Особенности дендритных клеток, полученных при различных условиях стимуляции моноцитов новорожденных детей in vitro

Цатуров, Максим Эдуардович

Диссертации по медицине → Клиническая иммунология, аллергология

Автореферат и диссертация по медицине (14.03.09) на тему:Особенности дендритных клеток, полученных при различных условиях стимуляции моноцитов новорожденных детей in vitro

ДИССЕРТАЦИЯ

АВТОРЕФЕРАТ

Цатуров, Максим Эдуардович Москва 2010 г.

Ученая степень: кандидата биологических наук

ВАК РФ: 14.03.09

Автореферат диссертации по медицине на тему Особенности дендритных клеток, полученных при различных условиях стимуляции моноцитов новорожденных детей in vitro

с/¿u

На правах рукописи

Цатуров Максим Эдуардович

Особенности дендритных клеток, полученных при различных условиях стимуляции моноцитов новорожденных детей in vitro

14.03.09 - Клиническая иммунология, аллергология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

-2 ДЕН 2010

Москва-2010

004615403

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Нижегородский государственный университет имени Н.И.Лобачевского» Министерства образования и науки РФ

Федеральное государственное учреждение науки «Нижегородский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени академика И. Н. Блохиной» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Научный руководитель:

Доктор медицинских наук Талаев Владимир Юрьевич Официальные оппоненты:

Доктор медицинских наук, профессор Пинегин Борис Владимирович Доктор биологических наук, профессор Куралесова Альбина Ивановна

Ведущая организация:

Институт биологии развития им. Н.К. Кольцова РАН

Защита состоится «¿3» , О-Х.» 2010 г. в часов на заседании диссертационного совета Д 208~(Й6.02 в Федеральном государственном учреждении науки «Московский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии имени Г.Н. Габричевского» Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека Российской Федерации по адресу 125212, Москва, ул. Адмирала Макарова, д. 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского, г. Москва.

Автореферат разослан «Р? » р^су 2010 г.

Ученый секретарь Диссертационного Совета, кандидат медицинских наук

Новикова Л.И.

Общая характеристика работы

Актуальность темы

Функционирование иммунной системы в ответ на антигенное раздражение и вне его находится под контролем многих молекулярных и клеточных систем. Эти системы призваны обеспечить оптимальный запуск и протекание реакции на антиген и при этом, не дать перейти этому процессу в русло различных системных отклонений, результатом которых может стать развитие аутоиммунной агрессии к собственным клеткам и тканям. Центральную роль в инициации первичного иммунного ответа играют дендритные клетки (ДК) - наиболее активные и высокоспециализированные антигенпрезентирующие клетки организма. Кроме инициации иммунных реакций немаловажной является роль ДК в регуляции иммунных процессов в организме и поддержания гомеостаза иммунокомпетентных клеток. ДК являются важнейшими участниками системы контроля иммунного ответа, так как основа контроля - центральная и периферическая толерантность как к ауто-, так и к аллоантигенам, зависит прежде всего от эффективной работы именно этих клеток (Оиегшопргег Р., й а!., 2002, МасЬу Р., е1 а1., 2002).

Известно, что процессы иммунного ответа и подержания клеточного гомеостаза лимфоцитов в раннем постнатальном периоде существенно отличаются от аналогичных процессов у взрослых. В этой связи, особенно интересным аспектом исследования функциональной значимости ДК является изучение последних на ранних этапах развития, т.е. с позиций онтогенетической зрелости иммунной системы (БсИбЫапс! 8.0.,е1 а1., 2003).

Исследования механизмов регуляции процессов созревания ДК при

различных условиях культивирования необходимы для последовательного

понимания процессов отклонений в работе иммунной системы человека в

целом и, особенно, на ранних этапах развития ребенка. Исследование

механизмов выработки толерогенных свойств позволяет оценить

возможность применения дендритных клеток с модулированными в ходе

созревания свойствами при решении ряда проблем, возникающих в клинической практике при лечении аутоиммунных заболеваний и предотвращении отторжения трансплантированных органов.

Цель работы

Изучить особенности функционального созревания дендритных клеток новорожденных детей при различных условиях культивирования клеток, а также под действием иммуномодулирующих агентов, способных изменить функциональные свойства ДК в плане выработки толерогенных свойств in vitro и определить их участие в выработке толерантности к антигенам.

Задачи исследования

1. Проанализировать особенности фенотипического созревания ДК новорожденных и взрослых в зависимости от условий культивирования.

2. Определить влияние препаратов глюкокортикоидов и различных цитокинов на экспрессию специфических маркеров дендритными клетками новорожденных детей и взрослых.

3. Провести сравнительный анализ продукции цитокинов дендритными клетками новорожденных и взрослых.

4. Исследовать функциональные свойства дендритных клеток новорожденных и взрослых в различных моделях взаимодействия с аллогенными Т-лимфоцитами.

5. Сравнить особенности созревания обычных и потенциально толерогенных дендритных клеток новорожденных и взрослых.

Научная новизна

здоровых доноров. Показан разный уровень экспрессии на мембране дендритных клеток функционально значимых маркеров, а также выявлены различия в продукции цитокинов дендритными клетками в зависимости от стадии созревания и условий культивирования. Показан сложный характер влияния синтетического глюкокортикоида дексаметазона на уровень продукции интерлейкина-10 дендритными клетками.

В ходе исследований впервые был выявлен стимулирующий эффект глюкокортикоидов, действующих в совокупности с интерлейкином-7, на экспрессию молекул антигенпрезентации на ДК новорожденных и взрослых.

Впервые проведены исследования толерогенных свойств ДК новорожденных в оригинальных моделях in vitro с использованием конкурентного и последовательного взаимодействия обычных ДК и ДК, подвергавшихся воздействию противовоспалительными агентами.

Практическая значимость

Разработаны оригинальные схемы культивирования дендритных клеток, предназначенные для выявления специфических свойств ДК.

Проведенные исследования механизмов регуляции процессов созревания ДК при различных условиях культивирования необходимы для разработки методов получения. Разработанные методики получения ДК со специфическими иммуностимулирующими или супрессорными свойствами могут быть использованы при оптимизации условий создания дендритно-клеточных препаратов для цитотерапии патологий как с недостаточностью иммунного ответа (онкологические заболевания), так и связанных с избыточной иммунной реакцией (аллергии, отторжение аллотрансплантанта). Толерогенные ДК могут найти применение в качестве основного инструмента при цитотерапии врожденных и приобретенных патологических срывов аутотолерантности организма к собственным антигенам.

Внедрение результатов работы

Материалы диссертационной работы вошли в аналитический обзор "Методы выделения, культивирования и оценки функциональной активности дендритных клеток новорожденных", рекомендованный для ознакомления и использования в работе специалистам учреждений научного профиля, занимающимся вопросами изучения формирования иммунного ответа Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека

Апробация материалов диссертации

Диссертация апробирована на совместном заседании 1) Ученого Совета ФГУН "Нижегорордский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной" Роспотребнадзора, 2) кафедры молекулярной биологии и иммунологии биологического факультета ГОУ ВПО «Нижегородский Государственный Университет им. Н.И. Лобачевского» Федерального агентства по образованию 3) расширенного межлабораторного научного семинара ФГУН "Нижегорордский научно-исследовательский институт эпидемиологии и микробиологии им. академика И.Н. Блохиной" Роспотребнадзора (протокол № 11 от 30.06.10).

Основные материалы работы были доложены на научной конференции молодых ученых «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (Санкт-Петербург, 2007), на научной конференции Биосистемы организация поведение управление (Н. Новгород, 2007) и на 2-ой республиканской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты» (Сочи, 2007).

Положения, выносимые на защиту:

1. Выявленные особенности фенотипического созревания дендритных клеток, свидетельствуют о своеобразной последовательности событий этого процесса у новорожденных детей.

2. Характерная продукция цитокинов дендритными клетками новорожденных свидетельствует о специфических функциональных особенностях этих ДК.

3. Модулированные противовоспалительными агентами дендритные клетки новорожденных обладают менее выраженными толерогенными свойствами, что является предпосылкой для более эффективного развертывания периферического отдела иммунной системы организма ребенка.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, в том числе 7 - в журналах, рекомендованных ВАК для кандидатских диссертаций, одна статья в иностранном журнале, 4 тезисов докладов, 1 статья в сборнике.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы «Материалы и методы», главы «Результаты исследований», главы «Обсуждение полученных результатов», выводов и списка цитируемой литературы, который содержит 5 отечественных и 187 зарубежных источника. Диссертация иллюстрирована 29 рисунками.

Содержание работы

Материалы и методы исследования

Исследования, связанные с характеристикой клеток периферической крови проводить на базе лаборатории кафедры молекулярной биологии и иммунологии биологического факультета ГОУ ВПО ННГУ им. Н.И. Лобачевского

Этап экспериментов, связанный с функциональным и фенотипическим

анализом лимфоцитов и дендритных клеток в условиях in vitro проводить на

базе лаборатории клеточной иммунологии ФГУН ННИИЭМ им. акад. И.Н. Блохиной.

Биологический материал для исследования предоставлен родильным домом № 1, г. Нижнего Новгорода.

В работе было проведено исследование ДК, полученных из моноцитов периферической крови здоровых взрослых доноров и пуповинной крови здоровых доношенных новорожденных. За весь период работы были изучены дендритные клетки, полученные из моноцитов от 33 взрослых доноров и 20 новорожденных детей. Все работы с клетками крови проводились в стерильных боксах и ламинарном шкафу. Для выделения МНПК гепаринизированную кровь наслаивали на Гистопак-1077 (Sigma, USA). Выделенные МНПК ресуспендировали в питательной среде DMEM (Sigma, USA) с 10% эмбриональной телячьей сыворотки (Биолот, Санкт-Петербург), L-глутамином и гентамицином. Дендритные клетки получали по стандартному методу культивирования. Клеточные суспензии свежевыделенных МНПК инкубировали 3 часа при 37° С. Затем неадгезировавшиеся клетки осторожно смывали DMEM. Во все лунки вносили полную питательную среду. Также во все лунки кроме контроля (моноциты) добавляли ГМ-КСФ (Biosource, USA) до концентрации 100 нг/мл, а также ИЛ-4 (Sigma, USA) или ИЛ-7 (Sigma, USA) до концентрации 20 нг/мл. Для исследования действия глюкокортикоидов на созревание ДК в отдельные лунки вносили дексаметазон (KRKA, Slovenia) до концентрации 0,4 мкг/мл. Культивировали 4 суток при 37° С и 5% С02. В конце 4-х суток проводили пересев культур с заменой 300 мл среды и добавлением цитокинов в тех же концентрациях. На седьмые сутки клетки пересевали в новую среду и добавляли активаторы созревания: ФНОа (Sigma, USA) в концентрации 10 нг/мл, sCD154 (Biosource, USA) - 1 мкг/мл, ЛПС (ГИСК им. Тарасевича Л.А., Москва) - 1 мкг/мл. По окончании инкубации (в общей сложности 9 суток) часть клеток (2 - 3*105) отбирали для цитометрического

исследования фенотипа. Оставшиеся клетки использовались для определения их функциональных свойств. Для исследования модулирующего влияния ИЛ-10 на свойства ДК использовался рекомбинантный человеческий ИЛ-10 (Biosource, USA) в двух рабочих концентрациях 20 нг/мл и 100 нг/мл. Получение дендритных клеток в короткой схеме культивирования осуществляли способом, описанным для классической схемы. Только в данном случае сроки культивирования сокращались вдвое. Для исследования фенотипа полученных дендритных клеток в работе использовался метод лазерной проточной цитофлюориметрии. Клетки окрашивались моноклональными антителами, меченными флюорохромами. Окрашенные клетки анализировали на проточном цитофлюориметре FacsCalibur (BD Biosciences Immunocytometry Systems, USA) в режиме двухцветной цитометрии. Результаты обрабатывали с помощью программного обеспечения CellQuest и WinMDI 2.8. Оценивался процент клеток, несущих маркер и плотность экспрессии данного маркера по геометрической средней яркости свечения окрашенных клеток.

Функциональные свойства дендритных клеток определяли по их способности стимулировать пролиферацию аллогенных лимфоцитов и усиливать продукцию интерферона-у Т-клетками, а также по способности индуцировать продукцию различных цитокинов (ИЛ-4 и ИЛ-5) лимфоцитами в смешанной лейкоцитарной реакции (СЛР). Для этого дендритные клетки смешивали с аллогенными лимфоцитами крови взрослых здоровых доноров в различных соотношениях (1:25-^-1:200). Лимфоциты получали путем смыва неадгезировавшихся мононуклеарных клеток после культивирования МНПК в полистироловых планшетах в течение 2-3 часов при 37 °С и 5 % С02. В качестве контроля использовали мононуклеарные клетки без добавления дендритных клеток или стимуляторов. В качестве положительного контроля использовали мононуклеарные клетки, стимулированные митогеном конканавалином А (КонА в концентрации 7,5 мкг/мл). Схемы СЛР были

нескольких типов: обычная CJIP, CJIP-одновременно, двухэтапная СЛР. Обычная СЛР проводилась для выявления стимулирующей способности получаемых при различных условиях дендритных клеток. В СЛР-одновременно оценивалось конкурирующее взаимодействие обычных и модулированных ДК. Двухэтапная СЛР применялась для выявления особенностей воздействия модулированных ДК на аллогенные лимфоциты.

Во всех экспериментах пролиферативный ответ аллогенных лимфоцитов оценивали по включению в ДНК пролиферирующих клеток меченного тритием метилтимидина, который добавляли в лунки на сроки 96 - 120, 120 — 144 или 168 - 192 часа культивирования. Анализ концентрации ИЛ-lß и ИЛ-10 в надосадках культур ДК; ИЛ-4, ИЛ-5 и ИНФ-гамма в надосадках из СЛР проводили с использованием наборов реагентов для твердофазного иммуноферментного анализа «ИФА-ИЛ-10» (Цитокин, С.-Петербург) и «ИНФ-гамма-, ИЛ-4-, ИЛ-1 ß-ИФА-Бест» (Вектор-Бест, Новосибирск), «IL-5 ELISA KIT» (Invitrogen, USA).

Для статистической обработки данных использовали критерий Стьюдента. Данные на рисунках представлены в виде М±ш.

Результаты исследования и их обсуждение

Культивирование моноцитов взрослых доноров и новорожденных детей в течение 2 суток в присутствии ИЛ-4 и ГМ-КСФ с последующей активацией ФНОа (fastflK), а также при культивировании в течении 8 суток (ДК), приводит к изменению морфологических, фенотипических и функциональных свойств клеток. Изменения морфологии касаются, прежде всего, размера клеток и степени гранулированное™ цитоплазмы.

Сравнение экспрессии мембранных молекул на ДК-4 и fastflK-4 (клетки, стимулированные в ходе созревания интерлейкином-4) выявляет признаки фенотипической незрелости fas^K-4 как у детей, так и у взрослых. Так, fastflK-4 взрослых, несмотря на высокий уровень экспрессии HLA-DR и CD86, отличаются практически полным

отсутствием СБ80, низким уровнем экспрессии С083 и сохранением экспрессии моноцитарного маркера СБ 14 на существенной части клеток (рис. 1).

РаэЩК-Д, полученные из моноцитов пуповинной крови демонстрируют необычное сочетание фенотипических признаков. Сохранение СБ 14 на большем количестве клеток свидетельствует о задержке их созревания. В то же время, эти клетки отличаются повышенным уровнем экспрессии костимулирующей молекулы СС86 в отличие от ДК, культивировавшихся в течение 8 суток.

ША-ОИ СОМ С080 С083 С086

ША-ОЯ СР14

Рис. 1. Сравнение экспрессии маркеров дендритных клеток на fastДK-4 и ДК-4 взрослых и детей. Серые диаграммы - fastДK-4, черные - ДК-4. Звездочкой обозначены статистически значимые отличия Газ1ДК-4 от ДК-4 (р<0,05) в непарном т-тесте. Единицы измерения - процент клеток, несущих соответствующий маркер.

Более детальное рассмотрение фенотипических свойств полученных клеток было проведено при использовании различных условий созревания дендритных клеток. Наиболее характерные различия особенностей созревания дендритных клеток новорожденных и взрослых выявляются при культивировании клеток в присутствии глюкокортикоидов и ИЛ-7.

Экспрессия молекулы НЬА-ОЯ статистически достоверно повышается на fastДK-4, росших как без дексаметазона, так и с дексаметазоном ^аБЩК-4-ДЕКС) по сравнению с моноцитами. РазЩК-7 и ГазЩК-7-ДЕКС обладают значимо меньшим количеством клеток, экспрессирующих НЬА-ОЯ. Данный маркер экспрессируется не более чем на 85% Га$ЩК-7 и ГаБ(ДК-7-ДЕКС, что почти полностью соответствует экспрессии НЬА-ЭЯ на моноцитах (рис. 2).

В экспрессии моноцитарного маркера СО 14 наблюдается иная картина (рис. 2). При культивировании со стимуляторами, количество экспрессирующих данный маркер клеток резко снижается и составляет в среднем 13% ГаБЩК-4; 18% ГазЩК-4-ДЕКС; 29% ГаэЩК-7 и, около 40% Га5ЩК-7-ДЕКС у взрослых. Как уже было отмечено выше, у новорожденных большее количество ГавЩК сохраняет экспрессию СО 14. Достоверно больше ГаБЩК-4 и ГазЩК-7 детей сохраняют на своей мембране С014 (32 и 43% соответственно). Введение в культуру дексаметазона нивелирует эти различия между клетками детей и взрослых за счет снижения экспрессии этого маркера на клетках детей. Плотность экспрессии НЬА-ОЯ зависит от типа стимулятора (ИЛ-7 или ИЛ-4), а также от добавления в среду дексаметазона. При использовании в качестве стимулятора ИЛ-7, показатель вМеап как для ГэбЩК взрослых, так и ГавЩК новорожденных является более низким по сравнению с клетками, в вариантах культур которых использовался ИЛ-4 (рис. 3). Добавление дексаметазона приводит к увеличению плотности экспрессии НЬА-ОЯ на всех типах Гая^ЦК детей и взрослых. Причем наибольшую плотность молекул НЬА-ОЯ удается достичь с помощью дексаметазона в культурах ГэбЩК новорожденных, стимулированных ИЛ-7.

мон

ДК-4 ДК-4 ДК-7 ДК-7 мон ДК-4 1 ДК-4 ДК-7 ДК-7

ДЕКС ДЕКС | ДЕКС ДЕКС

ША-Р!*

0014

Рис. 2. Количество трехсуточных, активированных ФНОа ГавЩК (%), несущих на своей поверхности молекулы НЬА-БЯ и СО 14. Статистически значимые отличия в парном т-тесте: ДК 4/ДК 7 - *; ДЕКС/без ДЕКС - ¿; ДК/моноцитарный контроль - (р < 0,05); дети/взрослые - £ .

Культивирование моноцитов в присутствии стимуляторов дифференцировки в течение 2 суток, с последующей активацией ФНОа в течение суток недостаточно для получения полноценно зрелых ДК. Экспрессия СБ83 остается на уровне моноцитарного контроля или незначительно отличается от него практически во всех вариантах культур fastДK взрослых, независимо от применения ИЛ-4 или ИЛ-7 при стимуляции созревания. Этого нельзя сказать о fastДK новорожденных. За трое суток культивирования клеток, экспрессия СЭ83 повышается более чем на трети ГаэВДК новорожденных детей, что заметно отличает их от {азЩК взрослых.

1200

1000

НТА-Ш

Рис. 3. Плотность экспрессии молекул СО 14 и НЬА-ОЯ на мембране ГаэЩК (ОМеап). Статистически значимые отличия в парном т-тесте: ДК 4/ДК 7 - ДЕКС/без ДЕКС - Л; ДК/моноцитарный контроль - (р < 0,05).

Данная закономерность прослеживается во всех вариантах культур ГаБЩК новорожденных, т.е. при культивировании моноцитов в столь короткие сроки со стимуляторами происходит более быстрое фенотипическое созревание (жЩК новорожденных. Влияние ИЛ-7 на экспрессию С083 по сравнению с ИЛ-4 оказывается менее выраженным (рис.

4).

Моноциты ДК-4

ДК-4ДЕКС

ДК-7

ДК-7ДЕКС

Рис. 4. Количество £аБЩК, имеющих на своей мембране молекулу С083. Статистически значимые отличия в парном т-тесте: дети/взрослые - А (р < 0,05); ДК 4/ДК 7 - ДЕКС/без ДЕКС - Д (р < 0,01); ДК/моноцитарный контроль - . (р < 0,05).

Необычным оказывается действие дексаметазона на экспрессию С083. Дексаметазон вызывает достоверное снижение экспрессии СЭ83 на ГаэЩК детей, стимулированных ИЛ-4, при этом, не оказывая никакого влияния на fastДK-7 (рис. 4)

Функциональные свойства дендритных клеток новорожденных и взрослых при культивировании в течение 3 суток практически не различаются (рис. 5). Как и следовало ожидать, наибольшая продукция ИФНу аллогенными Т-лимфоцитами наблюдалась в смешанной лейкоцитарной реакции (СЛР), где применялись ГазЩК-4.

без ОС Моноциты ДК4

ДК4ДЕКС ДК7 ДК7ДЕКС

Рис. 5. Концентрация ИФНу в супернатантах культур клеток в СЛР при взаимодействии fastДK и аллогенных лимфоцитов. Дендритные клетки культивировались с ИЛ-4 и ГМ-КСФ в течение 2 суток и активированы ФНОа в течение одних суток. Длительность СЛР 96 часов. Статистически значимые отличия в парном т-тесте: отличия от лимфоцитарного контроля -; отличия от моноцитарного контроля - О ДЕКС/без ДЕКС - Ь (р < 0,05). Соотношение дендритных клеток и лимфоцитов составляло 1:50.

При использовании ГазЩК-7 уровень продукции ИФНу, как правило, был почти вдвое ниже. Добавление в среду дексаметазона снижало стимулирующую способность ГаэОДК-ДЕКС практически до уровня моноцитарного контроля, однако, продукция ИФНу в этих вариантах культур была несколько выше, чем в культурах нестимулированных лимфоцитов. Митогенная активность fastДK-4 и fastДK-7 была значительно выше, чем у моноцитов, не стимулированных цитокинами.

2500

2000

1500

1000

500

Контроль Моноциты ДК-4

ДК-4ДЕКС

ДК-7

ДК-7ДЕКС

Рис. 6. Индукция пролиферативного ответа у аллогенных лимфоцитов в СЛР посредством fastДK, активированных ФНОа. Длительность СЛР четверо суток, Н3-метка добавлена в конце 3-х суток. Статистически значимые отличия в парном т-тесте: - отличия от лимфоцитарного

контроля; -' - от моноцитарного контроля; — -ДЕКС /без ДЕКС, 4/&!йДК-7.

Применение ИЛ-7 в качестве стимулятора созревания дендритных клеток демонстрирует сниженные функциональные свойства fastДK-7 по сравнению с fastДK-4, однако статистически данный факт подтверждается только на примере СайЩК новорожденных. Применение дексаметазона нивелирует эти различия и резко снижает митогенную активность fastДK (рис. 6).

В данной работе наряду с изучением способности получаемых дендритных клеток к индукции пролиферации и интерферонпродукции у аллогенных Т-клеток, исследование функциональных свойств ДК коснулось продукции самими дендритными клетками функционально значимых

цитокинов. Наиболее интересные результаты получены при сравнении продукции ИЛ-10 у взрослых и детей в краткосрочных культурах ГавЩК (рис. 7).

2 с.к. Зс.к. без Зс.к. ФНО 3 с.к. Зс.к. ЛПС 3 с.к. смесь стимула зС0401.

стимупа 500401

иМон вДК-4 гаДК-4-ДЕКС гаДК-7 вДК-7-ДЕКС

Рис. 7. Продукция ИЛ-10 (пг/мл) моноцитами (Мон) и ДК новорожденных и взрослых. Значимые различия показателей детей и взрослых обозначены - А отличия ДК от нестимулированных моноцитов - Л-, I достоверный эффект действия дексаметазона - * (р<0,05 в парном т-тесте).

Незрелые fastflK взрослых продуцируют значительные количества ИЛ-10 - цитокина, который, наряду с другими свойствами незрелых ДК, обуславливает их толерогенный потенциал. Наибольшая концентрация этого цитокина обнаруживалась в двухсуточных культурах fastflK-4. FastflK-7 взрослых продуцируют гораздо меньше ИЛ-10 в отличие от fastflK-4. В то же время, моноциты и незрелые ДК новорожденных оказались самыми слабыми продуцентами ИЛ-10. Дексаметазон на этом этапе созревания угнетал продукцию ИЛ-10 дендритными клетками детей и взрослых.

После добавления ФНОа, sCD154, ЛПС или их смеси ситуация с продукцией ИЛ-10 заменялась на зеркально противоположную: fastflK детей и взрослых, ранее подвергавшиеся действию дексаметазона, начинали синтезировать чрезвычайно большие количества ИЛ-10, тогда как продукция ИЛ-10 в необработанных дексаметазоном культурах fastflK оставалась незначительной или прекращалась вовсе.

Дефицит продукции ИЛ-10 незрелыми ДК новорожденных может являться одним из факторов, создающих основу процесса развертывания периферического отдела иммунной системы - бурной поликлональной пролиферации Т-клеток, регистрируемой в раннем детском возрасте. ДК новорожденных, подвергавшиеся действию дексаметазона, после второго этапа созревания продуцируют значительные количества ИЛ-10. Полученные результаты навели нас на предположение, что эти функциональные особенности могут придать модулированным дексаметазоном дендритным клеткам новорожденных выраженные толерогенные свойства.

Для выявления функциональных особенностей дендритных клеток

новорожденных, свойства которых модулированы, т.е. изменены в процессе

стимуляции дифференцировки и созревания из моноцитов, нами

применялись две оригинальных модели взаимодействия клеток in vitro.

Применялась модель контакта аллогенных лимфоцитов одновременно с

двумя типами дендритных клеток: ДК-4 и ДК-4-ДЕКС/ДК-4-ИЛ-10; вторая

модель представляла собой последовательное взаимодействие лимфоцитов сначала с модулированными ДК, а затем в эти культуры добавлялись обычные ДК, сингенные модулированным. В серии данных экспериментов нами использовались как трехсуточные, так и восьмисуточные культуры дендритных клеток. Наиболее выраженные различия между функциональными свойствами дендритных клеток новорожденных и взрослых обнаружены в экспериментах с использованием восьмисуточных культур ДК.

Одновременное использование обычных и модулированных интерлейкином-10 дендритных клеток не оказывает достоверного влияния на пролиферацию аллогенных лимфоцитов, а зачастую лимфоциты пролиферируют несколько активнее именно в культурах с одновременным добавлением обычных ДК и ДК-ИЛ-10. Результаты анализа пролиферации в СЛР, где в качестве стимулирующих антигенпрезентирующих клеток использовалась смесь обычных ДК и ДК-ДЕКС, также не выявили ожидаемого снижения пролиферативного ответа лимфоцитов. Нет различий и в зависимости от выбора типа активатора дендритных клеток (рис. 8).

ДК-ДЕКС детей при одновременном внесении вместе с обычными ДК не снижают продукции ИФНу. В то же время, продукция ИФНу в культурах СЛР с одновременным использованием ДК и ДК-ДЕКС взрослых доноров снижается практически в два раза, по сравнению с обычными ДК (рис. 9). Данное явление регистрируется при анализе продукции ИФНу при использовании ФНОа в качестве активатора дендритных клеток. Применение ЛПС нивелирует подобные различия.

Рис. 8. Пролиферативный ответ аллогенных лимфоцитов в СЛР-одновременно с использованием обычных и модулированных ДК, культивирование которых проходило в течение 8 суток. По оси ординат -индексы подавления пролиферации. Звездочкой обозначено статистически достоверное отличие от вариантов культур, в которых в качестве стимулирующих клеток использовались только обычные ДК. При р<0,05.

Рис. 9. Продукция ИФНу в культурах СЛР-одновременно. ДК культивировались в течении 7 суток в присутствии ИЛ-4 и ГМ-КСФ. В соответствующие варианты культур были добавлены дексаметазон и ИЛ-10. Активация дендритных клеток на втором этапе созревания проводилась ФНО а и ЛПС в течение одних суток. СЛР длилась 3 суток. Звездочкой обозначено статистически достоверное отличие от ДК. р<0,05.

Оценка свойств дендритных клеток новорожденных и взрослых

осуществлялась также по результатам оригинальной модификации

смешанной лимфоцитарной реакции - в двухэтапной СЛР. Для этого ДК

получали с помощью культивирования моноцитов с ИЛ-4 и ГМ-КСФ с

последующей активацией смесью ФНОа и ЛПС. В качестве модуляторов

использовались ИЛ-10 и дексаметазон. ИЛ-10 использовался в концентрации

20 нг/мл (ДК-ИЛ-10(20)) и 100 нг/мл (ДК-ИЛ-Ю(ЮО)). На первом этапе СЛР

к аллогенным лимфоцитам добавляли обычные, стимулирующие ДК или модулированные ДК, толерогенные свойства которых исследовались. Смешанные культуры растили 5 суток. Затем к лимфоцитам, росшим как с обычными, так и с модулированными ДК, повторно добавляли обычные стимулирующие ДК. ДК, добавляемые в одну культуру на первом и втором этапе, были сингенными и, соответственно, презентировали лимфоцитам одни и те же наборы антигенов. Для описания процессов, происходящих на первом этапе СЛР, использовали параллельный засев обычной одноэтапной 5-суточной СЛР без повторной стимуляции. Второй этап СЛР нами применялся для контроля изменений функций лимфоцитов после их первичного контакта с модулированными ДК.

Культивирование лимфоцитов с ДК-ИЛ-10 и незрелыми ДК не снижало способности лимфоцитов к ответу на повторную стимуляцию (рис. 10). В то же время, контакт лимфоцитов с ДК-ДЕКС существенно снижал их возможность к ответу на обычные ДК: концентрация ИФНу в культурах росших с ДК-ДЕКС на первом этапе СЛР была в 2 раза ниже, чем в культурах, росших с обычными ДК. Различий между ДК взрослых и ДК новорожденных в плане стимуляции продукции ИФНу в двухэтапной СЛР не выявлено.

Повторная стимуляция лимфоцитов, контактировавших на первом этапе с ДК-ИЛ-Ю(ЮО) вызывает размножение, в 1,5 раза меньшее, чем в культурах стимулированных обычными ДК на первом этапе СЛР. Это различие характерно как для ДК взрослых, так и ДК детей. Модулирование ДК малыми дозами ИЛ-10 (20 нг/мл) не придает им толерогенных свойств. Более того, внесение ДК-ИЛ-10(20) новорожденных на первом этапе СЛР не снижает, а достоверно увеличивает способность лимфоцитов отвечать на повторную стимуляцию.

6000

5000

4000

3000

2000

1000

имп/мин

Я Взрослые В Дети

Контроль

ДК+ИЛ-10(20) ДК+ИЛ-10(100) ДЕКС

★

г X 1

Контроль ¡ДК ДК ДКИЛ-10 {20} ДКИЛ-Ю(ЮО) ДКДекс

Рис. 10. Результат двухэтапной СЛР. Ответ аплогенных лимфоцитов на повторное добавление стимулирующих ДК. Верхняя диаграмма -пролиферация, нижняя - продукция ИФНу (рассчитана в индексах подавления). Звездочкой обозначено статистически достоверное отличие от ДК (положительный контороль); на верхней диаграмме стрелкой обозначено достоверное отличие значений пролиферации лимфоцитов в СЛР при взаимодействии с ДК детей от взаимодействия с ДК взрослых. р<0,05.

После контакта с ДК-ДЕКС на первом этапе СЛР, лимфоциты при повторном стимулировании снижают пролиферативную активность. Уровень пролиферации этих культур снижен почти в 2 раза. Здесь также не наблюдается различий в свойствах дендритных клеток детей и взрослых (рис. 10).

Выявленные особенности ДК новорожденных могут иметь непосредственное отношение к специфическим для периода новорожденное™ процессам формирования периферического отдела иммунной системы. Поскольку в экспериментах, описанных в данной работе, в условиях in vitro получаемые модулированные ДК новорожденных приобретают менее выраженный толерогенный характер функциональных свойств, то можно предположить, что эта особенность имеет отношение к реакциям гомеостатического контроля in vivo. Вероятно, у новорожденных имеется "лояльный" контроль размножения Т-лимфоцитов на периферии со стороны дендритных клеток. При этом, как показано в экспериментах с использованием одновременного добавления модулированных и обычных ДК, толерогенные свойства дендритных клеток новорожденных не препятствуют клональной пролиферации Т-лимфоцитов. Последовательное взаимодействие лимфоцитов со стимулирующими ДК выявляет снижение отвечающей способности Т-клеток. Данный факт, возможно, находит свое отражение in vivo в ограничении в первую очередь реакций клеточного иммунного ответа во избежание развития аутоиммунных процессов, опосредованных активацией аутореактивных клонов Т-лимфоцитов, которые избежали отрицательную селекцию в тимусе и размножились в ходе посттимической пролиферации на периферии

Выводы

1. Показано, что фенотипическое созревание ДК новорожденных детей обладает определенными особенностями. При изучении динамики экспрессии мембранных молекул ДК новорожденных одновременно демонстрируют признаки фенотипической зрелости (высокая экспрессия СБ83) и признаки отставания в развитии (длительное сохранение СБ 14 на большой части клеток), что возможно свидетельствует о переходном функциональном состоянии ДК новорожденных между моноцитами/макрофагами и миелоидными ДК взрослого организма.

2. Выявлено, что добавление к созревающим ДК дексаметазона подавляет экспрессию молекул костимуляции, но значительно повышает плотность экспрессии молекул НЬА-ОЯ. Усиление экспрессии НЬЛ-БЯ наиболее выражено на ДК новорожденных, стимулированных ИЛ-7 и ГМ-КСФ.

3. Выявлен низкий дифференцировочный потенциал ИЛ-7 в качестве стимулятора созревания ДК, что свидетельствует о практически полном исключении этого цитокина из необходимых факторов созревания дендритных клеток.

4. Показано, что незрелые ДК новорожденных, в отличие от ДК взрослых, продуцируют крайне мало ИЛ-10. Действие дексаметазона увеличивает способность ДК новорожденных и взрослых продуцировать ИЛ-10 после активации ЛПС, 5СБ154 и ФНОа.

5. Показано, что ДК детей и взрослых эффективно стимулируют пролиферацию и продукцию Т-лимфоцитами ИФНу и ИЛ-5. Добавление дексаметазона или ИЛ-10 резко снижает стимулирующие свойства ДК.

6. Показано, что модулированные дексаметазоном ДК взрослых при одновременном конкурентном взаимодействии с обычными ДК подавляют стимулирующее действие последних на продукцию ИФНу аллогенными Т-лимфоцитами. ДК новорожденных подобными эффектами не обладают.

Список опубликованных работ по теме диссертации

1. Талаев В.Ю., Заиченко И.Е., Бабайкина О.Н, Ломунова М.А., Цатуров М.Э., Талаева Е.Б. Совместное действие дексаметазона и интерлейкина-7 на созревание Т-лимфоцитов и дендритных клеток новорожденных и взрослых in vitro. Тезисы доклада на VI Съезде аллергологов и иммунологов СНГ, Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов и III Конференции по иммунотерапии, (Москва 11-13 сентября 2006 г.), М., - С. 183.

2. Талаев В.Ю., Цатуров М.Э., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А., Никонова М.Ф., Талаева Е.Б., Матвеичев A.B. Действие интерлейкина-7 и дексаметазона на созревание моноцитарных дендритных клеток новорожденных. Иммунология. - 2007. - Т. 28. - № 4.-С. 208-211.

3. Талаев В.Ю., Цатуров М.Э., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А., Никонова М.Ф., Талаева Е.Б., Матвеичев A.B. Функциональные свойства моноцитарных дендритных клеток новорожденных. Тезисы доклада на 2-ой республиканской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты», г. Сочи с 15 по 18 мая 2007 года. // Russian Journal of Immunology. - 2007 - V. 9. - Suppl. 4. - P. 116-117.

4. Матвеичев A.B., Цатуров M. Э., Бабайкина О.Н., Ломунова М. А., Талаев В. Ю., Добротина Н. А. Некоторые аспекты влияния дексаметазона на дендритные клетки. Тезисы доклада на научной конференции Биосистемы организация поведение управление Н. Новгород 12-13 апреля 2007. Материалы конференции. - С. 53-54.

5. Цатуров М.Э., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А., Матвеичев A.B. Особенности созревания дендритных клеток новорожденных. Тезисы доклада на научной конференции молодых ученых «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (X Всероссийская конференция

«Человек и его здоровье» 20 - 21 апреля 2007, С-Петербург). С-Петербург, - С. 490-491.

6. Талаев В.Ю., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А., Цатуров М.Э., Матвеичев A.B., Никонова М.Ф., Талаева Е.Б. Функциональные свойства моноцитарных дендритных клеток новорожденных в краткосрочных культурах. Иммунология. - 2008. - Т. 29. - № 3. - С. 141-147.

7. Талаев В.Ю., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А., Цатуров М.Э., Матвеичев A.B., Никонова М.Ф.*, Талаева Е.Б. Функциональные свойства моноцитарных дендритных клеток новорожденных в краткосрочных культурах. Иммунология. - 2008. - Т. 29. - № 3. - С. 141-147.

8. Цатуров М.Э., Матвеичев A.B., Талаева М.В., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А., Талаев В.Ю. Свойства дендритных клеток, модулированных в ходе созревания дексаметазоном. Статья в сборнике «Научное обеспечение противоэпидемической защиты населения», Н.Новгород, - 2009, - С. 199 -202.19

9. Талаев В.Ю., Цатуров М.Э., Матвеичев A.B., Талаева М.В., Бабайкина О.Н., Ломунова М.А., Заиченко И.Е. Миелоидные дендритные клетки как объект исследований в инфекционной иммунологии. Медицинский альманах, - 2009, - № 2(7) - С. 47-50.

10. Цатуров М.Э., Талаев В.Ю., A.B. Матвеичев, Талаева М.В., Бабайкина О.Н., Заиченко И.Е., Ломунова М.А. Толерогенные дендритные клетки - созревание и функции в экспериментах in vitro Медицинский альманах - 2010 - № 3 (11), - С. 263-265.

11. Матвеичев A.B., Талаев В.Ю., Ломунова М.А., Талаева М.В., Бабайкина О.Н., Цатуров М.Э., Заиченко И.Е. Роль дендритных клеток в предотвращении иммунологического конфликта матери и плода. Медицинский альманах - 2010 - № 3 (11). - С. 273-276.

12. Талаев В.Ю., Матвеичев А.В., Ломунова М.А., Бабайкина О.Н., Заиченко И.Е., Цатуров М.Э., Талаева Е.Б. Действие клеток плацентарного барьера на созревание дендритных клеток in vitro. Иммунология, - 2010, - Т. 31, - №3, - С. 125-131.

13.Taiayev V.Yu., Matveichev A.V., Lomunova M.A., Talayeva M.V.,Tsaturov M.E., Zaichenko I.Ye., Babaykina O.N., The effect of human placenta cytotrophoblast cells on the maturation and T-cell stimulating ability of dendritic cells in vitro. Clin. Exp. Immunol., 2010, vol. 162 (1), p. 91-99.

Список сокращений

ГКГ - главный комплекс гистосовместимости

ГМ-КСФ - гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор

ДЕКС - дексаметазон ДК - дендритные клетки ИЛ - интерлейкин ИФН - интерферон КЛ - клетки Лангерганса ЛПС - липополисахарид

М-КСФ - макрофагальный колониестимулирующий фактор пДК - плазмацитоидные дендритные клетки ТФР - трансформирующий фактор роста ФТ - фактор транскрипции

Подписано в печать 21.10.2010г. Печать цифровая. Усл.п.л.1,5 Тираж 100 экз. Заказ № 777. Отпечатано в типографии «Реглет» 119526, г.Москва, пр-т Вернадского,39 (495) 363-78-90; www.reglet.ru

Оглавление диссертации Цатуров, Максим Эдуардович :: 2010 :: Москва

Введение.

1. Обзор литературы.

2. Материалы и методы исследований.

3. Результаты исследований.

3.1. Методика получения ДК in vitro. Культивирование клеток при различных условиях стимуляции созревания.

3. 2. 1. Использование различных способов стимуляции созревания ДК в краткосрочных культурах.

3.2.2. Свойства fas^K, полученных с использованием ИЛ-7 и дексаметазона.

3.2.3. Использование растворимой формы рекомбинантного CD154 и липополисахарида Salmonella typhi в качестве активаторов дозревания fastflK.

3.2.4. Продукция различных цитокинов дендритными клетками, культивировавшимися в течение 3 суток при различных условиях стимуляции созревания.

3.3. Функциональные свойства модулированных дендритных клеток взрослых и новорожденных в различных моделях взаимодействия с Т-лимфоцитами.

3.3.1. Одновременное культивирование обычных fast^K, и fas^K модулированных в ходе созревания дексаметазоном в смешанной лейкоцитарной реакции.

3.3.2. Фенотипическая характеристика ДК детей и взрослых, полученных при традиционных условиях культивирования.

3.3.3. Модель взаимодействия дендритных клеток с модулированными свойствами и дендритных клеток с обычными свойствами, культивировавшимися в течение 8 суток.

3.3.4. Последовательная стимуляция аллогенных лимфоцитов модулированными и обычными дендритными клетками, культивировавшимися в течение 8 суток.

Введение диссертации по теме "Клиническая иммунология, аллергология", Цатуров, Максим Эдуардович, автореферат

Ход иммунных реакций, а также нормальное функционирование иммунной системы вне иммунного ответа находится под контролем многих молекулярных и клеточных систем. Эти системы призваны обеспечить оптимальный запуск и протекание реакции на антиген и при этом, не дать перейти этому процессу в русло различных системных отклонений, результатом которых может стать развитие аутоиммунной агрессии к собственным клеткам и тканям. Центральную роль в инициации первичного иммунного ответа играют дендритные клетки (ДК) - наиболее активные и высокоспециализированные антигенпрезентирующие клетки организма. Кроме инициации иммунных реакций немаловажной является роль ДК в регуляции иммунных процессов в организме и поддержания гомеостаза иммунокомпетентных клеток. ДК являются важнейшими участниками системы контроля иммунного ответа, так как основа контроля - центральная и периферическая толерантность как к ауто-, так и к аллоантигенам, зависит прежде всего от эффективной работы именно этих клеток.

Исследования механизмов регуляции процессов созревания ДК при различных условиях культивирования необходимы для последовательного понимания процессов отклонений в работе иммунной системы человека в целом и, особенно, на ранних этапах развития ребенка. Полученные результаты вносят вклад в развитие знания о выработке и поддержании аутотолерантности к собственным антигенам. В первую очередь это необходимо для понимания патогенеза аутоиммунных заболеваний и разработки новых методов лечения этих тяжелых и социально значимых заболеваний. Исследование особенностей созревания толерогенных дендритных клеток у детей необходимо для понимания механизмов аутоиммунных заболеваний с ранним дебютом - это аутоиммунные тиреоидиты, поражения желудка, печени, глаз, васкулиты. Результаты этих исследований могут прояснить причины атипично ранних проявлений таких заболеваний, как инсулинозависимый сахарный диабет, ревматоидный артрит, неспецифический язвенный колит, болезнь Крона. Общее количество детей с такими заболеваниями достигает единиц на тысячу детского населения. Следует отметить, что в мире отмечается рост частоты встречаемости аутоиммунных заболеваний и расширение возрастных рамок начала болезни (как омоложение, так и повзросление людей с дебютом аутоиммунной патологии). Перечисленные заболевания являются тяжелыми патологиями с высокой степенью инвалидизации или смертности. Изложенные выше положения определяют актуальность и социальную значимость данной работы.

Цель и задачи исследования

Цель работы:

На основании вышеизложенного целью настоящей работы явилось изучение особенностей функционального созревания дендритных клеток новорожденных детей при различных условиях культивирования, а также под действием иммуномодулирующих агентов, способных изменить функциональные свойства ДК в плане выработки толерогенных свойств in vitro.

Для решения поставленной проблемы были сформулированы следующие задачи.

Задачи:

3. Провести сравнительный анализ продукции цитокинов дендритными клетками новорожденных и взрослых.

Научная новизна

Были выявлены статистически значимые отличия между фенотипическими и функциональными свойствами ДК, полученных из моноцитов пуповинной крови новорожденных и венозной крови взрослых здоровых доноров. Показан разный уровень экспрессии на мембране дендритных клеток функционально значимых маркеров, а также выявлены различия в продукции цитокинов дендритными клетками в зависимости от стадии созревания и условий культивирования. Показан сложный характер влияния синтетического глюкокортикоида дексаметазона на уровень продукции интерлейкина-10 дендритными клетками.

Практическая значимость

Проведенные исследования механизмов регуляции процессов созревания ДК при различных условиях культивирования необходимы для разработки методов получения ДК со специфическими иммуностимулирующими или супрессорными свойствами. Разработанные методики получения клеток с заданными свойствами и полученные результаты могут быть использованы при оптимизации условий получения дендритно-клеточных препаратов для цитотерапии патологий как с недостаточностью иммунного ответа (онкологические заболевания), так и патологий, связанных, наоборот, с избыточной иммунной реакцией (аллергии, отторжение аллотрансплантанта). Толерогенные ДК могут найти применение в качестве основного инструмента при цитотерапии врожденных и приобретенных патологических срывов аутотолерантности организма к собственным антигенам.

Положения, выносимые на защиту:

Публикации

По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, из них 7 статей в научных журналах, принятых в официальный список ВАК, одна статья в иностранном журнале, 4 тезисов докладов, 1 статья в сборнике.

Основные материалы работы были доложены на: IV Съезде аллергологов и иммунологов СНГ Российском национальном конгрессе аллергологов и иммунологов и III Конференции по иммунотерапии, Москва 11 - 13 сентября 2006; на научной конференции молодых ученых «Фундаментальная наука и клиническая медицина» (X Всероссийская конференция «Человек и его здоровье») Санкт-Петербург. 20-21 апреля 2007; на научной конференции Биосистемы организация поведение управление Н. Новгород 12-13 апреля 2007; на 2-ой республиканской конференции «Иммунология репродукции: теоретические и клинические аспекты», г. Сочи с 15 по 18 мая 2007 года.

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 150 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, раздела «Материалы и методы», раздела «Результаты исследований», раздела «Обсуждение полученных результатов», выводов и списка цитируемой литературы, который содержит 5 отечественных и 187 зарубежных источника. Диссертация иллюстрирована 29 рисунками.

Заключение диссертационного исследования на тему "Особенности дендритных клеток, полученных при различных условиях стимуляции моноцитов новорожденных детей in vitro"

Выводы

2. Выявлено, что добавление к созревающим ДК дексаметазона подавляет экспрессию молекул костимуляции, но значительно повышает плотность экспрессии молекул НЬЛ-БЯ. Усиление экспрессии НЬА-ОК наиболее выражено на ДК новорожденных, стимулированных ИЛ-7 и ГМ-КСФ.

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Цатуров, Максим Эдуардович

1. Пащенков М.В., Пинегин Б.В. Физиология клеток врожденной иммунной системы: дендритные клетки//Иммунология. 2006, -27 (6).-С. 368-378

2. Симбирцев А.С. Толл-белки: специфические белки неспецифического иммунитета//Иммунология. 2005 - 26 (6). -С. 368-378

3. Ярилин А.А. Иммунный синапс как структурная основа презентации антигена//Иммунология. 2003 - 24 (6). - С. 347-350

4. Ярилин А.А. Основы иммунологии. Изд-во НГМА. 1999 г.

5. Abramson J., Giraud М., Benoist С., Mathis D. Aire's partners in the molecular control of immunological tolerance//Cell. 2010. - Vol. 140(1).-P. 123-35

6. Alexander Т., Prechtel В., Nadine M., Alexandros A. CD83 Knockdown in Monocyte-Derived Dendritic Cells by small Interfering RNA Leads to a Diminished T Cell Stimulation//J. Immunol. 2007. -Vol. 178. P. 5454-5464

7. Allman D., Dalod M., Asselin-Paturel C., Delale Т., Robbins S.H. Ikaros is required for plasmacytoid dendritic cell differentiation//Blood. 2006. - Vol. 108. P. 4025-4034

8. Anderson K.L., Perkin H., Surh C.D., Venturini S., Maki R.A. Transcription factor PU. 1 is necessary for development of thymic and myeloid progenitor-derived dendritic cells//J. Immunol. 2000. - Vol. 164. P. 1855-1861

9. Apostolou I., Sarukhan A., Klein L., von Boehmer H. Origin of regulatory T cells with known specificity for antigen//Nat.Immunol. -2002. Vol. 3. P. 756-763

10. Asselin-Paturel C., Boonstra A., Dalod M., Durand I., Yessaad N. Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology// Nat. Immunol. 2001. - Vol. 2. P. 11441150

11. Asselin-Paturel C., Boonstra A., Dalod M., Durand I., Yessaad N. Mouse type I IFN-producing cells are immature APCs with plasmacytoid morphology//Nat. Immunol. 2001. - Vol. 2. P. 11441150

12. Ayehunie S., Snell M., Child M., Klausner M. A plasmacytoid dendritic cell (CD123+/CD1 lc-) based assay system to predict contact allergenicity of chemicals//Toxicology. 2009. - Vol. 264(1-2). P. 1-9

13. Beinhauer B.G., McBride J.M., Graf P. et al. Interleukin 10 regulates cell surface and soluble LIR-2(CD85d) expression on dendritic cells resulting in T cell hyporesponsiveness in vitro//Eur. J. Immunol. -2004. Vol. 34. P. 74-80

14. Bendriss-Vermare N., Barthélémy C., Durand I., Bruand C., Dezutter-Dambuyant C. Human thymus contains IFN-alpha-producingCDllc(-), myeloid CDllc(+), and mature interdigitating dendritic cells//!. Clin. Invest. 2001. Vol. 107. P. 835-844

15. Benlagha K., Wei D.G., Veiga J., Teyton, L., Bendelac A. Characterization of the early stages of thymic NKT cell development. J. Exp. Med. 2005. Vol. 202. P. 485-492

16. Bjorck. P. (2001). Isolation and characterization of plasmacytoid dendritic cells from Flt3 ligand and granulocyte-macrophage colonystimulating factor-treated mice. Blood 98, 3520-3526.

17. Borkowski, T.A., Letterio, J.J., Fay C.L., Udey, M.C. (2004). A role for TGFbetal in langerhans cell biology. Further characterization of the epidermal Langerhans cell defect in TGFbetal null mice. J. Clin. Invest. 220, 575-581

18. Calderwood S.K., Theriault J., Gray PJ. Et al. Cell surface receptors for molecular chaperones//Methods. 2007. Vol. 43. P. 199-206

19. Cao T., Ueno H., Glaser C., Fay J.W. et al. Both Langerhans cells and interstitial DC cross-present melanoma antigens and efficiently activate antigen-specific CTL//Eur J Immunol. 2007. Vol. P. 2657-67

20. Carter Robert W, Clare Thompson, Delyth M. et al. Preferential Induction of CD4+ T Cell Responses through In Vivo Targeting of Antigen to Dendritic Cell-Associated C-Type Lectin-1//The Journal of Immunology. 2006. Vol. 177. P. 2276-2284

21. Caux, C., Dezutter-Dambuyant, C., Schmitt, D., and Banchereau, J.(1992). GM-CSF and TNF-alpha cooperate in the generation of dendritic Langerhans cells. Nature 360, 258-261

22. Chang C. C., Ciubotariu R., Manavalan, J. S. et al. Tolerization of dendritic cells by T(S) cells: the crucial role of inhibitory receptors ILT3 and ILT4//Nat. Immunol. 2002. Vol. 3. P. 237-243

23. Chapuis F., Rosenzwajg M., Yagello M. et al. Differentiation of human dendritic cells from monocytes in vitro//Eur. J. Immunol. 1997. Vol. 27. P. 431

24. Chorny A, Gonzalez-Rey E, Fernandez-Martin A, Pozo D, Ganea D, Delgado M. Vasoactive intestinal peptide induces regulatory dendriticcells with therapeutic effects on autoimmune disorders. Proc Natl Acad Sci U S A. 2005;102:13562-13567

25. Christodoulides N., Dixon T., Schulz D. et al. Cross Reaction of Mannose Receptor in Anti-inflamatory Immunosuppressive Programme//J. Immunology. 2003. Vol. 137. P. 2345-2355

26. Collison LW, Workman CJ, Kuo TT, Boyd K, Wang Y, Vignali KM, Cross R, Sehy D, Blumberg RS, Vignali DA. The inhibitory cytokine IL-35 contributes to regulatory T-cell function. Nature 2007;450:566-569

27. Comeau M.R., Van der Vuurst de Vries A. Et al. CD123bright Plasmacytoid Predendritic Cells: Progenitors Undergoing Cell Fate Conversion?//The Journal of Immunology. 2002. Vol. 169. P. 75-83

28. Corcoran, L., Ferrero, I., Vremec, D., Lucas, K., Waithman, J., O'Keeffe, M., Wu, L, Wilson, A., and Shortman, K. (2003). The lymphoid past of mouse plasmacytoid cells and thymic dendritic cells. J. Immunol. 170, 4926-4932

29. Corinti S., Albanesi C., La Sala A. et al. Regulatory Activity of Autocrine IL-10 on Dendritic Cell Functions//.!. Immunology. 2001. Vol. 166. P. 4312-4318

30. Dakic, A., and Wu, L. (2003). Hemopoietic precursors and development of dendritic cell populations. Leuk. Lymphoma 44, 14691475

31. Dalloul AH, Patry,C, Salamero J, Canque B, Grassi F, Schmitt C Functional and phenotypic analysis of thymic CD34+CD la-progenitor-derived dendritic cells: predominance of CDla+ differentiation pathway. J Immunol. 1999 May 15;162(10):5821-8

32. De Smedt, T., Pajak, B., Muraille, E., Lespagnard, L., Heinen, E., De Baetselier, P., Urbain, J., Leo, O., and Moser, M. (1996). Regulation of dendritic cell numbers and maturation by lipopolysaccharide in vivo. J. Exp. Med. 184, 1413-1424

33. Delia Bella S., Nicola S., Timofeeva I. et al. Are interleukin-16 and thrombopoietin new tools for the in vitro generation of dendritic cells?//Blood. 2004. P. 4020-4028.

34. Dixon V., Shimoike T., Inoguchi T. et al. The meaning of serum levels of advanced glycosylation end products in diabetic nephropathy//Metabolism. 2001. Vol. 49. P. 1030 -1035

35. Oct;23 l(l-2):8-13. Epub 2004 Dec 19.

36. Dobano C., Rogers W.O., Gowda K., Doolan D.L. Targeting antigen to MHC Class I and Class II antigen presentation pathways for malaria DNA vaccines//Immunol Lett. 2007. Vol. 111. P. 92-102

37. Emmer P. M., van der Vlag J., Adema G. J. and Hilbrands L.B. // Dendritic cells activated by lipopolysaccharide after dexamethasone treatment induce donor-specific allograft hyporesponsiveness. // Transplantation. 2006. - Vol. 81. - P. 1451-1459

38. Engels FH, Kreisel D, Faries MB, Bedrosian I, Koski GK, Cohen PA, Czerniecki BJ Calcium ionophore activation of chronic myelogenous leukemia progenitor cells into dendritic cells is mediated by calcineurin phosphatase Leuk Res. 2000 0ct;24(10):795-804

39. Faunce D.E., Terajewicz A., Stein-Streilein J. In vitro-generated tolerogenic APC induce CD 8+ T regulatory cells that can suppress ongoing experimental autoimmune encephalomyelitis//.! Immunol. 2004. Vol. 172. P. 1991-1995

40. Fogg, D.K., Sibon, C., Miled, C., Jung, S., Aucouturier, P., Littman,D.R., Cumano, A., and Geissmann, F. (2006). A clonogenicbone marrow progenitor specific for macrophages and dendritic cells. Science 311, 83-87

41. Fujimoto Y, Tedder TF CD83: a regulatory molecule of the immune system with great potential for therapeutic application. J Med Dent Sci. 2006 Jun;53(2):85-93

42. Garrett W.C., Chen L.M., Kroschewski R. et. al. Developmental control of endocytosis in dendritic cells by Cdc42//Ceell. 2000. Vol. 102. P. 325-34

43. Gil-Torregrosa B.C., Lennon-Duménil A.M., Kessler B. et al. Control of cross-presentation during dendritic cell maturation// Eur J Immunol. 2004. Vol. 34. P. 398-407

44. Ginhoux, F., Tacke, F., Angeli, V., Bogunovic, M., Loubeau, M., Dai, X.M., Stanley, E.R., Randolph, G.J., and Merad, M. (2006). Langerhans cells arise from monocytes in vivo. Nat. Immunol. 7, 265273

45. Graham JP, Moore CR, Bishop GA Roles of the TRAF2/3 binding site in differential B cell signaling by CD40 and its viral oncogenic mimic, LMP1 J Immunol. 2009 Sep l;183(5):2966-73. Epub 2009 Aug 10

46. Guermonprez P., Valladeau J., Zitvogel L et al. Antigen presentation and T cell stimulation by dendritic cells//Annu. Rev. Immunology. 2002. Vol. 20. P. 621 667

47. Guerriero, A., Langmuir, P.B., Spain, L.M., and Scott, E.W. (2000). PU. 1 is required for myeloid-derived but not lymphoid-derived dendritic cells. Blood 95, 879-885

48. Hacker, C., Kirsch, R.D., Ju, X.S., Hieronymus, T., Gust, T.C., Kuhl, C., Jorgas, T., Kurz, S.M., Rose-John, S., Yokota, Y., and Zenke, M. (2003). Transcriptional profiling identifies Id2 function in dendritic cell development. Nat. Immunol. 4, 380-386

49. Hardy R., Vlassara H. Palace MR: Diabetes and advanced glycation endproducts//J. Intern. Med. 2000. Vol. 251. P. 87 101

50. Henri, S., Vremec, D., Kamath, A., Waithman, J., Williams, S., Benoist, C., Burnham, K., Saeland, S., Handman, E., and Shortman, K. (2001). The dendritic cell populations of mouse lymph nodes. J. Immunol. 167, 741-748

51. Herrmann T.L., Agrawal R.S., Connolly S.F. et al. MHC Class II levels and intracellular localization in human dendritic cells are regulated by calmodulin kinase II//J Leukoc Biol. 2007. Vol. 82. P. 686-99

52. Hill J. A., Ichim T. E. Immune Modulation by Silencing IL-12 Production in Dendritic Cells Using Small Interfering RNA//J. Immunology. 2003. Vol. 171. P. 691 -696

53. Hochrein, H., Shortman, K., Vremec, D., Scott, B., Hertzog, P., and O'Keeffe, M. (2001). Differential production of IL-12, IFN-alpha, and IFN-gamma by mouse dendritic cell subsets. J. Immunol. 166, 54485455.

54. Hofman, F.M., Danilovs, J.A., and Taylor, C.R. (1984). HLA-DR (Ia)-positive dendritic-like cells in human fetal nonlymphoid tissues.Transplantation 37, 590-594

55. Inaba K, Inaba M Antigen recognition and presentation by dendritic cells Int J Hematol. 2005 Apr;81(3):181-7

56. Janossy, G., Bofill, M., Poulter, L.W., Rawlings, E., Burford, G.D.,Navarrete, C., Ziegler, A., and Kelemen, E. (1986). Separate ontogeny of two macrophage-like accessory cell populations in the human fetus. J. Immunol. 136, 4354-4361.

57. Kamath, A.T., Pooley, J., O'Keeffe, M.A., Vremec, D., Zhan, Y., Lew, A.M., D'Amico, A., Wu, L., Tough, D.F., and Shortman, K. (2000). The development, maturation, and turnover rate of mouse spleen dendritic cell populations. J. Immunol. 165, 6762-6770

58. Karakhanova S, Meisel S, Ring S, Mahnke K, Enk AH ERK/p38 MAP-kinases and PI3K are involved in the differential regulation of B7-H1 expression in DC subsets. Eur J Immunol. 2010 Jan;40(l):254-66

59. Kassianos AJ, Jongbloed SL, Hart DN, Radford KJ. Isolation of human blood DC subtypes. Methods Mol Biol. 2010;595:45-54

60. Keir, M.E., Stoddart, C.A., Linquist-Stepps, V., Moreno, M.E., and McCune, J.M. (2002). IFN-alpha secretion by type 2 predendritic cells up-regulates MHC class I in the HIV-1-infected thymus. J. Immunol. 168,325-331.

61. Kelly KA, Lucas K, Hochrein H, Metcalf D, Wu L, Shortman K Development of dendritic cells in culture from human and murine thymic precursor cells// Cell Mol Biol (Noisy-le-grand). 2001. Vol. 47. P. 43-54

62. Kim S., Elkon K.B., Ma X. Transcriptional suppression of interleukin-12 gene expression following phagocytosis of apoptotic cells//Immunity. 2004. Vol. 21. P. 204-6

63. Kimura A, Rieger MA, Simone JM, Chen W, Wickre MC, Zhu BM, Hoppe PS, O'Shea JJ, Schroeder T, Hennighausen L The transcription factors STAT5A/B regulate GM-CSF-mediated granulopoiesis. Blood. 2009 Nov 19;114(21):4721-8. Epub 2009 Sep 24

64. Kobayashi, T., Walsh, P.T., Walsh, M.C, Speirs, K.M., Chiffoleau, E, King, C.G., Hancock, W.W., Caamano, J.H., Hunter, C.A., Scott, P., et al. (2003). TRAF6 is a critical factor for dendritic cell maturation and development. Immunity 19, 353-363

65. Kurotaki T., Tamura Y., Ueda G., Oura J. et al. Efficient cross-presentation by heat shock protein 90-peptide complex-loaded dendritic cells via an endosomal pathway// J Immunol. 2007. Vol. 179. P. 1803-13

66. Kyewski B., Peterson P. Aire, master of many trades Cell. 2010 Jan 8;140(l):24-6

67. Laouar Y., Welte T., Fu X.Y., and Flavell R.A. (2003). STAT3 is required for Flt3L-dependent dendritic cell differentiation//Immunity Vol. 19. P. 903-912

68. Lechmann M, Zinser E, Golka A, Steinkasserer A Role of CD83 in the immunomodulation of dendritic cells. Int Arch Allergy Immunol. 2002 Oct; 129(2): 113-8

69. Lee IT, Lee CW, Tung WH, Wang SW, Lin CC, Shu JC, Yang CM Cooperation of TLR2 with MyD88, PI3K, and Racl in Lipoteichoic Acid-Induced cPLA2/COX-2-Dependent Airway Inflammatory Responses Am J Pathol. 2010 Feb 18

70. Li L, Masucci MG, Levitsky V. // Effect of interleukin-7 on the in vitro development and maturation of monocyte derived human dendritic cells. // Scand. J. Immunol. 2000. - Vol. 51(4). - P. 361-71.

71. Li L., Masucci M. G., Levitsky V. Effect of interleukin-7 on the in vitro development and maturation of monocyte derived human dendritic cells//Scand J Immunol. 2000. Vol. 51. P. 361 413

72. Liu, K., Waskow, C., Liu, X., Yao, K., Hoh, J., and Nussenzweig, M.2007). Origin of dendritic cells in peripheral lymphoid organs of mice. Nat. Immunol. 8, 578-583.

73. Piemonti L., Monti P., Allavena P. , Sironi M. , Soldini L. Glucocorticoids Affect Human Dendritic Cell Differentiation and Maturation. The Journal of Immunology, 1999,162: 6473-6481

74. Luft T., Rodionova E., Maraskovsky E. et al. Adaptive functional differentiation of dendritic cells: integrating the network of extra- and intracellular signals//Blood. 2006. Vol. 107. No. 12. P. 4763-4769

75. Mainali E.S., Kikuchi T., Tew J.G. Dexamethasone inhibits maturation and alters function of monocyte-derived dendritic cells from cord blood. Pediatr Res. -2005 Vol. 58(1). P. 125-31

76. Manavalan J.S., Rossi P.C., Vlad G. et al. High expression of ILT3 and ILT4 is a general feature of tolerogenic dendritic cells//Transpl Immunol. 2003. - Vol. 11. P. 245-58

77. Maraskovsky E., Elizabeth D., Eileen R., Mark T., Charlie R. et al. In vivo generation of human dendritic cell subsets by Flt3 ligand//Blood. 2000. - Vol. 96 (3) P. 878-884

78. Marie J.C., Letterio J.J., Gavin M., Rudensky A Y. TGF-{31 maintains suppressor function and Foxp3-expression in CD4+CD25+ regulatory T cells//J Exp Med. 2005. - Vol. 201. P. 1061-1067

79. Wallet M., Pradip S., Tisch R. Immunoregulation of Dendritic Cells//Clinical Medicine & Research. 2005. - Vol. 3. P. 166-175

80. Megjugorac N.J., Gallagher G.E., Gallagher G. Modulation of human plasmacytoid DC function by IFN-lambdal (IL-29)//J Leukoc Biol. 2009. Vol. 86(6). P. 1359-63

81. Mende, I., Karsunky, H., Weissman, I.L., Engleman, E.G., and Merad, M. Flk2+ myeloid progenitors are the main source of Langerhans cells//Blood. 2006. Vol. 107. P. 1383-1390

82. Mennechet F.J., Uze G. Interferon-lambda-treated dendritic cells specifically induce proliferation of FOXP3-expressing suppressor T cells//Blood. 2006. Vol. 107(11). P. 4417-23

83. Moore K. W., de Waal Malefyt R., Coffman R.L, O'Garra A. Interleukin-10 and the interleukin-10 receptor//Annu Rev Immunol. 2001. Vol. 19. P. 683-765

84. Murugaiyan G, Agrawal R, Mishra GC, Mitra D, Saha B Differential CD40/CD40L expression results in counteracting antitumor immune responses//J Immunol. 2007. Vol. 178(4). P. 204755

85. Naik, S.H., Corcoran, L.M., and Wu, L. Development of murine plasmacytoid dendritic cell subsets//Immunol. Cell Biol. 2005. Vol. 83. P. 563-570

86. Naik, S.H., Metcalf, D., van Nieuwenhuijze, A., Wicks, I., Wu, L., O'Keeffe, M., and Shortman, K. (2006). Intrasplenic steady-state dendritic cell precursors that are distinct from monocytes. Nat. Immunol. 7, 663-671.

87. Naik, S.H., Metcalf, D., van Nieuwenhuijze, A., Wicks, I., Wu, L., O'Keeffe, M., and Shortman, K. (2006). Intrasplenic steady-state dendritic cell precursors that are distinct from monocytes. Nat. Immunol. 7, 663-671

88. Nathalie C., Ponsaerts P., Van Tendeloo V. F. I., and Berneman Z. N. Balancing between immunity and tolerance: an interplay between dendritic cells, regulatory T cells, and effector T cells//Journal of Leukocyte Biology. 2007. Vol. 82

89. Nencioni A., Grunebach .F, Patrone F., Ballestrero A., Brossart P. The proteasome and its inhibitors in immune regulation and immune disorders//Crit Rev Immunol. 2006. Vol. 26 P. 487-98

90. Nielsen M, Lund O, Buus S, Lundegaard C MHC Class II epitope predictive algorithms Immunology. 2010 Apr 12

91. Nolan K.F., Strong V., Soler D., et al. IL-10-conditioned dendritic cells, decommissioned for recruitment of adaptive immunity,elicit innate inflammatory gene products in response to danger signals//J Immunol. 2004.Vol. 172. P. 2201-2209

92. Norbury C.C. Drinking a lot is good for dendritic cells Immunology//2006. Vol. 117. P. 443-451

93. Obermaier B., Dauer M., Herten J. et al. Development of a new protocol for 2-day generation of mature dendritic cells from human monocytes// Biol. Proced. Online. 2003. Vol. 5 P. 197-203

94. Palova-Jelinkova L. Barbara Pecharova et al., Gliadin Fragments Induce Phenotypic and Functional Maturation of Human Dendritic Cells// The Journal of Immunology. 2005. Vol. 175. P. 7038-7045

95. Piemonti L., Monti P., Allavena P., Sironi M., Soldini L., Leone B.E., Socci C. and Di Carlo V. // Glucocorticoids Affect Human Dendritic Cell Differentiation and Maturation. // J. Immunol. 1999. -Vol. 162.-P. 6473-6481.

96. Poliani PL, Kisand K, Marrella V, Ravanini M, Notarangelo LD, Villa A, Peterson P, Facchetti F Human Peripheral Lymphoid Tissues Contain Autoimmune Regulator-Expressing Dendritic Cells. Am J Pathol. 2010 Jan 21

97. Randolph G.J., Beaulieu S., Lebecque S., Steinman R.M., Muller W.A. Differentiation of monocytes into dendritic cells in a model of transendothelial trafficking. // Science. 1998. - Vol. 282. -P. 480-483.

98. Randolph, G.J., Inaba, K., Robbiani, D.F., Steinman, R.M., and Muller,W.A. (1999). Differentiation of phagocytic monocytes into lymph node dendritic cells in vivo. Immunity 11, 753-761

99. Rathinam, C., Geffers, R, Yucel, R., Buer, J., Welte, K., Moroy, T., and Klein, C. (2005). The transcriptional repressor Gfil controls STAT3-dependent dendritic cell development and function. Immunity 22, 717-728

100. Reis e Sousa C., Stachl P. D., Austyn J. M. Phagocytosis of antigens by Langergans cells in vitro//J. Exp. Med. 1993. Vol. 178. P. 509-519

101. Ridge, J.P., Fuchs, E.J., and Matzinger, P. (1996). Neonatal tolerance revisited: turning on newborn T cells with dendritic cells. Science 271,1723-1726

102. Rinderknecht CH, Belmares MP, Catanzarite TL, Bankovich AJ, Holmes TH, Garcia KC, Nanda NK, Busch R, Kovats S, Mellins ED Posttranslational regulation of I-Ed by affinity for CLIP/J Immunol. 2007 Nov 1;179(9):5907-15

103. Rissoan, M.C., Soumelis, V., Kadowaki, N., Grouard, G., Briere, F., de Waal Malefyt, R., and Liu, Y.J. (1999). Reciprocal control of T helper cell and dendritic cell differentiation. Science 283, 1183-1186

104. Robinson S.P., Patterson S., English N. et al. Human peripheral blood contains two distinct lineages of dendritic cells//European Journal of Immunology. 1999. Vol. 29. P. 2769 2778

105. Ruedl C, Storni T, Lechner F, Bachi T, Bachmann MF Cross-presentation of virus-like particles by skin-derived CD8(-) dendritic cells: a dispensable role for TAP Eur J Immunol. 2002 Mar;32(3):818-25

106. Rutella S, Danese S, Leone G Tolerogenic dendritic cells: cytokine modulation comes of age/ Blood. 2006 Sep l;108(5):1435-40. Epub 2006 May 9

107. Rutella S., Bonanno G., Pierelli L., et al. Granulocyte colony-stimulating factor promotes the generation of regulatory DC through induction of IL-10 and IFN-alpha// Eur J Immunol. 2004. Vol. 34. P. 1291-1302.

108. Santambrogio L., Sato A. et al. Abundant empty class II MHC molecules on the surface of immature dendritic cells//Proc Natl Acad Sci U S A. 1999. Vol. 96. P. 15050-15055

109. Schagger B., Dhodapkar M. V., Steinman R. M. et al. Antigen-specific inhibition of effector T cell function in humans after injection of immature dendritic cells//J. Exp. Med. 1987. Vol. 193. P. 233

110. Schlichting C.L., Schareck W.D., Nickel T., Weis M. Dendritic cells as pharmacological targets for the generation of regulatory immunosuppressive effectors. New implications for allo-transplantation//Curr Med Chem. 2005. Vol. 12. P. 1921-30

111. Schotte, R., Nagasawa, M., Weijer, K., Spits, H., and Blom, B.2004). The ETS transcription factor Spi-B is required for human plasmacytoid dendritic cell development. J. Exp. Med. 200, 1503— 1509.

112. Schotte, R., Nagasawa, M., Weijer, K., Spits, H., and Blom, B.2005). The knockout of factor Spi-B is deleted population of plasmacytoid dendritic cell. J. Exp. Med. 200, 1503-1509.

113. Shigematsu, H., Reizis, B., Iwasaki, H., Mizuno, S., Hu, D., Traver, D.,Leder, P., Sakaguchi, N., and Akashi, K. (2004). Plasmacytoid dendritic cells activate lymphoid-specific genetic programs irrepective of thr cellular origin. Immunity 21, 43-53

114. Slepnev V. I., De Camilli P. Accessory factors in clathrin-dependent synaptic vesicle endocytosis//Nat. Neurosci. Rev. 2000. Vol. l.P. 161-72

115. Sonmez M., Ovali E., Dikmen T., Yilmaz M. et al. The role of hepatocyte growth factor in the differentiation of dendritic cells from peripheral blood monocytes//Saudi Med J. 2007. Vol. 5. P. 688-95

116. Sousa C.R., Hieny S., Scharton K.T., et al. In vivo microbial stimulation induces rapid CD40 ligand-independent production ofinterleukin 12 by dendritic cells and their redistribution to T cell areas //J Exp Med. 1997. Vol. 186. P. 181

117. Spits, H., Couwenberg, F., Bakker, A.Q., Weijer, K., and Uittenbogaart, C.H. (2004). Id2 and Id3 inhibit development of CD34(+) stem cells into predendritic cell (pre-DC)2 but not into pre-DC1. Evidence for a lymphoid origin of pre-DC2

118. Sprent J, Lo D, Gao EK, Ron Y. T cell selection in the thymus. Immunol Rev. 1988;101:173-190

119. Stefan O. Schönland, Julia K. Zimmer, Consuelo M. Lopez-Benitez, Thomas Widmann, Kirk D. Ramin, Jörg J. Goronzy, and Cornelia M. Weyand Homeostatic control of T-cell generation in neonates/ Blood, 15 August 2003, Vol. 102, No. 4, pp. 1428-1434

120. Steinbrink K., Wölfl M., Jonuleit H., Knop J., Enk A.H. Induction of tolerance by IL-10-treated dendritic cells//J Immunol. 1997. Vol. 159. P. 4772-80

121. Steinman RM Some interfaces of dendritic cell biology. APMIS. 2003 Jul-Aug; 111(7-8):675-97

122. Stefan O. Schonland, Julia K. Zimmer, Consuelo M. Lopez-Benitez, Thomas Widmann, Kirk D. Ramin, Jorg J. Goronzy, and Cornelia M. Weyand Homeostatic control of T-cell generation in neonates/ Blood, 15 August 2003, Vol. 102, No. 4, pp. 1428-1434

123. Strunk, D., Egger, C., Leitner, G., Hanau, D., and Stingl, G. (1997). A skin homing molecule defines the langerhans cell progenitor in human peripheral blood. J. Exp. Med. 185, 1131-1136

124. Suciu-Foca N., Manavalan, J. S., Scotto, L. et al. Molecular characterization of allospecific T suppressor and tolerogenic dendritic cells// review. Int. Immunopharmacol. 2005. Vol. 5. P. 7-11

125. Tacke, F., and Randolph, G.J. (2006). Migratory fate and differentiation of blood monocyte subsets. Immunobiology 211, 609618.

126. Taieb, J., Chaput, N., Menard, C., Apetoh, L., Ullrich, E., Bonmort, M.,Pequignot, M., Casares, N., Terme, M., Flament, C., et al. (2006). A novel dendritic cell subset involved in tumor immunosurveillance. Nat. Med. 12, 214-219

127. Tamura, T., Tailor, P., Yamaoka, K., Kong, H.J., Tsujimura, H., O'Shea, J.J., Singh, H., and Ozato, K. (2005). IFN regulatory factor-4 and -8 govern dendritic cell subset development and their functional diversity. J. Immunol. 174, 2573-2581

128. Tinsley U., Sauter B., Albert M. L. et al. Consequences of cell death: exposure to necrotic tumor cells, but not primary tissue cells orapoptotic cells, induces the maturation of immunostimulatory dendritic cells//J. Exp. Med. 2000. Vol. 191. P

129. Treiner, E., Duban, L., Bahram, S., Radosavljevic, M., Wanner, V., Tilloy, F., Affaticati, P., Gilfillan, S., and Lantz, O. (2003). Selection of evolutionarily conserved mucosal-associated invariant T cells by MR1. Nature 422, 164-169.

130. Villadangos J.A., Schnorrer P., Wilson N.S. Control of MHC class II antigen presentation in dendritic cells: a balance between creative and destructive forces Immunol Rev. 2005. Vol. 207. P. 191205

131. Vremec, D., Pooley, J., Hochrein, H., Wu, L., and Shortman, K. (2000).CD4 and CD8 expression by dendritic cell subtypes in mouse thymus and spleen. J. Immunol. 164, 2978-2986

132. Vremec, D., Pooley, J., Hochrein, H., Wu, L., and Shortman, K. (2000). CD4 and CD8 expression by dendritic cell subtypes in mouse thymus and spleen. J. Immunol. 164, 2978-2986

133. Wakkach A., Fournier N., Brun V. et al. Characterization of dendritic cells that induce tolerance and T regulatory 1 cell differentiation in vivo//Immunity. 2003. Vol. 18. P. 605-617

134. Wang EL, Qian ZR, Nakasono M, Tanahashi T, Yoshimoto K, Bando Y, Kudo E, Shimada M, Sano T High expression of Toll-likereceptor 4/myeloid differentiation factor 88 signals correlates with poor prognosis in colorectal cancer Br J Cancer. 2010 Feb 9

135. Watanabe, N., Wang, Y.H., Lee, H.K., Ito, T., Cao, W., and Liu, Y.J. (2005). Hassall's corpuscles instruct dendritic cells to induce CD4+CD25+ regulatory T cells in human thymus. Nature 436, 11811185

136. Wu L, Shortman K Heterogeneity of thymic dendritic cells Semin Immunol. 2005 Aug;17(4):304-12

137. WuL. and Dakic A. Development of Dendritic Cell System//Cellular & Molecular Immunology. 2004. Vol. 2. P. 112-118

138. Wu L., D'Amico, A., Winkel, K.D., Suter, M., Lo, D., and Shortman, K. (1998). RelB is essential for the development of myeloid-related CD8alpha- dendritic cells but not of lymphoid-related CD8alpha+ dendritic cells. Immunity 9, 839-847.

139. Wu L., Vremec D., Ardavin C., Winkel K., Suss, G., Georgiou H., Maraskovsky E., Cook W., and Shortman K. (1995). Mouse thymus dendritic cells: kinetics of development and changes in surface markers during maturation. Eur. J. Immunol. 25, 418-425.

140. Xia C. Q., Peng R, Beato F., Clare-Salzer M.J. // Dexamethasone induces IL-10-producing monocyte-derived dendritic cells with durable immaturity. // Scand. J. Immunol. 2005. - Vol. 62. -P. 54-45.

141. Xia C.Q., Peng R, Beato F., Clare-Salzler M.J. Dexamethasone induces IL-10-producing monocyte-derived dendritic cells with durable immaturity// Scand J Immunol. 2005. Vol. 62(1). P. 45-54149

142. Zenke M., and Hieronymus T. Towards an understanding of the transcription factor network of dendritic cell development//Trends Immunol. 2006. Vol. 27. P. 140-145

Автореферат диссертации по медицине на тему Особенности дендритных клеток, полученных при различных условиях стимуляции моноцитов новорожденных детей in vitro

Оглавление диссертации Цатуров, Максим Эдуардович :: 2010 :: Москва

Введение диссертации по теме "Клиническая иммунология, аллергология", Цатуров, Максим Эдуардович, автореферат

Список использованной литературы по медицине, диссертация 2010 года, Цатуров, Максим Эдуардович

Похожие научные работы

Каталог диссертаций