Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование специфической профилактики бруцеллеза овец

1 7 ОМ «

АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК РЕСПУБЛИКИ УЗБЕКИСТАН

УЗБЕКСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ВЕТЕРИНАРИИ ИМ. АКАДЕМИКА К. И. СКРЯБИНА

На правах рукописи УДК 619:616. 98; 579 . 841 . 935 . 615. 371

МИРЗАЕВ МИРЗАХОН ШАПОЛАТОВИЧ

СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ БРУЦЕЛЛЕЗА ОВЕЦ

16 . 00. 03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

^ диссертации на соискание ученой степени

кандидата ветеринарных наук

VI

Самарканд - 1996

Работа выполнена в лаборатории по изучению бруцеллеза Узбекского ордена Трудового Красного Знамени научно-исследовательского института ветеринарии им. академика К.И. Скрябина.

Научные руководители: Заслуженный деятель науки Российской

Федерации, доктор ветеринарных наук, профессор К.В. ШУМИЛОВ. Кандидат ветеринарных наук Р. Г. ЯР АЙВ.

Официальные оппоненты: Доктор ветеринарных наук, профессор

М.П.ПАРМАИОВ.

Кандидат ветеринарных наук А. АБДУСАТТОРОВ.

Ведущая организация: Самаркандский Государственный

медицинский институт иу.Ф.Ходжаева.

Защита состоится 1996 Г. В 13 час на засе-

дании Специализированного совета К 020.37.01. по защите диссертаций на соискание ученой степени кандидата наук при Узбекском научно-исследовательском институте ветеринарии (704453, Самаркандская область, пас. Тайляк, УзШИВ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотека института.

Автореферат разослан Я1996 г.

Ученый секретарь Специализированного совета, доктор биологических наук

БУЛХАНОВ Р.У.

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темп. Усиешное развитие животноводства в значительной степени зависит от ветеринарного благополучия по инфекци-знанм заболеваниям и, в частности, по бруцеллезу. Бруцеллез не :олько обусловливает резкое снижение производства животнозодчес-гой продукции, но и представляет серьезную угрозу для человека, ¡сотому его ликвидация представляет собой не только большую эпи-¡оотодогическую, но и экономическую и социальную проблемы. В свя-и с этим, совершенствование средств специфической профилактики руцемеза является актуальное задачей ветеринарной науки и прак-ики.

Вопроси эпизоотологии, патогенеза, иммунитета, диагностики, бщей и специфической профилактики бруцеллеза отряжены в работах .Ф.Здрадовского, С.Н.Вышелесского, М.К.Юсковца, К.о.Орлоеа, П.А. эршшювой. П.О.Уласевича, М.И.Иванова, П.Н.Трнленко, К.П.Студента, П.Н.Жованик, ф.п.Локтевой, К.В.Шумилова, И.д.Косилова, А.Н. юьянова, Н.П.Иванова, к.М.Саимакова, А.А.Новицкого, О.М.Юсупова многих других 'ученых.

В настоящее время в нашэч республике и в Других странах мира ш специфической профилактики бруцеллеза овец применяют вакцины ¡готовленные из штаммов 19, Рев-1, бЗНЗЗ, которые создают доста->чно высокий иммунитет (70 - 90 %), однако их применение огранивается довольно еысокой агглютиногенностью, абортогенностью и актогенностьв, что создает определенные трудности для более чной оценки зпизоотолопгаеекой ситуации по бруцеллезу в хозяйс-е. Поэтому появилась настоятельная необходимость в изыскании кой вакцины против бруцеллеза овец, которая бы наряду с высокой нуногенностью обладала также слабоагглютиногеннши и слабовиру-чтными свойствами. Такие свойства в определенной мере присущи амму Вг.те111епз1з "Невский-13", полученному в Узбекское л',«ИВ и Ш ветпрепаратов в 1-381 году. К настоящему времени изучены 5фолог1"-'?ские, ку ^туральные и тинкториальные свойства зтого шма и при изуче- л-. реактогенных, агглютиногенных и иммуноген-: оьсйств на крупном рогатом скоте были получены удовлетворись ные результата.

Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы является екание и разработка эффективной вакцины для специфической

фидактики бруцеллеза овец, а в задачи исследований входит:

- изучить в экспериментальных условиях на морских свинках овцах реактогенные, антигенные и иммуногенные свойства вакцины и штамма Вг.тетепг1з "Невский-13";

- изучить расселяемость и приживаемость культуры вакцинног штамма Вг.те1иепз1з "Невский-13" в опытах на овцах;

- изучить патоморфологические изменения у овец, иммунизиро вонных вакциной из штамма Вг.гое1^епз1з "Невский-13";

определить оптимальную иммунизирующую дозу вакцинног штамма Вг.те111епз1з "Невский-13" для овец каракульской породы.

Научная новизна. Впервые в сравнительных опытах на овцах ка ракульской породы изучены реактогенные, антигенные, и иммуногенны свойства вакцинного штамма Вг.те111ег>51з "Невский-13", выяснен способность этого штамма расселяться и приживляться в организм* овец, изучены патоморфологические изменения внутренних органо привитых животных и показана целесообразность использования этог штамма для изготовления вакцины.

Практическая ценность. Результаты проведенных исследовани; использованы при разработке следующих документов, утверждение Ученым Советом УзНИИВ (протокол N 4 от 4 июля 1995 г):

1. Временная инструкция по изготовлению и контролю да вой жидкой вакцины из штамма Бруцелла мелитензис "Невский-13' против бруцеллеза.

2. Вакцина живая жидкая против бруцеллеза из штамма Еруцелл; мелитензис "Невский-13" (Технические условия).

3. Наставление по применению живой жидкой вакцины из штамм; Бруцелла мелитензис "Невский-13" против бруцеллеза мелкого рогатого скота.

Дано предложение Главному Управлению ветеринарии МОХ Республики Узбекистан о изготовлении на Узбекском биоко^бинате вакциш из штамма Вг-теШег^э "Невский -13" для специфической профилактики бруцеллеза овец (в порядке испытания в широком производственном опыте).

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на:

- заседании сотрудников лаборатории по изучению бруцеллез? Узбекского научно-исследовательского института ветеринарии в 1995 1993,1994,1995,1996 годах; ,

- межлабораторных заседаниях Узбекского научно-исследователе

- а -

coro института ветеринарии 1992-1996 года:;;

- заседаниях ученого соЕетз Узбекского научно-исследователь: coro института вс-терккарпк 1992, 1993,1594 и 1995 годов;

- конференциях молодых ученых и специалистов СамСХИ 1994 и 195 годов;

- на заседании кгфздры микробиологии, клккккл л эпизоотологии Сказанных болггней'вгт. ¿ака Са:,:СХИ 1998 г.

Публикация результатов исследовании. По материалам дкссерта-::j опубликовано Bcceja научны:: статей и четыре сданы в печать.

00 к м и структура диссертации. Диссертация га доли на на 135 рапицах маппгаописного текста и вклкчает введение, сбзср лптера-ры, собстаанные исследования, результата песледсга-

й, выеоды, практические предложения, список литературы.и придания. Работа содержит 12 таблиц п 8 рисунков. Список литературы явчавт 264 источника, в том числе 61 иностранных авторов.

ОснсЕНые положения, которые выносятся на заииту: - материалы учения на изреки:: свинках и овцах реактогенных,антигенных и нм-югенных свойств культуры вакцинного дггаыма В, melitensls "Невс-1-13"; расселяешсть « приживаемость шгаьш "Шескип-13" в ер-•:пзме овец; гпетолегп'-йчекне а гисто:::::.аг-:ескиг исследования ¡¿зпгазских углов н внутренних органов оЕец, иммунизированных 1ьтуроа В. relitensts "НевскшмЗ".

2. МАТЕРИАЛЫ И ШОР ИССЛЕДОВАНИЙ

Работа выполнена е лаборатории по изучений бруцеллеза Уз-ского научно-исследовательского института ветеринарии имени демнка К. IL Скрябина в течение 1992-1994 годов.

В экспериментальной работе было использовано 102 морских нкп и 47 ярок каракульской породы.

Всего было проведено 900 серологических (ISO н& морских Eifcax и 710 на ОЕцах) и 35 аллергических исследований.

Бактериологическому исследованию подвергнуты материалы от '.юрских свинок (850 объектов) и 47 овец ( 1316 объектов).

Эксперименты бшш проведены по методикам ФАО/БОЗ, которые меняются при изучении штаммов Сруцелл и бруцеллезных вакцин. ;рвторная диагностика бруцеллеза, в частности, рез-бенгал про-;РЕЩ, реакция агглютинации (РА), реакция связывания кошле-

ra(FCK), реакция длительного свяаыванвд кошлеиента (РДСК), 'с-риодогическиэ исследования преходили согласно "Наставлена

по диагностике бруцеллеза животных",утвержденного Главным упр< лением ветеринарии МОХ СССР 30 декабря 1982 г.

При работе были использованы вакцинные штаммы Br. welltens "Невский - 13" и Rev-1, стандартные культуры вирулентных штат Br.abortus 54 М/ВГНКИ и Br.melitensis "Новочеркасск-102".

Цифровой материал, полученный в результате исследований,ас вергли биометрической обработке на ЭВМ ЕС-1840 по методу Г.Ф. J кина (1963).

Реактогенные свойства штамма Br.melitensis "Невский-13" иг чены в двух опытах на 47 (12 и Н5) овцах методом клинического с Мотра с измерением температуры тела, регистрацией общего состс ния животных (прием корма, воды и т.п.) в течение 7-10 дней пос вакцинации.

Антигенные и иммуногенные свойства вакцинного штамма Br.tr« Unsis "Невский-13" изучали в сравнении с вакциной Br.melltens "fes-l" На 72 морских свинках и 35 овцах.

Опиты на морских свинках. животных разделили на 5 групп -опытных к одна контрольная. Первую, вторую и третью группы вакц Кирова?!!! штаммом "Невский-13" в дозе соответственно 2 млн, 20 м и 2 млрд микробных клеток. Четвертую группу животных иммунизир вали штаммом Рев-1 в дозе 0.5 Млрд м.к., а пятая (контрольная) вакцинировалась.

Антигенные свойства изучаемого штамма определяли в реакц агглютинации (РА) на 30-й, 60-й и 90-й день после вакцинации.

Иммунитет у привитых морских свинок проверялся путем искус твенного заражения культурой вирулентного штамма Br. abortus ! М/ВГНКИ в дозе 80 микробных клеток (16-я кратной предваритель: оттитрованной минимальной инфицирующей дозы). Через 40-45 дн< после заражения всех животных убивали для бактериологическо: исследования. Бактериологические посевы делали на одну пробир! мясопептонного печеночного глкжозо-глицеринового бульона (МППГГ] и,две пробирки мясопептонного печеночного' глюкозо-глицериново] агара (ШШГГА) из 10 объектов каждой свинки.

Опыты на овцах. Овец раздрлйли на 3 группы по пять живота в каждой. Животных первых .пяти групп вакцинировали культур< штамма "Невский-13" соответственно в дозах: £ млн, 20 млн, 2( млн, 2 млрд и 20 млрд м.к. Шестую группу овец привили вакциной i штамма Рев-1 принятой в практике дозой - 2 млрд м.к. Седьмг

?уппа была оставлена невакцинированкой и служила контролем.

Динамику антител определяли в РВЯ. РА, РСК на 3, 7, 10, 15, 3, 60, 90, 120, 150, 180, 210, и 230 сутки после введения закци-1. Для проверки иммунитета на 240-й день после прививки вакцини-эванных и контрольных овец искусственно заразили подкожно виру-гнтной культурой Br.melltonsls "Ноьочеркаск-102" в дозе 300 тыс к. в объеме 2 мл. Киеотных убивали через 43-49 дней после эара-шия. От каждого из них отбирали по 28-30 объектов (лимфоузлы -)дчелюстные 2, заглоточные 2, околоушные 2, предлопаточные 2, 1Глоточные 2, крестцовые 3, надпочечные 2, тазовые 2, надвымен-¡е 2, паховые 2, надколенные 2, средостешшй 1, бронхиальный 1, 'Эенгпраяышн 1, кусочки, печени, почки, селезенки, матки). Из здого объекта проводились ' -.'"териологические высевы на 1 про-рку МППГГВ и 2 пробирки ШИТА. Посевы кш;убировани при темпе-туре 37°С и учитываю через каадые 0 дней в течение 20 суток.

Выделенные- ¡c/льтуры изучали микроскопией мазков, окрашенных методу Грама и Козловского. Идентификацию культур проводили акцией агглютиниции на стекле с S- и R-антибруцеллезными еыво-тками, рост на средах с фуксином и тионином в разведении красок Б0000, бензилпеницилином натриевой соли (5, 10, 50, 200 ед/ыл) пробой на образование сероводорода.

Расселяемость и приживаемость вакцинного штамма "Невский-13" организме изучали на 12 ярках, иммунизированных двухсуточной аровой культурой из штамма в дозе 2 млрд м.к.. Вакцину вводили цкожно за правым локтевым суставом б объеме 1 мл. После вакци-дии каждые- SO дней убивали по три ярки для бактериологического следования.

Гистологические и гпстохимичзепв исследования лимфатических юв и внутренних органов овец, иммунизированных вакцинным итам-и Br.melltensis "Невский-13", проводились при участии сотрудни-j лаборатории патанатомиии УзНИИВ под руководством профессора Í. Ибадуллаева. Для Солее объективного суждения о характере и шике клеточных популяций в мозговых тяжах и синусах лимфати-:ких узлов проводили подсчет зрелых и незрелых плазматических ¡ток в 50 полях зрения микроскопа, а также число митозов и ютов. Патматериал от убитых овец для исследований отбирался юз 1, 2, 3 и 4 месяца росл? иммунизации.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Реактогенные свойства вакцинного штамма "Невский-13"

Реактогенные свойства штамма были изучены в двух сериях, ont тов на 4? животных путем проведения ежедневных клинических наблк дений. В первой серии опытов, проведенных на 12 ярках каракуль ской породы, в результате наблюдения было установлено, что л вакцинации температура тела у опытных и контрольных животных на холилась в пределах нормы и составляла соответственно 39,5+0,1 39,6+0,05 °С. После вакцинации в дозе 2,0 млрд.м.к. уже в первы день у ярок опытной группы наблюдалось достоверное увеличени температуры тела до 40,5+0,1 °С. Рост температуры продолжался и последующие дни и пик ее отмечался на третьи сутки после вакцина ции (до 41,3 °С), т.е. температура была выше исходных показателе на 1,8 °С. Начиная о 4 дня температура тела постепенно снижалас: , и на седьмые сутки устанавливалась в пределах Физиологически: норм (39,3 °С). Наряду с изменением температуры у вакцинировании: ярок на 3-5 сутки отмечалось незначительное угнетение, вялость i снижение аппетита.

Ео второй серии опытов наблюдения, велись за овцами, вакцинированными разными вакцинами в разных дозах.Были использованы £ дозировок вакцины из штамма "Невский -13"- (2,0 млн.м.к., 20,С МЛН.М.К.. £00,О МЛН.М.К., 2,0 млрд,М.К. и 20 млрд.м.к.), 5 OBeL были вакцинированы штаммом Рев-1 в дозе 2,0 млрд.м.к. и 5 овег служили контролем (не вакцинировались).

Как и в первой серии, у овец опытных групп реакш:.*' на введение вакцины проявлялась, начиная с первого дня. Рост температуры продолжался в течение четырех-пяти дней и в максимуме превышай на 1,8 - 2,0 °С физиологическую норму. Начиная с пятого-иестого дня рост температуры тела прекращайся и она устанавливалась в пределах физиологической нормы на седьмые сутки.

Следует отметить, что у овец, привитых штаммом Рев-1 температурная реакция была ниже.

Наблюдения за подопытными овцами псгглали, что как и в первой серии опытов, у вакцинированных животных отмечалось■ незначительное угнетение, вялость и потеря аппетита на 3 - 5 сутки после

- ? -

ведения вакцины.

Б контрольной группе овец изменений температуры тела и Физи-иогического состояния за период наблюдений не отмечалось.

Таким образом, вакцинный ютамм "Невский -13", введенный в эзах 2,0 -20,0 млрд.м.к. вызывает незначительную температурную ;акцию б первые 3-5 дней после иммунизации, которая на седьмой >нь исчезает без отрицательных последствий на организм каракуль-сих овец.

Что касается температуры тела ярок, привитых вакциной из 'амма Рев-l,- то в целом по группе она была несколько ниже чем у шотных, привитых штаммом "Невский-13", и приходила п норму так» на 6 день после введения вакцины. В контрольной (невакциниро-1НН0Й) группе изменений тем!!<-г,.чтуры тела и физиологического сос->яния за период опытов не наблюдалось.

Таким образом,в двух опытах было установлено, что вакцина из амма "Невский-13" обладает умеренными реактогенрыми свойствами, о выражается в повьгаении на 1,5-2 градуса, температуры тела, стной реакции на введение вакцины в виде гиперемии и небольшой ипухлости, которая исчезает через 3-5 дней после иммунизации, оме того, наблюдается незначительное кратковременное угнетение щего состояния животных-. Хроматы не регистрируется.

3.2. Антигенные свойства вакцинного итамма "Невский-13"

. Антигенные свойства вакцинного штамма Вг. melltensls "Нево-й-13" изучены на ?2 морских свинках и на 35 овцах. В качестве ^троля служила вакцина чз штамма Вг. melltensls Rev-i.

Опиты иа морских свинках, первые три группы были призиты jmmom "Невский-13" в дозах 2 млн, 20 млн и 2 млрд микробных ítok соответственно, а четвертая иммунизировала в дозе 0,5 зд м.к. штаммом Рев-1. Пятая группа не вакцинировалась и служи-контролем.

При исследовании сыворотки крови, морских свинок, привитых в ¡ах 2 и 20 млн м.к., специфические антитела в,ра обнаружены не т. Морские свинки, иммунизированные в дозе 2 млрд м.к., во все !ледовакны« сроки реагировали положительно. На 30-й день имму-1ации реапфовалии все морские свинки (lOOX) со средним титром .6 lffi/и. Через 60 дней после тонизация количество реагирую-

- в -

щих животных уменьшилось наполовину. Средний титр агглютининов составлял 31.2 МЕ/мл. При исследовании сыворотки крови через 90 дней положительно реагировало 5 морских свинок (31.2%) с содержанием агглютининов 5.0 МЕ/мл.

Что касается результатов исследований животных, привитых штаммом Рев-l, то через 30 дней у всех морских свинок в сыворотке крови были обнаружены специфические агглютинины и средний титр РА составил 163,0 МЕ/мл. Из 14 животных, исследованных через 60 дней после вакцинации, положительный результат дали 6 голов (42,8%), а титр агглютининов снизился до 22,5 МЕ/мл. Через 90 дней количество положительно реагирующих животных осталось на предыдущем уровне, но показатели титра агглютининов были значительно ниже - 18,7 МЕ/мл.

Таким образом, результаты изучения антигенных свойств вакцинного штамма Bruce Lia melltensls "Невский-13" на морских свинках показали, что ответная реакция организма, выражающаяся выработкой агглютининов, установлена у животных, иммунизированных в дозе 2,0 млрд м.к.. Активное продуцирование антител отмечалось на 30 день после вакцинации. На 60 и 90 день количество реагирующих животных резко уменьшается, как и средний титр агглютининов.

Морские свинки, привитые вакциной из штамма Рев-1 в дозе 0,5 млрд м.к., отвечали выработкой антигена более активно по сравнению с животными, иммунизированными штаммом "Невский-13". Разница отмечалась как в количестве положительно реагирующих морских свинок, так и в содержании специфических антител.

Опыты нэ овцах. При изучении антигенных свойств вакцины из штамма "Невский-13" были исследоЕаны сыворотки крови в РБП, РА, РСК через 3, 7, 10, 15, 30,60, 90, 120, 150, 180, 210 И 230 дней после иммунизации, в эти же сроки проводились исследования и,у овец, привитых вакциной из штамма Рев-1 (контрольная группа с базовой вакциной),а также у контрольных (непривитых) животных. Из 7 групп опытных овец 5 групп были привиты вакциной ив штамма "Невский-13" в разных дозах (1 гр, - 2 млн м.к., 2 гр. - 20 млн м.к., 3 гр. - 200 млн.м.к., 4 гр. - 2 млрд м.к., 5 гр. - 20 млрд М.К.).

В результате проведенных исследований было установлено, что вакцина из атамма "Не со кий-13" вызывала образование агглютининов» обнаруживаемых б РБП и РА, ущ на трет.'::- день у животных трзтьей, четвертой и пятой групп (соответственно у 40';, loot и 100% ж'льо?-

ütx), в то время как у овец первой и второй групп агглютинины в ¡ыворотке крови отсутствовали. Максимальное количество агглютикк-юв отмечалось во всех пяти подопытных группах чер^з 10 дней пос-ie вакцинации, а их содержание составляло в 1 группе 340 м^/мл, ю 2-й - 260 ме/мл, в 3-ей - 480 не/мл, в 4-й и 5-й по SC0 м--/мл. 1 дальнейшем у всех вакцинированных животных титра агглютининов :нилались. Самое ранее исчезновение антител обнаруживалось в РБП А у животных 2-ой группы (на 60-е сутки), а затем у 1-ой группы на 120 день). Полное исчезновение агглютининов у животных з-ой, -ой и 5-ой групп наблюдалось на 210 день после иммунизации. При сследоракиях в РСК-самое гысокое содержание компл-пнитсвязызаю-их антител было устчновлг;.:< у ярок третьей, четг.^ртсй и 5 групп 30 дни после вакцинации. Средние титры антител у линотных ретьей группы были установлены в разведении 1:15, в четвертей -:42, а в пятой - 1:44. Пепле этого началось скихени-э уровня ?мплемэ нтс в я сываюзлх антител с последующ!!* снилением числа реа-лрущих животных. Полное исчезновение комплементсвлгывзсдах ан-:тел наблюдалось у тавотных первой и второй групп на 30 д&нь, в ! 5Той групп? на 60 день, в третьей группе на 90 сутки и в ч^твер-эй - на 210 сутки поел? вакцинации.

Результаты серологических исследований контрольных групп юц, вакцинированных штачмем Рев-1, показали, что эта вакцина истэ вызывает появление агглютининов в сыворотк.? крови на 3-й нь у всех привитых животных с титром 100 ме/нд.на 7,10, 15 дни еле вакцинации положительные реакций в РБП.и РА были устатовле-у исех животных, но с Солее рысс-ким содержанием антител - 520, О и .1120 ЫЕ/мл соответственно, что было значительно выез чем у ец, привитых штаммом "Невский-13" з дозах 2 и 20 млрд и. к. Это азывает на высокие антигенные свойства вакцины из штамма Br.meteréis FeB-1. Комплементснягыващне антитела в'сыворотке крови эц были обнаружены на 7-й день исследований у 40% яивотяьпе б зведэнки 1:7,5. Еа 15 и SO День, антитела обнаруживались у всех' зотных в более высоком разведении: 1:14 к 1:52. В последующих ;ледозаниях в РБП, РА и FCK у привитых «ивотшя: было отмечаяо ¡женке иммунологического ответа на введение вакцины. Животные. 1гиролЕали положительно в РОК до 210 дня( (20,0%) в ¡^ведения >. в ?кн и РА да?» на 230-й день исследований Обнаружены агглю-шны у всох животных в диагностическом тятрэ . (25 Mg/мл). Это

свидетельствует о Солее длительном сроке сохранения антител в организме после введения штамма Рев-1 по сравнении со штаммом "Невский-13". 1

Таким образом, резюмируя данные по изучению антигенных свойств вакцины из штамма Вг.теШ©гй1з "Невский- можно сделать заключение о том, что она обладает умеренными антигенными свойствами. Внкцинация сопровождается синтезом агглютининов и компл€'мент(Л'.Яоив.'1Ю1циУ антител у привитых морских свинок и овец.

С.С. Иммуногенные свойства вакцинного штамма "Невский-13"

Эти свойства вакцины были изучены в опытах на морских свинках и оыш. В опыте на 55 морских свинках было установлено, что вакцина из штамма "Невский-.13", введенная животным в дозе 2 млрд м.к. вызывает у 907. животных стойкий иммунитет, не уступающий вакцине из штамма Рев-1 (927.).

Также было отмечено, что Полее низкие дозы вакцинного штамма (20 млн м.к.) СОЗДаЕЧ"!! иммунитет у 462 привитых животных или он совсем отсутствовал (доза 2 млн м.к.). Следует отметить, что в цанном опыте была правильно подобрана минимальная заражающая доза вирулентного штамма Нг. аЬогЬиз 54 М/ВГНКИ. От Ро контрольных животных было выделено 88 культур, а индекс инфицированности составил 88 единиц из 100 возможных.

При изучении имчуногенных свойств вакцины из ■ штамма "Невс-кий-13" на овцах перед нами.были поставлены одновременно две задачи: подобрать оптимальную иммунизирующую дозу и определить им-муногеиные свойства вакцины. Сказалось, что концентрация 2 млрд бруцелл микробных клеток в одной прививочной дове способна вызвать иммунитет у 100Х привитых животных. Продолжительность иммунитета 8 месяцев. В этом опыте все контрольные животные варави-лись с высоким индексом инфицированности (44.3).

Таким образом, в опыте на овцах были подтверждены высокие иммуногенные свойства вакцины из штамма "Невский-13" и установлена оптимальная иммунизирующая доза для данного.вида животных.

3.4. Расселяемосгь и приживаемость вакцинного штамма

Br. melltensls "Невский-13" е организме овец

Рассел?емость и приживаемость (культуры вакцинного штамма была изучена на 12 ярках каракульской породи. При этсм для бактериологических Еысевов культуры ежемесячно после вакцинации в течение 120 дней убивали по три ярки. Было установлено, что культура вакцинного штамма Br.melltensls "Невский-13" приливается в организм? овец в точение 3-х месяцев и широко расселяется по внутренним органам и лимфатическим узлчм:

3.5. Гистологические и гистохимические исследования органов овец, иммунизированных вакцинным штаммом

Br.meliterisis "Невский-13"

Результаты проведенных исследований позволили заключить, что тамм Br.melltensls "Невский-13" приживается в организм? огец с олее широкие расселением в первый месяц после иммунизации, о чен видетельствует интегрирозанная перестройка в креветворно-лш?о-1ной системе, характеризующаяся развитием магро- и микрофагаль-зй реакций клеточными трансформациями и ьзаиферацпями, которые в 5ою очередь ведут к появлению большого количества плазматических юток, ответственных за еырзоотку антител. Морфологическая пе-■стройка в органах сопровождается перераспределением в них РНК, икогена и усилением активности кислой фос&атазы р триод наибо-е выраженного иммунного ответа. 'Лтамм "ПевскшМЗ" вызывает в мфоидннх органах сгец выраженные ишунологкческн-? реакции, при-аив вакцинным культурам бруц?лл.

В У в о д и

1. Вакцина из шташа ВгисэПа melltensls "КевсгляМЗ" облает для овец умеренными реачтогенными свойства}®, одняащюоюя шеняем на 1,5-2,0 гг-г^уса температуры тела, слабой местной кцкей г-бил? йокрасшш и ч-?качительной крищЬслосяьэ на мес-n-jívtiw--«-:? и свихвник аппетита в .первые ,3-5 дней

после вакцинации.

Местная воспалительная и общая темпгратурн&я реакция на введение вакпини наиболее выражены- у ярок привитых штаммом Br.mc-litensis "Невский-13" в доае 2 млрд м.к.

3. Вакцина из штамма Br.melltensis "Невский-13" обладает слабыми агглютиногенчыми свойствами.

4. Вакцинация морских спинок и овец штаммом "Невскии-13" сопровождается синтезом агглютининов и комнлементсвязиващих антител в сыворотке крови, которые утрачиваются в организме овец в более ранние сроки (180-210 дн-'й) по сравнению с вакциной Рев-1 (230 и более дней).

5. Пасгсакциналпше антитела у 802 овец, иммунизированных вакциной "Невский-13", исчезают после 3-х месяцев.

6. Вакцинный штамм BruceJ la mellttsnsls "Невский-13" широко расселяется в организме привит1 ix овец и приживается в течение Ш дней с момента иммунизации жиеотных. Интенсивное размножение эт^й культуры происходит в первый месяц после вакцинации.

7. В лимфатических узлах и внутренних органах привитых животных вакциной из штамма Brucella me literals "Невский-13",не образуется абсцессов, некротических очагов и дистрофических изменений, он вызывает обратные реакции рэтикуло-эндотелиальной системы, свойственные вакцинальному процессу.

8. Штамм Brucella melltensis "Невский-13". обладает выраженными иммуногенными свойствами (ЭД-100%), не уступающими вакцине Рев-1.

9. Оптимальная иммунизирующая доза для овец при использовании вакцины из штамма Brucella melltensis "Невский-13" составляет 2 млрд м.к.. Эта доза может быть использована при контроле имму-ногенности вакцины на морских свинках при ее серийном производстве.

10. Вакцина из штамма Brucella mellltensls "Невский-13" в дозе 2 млрд м.к. предохраняет от заражения привитых овец и создает напряженный иммунитет на 8 месяцев.

11. Применение 'вакцины "Неьский-13" позволяет приступить в более ранние сроки к прижизненным диагностическим исследованиям, что дает возможность более точно оценивать и контролировать эпизоотическую ситуацию в хозяйстве и сократить сроки оздоровления стад от бруцеллезу.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

На основании результатов экспериментальных исследований считаем целесообразным изготовление на Узбекским бискокбннат? 100-200 тыс. доз вакцины из штамма Вг. те111впз1з "НеБСктМЗ" для испытания ее в производственных условиях.

Результаты проведенных исследований Еключены в следующие по-1 кументы, утвержденные Учены?,! сонетом УгШШВ 4 июля 1995 г. (протокол N4):

1. Временная инструкция по изготовления и контролю .*:и-вой жидкой вакцины из штамма Бруцелла мелитензис "Невский-13" против бруцеллеза.

2. Вакцина жива? жидкая против бруцеллеза из штамма Бруцелла мелитензис "Невский-13" (Технические условия).

3. Наставление по применению живей жилкой вакцины из штамма "Невский-13" Еруцедла мелитензис против бруцеллеза мелкого рогатого скота.

СПИОЯ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Миргаев М. Денгиз чучн;зларда Бруцелла мелптензнс "Невский-13" стаммли вакцишинг антигенлик ва кммуног^нлик хусусчят-лари //Прс<Гессор-у!>итуБчи.,:ар ва аспирантларнинг бЫшлш з$исобот конференцией ма'рузалар мазмуни.- Самарканд, 199?.- б.36.

2. Шумилов К. В., Мирзаев М., Калшков-В.В. s Скляров О.Д. Изучение агглютиногенных и имчуногенных свойств ат&мма Ер.мелитензис "Невсккй-13" в опытах на морских свинках //Сб.н.тр. ВГНКИ.

- М., 1994.- Т.55.-С.128-135.

I

3. Мирзаев М. ^оракул куйяарнинг органивмида Sr.n-.elitensls "НеЕск'ий-13" штаммасининг таркалгеш ва яшаш:ни урганпа //Еш олнтл-лар ва аспирантлзрнннг 1994 йил игмпй кон*еренцияеи материаллари.

- Самарканд, 1994.- 6.38. 1 ,

4. Яраев Р.Г., Шфзаев М.М., Бураченко H.A. Бруцелла мелитензис "Невский-13" штаымининг коракул куйларида реактогенлик, антигенлик, нммуногенлик хусусиятлари . //Бозср мктиссдиётига Игиш даврида 'кинлок хужалиги шглаб чичэришкнинг ^амасадорлпгини ж: •^аммодари. ,. /2ш олим ?а асгогрантларкянг '!!?95 йиг ¡имий

материяллари.^С&ыарканд, 1995. - С. 116-117.

6. Мирзаев М.Ш., Яраев Р.Г., А!ауроь И.Л. йкепериментад бру целлезда куйлар орган измшшнг тюбики резистентлиги. //Бозор ик;ти содиетига у-тиш даврида кишлоц хужаяиги ишлаб чикаришининг самара дорлигини ошириш иуачмолари ■ /т олим ва аспирантларнинг 199h йи илмий конференциям материаллари. - Самарканд, l99ö.- 6.62-63.

6. Мирзаев М.Ш., Яраев Р.Г., Шокиров Л.Х. Бруцеллез каса.яли гига ^арши омланган ва сунъий касаллантиридган рюракул куйлари иинг кои зардобидаги лиэоцим активлиги. ./Бозор и^тисодиётиг утиш даврида кишло^ хужалиги ишлаб чикаришининг самарадорлигин ошириа муаммолари. /Ёш олим ва аспирантларнинг 1995 йил илми конференцииси материаллари,- Самарканд. 1995.- 6.61-62.

V. Яраев Р.Г.. Ни Г.В., И":лов М.й., Мирзаев М.Ш. Хайвонла бруцеллееи на туберкулезига гурашнинг замонавий усуллари в истицболдаги йуналишлари //Уабакистон дех^ончилик саноат мажмуи нинг таъмикоти /Илмнй сессия материаллари.-Тошкент,1995.-"ФАН" -Т.2.-6.427-431. /

8. Рузимуродов М., Яраеь * , Рахимов А., Бурначенко Н., Мир' заев М. Единый бурцелдезный ан^кг-.ь //Ветеринария.-Тошкент, 1996 -N 2.-с.8-9.

"Цуйларда бруцеллез кэсзллигининг махеус усулда олдини олиш чорасини таксмшлаптирияГ мизуидаги диссертациянннг к.иск/^п матни

Диесертаиияда Br.melitert.3l?. "Неьекий-13" шта-'чпи Еакци'г.кинг 1енгиз чучкалари ва куйларда р^ктогенлик, антигенлнк. иммуноген-1ик хусусиятини, у.амда'змлаш учун оптимал дозаяи ачи^аш, фйлар эрганизмида бу шта'лтинг тар^алгам ея яшзз к.обилэтини yprvura, 'Невекий-13" вакцинами Силан иммунизация килинган ^айвонларнинг ».имфа тугунлари ва, ички органларининг гистологич вз гистохимия гекшириш натижалари ¿-'ритилган.

Теквириш натияилари "Невокий-13" штачминииг куче из реакто-•енлик хусуеиятига зга эканлктш курсатди ва бу уусуоилт эман-■ан куйлар тана хароратшшнг 1,5-2,0 градусга к/тярилиши, вакцина )борилган жойда кизариш ва исся^ шиш лайдо булиб 3-5 кундач к?йин ' юсратсиз йу^олизи Еа вде^з муддат in ила ^айвоялар ергакксчидз устлик ва иштахасининг пасайики билан намоё'н Оулди, Днтиг-члик усусйятини ургангаикмизда штамм кучеиз' антигенлкк хуоусиятига га эканлигини, эмлагандан кейга денгкз чучкалари вз куйлар rçoH ардобида агглютининлар ва коиплемент борловчи антнтелалар пайдо улияш ва ^иска муддат ичида йу^сшшш анюсяаяди. Щу билэя бирга енгиз чучкалари ва фйлар устэдз олиб борилган т'.жсиЗада "Невс-ий-13" етачмли говори иымуногенлик хусусндтини намоеи килди. зм-аш учун оптимая доза 2 млрд. микроб хуяайра деб топклли. Sy до-а 90,ОХ денгиз чуч^алари'ва 100,ОХ ^уйдарни экспериментам за-арланишдан саку1айдн. Br.melltensls "Невский-13" итамми-кушар рганизмкда кенг таркалиб вакиинациядан кейин 90 кунгача яшайди а ^айвонларнинг лкмфч тугунлари,' ички.органларида змлаш жараени-а хое узгаришларни чау,иради. ! , '

- ,U> -

per/c-ct.1011 or tim .^«¿cirio Prophylaxis of id.'^'P fiiiiCôUo::!'-?.

K'.-SUn..,-

hi Ute dU:>rl.v»t (at ti,<>t•• are nm-ii t. ho rosulfs of ^¡cp^rt mc-ntal study c.r til« vaccin* sti ai.n Bi.tnelitensis - "Novsky-13" o eutrH>a-pU.:3 ctn«.l as coitipart'd with th<* vaixslw of Br.avUten sir, "feV'i", 'aV study nhjcto^ric, antl^-nic and jnB.ur.ogeriio qua litlo:.:. ¡-'jftl itig and lift- activity of studlort' strain in sh«->p or-«.-tfiJïr-in, It in i')ft f-iralry-d th<.* optimum Irounlslne dos* of strali "lk-v.-:i.y-13" for £ultv>a-pd£s and sheep, thsre aio sncwn the ■ re-suits of glctoioglcal and ijlstcchomlcal trivéstlt'a» !on of lymphoK nodos and Internal organs ot stviep, Inmunlnsd by the vaocinf fron "Nevsky-13" strain.

The results of invest l»MM<vn show, that the vaccine frcr "HûViîKy-13" strain p^ssi-ss-.'s by incKterat r^acto^tiic qualU tes, expressing by the °o inorwar.!» of body temp» rature», by lo-

cal reaction to the v-iccin* introduction in the term of hypcremi-gatlori arid ctuali swolUne, wh1 -"-h disappear in days aftor immunization. W» od:>'!'vt> ln-.-:iKitiftcaiit., short. U.-rm depression of anlrnâi's général statu. Tho strain "Nèvslcv-13" ow"s by moderate antigenic qualities. Vaccination is rollowed by the synthesis of agglutinins and complement-fixing antibodies In inoculated guinea-pigs arid sheep, !n experiments on guinea-plus and she"3;) we determined the high Unmunogenlc qualities of the vaccine from "Nevsky-33" strain. The optimum immunl^ltig- dose or tho vaccin* is 2,0 mlrd of micr-oblc c«lls for sheep and guinea-pips. It prescrives 90,07. of guinea-pigs and 100,0% of sheep from experimental infection, it is determined, that the vaccine strain Br.moliten-sis - "Nevsky-13" widely settles in sheep organism , alives during 90 days after i'minizaUon and calls in lymphoid nodes aid Internal organs of immuned animals the changes, characteristic for the vaccinal process.