Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Химико-токсикологическое исследование галоперидола при комбинированных отравлениях

На правах рукописи ООЗ170338

СКОРНЯКОВА АНЖЕЛИКА БОРИСОВНА

ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГАЛОПЕРИДОЛА ПРИ КОМБИНИРОВАННЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ

15 00 02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

2 9 Г,.., ( ¿^О | и лп и .о^л^о^

Ск0[ишА

Пятигорск 2008

003170338

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего

профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

НАУЧНЫЙ РУКОВОДИТЕЛЬ: доктор фармацевтических наук, профессор

Лазарян Джон Седракович ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ: доктор фармацевтических наук, профессор

Попова Ольга Ивановна кандидат медицинских наук Варшавец Николай Петрович

ВЕДУЩАЯ ОРГАНИЗАЦИЯ: ГОУ ВПО «Пермская государственная

фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «24» июня 2008 г в 9-00 часов на заседании диссертационного совета Д 208.069 01 при Пятигорской государственной фармацевтической академии (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Пятигорской государственной фармацевтической академии

Автореферат разослан « /Р» (ДХОлД 2008 г Ученый секпетапь диссеотанионного совета.

да"0РФ~ аук'ПРОФТР 'ЕВК—

Общая характеристика работы

Актуальность темы. В медицинской практике довольно широко применяют психотропные лекарственные средства группы нейролептиков Эти лекарственные препараты составляют «стержень» фармакотерапии в современной психиатрии Несмотря на появление новых нейролептических лекарственных препаратов, использование галоперидола в лечении тяжелых психических расстройств остается наиболее предпочтительным Галоперидол применяют как в монотерапии, так и в комбинациях с другими психотропными веществами Наиболее часто галоперидол сочетакп с производными фенотиазияа, тагами как левомепромазип, хлорпромазин и трициклнческиг»ш антидепрессантами - амитриптилин, имипрамин Наряду с положительным терапевтическим эффектом, галоперидол как индивидуально, так и в смесях с другими психотропными веществами в определенных условиях (при передозировке, злоупотреблении, повышенной чувствительности организма) оказывает токсическое действие на организм человека, в том числе с летальным исходом

Отравления нейролептиками антипсихотического действия занимают 3-4 место среди отравлений лекарственными препаратами Наиболее часто встречаются отравления галоперидолом, среди подростков от 13 до 16 лет, которые принимают его для получения наркотического эффекта и отравления у детей младшего возраста

Длительное применение галоперидола, как и его передозировка, сопровождаются поражением нервной системы по типу экстрапирамидных расстройств с нарушением двигательной активности В наиболее тяжелых случаях отравлений, развивается так называемый синдром «внезапной смерти» Крайне тяжелым осложнением является развитие злокачественного нейролептического синдрома, летальность при котором достигает 15-22% В связи с эгим, галоперидол включен в «Перечень наиченовлний токсичных веществ, наиболее часто встречающихся при острых отравлениях» - приказ МЗ

РФ №460 от 29 декабря 2000 г «Об утверждении учетной документации токсикологического мониторинга» Согласно Международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем (МКБ - 10) галоперидолу присвоен код «Т 43 Отравление психотропными средствами. .»

Анализ данных литературы свидетельствует о том, что были разработаны ряд методик судебно-химического анализа галоперидола, опубликованы отдельные работы по его химико-токсикологическому анализу Вместе с тем не проводилось систематических исследований по разработке методик изолирования, обнаружения и количественного определения галоперидола с помощью доступных, современных физико-химических методов анализа В лшературе отсутствуют данные по химико-токсикологическому исследованию галоперидола при комбинированных отравлениях с другими психотропными лекарственными средствами.

Наработка схемы химико-токсикологического анализа галоперидола и сочетаемых совместно с ним производных фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклических антидепрессантов (амитриптилин, имипрамин) позволит надежно и оперативно диагностировать отравление и выбрать способ детоксикации

В связи с этим комплексное исследование по разработке методик химико-токсикологического анализа галоперидола при комбинированных отравлениях является актуальной проблемой

Цель и задачи исследования: Целью исследования является разработка методик изолирования, идентификации и количественного определения галоперидола в биологических жидкостях с помощью современных физико-химических методов при комбинированных отравлениях с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами (амитриптилин, имипрамин).

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи -осуществить выбор оптимальных условий изолирования галоперидола из биологических объектов (кровь, моча, желчь),

-разработать методики обнаружения галоперидола и его метаболитов при совместном присутствии с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами (амитриптилин, имипрамин) в извлечениях из биологических объектов с помощью современных физико-химических методов, -разработать методики количественного определения галоперидола, его метаболитов, и сочетаемых с ним хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина или имипрамина в извлечениях из биологических объектов, -предложить схему химико-токсикологического анализа галоперидола при комбинированных отравлениях с хлорпромазином, левомепромазином, амитриптилином или имипрамином Научная новична работы. Методом математического планирования эксперимента «латинский квадрат» изучена зависимость степени экстракции галоперидола из водных растворов от значения рЧ спелы, природы органического растворетеля, наличия электрочита и продолжительности экстракции Установлено, что на процесс изолирования галоперидола методом жидкость-жидкостной экстракции влияет значение рН среды и природа органического растворителя

Впервые установлена степень экстракции метаболитов галоперидола из водных растворов и предложены условия их изолирования из модельных проб мочи, позволяющие выделить 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидина до 89% и 3-(4-фторбензоил)-пропионовой кислоты до 86% В опытах на экспериментальных животных показано, что метаболит 3-(4-фторбензоил)-пропионовая кислота в моче не обнаруживается

Найдены оптимальные условия для изолирования галоперидола из биологических жидкостей (кровь, желчь, моча), его идентификации и количественного определения при совместном присутствии с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими гнткдшрессантами (амитриптилин, имипрамин) с помощью химических (хромогенных, и микрокристаллоскопических реакций) и физико-химических

методов (ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ) Наибольший выход изучаемых лекарственных веществ достигается при использовании гидролиза их комплексов с эндогенными соединениями биологических объектов (кровь, желчь, моча) в щелочной среде Изучена зависимость степени экстракции данных лекарственных веществ из биологических жидкостей от их концентрации в исследуемых объектах

Установлено, что при использовании в качестве объекта исследования мочи, диагностику отравлений галоперидолом с помощью хроматографических методов, необходимо проводить по его метаболиту - 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидину При этом анализ мо-ш методом ГЖХ следует проводить после предварительной дериватизации метаболита Используемые условия идентификации с помощью метода ВЭЖХ позволяют провести количественное определение галоперидола, производных фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклических антидеярессантов (амитриптилин, имипрамин) в извлечениях из биологических жидкостей как каждого индивидуально, так и при их совместном присутствии

Практическая значимость работы и внедрение результатов исследования.

Разработаны методики химико-токсикологического анализа галоперидола при комбинированных отравлениях с производными фенотиазина и трициклическими антидепрессантами, которые в отличие от ранее опубликованных позволяют надежно диагностировать факт их совместного применения Обосновано применение этих методик в практике химико-токсикологических лабораторий, что позволит сократить время диагностирования отравления исследуемыми лекарственными препаратами, оценить степень отравления с целью оказания эффективной медицинской помощи пострадавшему

На основании разработанных методик предложена схема химико-токсикологического анализа исследуемых лекарственных веществ, вошедшая в основу новой медицинской технологии для прякгических работников химико-токсикологических лабораторий

Материалы внедрения. Разработанные методики изолирования, идентификации и количественного определения галоперидола, его метаболита - 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидина, хлорпромазина, левомепромазина, амитриптшшна или имипрамина в биологических объектах при комбинированных отравлениях апробированы в химико-токсикологической лаборатории наркологического диспансера, г Ростова-на-Дону и в судебно-химическом отделении Бюро судебно-медицинской экспертизы Краснодарского края, г Краснодара Разработана новая медицинская технология «Химико-токсикологическое исследование галоперидола в биологических -а-иткостях при комбинированных отравлениях с левомепромазином, хлорпромазином, амитриптилином или имипрамином/>, проект которой направлен к рассмотрению в Российский центр судебно-медицинской экспертизы г. Москва

Связь задач с проблемным планом Фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации №01200206156)

Апробация работы. Основные результаты диссертационной работы доложены на 61-й и 62-й конференциях «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» г Пятигорск

Публикации. По теме диссертации опубликовано 11 работ, из них три в ведущих научных журналах, рекомендованных Высшей аттестационной комиссией

Основные положения, выносимые на защиту.

1 Результаты оптимизации условий изолирования галоперидола из биологических объектов (кровь, желчь, моча) с использованием метода математического планирования эксперимента «латинский квадрат»

2 Результаты применения разработанных методик для идентификации и количественного определения галоперидола в извлечениях из биологических объектов при комбинированных отравлениях с хлорпромазином,

левомепромазином, амитриптилином или имипрамином с помощью методов ТСХ, ГЖХ и ВЭЖХ. 3 Схемы химико-токсикологического и судебно-химического исследования галоперидола в биологических объектах при комбинированных отравлениях с хлорпромазином, левомепромазином, амитриптилином или имипрамином Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 147 страницах машинописного текста, содержит 29 рисунков и 29 таблиц, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 162 источников, из которых 44 иностранных и приложения

СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИОННОЙ РАБОТЫ 1 Разработка методик изолировании галоперидола из биологических

ли!дКиС1См при комбинированных отравлениях Для выбора оптимальных условии изолирования галоперидола использовали метод математического планирования эксперимента -«латинский квадрат», позволяющий при минимальном числе опытов, изучить влияние нескольких факторов на степень его экстракции из водной среды органическим растворителем

В качестве независимых переменных изучали одновременное влияние на процесс его экстракции четырех факторов природы органического растворителя, значения рН буферного раствора, присутствия электролита и времени экстракции в минутах

Для экстракции использовали следующие растворители хлороформ, смесь хлороформ-изопропанол (9.1), этилацетат, гексан, гексан-изоамиловый спирт 98 2, толуол, диэтиловый эфир

Значение рН в растворе создавали с помощью универсальной буферной смеси (УБС) Бриттона - Робинсона, величину которой контролировали универсальным иономером Piccolo 2

Электролитами служили натрия хлорид и натрия сульфат с 5% концентрацией в исследуемом растворе, аммония сульфат в 20% концентрации и добавленные до насыщения Экстракцию проводили трехкратно Контроль степени экстракции галоперидола в процессе эксперимента проводили с помощью метода УФ-спекгрофотометрии Сухие остатки после экстракции растворяли в 95% спирте и измеряли оптическую плотность полученного раствора при длине волны 246 нм относительно контроля Расчет содержания галоперидола проводили по оптической плотности стандартного раствора

В результате эксперимента определены оптимальные условия экстракции галоперидола экстрзгент — этчлацетат, значение рН среды-10, позволяющие извлечь его до 99,4%, при этом наличие электролита и время экстракции не оказывали значительного влияния

В оптимальных условиях изолирования галоперидола определена степень экстракции хлорпромазина, левомепромазина, амитриптипина и имипрамкна, которая находится в пределах 96,0-98,2%, а метаболита галоперидола - 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидина составила 85,0-99,8%

2 Изолирование галоперидола из биологических жидкостей при комбинированных отравлениях

На основании проведенных исследований нами разработаны методики изолирования галоперидола из биологических жидкостей Исследование проводилось на модельных смесях, содержащих попарно галоперидол и каждое из исследуемых лекарственных веществ в концентрациях, соответствующих их минимальной, средней и максимальной терапевтическим дозировкам

Методика изолирования к модельным пробам крови, желчи объемом 5 мл, мочи (25 мл) прибавляли 10% раствор натрия гидроксида до значения рН среды 10 (по универсальному индикатору), полученную смесь нагревали на кипящей водяной бане с воздушным холодильником в течение 30 минут. После охлаждения полученную смесь экстрагировали трехкратно этилацетатом по 20 мл в течение 5 минут на перемешивающем устройстве Полученные извлечения

фильтровали через фильтр с безводным натрия сульфатом, выпаривали в токе теплого воздуха до сухого остатка Полученный сухой остаток растворяли в 3 мл спирта 95% и исследовали с помощью методов ТСХ, ПКХ и ВЭЖХ

3 Обнаружение и количественное определение галоперцдола в извлечениях из биологических объектов при комбинированных отравлениях

Нами была изучена возможность использования для обнаружения галоперидола, его метаболита и сочетаемых с ним производных фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклических антидепрессантов (амитриптилин, имипрамин) с помощью химических и фичико-химичсских методов, наиболее широко применяемых в настоящее время в химико-токсикологическом анализе

Хромогенные и микрокристаллоскопические реакции При химико-токсикологическом анализе для идентификации психотропных и наркотических веществ наиболее широко используют реакции с реактивами Марки, Эрдмана, Манделина, 5% раствор железа (III) хлорид, кислоту серную концентрированную, кислоту азотную концентрированную

Реакции проводили на фарфоровых чашках при нагревании до 80°С, поскольку галоперидол не дает характерной окраски с перечисленными реактивами при комнатной температуре В фарфоровую чашку вносили 0,1% спиртовый раствор (от 10 до 100 мкг) каждого из исследуемых веществ, высушивали и к сухому остатку добавляли 1 каплю соответствующего реактива Результаты хромогенных реакций представлены в таблице 1

Таблица 1 — Результаты реакций на исследуемые вещества

Реактив Галоперидол Метаболит

цвет предел обнаружения, мкг цвет предел обнаружения, мкг

Марки желтый 70 -

Эрдмана желтый 90 желтый '»О

Манделина желтый 30 желтый 30

Полученные данные свидетельствуют о том, что указанные реактивы могут быть использованы для диагностики отравлений галоперидолом, поскольку сочетаемые с ним изучаемые лекарственные вещества дают положительные результаты с предложенными реактивами

Микрокристашюскопический метод широко используется в химико-токсикологическом анализе ввиду простоты выполнения, высокой чувствительности и возможности в большинстве случаев исключить громоздкие операции прокаливания и фильтрования

Для выполнения микрокристаллоскопических реакций, на предметное стекло наносили водный р«створ каждого из исследз/е*1ых веществ в количестве 10 мкг (в присутствии 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной и без нее) и рядом каплю соответствующего реактива, затем соединяли их при помощи стеклянной палочки и помещали во влажную камеру Полученные данные представлены в таблице 2

Таблица 2 - Результаты микрокристаллоскопических реакций

Реактив Предел обнаружения, мкг в пробе

галопе-ридол метаболит хлорпрома-зин левомепро-мазин амитрипти-лин имипрамин

Раствор гексацианоферра-та (II) калия - - 1,0 - - -

Сочь Рейнеке 0,5 1,0 - - 0,5 -

Реактив Стефана 1 1,0 3,0 - - - -

Реактив Стефана 2 0,4 - - - - -

Реактив Рахметова 0,8 - - - - -

Реактив Бушарда 0,7 - - - - -

Раствор дихлоротрийодо-цинката калия 0,5 - - - - -

Раствор иадигокармина - - - 0,4 0,3 0,4

Данные таблицы свидетельствуют о том, что для идентификации изучаемых лекарственных веществ могут быть использованы микрокристаллоскопические реакции, причем характерные кристаллы образуются только в присутствии 0,1 М раствора кислоты хлористоводородной

Таким образом, нами предложены цветные и микрокристаллоскопические реакции для идентификации галоперидола, производных фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклических антидепрессантов (амитриптилин, имипрамин) Однако, данные методики могут быть использованы только при индивидуальном содержании каждого из испытуемых веществ в исследуемых пробах

Метод хроматографии б тонком слое сорбента Метод хроматографии в тонком слое сорбента применяется в химико-токсикологическом анализе на этапах предварительного (скрининга) и подтверждающего анализа

Для идентификации исследуемых веществ с помощью метода хроматографии в тонком слое сорбента извлечения наносили на линию старта хроматографических пластин «Сорбфил» 111СХ-11-А-УФ В качестве «свидетелей» на линию старта тех же пластин наносили 1% растворы рабочих стандартных образцов исследуемых лекарственных веществ объемом 1 мкл Хроматографирование проводили в следующих системах растворителей- Б) толуол-ацетон-раствор аммиака концентрированный (50.10 5),

- Бг толуол-гексан-ацетон-диэтиламин(10 30 5 5),

- Бз этанол-раствор аммиака концентрированный (100 1,5),

- Б,-, толуол-гексан-диэтиламин (10 40 10),

- изопропанол-этанол-раствор аммиака концентрированный (50 20 5) Детекцию пятен осуществляли путем просмотра хроматографических

пластин в УФ-свете при длине волны 254 нм При этом все исследуемые вещества проявляются на хроматограмме в виде пятен сине-фиолетового цвета на одном уровне с пятном «свидетеля» При детекции пластин 10% раствором кислоты серной - обнаруживаются производные фенотиазина в виде окрашенных пятен хлорпромазин - розовым, левомепромазин - фиолетовым цветом При обработке хроматеграммы реактивом Драге:щорфа все исследуемые лекарственные вещества и метаболит обнаруживаются в виде

пятен оранжево-коричневого цвета Пределы обнаружения исследуемых веществ представлены в таблице 3

Таблица 3 - Пределы обнаружения исследуемых веществ

Исследуемое вещество Предел обнаружения в пробе, мкг

УФ-свет, 254 им 10% раствор кислоты серной реактив Драгендорфа

Галоперидол 0,2 - 0,1

Метаболит 5 - 4

Левомепромазин 0,05 0,05 0,05

Хлорпромазин л л< 0,05 0,05

Амитриптилин 0,05 0,05

Имипрамин 0,05 | 0,05

Значения Ы^ исследуемых лекарственных веществ и метаболита галоперидола в предложенных системах растворителей представлены в таблице 4

Таблица 4 - Значения Ы^ исследуемых веществ (п=6)

Исследуемое вещество Система растворителей

значение Ы^

& 82 Бз

Галоперидол 55±1,1 52±1,8 ■ 66±0,8 41±0,7 82±1,0

Метаболит - 5±0,4 15±0,2 5±0,1 23±0,4

Левомепромазин 80±0,9 86±0,9 58,5±0,6 75,5±0,7 77±1,1

Хлорпромазин 81±1,3 86,5±1,7 49,5±0,5 75±1,5 75±1,2

Амитриптилин 82±1,2 82±1,3 56±0,8 80±1,1 79±1,4

Имипрамин 76±0,5 80±1,2 50±0,7 78±0,9 76±1,6

Предложенные системы растворителей позволяют достаточно четко попарно разделить галоперидол с каждым из исследуемых веществ, а также отделить анализируемые вещества от соэкстрактивных компонентов крови, желчи и мочи

Таким образом, методика разделения и обнаружения изучаемых вещее методом ТСХ может быть использована в химико-токсикологическо исследовании при ненаправленном анализе, а также для их идентификации пр комбинированных отравлениях

Метод газожидкостной хроматографии

Метод газожидкостной хроматографии нами использован / идентификации галоперидола, его метаболита и сочетаемых с ни лекарственных веществ в извлечениях из биологических объекта Предварительно нями были р?зрзботаны условия газохрочатографическог анализа, позволяющие идентифицировать и разделить исследуемые веществ попарно между собой и от соэкстрактивных компонентов крови, желчи и моч!

Анализируемую пробу (извлечение из биологического объект хроматографировапи на газовом хроматографе фирмы «Кристалл 2000М» пламенно-ионизационным детектором (ПИД) производства ЗАО СК «Хроматэк», г Йошкар-Ола колонка капиллярная НР-5 с неполярно неподвижной жидкой фазой (5% дифенил- и 95% диметилполисилоксан), внутренним диаметром 0,25 мм и длиной колонки 30 м Хроматографировани осуществляли при следующих температурных параметрах детектор ПИД ЗОО'С, испаритель-250°С, колонка-180°С-выдержка 10 минут, с последующ подъемом температуры колонки до 290°С со скоростью 20°С в мину выдержка при 290°С-10 минут, расходы газов азот-7,5 мл/ми водород-20 мл/мин, воздух-200 мл/мин Коэффициент деления потока газ носителя 1 4,5, объемная скорость потока азота, проходящего через колонку, учетом коэффициента деления составила 1,5 мл/мин Общее врем хроматографирования 25 минут

Идентификацию осуществляли, сравнивая времена удерживани исследуемых лекарственных веществ и соответствующих стандартнь образцов Метаболит галоперидола - 4-(4-хлорфенил)-<*-гидроксипиперидин н удавалось обнаружить в моче В связи с этим нами была проведена ег

предварительная дериватизация уксусным ангидридом в присутствии безводного пиридина при 60°С, что позволило идентифицировать данный метаболит с временем удерживания 14,6 мин

Для всех анализируемых веществ были рассчитаны эффективность колонки и пределы обнаружения Полученные данные представлены в таблице 5

Таблица 5 - Хроматографические параметры исследуемых веществ

Исследуемое вещество Время удерживания (мин) Число теоретических тарелок Предел обнаружения, (мкг/мл)

Галоперидол 19,23 !7^086 14,0

Метаболит 7,47 161222 8,0

Хлорпромазин 15,93 571295 3,2

Левомепромазин 16,11 732211 2,5

Амигриптилин 14,04 315777 0,8

Имипрамин 14,25 1158509 2,2

Полученные результаты свидетельствуют о том, что с помощью метода газожидкостной хроматографии можно разделить и идентифицировать галоперидол с каждым из изучаемых лекарственных препаратов и его метаболитом, что может быть использовано в диагностике острых и смертельных отравлений в практике химико-токсикологических и судебно-химических лабораторий

Метод высокоэффективной жидкостной хроматографии

Для выбора оптимальных условий анализа изучаемых веществ методом ВЭЖХ проводили исследование на микроколоночном жидкостном хроматографе «Мшшхром А-02» производства ЗАО «ЭкоНова» в градиентном режиме элюирования на колонке размером 2x75 мм, заполненной обращено-

Лпппт ч! ллпКй1Тгли Т)<*пп+пС<| ПП А О ".........г,Л.......

иири^шиш А 1Ш1ШОИ 1 1 О лу *-> I О*- нидоплпип

использовали водно-ацетонитрильные смеси с добавлением кислоты

трифторуксусной Критериями оптимизации служили коэффициент разделения пиков и ассиметрии пиков Идентификацию осуществляли п времени удерживания и УФ - спектрам поглощения раствора вещест измеренных в кювете хроматографа в режиме остановки потока элюента выбранных условиях (элюент А - 0,1% раствор кислоты трифторуксусно элюент Б - ацетонитрил, скорость потока-100 мкл/мин, аналитические длин волн - 220, 240, 246, 250, 256 нм, время измерения - 0,18 сек, температ} термостата колонки - 35°С, градиент от 10% элюента Б до 80% за 30 мину коэффициент разделения пиков не менее 1 Для количественного определен изучаемых веществ строили грзлуиргточные графики при следующи аналитических длинах волн галоперидол Х=246 нм, 4-(4-хлорфенил)-гидроксипиперидин >.=220 нм, левомепромазин, ичипрамин Х=250 н» хлорпромазин 1=256 нм, амитриптилин >.=240 нм Предел обнаружени исследуемых веществ в растворе составляет галоперидол - 20 мкг/мл, 4-( хлорфенил;-4-гидроксипиперидин - 15 мкг/мл, хлорпромазин - 6,8 мкг/м левомепромазин - 9,0 мкг/мл, амитриптилин - 12,0 мкг/мл, имипрамин 20 мкг/мл

Разработанная методика позволила одновременно проводить обнаружени и количественное определение исследуемых веществ в извлечениях биологических объектов

Данная методика была подвергнута вапидационной оценке по следующи параметрам специфичность, воспроизводимость, линейность, диапазо применения методики, точность, селективность

Специфичность методики подтверждали набором хроматограм извлечений из крови, желчи и мочи, содержащих галоперидол и одно и изучаемых лекарственных веществ, растворов PCO галоперидол хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина или имипрамин растворителя и извлечений из крови, желчи и мочи, не содержащих изучаемы лекарственные вещества Коэффициент разделения для пиков галоперидол метаболит составил 24,2, галоперидол-хлорпромазин - 4,4, галоперидол

левомепромазин - 4,2, галоперидол-амитриптилин - 4,1, галоперидол-имипрамин - 4,0

При оценке разработанной методики проводили проверку линейной зависимости величины отклика от количества определяемого вещества В качестве параметра, характеризующего содержание исследуемого вещества в пробе, использовали площадь пика Линейность графиков для спиртовых растворов исследуемых веществ соблюдается в интервалах концентраций для галоперидола, его метаболита, амитриптилина и имипрамина 50-1000 мкг в 1 мл конечного хроматографируемого раствора, для хлорпромазина и левомепромазина 10-1000 мкг/мл

Для проверки точности и селективности методики готовили методом добавок модельные смеси, включающие извлечение из контрольной пробы крови, желчи, мочи (плацебо) и точных навесок PCO исследуемых веществ Полученные растворы хроматографировали не менее трёх р<и в предложенных условиях

Таким образом, валидационная оценка разработанной методики показала, что полученные результаты не отягощены систематической ошибкой, и относил ельная погрешность (±1,4 - 1,7%) определения находится в пределах относительной погрешности метода

Для определения степени экстракции исследуемых веществ из биологических жидкостей (кровь, желчь, моча), готовили модельные смеси содержащие исследуемые вещества в трех различных концентрациях соответствующих минимальной, средней и максимальной терапевтическим дозировкам

Результаты количественного определения исследуемых веществ в биологических жидкостях, содержащих минимальную терапевтическую концентрацию представлены в таблице 6

Таблица 6 - Результаты количественного определения исследуемы

веществ в извлечениях из биологических объектов с помощью метода ВЭЖХ

Исследуемое вещество Время удерживания, мин С редний выход, %

кровь желчь моча

Гадоперидол 16,8 60,6±5,7 £=9,4% 82,0±4,1 £=5,1% 84,3±3,8 £=4,5%

Метаболит 957 - 95,6±1,4 £=0,2% 87,2±2,6 е=3,1%

Хлорпромазин 19,7 40,4±1,6 е=3,9°о 73,3±2,9 £=3,90-С 60,2±4,01 £=6,7%

Левомепромазин 19,0 43,7±1,5 в-3,5% 68,9±2,0 £-2,8% 75,4±6,6 г=8,7% 66,0±3,5 £=5,3%

Амитриптилин 17,7 47,4±3,8 £=9,3% 85,3±3,7 £=4,4%

Имипрамин 18,2 36,9±2,3 £=6,4% 52,0±0,8 £=1,5% 70,0±2,2 £=3,2%

Данные таблицы свидетельствуют о достаточно высоком выход исследуемых веществ с относительной погрешностью определения н превышающей 9,4% Установлено, что с помощью разработанной методик можно достоверно диагностировать факт приема исследуемых лекарственны веществ от минимальной терапевтической дозировки и выше

В результате проведенных исследований разработана схема химико токсикологического анализа галоперидола при комбинированных отравления с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) трициклическими антидепрессантами (амитриптилин, имипрамин) биологических жидкостях (кровь, моча, желчь), включающая пробоподготовк и анализ с использованием химических реакций и современнь хроматографичсских методов

Рисунок 1 — Схема химико-токсикологического исследования галоперидола в биологических жидкостях (кровь, желчь, моча) при комбинированных отравлениях с хлорпромазином, левомепромазином, амитриптилином или имипрамином

Разработанная схема химико-токсикологического анализа исследуемых веществ апробирована в химико-токсикологической лаборатории наркологического диспансера в г Ростове-на-Дону, в судебно-химическом отделении Бюро судебно-медицинской экспертизы Краснодарского края и будет внедрена в практику работы химико-токсикологических и судебно-химических лабораторий РФ

Выводы

1 Определены оптимальные условия изолирования галоперидола из водны растворов с помощью метода математического планирования эксперимен - «латинский квадрат». Установлено, что на процесс изолирован оказывает влияние значение рН среды раствора и природа органическог растворителя В найденных оптимальных условиях определена степен экстракции метаболита галоперидола - 4 -(4-хлорфенил)-гидроксипиперидина, хлорпрочазина, левомепромазина, амитриптилина имипрамина

2 Разработаны методики изолирования галоперидола, его метаболита сочетаемых с ним производных фенотиазина (хлорпромази левомепромазин) и трициклических антидепрессантов (амитриптилт имипрамин) из крови, мочи и желчи, позволяющие извлечь из данны биологических объектов до 89% ж-следуемых веществ

3 Показана возможность идентфикаций изучаемых веществ с помощь: хромогенных, микрокристаллоскопических реакций индивидуально метода хроматографии в тонком слое сорбента как индивидуально, так и пр сочетании галоперидола с каждым из исследуемых лекарственны препаратов Оптимальными проявителями на хроматографичесг пластинах являются УФ-свет (254 нм) и реактив Драгендорфа

4 Разработаны условия разделения и обнаружения галоперидол хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина, имипрамина метода ГЖХ и ВЭЖХ в извлечениях из биологических объектов (кровь, желч моча) Сочетание двух методов позволяет достоверно идентифицирова исследуемые лекарственные вещества при проведении их химик токсикологического анализа

5 Установлено, что диагностику отравления галоперидолом при исследован мочи методом ГЖХ, необходимо проводить по метаболиту - 4~( хлорфенил)-4-гидроксипиперидина после предварительной дериватизации

6. Разработана методика количественного определения галоперидола, его метаболита, хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина и имипрамина с помощью метода ВЭЖХ в извлечениях из крови, желчи и мочи

7 По результатам исследования разработана схема направленного химико-токсикологического анализа галоперидола в биологических жидкостях при совместном присутствии с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трищшшческими антидепрессантами (амитригттилин, имипрамин), позволяющая идентифицировать и количественно определить исследуемые вещества

8 Разработан проект новой медицинской технологии по изолированию из биологических жидкостей (кровь, желчь, моча) и анализу галоперидола при комбинированных отравлениях с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами (амитрнптилин, имипрамин)

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1 Выбор оптимального растворителя при использовании УФ-спекгрофотометрии в химико-токсикологическом анализе галоперидола и тиаприда // Человек и лекарство тез докл XII Рос нац конгр 18-22 апр 2005 г - М, 2005 - С 131 (Соавт РА Калекин, ДС Лазарян, М Г. Цыбулина)

2 Изучение оптимальных условий экстракции галоперидола из водных растворов // Пути и формы совершенствования фармацевтического образования материалы 2 Всерос науч -метод конф «Фармобразование-2005» 20-22 апр 2005 г - Воронеж ВГУ, 2005 -С 394-396

3 Разработка методики изолирования галоперидола из крови // Человек и лекарство тез докл 12 Рос нац конгр 3-7 апр 2006 г -М,200б - С 587 (Соавт ДС Лазарян,МГ Цыбулина)

4 Идентификация галоперидола и тиаприда в моче методом тонкослойн хроматографии // Судеб -мед экспертиза - 2006 - №2 - С 37-39 (Coa Р А Калекин, Д С Лазарян)

5 Оценка пригодности методики обнаружения и количественного определен галоперидола и левомепромазина в крови с помощью высокоэффективн жидкостной хроматографии // Разработка, исследование и маркетинг нов фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2006 - Вып 61. С 292-294 (Соавт ДС Лазарян, В В. Донченко, М Г. Цыбулина)

6 Химико-токсикологический анализ галоперидола в желчи метод высокоэффективной жидкостной хроматографии при комбинированнь отравлениях // Вестник Воронежского Государственного Университета

2006 - №2 - С 368-370 (Соавт Д С Лазарян, М Г. Цыбулина)

7 Микрокристаллоскопический анализ галоперидола // Разработ исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч

- Пятигорск, 2007 - Вып. 62 - С. 371-373 (Соавт ЕМ Маслов Д С Лазарян)

8 Идентификация амитриптилина, галоперидола и тригексифснидила в мо методом тонкослойной хроматографии // Разработка, исследование маркетинг новой фармацевтической продукции- сб науч тр - Пятигорс

2007 - Вып 62-С 373-374 (Соавт ЕМ Маслова, СН Степаню Д С Лазарян, М Г Цыбулина)

9 Разработка условий газохроматографического анализа галоперидола п комбинированных отравлениях // Разработка, исследование и маркети новой фармацевтической продукции сб науч тр - Пятигорск, 2007 - Вь 62-С 369-371 (Соавт ДС Лазарян, А Г Рассказов)

10 Химико-токсикологический анализ галоперидола в крови методо высокоэффективной жидкостной хроматографии при комбинированнь отравлениях // Судеб -мед экспертиза - 2007 - №3 - С 33-35 (Соав Д С Лазарян, М Г Цыбучинэ)

11 Судебно-химический анализ галоперидола методом газожидкостной хроматографии при комбинированных отравлениях // Современные проблемы медико-криминалистических, судебно-химических и химико-токсикологических экспертных исследований материалы Всерос. науч-практ конф, посвящ памяти проф. Ю М Кубицкого 31 октября - 1 ноября 2007 г - М РИО ФГУ «РЦСМЭ Росздрава», 2007 - С 274-277 (Соавт Д С Лазарян)

СКОРНЯКОВА АНЖЕЛИКА БОРИСОВНА

ХИМИКО-ТОКСИКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ГАЛОПЕРИДОЛА ПРИ КОМБИНИРОВАННЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ

15 00 02 - фсфмацеи гичсская химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

ДИССЕРТАЦИИ НА СОИСКАНИЕ УЧЕНОЙ СТЕПЕНИ КАНДИДАТА ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИХ НАУК

Подписано к печати УС10 рмат бумаги 60x84/16

Бумага книжно-журнальная Печать ротапринтная Уел печ л 0.8 Тираж 100 экз Заказ №

Государственное образовательное учреждение высше профессионального образования «Пятигорская государственн фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению социальному развитию» (357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11)

Актуальность темы. В медицинской практике довольно широко применяют психотропные лекарственные средства группы нейролептиков. Эти лекарственные препараты составляют «стержень» фармакотерапии^ в современной психиатрии. Несмотря на появление новых нейролептических лекарственных препаратов, использование галоперидола в лечении тяжелых психических расстройств остается наиболее предпочтительным. Галоперидол применяют как в монотерапии, так и в комбинациях с другими психотропными веществами. Наиболее часто галоперидол сочетают с производными фенотиазина, такими как левомепромазин, хлорпромазин и трициклическими антидепрессантами — амитриптилин, имипрамин. Наряду с положительным терапевтическим эффектом, галоперидол как индивидуально, так и в смесях с другими психотропными веществами в определенных условиях (при передозировке, злоупотреблении, повышенной чувствительности организма) оказывает токсическое действие на организм человека, в том числе с летальным исходом.

Отравления нейролептиками антипсихотического действия занимают 3-4 место среди отравлений лекарственными препаратами. Наиболее часто встречаются отравления галоперидол ом среди подростков от 13 до 16 лет, которые принимают его для получения наркотического эффекта и отравления у детей младшего возраста.

Длительное применение галоперидола, как и его передозировка, сопровождаются поражением нервной системы по типу экстрапирамидных расстройств с нарушением двигательной активности. В наиболее тяжелых случаях отравлений, развивается так называемый' синдром «внезапной смерти». Крайне тяжелым осложнением является развитие злокачественного нейролептического синдрома, летальность при котором достигает 15-22%. В связи с этим, галоперидол включен в «Перечень наименований токсичных веществ, наиболее часто встречающихся при острых отравлениях» - приказ

МЗ РФ №460 от 29 декабря 2000 г. «Об утверждении учетной документации токсикологического мониторинга». Согласно Международной статистической классификации болезней и проблем, связанных со здоровьем (МКБ - 10) галоперидолу присвоен код «Т 43 Отравление психотропными средствами.».

Анализ данных литературы свидетельствует о том, что были разработаны ряд методик судебно-химического анализа галоперидола, опубликованы отдельные работы по его химико-токсикологическому анализу. Вместе с тем не проводилось систематических исследований по разработке методик изолирования, обнаружения и количественного определения галоперидола с помощью доступных, современных физико-химических методов анализа. В литературе отсутствуют данные по химико-токсикологическому исследованию галоперидола при комбинированных отравлениях с другими психотропными лекарственными средствами.

Разработка схемы химико-токсикологического анализа галоперидола и сочетаемых совместно с ним производных фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклических антидепрессантов (амитриптилин, имипрамин) позволит надежно и оперативно диагностировать отравление и выбрать способ детоксикации.

В связи с этим комплексное исследование по разработке методик химико-токсикологического анализа галоперидола при комбинированных отравлениях является актуальной проблемой.

Цель и задачи исследования: Целью исследования является разработка методик изолирования, идентификации и количественного определения галоперидола в биологических жидкостях с помощью современных физико-химических методов при комбинированных отравлениях с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами (амитриптилин, имипрамин).

Для реализации поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

-осуществить выбор оптимальных условий изолирования галоперидола из биологических объектов (кровь, моча, желчь); -разработать методики обнаружения галоперидола и его метаболитов при совместном присутствии с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами' (амитриптилин, имипрамин) в извлечениях из биологических объектов с помощью современных физико-химических методов; -разработать методики количественного определения галоперидола, его метаболитов, и сочетаемых с ним хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина или имипрамина в извлечениях из биологических объектов; -предложить схему химико-токсикологического анализа галоперидола при комбинированных отравлениях с хлорпромазином, левомепромазином, амитриптилином или имипрамином.

Научная новизна работы. Методом математического планирования эксперимента «латинский квадрат» изучена зависимость степени экстракции галоперидола из водных растворов от значения рН среды, природы i органического растворителя, наличия электролита и продолжительности экстракции. Установлено, что на процесс изолирования галоперидола методом жидкость-жидкостной экстракции влияет значение рН среды и природа органического растворителя.

Впервые установлена степень экстракции метаболитов галоперидола из водных растворов и предложены условия их изолирования из модельных проб мочи, позволяющие выделить 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидина (ХФГП) до 89% и 3-(4-фторбензоил)-пропионовой кислоты (ФБПК) до 86%. В опытах на экспериментальных животных показано, что метаболит 3-(4-фторбензоил)-пропионовая кислота в моче не обнаруживается:

Найдены оптимальные условия для изолирования галоперидола из биологических жидкостей (кровь, желчь, моча), его идентификации и количественного определения при совместном присутствии с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами (амитриптилин, имипрамин) с помощью химических (хромогенных, и микрокристаллоскопических реакций) и физико-химических методов (ТСХ, ГЖХ, ВЭЖХ). Наибольший выход изучаемых лекарственных веществ достигается при использовании гидролиза их комплексов с эндогенными соединениями биологических объектов (кровь, желчь, моча) в щелочной среде. Изучена зависимость степени экстракции данных лекарственных веществ из-биологических жидкостей от их концентрации в исследуемых объектах.

Установлено, что при использовании в качестве объекта исследования мочи, диагностику отравлений галоперидолом с помощью хроматографических методов, необходимо проводить по его метаболиту - 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидину. При этом анализ мочи методом ГЖХ следует проводить после предварительной дериватизации метаболита. Используемые условия идентификации с помощью метода ВЭЖХ позволяют провести количественное определение галоперидола, производных фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклических антидепрессантов (амитриптилин, имипрамин) в извлечениях из биологических жидкостей как каждого индивидуально, так и при их' совместном присутствии.

Практическая значимость работы и внедрение результатов исследования.

Разработаны методики химико-токсикологического анализа галоперидола при комбинированных отравлениях с производными фенотиазина- и трициклическими антидепрессантами, которые в отличие от ранее опубликованных позволяют надежно диагностировать факт их совместного применения. Обосновано применение этих методик в практике химико-токсикологических лабораторий, что позволит сократить время, диагностирования отравления исследуемыми лекарственными препаратами, оценить степень отравления с целью оказания эффективной медицинской помощи пострадавшему.

На основании разработанных методик предложена схема химико-токсикологического анализа исследуемых лекарственных веществ, вошедшая в основу новой медицинской технологии для практических работников химико-токсикологических лабораторий.

Материалы внедрения. Разработанные методики изолирования, идентификации и количественного определения галоперидола, его метаболита - 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидина, хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина или имипрамина в биологических объектах при комбинированных отравлениях апробированы в химико-токсикологической лаборатории наркологического диспансера, г. Ростова-на-Дону и в судебно-химическом отделении Бюро судебно-медицинской экспертизы Краснодарского края, г. Краснодара. Разработана новая медицинская технология «Химико-токсикологическое исследование галоперидола в биологических жидкостях при комбинированных отравлениях с левомепромазином, хлорпромазином, амитриптилином или имипрамином», проект которой направлен к рассмотрению в Российский центр судебно-медицинской экспертизы г. Москва.

Связь задач с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации №01200206156).

Структура и объем работы. Диссертационная работа изложена на 147 страницах машинописного текста, содержит 29 рисунков и 29 таблиц, состоит из введения, обзора литературы (1 глава), экспериментальной части (3 главы), общих выводов, списка литературы, включающего 162 источников, из которых 44 иностранных и приложения.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. Определены оптимальные условия изолирования галоперидола из водных растворов; с помощью метода математического* планирования эксперимента - «латинский? квадрат». Установлено; что на процесс изолирования; оказывает, влияние значение рН среды раствора и природа' органического растворителя. В найденных оптимальных; условиях определена степень, экстракции? метаболита галоперидола? — 4 - (4-хлорфенил)^4-гидроксиииперидина, хлорпромазина; левомепромазина, амитриптилина и имипрамина.

2. Разработаны методики изолирования галоперидола, его метаболита и сочетаемых с ним производных фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклических антидепрессантов (амитриптилин, имипрамин) из крови, мочи и желчи, позволяющие извлечь из данных биологических объектов»до 89% исследуемых веществ;

3. Показана! возможность идентификации изучаемых веществ, с помощью-хромогенных, микрокристаллоскопических реакций; индивидуально и метода хроматографии в тонком слое сорбента как индивидуально, так и прш сочетании; галоперидола с каждым из исследуемых лекарственных препаратов; Оптимальными проявителями на. хроматографических пластинах являются УФ-свет (254 нм) и реактив Драгендорфа.

4. Разработаны условия разделения и обнаружения галоперидола, хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина, имипрамина! методами^ ГЖХ и ВЭЖХ в извлечениях из биологических объектов (кровь,, желчь, моча). Сочетание двух «методов, позволяет достоверно идентифицировать исследуемые лекарственные вещества'; при проведении? их химико-токсикологического анализа;

- 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидина после предварительной дериватизации.

6. Разработана методика количественного определения галоперидола, его метаболита, хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина и имипрамина с помощью метода ВЭЖХ в извлечениях из крови, желчи и мочи.

7. По результатам исследования разработана схема направленного химико-токсикологического анализа галоперидола в биологических жидкостях при совместном присутствии с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами (амитриптилин, имипрамин), позволяющая идентифицировать и количественно определить исследуемые вещества.

8. Разработан проект новой медицинской технологии по изолированию из биологических жидкостей (кровь, желчь, моча) и анализу галоперидола при комбинированных отравлениях с производными фенотиазина (хлорпромазин, левомепромазин) и трициклическими антидепрессантами (амитриптилин, имипрамин).

1.6 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

Изучаемые антипсихотические нейролептики (галоперидол, хлорпромазин и левомепромазин) и трициклические антидепрессанты (амитриптилин и имипрамин) нашли широкое применение в терапии психических расстройств. Совместное применение галоперидола с каждым из исследуемых веществ, используется главным образом в терапии шизофрении, различных видов психозов, маниакальных состояний. Взаимодействие лекарственных веществ может приводить к потенцированию эффектов каждого из них, в том числе с летальным исходом.

Описаны методики идентификации и количественного определения исследуемых веществ в биологическом материале с помощью хроматографических и фотометрических методов. Встречены отдельные работы зарубежных авторов по идентификации и количественному определению галоперидола в биологических жидкостях. Вместе с тем, отсутствуют данные по химико-токсикологическому анализу галоперидола, хлорпромазина, левомепромазина, амитриптилина и имипрамина при совместном присутствии в биологических объектах с помощью современных физико-химических методов.

Отсутствие методик анализа, позволяющих идентифицировать и количественно определить изучаемые лекарственные вещества в биологических объектах, при комбинированных отравлениях осложняет работу специалистов химико-токсикологических и судебно-химических лабораторий при проведении экспертизы.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Галоперидол - 4-[4-(4-хлорфенил)-4-гидрокси-1 -пиперидиния]-1 -(4-фторфенил)-1 -бутанон:

-\ он

CO-CH,-CH,-CH-N YJ/

2 2 2 ч /V/ \)-С1 F

Белый или белый со слегка желтоватым оттенком кристаллический порошок, практически не растворим в воде, растворим в хлороформе, мало растворим в спирте 95% и эфире. Температура плавления от 149 до 153°С, М.м. 375,9, рКа=8,3 [10, 144].

Метаболиты галоперидола 4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидин

ОН

I-N.

CI

Белый аморфный порошок без запаха, горький на вкус, мало растворим в воде, легко растворим в спирте 95%, хлороформе и этилацетате, М.м =211,453.

3-(4-фторбензоил)-пропионовая кислота 1

С-СН2-СН2-С он

Белые с кремовым оттенком блестящие чешуйчатые кристаллы со слабым своеобразным запахом, слабогорького вкуса. На языке вызывает слабое чувство онемения. Мало растворим в воде, легко растворим в спирте 95%, хлороформе и этилацетате, М.м.=196.

Поскольку, экспериментально нами было установлено, что 3-(4-фторбензоил)-пропионовая кислота не обнаруживается в извлечениях из мочи методом ВЭЖХ, данный метаболит не использовался в дальнейших исследованиях (Глава 4).

Производные фенотиазина

Хлорпромазина гидрохлорид (Аминазин) диметиламинопропил) фенотиазина гидрохлорид

2-хлор-10-(3'хн,

CH2-CH2-CH2-I< *HCL сн3

Желтовато-белый слегка гигроскопичный к свету порошок. Неустойчив к свету и воздуху. Легко растворим в воде, спирте 95% и хлороформе, практически не растворим в эфире. Температура плавления 195-198°С, М.м. 355,3, рКа=9,3 [144].

Левомепромазина гидрохлорид (Тизерцин) - 2-метокси-10-(3'-диметиламино-2'-метилпропил)-фенотиазина гидрохлорид

О-СН, ch2-ch-ch2-nc^3

HCL

СН.

Желтовато-белый слегка гигроскопичный порошок. Неустойчив к свету и воздуху. Очень легко растворим в воде, легко растворим в спирте 95%, растворим в хлороформе, практически не растворим в эфире. Температура плавления около 187°С с последующей деструкцией, М.м. 364,9, рКа=9,2 [144].

Трициклические антидепрессанты

Амитриптилина гидрохлорид (Амизол)-5-(3-диметиламинопропилилиден)--10,11-дигидродибенз-[а,Ь]-1,4-циклогептадиена гидрохлорид ch-ch2-ch2-n,

СН,

СК

HCL

Белый кристаллический порошок, без запаха. Легко растворим в воде, хлороформе, спирте 95%, метаноле, ацетоне, практически нерастворим в эфире. Температура правления 195-199°С, М.м. 313,9, рКа=9,4 [144].

Имипрамина гидрохлорид (Имизин, Мелипрамин) диметиламинопропил)-иминодибензила гидрохлорид

N-(3I сн2-сн2-сн2 ск

HCL

СК

Белый или светло-желтый кристаллический порошок без запаха. Легко растворим в воде, спирте 95%, хлороформе, практически не растворим в эфире. Температура плавления 170-174°С, М.м. 316,9, рКа=9,5 [144].

ГЛАВА 2 РАЗРАБОТКА МЕТОДИК ОБНАРУЖЕНИЯ ГАЛОПЕРИДОЛА В БИОЛОГИЧЕСКИХ ОБЪЕКТАХ ПРИ КОМБИНИРОВАННЫХ ОТРАВЛЕНИЯХ С ХЛОРПРОМАЗИНОМ; ЛЕВОМЕПРОМАЗИНОМ, АМИТРИПТИЛИНОМ ИЛИ

ИМИПРАМИНОМ

2.V Химические реакции обнаружения

Несмотря на широкое использование в практике работы судебно-химических и химико-токсикологических лабораторий физико-химических методов анализа для* обнаружения и идентификации лекарственных веществ при отравлениях в извлечениях из биологических объектов, использование хромогенных и микрокристаллоскопических реакций не утратило своего значения.

2.1.1 Хромогенные реакции

Хромогенные реакции отличаются простотой, наглядностью, не требуют использования сложной и дорогостоящей аппаратуры.

При. химико-токсикологическом анализе на психотропные и> наркотические вещества наиболее широко используют реактивы: Марки, Эрдмана, Манделина, 5% раствор железа (III) хлорида, кислоту серную концентрированную, кислоту азотную концентрированную.

Исследование проводили на фарфоровых чашках нагретых до 80"С, поскольку галоперидол не дает характерную окраску с перечисленными реактивами в обычных условиях. Для проверки селективности в этих же условиях параллельно исследовали дроперидол, сходный по структуре с галопери до лом.

Методика анализа: на фарфоровую чашку вносили 0,\% спиртовый раствор каждого из исследуемых веществ в> количествах от Ю^до^ ЮО'мкл (10-100 мкг), высушивали и к сухому остатку добавляли 1 каплю соответствующего реактива. Параллельно проводили контрольный опыт, для подтверждения того, что образовавшаяся окраска является продуктом взаимодействия исследуемого вещества с соответствующим реактивом. Полученные данные представлены в таблице 1.