Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Морфогенез иммунных нарушений при некробактериозе крупного рогатого скота

На правах рукописи

Михеева Екатерина Александровна

МОРФОГЕНЕЗ ИММУННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ НЕКРОБАКТЕРИОЗЕ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.02. - патология, онкология, морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Ижевск - 2004

Работа выполнена на кафедре инфекционных болезней и патологической анатомии Федерального государственного образовательного учреждения высшего профессионального образования «Ижевская государственная сельскохозяйственная академия».

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук,

профессор Новых Алевтина Алексеевна

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор

Кокорев Валерий Серафимович;

доктор ветеринарных наук, Плешакова Валентина Ивановна

Ведущая организация: Свердловская научно-исследовательская

ветеринарная станция Россельхозакадемии

Защита состоится 21 мая 2004 г. в 10 часов на заседании диссертационного совета Д 220.067.03 при Уральской государственной сельскохозяйственной академии по адресу: 620219, г. Екатеринбург, ул. Карла Либкнехта, 42.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Уральской ГСХА.

Автореферат разослан 21 апреля 2004 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, доцент .

Рабовская Л.А.

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы.

Одной из актуальных проблем ветеринарной медицины на современном этапе ее развития является оздоровление поголовья крупного рогатого скота от бактериозов и вирозов. Особого внимания заслуживает некробак-териоз, занимающий одно из ведущих мест среди инфекционных заболеваний скота (Сидорчук А.А., Семенов Н.Н., 1987; Лукъяновский В.А., 1987, 1990 и др.).

Некробактериоз - инфекционная болезнь, характеризующаяся гнойно-некротическим распадом кожи, слизистых оболочек, паренхиматозных органов. Заболевание протекает длительно, со значительной потерей хозяйственных и племенных качеств животных, снижением молочной и мясной продуктивности (Гринаф П.Г., Макколуш Ф., Цивер А., 1976). Широкое распространение некробактериоза ученые связывают с нарушением технологий ухода за копытцами, снижением естественной резистентности, не благоприятными климатическими условиями, не сбалансированным рационом и т.д. (Чумаченко В.Е., 1982; Шакуров М.Ш., Кашов Н.М., 1988;.Кали-нихин В.В., 1988; Самоловов А.А., 1990).

Согласно существующей классификации, данное заболевание отличается значительным разнообразием клинического проявления. Наиболее часто регистрируется некробактериоз дистальных отделов конечностей, осложняющийся, как правило, гнойно-гнилостной микрофлорой. Заболевание при этом принимает хроническое течение, в процесс вовлекаются глубоко-лежащие ткани, подвергающиеся некрозу, механизм которого недостаточно изучен (Гримаев Н.Е., Бахтин Д.П., 1971; Самоловов А.А., 1997; Елисеев А.И., Коломийцев С.М., Бледнова А.И., 2000).

Данные о характере иммунологических, гематологических и биохимических изменений выявляемых при различных формах некробактериоза не многочисленны (Соколова Т.П., Петренко Г.Г., Степанова О.В., 1980; Семенова А.Т., Колесников И.К., 1983; Валев Н.О., 1998; Горьковенко Н.Е., 2000 и др.).

Сведения об участии центральных и периферических органов иммуногенеза в развитии болезни отсутствуют. Совершенно не изучены динамика и последовательность иммунных нарушений при сочетанном проявлении некробактериоза с другими инфекциями, в том числе с широко распространенными вирозами.

Имеющиеся работы Тартаковского М., 1900; Бальзаментова А., 1940; Безина А.Н., 2000; Berger G., 1977 и др. о характере патологоанатомических проявлений некробактериоза не содержат сведений освещающих механизмы развития висцеральной формы болезни и участие в них факторов резистентности и иммунологической реактивности. Не полностью раскрыты механизмы иммуностимуляции и эффективность различных стимуляторов резистентности и иммунологической реактивности.

С учетом изложенного считаем, что гии различных форм некробактериоза, участие

I '

1 СЭ

центральных и периферических органах иммуногенеза и соответствие им гематологических, биохимических и иммунологических изменений имеет, на наш взгляд, не только теоретический, но и большой практический интерес.

Цель и задачи исследований.

Цель работы — изучить динамику иммунного ответа, характер клинических, патоморфологических и иммуноморфологических изменений при различных формах некробактериоза, его ассоциациях с ИРТ и при иммуно-коррекции тимогеном.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи:

- провести анализ эпизоотической ситуации по заболеваемости коров некробактериозом в СПК «Россия»;

- установить особенности клинических, в том числе гематологических, биохимических и иммунологических проявлений различных форм некробактериоза и его ассоциаций с ИРТ;

- изучить динамику нарушений факторов естественной резистентности у больных некробактериозом коров;

- выявить характер патоморфологических изменений в различных органах и тканях в зависимости от формы некробактериоза, его ассоциаций с ИРТ;

- определить динамику иммуноморфологических изменений в тимусе, селезенке и лимфатических узлах у больных коров при различных формах некробактериоза и при его осложнении ИРТ;

- изучить эффективность иммуностимуляции при лечении больных некробактериозом коров.

Научная новизна исследований:.

- установлен характер иммуноморфологических изменений при различных формах некробактериоза и при его ассоциациях с ИРТ;

- определена зависимость клинических, в том числе гематологических, биохимических, иммунологических и патологоанатомических нарушений от состояния органов иммуногенеза;

- раскрыта динамика нарушений факторов естественной резистентности и иммунологической реактивности соответственно систематике нек-робактериоза; .

- установлено влияние иммуностимулятора тимогена на состояние раневого процесса и на восстановление нарушенного иммуногенеза.

Практическая значимость работы.

Данные об иммуноморфологических изменениях в центральных и периферических органах иммуногенеза позволяют раскрыть патогенетические механизмы развития некробактериоза и его ассоциаций. Использование цитомединов восстанавливает нарушенный иммуногенез, улучшает регенерацию тканей и сокращает сроки выздоровления животных и потому они могут быть рекомендованы в качестве средств коррелирующих иммунный ответ и повышающих устойчивость организма.

РезУ^ТсГгы^следований доложены:

- на региональной научно-практической конференции «Аграрная наука - состояние и проблемы» (Ижевск, 2002);

- на межрегиональной научно-практической конференции молодых ученых-специалистов «Перспективы развития регионов России в XXI веке» (Ижевск, 2002);

- на всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины (Уфа, 2003);

- на всероссийской научно-практической конференции «Устойчивому развитию АПК - научное обеспечение» (Ижевск, 2004);

- на расширенном заседании кафедры инфекционных болезней и па-танатомии с участием профессорско-преподавательского коллектива факультета ветеринарной медицины и зооинженерного факультета Ижевской ГСХА (Ижевск, 2003, 2004).

Основные положения выносимые на защиту:

- разнообразие клинических и патологоанатомических проявлений некробактериоза крупного рогатого скота обусловлены морфологическими изменениями в лимфоидных органах. Характер иммунологических нарушений при различных формах некробактериоза определяет морфогенез изменений в тимусе;

- генерализация процесса сопровождается поражением висцеральных органов и является результатом акцидентальной инволюции тимуса;

- применение цитомединов тимуса (тимогена) устраняет дефицит В-лимфоцитов, Jg G и коррелирует нарушенный иммуногенез.

Публикации.

Основные положения работы опубликованы в 6 научных статьях, тезисах и материалах научных конференций.

Объем и структура работы.

Работа изложена на страницах компьютерного набора и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список, кроме этого иллюстрирована рисунками и 16 таблицами. Библиографический список включает 228 источников, в том числе 29 работ иностранных авторов.

2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Материал и методика исследований

Исследования проводились на кафедре «Патологической анатомии и гистологии» Ижевской государственной сельскохозяйственной академии и на поголовье крупного рогатого скота СПК «Россия» Можгинского района Удмуртской Республики в период с 2001 по 2003 год.

Объектом исследований явились коровы дойного стада, содержащиеся на трех молочно-товарных фермах, стационарно неблагополучных по некробактериозу. Параллельно с производственными исследованиями использовался метод эксперимента. Для его проведения выделяли коров

больных различными формами некробактериоза (37 голов) и его ассоциацией (36 голов), в том числе с инфекционным ринотрахеитом (ИРТ) (18 голов). Контрольную группу составляли коровы свободные от этих заболеваний (20 голов).

Клинической диспансеризации подвергнуто 1366 коров, в том числе 172 головы с признаками некробактериоза, некробактериоза и ИРТ и животные подвергнутые стимуляции.

В работе использовали клинические, серологические, гематологические, бактериологические, патоморфологические, иммунологические и им-муноморфологические методы исследований.

На первом этапе работы проводили клинико-ортопедические исследования по общепринятой схеме.

1 Осмотр в состоянии покоя - при этом учитывали положение и постановку конечностей, характер постановки и состояние копытец.

2 Осмотр в состоянии движения - учитывали тип, степень и характер хромоты.

3 Методом пальпации дистального отдела больной конечности - определяли эластичность тканей, чувствительность, размер очага поражения и его характер. Результаты исследований заносили в журнал регистрации больных животных.

Во второй период опыта использовали различные схемы патогенетического и симптоматического лечения. В опыте находилось 78 голов. В первую очередь проводили туалет раны, после чего обрабатывали суспензией спирт — йод — ихтиол — глицерина. Затем накладывали бинтовую повязку и одевали башмак. Перевязки делали через каждые 5 дней. На 6-ой и последующие дни лечения к суспензии добавляли в качестве вещества стимулирующего регенерацию 2 %-ный АСД 2 фракции. Наряду с этим применяли антибиотики тетрациклинового ряда.

Помимо данной группы на центральной МТФ были выделены 30 голов больных некробактериозом коров (из которых 15 голов в ассоциации с ИРТ), которые параллельно с лечением подвергались иммуностимуляции. В качестве стимулятора использовали тимоген. Препарат вводили ежедневно 1 раз в сутки внутримышечно и на раневую поверхность в дозе по 100 мкг. Курс стимуляции составлял 3-5 дней в зависимости от выраженности нарушений иммунного ответа и от состояния раневого процесса.

Изучали динамику факторов естественной резистентности и иммунологической реактивности у больных животных, после применения иммуно-стимуляции и патогенетического лечения.

Материалом для исследований служили кровь и сыворотка крови. Кровь для исследований брали из яремной вены в две пробирки в утренние часы, в качестве антикоагулянта использовали гепарин. Во вторую пробирку брали кровь для получения сыворотки.

Лейкоцитарную формулу определяли методом визуальной микроскопической оценки фиксированных мазков по методу Романовского-Гимзы, с дифференцированным подсчетом лейкоцитов, описанным Смирновым A.M. (1978).

Общее количество лейкоцитов в 1 мкл крови определяли по общепринятой методике в камере Горяева, общий белок сыворотки крови - рефрактометрическим методом (Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г., 1985), белковые фракции сыворотки крови - нефелометрическим методом по методике (Кондрахин И.П., Курилов Н.В., Малахов А.Г., 1985).

Определение уровня фагоцитоза проводили с использованием тест-наборов (производитель - Химическая компания «Реакомплекс», г. Чита) по прилагаемой к ним инструкции. Фагоцитарную активность (ФА) оценивали с учетом процента фагоцитирующих нейтрофилов к общему числу выявленных и их поглотительную и переваривающую способность по фагоцитарному числу (ФЧ) - число микробных клеток (латексных частиц) в пересчете на один активный (фагоцитирующий) нейтрофил.

Состояние клеточного иммунитета проводили методом количественной оценки Т- и В-популяций лимфоцитов (реакцией розеткообразования). Для отделения лимфоцитов от других клеток крови применяли метод, предложенный А. Воушп (1986). Фракции лимфоцитов выделяли методом центрифугирования в одноступенчатом градиенте плотности фиколл-верографин (плотность раствора 1,078 г/см3).

Количественный анализ отдельных классов иммуноглобулинов определяли по методу Manchini (1964) с использованием моноспецифических сывороток против иммуноглобулинов крупного рогатого скота.

Мазки-отпечатки с пораженных участков тканей исследовали бактериологическим методом. Окраску осуществляли по Граму. Видовую принадлежность определяли методом пересева на питательные и дифференциальные среды, а также на пестрый ряд Гисса.

Материалом для гистологических и иммуноморфологических исследований служили лимфоидные (селезенка, тимус, региональные и отдаленные лимфатические узлы) и паренхиматозные органы (сердце, печень, легкие). Кроме этого, отбирали кусочки пораженных участков кожи (с дистальных отделов конечностей и вымени) на границе пораженной и здоровой области.

Полученный при убое от животных материал фиксировали в 10 % растворе нейтрального формалина. Ткани проводили через спирты восходящей крепости и заключали в парафин. Гистосрезы окрашивали гематоксилином и эозином. Размеры тканевых структур измеряли окуляр-микрометром.

Весь цифровой материал исследований обрабатывали биометрически по методикам Плохинского И.А. (1969) и Меркурьевой Е.К. (1970) на персональном компьютере с использованием соответствующих программ (Microsoft Excel 97 SR-1 и Microsoft Word SR-1 для Microsoft Windows 98).

2.2 Эпизоотическая характеристика по некробактериозу и герпес-вирусной инфекции в СПК «Россия» Можгинского района Удмуртской Республики

Выполненная работа является одним из разделов научно-исследовательских изысканий кафедры инфекционных болезней и патана-томии № 01990002816 «Разработка мероприятий по диагностике и искоре-

нению герпес- и онковирусных инфекций в некоторых хозяйствах Удмуртской Республики». Согласно полученных результатов: клинических, сероЛогических, патологоанатомических и других методов исследования, установлено неблагополучие дойного стада крупного рогатого скота по некро-бактериозу. Так, с декабря 2001 года определялась заболеваемость поголовья трех, а с сентября 2002 года - пяти МТФ данного хозяйства некробакте-риозом. Кроме этого, определялась инфицированность поголовья всех МТФ хозяйства не только некробактериозом, герпес-вирусами, но и смешанными инфекциями. При этом некробактериоз зачастую носил характер эпизоотии.

Самая высокая заболеваемость некробактериозом (на 30 января 2002 года) отмечена на МТФ Мальчиково. Из общего количества коров (130 голов) размещенных на этой ферме зарегистрирован некробактериоз у 24,6 % животных (32 головы), имеющих поражения дистальных отделов конечностей.

Заболевание во многих случаях развивалось как смешанная инфекция на фоне ИРТ. Из числа выявленных больных некробактериозом коров признаки ИРТ имели 43,8 % (14 голов). Процесс, осложненный гнилостной микрофлорой, обнаружили у 71,9 % (23 головы).

Заболеваемость некробактериозом на Центральной МТФ была несколько меньше и составила 9 % (21 голова) с поражение дистальных отделов конечностей. Из числа больных некробактериозом 66,7 % (14 голов) были инфицированы вирусом ИРТ. Процесс, осложненный гнилостной микрофлорой, наблюдали в 71,4 % случаев (15 голов).

На Б-Сюгинской МТФ возбудитель некробактериоза в области дис-тальных отделов конечностей был выделен у 23 коров (11,5 % случаев). Из числа выявленных коров больных некробактериозом 69,6 % (16 коров) были инфицированы вирусом ИРТ. Процесс, осложненный гнилостной микрофлорой, зарегистрирован в 82,6 % случаев (19 голов).

Согласно результатов исследования, заболеваемость имела сезонные особенности. Анализ заболеваемости некробактериозом (с декабря 2001 года по ноябрь 2002 года) позволил установить, что максимальная заболеваемость некробактериозом установлена на Мальчиковской МТФ в марте месяце (42 головы из 61 переболевших за год коров). На ЦМТФ больше всего больных животных зарегистрировали также в марте месяце (28 головы из 53 переболевших за год), а на Б-Сюгинской МТФ - в апреле 2002 года (36 голов из 58 переболевших за год). В зимний период заболеваемость оставалась стабильной и составляла на Мальчиковской МТФ 23,1 - 26,9 %, на ЦМТФ - 7,8 - 10,0 %, а Б-Сюгинской МТФ - 11,5 - 13,5 %. Начиная с июня месяца заболеваемость снижалась и к августу 2002 года заболеваемость некробактериозом на ЦМТФ не определялась, на Мальчиковской МТФ оставались единичные случаи заболевания (4,6 %), а на Б-Сюгинской МТФ -2,2 %.

Второй пик заболеваемости некробактериозом был зарегистрирован в октябре — ноябре 2002 года. Так, на ЦМТФ к октябрю месяцу выявили 7 больных животных (3,4 %). На Мальчиковской МТФ - 13 голов (10,0 %). В ноябре по данной ферме зарегистрировали уже 16 больных животных (12,3

%). На Б-Сюгинской МТФ в октябре месяце некробактериозом дистальных отделов конечностей и вымени болели 15 коров (8,2 %).

Полученные результаты" позволяют заключить, что в обследованном хозяйстве некробактериоз дистальных отделов конечностей и вымени у крупного рогатого скота встречается часто и имеет определенную динамику. Пик заболеваемости некробактериозом в данной зоне приходится на осенний и весенний период года. Динамика заболеваемости некробактериозом коров СПК «Россия» за 2001 -2003 годы представлена на рисунке 1.

Рисунок 1 - Динамика заболеваемости коров некробактериозом

Из общего числа выявленных за год больных животных (172 головы) поражения одной конечности установлено у 166 коров (96,4 %), поражение двух конечностей - у 6 коров (3,6 %). Поражения передних конечностей зарегистрировано в 4 % случаев (7 коров), задних -в 96 % случаев (165 голов). Поражение правой тазовой конечности отмечено в 41,8 % случаев (72 головы), поражение левой тазовой конечности - в 51,2 % (88 голов) и поражение обеих тазовых конечностей выявлено в 7 % (12 голов). Поражения вымени наблюдались реже. За весь период наблюдений отмечены 7 случаев заболевания, составившие 4,1 %. Генерализация процесса и поражение внутренних органов (висцеральная форма заболевания) выявлены у 12 коров (7 % случаев).

2.3 Характер клинических изменений при различных формах некробактериоза и при его ассоциациях

Характеризуя клиническую картину при различных формах некробак-териоза мы отмечали ее высокую вариабельность, обусловленную степенью вовлечения в процесс различных тканей. Согласно результатов исследования поражение тканей венчика на Мальчиковской МТФ отмечали у 33 животных составивших 54,1 % из числа всех (61 голова) переболевших за год животных. Флегмона венчика зарегистрирована у 25 голов (75,8 % случаев) из 33 коров. У 15 голов процесс распространялся на мякиши, поражения которых наблюдали в 24,6 % случаев. Свод межкопытной щели вовлекался в процесс в 37,7 % случаев, при этом поражения глубоколежащих тканей свода отмечали у 23 коров. Поражения копытного рога наблюдали в 32,8 % случаев (20 голов), при этом рог становился крошащимся. У 4-х коров (6,6 %) обнаруживали некротические поражения капсулы венечного и копытце-вого суставов, а также связочного аппарата.

На ЦМТФ поражения венчика наблюдали у 42 коров из 53 переболевших за год (79,3 %), из них флегмону - у 13 голов (30,4 %), некротические поражения копытных мякишей у 19 коров (36 % случаев), поражения тканей межкопытной щели — у 23 голов (43,4 %), а ламиниты - у 13 животных (24,5 % случаев).

При клинико-ортопедическом обследовании больных некробактерио-зом коров на Б-Сюгинской МТФ было выявлено, что поражения венчика отмечались у 41 коровы из 58 переболевших за год (70,7 %), из них флегмону венчика наблюдали всего лишь у 6 голов (14,6 %), поражения мякишей имели 19 коров (32,8 %), тканей свода межкопытной щели - 35 голов (60,3 %), а ламиниты обнаруживали у 15 голов (25,9 % случаев).

В связи с вариабельностью поражений тканей копытец, клиническая картина некробактериоза была весьма разнообразна. При некробактериозе дистальных отделов конечностей динамику клинического проявления болезни характеризовали покраснение кожи, умеренный болезненный отек в зоне первичного аффекта, приобретающего уже на вторые-третьи сутки характер острого воспаления. В последующий период отмечали нарушение целостности кожи венчика. Она имела красновато-синюшную окраску, на ее поверхности появлялись везикулы, содержащие серозный экссудат склеивающий волос, и мелкие очаги некроза. Последние локализовались преимущественно на дорсальной поверхности венчика, а затем охватывали область межкопытной кожной складки, копытных мякишей. Клинически они имели вид язвы округлой формы с ровными краями покрытой бесструктурной массой омертвевших тканей темно-коричневого или бурого цвета. Данные поражения тканей копытец затрудняли передвижение животных вследствие развивающейся хромоты. При передвижении животных появлялась болезненность, увеличивалось отделение серозного экссудата, усиливалась кровоточивость поврежденных сосудов.

При затяжном течении некроз распространялся на глубоколежащие ткани. В этом случае поверхность поврежденных тканей покрывала мелко-

зернистая грануляция, имеющая синюшный оттенок. Отделение серозного экссудата значительно нарастало, а в его составе определялись элементы крови. Нередко в процесс вовлекалась копытная стенка, на которой появлялись трещины. Последние определялись и в области кожи межпальцевой щели. Они сопровождались накоплением клейкого экссудата.

У животных с поражением молочной железы наблюдали повышение температуры до 40,5 - 41,0 °С, анарексию. При пальпации отмечали болезненность, молоко содержало в одних случаях хлопья и сгустки казеина, в других гнойный экссудат зеленоватого цвета вязкой консистенции издающий дурной запах. На коже молочной железы определяли некротические фокусы, проникающие вглубь железы. Очаги некроза имели небольшие размеры (1 - 2 см в диаметре), четко выраженный некротически измененный центр и перифокальную зону воспаления. Ткани были болезненными, пропитанными экссудатом бурого цвета неприятного запаха. Пораженная четверть вымени была увеличенной в размере, имела плотную консистенцию, местную повышенную температуру. Нередко поражение вымени сопровождалось некротическими изменениями дистальных отделов конечностей.

У животных с висцеральной формой заболевания отмечали резко выраженное угнетение, отказ от корма, снижение молочной продуктивности и живой массы, апатию, залеживание, усиленное потоотделение, жажду и одышку. Температура тела при этом находилась в пределах 39,8 - 42,0 °С. При насильственном подъеме этих животных они с трудом вставали и сразу ложились, тяжело дышали, появлялся кашель, при аускультации определяли хрипы, тахикардию, достигающую 70 - 85 ударов в минуту.

Наслоение гнойной микрофлоры (синегнойная палочка, стафилококк) приводило к возникновению септических пододерматитов, при которых процесс локализовался в сосочковом и сосудистом слоях. При этом экссудат приобретал серозно-геморрагический характер. Стенка копытного рога при этом деформировала, зона поражения флюктуировала.

При надавливании на края трещин выделялся экссудат грязно-серого цвета, неприятного запаха. В последующем происходило отслоение рогового чехла. Развивались общие реактивные изменения, характеризующиеся хромотой, повышением общей температуры до 39,8 °С, отечностью и болезненностью прилежащих тканей, в том числе подошвы.

При наличии колотых ран и ушибов выявили флегмонозный процесс. Стадии формирования флегмоны предшествовало развитие серозного воспаления подкожной клетчатки в последующем переходящее в гнойное, принимающее разлитой диффузный характер. Контуры венчика и копытных мякишей были плохо выражены, ткани плотные, болезненные, местная температура повышена. Со временем появились островки размягчения пораженных тканей, свидетельствующие о наступлении стадии абсцедирова-ния, завершающиеся формированием одного или нескольких абсцессов. В последующем абсцессы вскрывались, формировались свищевые ходы, края которых зачастую имели язвенноподобный вид.

При наслоении на раневую поверхность факультативных анаэробов

(В. Colli, В. Perfringens, Proteus vulgaris и стрептококков), процесс характеризовался гнилостным распадом тканей с образованием геморрагического, зловонного экссудата, называемого ихором. Вначале он имел серо-кровянистый цвет, а затем приобретал цвет мясных помоев. Омертвевшие ткани выглядели дряблыми, расползались, имели зеленовато-серый или черно-бурый цвет. Наблюдалось эрозивное кровотечение. Образовавшиеся до развития инфекции грануляции некротизировались, и процесс переходил на глубоколежащие ткани, развивалась гангрена. Поражались сухожилия, сухожильные влагалища, мышцы. Все эти изменения сопровождались интоксикацией организма, высокой температурой тела, учащением пульса и дыхания. Состояние животного было резко угнетено.

При ассоциации с ИРТ в процесс вовлекалась межпальцевая клетчатка, что приводило к образованию напряженной, болезненной припухлости. В связи с этим фаланги пальцев значительно расширялись, увеличивался межпальцевый валик, нарастал объем дистальной части конечности по сравнению с интактной. Образовывались фунгозные язвы, поверхность которых была покрыта грануляционной кровоточащей тканью с наличием серозно-гнойного экссудата. Имели место поражение кожи в области путового и венечного суставов. В процесс вовлекались сухожилия. В дальнейшем это приводило к воспалению копытцевой кости со стороны подошвенной поверхности, протекающему по типу кариеса. На копытцевой кости появлялись шероховатости, нарастала хромота. Отпадал копытцевый рог или фаланга пальца. У больных животных снижался аппетит, резко падали удой и упитанность.

2.4 Состояние факторов резистентности и иммунологической реактивности у больных некробактериозом коров

Соответственно клиническому проявлению, у больных животных отмечали изменение лейкоцитарного профиля, лейкоформулы, макрофагаль-ной активности, других факторов резистентности и иммунологической реактивности.

Согласно полученных результатов, при некробактериозе дистальных отделов конечностей в 1 мкл крови содержалось 9903,53 ± 422,61 лейкоцитов. Количество сегментоядерных нейтрофилов составляло 25,4 ± 1,7 %, палочкоядерных нейтрофилов - 1,4 ± 0,04 %, юных нейтрофилов - 0,3 ± 0,01 %. Базофилы выявлены в 1,0 ± 0,03 % случаев, эозинофилы - в 4,4 ± 0,4 %, моноциты - в 1,0 ± 0,01 %, а количество лимфоцитов составило 66,5 ± 1,88%.

У животных с поражением вымени в 1 мкл крови содержалось 11000 ± 532,92 лейкоцитов, преобладали сегментоядерные нейтрофилы (46,0 ± 2,51 %), а содержание лимфоцитов находилось в пределах 44,8 ± 2,24 %. Количество эозинофилов и моноцитов было низким (2,4 0,2 и 1,0 0,03 %) и не соответствовало физиологическим параметрам (контроль 7,8 ± 0,4; 4,9 ± 0,03 %).

У коров с висцеральной формой заболевания наблюдали аналогичную картину, но при этом отмечали увеличение количества юных и палочкоя-дерных нейтрофилов(1,5 ± 0,04 и 3,6 "± 0,04 % соответственно).

При осложнении процесса гнойно-гнилостной микрофлорой в 1 мкл крови находилось 10932,12 ± 486,32 лейкоцитов, количество эозинофилов составляло 2,7 0,6 %, а моноцитов - в 0,5 0,02 %. В лейкоформуле отмечали сдвиг влево. Так, количество сегментоядерных нейтрофилов составило 46,7 ± 2,50 %, палочкоядерных - 6,5 ± 0,05 %, юных - 3,8 ± 0,02 % (контроль 34,80; 1,2 соответственно).

У коров с ассоциативным проявлением некробактериоза и ИРТ содержание в 1 мкл крови присутствовало в среднем 11483,33 ± 1052,05 лейкоцитов; количество сегментоядерных нейтрофилов при этом достигало 45,7 2,61 %, процент моноцитов соответствовал менее 1 % (0,9 ± 0,01 %).

Параллельно изменялись факторы естественной резистентности, и, в частности, фагоцитарная активность макрофагов (ФА) и их поглотительная активность (фагоцитарное число). При поражении дистальных отделов конечностей фагоцитарная активность соответствовала 38,98 1,41 %, а фагоцитарное число (ФЧ) - 2,42 ± 0,17 латексных частиц.

При некробактериозе вымени эти показатели соответствовали 26,02 1,94 % и 1,88 ± 0,15 латексных частиц. Наименьшую ФА имели животные с поражением внутренних органов, которая достигала 27,12 ± 1,56 %, нарушение поглотительной активности фагоцитов (ФЧ) составляло 1,90 ± 0,29 латексных частиц.

У больных коров осложнение процесса гнойно-гнилостной микрофлорой приводило к подавлению фагоцитарной активности, которая составляла 32,12 ± 1,26 %, при норме у контрольных животных 39,55 ± 2,27 %. Поглотительная активность (ФЧ) и переваривающая способность макрофагов изменялась соответственно, она колебалась в пределах 1,97 ± 0,12 латексных частиц (у контрольных животных данный показатель составил 2,74 0,23 л.ч.).

При ассоциативном проявлении некробактериоза и ИРТ ФА равнялась 34,69 ± 1,19 %, а ФЧ - 1,84 ± 0,12 латексных частиц, то есть было на 0,9 латексных частиц ниже физиологического показателя здоровых животных.

Изучение клеточного иммунного ответа при различных формах некро-бактериоза показало, что при поражении конечностей содержание Т-лимфоцитов находилось на нижней границе физиологической нормы -31,74 ± 0,86 %, уровень Т-хелперов составлял 15,40 ± 0,86 %. Содержание В-лимфоцитов равнялось 24,74 ± 1,59 % (контроль 26,03 ± 0,53 %). При некробактериозе вымени количество Т-лимфоцитов равнялось 27,68 ± 0,75 %, а Т-хелперов - 12,58 ± 0,61 %. Уровень В-лимфоцитов составлял 18,18 ± 0,42 %. При висцеральной форме заболевания эти показатели составили 28,00 + 0,58, 11,20 ± 0,57 и 18,65 + 0,51 % соответственно. При наслоении гнойно-гнилостной микрофлоры содержание Т-лимфоцитов равнялся 30,65 ± 0,56 %. Содержание Т-хелперов в этой группе составляло 13,63 % (у кон-

трольных животных показатель составлял 25,11 ± 0,89 %), В-лимфоцитов -20,58 ± 1,12 %, что меньше по сравнению с контролем на 14,67 %. Уровень Т-лимфоцитов при ассоциативном проявлении некробактериоза и ИРТ соответствовал 30,35 ± 1,00 %. Количество Т-хелперов при данной форме равнялось 16,39 ± 0,84 % (25,11 ±..0,89 % в контроле). Кроме того, отметили снижение количества В-лимфоцитов, которые составляли 19,97 ± 0,52 %, что ниже, чем у контроля на 6,06 %.

Выявленные изменения иммунограммы свидетельствовали о нарушении взаимоотношений факторов клеточного и гуморального иммунного ответа на фоне подавления фагоцитарной активности макрофагов. Соответственно данные нарушения сопровождались изменением биохимического состава крови и, в частности, соотношения белковых фракций сыворотки крови.

При некробактериозе дистальных отделов конечностей уровень общего белка в сыворотке крови достигал 7,21 ± 0,22 г %, при этом альбумины составляли 36,68 ± 1,71 %, глобулины - 63,32 %. Соотношение а- и р-глобулинов равнялось 11,69 ± 1,06 и 31,48 ± 2,56 % соответственно, аналогичные изменения соотношений данных фракций отмечались и при других формах некробактериоза. Согласно представленных данных наиболее выраженные колебания отмечали при висцеральной форме заболевания. Так, содержание альбуминовой фракции сыворотки крови была низкой и составила в среднем 30,90 ± 1,84 г %. Количество а- и р-глобулинов равнялось 14,42 ± 1,00 и 42,68 ± 0,38 % соответственно.

Очевидно, изменение белкового обмена регистрировалось при всех вариантах проявления данной болезни. Резкое снижение общего белка, обусловленное нарушением соотношения альбуминов и глобулинов связано с воздействием на организм животных продуктов разрушения пораженных тканей и продуктов жизнедеятельности возбудителя некробактериоза.

Наиболее выраженные изменения гуморального иммунного ответа связаны с резким нарушением уровня у-глобулинов. Согласно полученных нами данных изменение содержания у-глобулинов в сыворотке крови были отмечены при некробактериозе вымени (10,62 ± 1,76 %), висцеральной форме болезни (12,00 ± 0,65 %) и осложнении основного заболевания гнойно-гнилостной микрофлорой (12,95 ± 1,65 %). Установлено, что содержание у-глобулиновой фракции сыворотки крови и во всех других случаях имеют низкие показатели. Так, при поражении некробактериозом дистальных отделов конечностей данный показатель составлял 20,15 ± 1,31 %, что ниже по сравнению с контролем на 7,26 %. При ассоциативном течении некро-бактериоза с ИРТ данный показатель составлял 19,29 95 ± 1,59 %. У здоровых животных он достигал 27,41 95 ± 1,45 %, то есть в два раза превышал показатель у больных коров.

Соответственно нарушалось соотношение различных классов иммуноглобулинов. Очевидно, что наиболее выраженные нарушения синтеза иммуноглобулинов отмечены нами при висцеральной форме болезни. Они сопровождались резким подавлением синтеза Jg А и Jg G. Содержание Jg A,

отвечающего за местный иммунный ответ, достигало при данной форме заболевания 0,66 ± 0,14 г/л по сравнению с содержанием его у здоровых животных 0,79 ± 0,04 г/л. Специфический ответ на воздействие Б. песгорИо-гиш определялся и ^ в, содержание которого резко снижалось при всех формах данного заболевания и отражало состояние иммуногенеза. Наиболее выраженное подавление его синтеза отмечалось при висцеральной форме заболевания (7,28 ± 1,59 г/л), поражении вымени (8,48 ± 2,12 г/л), ассоциативном проявлении с ИРТ (9,05 ± 1,34 г/л), а также сепсисе вызванном гнойно-гнилостной микрофлорой (10,44 ± 1,26 г/л), поражении дистальных отделов конечностей (10,83 ± 0,90 г/л). Параллельно этому содержание ^ М было достаточно высоким. У животных с поражением дистальных отделов конечностей данный показатель вдвое превышал его содержание у здоровых животных, как и при ассоциации заболевания с ИРТ. При осложненном гнойно-гнилостной микрофлорой процессе его содержание достигало 8,90 ± 0,29 г/л, а при висцеральной форме - 7,33 ± 1,09 г/л.

Таким образом, отмеченное нами достоверное снижение содержания общего белка, альбуминов и -глобулинов сыворотки крови, а также иммуноглобулинов класса А, в осуществлялось на фоне подавления функциональной активности и нарушении соотношений Т- и В-лимфоцитов. Выявленное высокое содержание р-глобулиновой фракции сыворотки крови и иммуноглобулинов класса М обусловлено, очевидно, высоким содержанием токсических факторов, отражающихся на состоянии различных органов и тканей.

2.5 Характер иммуноморфологических и патоморфологических нарушений при различных формах некробактериоза

При некробактериозе дистальных отделов конечностей макроскопических изменений во внутренних органах мы не наблюдали, за исключением печени. В органах иммуногенеза морфологические изменения были более выражены. В тимусе отмечали воспалительные процессы. Дольчатое строение сохранялось, определялся отек ткани и гиперемия ее сосудов.

При гистологическом исследовании мозговая зона превалировала над корковой. Граница между ними сохранялась. Определялись полнокровие сосудов железы, выраженная пролиферативная реакция сосудистых стенок, очаги плазматического пропитывания тканей и стенки сосудов. В корковой зоне лейкоциты располагались гнездно. Между ними выявляли единичные набухшие ретикулярные элементы. В цитоплазме некоторых из них определялись ядра разрушенных лимфоцитов и их осколки. Ядра ретикулярных элементов имели не ровную кариолемму и диффузно распыленный хроматин, указывающий на активное состояние макрофага. В мозговом веществе лимфоциты окружали увеличенные в объеме ретикуло-эпителиальные и эпителиальные элементы.

Более выраженные изменения обнаружены в регионарных лимфоузлах. Определялись лимфангиты подколенных, наружных и глубоких паховых

лимфоузлов. Лимфоузлы были увеличены в объеме, выглядели отечными, содержали точечные кровоизлияния. При микроскопии выявлялись реактивные изменения стенки сосудов, плазморрагии, увеличение лимфоидных фолликулов, которые утрачивали четкое очертание. Центры размножения опустошались, просматривались очаги разряжения и групповые скопления лимфоцитов. Паракортикальная зона имела более плотное расположение лимфоцитов. В мозговой зоне они располагались равномерно, разреженно. В мозговых синусах определялось не значительное количество плазмаци-тов. Отдельные макрофаги имели признаки цитолиза и кариолиза.

Селезенка не имела значительных макроскопических изменений, сохранялась форма и объем органа. При микроскопии наблюдали утолщение капсулы, фолликулы не имели четких очертаний, лимфоциты располагались в виде групповых скоплений. Герминативные центры диффузно выполняли рыхло расположенные лимфоциты. В красной пульпе содержалось значительное количество гемосидерина, обусловленного экстраваскулярным гемолизом. Гистиоциты были активированы, набухшие, увеличены в размерах.

У животных с поражением молочной железы альвеолярный эпителий очагово некротизировался, слущивался и замещался лимфоидными элементами. В обширных очагах некроза, в центральной его части, выявляли пет-рификаты. Сосуды не поврежденной зоны имели обильное кровенаполнение.

Тимус отечный, полнокровный сохранял дольчатое строение. При микроскопии граница между долями была четко выражена. Лимфоциты располагались в корковой зоне плотным слоем. Среди них выделялись им-муноциты и ретикулярные клетки, содержащие в цитоплазме фагоцитированный материал. Плотность расположения лимфоцитов в мозговом слое была меньшая, расположение не равномерное. Среди них выявлялись рети-куло-эпителиальные, эпителиальные, в том числе эпителиальные тельца Гассаля.

Развивались серозный лимфаденит надвыменных лимфоузлов и спле-ниты. При микроскопии наблюдались периваскулярные отеки, эндартерии-ты, васкулиты, нарушение фолликулярного строения, обусловленного не равномерным расположением лимфоцитов, разрежением фолликулов и мозговой зоны, появлением лимфоцитов в состоянии пикноза и рексиса, наиболее выраженное в паракортикальной зоне. Подавление макрофагальной активности характеризовалось увеличением объема ретикулярных элементов, накоплением в них фагоцитированного материала. Отек и набухание мя-котных тяжей сопровождалось очаговой инфильтрацией лимфоцитами.

Полученные результаты свидетельствовали о том, что некробактериоз вымени протекает на фоне морфологических изменений в лимфоидных структурах регионарных месту повреждения и обусловливает структурные нарушения тимуса. Поражение последнего приводит к вторичной генерализации процесса, заносу возбудителя в висцеральные органы. Сопровождается формированием в них очагов некроза. Занос возбудителя в висцеральные органы гематогенным и лимфогенным способом описывали Тартаковский

М. (1900), Шукевич И. (1913), Бальзаментов А. (1941).

При микроскопии печени мы определяли очаговые нарушения балочного строения, атрофию гепатоцитов, некроз некоторых из них. Местами выявлялись очаги кровоизлияний. Реактивные изменения стенки сосудов характеризовались пролиферативными процессами. Полнокровие сосудов и мелкие кровоизлияния выявлялись в легких. Периваскулярные инфильтраты носили диффузный характер. Наличие обширных мелких кровоизлияний Бальзаментов А. (1941), Каплтан А.В., Махсон М.Е., Мельникова В.М. (1985), Галанкин В.Н., Токмаков A.M. (1991), Чапанов С.С. (1991) объясняют тем, что возбудитель некробактериоза выделяет токсин, который повреждает эндотелий сосудов. Данные изменения в сердечной мышце сочетались с дистрофией миокардиоцитов, фрагментацией и инфильтрацией межмышечных волокон, с отеком и набуханием соединительно-тканых образований периваскулярных зон.

Очевидно, генерализация процесса, развитие некротических, дистрофических изменений в паренхиматозных органах является результатом им-мунодепрессивных нарушений, вызванных токсическим воздействием возбудителя. Возникая в центральных органах иммуногенеза, они определяют симптоматику болезни. Подобного мнения придерживаются Бальзаментов А. (1940), Тартаковский М. (1900) которые утверждают, что клиническая картина при генерализации процесса не характерна и регистрируется только на вскрытии после смерти.

Наиболее тяжелые иммуноморфологические изменения выявлены нами при висцеральной форме некробактериоза, сопровождающиеся вовлечением паренхиматозных органов и тимуса. Патологоанатомически они характеризовались полной атрофией сердечной доли и инволюцией шейной доли тимуса, которая выглядела в виде узкого сплошного тяжа, окруженного жировой тканью. При микроскопии тимус представлял собой длинный тяж, разделенный на доли толстыми прослойками соединительной ткани. Количество лимфоцитов в мозговом веществе резко снижалось, нарастало число соединительнотканных элементов типа гистиоцитов, которые формировали нежноволокнистую сеть. Эндотелий сосудов активно пролифериро-вал, к клеткам адвентиции примешивались лимфоциты.

Согласно нашим исследованиям, при висцеральной форме некробакте-риоза наиболее часто поражались лимфоузлы тех органов, в которых развивались патологические процессы. Лимфоузлы были увеличенными, отечными. На разрезе граница корковой и мозговой зон были не четко выражены, имели очаговые, чаще точечные кровоизлияния.

В процесс вовлекались средостенные, бронхиальные и портальные лимфоузлы. В них отмечали утолщение капсулы за счет ее отека и инфильтрации, нарушение фолликулярной структуры. В корковой зоне в отдельных фолликулах выявлялся более плотный сплошной слой. Паракорти-кальная зона определялась в виде узкого тяжа, большее число малых лимфоцитов в которых находились в состоянии рексиса. В мозговой зоне отмечали отек и гнездное скопление лимфоцитов. Ретикулярная строма подвергалась набуханию и фрагментации. Кровеносные сосуды были малокровны.

Эндотелий отдельных сосудов пролиферировал и подвергался некрозу. В отдельных эндотелиоцитах, ретикулоцитах, гистиоцитах и лимфоцитах выявлялись скопления микробных тел палочковидной, округлой и овальной формы. Периваскулярно отмечали отек и инфильтрацию полиморфными клеточными элементами.

Определялось полнокровие, увеличение в объеме селезенки и напряжение ее капсулы. При микроскопии фолликулы имели не правильную конфигурацию, размытые границы и очаги разряжения. Лимфоциты в периферийной зоне располагались пакетами более плотно, чем в центре. В красной пульпе лимфоциты располагались разряжено, развивались реактивные изменения сосудистых элементов, эндартерииты. Содержание гемо-сидерина было обильным, в связи с чем, определялись гемосидерофаги.

На фоне иммунных нарушений развивались патологические процессы в печени. Определялись крупноочаговые некротические фокусы, заполненные сухой крошковатой массой, окруженные зоной перифокального воспаления. Периваскулярно при микроскопии выявлялись плазморрагии, инфильтрация ткани полиморфоклеточными элементами, состав которых дополняли клетки адвентиции, набухание и фрагментация сосудистой стенки.

Специфические для некробактериоза нарушения определялись нами и группой исследователей (Шукевич И. (1913), Абдуллин X. (1947), Авроров В. (1947), Коваленко Я.Р. (1948), Альмеев Г. (1949), Стрижевский Н.В. (1952) и др.) в легких, сердечной ткани и некоторых других органах. Очаги некроза в легочной ткани заполнялись зеленоватого цвета крошковатой массой некротического детрита. При микроскопии стенка альвеол и бронхиол в зоне перифокального воспаления уплотнялась за счет обильной инфильтрации ее полиморфными элементами. Альвеолярный эпителий набухал, слущивался. Альвеолы расширялись, приобретали неправильную форму. В интерстиции накапливались макрофаги. Отмечалась пролиферация, набухание и слущивание эндотелия, наиболее выраженное в артериях, просвет которых сужался. Накапливающиеся вокруг некротического очага лейкоциты, в том числе макрофаги содержали округлые, палочковидные формы микроорганизмов. Очагово формировались кровоизлияния. В сердечной мышце обнаруживались некротические очаги, макрофагальная реакция, в которых характеризовалась не завершенным фагоцитозом. Зона некроза ограничивали лимфоидные элементы, макрофаги, в том числе гистиоциты и плазматические клетки. Мышечные волокна вне очага некроза набухали, распадались на фрагменты. Процесс носил характер продуктивного миокардита.

Очевидно, что развитие висцеральной формы некробактериоза обусловлено резким угнетением (атрофией) тимуса, нарушением структуры и функции периферических лимфоидных органов, приводящих к генерализации процесса, характеризующегося развитием в висцеральных органах некротических и воспалительных изменений, выражением которых явилось злокачественное течение болезни. При ассоциативном течении некробакте-риоза и стафилококкоза, по нашим данным, также происходит подавление резистентности и иммунологической реактивности, сопровождающихся

развитием септических процессов.

При осложнении некробактериоза гнойно-гнилостной микрофлорой шейная доля тимуса имела вид узкого серо-розового тяжа неравномерной толщины. При микроскопии железа утрачивала дольчатость и зональность. Толстые тяжи соединительной ткани плотным кольцом окружали скопления лимфоцитов. В центральных зонах этих лимфоидных скоплений определялись отдельные ретикулоциты и ретикуло-эпителиоциты. Отдельные разрушающиеся макрофаги, увеличенные в объеме, содержали в цитоплазме остаточные тельца.

Возникающие лимфангиты носили признаки серозного воспаления. Воспалительный отек ткани сопровождался разрежением субкапсулярной зоны и центра фолликулов. Корковая зона его выглядела в виде узкого ободка с равномерно распределенными лимфоцитами. Многие из них находились в состоянии рексиса. Лимфоциты межфолликулярных и мозговой зон располагались не равномерно. В мозговых синусах обнаруживали не значительное количество крупных лимфоцитов, часть которых напоминала клетки-«тени».

Выявляемая спленомегалия была обусловлена полнокровием органа. Расположение лимфоцитов указывало на некоторое разрежение зоны В-лимфоцитов (герминативные центры содержали рыхло расположенные лимфоциты). В Т-зонах железы в периартериальной зоне отмечались их гнездное скопление. Вдоль мякотных волокон определялись иммуноциты (лимфоцитов с интенсивно базофильным пиронинофильным ядром). Развивались эндартерииты, панваскулиты.

Выявленные морфологические изменения в органах иммуногенеза при данной форме болезни соответствовали развитию иммунодепрессивного состояния. Они отражали характер иммунологических нарушений и объясняли нарушение соотношения р- и у-глобулинов, в том числе ^ М, ^ в, на фоне которых происходила вторичная генерализация процесса. Расселение возбудителя в паренхиматозные органы приводило к развитию в них некроза и дистрофии, активной реакции элементов сосудистой стенки и мезенхимы. В печени развивались очаги некроза. Гепатоциты при этом увеличивались в объеме, подвергались лизису. Активация звездчатых ретикулоэндо-телиоцитов, пролиферация лимфоидных элементов, среди которых выявлялись округлые, палочковидные формы микроорганизмов, свидетельствовали об активной реакции организма, на метастазирование возбудителя.

При ассоциативном течении некробактериоза и ИРТ отмечалась более выраженная последовательность вовлечения в процесс органов иммуногенеза в связи с иммунодепрессивной особенностью вируса. Уже с первых дней заражения процесс носил злокачественный характер, подавлялась регенерация и восстановление дефекта.

При патологоанатомическом изучении материала от вынужденно убитых коров нами отмечено вовлечение в процесс тимуса. Уже на 15 день заражения объем органа уменьшался. На 20 - 30 день он с трудом выявлялся в жировой ткани. Дольчатое строение его не просматривалось. При микроскопии определялось разрастание соединительной ткани и замещение

паренхимы жировой. Граница между корковой и мозговой зонами не просматривалась. Лимфоциты располагались редко, отдельными и плотными пакетами, окруженными массивными тяжами соединительной ткани. Эпителиальные элементы выявлялись редко. Тельца Гассаля увеличенные в объеме имели слоистую структуру. По нашим данным при ассоциациях обнаруженные в тимусе изменения соответствовали атрофическим процессам, отражающихся на структуре и периферических лимфоидных образований.

Лимфоузлы, регионарные зоне поражения, имели признаки воспалительного отека, в том числе субкапсулярной зоны, при котором уменьшался объем корковой зоны. Лимфоциты в фолликулах располагались хаотично, неравномерно. Некоторые из них подвергались рексису, а макрофаги имели мелкие включения в цитоплазме. В герминативной зоне определялись рыхло расположенные лимфоциты и редкие плазмоциты. В просвете синусов рыхло распределялись лимфоциты, соединительнотканные тяжи их набухали, распадались на фрагменты В селезенке лимфоидные фолликулы расширялись, границы их размывались, светлые центры разрежались, дендритные клетки набухали, некоторые подвергались лизису. В ядре макрофагов мелкодисперсный хроматин распределялся не равномерно, в цитоплазме присутствовали остаточные тельца. Выявлялись геморрагии, периваскуляр-ные инфильтраты.

Очевидно, при развитии смешанных инфекций первично возникают деструктивные изменения в регионарных первичному аффекту лимфоузлах. Воздействие инфекции обусловливает сосудистые нарушения, изменение структуры Т- и В-зон дифференцировки данных субпопуляций, на фоне которых возникает поздняя генерализация процесса. Локализуясь в основном в эпителиальных элементах паренхимы, возбудитель ИРТ приводит к развитию воспалительных, а затем и некротических процессов в ткани. В печени обнаруживаются мелкие очаги некроза, деструкция балок, дистрофия гепатоцитов. В некоторых из них выявляются вирусные тельца-включения. В междольковой ткани и диффузно между гепатоцитами накапливаются мезенхимальные лимфоидные элементы. В легких межальвеолярные перегородки инфильтрируют лимфоидными элементами. Эпителий бронхов приобретал своеобразные «подушкообразные» утолщения, характерное для вирусных пневмоний.

В сердце реактивные изменения сосудов сопровождались отеком, сочеталось с разволокнением, фрагментацией миокардиоцитов, пролиферацией и инфильтрацией ткани. Аналогичные изменения выявлялись и в других паренхиматозных органах. Они завершались, как правило, выбраковкой больных животных и их вынужденным убоем.

Резюмируя результаты исследований, следует заключить, ассоциации некробактериоза с вирозами (ИРТ) и бактериозами (стафилококкоз, стреп-тококкоз) сопровождаются полной инволюцией вилочковой железы, приводят к структурным нарушениям в периферических лимфоидных образованиях, сопровождаются генерализацией и заносом возбудителей в паренхиматозные органы, развитием в них некротических, дистрофических и дру-

гих разрушительных процессов, обусловленных нарушением регенерации поврежденных тканей. Подтверждают данное заключение восстановление нарушенного иммуногенеза и регенерации тканей, при использовании ци-томединов тимуса, и в частности, тимогена.

Изменение иммунного ответа у больных некробактериозом коров свидетельствует о подавлении гуморального иммунитета, обусловленного резким снижением В-лимфоцитов, у-глобулинов, специфических и не специфических иммуноглобулинов.

Низкий уровень В-лимфоцитов обусловливает нарушение антителоге-неза как при некробактериозе, так и при смешанном течении его с герпес-вирусной инфекцией.

Применение иммуномодуляторов в организме больных некробакте-риозом животных повышает устойчивость тканей, естественную резистентность организма, иммунологическую реактивность и регенерацию тканей. При ассоциации с ИРТ и стафилококкозом эффективность стимулирующего влияния не достаточно высока, в связи с чем, процесс принимает затяжное, хроническое течение.

3 ВЫВОДЫ

1 Анализ эпизоотической обстановки курируемого хозяйства свидетельствует о стационарном неблагополучии дойного стада по некробакте-риозу и его ассоциациям.

2 Заболевание имеет сезонный характер, процент инфицированности поголовья в осенний и весенний период достигает 24,6 %.

3 Согласно локализации патологического процесса у коров выделяются:

- некробактериоз дистальных отделов конечностей;

- некробактериоз вымени;

- висцеральная форма некробактериоза.

4 Особенности клинического проявления болезни определяет характер иммуноморфологических изменений. При некробактериозе дистальных отделов конечностей и вымени развивается иммунодепрессивное состояние, при висцеральной форме и ассоциациях некробактериоза с ИРТ - акциден-тальная инволюция тимуса. Осложнение заболевания гнойно-гнилостной микрофлорой приводит к иммунодефициту, обусловленному В-клеточной недостаточностью.

5 Нарушение макрофагальной активности, соотношения Т- и В-популяций лимфоцитов и соотношение иммуноглобулинов отражают морфогенез тимической перестройки.

6 Инволюция вилочковой железы при висцеральной форме болезни обуславливает раннюю генерализацию процесса.

7 Акцидентальная инволюция тимуса при смешанном с ИРТ течении болезни вызвана иммунодепрессивным действием герпес-вируса.

8 Нарушение регенерации поврежденных тканей обусловлено имму-нодепрессивным действием, как возбудителей, так и продуктов распада тка-

ней.

9 Цитомедины тимуса и, в частности, тимоген восстанавливают мор-фо-функциональное состояние органов иммуногенеза, регенерацию тканей и повышают их устойчивость.

4 ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Учитывая морфогенез иммунных нарушений, рекомендуем:

- использовать тимоген для стимуляции естественной резистентности и иммунологической реактивности;

- не допускать ассоциативного течения болезней;

- коррелировать напряженность иммунитета посредством периодических исследований уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови;

- используя местно иммунокорректоры (тимоген), стимулировать регенерацию тканей.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1. Иммунологические изменения у коров при онковирусной инфекции и ассоциация ее с некробактериозом / А.А. Новых, Е.В. Максимова, Н.Н. Новых, Е.А. Михеева, В.В. Лебедко // «Аграрная наука - состояние и проблемы». - Ижевск, 2002. - С. 220 - 224.

2. Михеева, Е.А. Особенности проявления иммунологической перестройки у коров при некробактериозе и его ассоциациях / Е.А. Михеева, А.А. Новых // «Перспективы развития регионов России в XXI веке». -Ижевск, 2002. - С. 148 - 151.

3. Роль вирусоносителей в развитии лейкоза и его ассоциаций с нек-робакриозом / Н.Н. Новых, А.А. Новых, Е.А. Михеева, В.В. Лебедко // «Достижения ветеринарной медицины - XXI веку». - Барнаул, 2002, Ч. 1. -С. 74-76.

4. Особенности проявления гемобластозов и их ассоциаций в некоторых хозяйствах Удмуртии / А.А. Новых, Н.Н. Новых, Е.В. Максимова, Р. П. Сентякова, Е.А. Михеева и др. // «Достижения ветеринарной медицины -XXI веку». - Барнаул, 2002, Ч. 2. - С. 280 - 284.

5. Михеева, Е.А. Этиопатогенез инфицированности тканей дисталь-ных отделов конечностей у крупного рогатого скота / Е.А. Михеева, А.А. Новых, В.В. Лебедко // «Эффективность адаптивных технологий». -Ижевск, 2003. - С. 308 - 310.

6. Михеева, Е.А. Клиническое и патологоанатомическое проявление различных форм некробактериоза / Е.А. Михеева, А.А. Новых // «Устойчивому развитию АПК - научное обеспечение». - Ижевск, 2004. - С. 154 -159.

ü-8069

На правах рукописи Михеева Екатерина Александровна

Морфогенез иммунных нарушений при некробактериозе крупного рогатого скота

16.00.02. - патология, онкология, морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Сдано в набор 10.04.2004 г. Подписано в печать 12.04.2004 г. Формат 60 х 84 / 16. Объем 1 п. л. Тираж 100 экз. Заказ № 7296. Гарнитура Times New Roman. Отпечатано на Rex Rotary ред.-изд. отд. ФГОУ ВПО «Ижевская ГСХА». Лицензия ЛУ № 059 от 12.03.98.

Актуальность темы.

Одной из актуальных проблем ветеринарной медицины на современном этапе ее развития является оздоровление поголовья крупного рогатого скота от бактериозов и вирозов. Особого внимания заслуживает некробактериоз, занимающий одно из ведущих мест среди инфекционных заболеваний скота (Си-дорчук A.A., Семенов H.H., 1987; Лукъяновский В.А., 1987, 1990 и др.).

Некробактериоз — инфекционная болезнь, характеризующаяся гнойно-некротическим распадом кожи, слизистых оболочек, паренхиматозных органов. Заболевание протекает длительно, со значительной потерей хозяйственных и племенных качеств животных, снижением молочной и мясной продуктивности (Гринаф П.Г., Макколуш Ф., Цивер А., 1976). Широкое распространение некро-бактериоза ученые связывают с нарушением технологий ухода за копытцами, снижением естественной резистентности, не благоприятными климатическими условиями, не сбалансированным рационом и т.д. (Чумаченко В.Е., 1982; Шакуров М.Ш., Кашов Н.М., 1988; Калинихин В.В., 1988; Самоловов A.A., 1990).

Согласно существующей классификации, данное заболевание отличается значительным разнообразием клинического проявления. Наиболее часто регистрируется некробактериоз дистальных отделов конечностей, осложняющийся, как правило, гнойно-гнилостной микрофлорой. Заболевание при этом принимает хроническое течение, в процесс вовлекаются глубоколежащие ткани, подвергающиеся некрозу, механизм которого недостаточно изучен (Гримаев Н.Е., Бахтин Д.П., 1971; Самоловов A.A., 1997; Елисеев А.И., Коломийцев С.М., Бледнова А.И., 2000).

Данные о характере иммунологических, гематологических и биохимических изменений выявляемых при различных формах некробактериоза не многочисленны (Соколова Т.П., Петренко Г.Г., Степанова О.В., 1980; Семенова А.Т., Колесников И.К., 1983; Валев Н.О., 1998; Горьковенко Н.Е., 2000 и др.).

Сведения об участии центральных и периферических органов иммуногенеза в развитии болезни отсутствуют. Совершенно не изучены динамика и последовательность иммунных нарушений при сочетанном проявлении некробак-териоза с другими инфекциями, в том числе с широко распространенными ви-розами.

Имеющиеся работы Тартаковского М., 1900; Бальзаментова А., 1940; Без-ина А.Н., 2000; Berger G., 1977 и др. о характере патологоанатомических проявлений некробактериоза не содержат сведений освещающих механизмы развития висцеральной формы болезни и участие в них факторов резистентности и иммунологической реактивности. Не полностью раскрыты механизмы иммуно-стимуляции и эффективность различных стимуляторов резистентности и иммунологической реактивности.

С учетом изложенного считаем, что детальное изучение патоморфологии различных форм некробактериоза, участие в их развитии нарушений в центральных и периферических органах иммуногенеза и соответствие им гематологических, биохимических и иммунологических изменений имеет, на наш взгляд, не только теоретический, но и большой практический интерес. Цель и задачи исследований.

Цель работы - изучить динамику иммунного ответа, характер клинических, патоморфологических и иммуноморфологических изменений при различных формах некробактериоза, его ассоциациях с ИРТ и при иммунокоррекции тимогеном.

В соответствии с поставленной целью определены следующие задачи:

- провести анализ эпизоотической ситуации по заболеваемости коров некро-бактериозом в СПК «Россия»;

- установить особенности клинических, в том числе гематологических, биохимических и иммунологических проявлений различных форм некробактериоза и его ассоциаций с ИРТ;

- изучить динамику нарушений факторов естественной резистентности у больных некробактериозом коров;

-' выявить характер патоморфологических изменений в различных органах и тканях в зависимости от формы некробактериоза, его ассоциаций с ИРТ;

- определить динамику иммуноморфологических изменений в тимусе, селезенке и лимфатических узлах у больных коров при различных формах некробактериоза и при его осложнении ИРТ;

- изучить эффективность иммуностимуляции при лечении больных некробак

• териозом коров.

Научная новизна исследований:

- установлен характер иммуноморфологических изменений при различных формах некробактериоза и при его ассоциациях с ИРТ;

- определена зависимость клинических, в том числе гематологических, биохимических, иммунологических и патологоанатомических нарушений от состояния органов иммуногенеза;

- раскрыта динамика нарушений факторов естественной резистентности и иммунологической реактивности соответственно систематике некробакте

• риоза;

- установлено влияние иммуностимулятора тимогена на состояние раневого процесса и на восстановление нарушенного иммуногенеза.

Практическая значимость работы.

Данные об иммуноморфологических изменениях в центральных и периферических органах иммуногенеза позволяют раскрыть патогенетические механизмы развития некробактериоза и его ассоциаций. Использование цитоме-динов восстанавливает нарушенный иммуногенез, улучшает регенерацию тканей и сокращает сроки выздоровления животных и потому они могут быть рекомендованы в качестве средств коррелирующих иммунный ответ и повышающих устойчивость организма.

Апробация работы.

Результаты исследований доложены:

- на региональной научно-практической конференции «Аграрная наука — состояние и проблемы» (Ижевск, 2002);

- на межрегиональной научно-практической конференции молодых ученыхспециалистов «Перспективы развития регионов России в XXI веке» (Ижевск, 2002);

- на всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ве-. теринарной медицины (Уфа, 2003);

- на всероссийской научно-практической конференции «Устойчивому развитию АПК — научное обеспечение» (Ижевск, 2004);

- на расширенном заседании кафедры инфекционных болезней и патанатомии с участием профессорско-преподавательского коллектива факультета ветеринарной медицины и зооинженерного факультета Ижевской ГСХА (Ижевск, 2003, 2004).

Основные положения выносимые на защиту:

- разнообразие клинических и патологоанатомических проявлений некробак-. териоза крупного рогатого скота обусловлены морфологическими изменениями в лимфоидных органах. Характер иммунологических нарушений при различных формах некробактериоза определяет морфогенез изменений в тимусе;

- генерализация процесса сопровождается поражением висцеральных органов и является результатом акцидентальной инволюции тимуса;

- применение цитомединов тимуса (тимогена) устраняет дефицит В-лимфоцитов, О и коррелирует нарушенный иммуногенез.

Публикации.

Основные положения работы опубликованы в 6 научных статьях, тезисах и материалах научных конференций.

Объем и структура работы.

Работа изложена на 176 страницах компьютерного набора и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение полученных результатов, выводы, практические предложения, библиографический список, кроме этого иллюстрирована 72[ рисунками и 16 таблицами. Библиографический список включает 228 источников, в том числе 29 работ иностранных авторов.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

5 ВЫВОДЫ

1 Анализ эпизоотической обстановки курируемого хозяйства свидетельствует о стационарном неблагополучии дойного стада по некробактериозу и его ассоциациям.

2 Заболевание имеет сезонный характер, процент инфицированности поголовья в осенний и весенний период достигает 24,6 %.

3 Согласно локализации патологического процесса у коров выделяются:

- некробактериоз дистальных отделов конечностей;

- некробактериоз вымени;

- висцеральная форма некробактериоза.

4 Особенности клинического проявления болезни определяет характер иммуноморфологических изменений. При некробактериозе дистальных отделов конечностей и вымени развивается иммунодепрессивное состояние, при висцеральной форме и ассоциациях некробактериоза с ИРТ — акцидентальная инволюция тимуса. Осложнение заболевания гнойно-гнилостной микрофлорой приводит к иммунодефициту, обусловленному В-клеточной недостаточностью.

5 Нарушение макрофагальной активности, соотношения Т- и В-популяций лимфоцитов и соотношение иммуноглобулинов отражают морфогенез тимической перестройки.

6 Инволюция вилочковой железы при висцеральной форме болезни обуславливает раннюю генерализацию процесса.

7 Акцидентальная инволюция тимуса при смешанном с ИРТ течении болезни вызвана иммунодепрессивным действием герпес-вируса.

8 Нарушение регенерации поврежденных тканей обусловлено иммунодепрессивным действием, как возбудителей, так и продуктов распада тканей.

9 Цитомедины тимуса и, в частности, тимоген восстанавливают морфо-функциональное состояние органов иммуногенеза, регенерацию тканей и повышают их устойчивость.

6 ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Учитывая морфогенез иммунных нарушений, рекомендуем:

- использовать тимоген для стимуляции естественной резистентности и иммунологической реактивности;

- не допускать ассоциативного течения болезней;

- коррелировать напряженность иммунитета посредством периодических исследований уровня иммуноглобулинов в сыворотке крови;

- используя местно иммунокорректоры (тимоген), стимулировать регенерацию тканей.