Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Совершенствование диагностики хламидиоза и микоплазмоза домашних плотоядных

На правах рукописи

Литвинов Николай Валерьевич

Совершенствование диагностики хламидиоза и микоплазмоза

домашних плотоядных

(цитоморфометрические исследования эпителиоцитов конъюнктивы)

16.00.03. - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Нижний Новгород - 2008

003447628

Работа выполнена на кафедрах микробиологии, вирусологии и биотехнологии; эпизоотологии и инфекционных болезней Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (ФГОУВПО НГСХА), в Государственном учреждении «Санкт-Петербургская городская станция по борьбе с болезнями животных» (г. Санкт-Петербург).

Научный руководитель:

кандидат ветеринарных наук, доцент Медова Евгения Викторовна

Официальные оппоненты:

доктор ветеринарных наук, профессор Молев Аркадий Иванович

кандидат ветеринарных наук Сисягина Елена Павловна

Ведущая организация: ФГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины»

Защита состоится «16» октября 2008 г. в 900 часов на заседании диссертационного совета Д 220.047.02. при ФГОУ ВГ10 «Нижегородская государственная сельскохозяйственная академия» (603107, г. Н.Новгород, проспект Гагарина, д. 97).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НГСХА (603107, г.Н.Новгород, проспект Гагарина, д. 97). Автореферат опубликован на официальном сайте ФГОУ ВПО НГСХА www.agri.sci-nnov.ru «15» сентября 2008 г.

Автореферат разослан «15» сентября 2008 г. Ученый секретарь диссертационного совета

кандидат ветеринарных наук, доцент

А.В. Пашкин

Общая характеристика работы

Актуальность темы. Инфекционные кератоконъюнктивиты животных в современных условиях приобретают особое значение в связи с высоким ростом офтальмологических болезней. Воспалительные процессы глаз у животных в своей основе часто имеют бактериальную и вирусную этиологию, создавая одну из важных проблем ветеринарной офтальмологии (Л.В. Бардахчиева, H.A. Селезенева, 2005).

Сравнительная частота проявления инфекционных поражений органов зрения, их этиопатогенетическая многофакторность, своеобразие клинических проявлений, а также трудности дифференциальной диагностики этих болезней подтверждают необходимость продолжения научного поиска в совершенствовании и разработке новых, доступных методов их ранней диагностики.

Одним из эффективных и доступных методов диагностики инфекционного поражения животных, позволяющих достоверно характеризовать степень выраженности регенеративно-пролиферативного процесса, являются цитологические исследования (В.Л. Белянин, ] 998).

Однако в современной ветеринарной офтальмологии цитологические исследования до сих пор не получили должного применения, не установлены их информативность и достоверность при дифференциальной диагностике различных воспалительных, инфекционных, опухолеподобных и опухолевых поражений органов зрения, при контроле эффективности лечения кератоконъюнктивитов.

Отсутствие в отечественной ветеринарной офтальмологической практике четких цитологических критериев и морфометрических показателей при различных патологических процессах органов зрения подтверждает актуальность проблемы совершенствования цитоморфометрической диагностики инфекционных болезней животных и определяет тему направления наших исследований.

Цель работы. В сравнительном аспекте и в динамике изучить нозологический профиль заразной патологии домашних плотоядных в условиях г. Санкт-Петербурга, определить роль и место хламидиоза и микоплазмоза и их микстин-фекций в суммарной патологии собак и кошек, в т.ч. при болезнях с поражением органов зрения. Изучить возможность и разрешающую способность цитологических исследований в диагностике инфекционных болезней органов зрения и на

этой основе усовершенствовать систему комплексной диагностики хламидиоза и микоплазмоза животных как составную часть научно обоснованной системы эпизоотического надзора в регионе.

На разрешение поставлены следующие задачи:

1. Изучить роль и место хламидиозной и микоплазмозной инфекции в формировании заразной патологии домашних плотоядных в регионе, в т.ч. в формировании болезней их органов зрения.

2. Изучить в сравнительном аспекте разрешающую способность методов диагностики хламидиоза и микоплазмоза, в т.ч. молекулярно-генетических и цито-морфометрических исследований.

3. Изучить и определить морфометрические показатели клеток эпителия конъюнктивы у здоровых собак и кошек.

4. Изучить цитоморфометрические показатели клеток эпителиоцитов конъюнктивы собак и кошек при заболевании их спонтанными хламидиозом и мико-плазмозом.

5. Адаптировать программно-аппаратный комплекс «ВидеоТесТ» и создать банк данных с объективизацией цитологических критериев диагностики микоплазмоза и хламидиоза домашних плотоядных.

6. Усовершенствовать систему комплексной диагностики хламидиоза и микоплазмоза плотоядных, как составной части научно обоснованной системы проти-воэпизоотических и лечебно-реабилитационных мероприятий при хламидиозе и микоплазмозе собак и кошек в регионе.

Научная новизна. В сравнительном аспекте и в динамике изучены роль и место хламидиозной и микоплазмозной инфекций в формировании суммарной заразной патологии домашних плотоядных в условиях урбанизированных территорий, характер эпизоотического процесса этих инфекций при моно- и микстпрояв-лениях. Впервые изучены и определены цитоморфометрические показатели клеток эпителиоцитов конъюнктивы здоровых и больных хламидиозом и микоплазмозом собак и кошек. Усовершенствована прижизненная диагностика офтальмомико-плазмохламидиоза, установлена высокая диагностическая ценность цитоморфо-метрических исследований при диагностике этих инфекций в популяциях плотоядных. Впервые в условиях г. Санкт-Петербурга разработали схемы-модели получе-

ния и подготовки специмента для цитологического исследования плотоядных на хламидиоз и микоплазмоз; определения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы плотоядных; адаптации программы «ВидеоТесТ «Морфология» для диагностики инфекционных болезней животных.

Практическая цепность. Научно обосновано и практически подтверждено, что инфекционные болезни плотоядных (хламидиоз и микоплазмоз) относятся к числу управляемых инфекций. На основе результатов исследований разработаны: схема-модель получения и подготовки специментов для цитологических исследований плотоядных на хламидиозный и микоплазмозный кератоконьюнктивит (2006); схема-модель определения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы плотоядных (2008); схема-модель адаптации программы «ВидеоТесТ «Морфология» для диагностики инфекционных болезней (хламидиоза и микоплазмоза) и введения результатов измерения в пособие «Ветеринарная онкология (отбор и подготовка специментов для цитологического исследования)» (2006).

Положения, выносимые на защиту:

1. Хламидиозная и микоплазмозная инфекции плотоядных в условиях г. Санкт - Петербурга - важные составляющие суммарной заразной патологии собак и ксшек с особенностями характера эпизоотического проявления.

2. Разрешающая способность клинико-эпизоотологических, молекулярно-генетических и цитоморфометрических исследований как составляющие диагностического комплекса при хламидиозе и микоплазмозе плотоядных.

3. Цитоморфометрический метод прижизненной диагностики хламидиоза и микоплазмоза отличается высокой разрешающей способностью, объективностью показателей ядерно-цитоплазматического соотношения клеток эпителиоцитов конъюнктивы у здоровых и больных животных.

4. Использование системы «ВидеоТесТ «Морфология» позволяет усовершенствовать и повысить объективность и оперативность цитоморфометрических исследований в комплексной системе прижизненной диагностики инфекционных болезней животных и повысить эффективность и достоверность диагностики хламидиоза и микоплазмоза животных в современной ветеринарии.

Пути реализации: Результаты исследований могут быть использованы для совершенствования цитоморфометрических исследований при диагностике других инфекционных болезней животных, а также в учебно-педагогическом процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.

Апробация работы. Методическая основа, результаты исследований доложены и обсуждены на заседаниях Совета ветеринарного факультета ФГОУ ВПО НГСХА (2005-2008 гг.), на научно-практических конференциях специалистов государственных и приватных ветучреждений г. Санкт-Петербурга (2006, 2007, 2008 гг.), на заседании издательского совета НГСХА (2006, 2007 гг.), журнала «Ветеринарная практика» (2007 г.), на заседании УМО (г. Москва, 2007 г.), на межкафеде-ральном заседании профессорско-преподавательского состава НГСХА (2008 г.).

Результаты исследований опубликованы в 4 научных работах, в т.ч. в изданиях, рекомендованных ВАК для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций.

Внедрение. Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в Санкт-Петербургской городской и в районных станциях по борьбе с болезнями животных.

Основные положения диссертационной работы вошли в монографию «Ветеринарная онкология (отбор и подготовка специментов для цитологического исследования)», рекомендованную департаментом научно-технологической политики МСХ РФ (2006 г.); в учебно-методические пособия «Экологическая и противоэпи-зоотическая защита современного животноводства» (рекомендовано к изданию УМО, 2006 г.) и «Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела» (рекомендовано к изданию УМО, 2006 г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 155 страницах компьютерного текста, включает введение, обзор литературы, собственные исследования и их обсуждение, выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 21 таблицей, 31 рисунком и 8 фоторисунками. Список использованной литературы включает 211 источников, в т.ч. 40 иностранных авторов.

Собственные исследования

Материалы, методы и объемы исследований

Диссертационная работа выполнялась в 2005-2008 гг. на кафедрах микробиологии, вирусологии и биотехнологии; эпизоотологии и инфекционных болезней Нижегородской государственной сельскохозяйственной академии, в госветучреж-дениях г, Санкт-Петербурга

Клинико-эпизоотологические, молекулярно-биологические, цитологические исследования выполнены в ветеринарной лаборатории ГУ «Санкт-Петербургская городская ветеринарная станция» (г. С.-Петербург).

Для изучения эпизоотического проявления хламидийной и микоплазмозной инфекций среди мелких непродуктивных животных на урбанизированных территориях, а также для совершенствования методов их эпизоотологической диагностики провели ретроспективный анализ и статистическую обработку:

ведомственных обзоров и информации ветеринарных лабораторий, районных станций по борьбе с болезнями животных г. Санкт-Петербурга;

результатов клинико-эпизоотологических, молекулярно-биологических и цитологических исследований при диагностике микоплазмозной и хламидийной инфекций домашних животных.

Изменение тенденции в динамике эпизоотического проявления хламидиозов и микоплазмозов животных под воздействием различных факторов изучали путем обоснования и проверки гипотез о причинно-следственных связях, поддающихся изменениям под факторным воздействием.

Клинико-эпизоотологические, молекулярно-биологические исследования при диагностике хламидийной и микоплазмозной инфекций домашних животных проводили совместно с О.М. Параевой, A.C. Николаевой, а цитоморфометрические исследования - лично на базе ветлаборатории ГУ «Санкт-Петербургская городская ветеринарная станция».

Результаты исследований и установленные алгоритмы использовали при совершенствовании комплексной диагностики моно- и микстинфекций плотоядных в условиях урбанизированной территории.

Подробное изложение отдельных методик клинико-эпизоотологических и цитоморфометрических исследований при диагностике хламидийных и микоплаз-мозных инфекций плотоядных отражено в конкретных разделах данной работы.

Молекулярно-генетические исследования при диагностике заразных болезней плотоядных проводили в соответствии с «Методическими указаниями по индикации генома и штаммовой дифференциации вируса чумы плотоядных с помощью ПЦР и секвенирования фрагментов гена Н» (1998), «Методическими указаниями по индикации генома и штаммовой дифференциации парвовируса плотоядных животных методом полимеразной цепной реакции и секвенированием фрагмента VP1 гена» (1998), «Методическими указаниями по выявлению хламидиоза методом полимеразной цепной реакции» (1998), «Наставлением по применению тест-системы «Хла-Ком» для диагностики хламидиоза животных и птиц методом полимеразной цепной реакции» (1999), «Наставлением по применению тест-системы «Мик-Ком» для диагностики микоплазмоза методом полимеразной цепной реакции» (1998).

Роль и место конкретных нозоформ в общей патологии животных, многолетнюю и годовую динамику их заболеваемости, временные, популяционные и территориальные границы эпизоотического проявления изучали с использованием ретроспективного и проспективного эпизоотологического анализа и эпизоотологи-ческих критериев оценки эпизоотической ситуации.

При проведении цитологических исследований руководствовались учебно-методическим пособием «Отбор и подготовка специментов для цитологического исследования» (Н.Новгород, 2006). Морфометрию компонентов исследуемых специментов проводили на комплексе «ВидеоТесТ «Морфология 4,0», для измерения и расчета отношений площади ядра к площади цитоплазмы (клетки) использовали методику «NCR».

Оценку цитологической картины проводили по Смолянникову A.B. (1995 г.). При этом начинали оценку с определения фона препарата, наличия и характера межуточного вещества, определения количества и расположения клеток, образования комплексов или структур, сохранности клеточных границ, размера и формы клеток, устанавливали формы и размеры ядра, его расположение и окрашивае-мость. Оценивали ядерно-цитоплазматическое соотношение и характер строения

хроматина, количество и формы нуклеотидов, размер и четкость их границ, объем, окраску и четкость границ цитоплазмы, ее включений и вакуолизации; устанавливали наличие многоядерных клеток и атипичных фигур их деления.

Разрешающую способность методов исследований изучали в сравнительном аспекте с традиционными методами, применяемыми в практической ветеринарии.

В работе использован комплексный эпизоотологический подход, элементы современной прогностики, методы современной морфометрии, а также статистические методы контроля качества по Хитоси Кумэ (1990). Полученные данные обрабатывали по H.A. Плохинскому (1970).

При организации клинико-эпизоотологических, молекулярно-генетических исследований участвовали ветеринарные специалисты Санкт-Петербургской городской станции по борьбе с болезнями животных О.М. Параева, A.C. Николаева, С.Н. Омарова, а также д.вет.н. A.A. Алиев, к.вет.н., доцент кафедры микробиологии, вирусологии и биотехнологии ФГОУ НГСХА Е.В. Медова. Их участие в исследованиях отражено в совместно опубликованных научных статьях.

Результаты исследований

Многофакторпый анализ причин эпизоотического проявления инфекционных паразитарных систем в условиях изучаемого региона проводили под контролем специалистов Управления ветеринарии администрации города и установили, что в г. Санкт-Петербурге до критическихуровней возросла численность домашних плотоядных, увеличилось количество бездомных животных, чем создалась серьезная социальная аномалия в городе. Более того, подтвердили несоблюдение владельцами животных правил их содержания. Выявлены случаи досгупности бездомных животных к отбросам пищевых продуктов, а также рост благотворительности населения к бездомным животным. На территории жилых массивов города создаются эпизоотические и эпидемические ситуации зоонозов, обусловленные бродячими (бездомными) животными. Ежегодно в городе регистрируется до 17 тысяч обращений населения по причине покусов их животными. Недостаточно эффективно проводятся в городе мероприятия по регулированию численности бездомных животных. Подтвердили, что численность домашних плотоядных в городе за последние годы возросла на 23%. Факторами, способствующими эпизоотическому проявлению зоонозов, являются запоздалая обращаемость владельцев животных за

ветеринарной помощью, несвоевременная диагностика заразных болезней животных, общедоступность мест выгула здоровым и больным животным, недостаточный объем работ по санитарной очистке города, в т.ч. и по дератизации, а также неосведомленность населения об опасности зоонозов и о путях передачи возбудителей от животных людям.

Совместно со специалистами Управления ветеринарии администрации города разработали схему-модель многофакторного воздействия на эпизоотическую ситуацию и научно обоснованную систему слежения за популяцией бездомных плотоядных в городе, как неотъемлемую часть программы мониторинга за состоянием экосистемы города. В городе организован и функционирует общегородской приют для безнадзорных животных.

Эпизоотологический мониторинг за формированием нозоформ в популяциях домашних плотоадиых в условиях изучаемого региона

Изучили условия и показатели формирования нозологического профиля заразной патологии плотоядных в городе и подтвердили, что в популяции собак функционируют в основном 17 нозоформ (96,2% суммарной заразной патологии этого вида животных), а в популяции кошек 19 нозоформ, из них на отодектоз приходится 73,2% суммарной заразной патологии кошек.

Разработали схемы-модели суммарной заразной патологии собак и кошек в изучаемом регионе и подтвердили необходимость постоянных мониторинговых исследований по определению изменений эпизоотического и эпидемического риска зоонозов среди домашних плотоядных и людей.

Совместно с О.М. Параевой и A.C. Николаевой провели ретроспективный эпизоотологический анализ соактантов инфекциопных паразитарных систем в изучаемом регионе и установили, что соактантами 16 паразитарных систем в качестве возбудителей являются многоклеточные паразиты на разных стадиях их биологического цикла развития, в 12 из которых вовлечены собаки (58,3%) и в 14 -кошки (89,4%). Из 5 паразитарных систем-вирозов в 3-х участвуют собаки и 2-х -кошки. В качестве облигатных и факультативных хозяев собаки и кошки вовлечены в 6 бактериозов.

Разработали линейно-радианную схему-модель степени участия различных видов домашних плотоядных в эпизоотическом проявлении сформировавшихся и функционирующих на территории мегаполиса паразитарных систем.

Одновременно изучили роль и место хламндийной и микоплазмозной инфекций в суммарной заразной патологии домашних плотоядных в изучаемом регионе и установили, что по учетао-отчетной информации хламидийная инфекция в популяции собак и кошек занимает незначительную долю - менее одного процента от суммарной заразной их патологии, микоплазмозная инфекция - несколько большую долю. Нередко эти инфекции протекают одновременно в форме микстинфекции. Материалы ретроспективного анализа не отражают эпизоотической ситуации по этим инфекциям в условиях города Санкт-Петербурга в настоящее время, эти инфекции в популяции домашних плотоядных встречаются значительно чаще, но нередко протекают под другими диагнозами.

Сравнительная оценка методов диагностики хламидиоза и микоплазмо-за плотоядных в условиях г. Санкт-Петербурга

Изучили клнннко-эпизоотологические показателя хламвдийной инфекции плотоядных и подтвердили, что эта инфекция имеет особенности эпизоотического проявления.

Из общего количества заболевших хламидиозом собак 72,3% случаев приходится на собак в возрасте 1,5 лет и старше, 22,2% - на собак в возрасте от 6 месяцев до года и 3,5% - от 3,5 до 6 месяцев. Практически не установлено случаев заболевания хламидиозом собак в возрасте до 3 месяцев. Чаще (55%) заболевают хламидиозом собаки женского пола.

В 50% случаев хламидиоза кошек составляют животные старше 1,5 лет, по 16,7% случаев хламидиоза приходится на кошек 3,5-6-месячного возраста и от года до полутора лет, в 13,3% случаев - котята до 3,5-месячного возраста.

В популяции кошек хламидиоз чаще регистрируется среди особей мужского

пола.

Разработали линейно-радианные схемы-модели региональных особенностей эпизоотического проявления хламидийной инфекции домашних плотоядных животных в изучаемом регионе.

Изучили годовую динамику эпизоотического проявления хламидийной инфекции в популяциях домашних плотоядных и подтвердили, что у собак и кошек хламидиоз протекает круглогодично, с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками в весенне-летний период.

Изучили клинико-эпизоотологические показатели микоплазмозной инфекции плотоядных и выявили выраженную эпизоотическую ее неравномерность в различных группах животных. Из общего количества случаев микоплазмозной инфекции 59% - среди кошек и 41% - среди собак. У собак эта инфекция чаще регистрировалась среди животных старших возрастов. Около 60% заболевших ми-коплазмозом животных оказались особями женского пола.

Среди кошек микоплазмозная инфекция регистрировалась у всех половозрастных групп, но наиболее поражаемыми также оказались животные старше 1,5 лет и 3-6-месячного возраста (23,2%).

В годовой динамике заболеваемости при микоплазмозе плотоядных установили сезонные эпизоотические надбавки в весенне-летний период. Изучили клиническое проявление спонтанного микоплазмоза и хламидиоза среди домашних плотоядных, используя адаптированную схему-модель учета отклонений в состоянии здоровья животных, больных хламидиозом и микоплазмозом.

Подтвердили, что у собак при хламидийной и микоплазмозной инфекциях отмечаются патологическое течение беременности и сопутствующие ей осложнения (аборты в первой половине щенности, эндометриты, маститы и др.). У кошек хламидиоз и микоплазмоз отличаются частым бессимптомным носительством и весьма продолжительным инкубационным периодом болезни.

Разработали схему-модель клинико-эпизоотологического проявления диагностики спонтанного хламидиоза и микоплазмоза домашних плотоедных и подтвердили, что она может быть использована в комплексной диагностике этих инфекций, играя вспомогательную роль.

Совершенствование и объективизация методов диагностики спонтанного хламидиоза и микоплазмоза плотоядных в изучаемом регионе. Изучили возможность и разрешающую способность диагностики хламидиозной инфекции методами выявления и изоляции возбудителя, определения иммунологических и го-меостатических последствий пребывания возбудителя в организме зараженных

животных. На основе анализа результатов лабораторной работы по диагностике заразных болезней животных установили, что для повышения разрешающей способности и оперативности диагностического (лабораторного) контроля за развитием инфекционного и эпизоотического процессов в популяциях животных, и в частности по предупреждению рассеивания предполагаемого возбудителя инфекции или инвазии (по первичному клиническому диагнозу), микробиологические (бактериологические) и биологические исследования следует проводить в специализированной, режимной ветеринарно-диагностической лаборатории.

Разработали схему-модель диагностической возможности отдела генодиагностики клинической ветеринарной лаборатории.

Изучение возможностей автоматизации оцепки патологического процесса при диагностике спонтанных инфекционных болезней животных. Провели исследования с помощью системы «ВидеоТесТ» по оценке цитопатических аномалий клеток у животных при заболеваниях глаз инфекционной этиологии и интерпретацию выявленных дегенеративно-деструктивных изменений в клетках.

С целью повышения достоверности результатов цитологических исследований и их оценки провели изучение возможности использования информационных технологий в работе цитологического отдела ветеринарной клинической лаборатории Санкт-Петербургской городской станции по борьбе с болезнями животных.

В ходе проводимых исследований подтвердили, что применение современных информационных систем дает значительный экономический, практический и организационный эффект, упрощает хранение полученных диагностических данных, сокращает время, затраченное на исследования.

На основе результатов исследований разработали схему-модель основных возможностей использования программы «ВидеоТесТ», определили перечень решаемых с помощью данного комплекса задач: морфометрия гистологических срезов, анализ патологических изменений клеток крови, оценка ядерно-клеточного (цитоплазменного) отношения, построение и анализ эритроцитарной гистограммы, подсчет и анализ тромбоцитов, цитофотометрия и др.

Сравнительная оценка результатов различных методов исследования спецнментов от животных с подозрением на хламидиоз и микоплазмоз. Провели анализ разрешающей способности ПЦР при диагностике инфекционных бо-

лезней домашних плотоядных в условиях города Санкт-Петербурга и подтвердили, что в популяции собак подтверждение предположительного диагноза молекуляр-но-генетическими исследованиями составляет 33,2%, среди кошек - от 22,4% до 53,8%. На основе полученных результатов исследований разработали алгоритм разрешающей способности ПНР при различных инфекционных болезнях и сконструировали схему-модель эффективности ПЦР в ветеринарной практике региона, подтвердив, что использование молекулярно-генетических исследований способствует снижению гипердиагностики болезней животных на этапе предположительного диагноза, устанавливаемого клинико-эпизоотологическими методами.

Цитоморфометрические исследования эпителиоцитов конъюнктивы собак и кошек при кератоконъюнкгивитах, вызванные Chlamydia spp. и Mycoplasma spp. Исследования проведены на базе отдела цитологии ветеринарной клинической лаборатории Санкт-Петербургской городской станции по борьбе с болезнями животных.

Установили, что диагностика хламидиоза плотоядных традиционно применяемыми методами не всегда эффективна. Цитологическими исследованиями возможно устанавливать в цилиндрическом, метаплазированном плоском эпителии, а также в макрофагах цитоплазматические включения, характерные для хламидиоз-ной инфекции, даже при образовании L-подобных форм хламидий. Большинство штаммов хламидий накапливают гликоген в цитоплазматических вакуолях, что способствует образованию различных по морфологии включений (ретикулярных телец), обнаружение которых в исследуемых клетках эпителиоцитов конъюнктивы или в макрофагах позволяет сузить круг дальнейшего поиска возбудителей. В эпи-зоотологических экспериментах на 122-х собаках и 253-х кошках с первичным предположительным диагнозом «хламидиоз» или «микоплазмоз» молекулярно-генетическими исследованиями диагноз «хламидиоз» подтвердили в 16,3% случаев, микоплазмоз - в 48,7% случаев. Цитологическими исследованиями эти инфекции подтверждены соответственно в 14,8 и 49,6 % случаев. На основании полученных результатов исследований разработали схему-модель сравнительной оценки разрешающей способности ПЦР и цитологических методов исследования.

Разработали схему-модель сезонной вариантности подтверждения предположительных диагнозов на хламидиоз плотоядных в ПЦР и цитологическими исследованиями.

В эпизоотологическом эксперименте по сравнительной оценке разрешающей способности ПЦР и цитологических исследований при диагностике микоплазмоза плотоядных установили, что наибольшее количество подтвержденных диагнозов (в ПЦР - 73,9%; цитология - 82,3%) установлено ежегодно в ноябре, самый низкий уровень подтверждения предположительного диагноза в ПЦР установили в марте (18,2%), при цитологических исследованиях в мае - 0%. Разработали схему-модель годовой динамики подтверждаемое™ диагноза «микоплазмоз» домашних плотоядных и подтвердили сезонные надбавки в ноябре ежегодно.

Совершенствование методов подготовки спсциментов для цитологических исследований плотоядных при подозрении у них хламидиоза и микоплазмоза. Разработали специальную схему-модель получения и подготовки сие-циментов для цитологических исследований плотоядных на хламидиоз и микоплазмоз и подтвердили, что цитоморфометрические исследования с использованием сложной системы «ВидеоТесТ «Морфология» следует проводить лишь после отработки и освоения программы NCR и всех ее вспомогательных подсистем, тщательной апробации системы, а также специальной подготовки специментов и аккредитации самого цитологического отдела.

Изучение морфометрических показателей клеточной популяции эпителия конъюнктивы здоровых собак и кошек в условиях г. Санкт-Петербурга.

Используя схему-модель подготовки к исследованиям специментов, провели эпизоотологический эксперимент на 23 клинически здоровых кошках и 22 собаках, у которых предварительными исследованиями в ПЦР и электронной микроскопией хламидиоз, микоплазмоз и другие инфекционные болезни были исключены.

В клеточных популяциях эпителиоцитов изучили: площадь клетки, площадь ядра, периметр ядра, а также ядерно-цитоплазматическое соотношение. Установили, что наиболее «диагностичным» оказался последний показатель - «ядерно-цитоплазматическое соотношение».

Установили, что у здоровых животных клетки плоского эпителия отличаются регулярной мономорфностью, площадь, периметр и ядерно-цитоплазматическое соотношение являются количественно измеряемыми и непрерывными, а статистическое их распределение является нормальным, к ним применимы методы параметрической и непараметрической статистики (Ташке, 1980). В каждом цитологическом препарате морфометрии было подвергнуто от 100 до 600 эпителиоцитов и в расчет использовали их средние значения.

Установили, что средняя площадь ядра эпителиоцитов у здоровых кошек составляет 96,3±4,8 кв. мкм, при вариации от 73 до 120 кв. мкм периметр ядра составил 36,3±1,8 мкм, площадь клетки - 478,4±23,9 кв. мкм при вариации от 310 до 629 кв. мкм самым стабильным показателем оказалось «ядерно-цитоплазматическое соотношение» клеток эпителиоцитов и составило у здоровых кошек 0,21±0,01, при минимуме 0,15 и максимуме - 0,25, у здоровых собак этот показатель установлен 0,13±0,006. На основании полученных результатов исследований разработали схемы-модели «ядерно-цитоплазматического соотношения» в клетках эпителиоцитов конъюнктивы собак и кошек.

Морфометрические исследования эпителиоцитов конъюнктивы кошек при офтальмохламидиозе проведены на 20 кошках, больных хламидиозом. Диагноз у них подтвержден в ПЦР и у 6-ти животных - электронно-микроскопическим методом исследования. Морфометрическими исследованиями выявили, что ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы варьировало от 0,13 до 0,53 (М=0,319±0,016). Этот показатель оказался в 1,5 раза выше, чем у здоровых животных этого вида. Разработали схему-модель изменений мор-фометрических показателей ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы кошек на фоне заболевания хламидиозом.

Морфометрические исследования эпителиоцитов конъюнктивы собак при офтальмологических заболеваниях, вызванных Chlamydia spp., проведены на 10 собаках, больных хламидиозом. Установили, что ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы этих животных варьирует от 0,19 до 0,44 (М=0,30±0,017), т.е. в 2,3 раза выше, чем у интактных животных.

Разработали схему-модель изменений ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы собак на фоне офтальмохламидиоза.

Морфометрические исследования эпителиоцитов конъюнктивы кошек при офтальмологических заболеваниях, вызванных Mycoplasma spp., проведены на 22 кошках, больных микоплазмозом. Диагноз предварительно подтвержден в ПЦР и электронной микроскопии.

Установили, что ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы кошек, больных микоплазмозом, варьировало от 0,2 до 0,5 (М=0,33±0,016), что в 1,57 раза выше аналогичного показателя у интактных животных. Различия достоверны, они аргументированы t-критерием Стьюдента (р<0,05), а между выборками аргументированы непараметрическим U-критерием Вилкок-сона-Манна-Уитни (р<0,01).

Установили, что при офтальмомикоплазмозе кошек показатель «ядерно-цитоплазматическое соотношение» в клетках эпителиоцитов конъюнктивы достоверно повышен в 1,57 раза, что подтверждает диагностическое значение этого показателя при данной патологии. На основании установленных алгоритмов изменений ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы кошек, больных микоплазмозом, разработали линейно-радианную схему-модель, которая может быть использована как прогностический тест при диагностике микоплазмоза плотоядных и его исходов.

Морфометрические исследования эпителиоцитов конъюнктивы собак при офтальмологических заболеваниях, вызванных Mycoplasma spp., проведены на 22 собаках, больных микоплазмозом. Предварительный диагноз подтвержден ПЦР и электронно-микроскопическими исследованиями. Цитоморфометри-ческими исследованиями установили, что у собак, больных микоплазмозом, с проявлением патологии органов зрения показатель «ядерно-цитоплазматическое соотношение» значительно (в 2,2 раза) возрос в сравнении с аналогичными показателями у интактных животных и варьировал от 0,17 до 0,53 (М=0,29±0,014). Вариация изменений достоверна (р<0,01), достоверна и разница этого показателя между больными и здоровыми животными этого вида (р<0,001).

Разработали линейно-радианную схему-модель прогностического изменения показателя «ядерно-цитоплазматическое соотношение» в клетках эпителиоцитов конъюнктивы собак на фоне микоплазмозной инфекции. Подтвердили значение изменений этого показателя для дифференциальной диагностики микоплазмоза

плотоядных в практической ветеринарии, как повышающего результативность эпи-зоотологической диагностики инфекционных болезней плотоядных.

Разработали систему комплексной диагностики хламидиоза и микоплазмоза и включили ее как составную часть в научно обоснованную систему противоэпизо-отических мероприятий при этих инфекциях в изучаемом регионе.

Выводы

1. Хламидиоз и микоплазмоз являются постоянными составляющими нозологического профиля заразной патологии домашних плотоядных в условиях г. Санкт-Петербурга.

2. Эпизоотическое проявление хламидиоза и микоплазмоза собак и кошек в изучаемом регионе характеризуется выраженными различиями субпопуляционных границ, преимущественно половым путем передачи возбудителя в популяциях, круглогодичной заболеваемостью с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками в зимне-весенний период, тенденцией к расширению территориально-пространственных, временных и популяционных границ, а также смешанных форм их проявления.

3. Как хламидиозная, так и микоплазмозная инфекции в популяциях плотоядных отмечаются полиморфизмом манифестации с доминантой поражения уроге-нитальной системы, органов зрения, существенными отклонениями показателей гомеостаза организма больных животных.

4. Существующие методы диагностики (клинико-эпизоотологический, бактериологический, патоморфологический, иммунологический, биохимический, гематологический) могут быть эффективными только при комплексном их использовании. Молекулярно-генетические исследования (ПЦР) при этих инфекциях специфичны и обладают высокой разрешающей способностью, но и при их использовании может быть допущена гипердиагностика данных патологий, обусловленная длительной элиминацией возбудителя из организма клинически выздоровевших животных (45-65 дней).

5. Цитоморфометрические исследования с использованием системы ВидеоТесТ позволяют устанавливать характерные для этих инфекций изменения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы больных животных.

5.1. У здоровых кошек ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы является достоверным, постоянным (константным) показателем, варьируя от 0,14 до 0,26 (М=0,21±0,01) (Р<0,01), у здоровых собак -соответственно от 0,1 до 0,21 (М=0,13±0,016) (Р<0,01).

5.2. У кошек, больных хламидиозом, ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы возрастает и варьирует от 0,2 до 0,53 (М=0,319±0,016), превышая в 1,5 раза аналогичный показатель у здоровых животных. У собак, больных хламидиозом, эти показатели возрастают в 2,3 раза в сравнении с интактными животными.

5.3. У кошек, больных микоплазмозом, ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы варьирует от 0,19 до 0,52 (М=0,33±0,016), возрастая в 1,57 раза в сравнении со здоровыми животными. У собак, больных микоплазмозом, соответственно - от 0,17 до 0,53 (М=0,29±0,014), т.е. в 2,2 раза выше, чем у интактных животных.

6. Усовершенствованная система диагностики хламидиоза и микоплазмоза плотоядных и их смешанных форм включена специальным разделом в региональную научно обоснованную систему противоэпизоотических и лечебно-реабилитационных мероприятий при хламидийной и микоплазмозной инфекциях плотоядных, что позволило повысить их эффективность и снизить эпизоотический риск этих болезней в условиях г. Санкт-Петербурга.

7. Адаптация и внедрение в госветучреждениях г.Санкт-Петербурга усовершенствованной системы диагностики хламидиоза, микоплазмоза и их смешанных форм подтвердили ее приемлемость, высокую эффективность и востребованность.

Рекомендации производству

1. Схема-модель получения и подготовки специментов для цитологического исследования плотоядных на хламидиозный и микоплазмозный кератоконъюнкти-вит (Утв. Управлением ветеринарии администрации г. Санкт-Петербурга, 2006).

2. Схема-модель определения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы плотоядных (Рек. Ученым советом НГСХА, 2008).

3. Схема-модель адаптации программы «ВидеоТесТ «Морфология» для диагностики инфекционных болезней (хламидиоза и микоплазмоза) и выведения результатов измерений в базу данных «ВидеоТесТ «Альбом» (Рек. Ученым советом НГСХА, 2008).

Список опубликованных работ

1. Методология определения качества противоэпизоотических мероприятий / Н.В. Литвинов [и др.] // в кн.: Методология научных исследований в эпизоотологии. - Н.Новгород, 2006. - С. 105-121.

2. Ветеринарная онкология (отбор и подготовка специментов для цитологического исследования) / Н.В. Литвинов [и др.]. - Н.Новгород, 2006. - 96 с.

3. Применение информационных технологий в работе цитологических и патологических лабораторий / Н.В. Литвинов [и др.] // Ветеринарная Патология. -2007.-№1(20).-С. 44-48.

4. Литвинов, Н.В. Морфологические показатели клеточных популяций эпителия конъюнктивы интактных (здоровых) кошек и животных с офтальмоинфекци-ей, вызванной Chlamydia spp. и Mycoplasma spp. / Н.В. Литвинов // Ветеринарная практика. - 2008. - 3 (42).- С. 59-63.

Литвинов Николай Валерьевич

Совершенствование диагностики хламидиоза и микоплазмоза домашних плотоядных (цитоморфометрические исследования эпителиоцитов конъюнктивы)

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Корректор Г.Н. Орехова Компьютерный набор и верстка Э.Н. Шакерова

Подписано в печать Формат 60/84 1/16. Печать трафаретная. Бумага офсетная. Объем: печ.л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ 01/0908

Отпечатано издателем Ю.А. Николаевым 603073, Нижний Новгород, Таганская, 6-29 Тел.: (8312) 50-47-17, e-mail: nvapub@sandv.ru

Актуальность темы. Инфекционные кератоконъюнктивиты животных в современных условиях приобретают особое значение в связи со значительным ростом офтальмологических болезней. Воспалительные процессы глаз у животных в своей основе часто имеют бактериальную и вирусную этиологию, создавая одну из важнейших проблем ветеринарной офтальмологии (Бардахчиева J1.B., Селезенева H.A., 2005).

Сравнительная частота проявления инфекционных поражений органов зрения, их этиопатогенетическая многофакторность, своеобразие клинических проявлений, а также трудности дифференциальной диагностики этих болезней подтверждают необходимость продолжения научного поиска в совершенствовании диагностики и даже разработки новых доступных методов ранней диагностики.

Цитологические исследования многие исследователи считают одним из эффективных и доступных методов диагностики инфекционного поражения животных, позволяющих достоверно характеризовать степень выраженности регенеративно-пролиферативного процесса (Белянин В.Л., 1998).

Несмотря на широкое использование цитологического метода в медицинской клинической лабораторной диагностике воспалительных и опухолевых заболеваний глаз в современной ветеринарии и особенно офтальмологии, цитологические исследования до сих пор не получили должного применения. В литературе имеются упоминания о применении цитологического метода в диагностике отдельных заболеваний органов зрения животных (Бардахчиева JI.B., Селезенева H.A., 2005), но эти сообщения единичны и носят разрозненный характер.

Ветеринарной науке не известны данные об информативности и достоверности цитологических исследований в диагностике различных воспалительных, вирусных, опухолеподобных и опухолевых поражений органов зрения, о роли этого метода в определении характера заболевания, определении гистологических форм, дифференциальной диагностики бактериальных и вирусных процессов конъюнктивы, роговицы и век.

Эффективное лечение кератоконъюнктивитов возможно лишь на ранних стадиях патологического процесса, при оперативной его морфологической диагностике. Этому требованию отвечает цитологическая диагностика заболеваний органов зрения.

Однако до сих пор в отечественной ветеринарной офтальмологической практике нет четко определенных цитологических критериев при различных патологических процессах (воспалительных, вирусных, опухолеподобных и опухолевых поражений) органов зрения, отсутствуют сведения о чувствительности и специфичности этого метода, остаются неизученными морфо-метрические показатели при различных патологических процессах.

Все это подтверждает актуальность проблемы совершенствования диагностики инфекционных болезней животных, что и определило цель и задачи нашего исследования.

Цель работы. В сравнительном аспекте и в динамике изучить нозологический профиль заразной патологии домашних плотоядных в условиях г.Санкт-Петербурга, определить роль и место хламидиоза и микоплазмоза и их микстинфекций в суммарной патологии собак и кошек, в т.ч. при болезнях с поражением органов зрения. Изучить возможность и разрешающую способность цитологических исследований в диагностике инфекционных болезней органов зрения и на этой основе усовершенствовать систему комплексной диагностики хламидиоза и микоплазмоза животных как составную часть научно обоснованной системы эпизоотического надзора в регионе.

На разрешение поставлены следующие задачи:

1, Изучить роль и место хламидиозной и микоплазмозной инфекции в формировании заразной патологии домашних плотоядных в регионе, в т.ч. в формировании болезней их органов зрения.

2. Изучить в сравнительном аспекте разрешающую способность методов диагностики хламидиоза и микоплазмоза, т.ч. молекулярно-генетических и цитоморфометрических исследований.

3. Изучить и определить морфометрические показатели клеток эпителия конъюнктивы у здоровых собак и кошек.

4. Изучить цитоморфометрические показатели клеток эпителиоцитов конъюнктивы собак и кошек при заболевании их спонтанными хламидиозом и микоплазмозом.

5. Адаптировать программно-аппаратный комплекс «ВидеоТесТ» и создать банк данных с объективизацией цитологических критериев диагностики микоплазмоза и хламидиоза домашних плотоядных.

6. Усовершенствовать систему комплексной диагностики хламидиоза и микоплазмоза плотоядных, как составной части научно-обоснованной системы противоэпизоотических и лечебно-реабилитационных мероприятий при хламидиозе и микоплазмозе собак и кошек в регионе.

Научная новизна. В сравнительном аспекте и в динамике изучены роль и место хламидиозной и микоплазмозной инфекции в формировании суммарной заразной патологии домашних плотоядных в условиях СевероЗападного региона РФ, характер эпизоотического процесса этих инфекций при моно- и микстпроявлениях. Впервые изучены и определены цитоморфометрические показатели клеток эпителиоцитов конъюнктивы здоровых и больных хламидиозом и микоплазмозом собак и кошек. Усовершенствована прижизненная диагностика офтальмомикоплазмохламидиоза, установлена высокая диагностическая ценность цитоморфометрических исследований при диагностике этих инфекций в популяциях плотоядных. Впервые в условиях г.Санкт-Петербурга разработали схемы-модели получения и подготовки специмента для цитологического исследования плотоядных на хламидиоз и микоплазмоз; определения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы плотоядных; адаптации программы

ВидеоТесТ «Морфология» для диагностики инфекционных болезней животных.

Практическая ценность. Научно обосновано и практически подтверждено, что инфекционные болезни плотоядных (хламидиоз и микоплазмоз) относятся к числу управляемых инфекций. На основе результатов исследований разработаны: схема-модель получения и подготовки специментов для цитологических исследований плотоядных на хламидиозный и микоплазмоз-ный кератоконъюнктивит (2006); схема-модель определения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы плотоядных (2008); схема-модель адаптации программы «ВидеоТесТ «Морфология» для диагностики инфекционных болезней (хламидиоза и мико-плазмоза) и введения результатов измерения в пособие «Ветеринарная онкология (отбор и подготовка специментов для цитологического исследования (2006).

Положения, выносимые на защиту:

1. Хламидиозная и микоплазмозная инфекции плотоядных в условиях г.Санкт-Петербурга важные составляющие суммарной заразной патологии собак и кошек с особенностями характера эпизоотического проявления.

2. Разрешающая способность клинико-эпизоотологических, молеку-лярно-генетических и цитоморфометрических исследований как составляющие диагностического комплекса при хламидиозе и микоплазмозе плотоядных.

3. Цитоморфометрический метод прижизненной диагностики хламидиоза и микоплазмоза отличается высокой разрешающей способностью, объективностью показателей ядерно-цитоплазматического соотношения клеток эпителиоцитов конъюнктивы у здоровых и больных животных.

4. Использование системы «ВидеоТесТ «Морфология» позволяет усовершенствовать и повысить объективность и оперативность цитоморфометрических исследований в комплексной систем прижизненной диагностики инфекционных болезней животных и повысить эффективность и достоверность диагностики хламидиоза и микоплазмоза животных в современной ветеринарии.

Пути реализации: Результаты исследований могут быть использованы при совершенствовании цитоморфометрических исследований при диагностике других инфекционных болезней животных, а также в учебно-педагогическом процессе при подготовке специалистов ветеринарной профессии.

Апробация работы. Методическая основа, результаты исследований доложены и обсуждены на заседании Совета ветеринарного факультета ФГОУ ВПО НГСХА (2005-2008 гг.), на научно-практических конференциях специалистов государственных и приватных ветучреждений г. Санкт-Петербурга (2006, 2007, 2008 гг.), на заседании издательского совета НГСХА (2006, 2007гг.), журнала «Ветеринарная Практика» (2007 г.), на заседании УМО (г.Москва, 2007 г-)> на межкафедеральном заседании профессорско-преподавательского состава НГСХА (2008 г.). результаты исследований опубликованы в научных статьях, в т.ч. в учебно-методических пособиях, в центральных изданиях, рекомендованных ВАК для публикации материалов докторских и кандидатских диссертаций, в материалах научно - практических конференций.

Внедрение. Результаты исследований под авторским надзором с положительным эффектом внедрены в Санкт-Петербургской Городской и в районных станциях по борьбе с болезнями животных.

Основные положения диссертационной работы вошли в монографию «Ветеринарная онкология (отбор и подготовка специментов для цитологического исследования», рекомендованной департаментом научно - технологической политики МСХ РФ (2006 г.); в учебно-методические пособия «Экологическая и противоэпизоотическая защита современного животноводства» (рекомендованное к изданию УМО 2006 г.) и «Совершенствование организации и экономики ветеринарного дела» (рекомендованное к изданию УМО 2006г.).

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 156 страницах компьютерного текста, включает введение, обзор литературы, собственные исследований и их обсуждение, выводы и практические предложения. Работа иллюстрирована 21 таблицей, 31 рисунком и 8 фоторисунками. Список использованной литературы включает 211 источников, в т.ч. 40 иностранных авторов.

Выводы

1. Хламидиоз и микоплазмоз являются постоянными составляющими нозологического профиля заразной патологии домашних плотоядных в условиях г.Санкт-Петербурга.

2. Эпизоотическое проявление хламидиоза и микоплазмоза собак и кошек в изучаемом регионе характеризуется выраженными различиями суб-популяционных границ, преимущественно половым путем передачи возбудителя в популяциях, круглогодичной заболеваемостью с выраженными сезонными эпизоотическими надбавками в зимнее-весенний период, тенденцией к расширению территориально-пространственных, временных и популяцион-ных границ, а также смешанных форм их проявления.

3. Как хламидиозная, так и микоплазмозная инфекции в популяциях плотоядных отмечаются полиморфизмом манифестации с доминантой поражения урогенитальной системы, органов зрения, существенными отклонениями показателей гомеостаза организма больных животных.

4. Существующие методы диагностики (клинико - эпизоотологиче-ский, бактериологический, патоморфологический, иммунологический, биохимический, гематологический) могут быть эффективными только при комплексном их использовании. Молекулярно-генетические исследования (ПЦР) при эти инфекциях специфичны и обладают высокой разрешающей способностью, но и при их использовании может быть допущена гипердиагностика данных патологий, обусловленная длительной элиминацией возбудителя из организма клинически выздоровевших животных (45-65 дней).

5. Цитоморфометрические исследования с использованием системы ВидеоТесТ позволяют устанавливать характерные для этих инфекций изменения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы больных животных.

5.1. У здоровых кошек ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы является достоверным, постоянным (константным) показателем, варьируя от 0,14 до 0,26 (М=0,21±0,01) (Р<0,01), у здоровых собак - соответственно от 0,1 до 0,21 (М=0,13±0,016) (Р<0,01).

5.2. У кошек, больных хламидиозом, ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы возрастает и варьирует от 0,2 до 0,53 (М=0,319±0,016), превышая в 1,5 раза аналогичный показатель у здоровых животных. У собак, больных хламидиозом, эти показатели возрастают в 2,3 раза в сравнении с интактными животными.

5.3. У кошек, больных микоплазмозом, ядерно-цитоплазматическое соотношение в клетках эпителиоцитов конъюнктивы варьирует от 0,19 до 0,52 (М=0,33±0,016), возрастая в 1,57 раза в сравнении со здоровыми животными. У собак, больных микоплазмозом, соответственно — от 0,17 до 0,53 (М=0,29±0,014) в 2,2 раза выше, чем у интактных животных.

6. Усовершенствованная система диагностики хламидиоза и мико-плазмоза плотоядных и их смешанных форм включена специальным разделом в региональную научно-обоснованную систему противоэпизоотических и лечебно-реабилитационных мероприятий при хламидийной и микоплаз-мозной инфекциях плотоядных, что позволило повысить их эффективность и снизить эпизоотический риск этих болезней в условиях г.Санкт-Петербурга.

7. Адаптация и внедрение в госветучреждениях г.Санкт-Петербурга усовершенствованной системы диагностики хламидиоза, микоплазмоза и их смешанных форм подтвердило ее приемлемость, высокую эффективность и востребованность.

Рекомендации производству

1. Схема-модель получения и подготовки специментов для цитологического исследования плотоядных на Хламидиозный и микоплазмозный кератоконъюнктивит (Утв. Управлением ветеринарии Администрации г.Санкт - Петербурга, 2006).

2. Схема-модель определения ядерно-цитоплазматического соотношения в клетках эпителиоцитов конъюнктивы плотоядных (Рек. Ученым Советом НГСХА, 2008).

3. Схема-модель адаптации программы «ВидеоТесТ «Морфология» для диагностики инфекционных болезней (хламидиоза и микоплазмоза) и выведения результатов измерений в базу данных «ВидеоТесТ «Альбом» (Рек. Ученым Советом НГСХА, 2008).