Автореферат и диссертация по медицине (14.00.02) на тему:Лимфоидные органы при воздействии интерферона

СИБИРСКОЕ ОТДЕЛЕНИЕ РАМН ИНСТИТУТ КЛИНИЧЕСКОИ И ЭКСИЕРИМКНТЛЛЬНОИ ЛЮМШ01Ш

на правах рукописи

МАЙБОРОДИН Игорь Валентинович УДК 611.013+611.423+616.438

ЛИМФОИДНЫЕ ОРГАНЫ'ПРИ ВОЗДЕЙСТВИИ ИНТЕРФЕРОНА

14.00.02 -анатомия человека

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Новосибирск - 1992

Работа выполнена в Института клинической и экспериментальной лимфологии СО Р/..М11.

Научный руководитель: доктор медицинских наук, профессор В.Н.Григоръев

Научшй консультант: кандидат биологических наук В.Н.Гшзрилин

Официальнш оппоненты: .доктор медицинских наук В.Н.Горчаков

кандидат медицинских наук, Е.Д.Устюгов

Ведущее предприятие -Киевский ордена ТрудоЕого Красного Знамени медицинский институт им. академика А.А.Богомольца

Защита состоится "_" _ 1&92г. в _ часов

на заседании специализированного совета Д 084.52.02 при Новосибирском ордена Трудового Красного Знамени медицинском институте (6300Э1, Новосибирск, Красный проспект, 52, тел. 20-08-20).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Новосибирского ордена Трудового Красного Знамени медицинского института.

Автореферат разослан "_" _ 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, доцент А.Н.Матак

1?ТДЙЛ

^ -Ахтулльнос-гь прооломы. Интерферон рассматривается как один из важнейших факторов защиты организма от первичной вирусной ин-

фекции. Это обусловлено как прямым подавлением репликации ДНК- и РНК-содернащих вирусов (Кондратьева Г.А. и др., 1988; Кондратьева Г.А. и др., 1988), так и его ишуномодулируюдим эффектом (Ершов Ф.И., Новохатская А.С., 1980). Особую актуальность в нале время имеют сообщения о супрессии интерфероном вируса СПИДа в чувствительных клетках (crospi M., 1989). Шлется данные и о подавлении интерфероном онкогенных вирусов (Соловьев В.Д., IS83).

Помимо подавления репликации онкогенных вирусов, интерферон значительно снижает пролиферацию опухолевых клеток различных линий. Антитуморогенный эффект проявляется как в результате супрессии клеточной дифференцировки и тормогения клеточного цикла (Ъее S.H. et al., 1984; Grossborg S.E. et al., 1986), так и усиления цитотоксичности естественных клеток-киллеров к опухолевым клеткам (Гарин A.M. и др., 1983; Vilsek J. et al., 1984; Bonvlni E. et al., 1986; Feinman R. et al., 1986).

В настоящее время значительно возрастает распространенность аллергических и иммунодефицитных заболеваний. Применение препаратов интерферона показало высокую клиническую эффективность при снижении и при повышении исходного иммунологического статуса. Клетки и клеточные системы с высокой активностью-подавляются интерфероном, а с низкой активностью - стимулируются (Чередеев А.Н. И др., 1987; Braoska О., Obert Н.О., 1989; Here-mans H. et al., 1989; Maguire J.E. et al., 1990).

Тем не менее, действие интерферона на органы иммунной системы изучено далеко не полностью. В литературе имеются сообщения, часто противоречивые, о влиянии интерферона на отдельные клетки и клеточные системы и о результатах клинических испытаний препаратов. Данных о действии интерферона на иммунную систему, в частности на лимфоидные органы, в целом, нет. В связи с вышеизложенным, целью данного иссл<?лования било изучение характера и направленности изменений структурной организации не которых лимфоидных органов в различные сроки после курса интрана-зального введения препарата человеческого рекомошантного аль-фа-2 интерферона.

Для достижения указанной цели предполагалось решить следующие задачи:

1. На основании стереологического анализа ыикроанатомической организации и изучения цитоархитектоники тимуса показать основные изменения его структуры в различные сроки после цикла интра-назального введения интерферона.

2. Используя комплекс светооп-йгаеских методов исследований с элементами стереологического анализа, изучить шкроанзтомичес-кую организацию и цитоарзитектонику лимфоидаой ткани глубоких краниальных шейных, задних медиастинальнах и подколенных лимфатических узлов (ЛУ) в различные сроки после цикла интраназально-го введения интерферона.

3. Применяя алектронномикроскошчаский метод исследования с элементами стереологического анализа, изучить структуру гслв-га: плазмоцитарного ряда глубоких краниальных шейных, задних мэдаас-тинальных и подколенных ЛУ в различные сроки после цикла интра-назального введения интерферона.

Научная новизна исследования:

Впервые показана морфодинамика лимфоидных органов на примере тимуса, глубоких краниальных шейных, задних недаастинальных и подколенных ЛУ после стандартного курса интраназапьного введения интерферона.

Впервые обнаружено увеличение объема глубоких краниальных шейных, задних медиастинальных и подколенных ЛУ после ведения интерферона, причем изменение объема 2 первых узлов имело 2 пика.

Впервые показано, что после введения интерферона происходит увеличение количества клеток и объема мякотных тяхей и лим-фоидыых узелков с центрами и без центров размножения во всех исследованных ЛУ.

Впервые найдено сокращение объема краевого синуса в глубоких краниальных шейных и задних медиастинальных после введения интерферона.

Впервые показано, после введения интерферона, уменьшение объема цитоплазмы, численности свободных и прикрепленных рибосом, объема, количества и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий в клетках плазмоцитарного ряда из мякотных тяхей всех исследованных ЛУ.

Впервые обнаружено, что после введения интерферона происходит существенное уменьшениеие относительной массы и объема тиму-

са за счет сокращения коркового вещества, где снижается общее количество клеток и в первую очередь - лимфоцитов.

Впервые показано появление эритроцитов и увеличение численности зрелых плазмоцитов, нейтрофилов, тучных клеток после введения интерферона во всех отделах всех исследованных органов.

Практическая значимость диссертации -

Полученные данные свидетельствуют о том, что введение интерферона приводит к выраженным изменениями в структурной организации тимуса и ЛУ. Наблюдаемые изменения, видимо, дают возможность сделать заключение о подавлении Т-кдвточного компонента системы иммунитета с одновременной стимуляцией В-клеточного. Это позволяет, по-видимому, использовать препараты альфа-интерферона для создания модели т-клеточного иммунодефицита в эксперименте и рекомендовать данные препараты, кроме профилактики вирусных заболеваний, для использования в качестве адыованта при вакцинации и в качестве лечебного средства при Т-клеточных лейкемиях и реакциях отторжения трансплантата в клинике.

Проведенные исследования указывают на возможность управления процессами трансформации структурной организации органов лимфатической системы посредством интраназального введения интерферона, что, видимо, позволит сделать значительный шаг к управлению функционированием иммунной системы и последующей реализации полученных данных в научной и клинической практике.

На защиту выносятся следующие положения:

1. После цикла интраназального введения интерферона наблюдаются специфические изменения микроанатомической организации и цитоархитектоники тимуса, связанные с сокращением объема органа за. счет уменьшения объема коркового вещества; со снижением содержания малых и средних лимфоцитов и моноцитов в корковом и мозговом веществе; с уменьшением количества иммунобластов в корковом веществе.

2. Интраназальное введение интерферона приводит к совокупности структурных изменений лимфоидной ткани как центрального так и периферического органов иммунной системы. В тимусе, глубоких краниальных шейных, задних медиастинальных и подколенных ЛУ увеличива-

ется количество зрелых плазмоцлтов, кеитрофилов, эритроцитов и тучных клеток, причем наиболее выраженные изменения цитоархитек-тоники тимуса происходят через 14 еут! после введения препарата, а изменения в клеточном составе лимфатических узлов е период с 3 по 7 сут.

3. Интраназальное введете интерферона вызывает некоторые сходные изменения во Есех исследованных ЛУ: увеличение объема лимфо-идных узелков'и активных центров е них. через 3 сут., расширение мозговых синусов к 7 сут., уменьшение объема цитоплазмы, содержания свободных и прикрепленных, рибосом, объема, колкчестыа и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрии клеток плазматического ряда.

4. Интраназальное введение интерферона вызывает специфические изменения для каждой из исследованных групп Д.У, связанные с несинхронным по времени развитием стереотипной реакции лимфоидной ткани.

Апробация материалов диссертации. ОСНОЕНЫе ПОЛОКЗНИЯ ДИСсертации доложены на Республиканской научной конференции морфологов Казахстана, Алма-Ата, 13-14 сентября 1&90 г.; на научной конференции "Проблемы клинической и экспериментальной люифоло-гии", Новосибирск, 02-04 ишя 1992 г.

Пувликации. По теме диссертации опубликовано 6 печатных работ. -

Ооъен и структура диссертации. ДнССерТЗЦИЯ ИЗЛОХеКЗ Н3 254 страницах машинописного текста (собственно текста 106 страниц), состоит из введения, обзора литературы, 4 глав результатов собственных исследований, обсуждения, общего заключения, еыеодое, списка использованной литературы, содержащего 68 отечественных и 145 зарубежных источников. Работа иллюстрирована 65 черно-белыми фотографиями и 32 таблицами. Весь материал, представленный в диссертации, получен, обработан и проанализирован автором лично.

Работа выполнялась е рамках темы 041038-"Гомео" 3.2.6:"Изучение структурно-функциональной организации лимфатической системы при экологически ориентированных дестабилизирующих воздей-' ствиях и возможности направленного управления ее функциями с помощью новых лечебных факторов".

СОДЕРЖАНИИ РАБОТЫ

В главе "оеэор литературы" дано систематизированное излоет-ние материала, освещавшего вопросы действия различных препаратов интерферона на первичные и перевиваемые клеточные культура. Рассмотрены вопросы влияния интерферона на взаимодействие различных клеток иммунной системы как in vitro так и in vivo. Изложены сведения о механизмах действия интерферона на эти клетки. Приводятся данные о результатах клинических испытаний препаратов интерферона на здоровых добровольцах и при различных патологиях (аутоиммунные и иммунодефицитные заболевания, лейкозы, инфекционные и паразитарные болезни). Оценка приведенных литературных данных носит, в основном, дискуссионный характер.

Материалы и методы исследования. В КЭЧвСТВв ЭКСПврИМвНТЭЛЬ—

них животных использовали белых крыс-самцов породы Вист эр, массой тела 180-200 г. Реаферой (рекомбинантный человеческий альфа-2 интерферон) разводили дистиллированной водой до концентрации 50 ЕД/мл (далее интерферон). Водный раствор интерферона вводили крт-сам кнтранвзвлыга по 2 капли 4 раза в день в течении 5 даей. Контрольными животными служили крысн, получавшие интраназально дистиллированную воду (контрольных и опытных крыс содержали совместно). В качестве наркотического средства при манипуляциях с ¡животными использовали этиловый эфир.

Для морфологических исследований у экспериментальных животных забирали подколенные, задние медиастинальнне, глубокие краниальные шейные ЛУ и тимусг на 3,* 7, 14 и 30 сут. после окончания введения интерферона. У одной группы контрольных крыс органы для морфологических исследований брали на 3 сут., у другой - на 30 сут. На каждую точку эксперимента использовали по 30 животных.

Для исследований методом световой микроскопии органы фиксировали в 4% растворе параформальдегида на фосфатном буфере (рН= 7,3) не менее 24 ч., обезвоживали в серии этанола возрастающей концентрации, просветляли в ксилоле и заключали в hyetopiast ("Serva"). На микротоме с автоматической подачей материала и программным управлением готовили срезы толщиной 5 мкм, причем, в какдом случае, плоскость среза проходила через длинник органа, что давало возможность изучать полюса ЛУ и тимуса. Срезы окраши-

вали гематоксилином Гарриса и эозином, по BaH-iteoHy и азур II-эозином (Пирс Э., 1962; Лилли Э., 1969).

Для трансмиссионной электронной микроскопии материал фиксировали в 1% растворе 0в04 на фосфатном буфере (рн=7,3), обезволивали в градиенте этанола возрастающей концентрации и заключали в эпон (Гвйер Г., 1974). На ультратоме делали полутонкие срезы, которые после окраски толуидиновнм синим использовали для выбора нужного участка органа. На этом же ультратоме изготавливали ультратонкие срезы. После контрастирования насыщенным водным раствором уранилацетата и цитратом свинца (Гайер Г., 1974), срезы изучали в .электронном микроскопе jWioos/asid/secjz.

Параметры микроанатомической и ультраструктурной организации исследуемых органов определяли проецируя негативную микрофотографию на тестовую систему. Для определения морфометрических парметров ультраструктурной организации клеток применяли конечное увеличение негатива в 70 ООО раз. Увеличение светового микроскопа в 32 раза было достаточным для наблюдения всей площади среза и четкого распознавания исследуемых структур. Клеточный состав лимфоидной паренхимы и мякотных тяхей определяли с покорю окулярной морфометрической вставки к световому микроскопу, прэдставляхщвй собой закрытую квадратную тестовую систему с площадью 1600 кв.тол при увеличении в 1080 раз.

Выбор тестовых систем, использованных в работе, производили в соответствии с рекомендациями E.R.Weibei (1979). Различия между средними величинами считали достоверными при 140,05, использовали критерий Стьюдента. Цифровой материал обрабатывали на ЭШ TRS-80 ("Radio Stieiok")-

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИИ

Структурная организация тимуса крыс пооле введения интерферона.

Наиболее выраженные изменения в тимусе произошли через 14 сут. после введения интерферона. Относительная масса органа уменьшилась на 33%. Объем коркового вещества сократился в 2,2 раза, однако объем мозгового вещества, капсулы и септ достоверно не изменился. Одновременно .сократилось общее количество клеток в 2,6 раза, численность малых и средних лимфоцитов в 7,2 и 3,2 раза co-

tí

ответственно, уменьшилось количество митозов. Ь это же время возросла численность макрофагов в 2,8 раза, нейтрофилов в 2,8 раза, зрелых плазмоцитов в 3,8 раза, эозинофилов в 2,8 раза, эритроцитов в 2,1 раза, появились тучные клетки. Большинство изменений в структуре тимуса сохранилось до 30 сут.

Структурная организация глубоких краниальных шейных ЛУ крыс поеле введения интерферона..

Изменения в микронатомической организации и цитоархатектони-ке ЛУ произошли ухе через 3 сут. Объем лимфоидннх узелков без центров, с центрами размножения и самих активных центров возрос в 1,7, 1,8 и 6,8 раза соответственно. Объем коркового плато, мозговых синусов и паракортикальной зоны увеличился на 41%, 38% и 100% соответственно. Объем краевого синуса сократился на 21%. К 7 сут. объем мякотных тяжей превосходил контрольное значение на 47%. Толщина капсулы увеличилась к 14 сут. на 30%. При. в той объем ЛУ возрос на 67%, к 14 сут. его значение нормализовалось, и к 30 сут. снова превышало контрольную величину на 37%. К 3 сут. количество зрелых плазмоцитов стало больше нормы в 2 раза, макрофагов в 1,3 раза, нейтрофилов в 7,4 раза, эозинофилов в 1,5 раза, тучных клеток в 11,1 раза, появились эритроциты.

При ультраструктурном исследовании клеток плазматического ряда (средних лимфоцитов I и II типа, иммуно- и плазмобластов, незрелых и зрелых плазмоцитов) из мякотных тяжей, оказалось, что через 3 сут. у них уменьшается объем цитоплазмы (кроме средних лимфоцитов II типа и зрелых плазмоцитов), численность свободных (за исключением средних лимфоцитов Пиша) и прикрепленных рибосом, объем митохондрий (кроме зрелых плазмоцитов), количество митохондрий (за исключением плазмобластов) и суммарная длина профиля среза их внутренней мембраны.

Структурная организация задних медиастинальных ЛУ крыс после введения интерферона.

Наиболее выраженные изменения в ЛЗ произошли к 3 сут. Увеличился объем лимфоидных узелков без центров, с центрами и самих центров размножения на 30%, 38% и 49% соответственно. Объем коркового плато возрос на 56%. Через 7 сут. увеличился объем мякот-

яых тяжей на 33%. Объемы краевого синуса и паракортикалыюй зоны к 14 сут. сократились на ЕЗЖ и 37% соответственно. Объем самих ЛУ через 3 сут. возрос на 30%, на 14 сут. не отличался от контрольного, а к 30 сут. наблидали второй максимум гипертрофии (28%). Количество зрелых плазмацитов через 14 сут. увеличилось в 2,1 раза. Через 3 сут. содержание макрофагов возросло в 1,5 раза, ней-трофилов в 3,1 раза, эозинофилов в 1,9 раза, тучных клеток в 13,6 раза, появляются эритроциты.

Ультраструктурное исследование клеток плазыоцитараого ряда из мякотных тяжей, проведенное спустя 3 сут., показало сокращение объема цитоплазмы (кроме средних, лимфоцитов хх типа), количества свободных рибосом (так же за исключением средних лимфоцитов II типа), численности прикрепленных рибосом, объема митохондрий, их количества (так же кроме средних лимфоцитов XI типа) и суммарной длины профиля среза их внутренней мембраны.

Структурная организация подколенных ЛУ крыс после введения интерферона.

В этих ЛУ через 3 сут. увеличился объем лифоидных узелков без центров, с центрами и самих центров размножения в 3, 2,1 и Б,8 раза соответственно. Объем мякотных тяжей возрос к 7 сут. на 65%, а объем паракортикальной зоны согфатился на 33%. На 14 сут. толщина капсулы превосходила норму на 36% в остальные же сроки эксперимента величина этого параметра достоверно не отличалась от контроля. Объем самих ЛУ возрос только к 7 сут. (на 37%). В данных органах через 3 сут. увеличилось количество зрелых плазмо-цитов на 57%, а к 30 сут. их численность превосходила нормальную ужэ в 2,5 раза. Спустя 3 сут. количество макрофагов превышало контрольную величину в 1,3 раза, нейтрофилов в 3,9 раза, тучных клеток в 6 раз, появились эритроциты, а содержание эозинофилов со!фатилось в 1,8 раза.

Элэнтронномикроскопическое исследование клеток плазмоцитарно-го ряда из мякотных тяжей, проведенное спустя 3 сут., показало уменьшение объема цитоплазмы, количества свободных и прикрепленных рибосом, объема, численности и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий, однако, все исследованные характеристики митохондрий увеличились в плазмобластах.

в

ОВсуждени» результатов исследования

Через 14 сут. после интраназального введения интерферона сокращается объем тимуса за счет уменьшения объема коркового вещества. В корковом и мозговом веществе снижается количество малых, средних лимфоцитов и митозов. Эти изменения позволяют предположить супрессию пролиферативной активности Т-лимфоцитов, что согласуется с данными А.и. Haq (1986} И Chal С СОЗВТ. (1988), но противоречит результатам других исследователей (Wilkinson и. et al., 1985; Huber С. et al., 1985; Dumont F.J., 1986; Купко JI.Я. И др., 1989; Gotlieh W.H. et al., 1989).

Сокращение Т-зоны в тимусе, видимо, дает возможность получения для научно-исследовательских целей животных с ослабленной функцией тимуса (моделирование Т-клеточного иммунодефицита), а применение препаратов альфа-интерферона должно дать экономический эффект, так как использование их значительно дешевле применяющихся в настоящее время оперативных методов.

На основании изменений структуры тимуса можно ожидать и клинической эффективности использования альфа-интерферона для лечения но крайней мере Т-клеточных лейкемий (положительный эффект лечения больных различными лейкозами гамма-интерфероном отмечают все исследователи (Lee s.H. et al., 1984; Paganelli К.A. et al., 1986; Karray S. et al., 1987; Talpaz M. et al., 1987; Elliott K.R.F. et al., 1988; Кондратьева Г.А. и др., 1988; Кондратьева Г.А. и др., 1988; Balkwill г.Я.,1989)).

При использовании препаратов интерферона, по-видимому, становится возможным целенаправленное изменение структурной организации и, видимо, тесно связанных с ней функций тимуса - центрального органа иммунитета и, далее, через эти изменения, влиять на деятельность других систем защиты организма.

После окончания интраназального введения интерферона объем всех исследованных лимфатических узлов возрастает. Увеличение объема глубоких краниальных шейных и задних мвдиастиналышх ЛУ наблюдается через 3 сут., к 14 сут. данный показатель нормализуется и вновь становится больше контрольного спустя 30 сут. Объем подколенных ЛУ возрастает только к 7 сут. и остается увеличенным до окончания эксперимента.

Во всех исследованных ЛУ уже через 3 сут. значительно увели-

э

чивается объем и количество лимфоидных узелков без центров, с центрами размножения и самих активных центров. Гипертрофия лимфо-идных узелков без цетров и с центрами размножения и расширение активных центров, по-видимому, свидетельствует об иммунологической перестройке вышеуказанных органов и, возможно, всей лимфатической системы уже через несколько сут. после поступления интерферона в организм.

В каадой группе исследованных ЛУ после введения интерферона наблюдаются и специфические изменения.

В глубоких краниальных шейных ЛУ узлах через 3 сут. после введения интерферона увеличивается объем коркового плато, пара-кортикальной зоны и мозговых синусов, одновременно уменьшается объем краевого синуса.

В задних медиастинальных ЛУ объем коркового плато возрастает так же к 3 сут., но объем краевого синуса и тшракортикалъной зоны сокращается, начиная с 14 сут.

В подколенных ЛУ спустя 7 сут. уменьиается только объем пэ-ракортикальной зоны.

Сокращение объема краевого синуса в глубоких краниальных шейных и задних медиастинальных ЛУ, видимо, свидетельствует об уменьшении количества лим£ы, поступающей в данные органы. Возможно, что под действием интерферона изменяется активность клеток, принимающих участив в образовании тканевой жидкости, и следствием этого, по-видимому, является уменьшение объема лимфы, поступающей в эти ЛУ. Наиболее вероятно, что это происходит при локализации очага инфекции и предотвращении распространения ее в организме лимфогенным путем.

Некоторая схожесть изменений микроанатомической организации глубоких краниальных шейных и задних медиастинальных ЛУ (2 максимума увеличения объема самих узлов, изменения объема краевого синуса и коркового плато) позволяет предположить наличие прямой связи между данными органами лимфатической системы.

Начиная с 3 сут. во Есех исследованных ЛУ и с 14 сут. в тимусе возрастает количество зрелых плазматических клеток. В настоящее время не известно из за чего конкретно произошло ускорение дифференцировки клеток: в результате прямого действия интерферона, способствующего пролиферации В-лимфоцитов и дифференцировке остальных клеток плазмоцитарного ряда (Ыаклддиз т. et а1., 1983;

Evans S., (teer H.f 1987; Рахманова Л.Г. и Др., 1988; Delfrais3y J.Р. et ai., 1988) или в результате образования антител к интерферону, как к чужеродному белку - антигену (Wussow Р. et aL„, 1988; I tri М., et al., 1989; Larooca A.P. et al., 1989; Antonel-li G. et al., 1989; Ross C. et al., 1990; Karlason-I'arra A. et al., 1990).

При ультраструктурном исследовании клеток плазмоцитарного ряда из мякотных тяжей всех исследованных М обнаружено, что уже через 3 сут. после окончания введения интерферона сокращается объем цитоплазмы, содержание свободных и прикрепленных рибосом, объем, количество и суммарная длина профиля среза внутренней мембраны митохондрий. Данные изменения особенно Еиражекы в иммуно-и плазмобластах. Уменьшение численности и объема органелл, по-видимому, указьшет на снижение энергетических и белковосинтезирую-ЩКХ возможностей этих клеток (Chen Y.X. et al., 1986; Yferdelin О., 1987; Channcn J.X. et al., 1987).

Учитывая быстрое увеличение количества клеток плазмоцитарного ряда, могшо прадполокитъ, что данные изменения та ультраструктуры обусловлено быстрой дифференцировкой, когда невозмоано полноценное созревание клеток. К 30 сут. наблюдается тенденция к нормализации исследованных параметров, еидимо, связанная с прекращением действия интерферона.

Через 3 сут. после окочания введения интерферона во всех наследованных органах произошло значительное увеличение количества макрофагов, отмечаемое и спустя 30 сут.

По свидетельству Д.В.Скэтоеэ с соавт. (1989), интерферон способен непосредственно стимулировать миграцию макрофагов. По-Еидкмому, нельзя исключить.и возможность стимуляции интерфероном пролиферативной активности макрофагов, моноцитов и их предшественников (Troppmair J. et al., 1984; Michalevlcli R., Nada I., 1988; Steiniger B. et al-, 1990). Видимо, влияние интерферона на моноциты и макрофаги не является стандартной реакцией и скорее всего зависит от их клеточного и молекулярного окружения (Lungi T.W. et al., 1987; Анненков A.E., 1989).

Численность нейтрофильных лейкоцитов в тимусе и всех исследованных ЛУ возросла так же через 3 сут. после введения интерферона. По результатам исследований S-Spisani с соавт. (1989), интерферон непосредственно не стимулирует хемотаксиса нейтрофилов

:и

и, видимо, не может вызвать увеличения их количества даже в регионарных ЛУ. Однако препарат способен вызывать синтез других цито-кинов (Кузнецов В.П., 1987; Balkwill Р.Н., Burlte P., 1989). которые, в свою очередь, могут стимулировать у лимфоцитов, содержащихся в лимфоидных органах в большом количестве, секрецию хеш-тактического фактора для нейтрофилов (Spisani 3. et ai., 1989). Кроме этого, по данным ы.J.steinbeok и соавт. (1986), после обработки нейтрофилов интерфероном in vitro происходит прекращение их беспорядочной миграции и начинается упорядоченное движение к месту введения препарата, в настоящее время предполагается, что это связано с задержкой нейтрофилов для активации в местах выработки интерферона.

Содержание тучных клеток и эозинофилов возросло в тимусе, глубоких краниальных шейных и задних медиастинальных ЛУ через 3-7 сут. после окончания введения интерферона. В подколенных узлах в это же время увеличилось количество только тучных клеток, а численность эозинофилов к 3 сут. значительно снизилась.

В исследованиях Н.Г.Захаровой с соавт. (1388), эозинофилия в периферической крови наблюдалась при всех путях введения интерферона и четко коррелировала с дозой. А по данным S.Martin и соавт. (1988) после применения препаратов интерферона, даже в микродозах, наступает дегрануляция тучных клеток. Можно предположить, что увеличение числа эозинофилов и тучных клеток в наших экспериментах связано с действием интерферона, как антигена. Однако, по результатам исследований M.Litt (1964), при антигенном воздействии увеличение содержания эозинофилов опережает образование новых плазматических клеток. В наших исследованиях плазматические клетки появляются раньше увеличения численности эозинофилов и сразу в большом количестве.

Так как интерферон вырабатывается в организме при вирусной инфекции, видимо, увеличение количества эозинофилов и тучных клеток связано с подготовкой организма к поступлению антигена. И именно поэтому использование препаратов интерферона для усиления иммунного ответа на вакцины (в качестве адыованта), по-видимому, имеет преимущество перед используемыми в настоящее время веществами из за низкой алергенности и токсичности (но не для экстрен-• ной профилактики).

Эритроциты появляются во всех зонах всех исследованных opra-

нах уже через 3 сут. после введения интерферона. В опытах in vitro установлено, что связывание Т-лимфоцитов с эндотелизлышми клетками значительно повышается после обработки последних интерфероном. Видимо, это может активизировать миграцию лимфоцитов в периваскулярное пространство, а тан же оытъ причиной повышения проницаемости или даже повреждения эндотелия капилляров (Yu C.L. et al., 1985; Issekuts T.B. et al., 198b; Martin S. et al., 1983; Hendriks H.R. et al., 1989). Появление эритроцитов в исследованных органах, видимо, свидетельствует о повишении проницаемости стенки кровеносных капилляров под воздействием препарата.

Возрастание числа митозов во Есех зонах всех исследованных ЛУ, вадамо, свидетельствует о том, что под действием интерферона количество клеток увеличивается не только в результате поступления их из кровеносного и лимфатического русла, ко и за счет уси-лэния пролкферативной активности in situ. Подтверждением этому, по-видимому, служит значительное увеличение содержания бластов плгзматического ряда. В тимусе, где после введения интерферона содержание митозов снижается, уменьшается и общее количество клеток. Изменение численности митозов наблюдается раньше изменений общего количества клеток.

Видимо, параллельно усилению процессов пролиферации происходит и усиление процессов дегенерации, так как при повышении про-лифэративной активности должно увеличиваться число клеток с генетическими дефектам. Кроме этого, по-видимому, возможно сокращение жизненного цикла некоторых активированных интерфероном клеток из за усиления метаболизма в них.

Высокая выраженность изменений р регионарных и отдаленных ЛУ, видимо, не может быть объяснена только действием введенного интерферона, попавшего в кровеносное русло. Наиболее вероятным объяснением, по-видимому, служит явление прайминга, когда активированные интерфероном клетки начинают вырабатывать свой интерферон и другие цитокины. Все эти биологически активные вещества обладают свойствами перекрывающихся активностей и ответ на которые зависит от концентрации, типа клетки, клеточного окружения и наличия или отсутствия других клеточных регуляторов (Кузнецов В.П., 1987; Spisani S. et al., 1989; BalkwilL.P.K., Burke P., 1989). Возможно, что в данном случае интерферон попадает в регионарные ЛУ, где активирует некоторые клетки. Часть этих клеток затем пос-

и

тупает в кровеносное русло а далее в другие органу, нельзя исключить, что большинство наблюдающихся изменений вызваны веществами,

выделенными активированными интерфероном клетками.

выводы

1. Курс интраназального введение интерферона вызывает трансформацию микроанатомической организации и цитоархитектоники тимуса, заключающейся в сокращении объема органа за счет снижения величины объема коркового вещества, в уменьшении содержания малых, средних лимфоцитов и моноцитов в лимфоидной паренхиме, в снижении количества бластов в корковом веществе.

2. После цикла интраназального введения интерферона наблюдается увеличение количества зрелых плазмоцитов, нейтрофилов, эритроцитов и тучных клеток в тимусе и всех исследованных ЛУ, причем максимальную выраженность указанные изменения имеют в тимусе к 14 сут., а в ЛУ в период с 3 по 7 сут.

3. Интраназальное введение интерферона стимулирует развитие стереотипной реакции со стороны всех исследованных ЛУ: увеличение объема лимфоидных узелков и активных центров в них через

3 сут., расширение мозговых синусов к 7 сут., уменьшение объема цитоплазмы, содержания свободных и прикрепленных рибосом, объема, количества и суммарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий клеток плазматического ряда.

4. Наряду с динамической стереотипией, интраназальное введение интерферона вызывает специфические изменения для каждой из исследованных груш ЛУ, связанные с несинхронным по времени развитием стереотипной реакции лимфоидной ткани.

5. Интерферон при интраназальном применении вызывает увеличение объема глубоких краниальных шейных ЛУ, возрастание объема их паракортикальной зоны, коркового плато и мозговых, синусов при одновременном сокращении объема краевого синуса, свидетельствующие , видимо, о снижении количества лимфы, поступающей в краевой синус, замедлении лимфотока внутри данных органов и увеличении площади контакта лимфы с клетками.

6. Специфические изменения в задних медиастинальных ЛУ связаны

с увеличением их объема, при неизменном объеме мозговых синусов и толщины капсулы за спет возрастания объема коркового

плато через 3 сут.; с сокращением ооъема паракортикальной зоны и краевого синуса к 14 сут.; с увеличением численности им-муно- и плазмоблэстов, незрелых, плазмоцитов во всех зонах, кроме мякотных тяжей, к 3 сут. и с уменьшением их количества через 3 сут. в мякотных тяжах с возрастанием их численности только к 7 сут.

7. После окончания интраназального цикла введения интерферона специфические изменения в подколенных ЛУ связаны с увеличением их объема только к 7 сут.; с утолщением капсул к 14 сут.; с уменьшением объема паракортикальной зоны с 7 сут. при неизменности объемов коркового плато, краевого и мозгоеых синусов; с возрастанием количества зрелых плазмоцитов в корковом плато через 14 сут., в мозговых синусах и лимфоидных узелках без центров разложения - спустя 7 сут., а в остальных зонах" ЛУ - к 3 сут.; с увеличением численности других клеток плаз-моцятарного ряда во зсех зонах, кроме мозговых синусов, и уменьшением их количества к 14 сут. в мозговых синусах.

8. Клетки плазкоцитарного ряда из мякотных тяжей глубоких краниальных пейных, задних мэдазстаналышх и подколенных ЛУ, под действием интерферона, видимо, снижают способность к антите-лообразованию, о чем свидетельствует сокращение объема цитоплазмы, численности свободных и прикрепленных рибосом, объема, количества и суъмарной длины профиля среза внутренней мембраны митохондрий.

9. Интерферон, при интраназалъном применении, вызывает повышение проницаемости сосудистой стенки, что проявляется в появлении эритроцитов во всех зонах всех исследованных органов.

ВНЕДРЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ В ПРАКТИКУ

Результаты исследований внедрены в практику научной работы в лаборатории ультраструктурных исследваний Института Клинической и Экспериментальной Лимфологии СО РАМН и на кафедре патологической физиологии Новосибирского медицинского института.

Список раРот. огтурликованных гю тем«? диссертации

I. Гаврилин В.Н., Майбородин И.В., Григорьев В.Н., Ерофеев В.П., Нданов А.П. Исследование структурной организации синусов лим--

фатических узлов в норме к после введения плазмоззмещэюздх растворов //Мат. науч. коп. морфологов Казахстана "йикрососу-дистое русло внутренних органов е условиях патологии и эксперимента", 13-14 сект., JLöau, Алма-Ата. -Алма-Ата, iyäCJ. -С. 11-11.

2. Майбородин И.В., Ерофеев b.U., 1ригорьев В.Н. Цитоархитекто-ника лимфомикроциркуляторных конструкций лимфатического узла при воздействии интерферона //Там же. -С. 31-31.

3. Гаврилин В.Н., Бородин Ю.И., Маиак А.Н., Майбородин И.В. Ци-тоархитектоника лимфатических узлоб при венозном застое и в условиях его лечения бальнеопроцедурамк курорта Белсжуриха (экспериментальное .исследование) //Мат. науч. кон. "Проблема клинической и экспериментальной лимфологии", 2-4 июня, 1s92, Новосибирск. -Новосибирск: ршш, 1уу2. -с.43-46.

4. Гайнанова H.H., Майбородин Й.В. Структурная перестройка региональных лимфатических узлов крысы при первичном хроническом воздействии карбофосом //Там же. -С. 47-48.

5. Григорьев В.Н., Гайнанова H.H., Мзйоородин И.В. Реактивные изменения лимфатических узлов на повторное фосфорорганическо-го пестицида //Там же. -С. bti-bV.

6. Машзк А.Н., Бородин L'.M., Гаврилин В.Н., Мзкоородин И.В. кроанатомические преобразования лимфатических узлов при венозном застое и в условиях его лечения различными по качеству бальнеопроцедурами //Там же. -и. lua-iOy.

Зак.269.Тир.ТОО Печ.л-Д,0 Evw.ofc. Тип.СО РАЖ Г.Новосибирск Т992г.