Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Посттравматическая регенерация скелетных мышц

Р Г 5 ОД 1 о ЯНВ 1303

Володина Аэлита Владимировна

ПОСТТРАВМАТИЧЕСКАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ

СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦ (электронномикроскопическое исследование)

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Володина Аэлита Владимировна

ПОСТТРАВМАТИЧЕСКАЯ РЕГЕНЕРАЦИЯ

СКЕЛЕТНЫХ МЫШЦ (электронномикроскопическое исследование)

14.00.16 - патологическая физиология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора биологических наук

Работа выполнена в лаборатории экспериментальной патомор-фологии Научно-исследовательского института общей патологии и патофизиологии Российской АМН

Научный консультант

доктор медицинских наук, профессор, член-корр. Российской АМН

О.М.Поздняков

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент Российской АМН

доктор медицинских наук, профессор

доктор медицинских наук, профессор

В.А.Шахламов

П.Н.Александров

А.И.Воложин

Ведущее учреждение: Институт эволюционной морфологии и экологии животных имени А.Н.Северцова РАН

* Защита диссертации состоится 1996 г.

в у у часов на заседании Диссертационного совета Д 001.03.01 при Научно-исследовательском институте общей патологии и патофизиологии Российской АМН (125315 Москва, ул. Балтийская 8).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Института Автореферат разослан ЛЯ.-/*, 1995г.

Ученый секретарь Диссертационного совета

кандидат медицинских наук Л.Н.Скуратовская.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Регенерация скелетных мышц является одной из актуальных проблем биологии и медицины. Ее разработка связана как с теоретическими аспектами изучения процессов миогене-за в эмбриональном и постнаталыюм периодах развития скелетных мышц, так и с практическими задачами здравоохранения, обусловленными высоким травматизмом. Многолетний опыт экспериментальной и клинической медицины свидетельствует о том, что обширные травматические повреждения скелетных мышц заканчиваются рубцеванием. Блестяще выполненные операции по реплантации конечностей и их частей не всегда приносят ожидаемые результаты. Понимание патогенеза ряда нервно-мышечных и мышечных заболеваний также связано с изучением процессов регенерации в скелетных мышцах.

В настоящее время накоплен огромный материал в результате изучения регенераторного процесса у низших животных в период эмбрионального и раннего постнатального развития, когда, как известно, поперечнополосатая мышечная ткань обладает высокими регенераторными потенциями (А. А. Клишов, 1971; А. А. Клишов, П. К. Данилов, 1980, 1981, 1995; Г. В. Ельякова, 1977; Mauro, 1961; В, М. Carlson, 1974, 1986; М. Snow, 1977; Н. Schmalbruch, 1980; I. A. Cameron, 1983).

Значительное число экспериментальных исследований было посвящено источникам и механизмам формирования миобластов, выяснению роли клеток-сателлитов, деструктивно-дегенеративным процессам в мышечных волокнах при различных видах повреждения и экспериментальных воздействиях (Воронцова М. А., Лиознер Л. Д., 1955; Женевская Р. П., 1974; Полежаев А. В., 1961, 1963, 1968; Стригалова А. Р., 1961; Умнова М. М., Студитский А. И., 1949, 1961, 1977; Бродский В. Я., Урываева И. В., 1966, 1981, 1988; Целляриус С. Ф.> 1979; Бабакова Л. Л., Поздняков О. М., 1986; Бабакова Л. Л., Деморжи М. С., Поздняков О. М., 1993 и др.). Эти работы принципиально обосновали возможность регенерации скелетных мышц у высших позвоночных животных. Вместе с тем, открытым продолжает оставаться вопрос - почему у млекопитающих регенераторные потенции мышечной ткани не реализуются в полном объеме.

Усовершенствование старых и появление новых методов исследования позволили по-новому оценить известные ранее закономерности регенераторного процесса и получить новые данные. Многие узловые вопросы нашли решение на уровне тончайших цитологических исследований. В результате теоретические представления о сущности процесса регенерации были пересмотрены. Большую роль в пересмотре старых и постановке новых вопросов в этой проблеме сыграли исследования Д. С. Саркисова и сотр. (1967, 1970, 1975, 1977, 1988, 1992), в которых было основано представление о том, что комитиро-ванным тканям присущ особый вид регенерации - внутриклеточный. Основу его составляют гипертрофия и гиперплазия клеточных орга-нелл, обеспечивающих повышение функциональных возможностей органа при нагрузках и регенераторные процессы при повреждении. Эти представления подтвердились при изучении регенерации паренхиматозных органов и центральной нервной системы. Вместе с тем, многие вопросы, связанные с регенерацией скелетных мышц, в том числе с ролью клеток-сателлитов как камбиального резерва мышечной ткани в процессах регенерации, остались открытыми. Вопрос о других источниках образования миобластов у взрослых позвоночных животных также далек от разрешения вследствие отсутствия надежных клеточных маркеров (Sloper I. С., Partridge I. А., 1980).

В связи с изложенным было проведено комплексное ультраструктурное исследование динамики регенераторного процесса в мышечных волокнах, микрососудах, нервах, соединительнотканных элементах и других компонентах скелетной мышцы, что позволило получить развернутую картину регенераторного процесса в ней и ответить на ряд нерешенных вопросов, связанных с особсшюстями течения восстановительных процессов в скелетной мышце взрослого теплокровного животного, а также подойти к пониманию причин незавершенности регенераторного процесса в мышце как в органе.

Цель и задачи работы. Целью настоящего исследования явилось выяснение роли различных компонентов скелетных мышц в процессе ее восстановления после обширной травмы и реплантации конечности у крыс.

В задачи исследования входило изучить:

1. Деструктивно-регенераторный процесс в скелетных мышцах половозрелых крыс после размозженной травмы и реплантации конечности.

2. Особенности течения миогенеза у плода в сравнении с миоге-незом после травматического повреждения скелетных мышц у половозрелых крыс.

3. Роль клеток-сателлитов в регенерации мышечных волокон у взрослых крыс.

4. Постгравматическую регенерацию микрососудов в ранние и поздние сроки после размозженной травмы и реплантации конечности.

5. Особенности денервационно-реиннервациоиного процесса в скелетных мышцах после их размозжения, денервации, реплантации конечности в ранние и отдаленные сроки.

6. Состояние интерорецепторов мышечной ткани - мышечных веретен в отдаленные сроки после реплантации конечности и размозжения скелетных мышц.

Научная новизна работы, определяется следующими результатами: Впервые проведено комплексное ультраструктурное исследовашге различных структурных компонентов мышечной ткани после обширной травмы и реплантации конечности у взрослых половозрелых млекопитающих. Изучены последовательные этапы постгравматического миогенеза, а также особенности регенерации сосудов, нервов, нервно-мышечных синапсов, мышечных веретен.

Показано, что одной из причин ограничешгя миогенеза является отставание формирования капилляров в очаге повреждения. Следствием этого является переход части клеток-сателлитов - предшественников миобластов - на фибробластический путь дифферешщровки, что приводит к снижению регенераторного потенциала ткани.

Впервые установлено раннее формирование базалышх мембран у миобластов, препятствующее их слиянию в миосимпласты, что также является существенной причиной ограничения миогенеза.

Показано, что одним из важных механизмов хронизации патологического процесса после обширной травмы является постгравматиче-ская микроангиопатия. Выявлено, что одной из причин вторичной нейрогенной постгравматической атрофии мышц является повреждение vasa nervorum.

Теоретическая значимость работы определяется тем, что в ней выявлены причины несовершенства репаративных процессов в скелетных мышцах взрослых млекопитающих и установлены причины хро-

низации патологического процесса после обширных травматических повреждений скелетных мышц.

Показана возможность изменения направления дифференциров-ки клеток-сателлитов с миобластического на фибробластический путь.

Выделен новый тип микроангиопатий - постгравматическая микроангиопатия.

Практическая значемость работы заключается в том, что обнаруженная временная последовательность клеточных и тканевых реакций мышечной ткани на повреждение открывает возможность коррекции репаративного процесса соответственно его фазам в ранние и отдаленные сроки после травматического повреждения скелетных мышц.

Выявленные морфологические критерии оценки состояния элементов сосудистой стенки, невралыюго аппарата, мышечных веретен и других структурных компонентов мышечной ткани могут быть использованы при диагностических исследованиях биопсийного материала от больных с нервно-мышечной и мышечной патологией.

Положения, выносимые на защиту:

1. Основными причинами незавершенности репаративных процессов в мышцах половозрелых взрослых животных являются ушете-нис миобластического пути дифференцировки клеток-сателлитов, нарушение пространствешю-временного согласования отдельных стадий миогенеза с процессами реваскуляризации и реиннервации.

2. В скелетной мышце после тяжелого травматического повреждения и реплантации конечности развиваются деструктивно-дегенеративные процессы в микрососудах, приводящие к развитию по-стгравматической микроангиопатии.

3. После тяжелого травматического повреждения мышц и реплантации конечности в мышцах формируется хронический нейроди-строфический процесс, который усугубляется и поддерживается мик-роангиопатией, а также аутоиммунным процессом и может привести к прогрессирующему снижению их функции и дальнейшему снижению регенераторного потенциала ткани.

Апробация работы. Материалы диссертации доложены на научной конференции в МедА им. С. М. Кирова (г.Ленинград) по теме "Анатомофизиологические аспекты микрохирургии огнестрельной травмы" (1990), на Всесоюзных съездах, конференциях (Кишенев, 1989), на конференции (Харьков, 1989), на Х1У конференции по электронной микроскопии (Черноголовка, 1992), на научной конференции

"Морфология раневого процесса" (Санкт-Петербург, 1992), на XIII Всесоюзной конференции (Ленинград, 1988).

Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 373 страницах машинописи, содержит введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, девять глав собственных исследований, общее заключение, выводы и список литературы. Диссертация иллюстрирована 1 таблицей и 141 рисунком.

МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В работе были использованы методы ультраструктурного и све-тооптического анализа. Основная часть экспериментов была проведена на беспородных крысах-самцах массой 300-500 г. Операции проводились под эфирным наркозом.

Для повреждения скакательного комплекса крыс (икроножной и камбаловидной мышц) под эфирным наркозом наносили 90-100 ударов 60-граммовым молотком с резиновой наклейкой на ударной поверхности. Голень нрн этом находилась на резиновой подкладке. Указанная травма (по Кеннону) не является шокогенной. Материал для гистологического анализа после травмы был исследован на 1, 2, 3, 4, 5, 7, 10, 15, 30 сутки и отдаленные сроки после травмы - 8 месяцев.

Во второй серии экспериментов травма наносилась на 6-е сутки после денервации скелетных мышц; после нанесения травмы материал исследовали на 3, 10, 15 и 30 сутки и через 8 месяцев. Эта модель была избрана потому, что после предварительной денервации мышцы приобретают некоторые свойства эмбриональных, кроме того, обширные повреждения скелетных мышц часто сопровождаются повреждением крупных нервных стволов.

3-я серия экспериментов - взятие материала на 6-8 сутки после денервации в качестве контроля к предыдущим сериям.

4-я серия. Исследова1ше мышц бедра 18-ти дневных плодов крыс (за 3 суток до рождения). Исследованы по 2 плода от 3-х беременных самок.

5-я серия. Исследованы мышцы скакательного комплекса крыс (икроножная и камбаловидная), через 1 и 8 месяцев после операции реплантации конечности, которую проводили на уровне верхней трети бедра при сохранении кровотока по центральным артериям и венам. Особегаюстью использованной модели было отсутствие длительной

тепловой ишемии и исключение влияния травматического повреждения мышц на течение восстановительных процессов, поскольку исследовали мышцы голени, т.е ниже места пересечения тканей.

Реплантацию у крыс начинали с остеосинтеза бедренной кости специальными штифтами, сделанными из тантала. Далее под оптическим увеличением (бинокулярная лупа - 3,5 крат) с использованием микроинструментария, тончайшего шовного материала (7/0-10/0 на автоматической игле) и микрохирургической техники выполняли сшивание последовательно седалищного нерва (эпиневральными узловыми швами), мышцы бедра, мышцы фасции, подкожную клетчатку и кожу (узловыми швами).

Контролем служили мышцы бедра контралатеральной конечности (сроки 1 месяц, 8 месяцев) и мышцы интакпшх животных.

Электронномикроскопическое исследование.

Взятие и фиксация материала. Кусочки мышц помещали в охлажденный 4 % раствор формол-сахарозы (рН-7,4) на 2 часа. Затем кусочки промывали в буфере и был проведен отбор материала с ориентацией на синаптическую зону. После чего материал помещали в охлажденный забуферешгый 1 % раствор OSO4 на 1 час.

Обезвоживание и заливка. Фиксированные кусочки ткани обезвоживали в этиловом спирте восходящей концентрации, затем проводили через три смены ацетона. Заливка в аралдит. Полимеризация проводилась в течение суток при температуре 56 С. При заливке кусочки ориентировали таким образом, чтобы с большей вероятностью выйти на синаптическую зону. Ультратонкие срезы изготавливали на ультратоме "LKB-III".

Контрастирование материала. Срезы контрастировали в 70° спиртовом растворе урапил ацетата и цитратом свинца по Рейнольдсу (Reynolds, 1963).

Материал просматривали и фотографировали в электронном микроскопе JEM-7A при электронно-оптических увеличениях ЗОООх; бОООх; llOOOx; 22000х. Был проведен подсчет количества везикул на люминальной и базальной поверхностях эндотелиалышх клеток при окончательном увеличении 27500х.

Светооптическое исследование.

Предварительный просмотр ткани проводили на полутонких срезах, окрашенных метиленовым синим +азур II.

Применяли следующие гистологические и гистохимические методики: окраска гематоксилин-эозином, по Ван-Гизону, серебрение нервных волокон по Фальку; определяли активность сукцинатдегидро-геназы, миозиновой АТФ-азы, АХЭ-азы, кислой и щелочной фосфата-зы.

Всего использовано 82 животных (по 3 на каждый срок). Операция реплантации конечности была произведена у 20 животных; из них 5 было выбраковано вследствие образования трофических язв на голени и стопе.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Постгравматический миогенез и его особенности у половозрелых животных (ранние сроки)

Характеристика деструктивного процесса в мышечной ткани после размозжения скелетных мышц.

Размозжение скелетных мышц сопровождалось повреждением всех компонентов мышечной ткани как в центре повреждения, так и в перифокалыюй зоне.

На 1 - 2-е, 3-й сутки участки полной деструкции мышечных волокон перемежались с относительно сохранными. В мышечных волокнах наблюдался распад миофибрилл на отдельные саркомеры по типу ценкеровского некроза. Другие участки волокон характеризовались дезинтеграцией толстых и тонких миофиламентов с последующим распадом до мелкозернистого материала умеренной электронной плотности и лизисом. Сохранившиеся фрагменты волокон имели полосы сверхсокращения, в которых отмечались признаки набухания и пролиферации элементов саркоплазматического ретикулума.

В результате нарушения целостности микрососудов после травмы в интерстиции наблюдались скопления форменных элементов крови. Зона повреждения мышечных волокон характеризовалась значительными микроциркуляторными расстройствами. В капиллярах и венулах отмечался стаз и формирование микротромбов. Деструктивные повреждения эндотелия микрососудов сочетались с тромбозом. В сохранившихся микрососудах наблюдались отчетливые признаки отека эвдоте-лиоцитов и стазирование форменных элементов.

Макрофагальная реакция была многофазной и имела характерные особенности. Важным моментом в осуществлении фагоцитоза мышечных волокон имело повреждение сарколеммы. Особо следует заметить, что некоторые макрофаги, осуществляя фагоцитоз находились в состоянии митотического деления. Основные особенности воспалительной реакции в рашше сроки после травмы заключались в следующем: процесс очистки раны не завершался на 2, 3 сутки как при незначительных повреждениях мышц. При размозжении мышцы макрофагальная реакция была пролонгированной и многофазной; волны ее отмечались на 3, 5, 10, 15 сутки. Продолжающаяся деструкция мышечной ткани вследствие нарушения ее кровоснабжения и иннервации приводила к тому, что процессы альтерации мышечных волокон обнаруживались в пограничных с некрозом зонах и в здоровых участках.

Как известно, при повреждении макрофагальная реакция сменяется фибробластической. При размозжении мышц, вследствие многофазной макрофагальной реакции, отмечается усиленное образование коллагена фибробластами, что приводило к заполнению им интерстация. Выделившиеся в процессе посттравматического миогенеза клетки-сателлиты, дифференцирующиеся миобласты, мышечные трубочки попадали в окружение фибробластов и коллагеновых фибрилл. Во многих случаях это препятствовало их слиянию.

Таким образом, макрофагальная реакция характеризовалась про-лонгированностью течения и высокой активностью макрофагов. В отдаленные сроки после травмы и реплантации конечности отмечается вновь появление макрофагов, которые фагоцитируют неповрежденные "на вид" мышечные волокна.

Обнаруженные в эти сроки активированные плазматические клетки свидетельствуют о том, что при тяжелых травматических повреждениях скелетных мышц изменяется иммунологический статус ткани, что находит отражение в фагоцитировании "здоровых" неповрежденных мышечных волокон и появление активизированных плазматических клеток.

Посттравматический миогенез и его особенности.

Процессы деструкции ткани, фагоцитоз макрофагами продуктов некроза протекают параллельно с процессами внутриклеточной регенерации миофибрилл и активации клеток-сателлитов - камбиального резерва мышечной ткани. Между базальной мембраной мышечного

волокна и сарколеммой определяется труппа малодифференцирован-ных клеток, цитоплазма которых, бедная внутриклеточными органел-лами, образует узкий ободок вокруг ядер. В других клетках выявлялись различные этапы дифференцировки, что выражалось в увеличении площади цитоплазмы, обогащении ее внутриклеточными органеллами. В некоторых клетках-сателлитах были обнаружены центриоли, являющиеся косвенным признаком возможности их митотического деления.

Пополнение популяции клеток-сателлитов происходило также за счет обособления ядерно-саркоплазматических участков, которые затем выделялись из состава мышечного волокна. Такой процесс был больше всего выражен на 5, 7 сутки после травмы и в опытах, где травме предшествовала денервация мышцы. Эти наблюдения свидетельствуют о том, что ядра мышечных волокон неоднородны и при определенных условиях, могут также выступать в качестве камбиального резерва.

Наряду с этим, в поврежденных участках мышечных волокон, подвергшихся сегментарному некрозу, клетки-сателлиты претерпевают деструктивные изменения по типу вакуольной дегенерации. В 1шх, наряду с признаками внутриклеточного отека, определяются очаги цитолиза, крупные вакуоли, липидные капли, миэлиноподобные образования; перинуклеарные пространства расширены, ядра просветлены и содержат мелкодисперсный хроматин. Описанные деструктивно-дегенеративные изменения в клетках-сателлитах приводят к их гибели, и, следовательно, к сокращению камбиального резерва мышечной ткани. Клетки-сателлиты, дифференцирующиеся после повреждения мышц, можно обозначить как постгравматические, в отличие от недифференцированных "дремлющих миобластов", которые обнаруживаются в интактных мышечных волокнах.

Ультраструктура дифференцирующихся клеток-сателлитов на 2, 3 сутки после травмы усложнялась, в их цитоплазме отмечались скопления рибосом, полисом, электронноплоттлх митохондрий и тонких промежуточных филаментов. Эти морфологические признаки свидетельствовали о дифференцировке клеток в направлении миобластов. В цитоплазма другого тала клеток были развиты элементы гранулярного эндоплазматического ретикулума, цистерны комплекса Гольджи, которые занимали значительную часть клетки. Такая структурная организация характерна для секретирующих клеток, к которым относятся и фибробласты. Выявленные морфологические различия позволили вы-

сказать предположение, что клетки-сателлиты обладают плюрипотент-ностью и могут дифференцироваться при определенных условиях (например, при гипоксии), как в миобласты, так и фибробластопо-добные клетки. Отход части клеток-сателлитов с миогенного пути дифференцировки также приводит к сокращению миогенного резерва ткани в условиях размозжения скелетных мышц.

На 5-е сутки после травмы появляются первичные мышечные трубочки. Это гигантские одноядерные клетки с цетралъно расположенными ядрами. Отличительной особешюстью их является наличие тонких и толстых миофиламентов, разбросанных в цитоплазме. Сборка саркомеров и миофибриллогенез в клетках начинается после слияг ния нескольких первичных мышечных трубочек. Однако образованию многоядерных крупных симпластов препятствует коллаген и фиброб-ласты, располагающиеся между миоидными клетками.

Таким образом, у взрослых половозрелых крыс для посттравматического миогенеза характерны типичные стадии, описанные при развитии скелетных мышц у плода и в ранние сроки постнатального развития, а также у молодых животных при травме. Однако, развертывающиеся вначале процессы клеточного миогенеза имеют тенденцию к ограничению и значительному снижению регенераторного потенциала ткани. Важное значение приобретают процессы внутриклеточной регенерации миофибрилл, которые отмечаются с первых суток и протекают параллельно деструктивным процессам.

Причины неполной реализации миогенной программы у взрослых половозрелых особей, приводящих, как известно, к рубцеванию после обширных травматических повреждений мышц конечностей, были не ясны.

Сравнительные характеристики дифференцирующихся миогенных элементов в период пренатального развития скелетных мышц и после их размозжения у половозрелых животных.

Скелетная мышца крысы на 18 сутки эмбрионального развития находится на стадии формирования многоклеточных симпластов. Основное отличие пренатального миогенеза от посттравматического заключается в том, что миогенные элементы - миобласты, мышечные трубочки не имеют сформированных базальных мембран, которые определяются только у мышечных волокон. Вероятно, формирование

сарколеммы относится к постнатальному периоду развития скелетных мышц.

В результате выдвинута гипотеза о том, что рано формирующиеся базальные мембраны могут изменять характер межклеточных контактов вследствие изоляции рецепторов, расположенных на плазматических мембранах миобластов, мышечных трубочках и миосимпластах. У плода в период пренатального развития мышечные трубочки, молодые мышечные волокна с четкими чертами миофибриллогенеза прилегали друг к другу и формировали на боковых поверхностях плазматических мембран короткие плотные межклеточные контакты. Вместе с тем, на 5-е сутки после травмы, формирующиеся мышечные трубочки с начальными стадиями саркомерогенеза имели уже четко дифференцирующиеся базальные мембраны.

Таким образом, важным отличием постгравматического миогене-за является раннее формирование базальных мембран вокруг миобластов.

Особенности постравматического ангиогенеза и процессы

васкулогенеза у 18-лневного плода крысы.

Известно, что выживаемость ткани после повреждения и обширность зоны некроза определяется своевременным восстановле1шем микроциркуляции. Поэтому один из основных вопросов о судьбе ре-паративных процессов заключается в следующем - как относятся процессы миогенеза и ангиогенеза во времени?

Процессы миогенеза у половозрелых крыс отчетливо выражены уже на 3-й сутки после травмы и представлены последовательными стадиями дифференцирующихся миобластов и формирующихся сим-пластов. В это время в сосудах микроциркуляторного русла наблюдались острые деструктивно-дегенеративные изменения. В просветах определялись явления стаза и тромбоз. Таким образом, ранняя стадия миогенеза - образовать миобластов мышечных трубочек - протекала в условиях гипоксии. Отчетливые признаки регенерации кровеносных капилляров: формирование конусов роста от предшествующих сосудов и образовать новых капилляров из малодифференцированных клеток происходило на 3-5 сутки. Кроме формирования новых микрососудов имели место процессы восстановления эцдотелиальной выстилки микрососудов в местах слущивания эндотелиоцитов. Процесс этот заключался в том, что отростки эндотелиальных клеток, расположенные рядом с обнаженными участками, направлялись навстречу друг другу по

открытым базальным мембранам. Это приводило к формированию нового эндотелиального пласта на месте старого. Дегенерировавшие фрагменты старых эндотелиальных клеток оставались заключенными между расщепленными базальными мембранами. Эти процессы могли повторяться неоднократно, что сопровождались увеличением толщины стенки микрососуда и, следовательно, увеличением трансэндотелиаль-ного пути. Таким образом, после травматического повреждения скелетных мышц процессы миогенеза и реваскуляризации были разобщены во времени. Это приводило к тому, что формирующиеся миобла-сты и мышечные трубочки дифференцировались в условиях гипоксии. Даже, если бы восстановление капилляров и клеточные миогенные реакции шли параллельно, новообразующиеся сосуды следует отнести к незрелым, так как цитоплазма молодых эндотелиоцитов содержит только единичные транспортные микропиноцитозные везикулы и процессы обмена в таких сосудах осуществляется посредством диффузии и фильтрации.

Базальные мембраны отсутствовали у формирующихся микрососудов. Можно было наблюдать перемещение эндотелиоцитов от одного микрососуда к другому. На основании ультраструктурных наблюдений на плодах можно предположить, что отсутствие базальных мембран создает особые взаимоотношения между дифференцирующимися клетками, которые могут свободно перемещаться и встраиваться в определенные 1руппировки клеток. У плода процессы васкулогенеза и ангиогенеза предшествуют или протекают параллельно стадиям диф-ференцировки мышечных элементов, их слияния и формирования мышечных трубочек.

Выявленные особенности постгравматического ангиогенеза приводят к тому, что часть миобластов и мышечных трубочек претерпевает деструктивные изменения, завершающиеся вакуольной дегенерацией клеток. Напротив, фибробласты в условиях гипоксии активно про-лиферируют и синтезируют коллаген, разобщая миогенные элементы.

Вместе с тем, через месяц в пограничной с некрозом зоне восстанавливается кровоток. Мышечная ткань представлена молодыми волокнами, в которых отмечается несовершенство процессов внутриклеточной регенерации, вследствие нарушения процессов саркомеро-генеза. В центре повреждения организуется небольшой склерозиро-ванный участок размерами 1-3 мм. Однако, как показали экспериментальные данные и тщательный ультраструктурный анализ, дистрофи-

ческий процесс в мышцах не завершается, несмотря на заживление раны.

Состояние неврального аппарата мышц скакательного комплекса крыс после размозжения. денерваиии и реплантации конечности.

Известно, что важная роль в регенерации мышечных волокон принадлежит восстановлению нервно-мышечных взаимодействий. На рагашх стадиях госпитального миогенеза, мышечные трубочки не получившие своевременной иннервации, подвергаются дегенерации.

Данные ультраструктурного анализа показали, что размозжение скелетных мышц, создают пеструю картину перемежающихся участков полной деструкции ткани и волокон, сохранивших структурную организацию близкую к норме. Травма сопровождается денервацией вследствие повреждения дистальных отделов нервов. На сохранившихся участках мышечных волокон первые признаки реиннервации обнаруживаются на 5 сутки, что совпадает по времени с образованием мышечных трубочек и первых мышечных симпластов. Однако, прорастающие молодые аксоны обнаруживают признаки деструктивных изменений. Прорастающие аксоны незрелые, имеют 1-3 миелиновых слоя. Группы молодых прорастающих аксонов, как правило, окружены отростками шванновских клеток, образуют многослойные футляры наподобие оболочек периневрия. Отростки шванновских клеток могут проникать в осевые цилиндры, фагоцитируя аксоплазму. Подвергаются фагоцитозу со стороны швашговских клеток претерминальные веточки нервов, а также отдельные терминали в зоне синапса. Несмотря на то, что на 10-е сутки после травмы были обнаружены синапсы на мышечных трубочках, в синаптических зонах преобладали денерваци-онные процессы.

Особо следует отметить, что через месяц после травмы в некоторых нервных волокнах были обнаружены отчетливые признаки Уолле-ровской дегенерации, объяснить которую можно было нарушением кровоснабжешм в сосудах нервов. В эти сроки деструктивно-дегенеративные изменения в микрососудах мышц нарастали. Было обнаружено большое количество капилляров, образованных электронно-плотными эндотелиоцитами, цитоплазма которых, представлялась гомогенной. Вероятно, после размозженной травмы в части аксонов возникает ретроградная дегенерация. Одной из причин этого могут явиться изменения в vasa nervorum.

Несмотря на описанные выше процессы, через месяц большая часть мышечных волокон была реиннервирована. Вместе с тем, имело место снижение индекса иннервации ткани вследствие фагоцитоза швашювскими клетками невральных элементов и вторичной дегенерации отдельных аксонов, обусловленной сосудистыми изменениями.

Таким образом, размозженная травма вызывает не только повреждение и дегенерацию проксимальных участков нервных волокон. Сама травма может вызывать в дистальных отрезках нервов такие альтернативные изменения, которые могут сопровождаться ретроградной дегенерацией и вторичной денервацией мышечных волокон. Процессы реиннервации и время, в течение которого появляются аксоны в си-наптической зоне, определяются не только расстоянием и скоростью роста аксонов; большое значение приобретают деструктивно-дегенеративные процессы, обусловленные травмой, воспалительным процессом и изменениями в окружающих нервы тканях и микрососудах.

Травма на фоне предварительной денервации. Травма па мышцы бедра наносилась на 6-е сутки после денервации. Первые синапсы были обнаружены на 10 сутки после перерезки нерва. Это соответствовало пятым суткам после размозжения мышц. В ткани были резко выражены деструктивные изменения, обусловленные травмой, которые сопровождались нейтрофильной, макрофагальной реакциями. Освобождающиеся лизосомальные ферменты этих клеток вызывали, вероятно, деструктивные изменения как в самих мышечных волокнах, так и в других компонентах ткани, в том числе в прорастающих аксонах. В отличие от "чистой" травмы альтеративные изменения в аксонах были более выражены, затрагивали осевые цилиндры и во многих случаях имели необратимый характер. В зонах синапса также имели место явления фагоцитоза терминалей. Однако в данной экспериментальной модели, где травма сочеталась с предварительной денервацией обнаруживаются синапсы, в которых отмечалась дезинтеграция постсинап-тических складок.

Вместе с тем, несмотря на некоторые различия по сравнению с "чистой" травмой, после предварительной денервации общее направление изменений в нервах и синапсах сохраняется, как и время появления прорастающих аксонов и первые признаки реиннервации, что соответствуют важному периоду послравматического миогенеза -формированию миобластов и мышечных трубочек. Однако, многие ак-

соны и формирующиеся нервные волокна свободно располагаются в интерстиции и не образуют синаптические контакты.

Через месяц после операции мышечные волокна реиннервирова-ны. Вместе с тем, в большей части синапсов отмечается денервацион-но-реиннервационный процесс. Двигательные концевые пластинки расширены. Отдельные терминали в них замещены ядросодержащими частями шванновских клеток, другие окружены отростками шваннов-ских клеток, некоторые терминали выполнены плотно упакованными везикулами. Эти и другие признаки являются отражением нарушения нервно-мышечной передачи. В нервных волокнах отмечается рыхлое расположение аксонов.

Таким образом, несмотря на то, что процессы реиннервации протекают активно, их начальные этапы соответствуют или незначительно сдвинуты по отношению к стадиям миогенеза, отмечается снижение индекса иннервации ткани вследствие альтеративных изменений в нервах, снижении плотности аксонов в нервах и уменьшении площади синаптических контактов вследствие сокращения числа терминален в синапсах.

Перерезка бедренного нерва производилась в месте его отхождения от седалищного.

Денервация сопровождалась появлением большого числа клеток-сателлитов, которые образуются под сарколеммой мышечного волокна за счет обособления ядерно-саркоплазматических участков. Эта форма опыта четко продемонстрировала, что ядра мышечного волокна неоднородны и при определенных условиях могут принимать участие в генерации клеток-сателлитов, которые пройдя последовательные стадии дифференцировки превращаются в миобласты. Денервация показала, что клетки-сателлиты образуются также вследствие митотического деления. Таким образом, денервация стимулирует начальные этапы клеточного миогенеза.

Самые благоприятные условия для процесса реиннервации имели место в данной модели. Расстояние между перерезанными концами нервов составляло 1-2 мм, поэтому аксоны перерезанного нерва быстро прорастали по эпиневральному чехлу и дальнейшие процессы, связанные с реиннервацией проходили в относительно интактной мышце.

Таким образом, процессы реиннервации мышечных волокон определяются не только уровнем перерезки двигательного нерва. Возникающие деструктивно-дегенеративные процессы в периневральном

пространстве могли вызывать в отдельных волокнах альтеративные изменения, приводящие к вторичной Уоллеровской дегенерации, признаки которой были обнаружены через месяц после размозжения скелетных мышц. Изменения в нервах, как показали последующие изучения ткани в отдаленные сроки были связаны с дегенеративными процессами в vasa nervorum и развитием посттравматической микроангио-патии.

Полученные данные показали, что стадия постгравматического миогенеза и время появления первых аксонов в интерстиции, процессы реиннервации старых синаптических зон имеют временное соответствие. Вместе с тем, обнаруженные изменения в нервах свидетельствуют о неблагоприятном течении реиннервационного процесса после такого вида травматического повреждения, как размозжение скелетных мышц, и после травмы на фоне предварительной денервации.

Дифференцировка клеток-сателлитов в отдаленные сроки

после травмы и реплантации конечности.

Деструктивно-дегенеративные процессы в мышечных волокнах сопровождались регенеративными. В отдаленные сроки стадии миогенеза имели свои особенности. Начиная с месяца, выделившиеся клетки-сателлиты характеризовались высокой электронной плотностью ядра и цитоплазмы и были окружены базальными мембранами. Вследствие высокой осмиофильности и гомогенности их цитоплазмы, внутриклеточные органеллы в них не определялись, за исключением электронно-прозрачных вакуолей. Эта группа клеток-сателлитов была отнесена к дегенерирующим формам.

Наличие базальных мембран стало своеобразным клеточным маркером и позволило проследить дальнейшие пути миграции и диф-ференцировки некоторых из этих клеток. Были обнаружены картины, которые можно трактовать как последовательные этапы включения клеток-сателлитов в состав капилляров. Это позволило выдвинуть предположение о том, что в условиях гипоксии при обширных мышечных повреждениях клетки-сателлиты могут изменять направление дифференцировки с миобластической на фибробластическую. Основанием для этого послужили не только ультраструктурные различия клеток, но и способность их встраиваться в состав капиллярной стенки, занимая положение перицита, при этом базальные мембраны капилляра и присоединившейся клетки сливались. В норме такой способностью обладают фибробласты, но эти клетки не имеют, как известно,

базальных мембран. Часть же клеток-сателлитов сохраняет ми о генную дифференцировку.

Другой особенностью посправматического миогенеза в отдаленные сроки является наличие базальных мембран у миобластов, что, по-видимому, препятствует их слиянию и образованию миосимпла-стов. Такие изолированные клетки начинают синтезировать миофиб-риллярный аппарат, образуя гексагонально расположенные пучки про-тофибрилл. Наличие саркомеров в цитоплазме одноядерных клеток, является признаком принадлежности их к мышечным трубочкам. В дальнейшем они превращались в истонченные короткие мышечные волокна. Такой тип дифференцировки, свойственный низкоорганизованным видам животных (миноги) называется уницитарным. Как показали наши данные, в этом основное отличие посправматического миогенеза от эмбрионального, где базальные мембраны начинают формироваться только на стадии миосимпластов. Уницитарный путь дифференцировки клеток-сателлитов, миобластов приводит к рекапитуляции регенераторного процесса в скелетных мышцах половозрелых крыс, что значительно ограничивает регенераторный потенциал ткани. Вместе с тем, определенная часть клеток успевает пройти последовательные этапы дифференцировки, и удавалось обнаружить группы молодых волокон нормального диаметра, в которых активно синтезируется миофибриллярный аппарат.

Таким образом, посправматический миогенез у взрослых крыс ограничен в результате отхода части клеток с миогенного пути дифференцировки, гибели клеток, вследствие травматического повреждения мышечных волокон, а также рекапитуляции процесса миогенеза.

Не имея в настоящее время надежных клеточных маркеров, позволяющих метить клетки только миогенного ряда во взрослом организме, приходиться тщательно искать морфологические критерии, способные со значительной долей достоверности ответить на вопрос о сохранении в тканях (в данном случае скелетной мышцы) взрослого организма камбиальных резервов, способных обеспечить репаративные процессы. Мышца взрослых половозрелых крыс такой возможностью обладает.

Миогенный путь дифференцировки: клетка-сателлит - миобласт - мышечные трубочки имеют отличие от эмбрионального миогенеза. Различие эти определяются, в первую очередь, особенностями межклеточных отношений, которые, в определенной мере, обусловливают

раннее формирования базальных мембран и коллагеновых фибрилл. Кроме клеточного миобластического развития, значительное место в процессах регенерации приобретают процессы внутриклеточной регенерации. В волокнах, сохранивших базальные мембраны и сарколемму, отмечаются процессы саркомеро- и миофибриллогенеза. В процессах внутриклеточной регенерации протомиофибриллы не образуют типичную гексагональную упаковку, а миофибриллы продольную ориентацию. Эти нарушения структурной организации млофибрилл носят чаще всего локальный характер. Вместе с тем, встречаются молодые волокна, сформированные из атипично ориентированных саркомеров.

Через 8 месяцев после травмы на фоне предварительной денер-вации и реплантации конечности обнаружение отщепляющихся от мышечных волокон клеток-сателлитов, миобластов и мышечных трубочек свидетельствовали о том, что даже в отдаленные сроки в мышцах имеют место процессы клеточного миогенеза, а также внутриклеточной регенерации миофибрилл. Процессы регенерации мышечных волокон протекали параллельно деструктивными. Нарушение трофического обеспечения ткани как ос стороны неврального аппарата, так и сосудов на протяжении длительного времени приводило к прогрес-сированию патологического процесса в мышечных волокнах. Многие волокна имели характерные признаки дегенерации: определялись мембранные комплексы, вакуоли, фрагменгированные ядра, локальные участки миолиза. В пределах одного волокна можно было наблюдать различную степень и характер дезорганизации миофибриллярного аппарата.

Диаметр мышечных волокон уменьшался вследствие атрофии, значительно возрастало расстояние от них до капилляров, обнаруживались свежие очаги некроза. Присутствие поврежденных и тромбиро-ванных капилляров в непосредственной близости от некротизирован-ных волокон позволяло считать, что альтеративные изменения части мышечных волокон имеют сосудистый генез.

Кроме различного рода деструктивных изменений во многих мышечных волокнах были обнаружены патологические включения: спиральные мембранные комплексы, липофусциновые гранулы, лестничные структуры, липидные капли. Процессы внутриклеточной регенерации, саркомерогенеза носили атипичный характер. Среди многочисленных рибосом и полисом располагались свободные филаменты.

ОСОБЕННОСТИ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОГО МИОГЕНЕЗА

У ПОЛОВОЗРЕЛЫХ животных

Клетка- сателлит камбиальный резерв мышечного волокна

Ядерно-саркоплазмати-

ческий участок, отщепившийся от мышечного волокно

Дифференцировка по эмбриональному типу

X

МИОБЛАСТ

1

МИОСИМПЛАСТ

Фор базапън

ирование щ мембран

МЫШЕЧНАЯ ТРУБОЧКА

I

МЫШЕЧНОЕ ВОЛОКНО

Уницитарный путь дифференцировки

такие

Форма, ч базальн ых мембран

МИОБЛАСТ

чу

МЫШЕЧНАЯ ТРУБОЧКА

МЫШЕЧНОЕ ВОЛОКНО

V

Некоторые из них соединялись в пучки резко расширенными Ъ-линиями. Разбросанные по саркоплазме саркомеры не формировали параллельные ряды, вследствие чего миофибриллогенез носил хаотичный характер. В большинстве своем, эти процессы носили локальный характер, но встречались волокна целиком построенные из разнона-правлено расположенных саркомеров, в которых протомиофибриллы были объединены материалом, напоминающим "немалиновые тельца", которые описываются при различного рода мышечной патологии. На поперечных срезах таких волокон обнаруживалось нарушение гексагональной упаковки актомиозиновых нитей в миофибриллах.

В молодых волокнах определялись мембранные образования гигантского размера с упорядочегшой структурой и циркулярно расположенными мембранами с осмиофильным содержимым. На поперечных срезах эти структуры занимали значительную часть волокна. Ультраструктурный анализ этих мембранных образований позволяет считать, что это пролиферирукмцие мембраны саркотубуляриой системы. В некоторых волокнах обнаруживались кристаллоидные включения, гигантского размера митохондрии, необычные по форме, замещающие сократительный аппарат волокон.

Описанные структурные изменения одного волокна или группы волокон для мышцы в целом могут иметь различное значение. Тале, среди деструктивно измененных волокон с атипично сформировашш-ми лентами миофибрилл всегда имеется значительное число волокон, сохраняющих структурную организацию в пределах нормы или близкую к ней. Эти волокна, по-видимому, и обеспечивают сократительную функцию мышц. Вместе с тем, предел их компенсаторных возможностей ограничен в случае возрастания функциональной нагрузки.

Посттравматическая микроангаопатия.

Как показали данные ультраструктурного анализа, в отдаленные сроки после травмы и реплантации конечности наблюдается прогрес-сирование дистрофического процесса в скелетных мышцах, обусловленное, наряду с нейродистрофическими процессами, деструктивно-дегенеративными изменениями в сосудах микроциркуляторного русла.

Признаки альтерации микрососудов нарастают, начиная с одного месяца после травмы, что сопровождается появлением сосудов, образованных клетками с гиперосмированной цитоплазмой. Цитоплазма таких клеток представляется бесструктурной, в ней определяются единичные микропиноцитозные везикулы. В дальнейшем в эндотелии

микрососудов, образованных такими клетками, обнаруживаются крупные кавеолы, люки, широкие трансэндотелиальные каналы, что приводит к плазматическому пропитыванию стенок микрососудов. Крупные фрагменты клеток и целые эндотелиоциты слущиваются в просвет, вследствие чего могут образовываться ацеллюлярные капилляры, проницаемость которых резко возрастает.

Элекгрошгоплотные клетки с коагулированной цитоплазмой в ряде сосудов подвергаются глыбчатому распаду, и форменные элементы крови остаются свободными в интерстиции. Описанные изменения эндотелиоцитов по "темному типу" можно трактовать как апоптоз. Через 8 месяцев после травмы число сосудов, образованных "темными" клетками составляло 20%, при реплантации конечное™ - более 30%.

При регенерации и формировагага нового эвдотелиального слоя, пикнотические фрагменты старых эндотелиоцитов остаются заключенными между базальными мембранами. В отдаленные сроки многократное повторение процесса гибели и регенерации эндотелия приводит к тому, что толщина стенхи капилляров и артериол резко возрастает, в 3-5 раз и более.

• Проблема "темных" клеток имеет важное диагностическое значение, вследствие того, что патологические "темные" клетки не легко отличить от "темных" клеток, находящихся в состоянии гиперфункции. Они также имеют высокую электронную плотность цитоплазмы, но обычно в них среди обилия рибосом, четко определяются другие внутриклеточные структуры: митохондрии, микропиноцитозные везикулы, мелкие цистерны гранулярного ретикулума. Ядра клеток четко конту-рированы в цитоплазме. Появление в скелетных мышцах большого числа капилляров, образованных патологически измененными "темными" клетками, а также периваскулярные некрозы вокруг подобных сосудов является неблагоприятным патоморфологаческим признаком. Деструктивно-дегенеративные изменения эндотелиоцитов могут завершаться коагуляционным моноцеллюлярным некрозом с последующим глыбчатым распадом, разрывом стенки микрососуда и образованием экстравазатов. Наиболее выражен был этот процесс при реплантации конечности. Таким образом, при хронизации патологического процесса в микрососудах скелетной мышцы преобладают деструктивно-дегенеративные изменения эндотелиоцитов по "темному" типу.

Имеет место также другой тип дегенерации по "светлому" типу, при котором эндотелиоциты имеют низкую электронную плотность, цитоплазма их гомогенна и не содержит органелл; это сопровождается внутриклеточным отеком. Капилляры имеют расширенные уплотненные базальные мембраны. Процесс завершается лизисом клеток и описан в литературе как моноцеллюлярный колликвационный некроз.

Деструктивно-дегенеративные изменения в эндотелии микрососудов сопровождаются нарушением реологических свойств крови. В микрососудах, наряду с явлениями пристеночного стояния эритроцитов, формирования "монетных столбиков" отмечались явления сладжа. В местах скопления эритроцитов можно видеть разные по плотности клетки. Мембраны гемолизированных эритроцитов принимали неправильную форму, скручивались. Просветы многих микрососудов были заполнены мембранными комплексами гемолизированных эритроцитов, кольцевидно скрученными микроворсинами эндотелия, отшнуро-вавшихся в процессе цитоклазматоза. Эти структуры становились источником свободных эмболов, которые попадали в неповрежденные микрососуды. Процессы ворсинообразования и деструкции эндотелия, преципитация белков плазмы на люминальной поверхности, адгезия и агрегация тромбоцитов приводили к формированию микротромбов.

Таким образом, описанные дегенеративно-некробиотические процессы в эндотелиоцитах, сопровождающиеся нарушением проницаемости стенки микрососудов и гиалинозом в сочетании с отчетливо выраженными изменениями реологических свойств крови, формируют комплекс изменений, которые можно трактовать как посттравматическую микроангиопатию. подобную тем, которые имеют место при диабете, гипертонии, хронической алкогольной интоксикации и других заболеваниях, при которых имеет место действие постоянного патогенного фактора. В изученных экспериментальных моделях в роли патогенного фактора могут выступать высокомолекулярные соединения, поступающие в кровоток при гибели мышечных волокон и нервных структур, которые повреждают эндотелий, способствуют выбросу биологически активных веществ, в частности, агрегации эритроцитов и тромбоцитов. Сопутствующая этим изменениям гипоксия усугубляет дистрофические повреждения мышечной ткани, вследствие чего появляются свежие очага некроза. В интерстиции в отдаленные сроки после травмы появляются макрофаги, фагоцитирующие не только силь-

СХЕМА

ФОРМИРОВАНИЯ ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОЙ МИКРОАНГИОПАТИИ

ТРАВМА

Л

ГИПОКСИЯ

Продукты некроза ткани

Компенсаторно-регенераторпые изменения:

"активация поверхности эндотелия; _ обновление эндотелиальной выстилки;

рост и новообразование капилляров

Плазматическое пропитывание, отложение иммунных комплексов в стенке микрососудов. Колликвационный моноцеллю-лярный некроз эндотелиоцитов.

Гиалиноз микрососудов

_I_

Периваскулярный некроз

_I_

Вторичное повреждение мышцы

Деструктивно-дегенеративные изменения:

коагуляционный и колликвационный некроз эндотелиоцитов; нарушение реологических свойств крови, тромбоз, гемолиз эритроцитов_

Увеличение числа электронно-плотных эндотелиоцитов. Коагуляционный моноцеллю-лярный некроз эндотелиоцитов.

но, но и относительно мало поврежденные мышечные волокна. Обнаруживались также активированные плазматические клетки в непосредственном контакте с капиллярами. Иногда макрофаги образовывали цепочку из нескольких клеток в непосредственном контакте с перицитами капилляров. Это может быть обусловлено тем, что одной из функций макрофагов является элиминация иммунных комплексов из стенок поврежденных сосудов. Все сказанное свидетельствует о том, что в организме образуются специфические иммуноглобулгагы, атакующие как новые структуры, так и микрососуды, в которых откладываются гиалиновые массы. Ультраструктурным выражением этого процесса является гомогенизация цитоплазмы клеток, уплотнение цито-плазматического матрикса, плазматическое пропитывание базалышх мембран и резкое утолщение стенок сосудов.

Сравнительная характеристика изменений неврального аппарата скелетных мышц в отдаленные сроки после повреждения (травма на фоне предварительной денервации, реплантация конечности, "чистая" травма).

Были исследованы внутримышечные нервы и синапсы через 1 и 8 месяцев после повреждения. Ультраструктурные изменения, обнаруженные в нервных волокнах могут быть сведены к двум основным типам: псриаксиальная дегенерация аксонов и вторичная Уоллеровская дегенерация. При первой форме дегенерации в нервных волокнах деструктивные изменения затрагивают миелиновые оболочки аксонов, что выражается в их расслоении, частичной гомогетшзации, варикозных вздутиях и других характерных обратимых повреждениях. Периак-сиальные изменения аксонов сопряжены с реактивными изменениями цитоплазмы шванновских клеток. Эти изменения наиболее характерны для "чистой" травмы, при которой большая часть аксонов в нервах восстанавливается и через месяц в зоне синапсов процессы реиннер-вации преобладают.

При травме на фоне предварительной денервации и реплантации конечности периаксиальные изменения более выражены и часто сочетаются с изменениями осевого цилиндра аксонов. При реплантации обнаружены деструктивные процессы в сосудах периневрия и капиллярах эвдоневрия, которые приводят в ряде случаев к полной деструкции и нарушению целостности оболочек нерва. Аксоны окружены коллагеновыми фибриллами, и нервы подвергаются склерозированию. Подобные процессы при травме сочетанной с денервацией, встречают-

ся довольно редко, микрососуды оболочек пери- и эндоневрия, за редким исключештем сохраняют структурную организацию близкую к норме, вместе с тем в капиллярах обнаружены резко расширенные и уплотненные базальные мембраны.

В отдаленные сроки после травмы дегенеративные изменения в эндотелии vasa nervorum становится выраженными, особенно после реплантации конечности. Характер изменений в сосудах vasa nervorum можно характеризовать как микроангиопатию, она выражается в плазматическом пропитывании стенок, образовании уплотненных базаль-ных мембран. Отмечается гомогенизация цитоплазмы отдельных эндо-телиоцитов по типу моноцеллюлярного колликвационного некроза. Несмотря на это, межклеточные контакты эндотелиоцитов плотно закрыты. Обнаруженные деструктивно-дегенеративные изменения в сосудах позволяют считать, что дегенеративные изменения нервов в от-далегасые сроки могут быть частично обусловлены повреждением vasa nervorum.

Описанные изменения касались, в большинстве своем, мелких внутримышечных ветвей. Более крупные нервные стволы, находящиеся в интерстициальном пространстве редко подвергались тотальному некрозу и склерозированию. В них вторичная нейрогенная дегенерация захватывала только определенное число аксонов, среди которых определялись также прорастающие немиелинизированные аксоны.

Данные ультраструктурного анализа свидетельствовали о восстановлении в отдаленные сроки значительного числа нервов, содержащих рыхлорасположенные миелиновые профили аксонов. При сравнении структуры нервных проводников сопоставимого диаметра заметно уменьшение числа аксона в в нервном стволе и разобщение их коллагеновыми фибриллами. Соотношение немиелинизированных аксонов к миел и визированным составляло 5:1. В норме двигательные внутримышечные нервы содержат миелинизированные аксоны различного диаметра и единичные немиелинизированные аксоны. Разнонаправленное расположите коллагеновых фибрилл внутри нервного ствола нарушает внутриствольную топографию аксонов. Дегенеративные процессы в нервах при травме на фоне предварительной денерва-ции менее выражены, чем при реплантации конечности. При реплантации более 50% внутримышечных нервов были представлены пустыми периневральными футлярами и эндоневральными оболочками. Несмотря на значительные деструктивно-дегенеративные процессы в

нервных волокнах аксоны достигали синаптическис зоны и формировали терминали на мышечных волокнах.

Синаптические зоны имели типичные для денервационных процессов изменения: резкое сокращение синаптических контактов, фагоцитирование терминалей швагаговскими клетками, короткие пост-синаптические складки, анастомозирующие между собой. Синапсы, как правило, были представлены одной, двумя терминалями. Фагоцитозу подвергались также подрастающие аксоны, находящиеся в юггер-стиции.

Несмотря на выраженные изменения в синаптическом аппарате мышц, а также в нервах, сохранившиеся нервные элементы обеспечивали функцию конечности, животные передвигались по клетке и опирались на оперированные конечности. Чтобы расширить представление о функциональной значимости обнаруженных деструктивно-дегенеративных изменений в невралыюм аппарате, было проведено дополнительно светооптическое и морфометрическое исследование мышц реплантата, как одной из наиболее тяжелой формы исследованных экспериментальных моделей.

Мышцы скакательного комплекса (m. gastrocnemius, т. solius, т. ext. halucis longus) подвергли макро- и микроскопическому исследованию. Масса и объем мышц реплантированной конечности были значительно ниже соответствующих показателей контралатералыюй конечности. По степени выраженности атрофии можно было выделить 3 группы животных с падением массы мышц до 25% от 25-50% и более 50%. Доля соединительнотканного компонента значительно возрастала.

Анализ гистологических препаратов с применением морфомет-рии показал, что мышца реплантата существенно отличается от мышц контралатеральных конечностей. Наряду с мышечными волокнами, имеющими обычную структуру обнаруживались обширные участки атрофии, склероза и свежих деструктивных изменений, а также дегенерирующие волокна. Определение активности миозиновой АТФазы и сукцинатдегадрогеназы показало изменение типирования волокон, что является отражением денервационно-решшервационного процесса. Для мышц были типичны большие группировки однотипных волокон, которые тесно контактировали между собой, что предъявляет особое требование к их иннервационному аппарату и кровоснабжению. Компактное пространственное расположение мышечных волокон в новых

двигательных единицах может приводить к уязвимости нервно-мышечной системы при усиленной нагрузке. Выявление активности АХЭазы и ультраструктурный анализ показал, что как в быстрых, так и в медленных мышцах практически все двигательные волокна заканчиваются терминальным спраутингом. Характерным для экспериментальной реплантации конечности является высокий процент нервных волокон с признаками вторичной Уоллеровской дегенерации до 25% и более. Морфологические и морфометрические показатели атрофиче-ских изменений в мышцах реплантата в сочетании с данными ультраструктурного анализа позволили лучше оцепить значение патоморфо-логических изменений в нервных проводниках и картину деструктивных и атрофических процессов на клеточном тканевом и оргашгом уровнях, а также высокие адаптивные возможности сохранившихся нервных волокон.

Патоморфологическая картина после размозжения мышц на фоне предварительной денервации и реплантации ампутировашюй конечности показали, что, несмотря на процессы заживлетгя раны и приживление ампутированной конечности, дистрофические процессы в мышцах не завершаются, и принимают хрогагческий характер. Это свидетельствует о нестабильности вновь сложившихся нервно-мышечных взаимоотношений, а также о присутствии какого-то патогенного фактора.

Мышечные веретена. Особенности структурной организации

после травмы и реплантации конечности.

Учитывая, что мышечные веретена являются важной структурой мышечной ткани, принимающей участие в координации двигательной функции, было проведено исследование их ультраструкгуры после реплантации конечности.

Мышечные веретена имеют характерные признаки организации, присущие млекопитающим: наружную и внутреннюю капсулу, внутри которой содержатся 3-4 интрафузальных мышечных волокна, из шк ЯЦ - волокна, содержащие центрально расположенные ядра в виде цепочки; ЯС - волокна, имеющие группу ядер в центре волокна. В полярных зонах интрафузальных волокнах расположены двигательные концевые пластинки, в центральной части волокон спирально расположены сенсорные нервные окончания.

Через 1 месяц после реплантации конечности часть мышечных веретен выживает, о чем свидетельствует сохрашюсть наружной капсу-

лы рецептора. Часть веретен имеет удовлетворительную сохранность, но большинство их характеризуется различной степени выраженности деструктивно-дегенеративными изменениями. Клетки эпиневралыюго эпителия, формирующие наружную капсулу, характеризуются высокой электронной плотностью и имеют признаки деструкции. Внутренние листки капсулы, окружающие непосредственно интрафузальные волокна, атрофированы и представлены истонченными отростками клеток. Деструктивно-дегенеративные процессы в них настолько выражены, что внутриклеточные органеллы не определяются.

Особенно важно отметить, что дистрофические изменения захватывают эндотелий микрососудов, проходящих в наружной оболочке капсулы. Капилляры образованы электронноплотными деструктивно измененными "темными" клетками. Имеет место нарушение целостности эндотелиоцитов, ворсинообразование и цитоклазматоз. В отдельных микрососудах истончение эндотелия приводит к образованию диафрагмированных пор, что сказывается, безусловно, на увеличении проницаемости таких сосудов и, вероятно, сопровождается повышением интракапсулярнош давления. Изменения в сосудах рецептора были отнесены к группе неспецифических микроангиопатий.

Интрафузальное пространство характеризуется повышенной электронной плотностью. В нем определяются скопления эластических волокон, малодифференцировашше клетки в состоянии митоза, свободные пшаютические шванновские клетки, окруженные многослойными базальными мембранами. Встречаются также спиральнозак-рученные базальные мембраны, представляющие собой остатки лизи-ровашшх шванновских клеток.

Атрофия внутренних оболочек капсулы, увеличение плотности шгтракапсулярного пространства, появление в нем мелкодисперсного материала, повреждение эндотелия сосудов свидетельствуют о нарушении проницаемости оболочек капсулы и сосудов. Наряду с этим наблюдается прорастание в интракапсулярное пространство многочисленных миелинизировашшх аксонов. В аксонах, имеющих обычную электронную плотность и структурную организацию близкую к норме, отмечается глыбчатый распад и вакуолизация цитоплазмы. В отдельных аксонах наблюдаются явления филаментозной дегенерации. Шванновские клетки, сопровождающие аксоны, проникают в осевые цилиндры и фагоцитируют их, оставляя после себя пустые футляры. Эти наблюдения свидетельствуют о вторичной дегенерации прорас-

тающих аксонов. Несмотря на это, часть интрафузальных волокон ин-нервирована, в их синагггических зонах обнаруживаются терминали. Чувствительные нервные окончания, как правило, представляют собой структуры с гомогенным содержимым, только единичные окончания сохраняют структуру, близкую к норме - содержат мелкие митохондрии, единичные везикулы, нейрофиламенты.

Следует констатировать, что денервационные процессы в интрафузальных волокнах преобладают над реиннервационными.

Деструктивные изменения в новообразованных нервных структурах ухудшают условия для восстановления адекватных нервно-мышечных взаимоотношений в веретенах реплантата. Несмотря на сохранность капсулы, в ряде интрафузальных волокон обнаруживается лизис миофибрилл, дезорганизация внутриклеточных структур, отмечаются дегенеративные изменения в ядрах.

Таким образом, через месяц после реплантации конечности большинство изученных веретен сохраняет структурную целостность капсулы. Однако деструктивно-дегенеративные изменения в регенерирующих нервных структурах, нарушение аксон-шванновских взаимодействий затрудняет формирование нервно-мышечных и чувствительных контактов. Изменения микрососудов капсулы, атрофия внутренних листков и другие ультраструктурные изменения рецептора, ставят под вопрос возможность сохранения значительного числа мышечных рецепторов и в отдаленные сроки после реплантации. Характер структурной организации мышечных веретен в изучаемые сроки позволяет предполагать существенное ограничение восстановления адекватной функциональной активное™ значительного числа мышечных рецепторов. Подтверждением этого является также тот факт, что мышечные интрафузальные волокна через месяц после реплантации конечности находятся в состоянии расслабления, так же, как и экстрафузальные волокна.

Следует отметить, что атипичные волокна сохраняют свой регенераторный потенциал: от них отщепляются дифференцирующиеся клетки-сателлиты.

Появление атипичных белковых комплексов, наводнение ткани продуктами некроза вследствие продолжающихся деструктивных процессов нейрогенного и сосудистого генеза приводит к запуску аутоиммунных процессов, о чем свидетельствует нахождение в интерстиции активированных плазматических клеток. На изменение антигенной ха-

рактеристики мышечных волокон, указывают процессы активного фагоцитоза "здоровых" на вид мышечных волокон.

Таким образом, в отдаленные сроки после травмы персиетирую-щий характер повреждений мышечной ткани, обусловленной по-стгравматической микроангиопатией, вторичными нейрогенными дистрофиями и присоединяющимися аутоиммунными процессами, способствуют незатухающему деструктивно-дегенеративному процессу в скелетной мышце.

Анализ причин неполного структурно-функционального восстановления скелетных мышц после тяжелого травматического повреждения конечности.

Результаты исследования показали, что процессы регенерации, и без того ограниченные в комитированных тканях, при травме и реплантации конечности не реализуются в полном объеме по ряду причин:

1. С первых суток после повреждения мышц прослеживаются последовательные стадии клеточного миогенеза. Образование и диф-ференцировка клеток-сателлитов наблюдается на всех сроках, в том числе и в отдаленные сроки после травмы или реплантации. Однако часть клеток-сателлитов гибнет в течение 1-3-х суток. Приблизительно к месяцу появляются формы клеток-сателлитов, характерной особенностью которых является высокая осмиофильность цитоплазмы. Часть этих клеток совершает типичный путь дифференцировки, часть -дифференцируются в фибробластоподобные клетки и включается в состав капиллярной стенки, занимая положение перицита, часть клеток дегенерирует. Ограничение популяции клеток-сателлитов приводит к снижению регенераторного потенциала ткани.

2. Очень важным моментом миогенеза является формирование мышечных трубочек. Выявлено, что у 19-ти недельного плода не только миобласты, но и молодые мышечные трубочки, образованные из небольшого числа клеток не имеют базальных мембран. Особенностью посправматического миогенеза является раннее формирование базальных мембран вокруг миобластов, что, возможно, становится препятствием для формирования многоклеточного симпласта. Изолированные миогенные клетки начинают синтезировать миофибриллярный аппарат, и процесс завершается формированием тонких мышечных волокон (уницитарный тип дифференцировки). Наблюдается, своего рода, рекапитуляция миогенеза. Такой тип регенерации свойственен

более низкоорганизованньш животным. Вместе с тем, часть миобла-стов успевает сформировать многоклеточные симпласты.

3. Внутриклеточная регенерация миофибрилл в мышечных волокнах, занимает значительное место в процессе регенерации и протекает в волокнах, сохранивших сарколемму. Однако новообразованные миофибриллы часто формируют саркомеры, которые не объединяются в четкие параллельные ряды.

4. Для жизнеобеспечения очагов регенерации очень важно со-стоя1ше микрососудов. В рашше сроки после травмы (3-5 сутки) процессы клеточного миогенеза протекают в условиях гипоксии вследствие разрушения микрососудов. Новообразование капилляров в зоне повреждения наблюдаются на 3-й сутки, затем идет формирование просвета и везикулярного аппарата эндотелиоцитов. Вероятно, длительное время процессы транскапиллярного обмена осуществляются за счет капилляров, расположенных в пограничной с участком повреждения зоне. В сохранившихся микрососудах отмечается обновлегше эндотелия, посредством миграции соседних клеток на обнаженные ба-зальные мембраны. В случае, если имеет место дегенерация эндотелиоцитов по типу моноцеллюлярного коагуляциошгого некроза, пик-нотические фрагменты клеток остаются заключенными в базальные мембраны. Процессы обновления и гибели эндотелия носят персисти-рующий характер, вследствие чего образуются капилляры, состоящие из циркулярно расположенных слоев дегенерирующих эндотелиоцитов и базальных мембран. Некробиотические изменения в эндотелии сопровождаются плазматическим пропитыванием стенок и завершаются шалинозом. Поврежденный эндотелий микрососудов становится площадкой для формирования микротромбов и эмболов. В результате многие морфологически неизменешше микрососуды заполнены мембранными комплексами из гемолизированных эритроцитов, кольцевидно скрученных фрагментов дегенерирующих клеток. В отдаленные сроки обнаруживались свежие очаги некрозов, которые не были прямо связаны с травмой. Изменения в сосудах свидетельствовали о том, что процессы посттравматической реваскуляризации ткани, не носят реабилитирующий характер. Сопровождающая эти процессы гипоксия становится одним из ведущих факторов, усиливающих дистрофические процессы в ткани, вызывая повреждения новообразованных мышечных волокон и нервных структур. Это позволило выделить по-

сттравматическую микроангиопатию в числе ведущих факторов в гене-зе поздних дистрофических расстройств.

5. В прогрессировашш патологического процесса важная роль принадлежит нарушению нервно-мышечных взаимодействий. После повреждения в мышце возникает денервационно-реиннервационный процесс. Вместе с тем, через месяц при сравнении нервных проводников сопоставимого диаметра наблюдалось уменьшение числа аксонов и разобщение их коллагеновыми фибриллами; прорастающие аксоны подвергали дегенерации. Часть внутримышечных нервов была представлена пустыми эпиневральными футлярами. В синаптических зонах число терминалей было уменьшено, преобладали денервационные процессы, характерным признаком которых было фагоцитирование как претерминальных веточек аксонов, так и терминалей в зоне синапса. Уменьшение количества аксонов в нерве, терминалей в зоне синапса свидетельствовало о снижении индекса иннервации ткани. В дальнейшем в мышечных волокнах четко определялись признаки ней-рогсгшой атрофии.

Обнаруженные в отдаленные сроки деструктивно-дегенеративные изменения в микрососудах нервов свидетельствуют о том, что дегенерация нервов частично была связана с повреждением их сосудов. Все это препятствовало восстановлению адекватных нервно-мышечных связей и свидетельствовало о том, что реиннервация в полном объеме не происходит. В основе этого могут лежать: во-первых, гибель части мотонейронов, вследствие ретроградной дегенерации аксонов; во-вторых, неблагоприятные условия для прорастания и выживания аксонов вследствие развития постгравматичсской микроангиопатии.

Нейрогенная атрофия мышечных волокон приводила к еще большему увеличению трансэндотелиального пути, который заметно увеличивался вследствие истончения мышечных волокон и увеличения толщины стенок сосудов. Удаление от капиллярного русла ухудшало условия трофического обеспечения волокон. Некрозы сопровождались макрофагальной реакцией, однако "поздние" макрофаги имели короткие цитоплазматические отростки, слабо развитый лизосомальный аппарат, что свидетельствовало о снижении их фагоцитарной функции. Вместе с тем, образование в ткани атипичных белковых комплексов, продуктов некроза нервных и мышечных волокон приводили к развитию аутоиммунных процессов, что в реплантированной скелетной

мышце может также способствовать прогрессированию патологического процесса наряду с другими вышеуказанными причинами.

Характер ультраструктурной организации проприорецепторов мышечных веретен в реплантированной конечности позволяет предполагать существенное ограшгчетше процессов восстановле1Шя адекватной функциональной активности рецепторов, вследствие повреждения чувствительных нервных окончаний.

Состояние расслабления обнаруженных экстрафузальных и ин-трафузальных волокон говорит о нерабочем состоянии рецептора.

Таким образом, неполное структурно-функциональное восстановление скелетных мышц после повреждения у взрослых половозрелых животных, обусловлено многими факторами и определяется не только ограничением регенераторных потенций мышечной ткани. Это цепь взаимообусловленных межклеточных и тканевых реакций, приводящая к тому, что постгравматический миогенез протекает в условиях нарушения сосудисто-тканевых и нервно-мышечных взаимодействий.

В то же время исследование показало высокие компенсаторные возможности сохранившихся структурных элементов мышечной ткани, которые долгое время обеспечивают функцию конечности, близкую к норме.

ВЫВОДЫ

1. Электрошюмикроскопическое исследование постравматиче-ского миогенеза выявило, что после тяжелой травмы и реплантации конечности скелетная мышца имеет иную, отличную от нормы, структурно-функциональную организацию с предпосылками прогрессиро-вания дистрофического процесса, вследствие нарушения нейротрофи-ческого обеспечения ткани.

2. После тяжелой травмы камбиальный резерв мышечной ткани -клетки-сателлиты - уменьшаются в числе в результате дегенеративных изменений в них, а также вследствие ограничения миобластического пути их дифференцировки и переходе на фибробластический путь.

3. В отличие от эмбрионального пути развития, после травмы формирующиеся из клеток-сателлитов миобласты и мышечные трубочки изначально имеют базальную мембрану, что может препятствовать их слиянию и образованию миосимпластов.

4. Внутриклеточный тип регенерации, свойственный мышцам половозрелых млекопитающих, в условиях постравматического миоге-неза характеризуется атипичным саркомерогенезом и в регенерирующих волокнах миофибриллы не формируют параллельные ряды.

5. После обширной травмы в очаге повреждения на ранних сроках имеет место восстановление капиллярной сети, как в результате восстановления поврежденных капилляров, так и образования их de novo, вместе с тем, дальнейшие этапы характеризуются многократным чередованием процессов гибели и обновления эвдотелиоцитов, в результате чего формируются неполноценная сеть, состоящая из капилляров с многослойными базальными мембранами.

6. После тяжелой травмы в мышцах снижается индекс иннервации вследствие уменьшения числа аксонов в нервных волокнах и числа терминалей в синаптических зонах; процесс миелинизации а также прорастания новых аксонов запаздывает по отношению к формированию мышечных трубочек и новообразованных мышечных волокон.

7. Мышечные веретена сохраняют относительную целостность, однако обнаруживаются признаки денервации интрафузальных мышечных волокон, в основном, за счет афферентного звена.

8. В отдалегагые сроки после травмы в интерстиции мышечной ткани появляются активированные плазматические клетки и макрофаги, что свидетельствует о включении в деструктивно-регенеративный процесс иммунологического компонента.

9. При формировании новой структурно-функциональной организации мышцы после тяжелой травмы основными причинами незавершенности регенераторных потенций являются: формирование и прогрессирование нейродистрофического процесса, развитие по-справматической микроангиопатии, угнетение миобластического пути дифференцировки клеток-сателлитов, нарушение саркомерогенеза, включение иммушгого компонента.

10. Показана принципиальная возможность скелетных мышц половозрелых млекопитающих к регенерации. Выявлены причины несовершенства регенераторного процесса в мышце и временная последовательность клеточных и тканевых реакций в мышечной ткани, что открывает возможность целенаправленной коррекции патологического процесса.

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Ультраструктурные исследования ранних этапов регенерации скелетной мышцы у половозрелых животных // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1986. - N 6. - С.757-759. Соавт.: О. М. Поздняков.

2. Ультраструктурная характеристика мышечной ткани при механическом повреждении // Актуальные проблемы заболевания и выздоровления. - М., 1981. - С. 32-34.

3. Роль различных компонентов мышечной ткани в регенераторном процессе // Актуальные проблемы заболевания и выздоровления. М., 1983. - С. 33-36. Соавг.: О. М. Поздняков.

4. Ультраструктурное исследование постгравматической регенерации мышечной ткани у половозрелых крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1983. - N 8. - С. 106-109.

5. Электронно-микроскопическое исследование регенерации капилляров в скелетной мышце после её механического повреждения // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1985. - N 7. - С. 111-114. Соавт.: О. М. Поздняков.

6. Особенности ультраструктурной организации сосудистой стенки в условиях нарушения нервно-мышечных воздействий. // Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 1988. - N 3. - С. 41-45. Соавт.: Н. С. Гурко, О. Я. Кауфман, О. М. Поздняков.

7. Особенности посттравматической дифференцировки клеток-сателлитов в скелетной мышце // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1988. -К 6. - С. 755-757. Соавт.: О. М. Поздняков.

8. К вопросу об участии базальных мембран в исходе постгравматической регенерации мышц // XIII Всесоюзн. конференция по электрогагой микроскопии. - 1988. Соавт.: О. М. Поздняков.

9. Роль сосудистого фактора в развитии дистрофических процессов в мышцах при тяжёлом травматизме конечностей // Структурно-функциональные единицы органов. Теоретические и прикладные аспекты. - Харьков., - 1989. - С. 26-28. Соавт.: Н. С. Гурко.

10. Нервно-мышечные взаимосвязи и структурно-функциональная организация мышц реплантированной конечности крыс // Структурно-функциональные единицы органов. Теоретические и прикладные аспекты. - Харьков., - 1989. - С. 68-70. Соавт.: О. М. Поздняков, Н. С. Гурко.

11. Пути дифференцировки постгравматических клеток-сателлитов // Стресс и патология опорно-двигательного аппарата. -Харьков., - 1989. - С. 124-126. Соавт.: Н. С. Гурко.

12. К анализу причин неполного структурно-фугасционального восстановления мышц при тяжёлом травматическом повреждении конечностей // Стресс и патология опорно-двигательного аппарата. -Харьков., - 1989. - С. 106-109. Соавт.: О. М. Поздняков, Н. С. Гурко.

13. Особенности течения денервационно-реиннервационных процессов в мышцах реплантированной конечности крыс // Тез. докл. 4 Всесоюзного съезда патофизиологов. Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. - Кишинев., - 1989. - Т. 1. - С. 118-119. Соавт.: Н. С. Гурко, Ю. В. Кипренский.

14. Особенности формирования двигательных нервов при выключении симпатических влияний в раннем онтогенезе // Тез. докл. 4 Всесоюзного съезда патофизиологов. Нарушение механизмов регуляции и их коррекция. - Кишинёв., - 1989. - Т. 1. - С. 115-116. Соавт.: Н. С. Гурко.

15. Структурно-функциональная организация мышц реплантированной конечности крыс //Патол. физиол. и эксперим. терапия. -1990. - N 6. - С. 25-30. Соавт.: Н. С. Гурко, 10. В. Кипренский, О. М. Поздняков.

16. Сосудистый фактор в патогенезе дистрофии мышц //Адаптационно- компенсаторные и восстановительные процессы в тканях опорно-двигательного аппарата. - Киев., - 1990. - С. 166-169. Соавт.: Ю. В. Кипренский, Н. С. Гурко.

17. Посттравматические микроангиопатии // Материалы научн. конф. ВМедА им. С. М. Кирова. Анатомно-физиологические и пато-морфологические аспекты микрохирургии и огнестрельной травмы. -Ленинград., - 1990. - С. 95-96. Соавт.: Н. С. Гурко, О. М. Поздняков.

18. Особенности течения регенераторных процессов в мышцах реплантированной конечности крыс // Бюл. эксперим. биол. и мед. -1990. - N 9. - С. 325-328. Соавт.: Ю. В. Кипренский, Н. С. Гурко, О. М. Поздняков.

19. Постгравматические микроангиопатии // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1991. - N 7. - С. 103. Соавт.: Н. С. Гурко.

20. Analysis of the complete structural and functional muscle restoration after heavy traumatic inyury of extremities // Constituent

Congress international society for Pathophysiology. Moscow, May, - 1991. -p. 73. Coauthor: N. S. Gurko, J. V. Kiprensky, О. M. Pozdnyakov.

21. Structural-functional organization of muscles in a replanted extremity // Constituent Congress international society for Pathophysiology. Moskow, May 28- June 1, - 1991. - p. 71. Coauthor: N. S. Gurko, J. V. Kiprensky, О. M. Pozdnyakov.

22. Нервно-мышечные веретёна в условиях реплантации и размозжённой травмы // 9-ая Всесоюзная школа-семинар. -Куйбышев., -

1991.

23. Анализ причин неполного структурно-функционального восстановления скелетных мышц после тяжёлого повреждения конечности (ультраструктурное исследование) // Патол. физиол. и эксперим. терапия. - 1991. - N 6. - С. 50-53. Соавт.: Н. С. Гурко, 10. В. Кипренский, О. М. Поздняков.

24. Хронизация патологического процесса в мышцах реплантата // Научн. конф. "Морфология раневого процесса". - Санкт-Петербург.

- 1992. Соавт.: Н. С. Гурко, Ю. В. Кипренский, О. М. Поздняков.

25. Мышечные веретёна в реплантировашгой конечности крыс // Научн. конф. "Морфология раневого процесса". - Санкт-Петербург. -

1992. Соавт.: Н. С. Гурко, Ю. В. Кипренский, О. М. Поздняков.

26. Ультраструктурное исследование мышечных веретён в условиях реплантации конечности // XIY Всесоюзн. конф. электронной микроскопии (биология и медицина). - Звенигород., - 1992. Соавт.: Н. С. Гурко, О. М. Поздняков.

27. Ультраструктурные особенности организации мышечных веретён в реплантированной конечности // Бюл. эксперим. биол. и мед.

- 1993. - N 4. - С. 432-436. Соавт.: Н. С. Гурко, О. М. Поздняков.

28. Патоморфологические признаки повреждения эндотелия капилляров при травме и реплантации скелетной мышцы // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1994. - N 10. - С. 378-384. Соавт.: Н. С. Гурко, 10. В. Кипренский, О. М. Поздняков.

29. Ультраструктурное выражение компенсаторно-деструктивных процессов клеточной поверхности эндотелиоцитов при травме скелетной мышцы // Бюл. эксперим. биол. и мед. - 1994. - N 8. - С.212-216. Соавт.: Н. С. Гурко, О. М. Поздняков.