Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Лептоспироз собак

На правах рукописи

БОБРАКОВ СЕРГЕИ ИВАНОВИЧ

ЛЕПТОСПИРОЗ СОБАК

(эпизоотология, патогенез, иммунология, профилактика)

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология,

эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология

16.00.02 - патология, онкология и морфология животных

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Барнаул 2005

Работа выполнена на кафедре микробиолог ии и вирусологии Института ветеринарной медицины Алтайского государственного аграрного университета

Научный руководитель: доктор ветеринарных наук, профессор

П. И. Барышников.

Официальные оппоненты- доктор ветеринарных наук, профессор

Ю. М Малофеев, кандидат ветеринарных наук Г.С. Корж.

Ведущая организация Институт ветеринарной медицины

Омского государственного аграрного университета

Защита диссертации состоится 12 мая 2005 г. в 12 часов на заседании диссертационного совета Д 220 002.02 при Алтайском государственном аграрном университете по адресу: 656922, г Барнаул, ул. Попова, 276.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ИВМ АГАУ.

Автореферат разослан « 2005 ]

Ученый секретарь диссертационного совета, доктор ветеринарных наук; профессор _

3S-3S-

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Лептоспироз - является зооашропонозным природно-очаговым инфекщюнным заболеванием домашних и диких животных многих видов, болеет также человек. Болезнь имеет широкое распространение во многих странах мира и в различных регионах России. В решении X конференции Международного эпизоотического бюро (Лондон, 1982), отмечено, что лептоспироз, несмотря на многочисленные исследования, все еще остается не только экономической, но и социальной проблемой (Ананьин В.В., 1971; Евдокимова O.A., 1976; Малахов Ю А., 1992).

Впервые лептоспироз у собак был описан Хофером в 1850 г. В конце XIX века в Германии наблюдалась эпизоотия своеобразного заболевания среди собак в г. Штутгарте, получившее позднее название «ппуптардская болезнь».

A. Н. Klarenbeck и W. Schufiner (1933) выделили от больной собаки возбудителя штуттгардской болезни, названного ими L. canicola. У собак был также диагностирован иктерогеморрагический лептоспироз (Р. Uhlenhuth, W. Fromme, 1919).

Зорин В.Л. (1995) сообщает о массовой вспышке лептоспироза среди собак г. Иркутска в 1993-94 гг., где было зарегистрировано более пятидесяти больных животных.

По данным Швечковой О.Г. (1996) в г. Санкт-Петербурге за период с 1990 по 1995 г. установлено увеличение процента серопозитивных реакций на лентоспироз у городских собак с 0,03 % до 1,31 %, и с 1988 г. наблюдается тенденция к доминированию в этиологической структуре серогруппы Canicola.

Болоцкий И.А (1999) установил, что за период 1988-1997 гг. на Северном Кавказе количество положительных реакций на лептоспироз у собак увеличилось на 14,3 %, по сравнению с 1978-1987гг., при этом наибольшее количество изолятов лептоспир также удалось выделить от животных данного вида.

Среди домашних животных наиболее близкий контакт с человеком имеют собаки. При этом являясь одним из звеньев эпизоотического процесса при леп-тоснирозе, они могут способствовать заражению и человека. Собаки известны в основном как источники инфицирования людей лептоспирами Canicola и Icterohaemorrhagiae (Ананьин В В., 1971). Наибольшая опасность существует дня лиц, пользующихся ездовыми собаками, работающих в питомниках, владельцев охотничьих и домашних собак и ветеринарных работников (Ананьин

B.В.,1961; Абрамсда ЛА., 1976). По данным Швечковой О.Г. (1996) за период 1993-1995 гг. в Санкт-Петербурге установлено заражение 15 человек лептос-пирозом непосредственно от собак. Во всех расследованных случаях собаки являлись активными лептоспировыделйтелями, и заражение происходило контактным путём при уходе за животными, оказании врачебной помощи и уборке мочи. При этом 6 человек заразились L. icterohaemorrhagiae. В литературе есть ряд сообщений о вспышках лептоспироза среди населения, вызванного заражением от собак (Ананьин В.В., 1971: Перадзе Т.В., 1981; Маненкова Г.М., 2003; Меркулов А В., 2003; Шеша^о^.^ЦДОЗДишкля

I иктпт

I СЛвяMjpr

* О» \•¡tfunföfa

В настоящее время лептоспироз у сельскохозяйственных животных достаточно подробно изучен многими учеными, однако по собакам имеются лишь отдельные публикации не освещающие многие стороны данной патологии В связи с этим наши исследования были посвящены более детальному изучению проявления болезни у данного вида животных.

Цель и задачи исследований.

Целью настоящей работы явилось комплексное изучение особенностей эпизоотологии и патогенеза, усовершенствование диагностики и оптимизация на этой основе мероприятий по профилактике лептоспироза собак

Соответственно, были поставлены следующие задачи

1 изучить распространение лептоспироза с помощью РМА и микроскопии мочи с применением конденсора «темное поле» в зависимости от возраста, пола и условий содержания собак,

2. провести анализ этиологической структуры,

3 изучить возможность совершенствования лабораторной диагностики с применением РА и ГЩР;

4 изучить формирование поствакцинального иммунитета у собак;

5 определить устойчивость возбудителя лептоспироза в моче у данного вида животных;

6 изучить некоторые биохимические показатели крови, сыворотки и мочи от здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак,

7 провести гистологическое исследование почек от животных разного возраста и иммунного статуса;

8. разработать профилактические мероприятия при лептоспирозе собак в Алтайском крае.

Научная новизна работы Впервые в условиях Алтайского края изучены особенности эпизоотического процесса у собак, представлен анализ этиологической структуры возбудителя заболевания, установлена продолжительность сохранения лептоспир в моче в зависимости от ее кислотности и температуры окружающей среды.

Проведено макромикроморфологическое исследование почек у здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза животных в зависимости от возраста и породы.

Изучены некоторые особенности иммунного ответа у собак после вакцинации против лептоспироза.

Проведен анализ диагностической ценности РА и ПЦР, в сравнении с

РМА

Показана возможность применения для биохимического исследования мочи собак диагностических полосок PENTA PHAN

Практическое значение работы Результаты проведенных исследований применяются в работе ветеринарных специалистов в питомнике Зонального центра кинологической службы при ГУВД Алтайского края и ветеринарной клинике «Олвет» г в-

• научно-|^ганвтесвд©<|в^»вбв<йвг;, рекомендованные к внедрению в производство, Баржул, 2®e2;ftM»M*4 '

^ I

! »»4 m

• рекомендации «Особенности эпизоотологии и профилактика леп-тоспироза животных в Алтайском крае», Барнаул, 2005;

• план противоэпиэоотаческих мероприятий по Центральной ветеринарной лечебнице г Барнаула на 2002-2003 гг.,

• учебный процесс для подготовки ветеринарных специалистов в Институте ветеринарной медицины АГАУ

Основные положения вьпгосимъте ня яяпртту

2. Результаты эпизоотологического исследования особенностей проявления эпизоотического процесса лепгоспироза у собак.

3 Морфобиохимические показатели крови, сыворотки и мочи здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак

4 Макромикроморфологические исследования почек здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак в зависимости от возраста и породы

5 Динамика поствакцинального иммунного ответа у собак при леп-тоспирозс.

6. Результаты использования дополнительных методов диагностики лептоспироза у собак.

7. Оптимизация профилактических мероприятий при лептоспирозе собак в Алтайском крае.

Апробадия работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на' четвёртой городской научно-ирактическсй конференции молодых учёных «Молодёжь - Барнаулу» (Барнаул, 2002г.); городской тучно-практической конференции «Социально - экологические и зооветеринарные проблемы содержания собак и кошек в г. Барнауле» (Барнаул, 2002г.); Ш региональной научно-практической конференции по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Новосибирск, 2003г.); юбилейной международной научно-практической конференции «Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве» (Барнаул, 2003г.); региональной научной конференции посвящбпной 60-летию Алтайского госаг-роуниверситета «Актуальные вопросы ветеринарной медицины и их решение в современных условиях» (Барнаул, 2003г.); 10-й Всероссийской научно-практической конференции по лепгоспирозу (Анапа, 2003г.); курсах повышения квалификации ветеринарных врачей системы МВД (Ростов, 2004г.).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 6 тучных работ.

Внедрение результатов исследования Рекомендации «Особенности эпизоотологии и профилактика лептоспироза животных в Алтайском крае» рассмотрены и одобрены научно-техническим советом Управления ветеринарии администрации Алтайского края; результаты исследований включены в «Научно-технические разработки, рекомендованные к внедрению в производство» и используются в ветеринарных клиниках Алтайского края и учебном процессе при подготовке и повышении квалификации ветеринарных специалистов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, библио-

график» и приложение. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 21 рисунком Список литературы содержит 119 источников, из них 15 зарубежных авторов

1. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 1 1 Материалы и методы

Исследование и обработка экспериментального материала проводилась в течение 2001-2003 годов на базе кафедр микробиологии и вирусологии и анатомии и гистологии ИВМ АГАУ, Алтайской краевой ветеринарной лаборатории, Алтайской научно-исследовательской ветеринарной станции и Всероссийском научно-исследовательском институте пантового оленеводства СО РАСХН.

Для проведения исследований материалом служили пробы крови, сыворотки, мочи и почек, получаемые от собак различных пород И возрастов поступающих на эвтаназию или лечение в ветеринарную лечебницу Территориального управления ветеринарии государственной ветеринарной службы Алтайского края по г Барнаулу, а также содержащихся в питомнике Зонального центра кинологической службы при ГУВД Алтайского края. Всего исследовано 108 проб крови, 502 - сыворотки, 257 - мочи и 32 - почек

Постановку реакции микроагглютиналии (РМА) проводили в соответствии с ГОСТом 25386-91 с использованием 15 диагностических штаммов леп-тоспир, полученых в Алтайской краевой ветеринарной лаборатории.

При постановке реакции агглютинации (РА) использовали набор- Лептос-пира Байрам-Али Слайд-Антиген (Лепто БАСА).

При постановке полимеразной цепной реакции (ПЦР) руководствовались временным наставлением по применению тест-системы НПО «Нарвак» для обнаружения патогенных лептоспир.

Определение количества гемоглобина проводили стандартным методом при помощи гемометра ГС-3.

При определении количества глюкозы в крови использовали диагностические полоски MELLIPHAN.

Подсчет количества эритроцитов и лейкоцитов производили при помощи камеры с сеткой Горяева.

Выведение лейкоцитарной формулы проводили по окрашенпым мазкам крови по методу Романовского-Гимза, путем дифференциального подсчета под иммерсионной системой микроскопа 100 лейкоцитов по однопольному методу (Симонян Г.А., 1995).

Определение общего белка в сыворотке крови проводили рефрактометрическим методом. Для этого использовали рефрактометр типа ИРФ

Определение белковых фракций сыворотки крови проводили турбиди-метрическим (нефелометрическим) методом

, Для постановки сулемовой пробы в пробирку вносили 0,5 мл сыворотки крови и 1 мл 0,85%-ного раствора хлорида натрия, перемешивали Из микробюретки добавляли 0,1%-ный раствор сулемы - сначала умеренно до появле-

ния первоначального обратимого помутнения, а уже после этого медленно по каплям до стойкого помутнения (через вертикальный слой жидкости нельзя прочитать газетный текст). Результат данной пробы выражали в количестве миллилитров раствора сулемы, пошедшего на титрование.

Биохимические показатели мочи определяли, используя диагностические полоски PENTA PHAN.

Для микроскопического исследования мочи препараты готовили методом раздавленной капли, материал просматривали в темном поле микроскопа при увеличении 20x7-10,40x7-10 в 50 полях зрения.

Гистологические срезы готовили методом заливки в парафин и окрашивали гематоксилин-эозином по Бемеру. Импрегнацию серебром проб почек проводили по методу Левадити.

Для статистического анализа и обработки полученных результатов использовали методики и программы:

«Биометрия» (Лакин Г.Ф., 1990);

«Учебное пособие по биометрии для студентов и аспирантов зооинженерного и ветеринарного факультетов» (Коростелева H И, Рабинович И.Е, 1992);

Microsoft Excel 97.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3 1 Анализ эпизоотической обстановки по лепгоспирозу собак в Алтайском крае.

По данным ветеринарной государственной статистической отчетности с 1994 по 2003 гг. в Алтайском крае неблагополучных пунктов по лепгоспирозу собак не зарегистрировано. Однако, со слов ветеринарных врачей частных клиник, случаи этой болезни у собак имели место и сопровождались лихорадкой, угнетением и гематурией.

Для анализа эпизоотической обстановки в этот период доступными, в определенной степени, явились только сведения: по объемам вакцинации собак против лептоспироза. По данным ветеринарной отчётности до 1997 года в Алтайском крае крупномасштабной вакцинации собак против лептоспироза не проводилось.

Начиная с 1997 года количество собак вакцинированных против лептоспироза в целом по Алтайскому краю постоянно увеличивалось с 2165 животных в 1997 году до 43002 - в 2003 году В Предгорной области Алтайского края количество вакцинированных против лептоспироза собак в 1997 г составило 234 головы. Однако, в 1998 г. объем вакцинопрофилактики возрос и составил 9228 животных. После некоторого снижения в 1999 году, количество вакцинированных собак в последующий период постоянно увеличивается достигая в 2003 году 16940 животных В Салаирской и Лесостепной областях с 1997 года наблюдается динамичный рост количества

вакцинированных собак от 148 до 5267 и от 1783 до 9913 голов соответственно, с некоторым снижением в Салаирской области в 2001 году, а в Лесостепной - в 2003. В Степной области в 1997 году вакцинация собак против лептос-пироза не проводилась, но в 1998 году количество вакцинированных животных составило 2524 головы В последующие годы здесь отмечается устойчивая динамика возрастания объема вакцинации и в 2003 году достигает 10882 головы.

Определение уровня вакцинации собак против лепгоспироза было проведено за 1998 год, т к. только за этот год в доступной там литературе известно их поголовье (Снигирев С И., 2003) При этом в целом по Алтайскому краю уровень вакщшации составил 4,83 %, с колебанием по областям от 0,9 % (Са-лаирская) до 13,8 % (Предгорная).

3.2 Эпизоотологическое обследование на лептоспироз собак в г. Барнауле

С целью изучения эпизоотической обстановки по лептоспирозу собак с марта 2001 по сентябрь 2003 г на базе ветеринарной лечебницы Территориального управления ветеринарии государственной ветеринарной службы Алтайского края но г. Барнаулу нами было получено 502 пробы сыворотки крови и 257 проб мочи от животных различных пород в возрасте от 1 месяца до 17 лет Пробы сыворотки крови исследовали в РМА с яепгоспирами 15 серогрупп, начиная с разведения 1:10 и до максимального титра Пробы мочи исследовали под микроскопом с конденсором «темного поля»

3.2.1. Инфицированность собак возбудителем лепгоспироза

При серологическом исследовании сывороток крови в 83 (16,5 %) пробах были обнаружены антитела к различным серогруппам лепгоспир (табл 1).

Таблица 1.

Результаты серологического обследования собак на лептоспироз.

Положительные пробы

№ группы Возраст животного Количество проб, исследованных в РМА Количество проб Доля, %

1 От 1 до 7 месяцев 65 5 7,7

2 От 7 мес. до года 69 5 7,2

3 От года до 7 лет 176 35 19,9

4 Старше 7 лет 192 38 19,8

Итого 502 83 16,5

В зависимости от года исследования количество инфицированных животных было различным. В 2001 году наблюдалось 24 (28,9 %) собаки положительно реагирующие в РМА, в 2002 году этот показатель вырос до 50 (60,2 %) проб, а в 2003 году снизился до 9 (10,8 %) животных.

При рассмотрении зависимости выявления положительных реакций в РМА от пола животных выяснилось, что в 54 (65,1%) случаях реагировали кобели, а в 29 (34,9%) случаях - суки.

При анализе инфицированнскгш собак возбудителем лептоспироза в зависимости от породы было установлено, что преимущественно реагируют в РМА породистые животные - 67 особей (80,7 %), на беспородных приходится только 16 особей (19,3 %).

Анализ породной инфицированности собак возбудителем лептоспироза показал, что чаще других поражались животные пород доберман-пинчер (54,4 %) и кавказская овчарка (50,0 %) Редко реагировали в РМА животные пород коккер-спаниель (10,0 %), болонка (8,3 %)ипудель (7,7 %)

Инфицированных животных выявляли круглогодично, кроме февраля Максимальное количество инфицированных собак наблюдали в ноябре и марте, соответственно 20,5% и 15,7% (рис. 1).

I II III IV V VI VII VIII IX X XI XII Месяцы

Рисунок 1. Сезонность инфицированности собак лептоспирозом

При сравнительном анализе количества инфицированных животных в зависимости от способа их содержания замечено, что больше нсет инфицированных животных наблюдалось в благоустроенных квартирах (37 собак), в то время как в питомнике и частном секторе было выявлено по 23 собаки. Однако, удельная доля этих животных была наибольшей в питомнике достигая 20.4%, а в частном секторе и квартирах оказалась почти одинаковой, соответственно 15,9% и 15,2%.

3.2.2. Этиологическая структура лентоеггироза собак

">1 иоло1 ическая структура представлена антителами к лентосиирам следующих серогрупп: Canicola - 32 (38.6 %) пробы. Icterohaemorrhagiae - 31 (37.3 %) проба, Cynopteri - 7 (8.4 %) проб, Australis, Autumnalis по 6 (по 7,2 %) проб, Pyrogenes, Ballum - по 3 (по 3.6 %) пробы, Sejroe, Tarassovi — по 2 (по 2.4 %) пробы. Grippotyphosa. Hebdomadis, Pomona - по 1 (по 1,2 %) пробе (табл. 2).

В 2001 году у собак в тг но логической структуре доминировали лептоспи-ры ccporpvnn: Ictcrohaemorrhagiac - 10 (40 %) проб, Cvnoptcri - 5 (20 %) проб и Canicola - 4 (16 %) пробы . В 2002 году на первое место выходит cepoipyinia Canicola - 22 (36.7 %) пробы, за ней следует Ictcrohacmorrhagiac - 21 (35 %) проба, Autumnalis - 5 (8.3 %) проб. I) 2003 голу продолжает доминировать се-рогруппа Canicola - 6 (60 %). серогруппы Australis и Pyrogenes по 2 (по 20%) пробы.

Таблица 2

Этиологическая структура лептоспироза у собак.

< 2 с± 1С С X 3 4 н и с г- Количество проб и доля (%) положительных реакций с лептоспирами ccporpvnn

Canicola и Я 3) га V— 5 СС -С с и Cynopien л 5 Л т "в 5 С 3 3 < 3 1 2 Л Ballum i zt & ¿SI larassovi Я O "5. o a. c. 5 'X T3 с .2; •ü я 5 В о i-.

С ь о проба % проба % я о о. % проба % проба % проба | % проба | % проба 1 % проба % я e. % проба % проба | %

•2

о о» т о оо m г*-. 37.3 г. -г 30 VC <1 г-' l-N К г«". о гл rr-, SD <**V <4 r¡ r>< -Tt <N - - Г-J

и

Отологическая структура у кобелей представлена 12 серогруппами леп-тоспир: Canicola - 43.8 %. Icterohaemorrhagiae 23.4 %. Australis и Autumnalib по 6.3 V C>nopteri и ßallum rio 4.7 %. Pyrogenes - 3.1 %. на Sejroe. Tarassovi. Grippotyphosa. Pomona и Hebdomadis - по 1.6 %. У сук больше половины в этиологической яруюуре занимает серогрушта Icterohaemorrhagiae (51,6 %). на Canicola и Cynopteri приходится по 12.9 %. Australis и Autumnalis по 6.5 %. Pyrogenes. Sejroe и Tarassovi по 3.2 %. ; При изучении этиологической структуры в зависимости от породы уста-

новили. что с серофуммами Canicola и Iclerohaemorrtiagiae реагировало: 75 % беспородных собак. 78.6 % немецких овчарок. 75 % кавказских овчарок. 83,3 % f роIнейлеро». Антитела к- серофуппам Sejroe. Tarassovi и (¡rippotyphosa обна-

ружены только у немецких овчарок

В течение года основное количество выявленных антител приходится на серофуппы Canicola и Icterohaemorrhagiae. за исключением сентября, когда 50 % случаев составила ссрофуппа Cynopteri.

Антитела к лептоспирам серофу ппы Canicola в два раза чаще выявлялись в питомнике и благоустроенных квартирах, чем в частном секторе, а Icterohaemorrhagiae - и блатусгроепных квартирах и частом секторе, чем п питомнике.

3.3 Возрастная динамика некоторых морфобиохимических показателей крови сыворотки и мочи л здоровых и инфицированных возбудителем лептос-

пи|кма собик

При изучении морфобиохимических поката г елей крови и сыворотки использовали общепринятые методы и определяли следующие показатели: в кропи - Iемо1 лобии. !.моко¡у и форменные элементы. п сынороже крови -обший белок и сулемовую проб) Для биохимического исследования мочи у собак нами были применены диагностические полоски PENTA PHAN. с помощью которых опре je тяти pH. белок, глюкозу, кетоновые тела и кровь.

t 3 3.1 Морфобиохимические показатели крови, сыворотки и мочи у здоро-

вых собак

При изучении морфобиохимических показателей у здоровых животных было использовано 38 проб кропи. 85 проб сыворотки кропи и 44 пробы мочи.

Нами были отмечены некоторые отклонения от физиологической нормы, проявляющиеся в снижении уровня гемоглобина у собак до года, пониженном содержании в сыворотке кропи i люкозы в I возрастной фуппе и повышенном в 3 п 4 ipynimx Также наблюдали увеличенный показатель сулемовой пробы в I фуппе. d н 4 фуппе наоборот - пониженный. Отмечали эрифонию- и лей-конитопению. лимфопитоз. во всех возрастных фуппах было повышено количество малочкоядерпых с одновременным снижением ссгмсшоялсрнмх пей-трофилов При исследовании мочи установлена незначительная протеинурия и 1ема!урия

3 3.2 Морфобиохимичсские показатели крови, сыворотки и мочи у собак, инфицированных возбудителем лептоспироза

Для изучения морфобиохимических показателей у инфицированных леп-тоспирозом животных использовали 20 проб крови, 55 проб сыворотки и 18 проб мочи.

В крови у собак инфицированных возбудителем лептоспироза отмечали пониженный уровень гемоглобина во второй возрастной группе и повышенный уровень глюкозы во всех группах В сыворотке наблюдали незначительное снижение показателя сулемовой пробы во второй и четвертой группах При морфологическом исследовании крови собак отмечено пониженное количество эритроцитов и лейкоцитов в первой, второй и третьей группах, эозинопению в первой группе Во всех группах наблюдалось увеличенное количество палоч-коядерных нейгрофилов с одновременным снижением уровня сегментоядер-ных нейтрофилов Лимфоцитоз в первой возрастной группе и полное отсутствие моноцитов во второй и четвертой возрастных группах По результатам биохимического исследования мочи наблюдается повышенное содержание белка и'крови При сравнительном анализе показателей мочи у здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак обнаружена более выраженная протеинурия и гематурия у инфицированных животных

3 4 Макромикроморфологические исследования почек здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак

При изучении макромикроморфологии почек всех животных разделили в зависимости от породы на три группы: собаки мелких пород (10 почек), средних пород (8 почек) и «крупных пород (14 почек)

3.4.1 Возрастные особенности макромикроморфологии почек здоровых

собак

Для изучения возрастных особенностей макромикроморфологии поч^к у здоровых животных использовали 16 проб

Макрометрические показатели почек здоровых собак мелких пород возрастают до года (дайна с 47,7 мм до 49,7, ширила с 30,3 до 32,3 и толщина с 16,5 до 23,7), а затем снижаются- ширина до 28,3 мм, толщина до 22,5, за исключением длины, которая возрастает до 7 лет, достигая 51,3 мм, а потом снижается до 48,5 У животных средних пород при сравнении 3 и 4 возрастной группы длина и толщина почек уменьшаются с 60,3 до 59,5 и с 34,8 до 34,3 мм соответственно, а ширина увеличивается с 32,0 до 38,8 У собак крупных пород с возрастом наблюдается динамичное увеличение всех макрометрических показателей' длина от 53,0 до 77,5, ширина от 39,3 до 41,0 и толщина от 18,8 до 36,0 мм.

У собак мелких пород толщина коркового слоя почек с возрастом постепенно уменьшается от 8750 в первой возрастной группе до 7300 мкм в третьей и четвертой группах. Толщина мозгового слоя почек наоборот увеличивается от 10800 до 14250 мкм Диаметр почечных телец также динамично возрастал от 32,9 мкм в первой возрастной группе до 86,2 мкм в четвертой группе. Диаметр извитых мочевых канальцев уменьшается до 7-летнего возраста (с 12,9 мкм до 11,3), затем увеличивается до 18,3 мкм Диаметр прямых мочевых канальцев был равен в первой возрастной группе 18,3 мкм, во второй - 18,5, в третьей и четвертой группах по 11,9 мкм. Количество почечных телец в поле зрения в первой возрастной группе составило 10,7, во второй - 11,3, в третьей - 5,5 и в четвертой - 8,8

У собак средних пород толщина коркового слоя увеличилась от 7500 до 9600 мкм, а мозгового слоя наоборот уменьшилась на 1000 мкм Отмечали увеличение диаметра почечных телец от 54,5 до 73,2 мкм, извитых мочевых канальцев от 11,7 до 12,4 мкм, прямых мочевых канальцев от 11,9 до 14,6 мкм В третьей группе наблюдалось 5,7 почечных телец в поле зрения, в четвертой -5,5.

У собак круши,ix пород наблюдалась динамика увеличения с возрастом толпщпы коркового (от 6300 до 10900 мкм) и мозгового (от 10100 до 17900 мкм) вещества Также с возрастом увеличивался диаметр почечных телец от 36,8 в первой возрастной группе до 74,2 мкм в четвертой группе. Диаметр извитых мочевых канальцев составлял, в первой группе -12,2, в третьей- 14,3, в четвертой - 13,4 мкм Диаметр прямых мочевых канальцев в первой и третьей группах был одинаковым -18,6, а в четвертой уменьшался до 14,5 мкм В первой группе мы обнаруживали 10,3 почечных тельца в поле зрения, в третьей -11,9, а в четвертой - 9,0 почечных тельца.

3 4 2 Макромикроморфологические изменения почек собак, инфицированных возбудителем лептоспироза

Для макромикроморфологических исследований использовано 16 проб почек собак, инфицированных лептоспирами серогрупп: Canicola, Icterohaemorrhagiae, Tarassovi, Cynopteri в титрах от 1:10 до 1:400

У собак мелких пород длина почек возрастает от 35,2, до 53,0 мм, а в четвертой группе снижается до 40,3 мм Ширина и толщина почек увеличиваются с первой по третью группу с 22,2 до 34,3 мм и с 16,0 до 24,0 мм, соответственно, а в четвертой группе уменьшается до 26,1 и 16,4 мм, соответственно У собак средних пород дайна почек уменьшается от 77,9 в третьей возрастной группе до 51,6 мм в четвертой, ширина - от 36,0 до 33,2, а толщина от 34,9 до 30,0 мм. У собак крупных пород в первой возрастной группе дшша почек составляла - 43,4, ширина - 27,4, толщина - 24,2 мм; в третьей группе соответственно 89,5,46,7,43,5, а в четвертой - 86,5,43,5,43,3 мм

Микрометрические показатели почек у собак мелких пород характеризовались увеличением толщины коркового и мозгового вещества с первой по третью возрастную группу соответственно с 4100 до 10600 мкм и с 11900 до

14100 мкм В четверг ой фуппе и и показатели снижаются соответственно ю 6600 и 10200 мкм. Диаметр почечных телец с возрастом животных увеличивается 01 39.0 до 71.3 мкм. а диамеф извитых мочевых канальцев - с 10.7 ло 19.0 мкм Диаметр прямых мочевых канальцев составляет в первой группе 12.4. во шорой - 12,3, в фегьей - 10.9. в четвертой - 23.0 мкм. Количество почечных телси в поле зрения увеличивалось до 12-месячного возраста от 10.3 шт. ло 12.2. а за!ем уменьшалось в треп,ей до 8.7 и в четвертой фуппе до 2.7.

У собак средних пород тотшина коркового и мозгового слоев уменьшалась после 7-лешею вофаста по сравнению с третьей Iруиной соответственно с 10300 до 10200 и с 14000 то 10700 мкм. Также уменьшался диаметр почечных телец с 75.5 до 71.3 мкм и прямых моченых канальце» с 20,3 до 18.4 мкм. а диаметр извитых мочевых канальцев и количество почечных телец в поле зрения у величивалось с 16.8 до 20.6 мкм и от 8.3 до 14,0 шт. соответственно.

У собак крупных пород толщина коркового вещества увеличивается с 6100 в первой возрастной группе до 11800 в третьей и уменьшается до 9700 мкм в четвертой, толщина мозгового вещества увеличивается с 10950 до 11500 мкм и снижается до 10630 мкм. Диаметр почечных телец, извитых и прямых мочевых канальцев увеличивается в третьей фуппе соответственно с 61.6 до 81.4. с 12.9 до 13.4 и с 20,7 до 22.3 мкм. а в четвертой фуппе снижается до 76.6. 11.8 и 15,4 мкм. Количество почечных телец в ноле зрения увеличивается в третьей группе с 8.0 до 10.7. а в четвертой уменьшается до 6.2 шт.

В результате гистологических исследований почек собак, инфицированных жмоуджслем лстоснироза. обнаружены изменения характерные дли негнойного интерстициального нефрита, зернистой дистрофии, атрофии клубочков. I емоендероза, десквамаиии эпителия, кровоизлияний и некроза (рис 2-4)

Рисунок 2 Пекро! почки собаки (12 лет) Микрофою Увел х10 I ема-

ТОкСИТИИ-ХПИН.

Рисунок 4. Атрофия сослдистых кл\бочков почки (10 лет). Микрофото. Увел, х 10. Гематоксилин-жзин.

собаки породы боксер

3 5 Совершенствование лабораторной диагностики лептоспироза у собак

Основными методами лабораторной диагностики лептоспироза животных являются обнаружение антител в реакции микроагтлютинации (РМА) и микроскопия мочи в темном поле Однако они связаны с большой трудоемкостью, работой с живыми лепгоспирами, учетом реакции под микроскопом и соблюдением специальных ветеринарно-санитарных требований. В связи с этим нами была поставлена цель изучить диагностическую ценность реакции агглютинации (РА) и полимеразной цепной реакции (ПЦР) для выявления у собак лептоспироза.

3.5.1. Реакция агглютинации

В РА было проведено исследование 50 проб сыворотки крови от собак Параллельно данные пробы исследовали в РМА.

В РА из 25 проб сыворотки крови с положительным результатом в РМА, только в 5 (20 %) обнаружены антитела Все пробы с отрицательным результатом в РМА также оказались отрицательными в РА. Однако, РА позволяет исключить работу с живыми культурами лепгоспир и она проще в постановке, что позволяет ее использовать в качестве скрининг-теста в любой ветеринарной лаборатории

3 5 2 Полимеразная цепная реакция

В нашей работе для исследования использовали по восемь проб мочи и почек- по пять проб от собак инфицированных возбудителем лептоспироза и по три пробы от здоровых животных.

При сравнении диагностической ценности ПЦР и РМА выявили наличие ДНК лепгоспир в суспензии почек как у PMA-положительных, так и у РМА-отрицательных животных. При исследовании мочи, независимо от результатов РМА, в ПЦР все пробы дали отрицательный результат.

3 6 Динамика поствакцинального иммунного ответа при лепгоспирозе у

собак

Целью настоящего раздела работы явилось комплексное изучение динамики иммунного ответа после вакцинации собак против лептоспироза

Опыт проводили на 5 здоровых собаках породы немецкая овчарка в возрасте от 1 года до 3 лет с использованием вакцины «Биовак DPAL» От животных до и через 7,14, 30 и 90 дней после вакцинации исследовали пробы крови и сыворотки серологическими, морфологическими и биохимическими методами.

До вакцинации у двух собак (40%) обнаруживали в сыворотке антитела к лептоспирам серогруппы Carneóla в титрах 1:20. У всех собак в пробах мочи лептоспиры не обнаружены.

На 7 и 14 день после вакцинации специфические антитела присутствуют в сыворотке у 60 %, через 30 дней - у 40 %, а через 90 дней - отсутствовали у всех животных. Уровень гемоглобипа, сулемовой пробы и общего белка изменялся незначительно. Показатели альбуминовой фракции спижались до 14-дневного срока после вакцинации (от 44,9 до 27,6 %), в дальнейшем наблюдался их рост до 52,8 %. Показатели а-глобулиновой фракции снизились к 7-дневному сроку (от 17,1 до 14,4 %), с некоторым ростом до 14-дневного срока (до 26,2 %) и в дальнейшем снижение до 12,3 %. Значение (3-глобулиновой фракции увеличивались до 14-дневного срока (от 18,0 до 32,7 %), затем снижались до 10,9 %. Показатели у-глобулиновой фракции повышались в первый период исследования (до 7-го дня после вакцинации от 19,9 до 26,7 %), после чего наблюдалось их снижение к 14-му дню до 14,4 % и в дальнейшем постоянное увеличение до 23,9 %. При морфологическом исследовании крови установлены в отдельные периода эритроцитопения (до 4,9 мян/мкл), лейкоцито-пения (до 6,0 тыс/мкл) и моноцигоз (до 6,8 %). В лейкоцитарной формуле во все периоды исследования наблюдалось повышенное количество эозинофилов (от 9,8 до 19,8 %) и палочкоядерных нейтрофилов (от 23,2 до 35,8 %) и сниженное количество сегменгоядерных нейтрофилов (от 17,2 до 35,2 %)

3 7 Изучение устойчивости возбудителя лепгоспироза в моче собак

Лептоспиры выделяются из организма больных животных преимущественно с мочой, при контакте с которой и происходит заражение животных и человека. Для исследования мы использовали пробы мочи от собаки породи немецкая овчарка в возрасте 5 лет, содержащейся в условиях благоустроенной квартиры г. Барнаула.

Результаты микроскопического исследования мочи представлены в таблице 3

Таблица 3.

Сроки выживания лепгоспир в моче собак._

Номер опыта рН мочи Срок сохранения лепгоспир (час).

+1-3°С +20-25°С +28°С +37°С

1 5,0 8 6 6 4

2 6,0 10 8 6 6

3 7,0 12 8 8 6

Средний показатель 6,0 10±2,0 7,3±1,16 6,7±1,16 5,3±1,16

t

Наиболее продолжительное время возбудитель легггоспироза сохраняется при температуре +1-3"С, где он может выживать до 10 часов. При температуре +20-25°С срок жизни лептоспир сокращается до 7,3 часа, а в температурных режимах +28°С и +37°С они сохраняют жизнеспособность 6,7 и 5,3 часа соответственно. Наибольшую устойчивость возбудитель проявляет в моче с нейтральной реакцией, увеличение кислотности мочи губительно действует на лептоспир.

3.8 Профилактика легггоспироза собак в Алтайском крае

На основании литературных данных (Лукьяновский В.А, 1988; Старченков C.B., 1999; Резниченко З.М., 2000; Моисеев А.Н., 2002, 2003; Снигирев С И, 2003 и др ) и результатов собственных исследований полагаем, что профилактика лептоспироза у собак в Алтайском крае должна быть комплексной и включать общие мероприятия, диагностические исследования и вакцинацию животных.

Общие мероприятия направлены на предотвращение заболевания животных лептоспирозом и обязывают владельцев и ветеринарных специалистов выполнять следующее:

- не допускать вводить больных и переболевших собак без обследования в питомники, привозил, и продавать больных животных, проводить карашинирование всех поступающих;

- для участия в выставках (выводках, тренингах) и перевозки всеми видами транспорта допускать только вакцинированных животных;

- обеспечить полноценное и сбалансированное кормление, не позволять пть воду из открытых водоёмов, поедать грызунов и необезвреженные боннские отходи;

- проводил, регулярную очистку и дезинфекцию помещений, истреблять грызунов, раскладывая отравленные приманки в недоступных для собак местах;

- обязать коммунальные организации проводить отлов безнадзорных собак, их передержку, при необходимости эутаназия и захоронение;

- постоянно осуществлять контроль за клиническим состоянием животных и при появлении признаков лихорадки, желтушности кожных покровов, слизистой ротовой полости и конъюнктивы, крови в моче немедленно обратится к ветеринарному специалисту

Диагностические исследования сыворотки крови в РМА и патологического материала методом темнопольной микроскопии необходимо проводить в следующих случаях:

- при подозрении на лептоспироз (лихорадка, желтушность кожи, слизистой ротовой полости и конъюнктивы, гематурия) исследуют сыворотку крови и мочу, у трупов - паренхиматозные органы, транссудат из грудной и брюшной полостей, мочу и сыворотку крови. Кровь берут с интервалом в 7-10 дней, патологический материал доставляют в охлажденном виде в течение 8-10 часов;

- перед выставками (выводками, тренингами) и ввозе из других регионов исследовать сыворотку крови и мочу,

- после выздоровления собак от заболеваний, протекающих с признаками лептоспироза, проводить микроскопию мочи.

Вакцинацию собак против лептоспироза целесообразно проводить с двухмесячного возраста с ежегодной ревакцинацией в следующем поряд ке'

- в городах (Барнаул, Бийск, Белокуриха, Змеиногорск, и др);

- в питомниках;

- всех породистых животных,

- всех собак в предгорной области

ВЫВОДЫ

1 Эпгооотологическим обследованием собак на лептослироз выявлено 16,5 % инфицированных животных' от 1 до 7 мес - 7,7 %, от 7 до 12 мес. - 7Д %, от 1 года до 7 лет - 19,9 %, и старше 7 лет - 19,8 % Титры лептоспирозных антител колебались от 1:10 до 1:400.

2 Этиологическая структура заболевания представлена лептоспирами се-рогрупп Canicola - 38,6 %, Icterohaemorrhagiae - 37,3 %, Cynopteri - 8,4 %, Australis, Autumnalis - по 7,2 %, Pyrogenes, Ballum - по 3,6 %, Sejroe, Tarassovi

- по 2,4 %, Grippotyphosa, Hebdomadis, Pomona - по 1,2 %

3 Морфобиохимическими исследованиями крови, сыворотки и мочи собак, инфицированных возбудителем лептоспироза, в отличие от здоровых животных, установлена эозинопения (первая возрастная группа) и повышенное содержание белка и эритроцитов в моче.

4 Макроморфологическими исследованиями почек собак, инфицированных возбудителем лептоспироза, в отличие от здоровых животных, установлено: мелкие породы - снижение длины и ширины на 2,2-8,2 мм; средние породы

- превышение на 4,0-17,6 в 1-7 лет и снижение на 5,7-7,9 старше 7 лет, крупные породы - снижение на 9,6-11,9 в 1 -7мес и превышение на 2,5-25,0 и толщины на 5,4-11,5 мм в остальных возрастных группах

5 Микроморфологическими исследованиями почек собак, инфицированных возбудителем лептоспироза, в отличие от здоровых животных, выявлены участки некроза, зернистой дистрофии и гемосидероза эпителия извитых и прямых мочевых канальцев, атрофия сосудистых клубочков, десквамации эпителия и кровоизлияния.

6 Продолжительность выживания лептоспир в моче собак составляет 10 часов при температуре +1-3°С, 7,3 часа - при +20-25°С, 6,7 часа при +28°С и 5,3 часа при +37°С Наибольшую устойчивость возбудитель проявляет в моче с нейтральной реакцией.

7 Динамика поствакцинального иммунного ответа при лептоспирозе у собак с использованием поливалентной вакцины характеризуется показателями-

- до 14 дней после вакцинации специфические антитела присутствуют в сыворотке у 60 % животных, через 30 дней - у 40 %, а через 90 дней антител в крови не обнаруживали.

- уровень гемоглобина, сулемовой пробы и общего белка изменялся незначительно, показатель альбуминовой фракции снижается в первые две недели и затем динамично возрастает, а-глобулиновая фракция снижалась в первую неделю исследования, а во вторую возрастала, затем наблюдалось динамичное снижение Показатели Р и у- глобулиновых фракций имели противоположную тенденцию.

- в крови установлены в отдельные периоды эригроцитопения, лейкоци-топения и моноцитоз, постоянно наблюдалось повышенное количество эози-нофилов и палочкоядерных нейтрофилов и пониженное - сегментоядерных нейтрофилов.

8. В результате сравнительного изучения сывороток крови собак в РМА и РА установлено совпадение положительных результатов в 20 % случаев, а отрицательных - в 100 %. Методом ПЦР ДНК возбудителя легггоспироза обнаружено в пробах почек здоровых и инфицированных животных при отсутствии лепгоспир в моче.

9 Профилактика легггоспироза собак в Алтайском крае включает соблюдение общих правил содержания, диагностические исследования, обязательную и своевременную вакцинацию всех породистых животных городов, питомников, а также предгорной и лесостепной областей

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материал диссертационной работы может быть использован при:

• лабораторной диагностике лептоспироза собак в ветеринарных лабораториях и клиниках при исследовании сыворотки, крови и мочи;

« составлении противоэпизоотических планов;

• содержании и разведении собак, при проведении их выставок;

• чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по микробиологии, эпизоотологии, анатомии, гистологии, пат. анатомии, физиологии.

СПИСОК РАБОТ ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Бобраков С.И. Лептоспироз собак /Вестник АГАУ № 3. - Барнаул. -2001.-С. 116.

2 Бобраков С.И., Моисеев АН, Барышников ПИ. Этиологическая структура лептоспироза собак в Алтайском крае /Социально-экологические и зооветеринарные проблемы содержания собак и ко-

тек в условиях города. Сборник статей городской научно-практической конференции - Барнаул - 2002. - С.25.

3. Бобраков С.И., Барышников П И. Устойчивость возбудителя лептоспироза в моче собак /Вестник АГАУ № 1 - Барнаул - 2003. -С.208.

4 Бобраков С И, Моисеев А.Н, Барышников П.И. Эпизоотологаческие особенности лептоспироза собак в Алтайском крае /Актуальные вопросы ветеринарной медицины. Материалы Российской научно-практической конференции. - Новосибирск. - 2003 - С. 52

5 Бобраков С.И, Моисеев А.Н., Барышников П И. Иммунный ответ у собак при вакцинации против лептоспироза. /Актуальные вопросы ветеринарной медицины Материалы Российской научно-практической конференции - Новосибирск - 2003 - С. 53.

6 Бобраков С И., Кравцов A.II, Барышников П И Макромикроморфо-Л01ические изменения почек собак, инфицированных возбудителем лептоспироза. /Актуальные вопросы микробиологии и инфекционной патологии животных. Материалы научно-производственной конференции, посвященной 100-летию Н Г Кондюрина - Омск - 2004 -С.174.

Подписано к печати «_£_» ЛирыЛ, 2005 г. Формат 60x84/16. Объем 1,0 печ. л. Тираж 100 эхз Заказ № S

Издательство АГАУ, 656099, г. Барнаул, пр-кт Красноармейский, 98,

Jj

s.

í

1 \

I

»-637t

РНБ Русский фонд

2006-4 3595

Актуальность проблемы. Лептоспироз — является зооантропо-нозным природно-очаговым инфекционным заболеванием домашних и диких животных многих видов, болеет также человек. Болезнь имеет широкое распространение во;многих странах мира и в различных регионах России. В решении X конференции Международного эпизоотического бюро (Лондон, 1982), отмечено, что лептоспироз, несмотря на многочисленные исследования, все еще остается не только экономической, но и социальной проблемой (Ананьин В.В., 1971; Евдокимова О.А., 1976; Малахов Ю.А., 1992).

Впервые лептоспироз у собак был описан Хофером в 1850 г. В конце XIX века в Германии наблюдалась эпизоотия своеобразного заболевания среди собак в г. Штутгарте,; получившее позднее название «штуттгардская болезнь». А. Н. Klarenbeck и W. Schuffner (1933) выделили от больной собаки возбудителя штуттгардской болезни, названного ими L. canicola. У собак был также диагностирован иктерогеморрагический лептоспироз (P. Uhlenhuth, W. Fromme, 1919).

По данным Швечковой О.Г. (1996) в г. Санкт-Петербурге за период с 1990 по 1995 г. установлено увеличение процента серопо-зитивных реакций на лептоспироз у городских собак с 0,03 % до 1,31 %, и с 1988 г. наблюдается тенденция к доминированию в этиологической структуре серогруппы Canicola.

Болоцкий И.А. (1999) установил, что за период 1988-1997 гг. на Северном Кавказе количество положительных реакций на лептоспироз у собак увеличилось на 14,3 %, по сравнению с 1978

1987гг., при этом наибольшее количество изолятов лептоспир также удалось выделить от животных данного вида.

Зорин B.JI. (1995) сообщает о массовой вспышке лептоспироза среди собак г. Иркутска в 1993-94 гг., где было зарегистрировано более пятидесяти больных животных.

Среди домашних животных наиболее близкий контакт с человеком имеют собаки. При этом являясь одним из звеньев эпизоото-логического процесса при лептоспирозе, они могут способствовать заражению и человека. Собаки известны в основном как источники инфицирования людей лептоспирами Canicola и Icterohaemor-rhagiae (Ананьин В.В., 1971). Наибольшая опасность существует для лиц, пользующихся ездовыми собаками, работающих в питомниках, владельцев охотничьих и домашних собак и ветеринарных работников (Ананьин В.В.,1961; Абрамсон J1.A., 1976). По данным Швечковой О.Г. (1996) за период 1993-1995 гг. в Санкт-Петербурге установлено заражение 15 человек лептоспирозом непосредственно от собак. Во всех расследованных случаях собаки являлись активными лептоспировыделителями, и заражение происходило контактным путём при уходе за животными, оказании врачебной помощи и уборке мочи. При этом 6 человек заразились L. icterohaemorrhagiae. В литературе есть ряд сообщений о вспышках лептоспироза среди населения, вызванного заражением от собак (Ананьин В.В., 1971; Перадзе Т.В., 1981.; Маненкова Г.М., 2003; Меркулов А.В., 2003; Плешакова В.И., 2003 и др.).

В настоящее время лептоспироз у сельскохозяйственных животных достаточно подробно изучен многими учеными, однако по собакам имеются лишь отдельные публикации не освещающие многие стороны данной патологии. В связи с этим наши исследования были посвящены более детальному изучению проявления болезни у данного вида животных.

Цель и задачи исследований.

Целью настоящей работы явилось комплексное изучение особенностей эпизоотологии и патогенеза, усовершенствование диагностики и оптимизация на этой основе мероприятий по профилактике лептоспироза собак. Соответственно, были поставлены следующие задачи:

1.изучить распространение лептоспироза с помощью РМА и микроскопии мочи с применением конденсора «темное поле» в зависимости от возраста, пола и условий содержания собак;

2.провести анализ этиологической структуры;

3.изучить возможность совершенствования лабораторной диагностики с применением РА и ПЦР;

4.изучить формирование поствакцинального иммунитета у собак;

5.определить устойчивость возбудителя лептоспироза в моче у данного вида животных;

6.изучить некоторые биохимические показатели крови, сыворотки и мочи от здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак;

7.провести гистологическое исследование почек от животных разного возраста и иммунного статуса;

8.разработать профилактические мероприятия при лептос-пирозе собак в Алтайском крае.

Научная новизна работы. Впервые в условиях Алтайского края изучены особенности эпизоотического процесса у собак, представлен анализ этиологической структуры возбудителя заболевания, установлена продолжительность сохранения лептоспир в моче в зависимости от ее кислотности и температуры окружающей среды.

Проведено макромикроморфологическое исследование почек у здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза животных в зависимости от возраста и породы. '

Изучены некоторые особенности иммунного ответа у собак после вакцинации против лептоспироза.

Проведен анализ диагностической ценности РА и ПЦР, в сравнении с РМА.

Показана возможность применения для биохимического исследования мочи собак диагностических полосок PENTA PHAN.

Практическое значение работы. Результаты проведенных исследований применяются в работе ветеринарных специалистов в питомнике Зонального центра кинологической службы при ГУВД Алтайского края и ветеринарной клинике «Олвет» г. Барнаула, а также включены в:

• научно-технические разработки, рекомендованные к внедрению в производство, Барнаул, 2002;

• рекомендации «Особенности эпизоотологии и профилактика лептоспироза животных в Алтайском крае», Барнаул, 2005;

• план противоэпизоотических мероприятий по Центральной ветеринарной лечебнице г. Барнаула на 2002-2003 гг.;

• учебный процесс для подготовки ветеринарных специалистов в Институте ветеринарной медицины АГАУ.

Основные положения выносимые на защиту:

1.Результаты эпизоотологического исследования особенностей проявления эпизоотического процесса лептоспироза у собак.

2.Морфобиохимические показатели крови, сыворотки и мочи здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак. :

3.Макромикроморфологические исследования почек здоровых и инфицированных возбудителем лептоспироза собак в зависимости от возраста и породы.

4.Динамика поствакцинального иммунного ответа у собак при лептоспирозе.

5.Результаты использования дополнительных методов диагностики лептоспироза у собак.

6.Оптимизация профилактических мероприятий при лептоспирозе собак в Алтайском крае.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на: четвёртой городской научно-практической конференции молодых учёных «Молодёжь - Барнаулу» (Барнаул, 2002г.); городской научно-практической конференции «Социально - экологические и зооветеринарные проблемы содержания собак и кошек в г. Барнауле» (Барнаул, 2002г.); III региональной научно-практической конференции по проблемам ветеринарной медицины мелких домашних животных (Новосибирск, 2003г.); юбилейной международной научно-практической конференции «Современные проблемы и достижения аграрной науки в животноводстве и растениеводстве» (Барнаул, 2003г.); региональной научной конференции посвящённой 60-летию Алтайского госагроуниверситета «Актуальные вопросы ветеринарной медицины и их решение в современных условиях» (Барнаул, 2003г.); 10-й Всероссийской научно-практической конференции по лептоспирозу (Анапа, 2003г.); курсах повышения квалифйкации ветеринарных врачей системы МВД (Ростов, 2004г.).

Публикации: по теме диссертации опубликовано 6 научных работ.

Внедрение результатов исследования. Рекомендации «Особенности эпизоотологии и профилактика лептоспироза животных в Алтайском крае» рассмотрены и одобрены научно-техническим советом Управления ветеринарии администрации Алтайского края; результаты исследований включены в «Научно-технические разработки, рекомендованные к внедрению в производство» и используются в ветеринарных клиниках Алтайского края и учебном процессе при подготовке и повышении квалификации ветеринарных специалистов.

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 148 страницах и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследования, выводы, практические предложения, библиографию и приложение. Работа иллюстрирована 24 таблицами и 21 рисунком. Список литературы содержит 119 источников, из них 15 зарубежных авторов.

выводы

1. Эпизоотологическим обследованием собак на лептоспироз выявлено 16,5 % инфицированных животных: от 1 до 7 мес. - 7,7 %, от 7 до 12 мес. - 7,2 %, от 1 года до 7 лет - 19,9 %, и старше 7 лет — 19,8 %. Титры лептоспирозных антител колебались от 1:10 до 1:400.

2. Этиологическая структура заболевания представлена лептоспирами серогрупп: Canicola — 38,6 %, Icterohaemorrhagiae 37,3 %,

Cynopteri - 8,4 %, Australis, Autumnalis - no 7,2 %, Pyrogenes, Ballum - no 3,6 %, Sejroe, Tarassovi - no 2,4 %, Grippotyphosa, Hebdomadis, Pomona - no 1,2 %.

3. Морфобиохимическими исследованиями крови, сыворотки и мочи собак, инфицированных возбудителем лептоспироза, в отличие от здоровых животных, установлена эозинопения (первая возрастная группа) и повышенное содержание белка и эритроцитов в моче. 4. Макроморфологическими исследованиями почек собак, инфицированных возбудителем лептоспироза, в отличие от здоровых животных, установлено: мелкие породы - снижение длины и ширины на 2,2-8,2 мм; средние породы - превышение на 4,0-17,6 в 17 лет и снижение на 5,7-7,9 старше 7 лет; крупные породы — снижение на 9,6-11,9 в возрасте 1-7мес. и превышение на 2,5-25,0 и толщины на 5,4-11,5 мм в остальных возрастных группах.

5. Микроморфологическими исследованиями почек собак, инфицированных возбудителем лептоспироза, в отличие от здоровых животных, выявлены участки некроза и зернистой дистрофии эпителия извитых и прямых мочевых канальцев, атрофия сосудистых клубочков и кровоизлияния.

6. Продолжительность выживания лептоспир в моче собак составляет 10 часов при температуре +1-3°С, 7,3 часа - при +20-25°С, 6,7 часа при +28°С и 5,3 часа при +37°С. Наибольшую устойчивость возбудитель проявляет в моче, с нейтральной реакцией.

7. Динамика поствакцинального иммунного ответа при лептос-пирозе у собак с использованием поливалентной вакцины характеризуется показателями:

- до 14 дней после вакцинации специфические антитела присутствуют в сыворотке у 60 % животных, через 30 дней - у 40 %, а через 90 дней антител в крови не обнаруживали.

- уровень гемоглобина, сулемовой пробы и общего белка изменялся незначительно, показатель альбуминовой фракции снижается в первые две недели и затем динамично возрастает, а-глобулиновая фракция снижалась в первую неделю исследования, а во вторую возрастала, затем наблюдалось динамичное снижение. Показатели Р и у- глобулиновых фракций имели противоположную тенденцию.

- в крови установлены в отдельные периоды эритроцитопения, лейкоцитопения и моноцитоз, постоянно наблюдалось повышенное количество эозинофилов и палочкоядерных нейтрофилов и пониженное - сегментоядерных нейтрофилов.

8. В результате сравнительного изучения сывороток крови собак в РМА и РА установлено совпадение положительных результатов в 20 % случаев, а отрицательных - в 100 %. Методом ПЦР ДНК возбудителя лептоспироза обнаружено в пробах почек здоровых и инфицированных животных при отсутствии лептоспир в моче.

9. Профилактика лептоспироза собак в Алтайском крае включает соблюдение общих правил содержания, диагностические исследования, обязательную и своевременную вакцинацию всех породи стых животных городов, питомников, а также предгорной и лесо степной областей.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Материал диссертационной работы может быть использован при:

• лабораторной диагностике лептоспироза собак в ветеринарных лабораториях и клиниках при исследовании сыворотки, крови и мочи;

• составлении противоэпизоотических планов;

• содержании и разведении собак, при проведении их выставок;

• чтении лекций и проведении лабораторно-практических занятий по микробиологии, эпизоотологии, анатомии, гистологии, пат. анатомии, физиологии.