Оценка роли полиморфных вариантов генов "эндотелиальной дисфункции" плода в развитии гестоза у матери

Михайлин, Евгений Сергеевич

Диссертации по медицине → Акушерство и гинекология

Автореферат и диссертация по медицине (14.00.01) на тему:Оценка роли полиморфных вариантов генов "эндотелиальной дисфункции" плода в развитии гестоза у матери

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Михайлин, Евгений Сергеевич Санкт-Петербург 2009 г.

Ученая степень: кандидата медицинских наук

ВАК РФ: 14.00.01

Автореферат диссертации по медицине на тему Оценка роли полиморфных вариантов генов "эндотелиальной дисфункции" плода в развитии гестоза у матери

МИХАИЛЖ] Евгений Сергеевич

ОЦЕНКА РОЛИ ПОЛИМОРФНЫХ ВАРИАНТОВ ГЕНОВ «ЭНДОТЕЛИАЛЬНОЙ ДИСФУНКЦИИ» ПЛОДА В РАЗВИТИИ ГЕСТОЗА У МАТЕРИ

14.00.01 - акушерство и гинекология 03.00.15 - генетика

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание учёной степени кандидата медицинских наук

Санкт-Петербург - 2009

003482636

Работа выполнена в Учреждении Российской академии медицинских наук Научно-исследовательском институте акушерства и гинекологии имени Д.О. Отта Северо-Западного отделения Российской академии медицинских наук

Научные руководители:

академик РАМН, заслуженный деятель науки РФ,

доктор медицинских наук, профессор Айламазян Эдуард Карпович доктор биологических наук, профессор Иващенко Татьяна Эдуардовна

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук

Ниаури Дарико Александровна Фетисова Ирина Николаевна

Ведущая организация: Военно-медицинская академия имени С.М. Кирова

Защита состоится в __ часов на заседании

диссертационного совета Д 001.021.01 при Научно-исследовательском институте акушерства и гинекологии имени Д.О. Отта СЗО РАМН (199034, Санкт-Петербург, Менделеевская линия, д.З)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ акушерства и гинекологии имени Д.О. Отта СЗО РАМН Автореферат разослан «_»_2009 г.

Учёный секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук

Кузьминых Татьяна Ульяновна

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Гестоз занимает лидирующие позиции среди патологии беременности и является одной из актуальных проблем современного акушерства. В последние годы частота этого заболевания во всем мире увеличивается и составляет от 7 до 22% (Кулаков В.И. и соавт.,

2005). В России частота гестоза растет из года в год и достигает 16-22% (Айламазян Э.К. и соавт., 2008). В структуре материнской смертности в РФ данная акушерская патология стабильно занимает 3 место (от 11,8 до 14,8%) (Савельева Г.М. и др., 1992), а каждый четвертый ребенок, родившийся от матери с гестозом, отстает в физическом развитии (Савельева Г.М., 1996; Кулаков В.И., 1998; Мурашко JI.E., 1999).

Вопросы этиологии, патогенеза, а также диагностики и патогенетической терапии этого заболевания до сих пор остаются недостаточно изученными.

В настоящее время существует более 40 теорий гестоза, однако его природа до последнего времени продолжает оставаться неясной. На сегодняшний день большинство ученых в мире пришли к выводу, что ключевым звеном патогенеза гестоза, определяющим его клинические проявления, является эндотелиальная дисфункция (Chappell L., Morgan Т.,

2006).

Многочисленные исследования указывают на то, что гестоз является генетически обусловленным заболеванием.

Согласно последним исследованиям генетическая составляющая данного заболевания определяет до 50% всех факторов, влияющих на развитие гестоза (Cnattingius S. et al., 2004).

Исследование генов, «функционально неполноценные» варианты которых могут приводить к развитию гестоза, в настоящее время основано на наиболее широко принятой гипотезе эндотелиальной дисфункции.

В настоящее время при изучении генетической предрасположенности к данной патологии, основное число работ посвящено исследованию роли полиморфных вариантов генов матери в развитии гестоза. В то же время роль полиморфизма генов плода в развитии заболевания изучена недостаточно.

Существуют разные мнения о механизмах генетической предрасположенности к гестозу, и вопрос относительно того, полиморфные варианты генов матери или плода в большей мере определяют развитие заболевания, остается открытым. На данную тему опубликованы лишь единичные работы, результаты которых указывают на необходимость дополнительных исследований.

Таким образом, выявление взаимосвязи между дисфункцией эндотелия и полиморфизмом генов, ответственных за его функционирование не только у матери, но и у ее плода, поможет приблизиться к пониманию роли генетического полиморфизма в патогенезе гестоза. Изучение генетической предрасположенности и определение генотипов «риска» позволит заблаговременно выявить пациенток с повышенным риском развития этого заболевания.

Цель работы состоит в оценке влияния полиморфных вариантов генов "эндотелиальной дисфункции" плода на развитие гестоза у матери.

Задачи исследования

1. Провести исследование частоты полиморфных вариантов генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml(Del) у беременных с гестозом и у беременных с физиологическим течением беременности.

рожденных от беременных с гестозом, и детей, родившихся от беременных с физиологическим течением беременности.

3. Провести сравнительный анализ частот аллелей и генотипов по генам HLA-G (DeHns 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) между группой беременных с гестозом, здоровыми беременными женщинами и их новорожденными.

4. Провести сравнительный анализ частот генотипов по генам HLA-G (DeWns 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml(Del) в зависимости от клинических проявлений гестоза.

5. Оценить роль рассматриваемых генов матери и плода в развитии гестоза.

Научная новизна и теоретическая значимость работы

Впервые изучены особенности аллельного полиморфизма генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) беременной женщины и ее плода при гестозе, а также проанализирована ассоциация аллельных вариантов изученных генов с тяжестью течения заболевания.

Впервые показаны достоверные отличия как между беременными с гестозом и здоровыми беременными, так и между их плодами по частотам аллельных вариантов ряда изученных генов и частотами сочетаний определенных генотипов в системе мать-плод. Впервые продемонстрирована ассоциация некоторых генотипов изученных генов матери и плода с определенными клиническими параметрами у больных с гестозом.

Практическая значимость работы

Анализ аллельного полиморфизма генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5

повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml(Del) беременной женщины можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития и тяжести течения гестоза при настоящей беременности. Анализ генетического полиморфизма генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне),NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml(Del) у новорожденного от беременной с гестозом, можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития гестоза при последующих беременностях от того же партнера. Основные положения, выносимые на защиту

1. Наличие генотипа D/D по гену АСЕ у плода увеличивает риск развития гестоза тяжелой и средней степени у матери.

2. Наличие генотипа 4а/4а по гену NOS3 как у матери, так и у плода увеличивает риск развития гестоза у матери. Наличие сочетания генотипов 4b/4b+4a/4b по гену NOS3 в системе мать-плод ассоциировано с развитием гестоза легкой степени. Наличие сочетания генотипов 4а/4а+4а/4а по гену NOS3 в системе мать-плод повышает риск развития гестоза тяжелой и средней степени.

3. Наличие генотипа Ins/Ins по гену HLA G у плода увеличивает риск развития гестоза у матери. Наличие сочетания генотипов Ins/Ins + Ins/Ins по гену HLA G в системе мать-плод увеличивает риск развития гестоза легкой степени.

4. Сочетание «нулевых» генотипов по генам GST Т1 и GST Ml достоверно чаще встречается у плодов, чем у их матерей при беременностях, протекающих с гестозом.

5. При наличии гестоза ДНК плода достоверно чаще проникает в кровоток матери.

6. Для беременных с наличием гестоза, родивших недоношенных детей, характерным является наличие генотипа матери 4а/4а по гену NOS3. Для

беременностей, протекавших с гестозом, при которых артериальная гипертензия возникала до 30 недель, характерным является наличие генотипа плода 4а/4а по гену NOS3.

7. Для беременных с гестозом при наличии нарушений в маточно-плацентарном кровообращении характерным является наличие генотипа матери и плода I/D по гену АСЕ и генотипа матери 4b/4b по гену NOS3.

Апробация и внедрение результатов работы в практику

Результаты работы были представлены на 2 и 3 региональных форумах "Мать и Дитя" (Сочи, 2008; Саратов, 2009), на Всероссийской научно-практической конференции «Амбулаторно-поликлиническая помощь -платформа женского здоровья» (Москва, 2009), на X Юбилейном всероссийском научном форуме «Мать и Дитя» (Москва, 2009) и на городской конференции, посвященной юбилею А.Я. Крассовского (BMA им. С.М. Кирова, Санкт-Петербург, 2008).

Основные положения диссертации внедрены в работу акушерского отдела и лаборатории пренатальной диагностики наследственных заболеваний человека НИИ акушерства и гинекологии имени Д.О. Отта СЗО РАМН.

По материалам диссертации опубликовано 5 работ, в том числе 1 - в ведущих рецензируемых журналах и изданиях, определенных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, клинической характеристики групп, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 180 источников, из них - 152 зарубежных. Диссертация иллюстрирована 52 таблицами и 15 рисунками.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ Материалы и методы исследования

В настоящей работе проведено обследование 145 беременных женщин и их новорожденных детей (всего 290 человек).

Все беременные наблюдались в отделениях НИИ акушерства и гинекологии имени Д.О. Отта.

Основную группу составили 77 женщин с наличием чистого гестоза, беременные одним плодом, без хронических заболеваний, а также их новорожденные дети.

Пациентки были разделены на 3 подгруппы: с гестозом легкой, средней и тяжелой степени тяжести по баллам в зависимости от распространенности отеков, уровня артериального давления и протеинурии, а также в зависимости от времени появления симптомов (Классификация Г.М. Савельевой и соавт., 2005).

Обследовано 17 пациенток с наличием чистого гестоза тяжелой степени, 16 пациенток с гестозом средней степени и 44 женщины с гестозом легкой степени.

Группу сравнения составили 68 здоровых беременных женщин без наличия гестоза и хронических заболеваний, а также их новорожденные дети.

Клинико-лабораторное обследование включало в себя клинический и биохимический анализы крови, общий анализ мочи, функциональные почечные пробы, ультразвуковое исследование почек.

Коагуляционное звено гемостаза оценивалось по протромбиновому времени, протромбиновому индексу, тромбиновому времени, активированному парциальному тромбопластиновому времени и содержанию фибриногена в крови.

Изучение тромбоцитарного звена гемостаза проведено по исследованию количества тромбоцитов капиллярной крови.

Для выявления бактериальной флоры применялись бактериоскопические и бактериологические методы.

Ультразвуковая фетометрия и показатели гемодинамики в системе мать-плацента-плод исследовались с помощью ультразвукового диагностического пробора «ALOKA 2000». Использовался конвексный трансабдоминальный датчик с частотой 5 МГц, работающий в импульсном режиме.

ДНК выделяли из лимфоцитов периферической крови матери и пуповинной крови новорожденного с помощью солевого метода. Полиморфные области генов исследовали методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Характеристика изученных аллельных вариантов генов и последовательности использованных олигопраймеров представлены в таблице 1.

Амплификацию проводили на программируемом термоциклере фирмы «ДНК-технология» (Москва). После окончания ПЦР специфичность амплификации проверяли методом электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ). Продукты амплификации разделяли в 6-10% неденатурирующем полиакриламидном геле, приготовленном на трис-боратном буфере (ТБЕ), в аппарате для вертикального электрофореза. ПААГ окрашивали водным раствором бромистого этидия и просматривали в ультрафиолетовом свете свете на трансиллюминаторе «Macrovue» («Pharmacia LKB», Великобритания).

Первичную обработку изображений проводили в программе Adobe Photoshop 7,0 (Adobe Systems Incorporated, США).

Статистический анализ полученных данных проводился с использованием программ Microsoft Excel 2003 (Microsoft Corporation, США) и STATISTICA v.6.0 (Statsoft Inc., Tulsa, США).

Таблица 1

Список олигонуклеотидных праймеров, использованных для

проведения ПЦР

Ген, локализац] Полиморфизм Структура олигопраймеров

HLA-G Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне F: 5' - GTGATGGGCTGTTTAAAGTGTCACC-3' R: 5' -GGA AGGA ATGC AGTTC AGC ATGA-3'

АСЕ (17q23) Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне 1-497 п.н. D-210 п.н. F: CTGGAGACCACTCCCATCCTTTCT-3" R: 5'- ATGTGGCCATCACATTCGTCAGAT-3'

NOS3 (7q35-36; 4 или 5 повторов 27 п.н. i 5 интроне 4а(4повтора) - 394 п.н. 4Ь(5повторов)-421 п.н. F: 5'- AGGCCCTATGGTAGTGCCTT-3' R: 5'- TCTCTTAGTGCTGTGGTCAC-3'

GSTT1 Del. F: 5'-ТТС СТТ ACT GGT ССТ САС АТС ТС-3' R: 5-ТСА CCG GAT CAT GGC CAG СА-3'

GSTM1 Del F: 5-GAA СТС ССТ GAA AAG СТА AAGС-3' R: 5'-GTT GGG СТС AAA TAT ACG GTG G-3

AMXY Х:104 п.н. Y:110 п.н. F: 5'-CCCTGGGCTCTGTAAAGAATAGTG-3' R: 5'-ATCAGAGCTTAAACTGGGAAGCTG-3'

Определение достоверности различий между сравниваемыми группами или подгруппами по частотам генотипов и аллелей исследуемых генов проводили с помощью критерия Фишера (Б) или хи-квадрат (%2) по стандартной формуле с учетом поправки Йетса для парных сравнений и поправки Бонферрони для множественных сравнений с контрольной группой.

Для оценки различий значений клинических и биохимических параметров между различными группами применялся и-критерий Манна-Уитни или ^критерий Стыодента для независимых выборок.

Значение р<0,05 принималось как статистически значимое.

Результаты исследования и их обсуждение

При анализе клинических характеристик беременных женщин средняя прибавка массы тела за беременность при всех степенях тяжести гестоза была достоверно выше, чем в группе сравнения (р<0,05). Систолическое АД при всех степенях гестоза было достоверно выше, чем в группе сравнения. В подгруппах с тяжелым гестозом (158,82±4,50 мм рт. ст.) и со средним гестозом (138,33±3,40 мм рт. ст.) оно было достоверно выше, чем в подгруппе с легким течением гестоза (129,77±1,34 мм рт. ст.) (р<0,05). Диастолическое АД было достоверно выше во всех подгруппах с гестозом, по отношению к группе сравнения, а в подгруппах с тяжелым течением гестоза (100,00±3,0б мм рт. ст.) и гестозом средней степени тяжести (90,94±1,95 мм рт. ст.) оно достоверно отличалось от подгруппы с легким течением гестоза (83,86±0,97 мм рт. ст.) (р<0,05). Количество белка в моче, по нашим данным, значимо различалось только между подгруппой с тяжелым течением гестоза (1,05±0,45 г/л) и подгруппой с легким течением гестоза (0,04±0,01 г/л) (р<0,05). Также значимые отличия в сроках появления протеинурии были обнаружены между подгруппой с тяжелым гестозом (28,78±2,43 нед.) и подгруппой с гестозом легкой степени (34,62±1,59 нед.) (Р<0,05).

При анализе показателей допплерометрии в системе мать-плацента-плод выявлены достоверные различия между систоло-диастолическим отношением в артерии пуповины в подгруппе с тяжелым гестозом (3,30±0,38) по отношению к группе сравнения (2,37±0,08) и подгруппе с легким гестозом (2,49±0,08).

В подгруппе с тяжелым течением гестоза срок родоразрешения был достоверно меньше (36,18±0,80 нед.) (преждевременно было родоразрешено 35% (6) женщин), чем в подгруппе с легким течением гестоза (38,84±0,20 нед.) и в группе сравнения (38,57±0,18 нед.) (р<0,05).

Средняя масса новорожденных в подгруппе с тяжелым гестозом была достоверно меньше (2867,65±258,24 гр.), чем в группе сравнения (3304,41±61,67 гр.) (р<0,05).

Средняя оценка новорожденных по шкале Апгар при гестозе тяжелой степени была достоверно ниже (6,71±0,41), чем в группе сравнения (7,72±0,07) (р<0,05).

В результате проведенного анализа результатов клинических параметров обследованных групп показано, что у беременных с гестозом имеется значительное ухудшение многих показателей гомеостаза в системе мать-плацента-плод, что приводит к менее благополучному исходу беременности для матери и плода по сравнению со здоровыми беременными. При нарастании тяжести гестоза отмечено достоверное снижение сроков родоразрешения, веса новорожденных и их оценки по шкале Апгар.

Общеизвестно, что в генезе развития гестоза важную роль играет нарушение инвазии трофобласта. При этом трофобласт несет на себе HLA антигены отцовского и материнского происхождения, а степень инвазии трофобласта в слизистую оболочку матки, помимо прочих факторов, определяется и уровнем экспрессии генов системы HLA. Так же велико влияние HLA антигенов на становление иммуносупрессорного статуса у матери, при нарушении которого создаются предпосылки для отторжения плода как чужеродного организма.

HLA G, один из антигенов гистосовместимости, продуцируемый только в клетках межворсинчатого трофобласта, защищает трофобласт от материнского иммунного ответа и способствует его инвазии в спиральные артерии. Один из полиморфных вариантов гена HLA G представляет собой инсерцию (Ins) или делецию (Del) 14 пар оснований, в экзоне 8 и ассоциирован с различным уровнем экспрессии гена.

При анализе частот генотипов по гену HLA G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне) у матерей в различных группах нами не найдено статистически

значимых различий. При анализе частот генотипов по гену HLA G выявлено повышение частоты генотипа I/I, который ассоциирован с более низким уровнем экспрессии гена, у плодов, от беременных с гестозом (24,3%), чем у плодов здоровых женщин (16,9%).

Отмечено повышение частоты сочетания Ins/Ins + Ins/Ins в системе мать-плод в подгруппе с легким гестозом (21,1%), по отношению к группе сравнения (9,7%).

Частоты сочетаний генотипов, при которых плод имел генотип Ins/Ins + Ins/Ins, при гестозе были выше, чем в группе сравнения (15,9% против 9,7% при сочетании Ins/Ins + Ins/Ins и 9,5% против 6,5% при сочетании Ins/Del + Ins/Ins).

Вероятно, при прогрессировании некоторых беременностей, низкая и/или абберантная экспрессия HLA-G, препятствуя успешной глубокой инвазии трофобласта в кровеносные сосуды матки в процессе имплантации, может рассматриваться как один из факторов риска развития гестоза. Полученные нами результаты свидетельствуют в пользу роли генетических особенностей иммунологического статуса плода в развитии гестоза у матери.

Ангиотензин-превращающий фермент является важнейшим регулятором кровяного давления, являясь одним из ключевых звеньев поддержания равновесия между факторами вазоконстрикции и вазодилатации, и, следовательно, регуляции сосудистого тонуса. Функционально значимый полиморфизм гена представлен инсерцией (I) или делецией (D) Alu-повтора, состоящего из 287 пар оснований, в 16 интроне. Уровень АСЕ в сыворотке у здоровых людей гомозиготных по D аллели, почти в два раза выше, чем у гомозиготных по I аллели и имеет среднее значение у гетерозигот - I/D генотип.

При анализе частот генотипов по гену АСЕ (Del/ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне) у матерей в различных группах не найдено статистически значимых различий.

Среди плодов частота генотипа D/D по гену АСЕ, ассоциированного с высоким уровнем ангиотензин-превращающего фермента, была самая низкая в группе сравнения (38,7%).

При анализе частот различных сочетаний генотипов по гену АСЕ в системе мать-плод отмечено повышение частоты сочетания Ins/Ins + Ins/Ins у больных в группе с гестозом в целом (15,0%) и в подгруппе с легким гестозом (18,9%) по отношению к группе сравнения (6,7%).

Оксид азота (N0) является важным биологическим медиатором, участвуя в реализации вазодилатации, нейротрансмиссии, снижении агрегации тромбоцитов, реакциях иммунной системы, регуляции тонуса гладкой мускулатуры, и т. д.

В организме N0 синтезируется из аминокислоты L-аргинин в процессе реакции, катализируемой ферментом NO-синтазой (NOS). В плаценте присутствует преимущественно эндотелиальная NOS (ген N0S3).

Один из полиморфных вариантов гена N0S3 представлен двумя аллелями: аллель 4Ь, в котором имеются 5 повторяющихся фрагментов по 27 п.о. в интроне 5, и аллель 4а, в котором 4 таких повтора. Генотипу 4а/4а соответствует минимальный уровень базального N0. У людей с генотипом 4b/4b уровень N0 в два раза выше, гетерозиготы занимают промежуточное значение по выработке данного биологическим медиатора.

При анализе частот генотипов по гену N0S3 (4 или 5 повторов по 27 п.н. в 5 интроне) у матерей в различных группах не найдено статистически значимых различий.

В целом, частота генотипа 4а/4а гена N0S3 во всех группах с гестозом была выше, чем в группе сравнения как среди матерей, так и среди плодов.

Сочетание генотипов 4a/4b+4a/4b по гену NOS3 в системе мать-плод в группе сравнения встречалось достоверно чаще, чем в группе с гестозом (26,4% против 9,8%) (р<0,05).

Сочетание 4b/4b+4a/4b в группе с гестозом в целом и в подгруппе с легким гестозом встречалось достоверно чаще, чем в группе сравнения (22,9% и 22,5%, соответственно, против 5,7%) (р<0,05).

Сочетание 4а/4а+4а/4а в парах мать-плод чаще было отмечено в группе с тяжелым гестозом (8,33%), чем в группе сравнения (1,82%).

Можно предположить, что в регуляции продукции оксида азота в равной степени важную роль играют полиморфные варианты гена NOS3 как матери, так и ее плода.

В настоящее время не вызывает сомнений роль оксидативного стресса в возникновении дисфункции эндотелия при гестозе. Глутатионопосредованная детоксикация играет существенную роль в обеспечении устойчивости клеток к перекисному окислению липидов и свободно-радикальному окислению. Протяженные делеции в генах GST Т1 и GST Ml приводят к образованию так называемых нулевых аллелей и, как следствие - отсутствию соответствующих ферментов.

Сравнительный анализ частот генотипов по генам GST T1 (Del/Del (0/0)) и GST Ml (Del/Del (0/0) ) выявил, что частоты нулевых генотипов GST Т1 0/0 и GSTM 0/0 у матерей несколько выше в группе сравнения (37,7% и 42,6%) по отношению к группе с гестозом (25,4% и 27,1% соответственно). Среди плодов частоты нулевых генотипов GST Т1 0/0 и GST Ml 0/0 также были выше в группе сравнения (36,9% и 49,2%), чем в группе с гестозом (31,3% и 31,3%).

При анализе частот сочетаний генотипов по генам GST Т1 и GST Ml у беременных женщин было выявлено достоверное снижение частоты сочетаний нулевых генотипов в группе с гестозом в целом по отношению к группе сравнения (3,4% и 19,7% соответственно (р<0,01) и в группе с легким

течением гестоза также по отношению к группе сравнения (2,6% и 19,7% соответственно (р<0,05). У плодов также отмечена тенденция к снижению частоты сочетаний нулевых генотипов в группе с гестозом (16,4%) по отношению к группе сравнения (23,1%).

Важно отметить, что частота сочетаний нулевых генотипов в группе с гестозом была достоверно выше у плодов по сравнению с их матерями (16,4% у плодов и 3,4% у матерей) (р<0,01), тогда как в группе сравнения этих отличий найдено не было (рис. 1 и 2).

В настоящее время в литературе существуют данные о том, что при гестозе в результате ишемии плаценты усиливается апоптоз клеток трофобласта, что ведет к повышенному проникновению плодового генетического материала в кровоток матери (Огогсо М. е! а1., 2006).

Для проверки гипотезы проникновения плодового материала в материнский кровоток мы провели модельный эксперимент с определением частоты встречаемости гомологичной последовательности У хромосомы в кровотоке женщин, родивших мальчиков.

Из группы с гестозом и группы сравнения были отобрано 48 образцов ДНК женщин, которые родили мальчиков. Контрольную группу составили 20 образцов ДНК женщин, родивших девочек.

Мужской пол плода определялся по наличию как У специфичной, так и X специфичной последовательности У/Х гомологичного региона амелогенинового гена.

Нами выявлено достоверное повышение частоты проникновения фетальной ДНК в кровоток матери у беременных с гестозом (72,73%) по отношению к группе сравнения (19,23%). По всей видимости, повышение проницаемости синцитиотрофобласта при гестозе может приводить к поступлению в кровоток матери не только биологически активных веществ плацентарного происхождения, но и иммунологически чужеродного для матери генетического материала плода.

Рисунок 1. Частоты сочетаний генотипов по генам GST Т1 и GST Ml у беременных с гестозом различной степени тяжести и в группе сравнения * - р<0,05 по отношению к соответствующему показателю группы сравнения **- р<0,01 по отношению к соответствующему показателю группы сравнения

Рисунок 2. Частоты сочетаний генотипов по генам GST Т1 и GSTM1

у плодов от беременностей с гестозом различной степени тяжести и в группе сравнения

Далее, для учета возможной ассоциации аллельных вариантов исследуемых генов с патогенетически значимыми клиническими признаками, определяющими течение гестоза, нами был проведен анализ клинических показателей у больных с различными генотипами по исследуемым генам (табл. 2 и 3).

Следует отметить, что "неблагоприятные" функциональные варианты генов АСЕ и N053 достоверно чаще (р<0,05) встречались у матерей (64,29% против 30,0% и 14,29% против 0%, соответственно) и плодов (64,29% против 43,14% и 15,38% против 1,72%, соответственно) при наличии физиологической прибавки массы тела, по сравнению с группой с патологической прибавкой массы.

По всей видимости, продукты вышеуказанных генов не оказывают существенного влияния на механизм формирования отеков при гестозе.

Для беременных с наличием гестоза, родивших недоношенных детей, характерным является наличие генотипа матери 4а/4а по гену N083, ассоциированного с минимальным количеством N0 в кровотоке (20,0% против 6,42%). Для беременностей, протекавших с гестозом, при которых артериальная гипертензия возникала до 30 недель, характерным является наличие генотипа плода 4а/4а по гену N053 (22,20% против 3,13%).

Для беременных с гестозом при наличии нарушений в маточно-плацентарном кровообращении характерным является генотип матери 4Ь/4Ь по гену N053.

При отсутствии же этих нарушений, напротив - достоверно чаще отмечено наличие генотипа матери и плода 1/Е) по гену АСЕ (табл. 2 и 3). Можно предположить, что на маточно-плацентарный кровоток оказывают влияние не только вазоактивные вещества, вырабатываемые в организме матери, но и некоторые продукты плацентарного происхождения.

Таблица 2

Частоты встречаемости генотипов по исследуемым генам у беременных в подгруппах с разными клиническими

параметрами при гестозе

Клинический HLAG 1 АСЕ I NOS3 1 GSTT1 1 GST Ml

Параметр 1Л I® D/D И I/D D/D 4а/4а 4а/4Ь 4Ь/4Ь + 0/0 + 0/0

ОПВ, кг Меньше 12 13,33 73,33 13,33 14,29 21,43 64,29 14,29 14,29 71,43 90,00 10,00 60,00 40,00

Больше 12 31,91 71,93 1,75 22,00 48,00 30,00 0 10,00 90,00 97,73 2,27 97,62 2,38

АД систол.. Меньше 150 25,00 53,85 21,15 16,00 36,00 48,00 8,00 26,00 66,00 70,21 29,79 74,47 25,53

мм рт ст,- Больше 150 16,67 72Д2 11,11 21,43 42,86 35,71 7,14 7Д4 85,71 91,67 833 58,33 41,67

АД диаст. Меньше 95 23,12 56,60 18,87 17,65 33,33 49,02 5,00 21,67 56,67 7234 27,66 7234 27,66

мм .рт.ст. Больше 95 17,65 64,71 17,65 15,38 53,85 30,77 14,29 7,14 78,57 83,33 16,67 57,14 42,86

Срок появления До 30 0 62,50 37,5 12,50 25,00 62,50 12,50 12,50 75,00 8333 16,67 57,14 42,86

гипертензии, нед. После 30 38,46 46,15 15,38 8,70 52,17 39,13 0 26,09 73,91 71,43 28,57 71,43 2837

Меньше 0,132 г/л 26,00 56,00 18,00 18,37 34,69 46,94 8,33 25,00 66,67 73,91 26,09 6739 32,61

Протеинурия, г/д Больше 0,132 i/л 17,65 58,82 23,53 15,38 38,46 46,15 14,29 7,14 78,57 80,00 20,00 90,00 10,00

СДОАП Меньше 3,0 29,54 47,73 2,27 15,38 33,33* 51,28 12,50 27,50 60,00 78,95 21,05 84,21 15,79

Больше 3,0 14,29 57,14 28,57 20,00 0 80,00 16,67 50,00 3333 100,00 0 100,00 0

Меньше 2,0 36,36 54,55 9,09 9,09 54,55 36,36 30,00 30,00 40,00 80,00 20,00 100,00 0

СДО ПМА Больше 2,0 25,00 46,15 34,62 20,83 50,00 29,17 8,00 16,00 76,0+ 79,17 20,83 79,70 20,83

Меньше 2,0 18,75 37,50 43,75 7,143 5,71 57,14 6,25 31,25 62,50 85,71 14,29 78,57 21,43

СДОЛМА Больше 2,0 38,10 52,38 9,52 27,78 33,33 38,89 22Д2 11,11 66,67 78,95 21,05 89,47 10,53

Срок До 37 0 100,00 0 14,29 28,57 57,14 20,00$ 20,00 60,00 100,00 0 100,00 0

нел. После 37 20,63 33,97 23,40 21,73 23,91 54,35 6,45 19,05 73,02 72,73 27,27 58,46 30,91

Вес, грамм Меньше 2500 16,67 83,33 0 12,50 37,50 50,00 28,57 14,29 57,14 80,00 20,00 100,00 0

Больше 2500 22,22 57,14 20,63 17,24 38,60 39,68 4,48 22,81 71,93 74,07 25,93 66,67 33,33

Рост; см. Меньше 45 0 100,00 0 33,33 0 66,67 0 100,00 0 100,00 0 100,00 0

Больше 45 25,00 55,88 19,12 19,61 47,06 52,94 8,20 19,67 72,13 73,68 26,32 85,11 29,82

Алгар Ниже 7 0 100,00 0 25,00 25,00 50,00 0 33,33 66,67 100,00 0 50,00 50,00

7 и выше 24,24 56,06 19,70 16,67 38,33 45,00 8,40 21,31 70,49 73,68 2632 71,93 28,07

* -р<0,05 — по отношению к подгруппе с нарушенными кровотоками в АП

+-р<0,05 - по отношению к подгруппе с нормальными кровотоками в ПМА # -р<0,05 — по отношению к подгруппе со сроком родоразрешения после 37 недель

Таблица 3

Частоты встречаемости генотипов по исследуемым генам у плодов в подгруппах с разными клиническими параметрами

при гестозе

Клинический Параметр

HLA G,% АСЕ,% NOS3,% GST Т1,% GST М1,%

1Л К> D/D 1/1 I/D D/D 4а/4а 4а/4Ь 4Ь/4Ь + 0/0 + 0/0

ОПВ, кг Меньше 12 16,67 41,67 41,67 14,29 21,43 64,29 15,38 23,08 61,54 63,64 3636 63,64 36,36

Больше 12 25,45 52,73 21,82 17,65 39,22 43,14 1,72 36,21 62,07 73,08 26,92 66,67 33,33

АД систол., мм рт.ст Меньше 150 27,45 50,98 21,57 15,38 36,54 48,08 3,64 34,55 61,82 63,46 36,54 71,15 28,85

Больше 150 17,65 47,06 35,29 20,00 40,00 40,00 6Д5 31,25 62,5 85,71 14,29 41,86 57,15

АДднаст., мм .рт.ст. Меньше 95 20,00 52,73 24,45 18,52 33,33 48,15 1,72 37,93 60,35 63,64 36,36 67,27 32,73

Больше 95 21,43 35,71 42,86 83,30 50,00 41,67 15,38 15,38 69,23 90,91 9,09 54,55 45.45

Срок появления пшертензии, нед. До 30 14,29 42,86 42,85 0 37,50 62,5 22,2* 22,2 55,56 100 0 71,43 28,57

После 30 28,57 50,85 25,42 21,57 41,18 56,87 3,13 35,94 60,94 64,41 35,59 64,41 35,59

Протеинурия, г/л Меньше 0,132 г/л 28,57 51,02 20,41 18,75 35,42 45,83 1,92 34,62 63,46 63,83 36,17 70,21 29Д9

Больше 0,132 г/л 15,72 47,37 36,84 10,53 42,11 47,37 10,53 31,58 57,89 28,95 21,05 52,63 47,37

СДОАП Меньше 3,0 34,29 48,57 17,14 17,14 40,00 42,86 7,69 30,77 61,54 77,14 22,86 71,43 28,57

Больше 3,0 33.33 33,33 3333 0 37,5 62^5 0 50,00 50,00 50,00 50,00 50,00 50,00

СДОПМА Меньше 2,0 28,57 50,00 21,43 22Д2 53,85$ 29,63 3,45 31,03 65,52 88,00 12,00 68,00 32,00

Больше 2,0 44,44 44,44 11,12 7,14 14,29 57,14 20,00 30,00 50,00 72,73 27,27 63,64 36,36

СДОЛМА Меньше 2,0 23,53 29,41 47,06 7,14 57,14 35,71 5,56 27,78 66,67 93,33 6,67 73,33 26,67

Больше 2,0 10,53 52,63 36,84 22,73 27,27 50,00 7,69 26,92 46,15 71,43 28,57 61,90 38,1

Срок Родоразрешения ,нед. До 37 28,57 28,57 42,86 0 50,00 50,00 20,00 80,00 0 80,00 20,00 60,00 40,00

После 37 25,81 51,61 22,58 18,03 38,07 45,90 3,03 36,36 60,61 67,21 32,79 65,57 34,43

Вес, грамм Меньше 2500 12,50 50,00 37,50 0 62,50 37,5 12,50 25,00 62,50 87,50 12,50 50,00 50,00

Больше 2500 23,33 50,00 27,67 18,64 33,90 47,46 3,13 34,38 62,50 67,24 32,76 67,24 32,76

Рост, см. Меньше 45 0 66,67 33,33 0 33,33 66,67 0 50,00 50,00 100 0 33,33 66,67

Больше 45 15,56 51,11 33,33 17,19 37,50 45,31 4,35 33,33 62^2 66,67 3333 66,67 3333

Апгар Ниже 7 50,00 0 50,00 0 25,00 75,00 0 0 100 66,67 33,33 33,33 66,67

7 и выше 27,78 44,44 27,78 17,46 38,10 44,44 4,35 34,78 60,87 68,25 31,75 66,67 3333

*-р<0,05 — по отношению к подгруппе с появлением гипертензии после 30 недель #-р<0,05 — по отношению к подгруппе с нарушенными кровотоками в ПМА

Среди детей, родившихся с массой тела менее 2500 грамм, частота встречаемости сочетаний нулевых генотипов по генам GST Т1 и GST Ml была выше (33,33%), чем среди детей, родившихся с массой больше 2500 грамм (15,52%). Кроме того, среди детей, родившихся с оценкой по шкале Апгар меньше 7, частота сочетаний нулевых генотипов по генам GST Т1 и GST Ml также была выше (33,33%), чем среди детей, родившихся с оценкой по шкале Апгар выше 7 (14,29%), что может свидетельствовать в пользу низкой толерантности плода к оксидативному стрессу при наличии у него сочетания нулевых генотипов по генам GSTT1 и GST Ml.

Анализ клинической картины и ассоциации полиморфизма генов «эндотелиальной дисфункции» с патогенетически значимыми признаками гестоза показал, что продукты определенных аллельных вариантов генов HLA-G (Ins), ACE (D), NOS3 (4а), GST ТЦ0/0), GST Ml (0/0) играют существенную роль в развитии и прогрессировании заболевания.

Полиморфные варианты генов «эндотелиальной дисфункции» матери, играющие определенную роль в развитии гестоза, хорошо известны. Роль полиморфизма генов «эндотелиальной дисфункции» плода в этом процессе изучена существенно хуже.

Тем не менее, сегодня становится очевидным, что продукты генов как матери, так и плода способствуют прогрессированию ранее существовавшей или возникновению первичной эндотелиальной дисфункции и последующему развитию клиники гестоза.

Не вызывает сомнений, что некоторые продукты плацентарного и плодового происхождения могут проникать в кровоток матери, вызывать дисбаланс между вазоактивными веществами и функциональные расстройства эндотелия.

По всей видимости, соединение материнского и плацентарного путей патогенеза гестоза происходит в завершающей фазе сниженной плацентарной перфузии, на уровне общего механизма эндотелиальной

дисфункции, причем комбинация неблагоприятных материнских и плодовых факторов является наиболее разрушительной.

Дальнейшие комплексные исследования роли полиморфных вариантов генов матери и плода необходимы для подтверждения их важного значения в развитии эндотелиальной дисфункции, возникновении и прогрессировании гестоза.

ВЫВОДЫ

1. На основании проведенного клинико-лабораторного исследования установлено, что возникновение и прогрессирование гестоза зависит не только от особенностей генотипа матери, но и от особенностей генотипа ее плода.

2. Наличие генотипа 4а/4а по гену NOS3 как у матери, так и у плода, а также наличие генотипа Ins/Ins по гену HLA G у плода увеличивает риск развития гестоза. Наличие генотипа D/D по гену АСЕ у плода, а также наличие сочетания генотипов 4а/4а+4а/4а по гену NOS3 в системе мать-плод увеличивает риск развития гестоза тяжелой и средней степени у матери.

3. При изучении сочетаний «нулевых генотипов» по генам GST Т1 и GSTM1, выявлена их в 5 раз большая частота встречаемости у плодов, чем у их матерей, беременность которых осложнилась гестозом.

4. При сопоставлении клинических проявлений гестоза с генетическим полиморфизмом генов «эндотелиальной дисфункции» выявлена ассоциация определенных аллельных вариантов генов «эндотелиальной дисфункции» с ранним возникновением артериальной гипертензии, нарушениями в маточно-плацентарном кровотоке и преждевременными родами.

5. На основании проведенных исследований доказано, что при гестозе проникновение ДНК плода в кровоток матери происходит в 4 раза чаще, чем при физиологически протекающей беременности.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Рекомендуется проведение анализа генетического полиморфизма генов «эндотелиальной дисфункции» в качестве прогностического теста для оценки риска развития гестоза при последующих беременностях от того же партнера в условиях женских консультаций и отделений патологии беременности.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Михайлин, Е.С. Исходы беременности у женщин с тяжелыми формами чистого позднего гестоза / Михайлин Е.С. // Материалы II регионального научного форума «Мать и Дитя». - Сочи, 2008. - С. 56.

2. Михайлин, Е.С. Анализ нулевых вариантов генов GST Т1 и GST Ml у женщин с гестозом и их новорожденных детей / Михайлин Е.С., Иващенко Т.Э. // Материалы III регионального научного форума «Мать и Дитя».-Саратов,2009.-С. 180-181.

3. Михайлин, Е.С. Оценка влияния полиморфных вариантов гена HLA G беременной женщины и ее плода на течение гестоза / Михайлин Е.С., Иващенко Т.Э. // Материалы Всероссийской научно-практической конференции «Амбулаторно-поликлиническая практика - платформа женского здоровья». - М.,2009. - С. 114.

4. Михайлин, Е.С. Роль полиморфных вариантов гена HLA G плода в развитии гестоза у матери / Михайлин Е.С., Иващенко Т.Э., Айламазян Э.К. // Журнал акушерства и женских болезней. - 2009. - Том LVIII, Вып. 2.-С. 4-11.

5. Михайлин, Е.С. К вопросу о проникновении ДНК плода в кровоток матери при гестозе / Михайлин Е.С., Иващенко Т.Э. // Материалы X Юбилейного всероссийского научного форума «Мать и Дитя». -М.,2009.-С. 113.

Отпечатано методом оперативной полиграфии

в ООО "ЭлекСис" Санкт-Петербург, ул. Моисеенко, д. 10. Формат 60x84 1/16. Тираж 100 экз.

Оглавление диссертации Михайлин, Евгений Сергеевич :: 2009 :: Санкт-Петербург

ОГЛАВЛЕНИЕ.

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

1 .ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Этиология и патогенез гестоза.

1.2. Классификация гестоза.

1.3. Формирование представлений о генетической природе гестоза.

1.4. Генетические факторы, связанные с развитием гестоза.

1.4.1. Гены главного комплекса гистосовместимости.

1.4.2. Гены цитокинов и ростовых факторов.

1.4.3. Гены, продукты которых участвуют в регуляции артериального давления.

1.4.3.1. Ген ангеотензин-превращающего фермента.

1.4.4. Гены свертывающей системы крови.

1.4.5. Гены NO-синтетаз.

1.4.6. Гены детоксикации ксенобиотиков.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Обследуемые группы.

2.2. Клинико-лабораторное обследование.

2.3. Молекулярно-биологическое исследование.

2.3.1. Экстракция геномной ДНК из лимфоцитов периферической крови.

2.3.2. Проведение полимеразной цепной реакции.

2.3.3. Электрофорез и визуализация результатов.

2.3.4. Математические методы анализа.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ.

3.1 Клиническая характеристика групп.

3.2. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов по исследуемым генам у беременных и их плодов от беременных с гестозом и в группе сравнения.

3.2.1.Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов по гену HLA G у беременных и их плодов от беременных с гестозом и в группе сравнения.

3.2.2. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов по гену АСЕ у беременных и их плодов от беременных с гестозом и в группе сравнения.

3.2.3. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов по гену NOS3 у беременных и их плодов от беременных с гестозом и в группе сравнения.

3.2.4. Сравнительный анализ частот аллелей и генотипов по генам GSTT1 и GSTM1 у беременных и их плодов от беременностей с гестозом и в группе сравнения.

3.3. Сравнительный анализ частот встречаемости генотипов матери по исследуемым генам в подгруппах с различными клиническими характеристиками гестоза.

3.4. Сравнительный анализ частот встречаемости генотипов плода по исследуемым генам в подгруппах с различными клиническими характеристиками гестоза.

3.5.Определение фетальной ДНК в кровотоке матери.

4. ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В ПРАКТИКУ.

Введение диссертации по теме "Акушерство и гинекология", Михайлин, Евгений Сергеевич, автореферат

Актуальность проблемы. Гестоз занимает лидирующие позиции среди патологии беременности и является одной из актуальных проблем современного акушерства.

В последние годы частота этого заболевания во всем мире увеличивается и составляет от 7 до 22% (Кулаков В.И. и соавт., 2005). В России частота гестоза растет из года в год и достигает 16-22% (Айламазян Э.К. и соавт., 2008). В структуре материнской смертности в РФ данная акушерская патология стабильно занимает 3 место (от 11,8 до 14,8%) (Савельева Г.М. и др., 1992), а каждый четвертый ребенок, родившийся от матери с гестозом, отстает в физическом развитии (Савельева Г.М., 1996; Кулаков В.И., 1998; Мурашко Л.Е., 1999).

Вопросы этиологии, патогенеза, а также диагностики и патогенетической терапии этого заболевания до сих пор остаются недостаточно изученными. В настоящее время существует более 40 теорий гестоза, однако его природа до последнего времени продолжает оставаться неясной. На сегодняшний день большинство ученых в мире пришли к выводу, что ключевым звеном патогенеза гестоза, определяющим его клинические проявления, является эндотелиальная дисфункция (Chappell L., Morgan Т., 2006). Многочисленные исследования указывают на то, что гестоз является генетически обусловленным заболеванием. Согласно последним исследованиям, генетическая составляющая данного заболевания может составлять до 50% всех факторов, влияющих на развитие гестоза (Cnattingius S. et al., 2004). Исследование генов, «функционально неполноценные» варианты которых могут приводить к развитию гестоза, в настоящее время основано на наиболее широко принятой гипотезе эндотелиальной дисфункции. В настоящее время при изучении генетической предрасположенности к данной патологии, основное число работ посвящено исследованию роли полиморфных вариантов генов матери в развитии гестоза. В то же время роль полиморфизма генов плода в развитии заболевания изучена недостаточно. Существуют разные мнения о механизмах генетической предрасположенности к гестозу и вопрос относительно того, полиморфные варианты генов матери или плода в большей мере определяют развитие заболевания, остается открытым. На данную тему опубликованы лишь единичные работы, результаты которых указывают на необходимость дополнительных исследований. Таким образом, выявление взаимосвязи между дисфункцией эндотелия и полиморфизмом генов, ответственных за его функционирование, не только у матери, но и у ее плода, поможет приблизиться к пониманию роли генетического полиморфизма в патогенезе гестоза. Изучение генетической предрасположенности и определение генотипов "риска" позволит заблаговременно выявить пациенток с повышенным риском развития этого заболевания.

Достижение этой цели предусматривало решение следующих задач:

1. Провести исследование частоты полиморфных вариантов генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) у беременных с гестозом и у беременных с физиологическим течением беременности.

2. Выявить частоты полиморфных вариантов генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) у детей, рожденных от беременных с гестозом, и детей, родившихся от беременных с физиологическим течением беременности.

3. Провести сравнительный анализ частот аллелей и генотипов по генам HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) между группой беременных с гестозом, здоровыми беременными женщинами и их новорожденными.

4. Провести сравнительный анализ частот генотипов по генам HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) в зависимости от клинических проявлений гестоза.

5. Оценить роль рассматриваемых генов матери и плода в развитии гестоза.

Научная новизна и теоретическая значимость работы.

Впервые показаны достоверные отличия, как между группой беременных с гестозом и группой сравнения, так и между их плодами по частотам аллельных вариантов ряда изученных генов и частотами сочетаний определенных генотипов в системе мать-плод. Впервые продемонстрирована ассоциация некоторых генотипов изученных генов матери и плода с определенными клиническими параметрами у больных с гестозом.

Практическая значимость работы.

Анализ аллельного полиморфизма генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) беременной женщины можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития и тяжести течения позднего гестоза при настоящей беременности. Анализ генетического полиморфизма генов HLA-G (Del/Ins 14 п.н. в 8 экзоне), АСЕ (Del/Ins Alu-повтора 287 п.н. в 15 интроне), NOS3 (4 или 5 повторов 27 п.н. в 5 интроне), GST Tl(Del), GST Ml (Del) у новорожденного ребенка, рожденного от беременной с гестозом, можно рекомендовать в качестве прогностического теста для оценки риска развития гестоза при последующих беременностях от того же партнера.

Основные положения, выносимые на защиту.

2. Наличие генотипа 4а/4а по гену NOS3, как у матери, так и у плода увеличивает риск развития гестоза у матери. Наличие сочетания генотипов 4b/4b+4a/4b по гену NOS3 в системе мать-плод ассоциировано с развитием гестоза легкой степени тяжести. Наличие сочетания генотипов 4а/4а+4а/4а по гену NOS3 в системе мать-плод повышает риск развития гестоза тяжелой и средней степени тяжести.

4. Сочетание "нулевых" генотипов по генам GST Т1 и GST Ml достоверно чаще встречается у плодов, чем у их матерей при беременностях, протекающих с гестозом.

5. При наличии гестоза ДНК плода достоверно чаще проникает в кровоток матери.

6. Для беременных с наличием гестоза, родивших недоношенных детей, характерным является наличие генотипа матери 4а/4а по гену NOS3. Для беременностей, протекавших с гестозом, при которых артериальная гипертензия возникала до 30 недель, характерным является наличие генотипа плода 4а/4а по гену NOS3.

7. Для беременных с гестозом, при наличии нарушений в маточно-плацентарном кровообращении, характерным является наличие генотипа матери и плода I/D по гену АСЕ и генотипа матери 4b/4b по гену NOS3.

Апробация и внедрение результатов работы в практику.

Результаты работы были представлены на 2 и 3 региональных форумах "Мать и Дитя" (Сочи, 2008; Саратов, 2009), на Всероссийской научно-практической конференции "Амбулаторно-поликлиническая помощь - платформа женского здоровья" (Москва, 2009), на X Юбилейном всероссийском научном форуме "Мать и Дитя" (Москва, 2009).

Диссертация апробирована на научном семинаре акушерского отдела НИИ акушерства и гинекологии имени Д.О. Отта СЗО РАМН и на городской конференции, посвященной юбилею А.Я. Крассовского (ВМА им. С.М. Кирова).

По материалам диссертации опубликовано 5 работ, в том числе 1 - в ведущих рецензируемых научных журналах, определенных ВАК РФ.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа изложена на 150 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, клинической характеристики групп, результатов и их обсуждения, выводов и списка литературы. Библиографический указатель включает 180 источников, из них 152 зарубежный. Диссертация иллюстрирована 52 таблицами и 15 рисунками.

Заключение диссертационного исследования на тему "Оценка роли полиморфных вариантов генов "эндотелиальной дисфункции" плода в развитии гестоза у матери"

выводы

2. Наличие генотипа 4а/4а по гену NOS3, как у матери, так и у плода, а также наличие генотипа Ins/Ins по гену HLA G у плода увеличивает риск развития гестоза. Наличие генотипа D/D по гену АСЕ у плода, а также наличие сочетания генотипов 4а/4а+4а/4а по гену NOS3 в системе мать-плод увеличивает риск развития гестоза тяжелой и средней степени у матери.

3. При изучении сочетаний "нулевых генотипов" по генам GST Т1 и GST Ml, выявлена их в 5 раз большая частота встречаемости у плодов, чем у их матерей, беременность которых осложнилась гестозом.

4. При сопоставлении клинических проявлений гестоза с генетическим полиморфизмом генов "эндотелиальной дисфункции" выявлена ассоциация определенных аллельных вариантов генов "эндотелиальной дисфункции" с ранним возникновением артериальной гипертензии, нарушениями в маточно-плацентарном кровотоке и преждевременными родами.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ВНЕДРЕНИЯ В ПРАКТИКУ

Результаты проведенных исследований служат основанием для использования в условиях женских консультаций и отделений патологии беременности анализа генетического полиморфизма генов "эндотелиальной дисфункции" в качестве прогностического теста для оценки риска развития гестоза при последующих беременностях от того же партнера.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2009 года, Михайлин, Евгений Сергеевич

1. Айламазян, Э.К. Гестоз: теория и практика / Айламазян Э.К., Мозговая, Е.В. М.:МЕДпресс информ, 2008.-272с.

2. Айламазян, Э.К. Неотложная помощь при экстремальных состояниях в акушерской практике: руководство / Айламазян Э.К., Новиков Б.Н., Павлова Л.П. СПб.: Н.-Л, 2002.-432с.

3. Адамян, Л.В. Эндометриозы: руководство для врачей / Адамян Л.В., Кулаков В.И.-М.: Медицина, 1998.-320 с.

4. Акушерство. Национальное руководство / Ред. Айламазяна Э.К., Кулакова В.И., Радзинского В.Е., Савельевой Г.М. М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 1200 с.

5. Баранов, B.C. Геном человека и гены "предрасположенности" (Введение в предиктивную медицину) / Баранов B.C., Баранова Е.В., Иващенко Т.Э., Асеев М.В. СПб.: Интермедика, 2000. -272 с.

6. Генетические факторы предрасположенности к бронхиальной астме / Иващенко Т.Э., Сиделева О.Г, Петрова М.А. и др. // Генетика. -2001. Т. 37, №1 — С. 107-111.

7. Гены GSTM1, GSTT1, CYP1A1, CFTR у больных бронхиальной астмой / Сиделева О.Г., Иващенко Т.Э., Орлов А.В. и др. // Материалы 11 национального конгресса по болезням органов дыхания. М., 2001. - С.20.

8. Гомазков, О.А. Эндотелий «эндокринное дерево» / Гомазков О.А. //Природа.-2000.-№5.-С.38-46.

9. Демин, Г.С. Анализ ассоциации полиморфизма генов "сосудистой системы" и "эндотелиальной дисфункции" с развитием преэклампсии : автореф. дис. . канд. мед. наук.- СПб., 2008.

10. Кулаков, В.И. Введение / Кулаков В.И., Мурашко JI.E. // Актуальные вопросы диагностики, профилактики и лечения гестоза: материалы междунар. симп,- М., 1998.-С.5-7.

11. З.Кулаков, В.И. Новые подходы к терминологии, профилактике и лечению гестоза / Кулаков В.И., Мурашко JI.E. // Акушерство и гинекология. 1998. - № 5. - С. 3-6.

12. М.Кулинский, В.И. Обезвреживание ксенобиотиков / Кулинский В.И. // Соросовский Образовательный журнал.- 1999.- №1- С. 8-12.

13. Кольман, Я. Наглядная биохимия: пер. с нем. / Кольман Я., Рем К.-Г.-М.: Мир,2000.-469 с.

14. Кукес, В.Г. Метаболизм лекарственных средств: клинико-фармакологические аспекты / Кукес В.Г. М.: Реафарм, 2004.- 144 с.

15. Макацария, А. Д. Тромбофилические состояния в акушерской практике / Макацария А.Д., Бицадзе В.О. М.: РУССО, 2001. - 704 с.

16. Мозговая, Е.В. Диагностика и медикаментозная коррекция эндотелиальной дисфункции при гестозе: автореф. дис. .д-ра. мед. наук.-СПб., 2004.

17. Милованов, А.П. Патология системы мать—плацента-плод: Руководство для врачей / Милованов А.П. М.: Медицина, 1999.

18. Митьков, В.В. Клиническое руководство по ультразвуковой диагностике / Митьков В.В. М.:ВИДАР, 1996. - Т.2. - С.257-275.

19. Новик, А.А. Генетика в клинической медицине: руководство для врачей / Новик А.А., Камилова Т.А., Цыган В.Н. -СПб.:ВМедА,2001.-219 с.

20. Пальцев, М.А. Межклеточные взаимодействия / Пальцев М.А., Иванов А.А. М.: Медицина, 1995 - 464с.

21. Савельева, Г.М. Принципы профилактики и лечения ОПГ-гестозов / Савельева Г.М., Шалина Р.И., Дживелегова Г.Д. // Акушерство и гинекология. 1992. - № 3. - С. 14-17.

22. Савельева, Г.М. Современные принципы диагностики, лечения и профилактики ОПГ-гестозов / Савельева Г.М. // Проблемы ОПГ-гестозов: сб. научных трудов. Чебоксары, 1996. - С. 80.

23. Секреция фактора некроза опухоли-а и интерлейкина-1 плацентарными макрофагами in vitro при различных исходах беременности / Павлов О.В., Сельков С.А., Селютин А.В. и др. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1999.- Т. 128, №7.- С.97-100.

24. Сиделева, О.Г. Полиморфные аллели генов, ассоциированные с патогенезом атопической формы бронхиальной астмы у жителей Северо-запада России: автореф. дис. . канд. биол. наук. СПб.,2002. 19 с.

25. Стрижаков, А.Н. Информативность допплерометрии в прогнозировании возникновения гестозов и синдрома задержки развития плода / Стрижаков А.Н. // Акуш. и гин. 1990. - №7. - С. 1215.

26. Супряга, О.М. Роль эндотелиальной дисфункции в генезе гипертензивных состояний у беременных / Супряга О.М. // Акушерство и гинекология. 1995.- №6.- С. 5-9.

27. А 14 bp deletion polymorphism in the HLA-G gene / Harrison G.A., Humphrey K.E., Jakobsen I.B. et al. // Hum. Mol. Genet. 1993. - Vol.2, N. 12.-P. 2200.

28. A candidate genetic risk factor for vascular disease: a common mutation in methylenetetrahydrofolate reductase / Frosst P., Blom H.J., Milos R.et al. //Nat. Genet. 1995. -Vol. 10, N. 1.- P. 111-113.

29. A prospective study of several potential biologic markers for early prediction of the development of preeclampsia / Masse J., Forest J.C., Moutquin J.M. et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1993. - Vol. 169, N.3.-P. 501-508.

30. Absence of association between a common mutation in the methylenetetrahydrofolate reductase gene and preeclampsia in Japanese women / Kobashi G., Yamada H., Asano T. et al. // Am. J. Med. Genet. 2000. - Vol. 93, N. 2. - P. 122-125.

31. Ап Australian twin study of the genetic basis of preeclampsia and eclampsia / Treloar S.A., Cooper D.W., Brennecke S.P. et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. 2001. - Vol. 184. - P.374-381.

32. An endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism is associated with preeclampsia / Tempfer C.B., Dorman K., Deter R.L. et al. // Hypertens Pregnancy. 2001. - Vol. 20, N. 1. - P. 107-118.

33. An insertion/deletion polymorphism in the angiotensin I-converting enzyme gene accounting for half the variance of serum enzyme levels / Rigat В., Hubert C., Alhenc-Gelas F. et al. // J. Clin. Invest. 1990. -Vol. 86, N. 4.-P. 1343-1346.

34. Analysis of different inheritance patterns in preeclampsia/eclampsia syndrome / Arngrimsson R., Bjornsson H., Geirsson R.T. et al. // Hypertens Pregnancy. 1995. - Vol.14.- P.27-38.

35. Analysis of human leukocyte antigen (HLA)-G polymorphism in normal women and in women with recurrent spontaneous abortions / Abbas A., Tripathi P., Naik S. et al. // Eur. J. Immunogenet. 2004. - Vol.31, №6. -P.275-278.

36. Angiotensin converting enzyme as a genetic risk factor for coronary artery spasm. Implication in the pathogenesis of myocardial infarction / Oike Y., Hata A., Ogata Y. et al. // J. Clin. Invest. 1995. - Vol. 96, N. 6. - P. 2975-2979.

37. Angiotensin converting enzyme gene deletion allele is independently and strongly associated with coronary atherosclerosis and myocardial infarction / Arbustini E., Grasso M., Fasani R. et al. // Br. Heart. J. -1995. Vol. 74, N. 6. - P. 584-591.

38. Angiotensin-converting enzyme gene I/D polymorphism in malignant hypertension / Stefansson В., Ricksten A., Rymo L. et al. // Blood Press. 2000. - Vol. 9, N. 2-3. - P. 104-109.

39. Angiotensin-converting enzyme: new concepts concerning its biological role / Ehlers M.R., Riordan J.F. // Biochemistry. 1989. - Vol. 28, N. 13. -P. 5311-5318.

40. Angiotensinogen and endothelial nitric oxide synthase gene polymorphisms among Hispanic patients with preeclampsia / Bashford M.T., Hefler L.A, Vertrees T.W. et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. -2001. -Vol. 184.-P. 1345-1351.

41. Antigenic heterogeneity of human cytotrophoblast and evidence for the transient expression of MHC class I antigens distinct from HLA-G / Shorter S.C., Starkey P.M., Ferry B.L. et al. // Placenta. 1993. -Vol.14.-P.571-582.

42. Arngrimsson, R. Genetic and familial predisposition to eclampsia and pre-eclampsia in a defined population / Arngrimsson R., Bjornsson H., Geirsson R.T.// Br. J. Obstet. Gynaecol. 1990. - Vol.97. - P.762-769.

43. Association between a deletion polymorphism of the angiotensin-converting-enzyme gene and left ventricular hypertrophy / Schunkert H., Hense H.W., Holmer S.R. et al. // N. Engl. J. Med. 1994. - Vol. 330, N. 23.-P. 1634-1638.

44. Association of the maternal 14-bp insertion polymorphism in the HLA-G gene in women with recurrent spontaneous abortions / Yan W.H., Lin A., Chen X.J. et al. // Tissue Antigens. 2006. - Vol.68, №6. - P.521-523.

45. Austgulen, R. Expression of receptors for tumor necrosis factor in human placenta at term / Austgulen R., Espevik Т., Mecsei R., Scott H. // Acta Obstet. Gynecol. Scand. 1992. - Vol. 71, N. 6. - P. 417-424.

46. Autrup, H. Genetic polymorphisms in human xenobiotica metabolizing enzymes as susceptibility factors in toxic response / Autrup H. // Mutat. Res. 2000.- Vol 3, № 1.- C.65-76.

47. Bianchi, D.W. Possible effect of gestational age on the detection of fetal nucleated erythrocytes in maternal blood / Bianchi D.W., Stewart J.E., Garber M.F., Lucotte G., Flint A.F. // Prenat. Diagn. 1991. - Vol. 11, №8. -P. 523-528.

48. Board, P.G. Human muscle glutathione S-transferase (GST-4) shows close homology to human liver GST-1 / Board P.G., Suzuki Т., Shaw D.C. // Biochim Biophys Acta.-1988.-Vol.14. № 3.-P.214-217.

49. Brocklehurst, J.C. Familial eclampsia / Brocklehurst J.C., Ross R. // J. Obstet. Gynaecol. Br. Emp. 1960. - Vol. 67. -P.971.

50. Carosella, E.D. HLA-G revisited / Carosella E.D., Dausset J., Kirszenbaum M. // Immunol. Today. 1996. - Vol.17. - P.407-409.

51. Carreiras, M. Preeclampsia: a multifactorial disease resulting from the interaction of the feto-maternal HLA genotype and HCMV infection / Carreiras M., Montagnani S., Layrisse Z. // Am. J. Reprod. Immunol. -2002. Vol. 48, N. 3. - P. 176-183.

52. Chappell, S. Searching for genetic clues to the causes of pre-eclampsia / Chappell S., Morgan L. // Clin. Sci. 2006. - Vol. 110, N. 4. - P. 443458.

53. Cheeseman, K.H. An introduction to free radical biochemistry / Cheeseman K.H., Slater T.F. // Br. Med. Bull. 1993. — Vol.49. -P.481-493.

54. Cooper, D.W. Genetics of preeclampsia / Cooper D.W., Brennecke S.P., Wilton A.N. // Hypertens. Pregn. 1993. - Vol.12. - P. 1-23.

55. Daher, S. Cytokine genotyping in preeclampsia / Daher S., Sass N., Oliveira L.G., Mattar R. // Am. J. Reprod. Immunol. 2006. - Vol. 55, N. 2.-P. 130-135.

56. Dekker, G.A. Oxygen free radicals in preeclampsia / Dekker G.A., Kraayenbrink A.A. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1991. - Vol.164. - P.73.

57. Detection of insertion/deletion polymorphism of angiotensin converting enzyme gene in preeclampsia / Zhou N., Yu P., Chen J. et al. // Zhonghua Yi Xue Yi Chuan Xue Za Zhi. 1999. - Vol. 16, N. 1. - P. 2931.

58. Elliot, G.T.J. Case 120. Puerperal eclampsia in the eight month extraordinary family history / Elliot G.T.J. New York: Appleton, 1873.

59. Endothelial cell killing by neutrophils: synergistic interaction of oxygen products and proteases / Varani J., Ginsburg I., Schuger L. et al. // Am. J. Pathol. 1989. - Vol.135. -P.435-438.

60. Endothelial nitric oxide synthase gene polymorphism in women with idiopathic recurrent miscarriage / Tempfer C., Unfried G., Zeillinger R. et al. // Hum. Reprod. 2001. - Vol. 16, N. 8. - P. 1644-1647.

61. Endresen, M.J. Increased lipolytic activity of sera from pre-eclamptic women due to the presence of a lysophospholipase / Endresen M.J., Lorentzen В., Henriksen T. // Scand. J. Clin. Lab. Invest. 1993. —Vol.53.-P.733-739.

62. Epidermal growth factor in urine of nonpregnant women and pregnant women throughout pregnancy and at delivery / Hofmann G.E., Rao C.V., Brown M.J. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1988. - Vol. 66, N. 1. -P. 119-123.

63. Esterbauer, H. Lipid peroxidation and its role in atherosclerosis / Esterbauer H., Wag G., Puhl H. // Br. Med. Bull. 1993. - Vol.49. -P.566-576.

64. Evidence, from combined segregation and linkage analysis, that a variant of the angiotensin I-converting enzyme (ACE) gene controls plasma ACE levels / Tiret L., Rigat В., Visvikis S. et al. // Am. J. Hum. Genet. -1992. Vol. 51, N. 1. - P. 197-205.

65. Factor V Leiden and factor II G20210A in preeclampsia and HELLP syndrome / Benedetto C., Marozio L., Salton L. et al. // Acta Obstet. Gynecol. Scand. 2002. - Vol. 81, N. 12. - P. 1095-1100.

66. Factor V Leiden and thermolabile methylenetetrahydrofolate reductase gene variants in an East Anglian preeclampsia cohort / O'Shaughnessy K.M., Fu В., Ferraro F. et al. // Hypertension. 1999. - Vol. 33, N. 6. -P. 1338-1341.

67. Factor V Leiden, С > T MTHFR polymorphism and genetic susceptibility to preeclampsia / Grandone E., Margaglione M., Colaizzo D. et al. // Thromb. Haemost. 1997. - Vol. 77, N. 6. - P. 1052-1054.

68. Frequency of factor V, prothrombin and methylenetetrahydrofolate reductase gene variants in preeclampsia / D'Elia A.V., Driul L.,

69. Giacomello R. et al. // Gynecol. Obstet. Invest. 2002. - Vol. 53, N. 2. -P. 84-87.

70. Friedman, S.A. Pathophysiology of preeclampsia / Friedman S.A., Taylor R.N., Roberts J.M. // Clin. Perinatol. 1991. - Vol. 18, N. 4. - P. 661-682.

71. Ganshirt-Ahlert, D. Fetal DNA in uterine vein blood / Ganshirt-Ahlert D.,Basak N., Aidynli K., Holzgreve W. // Obstet. Gynecol. 1992. - Vol. 80, №4.-P. 601-603.

72. Garte, S. Metabolic gene polymorphism frequencies in control populations / Garte S., Gaspari L., Alexandrie A. // Cancer Epidemiol. Biomarkers Prev. 2001. - Vol. 10. - P. 1239 - 1248.

73. Genetic contribution of the endothelial constitutive nitric oxide synthase gene to plasma nitric oxide levels / Wang X.L., Mahaney M.C., Sim A.S. et al. // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. - Vol. 17, N. 11. - P. 3147-3153.

74. Genetics of hypertension in pregnancy: possible single gene control of pre-eclampsia and eclampsia in the descendants of eclamptic women / Chesley L.C., Cooper D.W. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1986. - Vol. 93, N. 9. - P. 898-908.

75. Glutathione S-transferases and esterases in placenta after normal and preeclamptic pregnancies / del Carmen Terrones Saldi'var M., Juarez F.J., Viramontes J.L. et al. // Placenta. 2004. - Vol.25, №4. - P.331-336.

76. Goldstein, D.P. Current management of complete and partial molar pregnancy / Goldstein D.P., Berkowitz R.S. // J. Reprod. Med. 1994. -Vol.39. -P.39-46.

77. Hatagima, A. Genetic polymorphisms and metabolism of endocrine disruptors in cancer susceptibility / Hatagima A. // Cad. Saude Publica. -2002.-Vol. 18.-P. 357-377.

78. Higgs, G.A. Inhibition of cyclooxygenase and lipoxygenase / Higgs G.A., Vane J.R. // Br. Med. Bull. 1983. - Vol.39. - P.265-270.

79. HLA-G deletion polymorphisms and preeclampsia/eclampsia / Humphrey K.E., Harrison G.A., Cooper D.W. et al. // Br. J. Obstet. Gynaecol. -1995.- Vol.102.-P.707-710.

80. HLA-G*0105N null allele encodes functional HLA-G isoforms / Le Discorde M., Le Danff C., Moreau P. et al. // Biol. Reprod. 2005. -Vol.73, №2. - P.280-288.

81. Holley, A.E. Measuring free radical reactions in vivo / Holley A.E., Cheeseman K.H. // Br. Med. Bull. 1993. - Vol.49. - P.494-505.

82. Hooper, N.M. Angiotensin converting enzyme: implications from molecular biology for its physiological functions / Hooper N.M. // Int. J. Biochem. 1991. - Vol. 23, N. 7-8. - P. 641-647.

83. Humphries, A.W. Arteriosclerotic abdominal aortic aneurysms / Humphries A.W., Dewolfe V.G., Lafevre F.A., Britton R.C. // Postgrad. Med. 1960. - Vol. 28. - P. 236-241.

84. Hypothesis: which plasma factors bring about disturbance of endothelial function in pre-eclampsia? / Arbogast B.W., Leeper S.C., Merrick R.D. et al. // Lancet. 1994. - Vol.343.- P.340-341.

85. Hunley, Т.Е. Nitric oxide and endothelin in pathophysiological settings / Hunley Т.Е., Iwasaki S., Homma Т., Коп V. // Pediatr. Nephrol. 1995. -Vol. 9, N. 2.-P. 235-244.

86. Hviid, T.V. HLA-G allelic variants are associated with differences in the HLA-G mRNA isoform profile and HLA-G mRNA levels / Hviid T.V.,

87. Hylenius S., Rorbye C., Nielsen L.G. // Immunogenetics.'- 2003. Vol. 55, N. 2. - P. 63-79.

88. Hylenius, S. Association between HLA-G genotype and risk of preeclampsia: a case-control study using family triads / Hylenius S., Andersen A.M., Melbye M., Hviid T.V. // Mol. Hum. Reprod. 2004. -Vol. 10, N. 4. - P. 237-246.

89. Hypoxia-induced membrane-bound apoptotic DNA particles: potential mechanism of fetal DNA in maternal plasma / Orozco A.F., Bischoff F.Z., Home C. et al. // Ann. N. Y. Acad. Sci. 2006. - Vol. 1075. - P. 57-62.

90. Impact of genetic variation of tumor necrosis factor-alpha on gestational hypertension / Chen Y.P., Pfab Т., Slowinski T. et al. // Chin. Med. J. -2006. Vol. 119, N. 9. - P. 719-724.

91. Immunohistochemical localization of transforming growth factor-beta in human implantation sites / Selick C.E., Horowitz G.M., Gratch M. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1994. - Vol. 78, N. 3. - P. 592-596.

92. Increased accumulation of tissue ACE in human atherosclerotic coronary artery disease / Diet F., Pratt R.E., Berry G.J. et al. // Circulation. 1996. - Vol. 94, N. 11. - P. 2756-2767.

93. Increased frequency of genetic thrombophilia in women with complications of pregnancy / Kupferminc M.J., Eldor A., Steinman N. et al. //N. Engl. J. Med. 1999. - Vol. 340. - P. 9-13.

94. Isolating fetal nucleated red blood cells from maternal blood: the Baylor experience 1995 / Simpson J.L., Lewis D.E., Bischoff F.Z. et al. // Prenat. Diagn. - 1995. - Vol. 15. - P. 907-912.

95. Johnston, C.I. Franz Volhard Lecture. Renin-angiotensin system: a dual tissue and hormonal system for cardiovascular control / Johnston С J. // J. Hypertens. Suppl. 1992. - Vol. 10, N. 7. - P. SI 3-26.

96. Joos, L. Genetic risk factors for chronic obstructive pulmonary disease / Joos L., Pare P., Sanford A. // Swiss med. wkly. 2002. - Vol. 132.-P. 27-37.

97. Katusic, Z.S.Superoxide anion and endothelial regulation of arterial tone / Katusic Z.S., Vanhoutte P.J.M. // Semin. Perinatol. 1991. -Vol.15. -P.30-33.

98. Laisney, V. Human genes for glutation-S-transferases / Laisney V., Gross M.S., Frezal J. //Hum. Genet. 1984. - Vol. 68. -P.221-227.

99. Lie, R.T. Fetal and maternal contributions to risk of preeclampsia: population based study / Lie R.T., Rasmussen S., Brunborg H. // BMJ. 1998. - Vol.316. —P.1343-1347.

100. Lifton, R.P. Molecular mechanisms of human hypertension / Lifton R.P., Gharavi A.G., Geller D.S. // Cell. 2001. - Vol. 104, N. 4. - P. 545556.

101. Lin, J. Genetic thrombophilias and preeclampsia: a meta-analysis / Lin J., August P. // Obstet. Gynecol. 2005. - Vol. 105, N. 1. - P. 182192.

102. Lipid peroxidation in pregnancy: new perspectives on preeclampsia / Hubel C.A., Robert J.M., Taylor R.N. et al. // Am. J. Obstet. Gynecol. -1989. Vol.160. - P. 1025-1034.

103. Lockwood, C.J. Increased plasma levels of ED1(+) cellular fibronectin precede the clinical signs of preeclampsia / Lockwood C.J, Peters J.H. //Am. J. Obstet. Gynecol. 1990. - Vol. 162. - P.358-362.

104. Loke, Y.W. Immunology of human placental implantation: clinical implications of our current understanding / Loke Y.W., King A. // Mol. Med. Today. 1997.-Vol. 3.-P. 153-159.

105. Lorentzen, B. Fatty acid pattern of esterified and free fatty acids in sera of women with normal and pre-eclamptic pregnancy / Lorentzen В.,

106. Drevon C.A., Endresen M.J., Henriksen T. // Br. J. Obstet. Gynaecol. — 1995. -Vol.102. -P.530-537.

107. Lorentzen, B. Fasting serum free fatty acids and triglycerides are increased before 20 weeks of gestation in women who later develop preeclampsia / Lorentzen В., Endresen M.J., Clausen Т., Henriksen T. // Hypertens. Pregn. 1994. -Vol.13. -P.l03-109.

108. Lowenstein, C.J. Nitric oxide: a physiologic messenger / Lowenstein C.J., Dinerman J.L., Snyder S.H. // Ann. Intern. Med. -1994. Vol. 120, N. 3. - P. 227-237.

109. Maternal-fetal flow, negative events, and preeclampsia: role of ACE I/D polymorphism / Mello G., Parretti E., Gensini F. et al. // Hypertension. 2003. - Vol. 41, N. 4. - P. 932-937.

110. Methylenetetrahydrofolate reductase polymorphism and preeclampsia / Sohda S., Arinami Т., Hamada H. et al. // J. Med .Genet. -1997. Vol. 34, N. 6. - P. 525-526.

111. Moncada, S. The L-arginine-nitric oxide pathway / Moncada S., Higgs A. // N. Engl. J. Med. 1993. - Vol. 329, N. 27. - P. 2002-2012.

112. Moncada, S. Nitric oxide: physiology, pathophysiology, and pharmacology / Moncada S., Palmer R.M., Higgs E.A. // Pharmacol. Rev. 1991. - Vol. 43, N. 2. - P. 109-142.

113. Mutze, S. Genes and the preeclampsia syndrome / Miitze S., Rudnik-Schoneborn S., Zerres K., Rath W. // J. Perinat. Med. 2008. -Vol.3, №l.-P.38-58.

114. Naber, C.K. Genetics of human coronary vasomotion / Naber C.K., Siffert W., Erbel R., Heusch G. // Arch. Mai. Coeur. Vaiss. 2004. -Vol. 97, N. 3.-P. 255-260.

115. Nakaki, T. Physiological and clinical significance of nitric oxide / Nakaki T. // Keio J, Med. 1994. - Vol. 43, N. 1. - P. 15-26.

116. Nathan, С. Nitric oxide as a secretory product of mammalian cells / Nathan C. //Faseb J. 1992. - Vol. 6, N. 12. - P. 3051-3064.

117. Ness, R.B. Heterogeneous causes constituting the single syndrome of preeclampsia: a hypothesis and its implications / Ness R.B., Roberts J.M. //Am. J. Obstet. Gynecol. 1996. - Vol.175. -P.l365-1370.

118. Nitric oxide synthase isozymes. Characterization, purification, molecular cloning, and functions / Forstermann U., Closs E.I., Pollock J.S. etal. //Hypertension. 1994. - Vol. 23, N. 6, Pt 2. - P. 1121-1131.

119. Orhan, H. Circulating biomarkers of oxidative stress in complicated pregnancies / Orhan H., Onderoglu L., Yucel A., Sahin G. // Arch. Gynecol. Obstet. 2003. Vol.267, №4. - P.189-195.

120. Paternal and maternal components of the predisposition to preclampsia / Esplin M.S., Fausett M.B., Fraser A. et al. // N. Engl. J. Med. 2001. - Vol.344. - P.867-872.

121. Paternity patterns and risk of preeclampsia in the last pregnancy in multiparae / Robillard P.Y., Hulsey T.C., Alexander G.R. et al. //J. Reprod. Immunol. 1993. - Vol.24. - P. 1-12.

122. Placental trophoblast-derived factors diminish endothelial barrier function / Wang Y., Lewis D.F., Gu Y. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 2004. - Vol.89, №5. - P.2421-2428.

123. Plasminogen activator inhibitor type 1 gene is located at region q21.3-q22 of chromosome 7 and genetically linked with cystic fibrosis /

124. Klinger K.W., Winqvist R., Riccio A. et al. // Proc Natl Acad Sci U S A. 1987. - Vol. 84, N. 23. - P. 8548-8552.

125. Polymorphism at the glutathione S-transferase. A new marker for bronchial hyperresponsiveness and asthma / Fryer A.A., Bianco A., Hepple M. et al. // Am. J. Respir. Crit. Care Med. 2000. - Vol. 161. -P. 1437-1442.

126. Polymorphism in the glutathione S-transferase PI gene and risk for preeclampsia / Zusterzeel P.L., Visser W., Peters W.H. et al. // Obstet. Gynecol. 2000. - Vol.96, N1. - P.50-54.

127. Polymorphism in the tumor necrosis factor-alpha gene in women with preeclampsia / Heiskanen J., Romppanen E.L., Hiltunen M. et al. // J. Assist. Reprod. Genet. 2002. - Vol. 19, N. 5. - P. 220-223.

128. Possible involvement of arylamine N-acetyltransferase 2, glutathione S-transferases Ml and T1 genes in the development of endometriosis / Baranova H., Canis M., Ivaschenko T. et al. // Mol. Hum. Reprod.-1999.- Vol.5, N 7. P.636-641.

129. Preeclampsia and serum antibodies to oxidized low-density lipoprotein / Branch D.W., Mitchell M.D., Miller E. et al. // Lancet. -1994. Vol.343.- P.645-646.

130. Prenatal diagnosis using fetal cells isolated from maternal peripheral blood: a review / Steele C.D., Wapner R.J., Smith J.B. et al. // Clin. Obstet. Gynecol. 1996. - Vol. 39, №4. - P. 801-813.

131. Prochazka, M. Occurrence of gene mutations in factor V Leiden, prothrombin and methylenetetrahydrofolate reductase in patients withpre-eclampsia / Prochazka M., Krcova V., Kudela M., Slavik L. // Ceska. Gynekol. 2003. - Vol. 68, N. 3. - P. 162-166.

132. Proportion of the GSTM1 0/0 genotype in some Slavic populations and its correlation with cystic fibrosis and some multifactorial diseases / Baranov V., Ivaschenko Т., Bakay B. et al. // Hum. Genet.-1996. -Vol.97, N4.- P.516-520.

133. Prothrombin 20210 G: a mutation and Factor V Leiden mutation in women with a history of severe preeclampsia and (H)ELLP syndrome / van Pampus M.G., Wolf H., Koopman M.M. et al. // Hypertens. Pregnancy. 2001. - Vol. 20, N. 3. - P. 291-298.

134. Purification, characterization and tissue distribution of human class theta glutathione S-transferase Tl-1 / Juronen E., Tasa G., Uuskula M., Pooga M. et al. // Biochem. Mol. Biol. Int. 1996. - Vol. 39. - P. 2129.

135. Radomski, M.W. An L-arginine/nitric oxide pathway present in human platelets regulates aggregation / Radomski M.W., Palmer R.M., Moncada S. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA.- 1990. Vol. 87, N. 13. - P. 5193-5197.

136. Sargent, I.L. Maternal and fetal immune responses during pregnancy / Sargent I.L. //Exp. Clin. Immunogenet. — 1993. Vol.10. -P.85-102.

137. Sattar, N. Potential pathogenic roles of aberrant lipoprotein and fatty acid metabolism in preeclampsia / Sattar N., Gaw A., Packard С J., Greer I.A. //Br. J. Obstet. Gynaecol. 1996. - Vol.103. - P.614-620.

138. Seidegard, J. Effect of grapefruit juice on urinary 6 beta-hydroxycortisol/cortisol excretion / Seidegard J., Dahlstrom K., Kullberg A. // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol.-1998.- Vol.25, N 5.- P.379-381.

139. Serhal, P.F. Oocyte donation in 61 patients / Serhal P.F., Craft I.L. // Lancet 1989. - Vol. 1. - P. 1185-1187.

140. Sibai, B.M. Severe preeclampsia in the second trimester: recurrence risk and long-term prognosis / Sibai B.M., Mercer В., Sarinoglu C. // Am. J. Obstet. Gynecol. 1991. - Vol.165. - P.1408-1412.

141. Skajaa, K. Pre-eclampsia. Etiology-physiopathology-treatment / SkajaaK. //Ugeskr. Laeger. 1993.-Vol. 155, N. 24. -P. 1845-1851.

142. Skidgel, R.A. The broad substrate specificity of human angiotensin I converting enzyme / Skidgel R.A., Erdos E.G. // Clin. Exp. Hypertens.- 1987. Vol. 9, N. 2-3. - P. 243-259.

143. Snyder, S.H. Janus faces of nitric oxide / Snyder S.H. // Nature. -1993. Vol. 364, N. 6438. - P. 577.

144. Structure and chromosomal localization of the human constitutive endothelial nitric oxide synthase gene / Marsden P.A., Heng H.H., Scherer S.W. et al. // J. Biol. Chem. 1993. - Vol. 268, N. 23. - P. 17478-17488.

145. Susceptibility to pre-eclampsia in Finnish women is associated with R485K polymorphism in the factor V gene, not with Leiden mutation / Faisel F., Romppanen E.L., Hiltunen M. et al. // Eur. J. Hum. Genet. -2004. Vol. 12, N. 3. - P. 187-191.

146. Sun, Y. Angiotensin converting enzyme and myofibroblasts during tissue repair in the rat heart / Sun Y., Weber K.T. // J. Mol. Cell. Cardiol.- 1996. Vol. 28, N. 5. - P. 851-858.

147. Sun, Y. Angiotensin-converting enzyme and myocardial fibrosis in the rat receiving angiotensin II or aldosterone / Sun Y., Ratajska A., Zhou

148. Taylor, R.N. Growth factor activity in the blood of women in whom preeclampsia develops is elevated from early pregnancy / Taylor R.N., Heilbron D.C., Roberts J.M. //Am. J. Obstet. Gynecol. 1990. -Vol.163. -P.1839-1844.

149. Temporal relationship between the human chorionic gonadotropin peak and the establishment of intervillous blood flow in early pregnancy / Meuris S., Nagy A.M., Delogne-Desnoeck J. et al. // Hum. Reprod. -1995. -Vol.10. -P.947-950.

150. The 4G/5G polymorphism of the plasminogen activator inhibitor-1 gene is associated with severe preeclampsia / Yamada N., Arinami Т., Yamakawa-Kobayashi K.et al. // J. Hum. Genet. 2000. - Vol. 45, N. 3.-P. 138-141.

151. The deletion/insertion polymorphism of the angiotensin converting enzyme gene and cardiovascular-renal risk / ,Staessen J.A., Wang J.G., Ginocchio G. et al. // J. Hypertens. 1997. - Vol. 15, N 12, Pt. 2. - P. 1579-1592.

152. The relationship between thrombophilic mutations and preeclampsia: a prospective case-control study / Yalinkaya A., Erdemoglu M., Akdeniz N. et al. // Ann. Saudi. Med. 2006. - Vol. 26, N. 2.-P. 105-109.

153. Theta, a new class of glutathione transferases purified from rat and man / Meyer D.J., Coles В., Pemble S.E. et al. // Biochem. J. -1991. — Vol.274,№1, Pt. 2.- P.409-414.

154. Trophoblast-derived tumor necrosis factor-alpha induces release of human chorionic gonadotropin using interleukin-6 (IL-6) and IL-6-receptor-dependent system in the normal human trophoblasts / Li Y.,

155. Matsuzaki N., Masuhiro K. et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1992. -Vol. 74, N. l.-P. 184-191.

156. Trophoblast deportation in pre-eclamptic pregnancy / Chua S., Wilkins Т., Sargent I. et al. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1991. -Vol.98. -P.973-979.

157. Tsukada, T. Evidence of association of the eNOS gene polymorphism with plasma NO metabolite levels in humans / Tsukada Т., Yokoyama K., Arai T. et al. // Biochem. Biophys. Res. Commun. -1998 -Vol.245. -P.190-193.

158. Tuohy, J.F. Pre-eclampsia and trisomy 13 / Tuohy J.F., James D.K. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1992. - Vol.99. - 891-894.

159. Twin mothers, pregnancy hypertension and pre-eclampsia / Thornton J.G., Macdonald A.M. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1999. -Vol.106. -P.570-575.

160. Uotila, J.T. Findings on lipid peroxidation and antioxidant function in hypertensive complications of pregnancy / Uotila J.T., Tuimala R.J., Aarnio T.M. // Br. J. Obstet. Gynaecol. 1993. - Vol.100. - P.270-276.

161. Vascular endothelial growth factor gene polymorphisms and preeclampsia / Papazoglou D., Galazios G., Koukourakis M.I. et al. // Mol. Hum. Reprod. 2004. - Vol. 10, N. 5. - P. 321-324.

162. Walsh, S.W. Lipid peroxidation in pregnancy / Walsh S.W. // Hypertens. Pregn. 1994. - Vol.13. - P.l-31.

163. Wang, X. Microvascular endothelial cell activation is present in the umbilical placental microcirculation in fetal placental vascular disease / Wang X., Athayde N., Trudinger B. //Am. J. Obstet. Gynecol. 2004. -Vol.190, №3.-P.596-601.

164. Wang, Y. Nitric oxide synthases: biochemical and molecular regulation / Wang Y., Marsden P.A. // Curr. Opin. Nephrol. Hypertens. -1995.-Vol. 4, N. l.-P. 12-22.

165. Wang, Y. TNF alpha concentrations and mRNA expression are increased in preeclamptic placentas / Wang Y., Walsh S.W. // J. Reprod. Immunol. 1996. - Vol. 32, N. 2. - P. 157-169.

166. Watson, M.A. Human glutathione S-transferase PI polymorphisms: relationship to lung tissue enzyme activity and population frequency distribution / Watson M.A., Steward R.K, Smith G.B. // Carcinogenesis. 1998. -Vol.9. -P.275-280.

167. Wilke, A. Effect of the renin-angiotensin-aldosterone system on the cardiac interstitium in heart failure / Wilke A., Funck R., Rupp H., Brilla

168. C.G. // Basic Res. Cardiol. 1996. - Vol. 91, N 2,Suppl. - P. 79-84.

169. Wilton, A.N. Pre-eclampsia and HLA-DR4 / Wilton A.N., Cooper

170. D.W. // Lancet. 1990. - Vol. 336, N. 8710. - P. 323.

171. Yang, X. Inhibition of inducible nitric oxide synthase in macrophages by oxidized low-density lipoproteins / Yang X., Cai В., Sciacca R.R., Cannon P.J. // Circ. Res. 1994. - Vol.74. - P.318-328.

172. Zhou, Y. Preeclampsia is associated with failure of human cytotrophoblasts to mimic a vascular adhesion phenotype / Zhou Y., Damsky C.H., Fisher S.J. // J. Clin. Invest. 1997. - Vol.99. - P.2152-2164.

173. Zusterzeel, P.L. Ethene and other biomarkers of oxidative stress in hypertensive disorders of pregnancy / Zusterzeel P.L. Steegers-Theunissen R.P. Harren F.J. // Hypertens. Pregnancy. 2002. - Vol.21, N1. - P.39-49.