Автореферат и диссертация по медицине (14.00.25) на тему:Металлсодержащие антиоксиданты при острой экзогенной гипоксии

На правах рукописи

ЕВСЕЕВ

Андрей Викторович

МЕТАЛЛСОДЕРЖАЩИЕ АНТИОКСИДАНТЫ ПРИ ОСТРОЙ ЭКЗОГЕННОЙ ГИПОКСИИ

14.00.25 - фармакология, клиническая фармакология 03.00.13 - физиология

Автореферат диссертации на соискание учёной степени доктора медицинских наук

]

□□3163491

ч

•Санкт-Петербург 2008

003163491

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Смоленская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

НАУЧНЫЕ КОНСУЛЬТАНТЫ доктор медицинских наук профессор Петр Дмитриевич Шабанов доктор медицинских наук профессор Виталий Андреевич Правдивцев

ОФИЦИАЛЬНЫЕ ОППОНЕНТЫ доктор медицинских наук профессор Александр Николаевич Петров доктор медицинских наук Павел Васильевич Родичкин доктор медицинских наук профессор Андрей Федорович Якимовский

Ведущая организация - ГОУ ВПО «Санкт-Петербургская государственная медицинская академия им И И. Мечникова Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «19» февраля 2008 года в 13 00 часов на заседании диссертационного совета Д215 002 07 при Военно-медицинской академии им С М Кирова (194044, Санкт-Петербург, ул Академика Лебедева, д 6)

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Военно-медицинской академии им С М Кирова по адресу 194044, Санкт-Петербург, ул Академика Лебедева, д 6

Автореферат разослан « и » декабря 2007 г

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинских наук профессор Борис Николаевич Богомолов

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Практическая медицина постоянно сталкивается с проблемой защиты организма от осложнений, вызываемых недостатком кислорода Гипоксия является ключевым фактором в генезе большинства острых и хронических заболеваний (Зарубина И В , Шабанов П Д , 2004, Хватова ЕМ и др , 2007) В литературе содержится достаточно сведений, дающих представление о многочисленных способах адаптации организма человека к дефициту 02 Тем не менее вопрос о механизмах формирования гипоксического состояния и последствиях, обусловленных эпизодами кислородной недостаточности, продолжает привлекать исследователей и мотивировать их на поиск эффективных средств, способных нейтрализовать последствия перенесенной гипоксии (Bunn, Poyton, 1996, Semenza, 1999, Архипен-ко Ю В , Сазонтова Т Г, 2004)

Как известно, провести чёткую границу между гипоксией физиологической, инициирующей компенсаторные реакции, и гипоксией, запускающей каскад патологических реакций, довольно трудно Согласно известным концепциям, адаптационный процесс в ответ на воздействие экстремальных факторов проявляется в значительных перестройках морфофункциональных структур, обеспечивающих механизмы адекватного гомеостатического регулирования (Агаджанян НА и др, 2001, Шастун С А, 2005, Манухина Е Б и др 2007)

В современных производственных условиях человек рискует оказаться в сфере влияния разнообразных негативных факторов внешней среды, в ряду которых одно из первых мест отводится остро развивающейся гипоксии (Jones, 1982, Stokes, 1984, Wisano, 1989, Новиков ВС и др , 1998, Белов С В и др , 1999)

Здоровый организм особенно часто подвергается воздействию экзогенных форм острой гипоксии, которые, как правило, обусловлены уменьшением парциального давления 02 в окружающем воздухе или во вдыхаемой смеси газов (Но-chachka et al, 1999, Шевченко Ю Л и соавт, 2000) Экзогенная гипоксия может возникать, например, при эксплуатации летательных аппаратов, подводных лодок, в случае отказа систем, обеспечивающих подачу или регенерацию воздуха обитаемых замкнутых пространств (Васильев П В и др, 1992, Новиков В С, 1997) В связи с этим очевидна актуальность проблемы разработки комплекса мероприятий по профилактике гипоксии и лечению вызываемых ею осложнений

Установлено, что организмы с высоким уровнем организации ЦНС острее реагируют на экстремальные воздействия, включая и гипоксию, в сравнении с организмами, имеющими более низкий уровень организации ЦНС (Даренская Н Г и др., 1993, Hochachka, Somero, 2001, Schmidt, 2002, Bickler, 2004) В частности, показано, что ЦНС человека в целом и, прежде всего, кора головного мозга обладают повышенной чувствительностью к недостатку 02 (Auer, 1997, Ахмадеев Р Р , Еникеев Д А , 2004) Есть данные о том, что в ходе развития острого гипоксического состояния нейроны коры реагируют даже на слабые колебания уровня 02 в межклеточной жидкости В случае значительного снижения напряжения 02,

в мозговой ткани возникают грубые и необратимые изменения (Шаов M Т и др , 2002, Zhang et al, 2003, LaManna et al, 2004, Хожева А А , Молов А А , 2005)

Как было отмечено во многих исследованиях, активация аппарата внешнего дыхания, увеличение количества эритроцитов в кровяном русле, сопровождающееся повышением кислородной емкости крови, увеличение минутного объема кровообращения в первую очередь направлены на усиление доставки Ог клеткам головного мозга (Persson et al, 1992, Chavez et al, 1995, Graham, 1995, Maxime, Nonnotte, 1995, Hlastala, Berger, 1996, Черняков И H и др , 1998, Агаджанян H А и др 2001, Вовенко Е П , Соколова И Б , 2004, Саноцкая HB и др , 2004, Levme, Stray-Gundersen, 2005) Такого рода реакции носят адаптивный характер и позволяют организму противостоять возникающим неблагоприятным условиям (Березовский В А, 1986, Zakynthinos, Roussos, 1993, Payen et al, 1996)

В последние годы было показано, что общая направленность процессов адаптации при развитии остро нарастающей гипоксии не исключает возможности возникновения параллельных негативных реакций (Сабаев В В , Ильина С Л, 1995, Wiese et ai , 1995, Галанцев В П и др , 1996, Китаев МИ и др , 1997, Архипенко Ю В , Сазонтова Т Г , 2004) В связи с этим в качестве интегрального критерия адаптации организма к недостатку 02 чаще всего используется показатель выживаемости организма, находящегося в условиях развивающейся острой гипоксии (Folk, 1969, Сло-ним А Д, 1976, Davies, 1996, Новиков ВС и др , 1998)

Многие авторы допускают, что перспективным способом увеличения выживаемости человека в условиях гипоксии экзогенной природы является ограничение уровня его физической активности, что гарантирует экономный расход доступного для дыхания 02 и наличного резерва субстратов биологического окисления (Sutton et al, 1990, Шевченко ЮЛ и др, 2000, Шабанов П Д, 2003) Как было установлено, снижение метаболических запросов организма также может быть обеспечено применением эффективных фармакологических веществ, относящихся к классу антигипоксантов (Guttierrez, 1991, Виноградов В M , Смирнов AB , 1994, Зарубина ИВ и др , 2006)

На сегодняшний день арсенал антигипоксических веществ, которые могли бы быть использованы прежде всего в практике экстремальной медицины, невелик (Семиголовский НЮ и др , 1994, Копцов С В и др, 2002, Левченкова О С и др, 2005) Наиболее перспективной группой антигипоксантов заслуженно считают вещества метаболического типа действия, относящиеся преимущественно к производным аминотиолов - гутимин, амтизол, бемитил, алмид, этомерзол и др (Виноградов В M , Криворучко Б И , 2001, Зарубина И В , Шабанов П Д , 2004) Перечисленные химические соединения предупреждают как нарушения энергетического обмена, так и последствия этих нарушений, повышая устойчивость клеточных элементов жизненно важных органов и организма в целом не только к недостатку 02, но также к некоторым другим воздействиям, нарушающим энергетический обмен в тканях (Смирнов AB и др , 1996, Лукьянова JIД , 2004) Функциональный анализ активности данной группы противогипоксических веществ способствовал созданию современной методологии поиска высокоэффективных антигипоксантов (Шабанов П Д, 2002, Зарубина И В , 2005)

С появлением в поле зрения исследователей новой группы химических веществ - металлсодержащих антиоксидантов, представляющих собой комплексные соединения биометаллов с природными антиоксидантами, открылись новые возможности для изыскания антигипоксических средств (Парфенов Э А, 2000) Высокая биологическая активность и биодоступность этих химических соединений в сочетании с полимодальностью их фармакологических эффектов были отмечены в публикациях многих авторов (2001, Алейникова Т Ю , 2001, Лебедева С А , 2003, Новиков В Е и др, 2005, Цеева Ф В , 2005, Протасова Н В , 2006)

Впервые синтезированные Э А Парфёновым на базе НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей Российского онкологического научного центра РАМН (РаНепоу еХ а1, 2000, Парфенов Э А и др , 2002) вещества этой фармакологической группы, обозначенные лабораторным шифром «я<3» и соответствующими порядковыми номерами, оказались эффективными при развитии у животных различных видов острой экзогенной гипоксии (Лебедева С А, 2003, Арбаева М В , 2004, Левченкова О С, 2006, Яснецов С А , Сосин Д В , 2007)

Таким образом, проблема изыскания эффективных антигипоксических средств для осуществления профилактики и лечения последствий, вызванных экзогенными гипоксическими состояниями, может быть в значительной мере решена путем проведения комплексного физиологического исследования, ориентированного на ключевые звенья динамики формирования гипоксических состояний и их фармакологической коррекции металлсодержащими антиоксидантами

Цель исследования - изучить механизмы изменений состояния основных функциональных систем организма (кровообращения, дыхательной, нервной) при развитии острой экзогенной гипоксии и выявить высокоэффективные антигипок-санты среди новых металлсодержащих антиоксидантов на различных моделях острой экзогенной гипоксии

Задачи исследования:

1 Изучить динамику изменений ЭКГ и внешнего дыхания мышей при развитии острой экзогенной гипоксии с гиперкапнией и острой экзогенной гипоксии без гиперкапнии

2 Изучить динамику изменений корковых вызванных потенциалов и импульсной активности нейронов соматосенсорной коры головного мозга кошек при развитии острой экзогенной гипоксии с гиперкапнией и острой экзогенной гипоксии без гиперкапнии в условиях мониторинга ЭКГ

3 Изучить влияние 9 новых металлсодержащих антиоксидантов на продолжительность жизни мышей в условиях острой экзогенной нормобарической гипоксии с гиперкапнией, острой экзогенной нормобарической гипоксии без гиперкапнии и резервное время мышей в условиях острой экзогенной гипобарической гипоксии

4 Провести сравнительный анализ антигипоксической активности веществ в ряду исследованных химических соединений, а также сопоставить их антигипок-

сическую эффективность с таковой веществ сравнения - антигипоксантов мекси-дола, амтизола и бемитила

5 Установить величины средней летальной и средней эффективной доз для наиболее активных металлсодержащих антиоксидантов

6 Изучить влияние наиболее активных металлсодержащих антиоксидантов и наиболее эффективных веществ сравнения на характеристики условнорефлектор-ной деятельности мышей, ЭКГ и внешнего дыхания у мышей, помещенных в условия острой экзогенной нормобарической гипоксии с гиперкапнией и острой экзогенной нормобарической гипоксии без гиперкапнии, а также на параметры их стандартного энергетического обмена

7 Изучить влияние наиболее активных металлсодержащих антиоксидантов на процессы окислительного фосфорилирования в митохондриях клеток головного мозга крыс

8 Изучить влияние наиболее активных металлсодержащих антиоксидантов на параметры корковых вызванных потенциалов, импульсной активности нейронов сомагосенсорной коры головного мозга кошек, подвергнутых воздействию периодической дыхательной асфиксии, а также помещённых в условия острой экзогенной нормобарической гипоксии с гиперкапнией и острой экзогенной нормобарической гипоксии без гиперкапнии

Научная новизна. Впервые проведен системный анализ формирующегося экзогенного гипоксического состояния по характеристикам изменений ЭКГ, внешнего дыхания, корковых вызванных потенциалов, импульсной активности отдельных нейронов соматосенсорной коры в зависимости от наличия или отсутствия фактора гиперкапнии

Изучено влияние 9 оригинальных новых металлсодержащих антиоксидантов на резистентность мышей к условиям трех моделей острой экзогенной гипоксии Установлено, что химические соединения л<3901, и<31104 на всех использованных в скрининге моделях гипоксии обладают выраженной антигипоксической активностью, превышающей таковую мексидола, бемитила, но сопоставимой с активностью амтизола Подтверждена низкая токсичность вещества л<31104. На модели избегательного оборонительного условного рефлекса обнаружено обратимое не-1ативное влияние вещества 104 и антигипоксанта амтизола на моторные реакции мышей

В ходе анализа ЭКГ и пневмобарограмм мышей доказано, что вещество я<31104 в условиях нормобарических видов острой экзогенной гипоксии продлевает период относительного благополучия в большей степени, чем антигипоксант амтизол при использовании данных веществ в равных дозах

Проведено измерение стандартного энергетического обмена у мышей на фоне действия цинксодержащего антиоксиданта гсСЩ04 и антигипоксанта амтизола Установлено, что вещество я(21104 в большей мере снижает величину энергетического обмена, чем амтизол Установлено, что вещество я<31104 существенно ограничивает возможности митохондрий головного мозга в отношении синтеза АТФ на фоне достаточного уровня сопряжения процессов окисления и фосфорилирования, а также сохранения энергетического потенциала ткани Впервые в ка-

честве индикатора глубины экзогенного гипоксического состояния были использованы вызванные потенциалы коры головного мозга По данным регистрации активности нейронов соматосенсорной коры установлено, что введение вещества rcQ 1104 значительно повышает резистентность нервных клеток к острой экзогенной гипоксии с гиперкапнией и острой экзогенной гипоксии без гиперкапнии

Научно-практическая значимость связана с разработкой новых методов моделирования острых экзогенных гипоксических состояний у животных, оценкой состояния основных функциональных систем организма (кровообращения, дыхательной, нервной) при развитии острой экзогенной гипоксии и выявлением высокоэффективных антигипоксантов среди новых металлсодержащих антиокси-дантов на различных моделях острой экзогенной гипоксии К методам моделирования острых экзогенных гипоксических состояний у животных отнесены острая экзогенная нормобарическая гипоксия с гиперкапнией (кошка, кролик) и острая экзогенная нормобарическая гипоксия без 1иперкапнии (мелкие лабораторные животные)

Оригинальность и новизна выполненных физиологических исследований, а также сведения, полученные в ходе изучения нового антигипоксанта под шифром 7tQ1104 (бис (И-ацетил-Ь-цистеинато) цинк(И) сульфат октагидрат), подтверждены тремя патентами РФ на изобретение (патенты на изобретение РФ № 2265608 от 26 07 2004 г , № 2251158 от 27 04 2005 г и № 2291498 от 10 01 2007 г ) На основе установленных механизмов развития острого гипоксического состояния представляются реальными перспективы внедрения нового высокоактивного антигипоксанта iiQ1104 (бис (Ы-ацетил-Ь-цистеинато) цинк(П) сульфат октагидрат) в клиническую практику

По итогам исследования выдвинута гипотеза, согласно которой точкой приложения антигипоксического действия цинксодержащего антиоксиданта nQl 104 является цитохромный фрагмент в составе дыхательной цепи митохондрий Предполагается, что двухвалентный цинк, являющийся основой изученного комплексного соединения, ограничивает объемы электронных потоков в области ци-тохромов на участке Ь—с Указанный феномен обеспечивает повышение экономичности процессов окислительного фосфорилирования, предотвращая преждевременное истощение внутриклеточных резервов 02 и субстратов окисления

Использование в работе комплексного подхода к изучению фармакологических свойств перспективных антигипоксантов при проведении опытов на животных с разным уровнем организации ЦНС (мыши, крысы, кошки) позволило экстраполировать полученные результаты на физиологические закономерности функциональной активности соответствующих гомеостатических систем человека

Работа поддержана грантом РФФИ № 07-04-96437, полученным в рамках регионального конкурса 2007 г Финансирование гранта осуществлялось из средств бюджета Смоленской области

Основные положения, выносимые на защиту:

1 В ходе формирования у мышей и кошек состояний острой гипоксии с ги-перкапнией и острой гипоксии без гиперкапнии динамика ЭКГ, показателей внешнего дыхания, корковых вызванных потенциалов и активности отдельных нейронов соматосенсорной коры демонстрируют большую устойчивость животных к гиперкапническим состояниям в сравнении с нормокапническими

2 У трех из девяти исследованных новых металлсодержащих антиоксидан-тов - веществ тг0262, 71(2901, тг01104 - выявлена антигипоксическая активность на моделях острой экзогенной нормобарической гипоксии с гиперкапнией (ОГ+Гк), острой экзогенной нормобарической гипоксии без гиперкапнии (ОГ-Гк) и острой экзогенной гипоксии с гипобарией (ОГ+Гб)

3 По показателям средней летальной и средней эффективной доз, рассчитанных для вещества яС)1104, данное химическое соединение может быть отнесено к категории относительно безопасных веществ

4 Вещество тг<31104 в опытах на мышах, подвергнутых воздействию ОГ+Гк и ОГ-Гк, в большей степени повышает устойчивость животных к указанным видам гипоксии, чем эталонный антигипоксант амтизол, в то время как в опытах на мышах, подвергнутых ОГ+Гб, их эффекты одинаковы

5 Вещество я<31104, как и антигипоксант амтизол, относится к противоги-поксическим веществам метаболического типа действия, что подтверждено замедлением стандартного энергетического обмена у мышей на фоне их действия, а также общим снижением электрической активности миокарда и параметров внешнего дыхания

6 Механизм действия вещества я(21104 во многом обусловлен снижением интенсивности энергосинтетических процессов в митохондриальном компар-тменте клеток головного мозга Вызываемое введением вещества я<31104 уменьшение скоростей протекания окислительных реакций в дыхательной цепи митохондрий может обеспечить оптимизацию расхода кислорода и субстратов биологического окисления при острых экзогенных гипоксических состояниях

7 В условиях периодической дыхательной асфиксии, при острой гипоксии с гиперкапнией и острой гипоксии без гиперкапнии профилактическое введение вещества л(21104 кошкам способствует значительному пролонгированию активного состояния коры головного мозга, что подтверждается динамикой вызванных потенциалов, а также импульсной активности нейронов соматосенсорной коры

Реализация результатов работы. Полученные результаты используются в учебном процессе кафедры фармакологии Санкт-Петербургской Военно-медицинской академии им СМ Кирова (акт внедрения от 13 04 2007 г), в лекционных курсах кафедры фармакологии и кафедры нормальной физиологии Смоленской государственной медицинской академии, в научной работе ЦНИЛ Смоленской государственной медицинской академии (акт внедрения от 11 06 2007 г) Диссертационная работа выполнена на кафедре нормальной физиологии СГМА (заведующий - доктор медицинских наук профессор В А Правдивцев) в рамках плановой темы НИР, № государственной регистрации 01200409026 (протокол

№7 от 1.06 2004 г) Исследования проведены в рамках договора о совместной научно-практической деятельности между НИИ экспериментальной диагностики и терапии опухолей Российского онкологического научного центра им Н Н Бло-хина РАМН и Смоленской государственной академией «Синтез и изучение фармакологической активности новых физиологически совместимых антиоксидан-тов»

Апробация и публикация материалов исследования. Результаты и основные положения диссертации доложены и обсуждены на Международной научно-практической конференции «Загрязнение окружающей среды и здоровье населения» (Смоленск, 1999), научной конференции «Медико-биологические аспекты экстремальных состояний» (Смоленск, 1999), областной научно-практической конференции «Проблемы охраны труда в условиях рыночной экономики и пути их решения» (Смоленск, 2002), Всероссийской научной конференции с международным участием «Современные информационные технологии в медицине и экологии» - ИТМЭ-2003» (Смоленск, 2003), 2-й Международной конференции «Патофизиология и современная медицина» (Смоленск, 2004), XIX Съезде физиологического общества им И П Павлова «От геномики до интегративной физиологии» (Екатеринбург, 2004), 11-й Международной конференции «Новые медицинские технологии и квантовая медицина» (Москва, 2005), 6-й Международной научно-практической конференции «Здоровье и образование в XXI веке» (Москва, 2005), Межрегиональной научно-практической конференции «Типовые патологические процессы» (Уфа, 2005) 4-й Российской конференции «Гипоксия механизмы адаптации, коррекция» (Москва, 2005), 6-й научно-практической конференции «Актуальные проблемы современной медицины» (Смоленск, 2007), XX Съезде физиологического общества им И.П Павлова (Москва, 2007), III Съезде фармакологов России «Фармакология - практическому здравоохранению» (Санкт-Петербург, 2007), проблемной комиссии Смоленской государственной медицинской академии «Физиология и патология нервной системы» (Смоленск, 2004, 2007), ежегодных итоговых заседаниях Смоленского отделения физиологического общества (Смоленск, 2005-2007)

Апробация диссертации состоялась 24 мая 2007 г на совместном заседании кафедр нормальной физиологии, фармакологии, клинической фармакологии, неврологии и нейрохирургии, неврологии и психиатрии ФПК, патологической физиологии, общей и медицинской химии, общей гигиены, медбиофизики Смоленской государственной медицинской академии

По теме диссертации опубликовано 48 печатных работ, из них 8 в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК, 1 монография, 3 патента на изобретения Зарегистрировано 5 рационализаторских предложений

Структура и объём диссертации. Диссертация состоит из следующих разделов введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследования, 4 главы собственных экспериментальных исследований, обсуждение результатов, выводы, научно-практические рекомендации и список литературы Работа

изложена на 311 страницах машинописного текста, содержит 16 таблиц и 53 рисунка Библиографический указатель содержит 588 наименований, в том числе 352 отечественных и 236 иностранных

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Выбор животных. В соответствии с целью и задачами исследования опыты выполнены на 1080 мышах-самцах линии СВР1 массой 20-25 г, на 32 крысах-самцах линии \Vistar массой 170-220 г и 104 кошках-самцах массой 3,5-4,5 кг Все исследования проводились в соответствии с «Международными рекомендациями по проведению медико-биологических исследований с использованием животных» (1985) и Правилами лабораторной практики в Российской Федерации (приказ МЗ РФ № 267 от 19 06 2003 г )

Поиск эффективных антигипоксантов осуществляли среди 9 новых химических соединений, относящихся к категории металлсодержащих антиоксидантов различных классов (табл 1) В качестве веществ сравнения были использованы такие известные антиг ипоксанты, как мексидол, амтизол и бемитил

Таблица 1

Исследованные металлсодержащие антиоксиданты

Шифр вещества Класс металлсодержащего антио кс иданта Структурная характеристика

JtQ262 Модель супероксиддисмутазы Комплексное соединение меди с никотиновой кислотой

jcQ901 Модель цинксодержащих ферментов Комплексное соединение цинка с Ы-ацетил-Ь-цистеином

tcQ914 Модифицированный ионом ти-тана(1У) ароматический кума-риновый редуктон Комплексное соединение титана с пирокатехиновым кумарином

TTQ915 Модифицированный ионом ти-тана(1У) ароматический кума-риновый редуктон Аналог 7tQ914

nQ918 Модифицированный аскорбат Комплексное соединение титана с аскорбатом

TCQ1104 Модель цинксодержащих ферментов Аналог 7CQ901

jtQl 105 Модель цинксодержащих ферментов Аналог rcQ901

jiQI 108 Модель цинксодержащих ферментов Комплексное соединение цинка с И-ацетил-Ь-цистеином и никотиновой кислотой

71QI109 Модель цинксодержащих ферментов Аналог tcQ 1108

Состояние ОГ+Гк и ОГ+Гб в опытах на мышах воспроизводили по методикам, рекомендованным для проведения скрининга антигипоксантов (Лукьянова Л Д и др , 1990) Состояние ОГ-Гк у мышей моделировали по способу А В Евсеева и соавторов (2007)

Состояние ОГ+Гк и ОГ-Гк у кошек моделировали по способу А В Евсеева и М А Евсеевой (2005) Состояние дыхательной асфиксии у кошек моделировали путем периодического выключения аппарата искусственной вентиляции легких (Виноградов В М, Криворучко Б И, 2001) Через каждые 10 циклов «асфиксия/восстановление» воздействие усиливали путем увеличения продолжительности периода асфиксии на 0,5 мин и соответствующего укорочения периода восстановления, при этом стартовый режим представлял собой 2,5-минугную асфиксию с 3-минутным периодом восстановления

В опытах у мышей регистрировали электрокардиограммы, пневмобарограм-мы (кривые, отражающие изменение внешнего дыхания), определяли скорость потребления 02 по Холдену, рассчитывали величину стандартного энергетического обмена по Крогу, измеряли содержание 02 и С02 в доступном для дыхания воздухе на разных стадиях изучавшихся гипоксических состояний

Средние летальные и средние эффективные дозы наиболее активных металлсодержащих антиоксидантов рассчитывали по методу В Б Прозоровского и соавторов (1978)

УсловнОрефлекторную деятельность мышей изучали по показателям избега-тельного оборонительного условного рефлекса (Анохин П К , 1968)

Процессы окислительного фосфорилирования в митохондриях головного мозга крыс изучали полярографическим методом (Шаров А Н , 1984) По данным полярограммы рассчитывали скорость дыхания митохондрий в различных метаболических состояниях (Ивков И Н , Панченко Л Ф , 1971, Ковалева Л А , 1997) V0 — скорость поглощения 02 при окислении экзогенного субстрата, V3 - скорость фосфорилирующего окисления, V4 - скорость окисления после фосфорилирования, Уднф - скорость дыхания после добавления разобщителя протонофора -2,4-динитрофенола Рассчитывали показатели, характеризующие сопряжение процессов окисления и фосфорилирования в митохондриях дыхательный контроль по Ларди (ДКЛ= V3/V0), дыхательный контроль по Чансу (ДКЧ = V3/V4), коэффициент АДФ/ДО, стимуляцию дыхания 2,4-динитрофенолом (ДНФ -Уднф/У4), скорость фосфорилирования добавки АДФ (АДФ/Д0, способность мембран митохондрий сохранять собственный энергетический потенциал (V(/V4)

Биоэлектрические процессы в соматосенсорной зоне коры мозга кошек изучали с помощью метода вызванных потенциалов (ВП) (Shagas, 1972), микроэлектродного метода (Dykes et al, 1995) Параллельно осуществляли регистрации ЭКГ

Устройства сопряжения комплекса регистрирующей аппаратуры и ПЭВМ, специализированные программы обработки физиологической информации разработаны в творческом содружестве с СКБ СФ МЭИ (заведующий - кандидат технических наук доцент О Е Аверченков)

Все изученные вещества вводили внутрибрюшинно (в/б) При проведении скрининга - за 60 мин до начала опыта (период инкубации) в дозах 10, 25 и 50 мг/кг При последующих исследованиях использовали дозы, оказавшиеся наиболее эффективными В этих опытах период инкубации для мышей и крыс составлял 60 мин, для кошек - 90 мин

В случае недостаточной растворимости веществ в физиологическом растворе хлорида натрия, в суспензию добавляли твин-80 В контрольных группах использовали равноценные объемы физиологического раствора хлорида натрия

Все эксперименты на животных выполняли с осуществлением контроля ректальной температуры

Статистический анализ полученных данных проводили с помощью методов вариационной статистики (Урбах ВЮ, 1964, Бессмертный БС, 1967, Лакин Г Ф , 1968)

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

Согласно полученным результатам, продолжительность жизни мышей в условиях ОГ+Гк и ОГ-Гк составляла соответственно 34,06 и 25,97 мин Резервное время при ОГ+Гб в контрольной группе составило 4,53 мин Полученные величины соответствует литературным данным (Новиков В Е , Катунина Н П, 2002, Лебедева С А 2003, Левченкова О С , 2006, Арбаева М В , 2004)

В ходе скрининга было установлено, что вещества я<3918, я01108, тг<31109 были не эффективны на использованных моделях острой экзогенной гипоксии Одно из изученных веществ - лС>915 демонстрировало слабый положительный эффект только при ОГ+Гк в дозах 50 и 25 мг/кг

Пять металлсодержащих антиоксидантов, а именно вещества 262, я<3901, л0914, л01104, я01105, в разной степени проявили антигипоксические свойства при ОГ+Гк, ОГ-Гк и ОГ+Гб (рис 1) Наиболее существенный и дозозависимый эффект был отмечен у комплексных соединений цинка и Ы-ацетил-Ь-цистеина -веществ я(3901 и 104 Протективные свойства этих веществ сочетались с выраженным гипотермическим действием (рис 2)

В ходе изучения антигипоксических свойств веществ сравнения мексидола, амтизола и бемитила в равнозначных условиях было установлено, что мексидол (производное 3-оксипиридина) был эффективен только при ОГ+Гб Антигипок-сант в дозе 50 мг/кг повышал резервное время мышей на 63%

Амтизол и бемитил (производные аминотиолов) продемонстрировали высокий уровень антигипоксической защиты мышей, подвергнутых воздействию ОГ+Гк, ОГ-Гк и ОГ+Гб (рис 3) Полученные результаты согласуются с литературными данными (Арбаева М В , 2004, Зарубина И В , Шабанов П Д, 2004, Левченкова О С, 2006)

В частности, при развитии ОГ+Гб амтизол не уступал наиболее активным цинксодержащим антиоксидантам Однако в целом действие эталонных веществ было менее выраженным (особенно у бемитила) в сравнении с протективным действием веществ л(2901 и я(21104 Также было отмечено, что оба вещества

сравнения заметно снижали ректальную температуру мышей, что было сопоставимо с гипотермическими эффектами цинксодержащих антиоксидантов.

200 ..МШи.

■кЧЯОг -п.(±91-4 пСЦЮ** 7tQíJ05

Рис. 1. Влияние наиболее активных металлсодержащих антиоксидантов на продолжительность жизни мышей в условиях ОГ+Гк и ОГ-Гк и на резервное время при развитии ОГ+Гб

20 до

Время инкубации (мин)

Рис. 2. Влияние веществ л<2901 (50 мг/кг, в/б) и л(21104 (50 мг/кг, в/б) на динамику ректальной температуры у мышей в период инкубации (60 мин)

юо

ОГ+Гк

т кгонггрсхгхь

ЕЗ ЯО 901

т яО1104

КЗ Амтизол

□ Бемитип

юо во

40

Рис. 3. Влияние амтизола и бемитила на продолжительность жизни мышей в условиях ОГ+Гк и ОГ-Гк и на резервное время при развитии ОГ+Гб в сравнении с веществами л(2901 и лС)1104

Исследование показателей острой токсичности для веществ я<3901 и тг<31104 позволило установить, что вещество л0901 является высокотоксичным (ЪО50 -51,5 мг/кг, ЕО30 - 25 мг/кг). Для вещества яС?1104 эти показатели составили соответственно 178,0 и 25,8 мг/кг, что позволило продолжить изучение его фармакологических свойств.

Таким образом, для дальнейшего исследования были отобраны вещество 71(51104 (бис (М-ацетил-Ь-цистеинато) цинк(И) сульфат октагидрат) и антигипок-сант амтизол (3,5-диамино-1,2,4-тиадиазол), оба являющиеся производными ами-нотиолов.

Так как на протяжении периода инкубации после введения некоторых металлсодержащих антиоксидантов и веществ сравнения, включая вещество яО 1104 и антигипоксант амтизол, отмечали изменения в поведении мышей (снижение двигательной, ориентировочно-исследовательской активности, утрата таксиса на пищу и воду), были проведены опыты по изучению условнорефлекторной деятельности животных.

Рис. 4. Влияние вещества rtQ1104 (А) и амтизола (Б) на показатели избегательно-го оборонительного условного рефлекса у мышей (50 мг/кг, в/б). 1 - контроль; 2 - через 30 мин после введения; 3 - через 60 мин; 4 - через 24 ч. а - Отметка условного раздражителя; б - отметка избегательной реакции; в - отметка времени: 1 деление - 4 с

Согласно результатам опытов, оба вещества оказывали негативное влияние на процесс осуществления животными избегательного оборонительного условного рефлекса (рис. 4). Как на фоне действия вещества rcQl 104, так и после введения амтизола время активного избегания достоверно сокращалось и к концу периода инкубации составляло соответственно 21,4 и 28,0% от исходных значений. По-видимому, это явилось следствием усиления процессов торможения в высших структурах ЦНС, что приводило к снижению физической выносливости мышей. В отличие от амтизола, вещество nQ1104 способствовало увеличению латентного периода избегательной реакции. Выявленные эффекты носили обратимый характер, что было подтверждено восстановлением всех показателей условнорефлек-торной активности через 24 ч наблюдения.

Известно, что поступление Oj к тканям определяется в первую очередь возможностями систем кровообращения и дыхания (Агаджанян Н.А., 1972; Miller et al., 1997; Melin et al., 2003; Аккизов А.Ю. и др., 2004). В связи с этим нами были проведены эксперименты по изучению электрической активности миокарда и некоторых параметров внешнего дыхания мышей в условиях ОГ+Гк и ОГ-Гк, а также при коррекции этих состояний веществами nQ1104 и амтизолом. Сравнительный анализ ЭКГ и пневмобарограмм, зарегистрированных у мышей на указанных моделях гипоксии, позволил обнаружить ряд отличий.

Как видно из рис. 5-А, Б, к 12-15 мин ОГ+Гк наблюдали кратковременный период повышения электрической активности миокарда в сочетании с увеличением частоты и амплитуды волн пневмобарограмм. Период повышенной активности сменялся периодом угнетения и характеризовался дестабилизацией ЭКГ в сочета нии с уменьшением лёгочной вентиляции. Подобная динамика ЭКГ и дыхания

считается типичной для гиперкапнических состояний (Молов A.A., 1998; Qihai, Lu-Yuan, 2002).

Развитие у мышей состояния ОГТк ни в одном опыте не сопровождалось увеличением частоты следования желудочковых комплексов. Как правило, с 12-15 мин опыта частота ЭКГ уменьшалась. На пневмобарограмме отмечали постепенное уменьшение амплитуды дыхательных волн (рис. 5-В, Г). Гибель животных в этой группе регистрировали значимо раньше, чем при развитии ОГ+Гк.

V-—^——у———^——

-----*-^-wv

«и. ЛЛЛЛЛЛЛЛЛЛЛЛЛ/w

" ЛЛАЛАММММЛ " UVVA/VUAAAÀAJ\

о

.АЛЛААЛАЛЛЛЛЛМ

Рис. 5. ЭКГ и пневмобарограммы мышей при ОГ+Гк (А, Б) и ОГ-Гк (В, Г)

Введение мышам вещества л<31104 и антигипоксанта амтизола в наиболее эффективных по результатам проведенного скрининга дозах (50 мг/кг, в/б) способствовало уменьшению амплитудно-временных параметров ЭКГ и пневмобаро-грамм. На фоне действия вещества яОП04 в течение 2-й половины периода инкубации частота ЭКГ замедлялась в 3,5 раза, амплитуда желудочкового комплекса заметно уменьшалась. В этот же промежуток времени отмечали замедление частоты дыхательных волн (в 4 раза) при сохранении исходной глубины. Амтизол на соответствующие показатели состояния миокарда и респираторной системы оказывал сходное, но менее выраженное действие. Максимальное замедление частоты ЭКГ (в 1,7 раза) после его применения было отмечено через 45 мин наблюдения, амплитуда зубцов ЭКГ изменялась незначительно, в то время как дыхание приобретало поверхностный характер. Важно подчеркнуть, что по истечении периода инкубации величины изучавшихся показателей оставались относи тельно стабильными на протяжении продолжительного периода.

В литературе имеются сведения о способности серосодержащих антигипок-сантов, к которым следует относить амтизол и вещество тг<31 104, оказывать кар-диодепрессивное действие, сочетающееся со снижением объёмов лёгочной вентиляции (Семиголовский Н.Ю., 1987; Зарубина И.В., Шабанов П.Д., 2004).

т

При регистрации ЭКГ у мышей на фоне действия вещества л<31104 в условиях ОГ+Гк значимых отклонений не выявляли на протяжении 115-120 мин от момента начала опыта (рис. 6-А).

Рис. 6. Динамика изменения частоты ЭКГ у мышей при ОГ+Гк (А) и ОГ-Гк (Б) в контроле и после в/б введения веществ я01104 и амтизола в дозах 50 мг/кг

Динамика пневмобарограмм также оставалась относительно устойчивой. Интервал времени, на протяжении которого электрические процессы в сердечной мышце и параметры внешнего дыхания животных в условиях эксперимента оставались стабильными, был нами обозначен как «период относительного благополучия». Следует отметить, что в сравнении с контрольной группой животных, переживавших состояние ОГ+Гк, период относительного благополучия на фоне действия вещества лО1104 увеличивался почти в 6 раз и составлял 82% от продолжительности жизни, в то время как у животных, не получивших фармакологической защиты, этот показатель составил всего 57%.

Длительность периода относительного благополучия на фоне действия амтизола не превышала 70% средней продолжительности жизни, в то время как собственно продолжительность жизни увеличивалась в 4 раза по сравнению с контролем. Тем не менее было отмечено, что вызываемые гипоксией нарушения электрической активности миокарда и угнетение дыхания в этой опытной группе проявлялись только на заключительных этапах эксперимента.

Анализ динамики изученных показателей ЭКГ у мышей в условиях ОГ-Гк (рис. 6-Б) показал, что введение вещества лО1104 гарантировало период относительного благополучия протяжённостью не менее 65 мин (72% от продолжительности жизни), который превышал контрольный показатель в 3,3 раза. В тех опытах, где для коррекции состояния ОГ-Гк использовали амтизол, длительность ука-

занного периода составляла 50 мин, т.е. 66% продолжительности жизни, и превышала соответствующий показатель контрольной группы в 2,5 раза.

Таким образом, сочетание антигипоксических эффектов изученных веществ с их тормозящими влияниями на функциональную активность эффекторов сердечно-сосудистой и дыхательной систем в условиях ОГ+Гк и ОГ-Гк подтвердило наличие у вещества 7г01104 и амтизола сходных качеств, способных обеспечивать значительное уменьшение потребностей тканей в 02.

В ходе изучения динамики потребления мышами 02 из доступного для дыхания воздуха было установлено, что после в/б введения вещества 71(31104 и амтизола в дозах 50 мг/кг животные потребляли 02 менее интенсивно, чем в контроле. В частности, спустя 60 мин после введения вещества 7101104 скорость потребления животными 02 составляла всего 45% от контрольного показателя. Что касается амтизола, то уровень кислородопотребления на момент завершения периода инкубации был заметно выше и составлял 74% от исходной величины.

После помещения животных в условия ОГ-Гк скорость потребления 02 в обеих опытных группах также была существенно ниже в сравнении с контрольными показателями, что способствовало экономному расходованию его запаса по мере нарастания у мышей состояния гипоксии (рис. 7).

чл <ч

1с

с 4ь_

cl

Nïf 40

u £

à £ 35

« Г,

30

£ 2

25

ч

о 20

15

"te -О-Контроль 7TQ1-104 Амтизол

- if -

4 site— : : :

44-Xi T x

20 g

18 M О

1fi о

14 s: 1С

12 «к 3 a. H .

-1П

8 3 r

6

25 50 75 100

Продолжительность жизни (мин)

125

Рис. 7. Потребление 02 из доступного для дыхания воздуха у мышей в контроле и на фоне действия веществ л<31104 (50 мг/кг) и амтизола (50 мг/кг)

Проведённый по результатам этих опытов расчет энергетических затрат показал, что исходная величина стандартного энергетического обмена для мышей составляла 312 ккал/сут/кг, что соответствует литературным данным (Prosser, 1973; Roffman, Lal, 1974; Слоним А.Д., 1976; Трахтенберг И.М. и др., 1978; Лев-ченкова О,С., 2006). Через 60 мин после введения вещества jtQ 1104 и антигипок-санта амтизола изучавшийся показатель у животных обеих групп уменьшился соответственно в 2,2 и 1,5 раза.

Полученные результаты позволили предположить, что вещество 7rQ 1104 способно снижать интенсивность метаболизма в тканях. Для получения прямых доказательств этого были изучены процессы тканевого дыхания в головном мозге

крыс после введения указанного цинксодержащего антиоксиданта в дозах 10,25 и 50 мг/кг

Данные, полученные в ходе изучения реакций окислительного фосфорили-рования в митохондриях клеток головного мозга, представлены в габл 2

Таблица 2

Влияния вещества яС>1104 на окислительное фосфорилирование в митохондриях головного мозга крыс

Группы Статис-

животных тические параметры V« V* Удпф ДКл ДКч АДФ /ДО АДФ /Ах ДНФ У„/У4

Контроль (п=10) М + т 22,07 0,71 57,88 ± 1,54 25,72 + 0,79 64,81 + 1,92 2,62 ± 0,08 2,25 ± 0,05 1,64 ± 0,14 87,16 + 4,93 2,54 0,05 0,86 ± 0,04

Доза М 20,55 49,32 22,36 55,83 2,40 2,21 1,56 82,39 2,51 0,92

10 мг/кг ± + + + + ± ±

(п=8) т 0,86 0,61* 0,44* 1,32* 0,09 0,14 0,13 3,67 0,06 0,05

Доза М 15,43 36,08 18,93 40,58 2,34 1,91 1,41 53,27 2,35 0,81

25 мг/кг + ± + ± ± ± ± ±

(п=8) т 0,73* 1,14* 1,02* 0,65* 0,06* 0,03 0,21 1,23* 0,11 0,08

Доза М 12,24 30,01 17,37 36,33 2,45 1,72 1,22 37,96 2,09 0,70

50 мг/кг + + + ± + ± ± ±

(п=8) т 0,95* 1,19* 0,77* 1,43* 0,10 0,03* 0,12* 2,09* 0,05* 0,06*

* - статистически достоверные различия по сравнению с контролем (р<0,05)

Как видно из таблицы, уже в дозе 10 мг/кг вещество тг<31104 оказывало тормозящее влияние на функциональную активность митохондрий, что подтверждалось достоверным снижением скорости фосфорилирующего окисления (Уз) - на 13,0%, скорости окисления после фосфорилирования (У4) - на 14,8%, а также скорости дыхания митохондрий в состоянии разобщения - на 13,9%

Следует отметить, что вещество я(21104 в дозе 10 мг/кг не нарушало процессов сопряжения окисления и фосфорилирования, о чем свидетельствовали устойчивые соотношения между соответствующими скоростями окисления, которые представлены в виде дыхательных коэффициентов ДКЛ и ДКЧ, а также достаточно высокий показатель АДФ/ДО Продукция АТФ в митохондриях, согласно расчетам соотношения АДФ/А1, оставалась на уровне исходного значения

Введение вещества тг(31104 в дозах 25 и 50 мг/кг подтвердило его способность замедлять процессы внутриклеточного дыхания на уровне митохондрий ткани мозга По мере увеличения дозы вводимого цинксодержащего антиоксиданта происходило дальнейшее замедление всех изучавшихся скоростей окисления Например, после введения вещества 104 в дозе 50 мг/кг скорость окисления глутамата (У0) снижалась более чем на 30% от исходной величины, а скорость фосфорилирующего окисления (У3) - почти на 50% При этом У4 и УДНФ составляли всего 77 и 56% соответственно от исходных значений

Настораживающим моментом, с нашей точки зрения, явился отрицательный эффект вещества rcQl 104 после его применения в дозах 25 и 50 мг/кг на реакции сопряжения процессов окисления и фосфорилирования в митохондриях мозга крыс Это нашло отражение в значимом понижении показателя дыхательного контроля по Чансу (ДКЧ), дающего представление о чувствительности митохондрий к приросту концентрации АДФ, что предполагало уменьшение сродства дыхательной цепи к добавке АДФ Снижение коэффициента АДФ/ДО также подтверждало частичное уменьшение энергоэффективности окисления митохондриями субстрата

Тем не менее, несмотря на то, что после использования вещества nQ1104 в дозе 25 мг/кг продукция АТФ в митохондриях снижалась на 38,9%, соотношение скоростей окисления Vo/V4, характеризующее способность митохондриальных мембран сохранять энергетический потенциал, оставалось на уровне контрольных величин Однако после введения изученного вещества в дозе 50 мг/кг энергетический потенциал начинал понижаться и составлял 81% от исходного уровня, в то время как образование АТФ в митохондриях снижалось в 2,3 раза

На сегодняшний день к числу наиболее известных классов органических веществ, способных модифицировать энергообразующие процессы в митохондри-альном компартменте при гипоксических состояниях, относят серосодержащие соединения, которые, главным образом, представлены аминотиолами - гутими-ном, амтизолом, бемитилом (Бакибаев А А и др , 1997) Феномен снижения энер-госинтезирующей функции митохондрий клеток печени на фоне действия анти-гипоксических веществ аминотиолового ряда продемонстрирован в эксперименте (Зарубина И В , Шабанов П Д, 2004) Согласно полученным авторами данным, после введения амтизола (25 мг/кг) крысам, помещенным в условия острой ги-поксической гипоксии, содержание АТФ в митохондриях уменьшалось на 45% в сравнении с контрольной группой (гипоксия) Авторами было высказано предположение, что амтизол при острой гипоксии способствует сохранению адениннук-леотидного пула в энергопотребляющем и энергосинтезирующем компартментах клетки, что, возможно, характерно и для вещества nQ 1104

Сведения о перспективах разработки нового класса антигипоксантов на основе смешаннолигандных соединений металлов с аминокислотами, витаминами и другими антиоксидантами встречаются в целом ряде аналитических обзоров и научных работ, выполненных за последние 10-15 лет (Парфенов Э А, Смирнов Л Д, 1993, Лукьянчук В Д, Савченкова Л В , 1998, Лебедева С А , 2003, Левчен-кова О С, 2005) Идея базировалась на том, что интегрированный в структуру биологически активного вещества тот или иной незаменимый микроэлемент способен оказывать более существенное влияние на биоэнергетические процессы внутри клерки, чем самостоятельный лиганд (Eisenberg-Hohl, 1996)

Как установлено, многие металлопротеины (в том числе и цинксодержащие ферменты) принимают активное участие в синтезе нуклеиновых кислот, в белковом, жировом и углеводном видах обмена (Spiro, 1983) Однако, по нашему мнению, при остро развивающихся гипоксических состояниях указанные механизмы синтеза de novo металлоферментов в силу их инертности не могут вносить значи-

тельного вклада в совокупность процессов, обеспечивающих повышение резистентности организма к кислородной недостаточности

Согласно собственным результатам, вещество TtQ1104 обладает способностью оптимизировать работу лимитирующих звеньев энергетического обмена в клетке Это подтверждается в первую очередь существенным замедлением на фоне его действия интенсивности протекания всех изученных видов внутримито-хондриального дыхания, что сопровождалось ожидаемым снижением синтеза АТФ, но при этом протекало без существенной утраты митохондриями мозга способности сохранять собственный энергетический потенциал Из литературных источников следует, что подобного рода изменения на уровне митохондриального компартмента достаточно предсказуемы и закономерны при реализации защитных эффектов антигипоксических веществ, так как они лежат в основе последующего экономичного расходования поступающих на матрикс митохондрий 02 и субстратов окисления (Hochachka, 1980, Siesjo, 1994, Лукьянова Л Д и др, 2007)

По нашему мнению, внутриклеточными структурами-мишенями антигипок-сического действия вещества ttQ1104 могут являться, прежде всего, митохондрии головного мозга, сердца, печени Как показали результаты исследования, принципиальным отличием изученного комплексного соединения цинка и N-ацетил-Ь-цистеина от прочих антигипоксантов аминотиолового происхождения является его способность оказывать отчетливое влияние на метаболические процессы внутри клетки в условиях нормоксии, в то время как гутимин, амтизол, бемитил, как правило, более значимо демонстрируют свои защитные свойства в ходе формирования гипоксического состояния (Виноградов В М , 1978, Смирнов А В , Криворучко Б И, 1998)

Присутствие цинка в структуре молекулы КГ-ацетил-Ь-цистеина априори предполагало проявление качественно новых эффектов синтезируемого комплексного соединения, так как переходные металлы, к каковым относится и цинк, в биологических системах выполняют множество функций, в том числе и функцию активного центра металлоферментов В целом комплексные соединения М-ацетил-Ь-цистеина с биометаллами можно рассматривать одновременно как метаболиты и металла и лиганда (Парфёнов Э А , 2000) По этой причине вероятность обнаружения защитного эффекта у комплексного соединения, например при гипоксии, значительно выше, чем только у металла или отдельно у лиганда.

Мы выдвигаем гипотезу о том, что наиболее вероятной точкой приложения антигипоксического действия вещества nQ 1104 в дыхательной цепи митохондрий является ее цитохромный фрагмент Высказанное предположение основывается на фактах, подтверждающих способность Zn2+ заметно ограничивать объемы электронных потоков в области цитохромов дыхательной цепи на участке Ь-с вплоть до их полной блокады (Scott, Mauk, 1996, Лукьянова Л Д, 2004, Branden, 2003) Указанный феномен обеспечивает экономичность процессов окислительного фосфорилирования, что предотвращает преждевременное истощение внутриклеточных резервов, в том числе и за счет угнетения чрезмерно быстрого окисления митохондриями НАД-зависимых субстратов (Дудченко А М , Лукьянова

JIД, 1996, Лукьянова Л Д, 2000) Присутствие Zn2+ в составе двух молекул Ы-ацетил-Ь-иистеина, образующих вещество jcQ1104, на наш взгляд, при развитии острой гипоксии ограничивает фазную активацию НАД-зависимого окисления в митохондриях мозга и, возможно, других энергоемких органов, что на следующем этапе формирования гипоксии позволяет отсрочить момент наступления фазы угнетения указанного процесса

Литературные данные косвенно подтверждают высказанную гипотезу (Лукьянова Л Д, 1991, Сергеева С С , 1994) Так, С С Сергеева с соавторами (1991) полагают, что на нейронном уровне протективные эффекты аминотиоловых антиги-поксантов могут существенно отличаться в способах их реализации Например, если для гутимина в большей степени характерна пассивная защита нейронов от энергетического дефицита за счет снижения энерготрат на электрогенез, то, в свою очередь, амтизол способен активно перестраивать мембранные и внутриклеточные процессы для сохранения стабильного энергообеспечения импульсной активности нейронов

В последние годы у антигипоксантов аминотиолового ряда была обнаружена способность ограничивать активацию процессов перекисного окисления липидов и препятствовать угнетению антиокислительных систем при остроразвивающейся гипоксии (Грек О Р , 1978, Смирнов А В и др ,1998, Шабанов П Д и др , 2005) Тем не менее многие авторы полагают, что антиоксидантный эффект гутимина и амтизола является не столько результатом их прямого влияния на процессы пе-роксидации липидов, сколько опосредован стабилизацией энергетического обмена клетки

Мы полагаем, что вещество jiQI 104, в соответствии с его структурными особенностями, также способно принимать участие в регулировании процессов сво-боднорадикального окисления в тканях В отличие от эталонных аминотиоловых антигипоксантов (гутимина, амтизола, бемитила), вещество nQl 104 владеет свободными SH-группами (в составе двух молекул N-ацетил-Ь-цистеина) Роль сульфгидрильной группы как участника энзиматических и антиокислительных реакций имеет большое значение в процессах сопряженного катализа, обеспечивающих синхронизацию событий в метаболических, энергетических и информационных биологических потоках (Зайцев В Г и др, 2003) Редокс-превращения SH-групп органических компонентов клетки способствуют сохранению показателей гомеостаза на оптимальном уровне (Bellomo, 1991) Благодаря наличию SH-групп, изученное комплексное соединение способно выступать в качестве редокс-буфера клетки, поддерживая в ней восстановленную среду, обеспечивая восстановление SH-групп энергообеспечивающих ферментов митохондрий при их окислении В связи с этим дефицит тиолового редокс-контроля активности ферментов, который восполняется в клетке преимущественно путем использования тиолдисучьфидных соединений (глутатионовая система) (Биленко М В , 1989, Sen, 1998), при развитии острой гипоксии вполне может быть частично компенсирован за счёт стабилизирующих эффектов вещества nQl 104, что можно рассматривать в качестве возможного дополнительного механизма его антигипокси-ческого действия

Присутствие цинка в структуре вещества rcQ1104 также может влиять на течение свободнорадикальных реакций в клетке Установлено, что в отличие от целого ряда ионов металлов (кобальт, никель, хром), инициирующих реакции сво-боднорадикапьного окисления (Владимиров Ю А и др , 1991), цинк обладает антиокислительным эффектом, являясь фактором стабилизации плазматических мембран, поврежденных продуктами пероксидации Кроме того, имеются сведения о том, что цинк эффективно препятствует всасыванию прооксидантных микроэлементов (Скальный А В , Кудрин А В , 2000, Ракитский В Н , Юдина Т В , 2005)

Следует также отметить, что лиганд химического соединения jcQI 104 -N-ацетил-Ь-цистеин является природным метаболитом L-цистеина, в связи с чем его можно рассматривать как низкомолекулярное соединение, способное выполнять и самостоятельные защитные функции (Kolar et al, 2003) Например, установлено, что этот агент регулирует активность факторов транскрип гации АР-1 и NF-кВ в качестве хелатора ионов Zn(II) (Kim С Н et al, 2003), а не выступает в качестве ловушки активных частиц, как считали ранее

В целом полученные данные свидетельствуют о наличии у вещества jiQI 104 многокомпонентного нейропротективного действия, позволяющего обеспечить поддержание устойчивой деятельности митохондрий нервных клеток в условиях острого дефицита 02 в окружающей воздушной среде

Много нового в понимание патогенетических механизмов гипоксии привнесли исследования, в которых гипоксия расценивается, в первую очередь, как фактор инициации процессов, приводящих к электрической нестабильности клеточных мембран нейронов, которая в итоге может являться непосредственной причиной гибели клеток (Kerr et al, 1973, Завалишин И А , Захарова М Н , 1999) Такой подход к патогенезу 02-недостаточности представляется наиболее оправданным, так как именно гибель нейронов в настоящее время рассматривается в качестве основы для возникновения той или иной патологии ЦНС (Викторов И В , 1996, Nyakas et al, 1996)

Известно, что нейроны головного мозга характеризуются особенно высоким уровнем утилизации 02 (Auer, Benveniste, 1997, Шевченко Ю В , 2000) Результаты экспериментальных исследований и клинических наблюдений свидетельствуют о повышенной чувствительности структур ЦНС к недостатку кислородного и энергетического обеспечения (Siesjo, Smith, 1989) В связи с этим фармакологическая защита организма от гипоксии должна быть преимущественно нацелена на повышение резервных возможностей нервных элементов головного мозга

Использование метода периодической дыхательной асфиксии в сочетании с возможностью задействования более жёстких режимов «асфиксия/восстановление» обеспечило в наших опытах дополнительную объективизацию оценки уровня резистентности животных к условиям эксперимента

Результаты проведенных опытов показали, что по мере формирования у кошек состояния дыхательной асфиксии, первые признаки ухудшения кислородного обеспечения головного мозга проявляются в изменении амплитуды и длительности первичной негативной волны ВП

Как видно из рис 8-1 (А, Б), на начальном этапе дыхательной асфиксии, по завершении 1-го цикла режима 2,5/3, биоэлектрическая активность соматосенсор-ной коры заметно возрастала, что выражалось преимущественно в увеличении амплитуды первичной негативной волны ВП

I II

Рис 8 Усредненные вызванные потенциалы соматосенсорной коры в условиях периодической дыхательной асфиксии

I - контроль, режим 2,5/3 А - вызванный потенциал у кошки до асфиксии,

Б - через 2 мин 1-го цикла дыхательной асфиксии, В - через 2 мин 4-го цикла

II - на фоне действия вещества л:(31104 (50 мг/кг, в/б) А - вызванный потенциал перед началом опыта, Б - через 90 мин после введения вещества я<51104 (начало опыта), В - через 218 мин после начала опыта (окончание 10-го цикла режима 4/1,5) Стрелкой обозначен момент нанесения раздражения

Увеличение корковой активности мозга сопровождалось развитием у животных тахикардии (рис 9), что, по всей видимости, явилось результатом стресс-индуцируемой активации спинальных симпатических центров и выброса надпочечниками катехоламинов (Наскеи, 1980, Меерсон Ф 3 , 1986, Дмитриева И А , 1991, РегИопеп е1 а1, 1995, Молов А А , 1998)

При дальнейшем пошаговом углублении гипоксического статуса, в ходе многократного повторения циклов «асфиксия/восстановление» наблюдали прогрессирующее снижение амплитуды первичной негативной волны ВП в сочетании с увеличением ее длительности (рис 8-1 (В), что, согласно литературным источникам, принято рассматривать как показатель ослабления биоэлектрической активности коры и подкорковых структур головного мозга (МсРИегеоп е! а1, 1986, На1-Мау, 1993, Орлова Т В , Любимов С Н , 2004; Фаррахова Г Р и др , 2004)

Так как в наших экспериментах периоды «восстановления» были целенаправленно минимизированы, то ВП, регистрируемые в условиях молниеносно развивающейся гипоксии, отличались полиморфизмом В свою очередь интервалы так называемого «электрического молчания» - полного исчезновения биоэлектрической активности мозга - возникали заметно раньше, чем в близких по характеру исследованиях других авторов (Виноградов В М и др , 1970, Асату-рян М А , Александрова А Е , 1974)

Рис. 9 ЭКГ у кошек при периодической дыхательной асфиксии Режим 2,5/3, 1-й цикл А - ЭКГ до асфиксии, Б - через 1 мин асфиксии, В - через 2 мин асфиксии, Г - через 2,5 мин асфиксии, Д - через 2 мин периода восстановления

Согласно полученным результатам, введение кошкам вещества jtQ1104 (50 мг/кг, в/б, за 90 мин до начала опыта) не только оказывало стабилизирующее влияние на динамику ВП в соматосенсорной коре, но также гарантировало восстановление мозговой активности в случаях применения к животным более жестких режимов периодической дыхательной асфиксии - 3/2,5, 3,5/2, 4/1,5 (рис 8-И) При этом необратимые изменения (неполное восстановление ВГ1, исчезновение биоэлектрической активности) наблюдали только на фоне наиболее тяжелого режима 4,5/1 (асфиксия - 4,5 мин, восстановление -1 мин)

В М Виноградов и соавторы (1970) отмечали ряд негативных сторон метода дыхательной асфиксии Согласно мнению исследователей, в ходе применения указанного метода формируется не совсем «чистая» гипоксия мозга, так как в большинстве случаев стремительно развивающаяся кислородная недостаточность приводит к резкому ослаблению сердечной деятельности и выраженной артериальной гипотонии В некоторых случаях авторы наблюдали и другие осложнения, обусловленные дыхательной асфиксией, такие как остановка сердца, фибрилляция желудочков Известно, что снижение артериального давления существенно усугубляет и пролонгирует кислородное голодание мозга (Brown, 1973, Farber, 1981, Бархатова В П и др , 1991) Однако вышеперечисленные последствия дыхательной асфиксии, по мнению авторов, не только не являются препятствием для использования в эксперименте асфиксической модели, но, напротив, предрасполагают к ее применению, в связи с тем, что формирующееся у животного состояние во многом соответствует статусу больного или пострадавшего в условиях реанимации при развитии сердечных или дыхательных расстройств

Как показали наши собственные исследования, эффективная защита головного мозга веществом irQl 104 в определенной степени может быть обусловлена мягким кардиодепрессивным действием вещества, наличие которого не только ограничивает чрезмерно интенсивную доставку 02 к головному мозгу, лимитируя его расход (Василенко A M , 1980, Tremper, 1990, Yun et al., 1997), но также предупреждает развитие приступов тахикардии, связанных с формированием гипок-сического стресса, которые способны осложниться развитием острой сердечной недостаточности и спровоцировать фибрилляцию желудочков (Graver et al, 1990, Welt et al, 1996, Грек О P , 2001, Соколова НА и др , 2002) Следует подчеркнуть, что отрицательная роль гипоксического стресса в условиях периодической дыхательной асфиксии в значительной степени может усиливаться по причине невозможности вовлечения в компенсационный процесс механизмов дыхательной адаптации (Thomas et al, 1995)

Тем не менее на фоне действия вещества ttQI 104, уровень биоэлектрической активности соматосенсорной коры головного мозга оставался относительно стабильным на протяжении 229+12 мин, что почти в 5 раз превышало контрольный показатель (46±5 мин)

Так как молниеносные формы гипоксии встречаются нечасто (Ефуни С H, Шпектор В А , 1981, Симоненков А П и др , 2004), представлялось важным дать оценку эффективности вещества 7cQ1104 в опытах на животных, помещенных в условия более распространенных видов экзогенной гипоксии - ОГ+Гк и ОГ-Гк Как следует из представленных результатов, по мере углубления состояний ОГ+Гк и ОГ-Гк параметры усредненных ВП соматосенсорной коры отчетливо изменялись (рис 10)

ОГ+Гк ОГ-Гк

Рис 10 Усредненные вызванные потенциалы соматосенсорной коры при развитии ОГ+Гк и ОГ-Гк

А - исходное состояние Б - гипоксия 1 - лёгкая стадия гипоксии, 2 - средняя стадия, 3 - глубокая стадия, 4 - предтерминальная стадия Стрелкой обозначен момент нанесения раздражения

Установлено, что в структуре корковых ВП наиболее чувствительным к дефициту 02 компонентом выступает первичная негативная волна (Батуев А С, 1980, Оо1с11е е1 а1, 1981) Нами было условно принято, что уменьшение первичной негативной волны в пределах 90-55% от исходного уровня характеризует легкую,

1-ю стадию гипоксии Уменьшение первичной негативной волны в пределах 50-30% от исходного значения характеризовало среднюю, 2-ю стадию гипоксии Уменьшение показателя в пределах 25-10% от исходного уровня - глубокую, 3-ю стадию гипоксии Наконец, уменьшение первичной негативной волны в пределах от 5% вплоть до полного ее исчезновения характеризовало предтерминаль-ную, 4-ю стадию ОГ+Гк

В наших экспериментах лёгкая стадия ОГ+Гк у животных в среднем развивалась через 7,3±1,2 мин после инициации модельных условий, средняя стадия - через 34,1±3,3 мин, глубокая - через 50,8±3,5 мин, тогда как предтерминальная стадия развивалась обычно через 55,8±3,8 мин

В опытах с моделированием ОГ-Гк легкая стадия гипоксии у животных развивалась спустя 9,5±1,0 мин, средняя - через 28,4±2,9 мин, глубокая стадия - через 36,2+3,3 мин Предтерминальную стадию регистрировали обычно к 45 мин опыта Полученный нами в результате применения оригинальных моделей ОГ+Гк и ОГ-Гк фактический материал не противоречит сведениям имеющимся в литературе относительно других видов гипоксии, и, в частности, острой гипоксической гипоксии, вызываемой вдыханием гипокислородных газовых смесей (воИш й а1, 1981) Авторы отмечали, что, по мере углубления названного состояния, на фоне медленноволновой ЭЭГ-активности ВП демонстрировали увеличение латентных периодов, уменьшение амплитуды основных компонентов ВП в сочетании с увеличением их протяжённости Подобные изменения характеристик ВП, как выяснилось, полностью коррелировали с изменениями кровотока и кислородного обеспечения ткани мозга (МсРЬегеоп с1 а1,1986)

Параллельно регистрации ВП нами выполнялось микроэлектродное отведение биопотенциалов непосредственно от нейронов коры мозга Согласно литературным данным, в экспериментах по изучению влияния кислороддефицитных состояний на импульсную активность нейронов предметом исследования нередко выступают нейроны, имеющие отношение к стволовому отделу дыхательного центра (Зинченко Е А и др, 2004) В наших опытах впервые была прослежена динамика изменений фоновой и вызванной активности нейронов соматосенсор-ной коры при развитии у кошек острой экзогенной нормобарической гипоксии (рис 11) Всего в ходе нарастания ОГ+Гк и ОГ-Гк было зарегистрировано соответственно 184 и 160 нейронов В ряде опытов удалось зафиксировать изменения активности отдельных нервных клеток на протяжении всех стадий формирующегося гипоксического состояния

Как видно из представленных растровых диаграмм и перистимульных гистограмм, нейроны соматосенсорной коры при достижении 1-й (легкой) и 2-й (средней) стадий ОГ+Гк, демонстрировали 2-, 3-кратное усиление фоновой активности При этом отмечалось уменьшение выраженности вызванных ответов клеток и увеличение времени реагирования нейронов на раздражитель При достижении предтерминальной (4-й) стадии ОГ+Гк нейроны становились ареактивным

Изучение импульсной активности нейронов при ОГ-Гк позволило установить, что фоновая активность нервных клеток соматосенсорной коры по мере уг-

лубления изучавшегося гипоксического состояния постепенно снижалась и исчезала, как правило, на этапе развития 4-й (предтерминальной) стадии ОГ-Гк.

т гоо боо юоо

1" zoo too юоо

Рис. ] 1. Динамика вызванных реакций нейрона соматосенсорной коры при развитии ОГ+Гк и ОГ-Гк.

А - исходное состояние. Б - гипоксия: 1 - лёгкая стадия гипоксии; 2 - средняя стадия; 3 - глубокая стадия; 4 - предтерминальная стадия. По вертикали: число импульсов в бине перистимульной гистограммы (1 бин=10 мс); по горизонтали: время, мс. Стрелкой обозначен момент нанесения раздражения

Как следует из полученных результатов, на момент завершения 2-й (средней) стадии ОГ+Гк концентрация С02 во вдыхаемом воздухе возрастала до 4-7%, что соответствовало напряжению С02 в крови порядка 50-60 мм рт. ст. и объективно свидетельствовало о пребывании животного в состоянии умеренной гиперкапнии (Агаджанян H.A., Елфимов А.И., 1986; Вовенко Е.П., Соколова И.Б., 1998).

Большинство исследователей согласны с тем, что постепенное нарастание гиперкапнии первично проявляется в возбуждающем влиянии увеличивающегося напряжения углекислоты и водородных ионов в крови и спинномозговой жидкости на ранние инспираторные нейроны дыхательного центра, а также на нейроны коры головного мозга. Подобные эффекты могут реализоваться как через специфические рецепторы ретикулярной формации ствола мозга, так и через хеморе-цепторы сосудистых рефлексогенных зон (Акопян Н.С., 1987; Агаджанян H.A. и др., 2001).

Однако при значительном углублении гиперкапнии (увеличении содержания С02 во вдыхаемом воздухе более чем на 9-10%) стимулирующее действие углекислоты прекращается (Агаджанян H.A., Чижов А.Я. 2003; Sutton et al., 1990). Период повышенной активности нейронов коры головного мозга и дыхательного центра сменяется периодом их угнетения, что нашло отражение в структуре пери-

стимульных гистограмм и параметров ВП, зарегистрированных в ходе наших экспериментов

Отсутствие фазы повышения фоновой активности нервных клеток при развитии ОГ-Гк, которая, как ранее упоминалось, была отчетливо выражена при ОГ+Гк, с нашей точки зрения может быть объяснено, главным образом, прекращением стимулирующего влияния С02 на стволовые структуры головного мозга (СагреШег е! а1, 1974), что всегда находит отражение в уровне активности нейронов различных корковых представительств, включая и соматосенсорную зону Данное предположение подтверждается литературными источниками (Киуреге, 1960, СЬакжотПБ, 1963, Ьетопеп, 1984, Акопян Н С , 1987)

Наблюдавшаяся на протяжении первых двух стадий ОГ-Гк (легкая, средняя) стабильность латентного периода реагирования нейронов в сочетании с относительно устойчивыми паттернами нейронных ответов объективно подтвердили устойчивость исходной скорости реагирования животных на предъявляемый стимул (Дудкин К Н, 1970, Гоголицин Ю Л, Кропотов Ю Д 1983, Черенкова Л В и др , 1987) Наиболее вероятной причиной отсутствия значимых изменений вызванной активности нервных клеток в этих стадиях, по-видимому, вновь послужил относительно низкий уровень содержания С02 во вдыхаемом воздухе

Динамика электрической активности миокарда в ходе нарастания состояний ОГ+Гк и ОГ-Гк представлена на рис 12

л Б

л——Л^-Л———

А ог-гк

|—\——^——4—4"

4-4-4-4-

4—4—4—4~1

Рис 12 ЭКГ кошек при развитии ОГ+Гк и ОГ-Гк

А - исходное состояние Б - гипоксия 1 - легкая стадия гипоксии, 2 - средняя стадия; 3 - глубокая стадия, 4 - предтерминальная стадия, 5 - исчезновение электрической активности

Развитие легкой (1-й) стадии ОГ+Гк во всех опытах сопровождалось тахикардией Известно, что сердце в ответ на нарастание гипоксии, как правило, реагирует учащением ритма Например, вдыхание гипоксической смеси, содержавшей 12% 02 способствовало увеличению частоты сердечных сокращений у подавляющего большинства обследуемых (СЬегшаск, Longobardo, 1970, Дударев В П , 1979, Чабдарова Р Н , 1982)

В опытах, выполненных на добровольцах, с использованием газовых гипер-капнических смесей содержащих 16% С02 и 8% 02, также было показано, что 30-минутные ингаляции смеси газов сопровождаются прогрессирующим увеличением частоты сердечных сокращений Однако по истечении этого периода у испытуемых отмечали быстрое формирование брадикардии, в связи с чем спустя 5-10 мин от момента констатации кардиодепрессивного эффекта эксперименты, как правило, приходилось прекращать (Агаджанян НА и др , 1987)

Анализ записей ЭКГ кошек, переживавших состояние ОГ-Гк, показал, что на протяжении двух первых стадий гипоксии (легкая, средняя) динамика частоты ЭКГ-комплексов мало отличалась от таковой при ОГ+Гк При переходе к легкой стадии ОГ-Гк практически у всех экспериментальных животных регистрировали достоверное увеличение частоты ЭКГ

В литературных источниках встречаются противоречивые сведения о реакциях системы кровообращения в ответ на развитие острой гипоксии, протекающей без сопутствующей гиперкапнии В Частности, по данным Н А Агаджаняна и А И Елфимова (1986), вдыхание людьми 10% гипоксических газовых смесей не сопровождалось увеличением показателей кровообращения, и даже напротив, приводило к развитию брадикардии. В свою очередь, согласно данным В Б Мал-кина и Е Б Гиппенрейтера (1977), а также С В Даниярова (1979), при «подъеме» испытуемых на умеренные высоты у большинства из них наблюдали увеличение частоты ЭКГ

Учитывая, что в наших опытах, выполненных с использованием искусственной вентиляции легких, возможности адаптации животных к состояниям ОГ+Гк и ОГ-Гк во многом были ограничены ресурсами системы кровообращения, наблюдавшаяся в ходе углубления гипоксического статуса ранняя активация электрических процессов в миокарде была вполне объяснима В частности, одним из ЭКГ-признаков снижения внутреннего энергетического потенциала миокарда явилось смещение сегмента БТ относительно изолинии Элевацию сегмента обычно обнаруживали при переходе легкой (1-й) стадии ОГ+Гк в среднюю (2-ю), и в дальнейшем наблюдали на всем протяжении глубокой и предтерминальной стадий В свою очередь, на фоне ОГ-Гк элевацию сегмента 8Т наблюдали преимущественно при достижении предтерминальной (4-й) стадии ОГ+Гк

Развитие выраженной брадикардии на фоне остро нарастающей гипоксии, по нашему мнению, способствовало усугублению кислородного дефицита в мозговой ткани и ускоряло момент индикации биоэлектрических признаков клинической смерти экспериментальных животных

Как показали наши опыты, динамика ухудшения ЭКГ-параметров у кошек, переживавших условия ОГ-Гк, в сравнении с ОГ+Гк, на первых стадиях гипоксии имела менее яркий характер Однако по достижении глубокой (3-й) и предтерминальной (4-й) стадий ОГ-Гк, согласно данным регистрации ЭКГ, состояние «относительного благополучия» быстро исчезало

Следует отметить, что скорость потребления животными Ог из дыхательной емкости при ОГ-Гк была несколько выше, чем при ОГ+Гк, однако переход к каж-

дой последующей стадии гипоксии происходил при практически равных для обеих изучавшихся моделей гипоксических состояний концентрациях 02

Как было установлено, в/б введение вещества л<31104 сопровождалось заметными изменениями биоэлектрической активности соматосенсорной коры, что проявлялось в некотором увеличении латентного периода ВП, уменьшении амплитуды его негативной волны (рис 13-А, Б), а также в увеличении времени реагирования отдельных нейронов на воздействие раздражителя при сохранении их стабильной фоновой активности (рис 14-А, Б)

2(20 мин)

3{50 мин)

4(75 мин) 5(130 мим)

Рис 13 Усредненные вызванные потенциалы соматосенсорной коры мозга кошки, получившей вещество я(21104 (50 мг/кг, в/б), при развитии ОГ+Гк и ОГ-Гк А исходное состояние Б 1 - через 90 мин после введения вещества я(31104, 2 - легкая стадия гипоксии, 3 - средняя стадия, 4 - глубокая стадия, 5 - предтер-минальная стадия ОГ+Гк Стрелкой обозначен момент нанесения раздражения

Мы полагаем, что все вышеуказанные трансформации биоэлектрических процессов вполне согласуются с результатами, полученными нами в ходе опытов, выполненных на митохондриях головного мозга, когда у вещества лС>1104 была обнаружена способность вызывать замедление скорости протекания метаболических реакций в митохондриальном компартменте клеток

Следует отметить, что изменения электрических процессов в сердечной мышце на фоне действия изученного цинксодержащего антиоксиданта также были значимыми и преимущественно проявлялись в снижении частоты генерации ЭКГ-комплексов, которая уменьшалась почти на 40% по сравнению с исходным значением (рис 15-А, Б)

Известно, что в условиях кислородной недостаточности аппарат кровообращения является основным звеном, ограничивающим уровень работоспособности и лимитирующим транспорт 02 (Дергунов А В , 1995, Борисюк М В и др , 2002) Отмечено, что чем быстрее при гипоксии развивается брадикардия, тем медленнее снижается парциальное давление 02 в альвеолах легких, а значит, экономнее расходуется резерв Ог в организме (Галанцев В П, 1977, Бикида е! а1, 1989)

^ 4(90 мин) — 5(160 мин}

f ........... .............. ........, 't

s s

: ....................................................................................................: |_____■ -J'. -........................- _

Г 200 too lOOO " <' t iOQ 600 lOOO

Рис. 14. Гистограммы вызванных ответов отдельного нейрона соматосенсорной коры мозга кошки, получившей вещество tcQ 1104 (50 мг/кг, в/б), при развитии ОГ+Гк и ОГ-Гк.

А: исходное состояние. Б: 1 - через 90 мин после введения вещества TtQ1104; 2 - лёгкая стадия гипоксии; 3 - средняя стадия; 4 - глубокая стадия; 5 - предтер-минальная стадия. По вертикали: число импульсов в бине перистимульной гистограммы (1 бин=10 мс); по горизонтали - время, мс. Стрелкой обозначен момент нанесения раздражения

Таким образом, профилактическое применение вещества nQl 104, с нашей точки зрения, позволило оптимизировать уровень активности ЦНС и миокарда животных в условиях постепенно нарастающего дефицита 02.

Было установлено, что в соответствии с динамикой изменения первичной негативной волны ВП смена стадий ОГ+Гк и ОГ-Гк на фоне действия вещества 7rQl 104 происходила значительно медленнее (рис. 13-Б). Так, лёгкую стадию ОГ+Гк регистрировали в среднем через 12,4+2,3 мин после помещения животных в условия опыта. Среднюю стадию ОГ+Гк регистрировали через 40,7+3,9 мин, глубокую - через 86,1+6,3 мин. Развитие предтерминальной стадии отмечали, как правило, спустя 154,0+13,6 мин от момента помещения животных в модельные условия.

Согласно полученным результатам, чувствительность животных к состоянию ОГ-Гк была несколько выше, чем к ОГ+Гк. Это подтверждалось более ранним переходом средней (2-й) стадии ОГ-Гк в глубокую (3-ю) - через 71,6±6,9 мин, а также тем, что предтерминальная (4-я) стадия при ОГ-Гк наступала на 30 мин быстрее. чем при развитии ОГ+Гк. Полное исчезновение ВП при ОГ-Гк, как правило, наблюдали спустя 134 мин от момента начала опыта.

По результатам регистраций импульсной активности отдельных нейронов соматосенсорной коры при развитии у кошек состояний ОГ+Гк и ОГ-Гк было ус-

тановлено, что вещество я<31104 достоверно повышает резистентность нейронов к воздействию обоих изучавшихся вариантов гипоксии (рис. 14-Б).

По мере углубления у кошек указанных состояний было отмечено, что нейроны соматосенсорной коры на фоне действия вещества яС>1104 в целом слабее реагируют на нарастание экзогенной гипоксии в сравнении с нейронами животных соответствующих контрольных групп. Это подтверждалось медленно нарастающими негативными изменениями в уровне фоновой активности, а также более стабильными паттернами вызванных ответов. В частности, при развитии у животных состояния ОГ-Гк ответные реакции нейронов удавалось регистрировать даже в ходе формирования предтерминальной (4-й) стадии гипоксии.

Антигипоксический эффект вещества я(31104 был подтвержден почти 3-кратным увеличением периода, на протяжении которого нейроны соматосенсорной коры сохраняли способность реагировать на электрические стимуляции лучевого нерва (в 2,9 раза - при ОГ+Гк, в 2,7 раза - при ОГ-Гк) в сравнении с установленными контрольными значениями.

Характерная динамика изменений ЭКГ у кошек, получивших в качестве протектора гипоксического состояния вещество я<31104 и в дальнейшем подвергнутых воздействию ОГ+Гк и ОГ-Гк, представлена на рис. 15.

ОГ+Гк

'Д——

ОГ-Гк

—*—'——-■ ■ ■ . ———

Рис. 15. ЭКГ кошек при развитии ОГ+Гк и ОГ-Гк на фоне действия вещества я01104 (50 мг/кг, в/б).

А: исходное состояние. Б: 1 - через 90 мин после введения вещества я01104; 2 - лёгкая стадия гипоксии; 3 - средняя стадия; 4 - глубокая стадия; 5 - предтер-минальная стадия

В условиях ОГ+Гк электрическая активность миокарда на фоне действия вещества яО1104 имела сходную динамику в сравнении с контролем. Как правило, на протяжении 115-120 мин достоверных изменений со стороны изучавшихся характеристик ЭКГ не выявляли. Было установлено, что применение вещества я0>1104 не предупреждало возникновения фазы повышенной активности миокарда в лёгкую (1-ю) стадию ОГ+Гк. В связи с этим можно заключить, что формиро-

вание у кошек антигипоксического эффекта вещества nQ1104 не оказывало дестабилизирующих влияний на реактивность базовых физиологических механизмов сердечной регуляции. Элевацию сегмента ST наблюдали исключительно по достижении глубокой (3-й) стадии ОГ+Гк, что свидетельствовало об относительно адекватном обеспечении миокарда кислородом на протяжении большей части эксперимента (Граф A.B. и др., 2004; Орлов В.Н., 2004).

Особенности изменений ЭКГ у кошек при развитии состояния ОГ-Гк на фоне действия вещества nQ1104, также как и при ОГ+Гк, проявлялись в стабилизирующих влияниях изученного цинксодержащего антиоксиданта на основные характеристики ЭКГ. Было отмечено отсутствие периода активации ЭКГ на ранних стадиях ОГ-Гк. При достижении глубокой (3-й) и предтерминальной (4-й) стадий ОГ-Гк наблюдали постепенное угнетение электрических процессов в миокарде, но без явных признаков его ишемизации. Кроме того, для формирующегося ги-поксического состояния было характерно сохранение синусного ритма, хотя при глубокой и предтерминальной стадиях иногда наблюдали единичные предсерд-ные экстрасистолы, что в соответствии с данными литературы указывало на развитие негативных изменений в миокарде предсердий (Будзинская Н.И., Никитин Г А., 1995; Орлов В.Н., 2004).

Результаты проведённого газового анализа вновь подтвердили высказанные ранее предположения о способности вещества 7tQl 104 экономизировать потребление 03 из доступного для дыхания воздуха при ОГ+Гк и ОГ-Гк (рис. 16).

Рис. 16. Процентное содержание 02 во вдыхаемом воздухе при нарастании у кошек ОГ+Гк (А) и ОГ-Гк (Б) в контроле и на фоне действия вещества л01104

В ходе этих опытов было установлено, что эффективность вещества зт<31104 обусловлена не только уменьшением собственно скорости 02-потребления организмом в единицу времени, но также в значительной степени была обеспечена повышением уровня резистентности животных к нарастающему дефициту 02, что нашло отражение в снижении показателей конечной концентрации 02, при которых наступала гибель кошек. Также было отмечено, что антигипоксические свойства изученного цинксодержащего антиоксиданта становились заметнее по мере снижения процентного содержания 02, т.е. проявлялись ярче при достижении

наиболее тяжелых стадий гипоксии Последнее, как известно, характерно для фармакологических эффектов антигипоксантов, относящихся к категории истинных (Зарубина И В , Шабанов П Д, 2004)

Таким образом, совокупность полученных результатов не только позволяет отнести изученное нами комплексное соединение цинка и И- ацетил -Ь-цисте и на -вещество 71(31104 к разряду антигипоксантов метаболического типа действия, но также дает возможность высказать аргументированные предположения относительно механизмов реализации его защитных эффектов при формировании ряда острых экзогенных гипоксических состояний, таких как острая гипоксия с гипер-капнии, острая гипоксия без гиперкапнии, острая гипобарическая гипоксия, а также дыхательная асфиксия Важно отметить, что фармакологическая активность нового антигипоксанта вполне сопоставима, а в некоторых случаях превосходит таковую изученных в работе современных антигипоксических средств -амтизола, бемитила и мексидола

ВЫВОДЫ

1 На основании данных регистрации электрокардиограмм и пневмобаро-грамм мышей, а также корковых вызванных потенциалов, импульсной активности нейронов соматосенсорной коры и электрокардиограмм кошек при развитии нормобарических видов экзогенной гипоксии присутствие фактора гиперкапнии оказывает положительное влияние на функциональный статус животных

2 Развитие острой экзогенной гипоксии с гиперкапнией сопровождается фазными изменениями вызванных потенциалов и импульсной активности нейронов соматосенсорной коры - период повышенной активности сменяется периодом угнетения, в то время как на фоне нарастания острой экзогенной гипоксии без гиперкапнии наблюдается постепенное угнетение вызванных потенциалов и импульсной активности нейронов

3 Среди исследованных девяти металлсодержащих антиоксидантов выявлено три вещества - л<2262, яС>901,7сО1104, обладающие антигипоксическим действием на всех, примененных в ходе скрининга, моделях острой экзогенной гипоксии Наиболее активными в этой группе являются цинксодержащие антиоксидан-тыя0901 и 71(21104

4 Согласно результатам определения средних летальных и средних эффективных доз для цинксодержащих антиоксидантов л0901 и л01104, вещество л0901 является высокотоксичным соединением, в то время как вещество я<21104 - относительно малотоксичным

5 Вещество л<21104 в опытах на мышах превосходит по своему антигипок-сическому эффекту антигипоксант мексидол и актопротектор бемитил и не уступает антигипоксан ту амтизолу

6 В условиях нормоксии вещество л01104 и антигипоксант амтизол существенно уменьшают величину энерготрат, потребление кислорода, активность системы кровообращения, дыхательной системы у мышей В условиях острой гипоксии с гиперкапнией и острой гипоксии без гиперкапнии вещество л(21104 в

большей степени пролонгирует период относительного благополучия мышей, чем антигипоксант амтизол, и обеспечивает более экономичное потребление кислорода

7 Механизм действия вещества яО! 104 реализуется через снижение интенсивности энергосинтетических процессов в митохондриальном компартменте клеток головного мозга Вещество л<21104 уменьшает скорость протекания окислительных реакций в дыхательной цепи митохондрий, находящихся в разных метаболических состояниях, что лимитирует продукцию АТФ и предупреждает быстрый расход кислорода и субстратов биологического окисления в головном мозге при гипоксии

8 При развитии у кошек периодической дыхательной асфиксии, острой гипоксии с гиперкапнией и острой гипоксии без гиперкапнии вещество я<31104 в дозе 50 мг/кг способствует значительному пролонгированию активного состояния коры головного мозга по показателям вызванных потенциалов и импульсной активности нейронов

9 Введение вещества л(21104 снижает потребление кошками кислорода и повышает их резистентность к экзогенным гипоксическим состояниям

10 Металлсодержащие антиоксиданты являются перспективной группой ан-тигипоксантов, применение которых наиболее эффективно при острой экзогенной гипоксии, что доказывается результатами их влияния на базисные механизмы развития этого типового патологического состояния

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

Цинксодержащие антиоксиданты на основе аминотиолов являются перспективным классом химических соединений для дальнейшего поиска эффективных антигипоксантов

Рекомендуется проведение расширенного изучения фармакологических свойств нового перспективного антигипоксанта - вещества я01104 на животных с высоким уровнем организации ЦНС (кошках, собаках, обезьянах)

Рекомендуется добавить в комплекс исследовательских мероприятий по изучению острых гипоксических состояний три новых способа моделирования ги-поксий для скрининга антигипоксантов - моделирование острой экзогенной нормобарической гипоксии без гиперкапнии на мелких лабораторных животных, для проведения углубленных исследований свойств антигипоксантов и перспективных в этом отношении веществ в опытах на кошках, кроликах, собаках - моделирование острой экзогенной гипоксии с гиперкапнией и моделирование острой экзогенной гипоксии без гиперкапнии

Список основных работ по теме диссертации

1 Защитное действие нового химического соединения (вещество № 901) при периодической асфиксии у кошек / Евсеев A.B., Парфенов Э А, Евсеева М А, Ковалева JI.A, Бабаниязова З.Х // Вестн Смоленской мед академии -

2003 - № 4 - С 30-33

2 Изучение антиг ипоксических эффектов потенциальных физиологически совместимых антиоксидантов / Евсеев A.B., Парфенов Э А , Евсеева М А , Ясне-цов CA// Вестн Смоленской мед академии - 2003 - № 4 - С 26-28

3 Использование гибридного биотехнического комплекса для оценки эффективности антигипоксического действия химических соединений в условиях острой гипоксии с гиперкапнией / Евсеев A.B. // Современные информационные технологии в медицине и экологии - ИТМЭ-2003 Тр Всерос науч конф, г Смоленск, 20-21 нояб 2003 г -М Физматлит, 2003 - С 11-14

4 Температурный баланс мышей при введении новых комплексных соединений цинка(Н) с S-содержащим лигандом и меди (II) с никотиновой кислотой / Евсеев A.B., Парфенов Э А , Евсеева М А , Яснецов С А , Осипов Н М // Вестн Смоленской мед академии - 2003 - № 4 - С 28-30

5 Антигипоксический эффект нового физиологически совместимого антиоксиданта TtQ-901 / Евсеев A.B., Евсеева М А , Правдивцев В А , Яснецов В В , Яснецов CA// Вестн. новых мед. технол. - 2004. - Т. 11, № 4. - С. 92-93.

6 Возможность экстренной профилактики острой гипоксии физиологически совместимыми антиоксидантами / Евсеев A.B., Евсеева М А , Сосин Д В // Здравоохр Башкортостана -2004 -№4 - С 81-83

7 Зависимость антигипоксического действия амтизола, ацизола, мексидола и нового вещества jtQ-901 от модели гипоксии / Евсеев A.B., Евсеева М А , Яснецов С А , Сосин Д В // Актуальные проблемы современной неврологии Сб тр науч -практич конф, г Смоленск, 2 апр 2004 г - Смоленск Изд-во СГМА,

2004 - С 20-22

8 Изучение антигипоксического действия нового химического соединения из группы физиологически совместимых антиоксидантов / Евсеев A.B. // Патофизиология и современная медицина 2-я Междунар конф, г Москва, 22-24 апр 2004 г -М Изд РУДН,2004 - С 134-135

9 Использование метода структурного анализа для поиска новых антиги-поксантов среди комплексных соединений переходных металлов и биоантиокси-дантов / Евсеев A.B., Евсеева М А // Здравоохр Башкортостана - 2004 - № 4 -С 80-81

10 Производные аминотиолов / Парфенов Э А , Самойлов Н Н , Ковалева В JI, Крылов И А , Евсеев A.B., Бабаниязова 3 X., Бабаниязов X X , Некрасов М С , Хамидуллин Н М , Пронина HB// Патент РФ на изобр № 2265608 - 2004

11 Реактивность нейронов коры головного мозга кошки при развитии гипоксии с гиперкапнией / Евсеев A.B., Яснецов С А , Сосин Д В // Дизрегуляци-онная патология органов и систем Тез докл 3-го Рос конгр по патофизиологии, г Москва, 9-12 нояб 2004 г - М , 2004 - С 211

12 Способ моделирования гипоксии с гиперкапнией, позволяющий регистрировать показатели жизнедеятельности животного / Евсеев A.B. // Дизрегуляци-онная патология органов и систем Тез докл 3-го Рос конгр по патофизиологии, г Москва, 9-12 нояб 2004 г - М , 2004 - С 211

13 Электрические реакции головного мозга в условиях острой гипоксии с гиперкапнией и при профилактическом введении нового антигипок-санта jtQ-901 / Евсеев A.B. // Рос. физиол. журн. им. М.И. Сеченова. - 2004. -Т. 90, № 8. - Ч. 2 - С. 276-277.

14 Эффективность антигипоксантов в зависимости от вида гипоксии / Евсеев A.B., Евсеева М А , Яснецов С А , Сосин Д В // Вестн Смоленской мед академии - 2004 - № 3 - С 21-24

15 Влияние вещества jiQ-901 на условнорефлекторную деятельность у мышей / Евсеев A.B., Яснецов С А , Евсеева М А , Осипов Н М // Вестн Смоленской мед академии - 2005 - № 3 - С 121-122

16 Влияние нового антигипоксанта reQ-901 на процессы окислительного фосфорилирования в митохондриях / Евсеев A.B., Парфенов Э А , Ковалева Л А , Сосин Д В , Кулагин К Н , Яснецов С А , Климкина Е И // Новые медицинские технологии и квантовая медицина Сб тр XI междунар конф, г Москва, 24-27 янв 2005 г - М , 2005 - С 197-198

17 Влияние новых комплексных соединений металлов и биоантиоксидантов на продолжительность жизни мышей в условиях острой экзогенной гипоксии с гиперкапнией / Евсеев A.B., Яснецов С А , Сосин Д В // Здоровье и образование в XXI веке Науч тр VI Междунар науч-практ конф, г Москва, 8-10 дек 2005 г - М Изд РУДН, 2005 - С 560

18 Защитное действие производных N-ацетил -L- цисте и н а при развитии экзогенной гипоксии у кошек / Евсеев A.B., Евсеева М.А, Парфенов Э А., Сосин Д В , Яснецов С А, Ковалева Л А // Здравоохр Башкортостана Межрегион науч -практ конф «Типовые патологические процессы» - 2005 - № 7 - С 57-59

19 Изменение энергетического обмена у животных на фоне введения комплексных соединений цинка(И) и N-ацетилцистеина / Евсеев A.B., Правдивцев В А , Евсеева М А , Сосин Д В , Ковалева Л А , Осипов Н М // Вестн Смоленской мед академии - 2005 - № 1 - С 24-27

20 Изменение энергетического обмена у мышей на фоне антигипоксанта 7CQ-901 / Евсеев A.B., Правдивцев В А , Яснецов В В , Евсеева М А // Новые медицинские технологии и квантовая медицина Сб тр XI Междунар конф , г Москва, 24-27 янв 2005 г - М , 2005 - С 199-200

21 К вопросу о влиянии скорости развития острой экзогенной гипоксии на антигипоксический эффект комплексных соединений металлов и биоантиоксидантов / Евсеев A.B., Сосин Д В // Гипоксия Механизмы, адаптация, коррекция Мат IV Рос конф , г Москва, 12-14 окт 2005 г - М Изд ГУ НИИ ОПП РАМН, 2005 - С 104-105

22 К вопросу о сравнительной эффективности антигипоксантов в опытах на мышах и кошках / Евсеев A.B., Яснецов С А , Сосин Д В , Парфенов Э А , Правдивцев В А , Евсеева М А // Здоровье и образование в XXI веке Науч тр VI Ме-

ждунар науч -практ конф , г Москва 8-10 дек 2005 г, - M Изд РУДН, 2005 -С 158

23 Новый способ моделирования плавно нарастающей экзогенной гипоксии с гиперкапнией в остром эксперименте / Евсеев A.B., Евсеева M А , Сосин Д В , Правдивцев В А // Гипоксия Механизмы, адаптация, коррекция Мат IV Рос конф , г Москва, 12-14 окт 2005 г - M Изд ГУ НИИ ОПТ! РАМН, 2005 - С 41

24 Способ моделирования гипоксии с гиперкапнией у животного / Евсеев A.B., Евсеева MA// Патент РФ на изобр № 2251158 - 2005

25 Сравнительная эффективность комплексных соединений цинка(П) и N-ацетил-Ь-цистеина при различной скорости развития экзогенной острой гипоксии с гиперкапнией / Евсеев A.B., Сосин Д В , Евсеева M А , Яснецов CA// Вестн Смоленской мед академии -2005 -№3 - С. 12-16

26 Биоэлектрические процессы коры головного мозга в условиях острой гипоксии и при профилактическом введении нового антигипоксанта аминотиоло-вого ряда (компьютерный анализ) / Евсеев A.B., Правдивцев В А , Евсеева M А // Математич морфология Электрон математич и мед -биол журн - 2006 - Т 5, Вып 4 - URL http //www smolensk ru/user/sgma/MMORPH/N-12-html/evseev/ evseev htm идентификационный номер 0420600004/0010

27 Влияние антигипоксанта rcQ1104 на нейрональную активность коры головного мозга кошек при острой экзогенной гипоксии / Евсеев A.B., Парфенов, Э А, Правдивцев В А , Евсеева M А , Шабанов П Д // Мед. академ. журн. - 2006. - Т. 5, № 4. - С. 54-62.

28 Влияние комплексного соединения М-ацетил-Ь-цистеина и цинка на биоэлектрическую активность коры мозга кошек при развитии острой экзогенной гипоксии с гиперкапнией / Евсеев A.B., Парфенов Э А , Правдивцев В А , Евсеева M А //Психофармакол биол наркол -2006 -Т 6, №1 - С 1129-1134

29 Влияние комплексных соединений Ы-ацетил-Ь-цистеина с биометаллами на динамику адаптивных реакций организма / Евсеев A.B., Парфенов Э А , Ковалева В JI, Крылов И А , Правдивцев В А , Евсеева MA// Математич морфология Электрон математич и мед -биол журн - Т 5, Вып 4 - 2006 - URL http /www smolensk ru/user/sgma/MMORPH/N- 12-html/evseev-3/evseev htm идентификационный номер 0420600004/0012

30 Влияние фактора скорости развития гипоксии на продолжительность жизни мышей в условиях острой экзогенной гипоксии / Евсеев A.B., Сосин Д В , Евсеева M А , Яснецов С А , Осипов H M // Вестн Смоленской мед академии -2006 - № 3 - С 13-15

31 Изучение антигипоксических эффектов медьсодержащих биологически активных веществ / Евсеев A.B., Яснецов С А , Парфенов Э А И Психофармакол биол наркол -2006 -Т 6, №4 - С 1335-1340

32 К вопросу о механизмах антигипоксического действия нового производного аминотиолов / Евсеев A.B., Яснецов С А , Козлов, С Б , Сосин Д В , Евсеева MA// Вестн Смоленской мед академии - 2006 - № 3 - С 38-40

33 Комплексные соединения цинка и ГЧ-ацетил-Ь-цистеина при острой экзогенной гипоксии / Евсеев A.B., Сосин Д В , Евсеева MA// Математич морфоло-

гия Электрон математич и мед-биол. журн - 2006 - Т 5, Вып 4 - URL http //www smolcnsk ru/user/sgma/MMORPH/N-12-html/evseev-2/evseev htm идентификационный номер 0420600004/0011

34 Комплексные соединения М-ацетил-Ь-цистеина с биометаллами как факторы самозащиты биологических систем / Евсеев A.B., Ковалева В Л, Крылов И А , Парфенов Э А // Бюл. эксперим. биол. мед. - 2006. - Т. 142, № 7. -С. 26-30.

35 Новый антигипоксант бис^-ацетил-Ь-цистеинато) аквоцинк(П) дисеми-гидрат и его влияние на биоэлектрические процессы в коре головного мозга при развитии острой гипоксии / Евсеев A.B., Правдивцев В А , Евсеева М А // Вестн Смоленской мед академии - 2006 - № 3 - С 3-9

36 Эффективность новых производных аминотиолов при различной скорости нарастания острой экзогенной гипоксии / Евсеев A.B., Сосин Д В , Евсеева М А //Вестн Смоленской мед академии.- 2006 - №3 -С 16-18

37 Антигипоксическая эффективность бис(]Ч-ацетил-Ь-цистеинато) цинк(П) сульфат октагидрата в динамике острой нормобарической гипоксии / Евсеев A.B., Евсеева М А , Парфенов Э А , Правдивцев В А, Шабанов П Д // Эксперим клин фармакол -2007 -Т 70, №5 -С47-51

38 Антигипоксический эффект производного аминотиолов 6hc(N-ацетил-Ь-цистеинато)аквоцинк(П) дисемигидрата у кошек в условиях модели острой гипоксии в нейрофизиологическом эксперименте / Евсеев A.B., Евсеева М А , Правдивцев В А // Вестн. новых мед. технол. - 2007. - Т. 14, № 2. - С. 26-29.

39 Биоэлектрическая активность соматосенсорной коры при острой гипоксии у кошек / Евсеев A.B., Правдивцев В А , Евсеева М А , Шабанов П Д // Вестн. Рос. воен.-мед. академии. - 2007. - № 1(17). - С. 83-86.

40 Биоэлектрическая активность соматосенсорной коры мозга при острой гипоксии с гиперкапнией у кошек / Евсеев' A.B., Евсеева М А , Правдивцев В А , Шабанов ПД //Нейроиммунология -2007 -Т 5, №2 - С 38-39

41 Вещество nQl 104 (комплексное соединение Zn2+ и М-ацетил-Е-цистеина) в ряду антигипоксантов метаболического типа действия / Евсеев A.B., Правдивцев В А , Евсеева М А // Психофармакол биол. наркол Спецвыпуск - 2007. -Т 7 - С 1684

42 Защитный эффект антигипоксанта JiQU04 по результатам анализа нейронной активности головного мозга кошек в условиях острой экзогенной нормобарической гипоксии / Евсеев A.B., Евсеева М.А , Парфенов Э А , Правдивцев В А // XX съезд физиол общества им И П Павлова, г Москва, 4-8 июн 2007 г Тез докл - М Изд дом «Русский врач», 2007 - С 219

43 Изучение биоэлектрической активности соматосенсорной коры мозга при острой гипоксии с гиперкапнией / Евсеев A.B., Евсеева М А, Правдивцев В А , Шабанов П Д // Вестн. Рос. воен.-мед. академии. - 2007. - №1(17). -Прил. Ч. I. - С. 476.

44 К вопросу о возможном механизме протективного действия новых производных аминотиолов при острой экзогенной гипоксии / Евсеев A.B., Сосин Д В // Вести, новых мед. технол. - 2007. - Т. 14, № 1. - С. 185-187.

45 Нейрональная активность соматосенсорной коры мозга при острой гипоксии с гиперкапнией / Евсеев A.B., Евсеева M А , Правдивцев В А , Шабанов П Д И Юбил Рос науч конф , поев 175-летию С П Боткина - СПб ВМедА, 2007 - С 330-331

46 Острая гипоксия механизмы развития и фармакологическая коррекция (монография) / Евсеев A.B., Шабанов П Д, Парфенов Э А , Правдивцев В А // СПб Элби-СПб, 2007. - 224 с.

47 Устройство для моделирования острой экзогенной нормобарической гипоксии без гиперкапнии у мелких лабораторных животных / Евсеев A.B., Евсеева M А , Сосин Д В // Патент РФ на изобр № 2291498 - 2007

48 Физиологически совместимые антиоксиданты как перспективные протекторы острых гипоксических состояний / Евсеев A.B., Правдивцев В А , Евсеева M А , Сосин Д В , Яснецов С А , Осипов H M // Актуальные проблемы современной медицины Сб науч тр - Смоленск СГМА, 2007 - С 330-341

Рационализаторские предложения

1 Биотехнический комплекс для регистрации пневмобарограммы (кривой, отражающей процессы вдоха и выдоха) у мелких лабораторных животных в особых условиях эксперимента / Евсеев A.B., Сосин Д В , Яснецов CA// Рацпредложение №1510 Зарегистрир БРИЗом Смоленской гос мед академии 19 0107

2 Биотехнический комплекс для регистрации ЭКГ у мелких лабораторных животных / Евсеев A.B., Сосин Д В , Яснецов CA// Рацпредложение № 1509 Зарегистрир БРИЗом Смоленской гос мед академии 19 01 07

3 Установка для выработки и регистрации актограмм избегательных оборонительных рефлексов у мелких лабораторных животных / Евсеев A.B., Осипов H M , Сосин Д В , Яснецов С.А // Рацпредложение № 1507 Зарегистр БРИЗом Смоленской гос мед академии 19 01 07

4 Устройство для изготовления стеклянных одно- и многоканальных микроэлектродов / Евсеев A.B., Яснецов С А , Сосин Д В , Осипов H M // Рацпредложение № 1499 Зарегистрир БРИЗом Смоленской гос мед академии 19 01 07

5 Приспособление для моделирования состояния нормобарической гипоксии без гиперкапнии у животного / Евсеев A.B., Сосин Д В , Яснецов CA// Рацпредложение № 1524 Зарегистр БРИЗом Смоленской гос мед академии 02 07 07

Подписано в печать 20 12 2007 г Формат 60x84 1/16 Бумага офсетная № 1 Печать офсетная Объем 1,5 п л Тираж 150 экз Заказ №13241

Отпечатано ОАО «Смоленская городская типография», 214000, г Смоленск, ул Маршала Жукова,16,

тел 59-99-07,38-28-65,38-14-53