РОК-образования (5.1+0.32) была высокой з популяции самых лег-оплотннх зозинофилов (градиент плотности 1.082 г/нл), что а 2 ра-а низе по сравнения с ЗНП. Далее по активности следуат зозинофилы радиентов плотности 1.096 г/ил (3.4+0.2%) и 1.115 г/мл (1.8+0.1%). рослезивалась зависимость уровня Е-РОК-образованнп от количества озинофилов, выделяемых на градиенте плотности: чей больее видела-

- 16 -

т

ч

^ 1.082

У

• й

| 1.006

л

£

11115

й

§ L12

<5

0 10 2030405060708000 100

<* относительное сод-ние эоэинофилол (Чв)

Рис. 2. Характеристика распределения эоэиыофшюв по плотности у больных хроническим описщрхтоы х - Р<0.05 по сравнению с градиентами плотности 1082 г/ыл. 1096 г/мл. 1115 г/ыл

ется эозинофилов, тем вше был уровень спонтанного Е-РОК-образова-ния. Таким образом, эти данные свидетельствуют, что формирование плотностной гетерогенности эозинофилов сопровождается и фенотипи-ческой гетерогенностью: зозинофилы, полученные на разных градиентах плотности отличались, существенно по числу клеток, несущих рецепторы к эритроцитам барана. Зозинофилы больных ХО на всех градиентах плотности, в том числе 1.120 г/мл не проявляли достоверной зависимости Е-РОК-образования от обзидана и адреналина, что свидетельствует о низком ответе клеток на неспецифические стимулы поникающего и повывающего характера. ЗИП давали значимый ответ на биологические стимулы, сопоставимый с клетками этой популяции у доноров. Существенный прирост Е-РОК-образования под влиянием сыворотки больных ОД может быть связан с наличием в ней в период обострения ЙД различных биологически активных компонентов: И, ЦИК, 1в. компонентов комплемента (Н.П.Торопова, О.й.Синявская, 1983: К.Н.Суворова с соавт.,1989; йаоп, 1991).

Максимальный ответ на добавление сыворотки больных АД получен и ХО со стороны ЗЯП с градиента плотности 1.096 г/ил: отмечалось кратное увеличение Е-РОК-образования, тогда как на ЭЛП градиента отности 1.082 г/мл сыворотка больных АД не оказывала стимулируп-го эффекта.

Эти данные свидетельствуат о присутствии клеток более высокой тенциальной активности среди ЭНП и плотности 1.096 г/мл, чем с адиента плотности 1.082 г/мл. Высокая доля среди легчайпнх по отности эозинофилов (1.082 г/мл), спонтанно образувцнх розетки с итроцитами барана, н отсутствие ответа популяции на биологически ачимые стимулы отличает эту фракции клеток при Х0, Десенситнза-я эозинофилов при уменьяении их плотности в условиях нормального дергания эозинофилов в циркуляции при Х0 мозет отразать предзес-увцув активации и дегрануляцип эозинофилов, входяцих в популяция.

Оценивая наа данные относительно плотностной, функциональной и нотипической гетерогенности эозинофилов при АД н Х0 в целом моа-заклпчить, что ЗЛП не встречавтся у здоровых лиц, но появлявтея лько при заболеваниях. В свете имевшихся литературных данных, ано полагать, что легкие зозинофилы могут иметь минимальнув отность в связи с дегрануляцией, либо изменением продукции кле-к. По напиы данным, уровень спонтанного Е-РОК-образования у них раздо низе, отсутствует вырааенный ответ на адреналин и обзидан, алогические стимулы, что отличает их от ЭНП. Это мозет свиде-иьствовать о десенситизации легкоплотных эозинофилов и уменьае-1 их роли в дальнейаем развитии заболевания, связанного с глист-\ инвазией или аллергией.

Закономерность градиентного распределения других лейкоцитов у 1оров соответствует данным литературы: на градиенте плотности )82 г/мл преобладапт лимфоциты в 100% (В.П.Лозовой с соавт., )6). на градиенте плотности 1.096 г/мл остазтся преобладавшими юнуклеары, на градиентах плотности 1.115 г/ня и 1.120 г/ыл до-

Таблица 2

Распределение лейкоцитов на градиентах плотности фиколла-верографина 'донор'В, больных атопическим дерматитом и хроническим описторхозом

Град и е н т ы п л о Т Н 0 с т И •

1.082 г/ил 1.096 г/мл 1.115 г/мл 1.120 г/мл

Н Э Б Л И Н 3 Б Л И Н Э Б Л и Н Э Б Л Н

* '. *

йД - - - 100 - - 1.8 - 85.3 12.9 78.0 }0.3 0.4 3.2 8.2 71.4 24.6 0.4 - 3.6

хо - 2.4 - 96.9 0.7 - 0.8 - 73.4 25.8 59.3 1.3 4.0 5.7 29.7 84.5 14.5 - - 1.0

Дон. - - ~ 100 - - - - ?|,0 29.0 75.9 0.6 0.6 - 23.0 83.6 7.8 - - 8.8

* - Р<0.05 - мевду больными ЙД К бол?>ННВИ Р или донорами

** - Р<0.05 - меяду больнцми Х0 И'ЗДОРОРШ ЯИЦЗМИ

ннннрупт гранулоцити, вклвчая и эозинооилн, в меньваа количества аоноцитн С Табл.2).

Пролиферативная активность выявлена у всех лейкоцитов, полученных на разных градиентах плотности. Содераание пролнферирупцих клеток у доноров составило 1.8-3.3%, у больных АД 2.1-12.7%, у больных ХО 4.1-9.9%.

Уровни пролиферативной активности лимфоцитов (градиент плотности 1,082 г/мл) значимо отличались у здоровых лиц и больных АД. Они были почти в 5 раз выае при АД (Табл.3). Этот показатель у больных ХО такяе был почти в 2 раза.визе, чем у здоровых лиц. Однако, при ХО на градиенте плотности 1.082 г/кл кроме лимфоцитов выявлена примесь эозинофилов и моноцитов.

Высокий уровень пролиферативной активности клеток периферической крови, выделенных на всех без исключения градиентах плотности, у больных АД и ХО в сравнении с донорами моает отрааать активации мононуклеаров (И.К.Скрипкин с соавт., 1993; На1кзг е.а,, 1991). Высокая пролиферативная активность популяции лимфоцитов ече раз подтверадает роль активации лимфоцитов в патогенезе аллергических и паразитарных заболеваний н косвенно моает отрааать увеличение секреции биологически активных ведеств, об этом ае свидетельствует и повыпение биологической активности сыворотки больных АД к в гораздо неньаей степени у больных ХО, что доказано з опытах с индуцированным Е-РОК-образованием на донорских эозинофилах.

В целом состояние зозянофилоз при ХО, наличие повыиенного со-дераания ЭЛП аоано расценить как иной уровень адаптации механизмов защиты, не смотра на нормальные количества эозинофилов.

Об^ая характеристика популяций зозииофИлов у донороз, при АД и ХО представлена на схеме (Табл.З).

На основании собственных наблюдений и данных литературы ац приходим к заклачеиия, что качественные и количественные изкокзния со стороны эозинофалаз при АД и ХО, проявлявшиеся увеличением доли

таблица з

Характеристика популяций лейокцитов и эозиноФильных грапулонитов у здоровых лип, больных атопическим дернатитон и хроническим описторхозом ЛТОПИ'ТКСКИИ ДЕРПЛТИТ ДОНОРЫ

число ЛНК-син-

тезируххпих клеток на градиенте ?.. 112. 7у.

|увеличение секреции БАВ линфопитани

увеличение количества н и популяций эозинофиловй

П

А Я

[ 1. 12о[" 1. 115] Г. 095 ]

сумнарно спонтанное Е-РОК-образование эози-нофилов 10. 1'/.

[ответ на фармакологичес-1кие стимулы ниже, чем у

число ДНК синте-| зируюшик клеток | на ггадиенте 1. 8-3. зу.

ш

J

базовый уровень секреции БАВ лимфоцитами

□с

нормальное содержание эозинофилов, популяций

¡Г~ | 1.115

—--Г--------1-------

суммарно спонтанное I Е-РОК-образование эози-1 ноФилов 10. 9У-_(

" , ;--Т~ 1 " ----~~

базовый ответ на Фармакологические стимулы

ХРОНИЧЕСКИИ ОПИСТОРХОЗ

число ДНК синте-| зирумпих клеток я на градиенте I 4. 1-9. Ч'. 8

небольшое увеличение секреции БАВ лимофцитами

п

нормальное содержание эози-ноФилов.увеличение популяций

И н

С

Л1

Л о

X

0

1

1.1го

—с

-Ь 1151 1.096 | 1.0б!Г]

х

сунмэрио спонтанное Е-РОК-образование зо-зиноФилов 9. Г/.

г:гт~

ответ на Фармакологические стимулы несколько ниже, чем у доноров

стинулируюший эффект сыворотки больных атоническим дерматитом на зозинофилы доноров выше, чем сыворотки больных хроническим

описторхозом

БАВ - биологически активные вещества х - на основе данных литературы

яегкоплотннх клеток, клеток, зкспрессирущих рецепторы, вагные для {леточных взаимодействий, активны» ответом на нагрузочные тести, а гак ае увеличением доли пролиферирувцнх клеток, являвтся отразени-!й нарувений иммунного гомеостаза организма с вклвчением эозино-жльного компартмента,

ВЫВОДИ. .

1. Гетерогенность эозинофилов по характеру распределения в радиентах плотности, фенотипу и функциональной активности проявля-тся как в условиях нории, так и особенно с условиях изучаемой па-ологии.

2. Для состояния иммунного и эозинофильного гомеостаза здоро-ых ладей типичен базовый уровень числа ДНК-синтезируЕщих лейкоци-ов на разных градиентах плотности (1,8-3.3%), содержание зознно-илов от 110 до 220 клеток/мкл крови, наличие двух популяций зозн-офилов, отличавшихся по плотности (1.120 и 1.115 г/мл), а такзе енотипической и функциональной характеристике.

3. Нарувение иммунного гомеостаза при обострении атопическом эрматите и при хроническом описторхозе характеризуется увеличени-1 процента ДНК-синтезнрувцих лейкоцитов, выделенных на разных заднентах плотности, повыиением биологической активности снворот-{ крови, нарувением эозинофильного гомеостаза, что проявляется фастанием гетерогенности эозинофилов за счет увеличения числа шуляций легкой плотности, содераания Е-РОК и доли эозинофилов, юсобных изменить уровень экспрессии рецепторов к эритроцитам баша в ответ на действие фармакологических и биологических стиму-в.

4. Общим для состояния нормы и изучаемой патологии является сокое от 96.8% в норне до 80.4% при хроническом описторхозе едставительство эозинофилов нормальной плотности среди всех изу-еиых популяций с максимальным среди них содераанием доли актиа-х клеток, характернризугщхся высокий уровнем спонтанной и инду-

цированной фармакологическими стимулами экспрессии мембранных рецепторов, имевших значение в адгезивных клеточно-клеточных взаимо действиях.

5. Принципиальным фенотипически отличием зозинофилов легкой плотности при обострении атопнческоГо дерматита и при хроническом описторхозе от аналогичных популяций клеток здоровых людей являет ся присутствие среди догкдплотннх зозинофнлов при изучаемых патологиях Е-РОК.

6. Особенностьв популяционного состава зозинофилов при хрони ческом описторхозе является появление в больвом количестве (до Ш) самых легких ( 1.082 г/мл) по плотности клеток. Эта популяция обнаруживается на фоне нормального количества зозинофилов в периферической крови при хроническом процессе и не содержит клеток, способных к дополнительной, индуцированной биологическими стимулами, зкспрессии мембранных рецепторов неспецифического адгезивного характера.

7. Популяционный анализ клеток периферической крови на основ градиентного центрифугирования, спонтанного к индуцированного Е-р зеткообразования является информативным для оценки гетерогенности зозинофилов, даже в отсутствие увеличения числа аткх клеток, и мо жет быть полезным при анализе некоторых клинически латентно текуч эозинофилзависимых патологических состояниях.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ИАТЕРИАЛАН ДИССЕРТАЦИИ.

1. Новое в патогенезе н лечении хронических дерматозов у детей и взрослых/Нат.науч.-практ.конф.Актуальные вопросы деркатоло-гиии и Bt.урологии,-Свердловск, 1991.-С.57-56.

2. Atopic deraatitls - а severe suffering for a child and his fasily. Kedicai and social aspects of rehabilitation/Abstracts of an international, interdisciplinary conference.-Bergen, Korirav 13-16 Hay 1992.-P.151.

3. Попудяционкая характеристика аозкиофильных гракулоцитоз ii

больных атопическим дерматитом/Сб.науч.тр.СННКВИ: Актуальные вопросы дерматовенерологии.-Екатеринбург, 1993.-С.35-40.

4. Гетерогенность свойств аозинофилов у больных нейродермитом, бронхиальной астмой и описторхозом/ Тез.науч.-практ.конф. Санаторно-курортное лечение детей, страдавших аллергодерматозамн: подготовка, отбор, оценка эффективности,- Екатеринбург, 1993.-

С.45-46.

5. Стуктурно-функциональная характеристика полинорфноядерных лейокцитов у больных атопическии дерматитом/Тез.мездунар.конф. Йтопических дерматит у детей.-Екатеринбург, 1994,-С.19-20.

6. Цитофлоуыетрическое исследование зозинофильных гранулоци-тов и других лейкоцитов периферической крови больных атопическим дерматитом и хроническим описторхозом/ Тез.науч.практ.конф,-Екатеринбург, 1994.

Список сокращений АД - атопический дерматит Х0 - хронический описторхоз . ЗЛП - зозинофилы легкой плотности ЭНП - эозинофилы нормальной плотности