Автореферат и диссертация по медицине (14.00.07) на тему:Гигиеническая оценка иммунотоксичности и аллергоопасности парафенилендиамина и гексаметилендиамина, содержащихся в воде водоемов

АКАДЕМИЯ МЕДИЦИНСКИХ НАУК

ОРДЕНА ТРУДОВОГО КРАСНОГО ЗНАМЕНИ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ОБЩЕЙ И КОММУНАЛЬНОЙ ГИГИЕНЫ им. А. Н. СЫСИНА

На правах рукописи УДК 614.777:616.003.96 ОСИПЕНКО Алла Михайловна

ГИГИЕНИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА ИЛШУНОТОКСИЧНОСТИ И АЛЛЕРГООПАСНОСТИ ПАРАФЕНИЛЕНДИАМИНА И ГЕКСАМЕТИЛЕНДИАМИНА, СОДЕРЖАЩИХСЯ В В ВОДЕ ВОДОЕМОВ

14.00.07 — Гигиена

14.00.30 — Аллергология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук

\ о с к 1'. а —

1 а з о

Работа выполнена в ордена Трудсшо.го Kpiaciia.ro Знамени на.учпо-исолсдювательс,кз'м институте общей '.и коммунальной гигиены им. А. Н. Сысизла АМН СССР.

Научные руководители — доктор 'меднщипши'Х паук,

профессор Г. Н. Красовский,

Ц'ОКТСр б'ПО.ЛОГИЧОС.ЮПХ П'пук,

профессор В. Н. Федосеева.

Официальные оппоненты — доктор медицинских п.аук

Н, В. Русаков,

поктгф медпши.поки.х .паук ¡Г. В. Порлдин.

Ведущее учреждение — Республиканский научный гигиенический центр МЗ УССР, Науч1Гони.ссл.еио>в.а.тальс(МИ'й аш-■стштут .общей 'и коммунальной пипиеды ¡им. А. Н. Мацюеева.

Защита диссертации состоится « <ЛЛ» 1990 г.

в.......час. на заюедашш специализированного совета

Д.001.09.01 тто защите дчюоерггациш на шиакашие учесюй стелен/и доктора :н<аук три НИИ общей ш шмшун.алыюй пшнены им. А. Н. Сысина АМН СССР, 119833, г. Москва, Погодинская ул., 10.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке НИИ общей и коммунальной лишены им. А. Н. Сытна АМН СССР.

Автореферат разослан «» .

1990 г.

Ученый секретарь специализированного ответа, доктор медищшюгсих наук Ю. Н. МОЛЬКОВ

Подп. в яеч. 14.9.90 Объем 1 п. л. Зак. 750 Тир. 100

Типография Московского лесотехнического института

' . (Ш ШЙШРПЯШСА РАБОШ'• ■ . > *

3.?., ' - ' . " - ' • .

^ ^сЬктпост?. гстюблеми. Кптоисивноо развитие зссх зздов прслгп-

"ТШШсга, эпзргзтики, транспорта, химизация сельского хозяйства приводят к постоянно увеличивавшемуся загрязнении окружапцей среда химическими веществами, которые когут выступать в ро.тл иыыуно-токспкзитов.

Одьа из главных задач гигиены округзадеЯ срадн состоит в гшга-лении неблагояриятзгах факторов, способствуют:* фор?.ирозашю болэз-но2 человека. По данным Всемирной организации здравоохранения, Аллергические заболевания, зшглг/лэт третье место поело сордочн©-сосудистых л онкологических. Тялесть а длительность течения аллергических болезней ставит проблему их профилактики в разряд ведущих в современной медицине. 3 то г.о время механизма сопсибаляэа-ции к химическим загрязнителям пока изучены крайне недостаточно.' Большую опасность цриобретаот новый вид'реакций на химические зе-цоства - псевдоаллергснтгЛ эффект, который проявляется з зндо бронхоспатических реакций, крапивниц и других аллоргодорматитсв. . • В гигиена окружздеЗ среды механизмы этих эффектов практ!гче-скя но изучены,, отсутствуй? способы их прогнозирования, что край- • но за?ло с ноэяцгЯ профилактики ряда заболеваний. Существующие схемы-сценки аллергенной активности химических веществ (О.Г.Алексеева, Л.А,Дуева,1987; М.В.фыжояозсяагт 1970 и др.) составлены баз учета механизмов их иммунотоксического действия, разнообразия аллергических п псевдоаллергических реакций. Не рассматривалась возможность введения принципа; этапностя исследований, недостаточное внимание уделялось разработка метода скрининга в оценке аллер-гоопасшсти химических заг^чзнателеЗ, не.определено его место л значение в схеме исследований. При нормировании допустимых концентрация химических аллергвкоз принципы , и кетодичэскао подходы их ти-

' ■ . о

гкеначескэЗ рег.таяектащ'.п но угафицзрозаны и нуадаатся в паучком обосновании и снстеыаткзацад.

Все ати методические вопроси целесообразно изучать па щше-рэ хгагачесхих вёщестз, которое реально поступают в воду я являатся . пстенцаалый&ш аллергокаыа. Сродя таких вецеств привлекает внг'л-ю$е группа аляносоедаке1Шй, а именно: парафендлендиамкн (П2ДА) я гег.самоталецдяамик (ЩЕА), которые относятся к категории широко распростралеют загрязнителей пода. Эти:вещества относятся к разним классам опасностз, ПФДА - к Ш, ТЗДА - ко П, предольно-допусти-«ая хокцонгращк для обоих аминов установлена по санитарно-токси-кологпчоог.о'лу признаку я составляет 0,1 п 0,01 иг/л соответственно. Нэсиотря на то, что аллергенная активность ПОДА и ИЩА изучена рядом авторов (Н.В.Русаков, 1987; Я.С.Заворман, 1971), влияние на пммтно:;о1!петенткко клсгни и клетка-мишени аллергии исследовано недостаточно. Необходимость изменяя диктуется еде к тем обстоя- • твльствсм, что ДДК зтах веаеств били установлены более 20-30 лет назад (Ю.А.Еаков, 1359; А.В.Кулаков, 1955) без учета их икмуноток-сичаостп в в^злолия различных типов аллергических реакций. .

В связи с ота; ноль к работы явилось изучение механизмов ииму-нотоксического, аллергенного и псевдоаллоргонного действия ларафе-лплендиа-лша и гохсаметилбндиамина и усслерзенствованио на этоЗ основе схеш оценки аллергоопасностк- химических вечоств.

Исследования били направлены на решение следующих основных задач:

1. Вобрать модель для оценки изучае:.о*х веществ.

2. Изучить обще токсическое, иммунотокспческсе, алле-ргенкоз действ л о ¡ЩА к Л,'ДА и сравнить выраяенаость этих эффектов по соотко-шеняо порогов их действия. ..... ■

3. Оце;птть возможность развития псеЕДоаллергических реакцк"

• 3.

данных алянососдшют:3,

Л. Усовершенствовать методическую схему оценки аллергоопасно-стя хкичоекпх веществ, сйдоряавдхся В ПОДО 30Д0СМЭВ.

Цоучцая нотазна состоит в том, что: .

Яа основа принципа этапноета а данных о механизмах гэдупоток-скческого, ачлергетгого и псоздоаялергеккого действия КФДД. г. ЩЯА усовершенствована схегл оценки аллергоонасноста хаккчееккх загрязнении вода.

• Обосновала необходимость исяольэовакач з экспериментах мытаЯ-гзбрлдоз ( сва х С57В1/6 ) г1 как наиболее чувстзятедьпсЯ

модели пра однозромешюЛ сцонкс клунотокспческого а аллоргенного действия хяглачоскях веществ. '

Показано, что ПЗДА обладает ш.:укотокспчоскяи и а-лергешогл действием по I а 17 талу на уровно порога деЗствпя 0,1 ст/л. Зпер-с-уе показано, что ПФДА обладает способность!: вызывать вцдэле;кв гкетакгаа яри действии на клотка-гггиеип егяерпга, т.е. вызывать зсевдоаллергоншЗ эффект.

У ГМДА на той ко уровне воздействия (0,1 ыг/л) установлено как >бщетоксическоо, так л пшунотоксичосноз действие. Вперпцо ггоказа-50, что ИЩА является активным тас?а\гаиолибератором.

Обнаружен феномен нзмзнешп величины пролифорапгвноЯ актшзно-:тз лимфоцитов яра перораяьнои воздействии а\ш;ов в заниоашети 1Т удаления люфоздпих органов от «.иста поступления токсаканта: ойровы бляпки > иезентераялышо лимроуэлы > селезенка, та ус.

Показано, что ПЗДЛ а ПДДА вызизаэт "перекрестила" роахщга по апу аллергических аффектов заыедлонного тала на другие аллергены.

Птк^ческач дначгелссть и внептенпэ пезулгтатоп ппботн. ■ .

Доказала ггеобход!гл5сть учета псевдоаллергонпого эффекта пру игаенической оцеико опасностз веществ^

Лпробярозана п предложена модифицированная схема оценке аллер-гоопасности >п:гл1гчес1-и:х соединений, позволящая на основе принципа эташ10ста сократить срою:, объем и необходимо материалы при нормировали химических вопоств.

Подтверждена надежность ПДК ГЦДА в воде, предлагаэтея пересмотреть ПДК ПОДЛ. :

Маторпает диссертационного яссдедовакая использована при разработке "Методических рекомендаций по оксперимзнталыюьу изучения яи.унотокс1!ческ:1Х свойств химических факторов окружающей среди" (Проблемная комиссия.АМН'СССР, 1989), "Методических рекомендаций по оценке аялергешгих свойств фармакологических средств" (МЗ СССР, 1Э88), Санитарных правил устройства и эксплуатация систем центрального горячего водоснабжения (МЗ СССР & 4723-88). По материалам диссертация оформлено одно рациопализаторско.ь предложение (Л 19149). ..

Апто^апг-я т^.ботя. ?латериалл диссертации до.тоузнц на: мешметсг-гутской конференции «олоднх ученых и специалистов по проблема "Окружающая среда и здоровье населения" (Москва, 1988 г.); пленума Проблемой когассип "Научные основы гигиены труда и профпатологии" (Пермь, 1989 г.); I Всесоюзном иммунологическом съезде (Сочи, 1989 г.); конференции молодых ученых "Гигиена окружающей среды" (Москва, 1990 г.), г.'.е.т,отдельческой апробацлоншЗ комиссии НИИОКГ им.А.Н.Сысана (26 Ей, 1993 г.).

По ыатериа'шм диссертации опубликовано 7 печа-пшх

работ.

Структура диссертации. Работа изложена на /'/¿Г страницах маи^шописи, состоит из введения, обзора литература, главы, посвященной выбору и обоснованию .методов исследования, 4 глаз с кзло-кедазм собственных результатов, обсуддешм, выводов, списка цити-

»

русмой литература, шипочакзого /Я/ отечественных з зару-

бопоос источников, содоряпт -fz ' рисунков, 33 таблиц.

■ Долототглч. пкиостапго 'па задтиту:

1. Обязательным стадом оценки аллсргооиаспости химических веществ является изучение направленности их действия на различные клетки-киаски и учет всех т><лов аллергической

2. П5ДА обладает клмунзтогскчеспйш свойствами, формирует аллергические реакции I и 1/ типа (по ceil к сооть» ), обладает способностью развивать исевдоаллорппескиэ реакции.

3. ПШ обладает пммунотоксичс-скими свойствами, вызывает сла-бовырачсенные аллергические реалхии замедленного типа, является активным лпбераторэм гистамипа при прямом контакте с тучны:,гл клетками. /

4. Предлагаемая схема гигиенической оценки аллергоопасносгп химических веществ, содержащихся в воде водоемов, позволяет проводить ускоренное регламентирование химических веаоств по аллергенно,vry и псс-вдо-зллергенному эффекту.

■ -ООЖРНЛТС'Н РАБОТУ ■. ■

Объем п методы исследования. ' Проведен когяиоко зкспернмон-тачьннх исследований, включавшие гигиенические, биохимические, морфологические, иммунологические и аллвргологическиа методы ис-зледовшгия. 3 работе использовано 2550 ише2^саг.щов (линии Свл, с57в1/6, bjlb/c, пгбрщш первого с0:ЮЛе|П!Я (свах c57b1/6)f(> 1утбред]ше белые), 450 морских свинок.

Для получения всесторонней информация о'влитши ГИДА и 1Т.ЩА ia иммунную систол, оценивала функциональную активность лпм1?оци-ов различных лии5оцдшсе органов и состояние Т- и В-сийтем ишу-итета. В качестве тест-антигенов -были использованы эритроциты ба-

рана (ЗБ) и метилированной бшшй сывороточный альбумин (МБСА). Действие ПЗДА и ШЛА на 3-лимфоциты и гуморальный иммунный ответ оценивала по количеству антителосбразувдах клеток (АОК) по методу Хагатнгема (1969) к титру антител в сыворотке крови стандартны-, методом в реакции гемагглвтинации с 1% суспензией ЭЕ. Действие на ?-лим$оаиты и клеточный n?.wyin;?o г оценивали по интенсивности реакции гиперчувствятельности замедленного типа (ГЗТ) на тест-антиген (Т.И.Дшшлова, 1988), реакции трансплантат против "хозяина" («егер Л., 1986Ч. Д.чя установления состояния сенсибилизации у животных исследовали наличие гомоцитотропных антител в решщии активной .и пассивной анафилаксии по о»егу . (Н.В.Стотхина,1988), 'функцийТЗТ-эффекторов в реакции гидерчувствительности зэмодяен-ного типа по Медукищщу' (1983) . С целью выявления своГ;ств-индук-торов псйздоаллартичеera х реакций, использовали флуоримстричоский метод опрсцелсниягистЕмияапо методу shorre (И.С.Гувдн, 198?). Было яроведено 12760.исследований.

Работа выполнена на базе лабораторий иммунологии и токешшло-гли. водных загрязнений и санитарной охраны водоемов НИИ общей и коммунальной гигиены км.А.Н.Сысина АМН СССР, лаборатории физических методов в иммунологии института Ймцунояогии МЗ СССР в соответствии с планом научно-исследовательских работ института по темам 092 "Комплексная оцокка систем организул. (крупных, детокси-кздии, эпителиальных барьеров и др.) при действия химических загрязнителей разной природа (.'« гос.регистрации 01.8900440722) и 034 ¡'Дать гигиеническую оценку реагентам, применяемым в горччем Ййдорнабаении" {¡Ь гос.регистрации 0IL00I4383). ,

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЩЮВАШЙ '

Интенсивность развития аллергической.реакции изучали при пе~ ро'ральном и поркутанном воздействии вещества, как наиболее гдек-ватном пути поступления. Проведенные Hai.ni предварительные исследования по изучению сенсибитазирухщего действия ГОДА и ГЗДА на беспородных кивотных показали неоднородность получениях данных, отсутствие возмоянссти воспроизведения наблюдавши аффектов, что требовало поиска оптимальной модели для дальнейпего изучения аллергенных свойств ПОДА л Г?Щ.

Дгл выбора .экспериментальной модели изучение аллергенного деП-ствия аминов проводили на морских спинка:: и игаах СВА, (свахсзтв!/^ с57 в 1/6, вл 1ь*' белых аутбредннх в дозах 50 к 5 мг/кг веса в точенио 10, 20, 30 дней. Наиболее выразсепный эффект поваленной чувства- • тельностл замедленного типа наблвдался у.ишой СВА, я 1Ябрндов ( сва х с57в1/6 ,)'г . 5Ь.олунотоксяческий эффект такзе был более выражен у этих животных. Реакции немедленного типа наблэдались у морских свинок, мыпей СВА и г.1бр?щов и-но проявлялиоь у шаей с57в1/6, Ва!ь/с л аутброднцх. Лоэтог^, в качестве экспе-

риментальной модели <5ти внбраны мшм-гибридк первого поколештя (сва * с57в1/б)г1 , на которых Далось получить воспроизводите и четко регистрируемые результаты как идаунотоксического, так и аллергенного действия.

Для выявления оптимальных условий сроков сенсибилизации аминами при разном пути поступление были выбраны два способа воздействия - пероральныИ и псркутошгнй (посредством купачия шыеа в растворах веществ)., При пероральном введении антигена пик образования гомоцитотротгых антител наблвдался на 30 день сенсибилизации (диаметр окрашенного пятна был равен 6,1+0,4 в контроле 1,9+

0,4 мм). Поркугаипревоздействие вызывало аллергическую реакцию мэиыпой интенсивности. При пескутакном воздействии растворов ком-патной температуры аллергические реакции наблздались у отдельных особе!: (2 из 10) .■ Накогаща реакции у контрольных завотных, а такие- сенсибилизированных И.1ДД не превышали 5 ш. Гомоцитотропние антитела у них но были обнаружены в точение всего срока наблхщо-Для изучения развитая повышенной чувствительности замедленного типа выявлял!! сенсибилизированные лимфоциты на 21 и 30 день при перкуталном и п-роралъном введении П5ДА и ГМДЛ в доз.ах 50 и 5 кг/кг. Купание мыэей в растворе П2ДЛ при ко:,2'лткой температуре приводило к образовании клеточно-слосредованных реакций небольшой 'лнтэисавноси: на 20-й день (ЯР=в,47+2,74^; контроль: 2,9+0,5^). Повышение температуры растчора до 39°С приводило к увеличению 1!Р до 14,63+1,88$. Пероралькое введение вещества высылало еще более выраженный эффект 01?=32,2+3,52$). .

Следовательно, пкк реакций немедленного и замедленного типов достигает максжума на 30-й.'день яероральной затравки. Интенсивность реш-дий клйточно-опоерздовашюго типа значительно визе, чем реакций анафилактического типа. Пероральноо введение вещества вызывало белее выракеншЗ ответ по сравнению с паркуаашшм воздействием. .

1'сходя из полученных результатов С-шга установлено, что длительность эксперимента в течение месяца являете и. достаточной для выявления аллергенного действия изучаемых веществ при иеророльноЗ Затравке животных, что согласуется с данными литературы (Г.П.Виноградов, 1985; Н.Б.Русаков, 1561). .

г; ■ ' '

'.; В связи с тем, что при оцс'.цсе реальной опасности химических соединений для здоровья населения ва^нейгшм показателем является зопз специфического дейсгакя,-которая устанавливается по соотно-

ионию порогов облетоксического :и специфического действия (И.В.Са-ноцкий, В.В.Зоменко, 1979), одной из задач исследования било изучение соотношения указанных эффектов.

Обдетокспчзский эффект оцешгааля по изменении массы тела зи-вотного, показателей крови, активности ферментов печени и морфологических исследований.. ПФДА и ШЛА во всех изученных дозах не изменяли массу тела, количество эритроцитов, но влияли на такие показатели, как количество лимфоцитов и активность фермс-нтов поче-ш1. Так, ПОДЛ в дозе 50 мг/кг сштал количество лимфоцитов с 12,1+ 1,98 х Ю9 до 6,51+1,01 х ЮЭ, ИЩА (в дозе 5 мг/кг чороз 30 дне;! воздействия) до 10,85+1,07 х 109./.ул.

П'ЗДА в дозе 50 мг/кг через 30 дней достоверно увеличивав активность аспартатачпнотрансфоразн (АсТ) с 70,02+16,2 до 189,03+ 30,1 МЕ/л, сшшл при то Л ,т.о дозо активность, алглганаминотраисфера-зы (АлТ) до 53,28+3,27 1!2/л (контроль - 76,9+4,0 !.Е/л) и почти вдпоо уменьшал активность с о р5;; т олд а г: л р о г е • I а ? ■: (С,Т). Доз;; 0,5 и 5 иг/кг ПЗДА существенно но изменяла активность указании* формен-•тов. П.1ДА в дозо 5 мг/кг снижтл активность АсТ почти втрое, АлТ -вдвое через 30 дней экспозиции. При воздействии 0,05, 0,5 г,т/кг ГМДА активность ферментов достоверно но изменялась во все срок;: каблзденил. "ор&офупкционадьные изменения в печени г,!1яг>.:лл::еь через 20 суток пороратьного введенпя 50 мг/кг П5ДА, а к 30 дна наблюдалось повышение нпдокса альтерации в два рапа и полиплоидизация геяатоцитов. ГТ.Ц1Л через 10 суток во?до;1стз:!Л в дозах 0,5 и 5 мг/кг увеличивал индекс альтерации вдвое,.а к 20 дни - в 4 раза. Приведенные данные спидотольстпунт о том, чго амины в дозах 0,05-0,5 мг/кг вызывают повреждение геиатоцитов неспецпфического характера с развитием компенсаторных реакций, восстлнавлипаздих клеточный генофонд - полинлохдизацим. При воздействии 50 и 5 мг/кг П-ЗДА я

ИДАэтпрешада начинались раньше и были более вирокенными.

Получешша результаты подтверждают данные о том, что Ш>ДА и П!ДАв изучаеьшх. дозах оказывают обдетоксическоо действие на активность ферментов печени, содержание лимфоцитов и не изменяют такие показатели, как масса тела, количество эритроцитов.

ГТтет изучении '.плмунотоксическкх: эТДекточ на 1-е:.: этапе исследовали действие веществ на спленоциты пптактлых мышей ¡n vi tro. ПФДА подавлял, спонтшшую.пролиферацию в диапазоне концентраций от 50 до 1,5 мкгДи, ЩПЛ - в меньшем диапазоне (50-3,1 мкг/мл). В-лпмфоциты оказались более чувствительными к действию ПФДА и менее чувствительные; к действии ГИДА. Г-клеточнэя пролиферация подавлялась липь при высо;а:х концентрациях а\:инов (50-25 мкг/мл). При углубленном изучении пролиферативной активности сшгеноцнтов мш;еЯ, сенсибилизированных ПОДА и П.ЩА в дозах 50 и 5 r/.г/кг было подтверждено в опытах in vivo активирующее действие Il-1'ДЛ на В-юхеточ-ныо популяции селезенки. Их пролиферативпая активность возрастала в зависимости от сроков воздействия (10, 20, 30 сугок) соответственно в 1,4; 1,6; 2,2 раза. Спонтанная пролиферация сенсибилизированных спленоцитов также была выае, по сравнений с контролем. П.1ДА почти не изменял активированную кошганавадином А (Кон А) пролиферации Т-клеток. Пероральное введение аминоз в течение 30 дней не изменяло количество клеток селезенки и лимфатических узлов. Изменение количества глеток тимуса коррелировало с нзмоненп-. ем массы утого органа. Отсюда слезет, что oía вещества оказывают более выраженное актиБирухглее дсИствно на В-клсточннэ популяции сэлззенки. Этот эффект зависел от доз и и времени воздействия. 'Такая zo зависимость была характерна и для активированных Т-лим-фоцнтов, но проявлялась лишь при действии.высоких доз аминов (50 •и 5 от/кг). Результаты исследовании in vivo подтвердили данные

полученные в опытах in vitro /что мояет бить• использовано на начальных этапах выявления клоток-миесноИ действия химических веществ.

Изучение пролпферативной активности клеточных элементов различных лнмфоидных органов показало, что при пороралыюм введена! аминов в дозе 50 и 5 кг/кг первой мипкнгьга, испытывающей наибольшее воздействие препарата, являются пойровы" бляшки, а затем регионарные (мезентерпальныо) лимфоузлы и другие личроидные органы. Пролиферацию клеток различных органов оценивали по ш-тсче-пип меченного тритием тимидииа и вира-дали в имп./мпн. ПГ'ДА почти здзоо усиливал спонтанную пролиферацию клеточшлс элементов пейровых бляшек (табл.1).

Таблица I.

Влияние парафенилондиамлна на цроляфератизную активность клеток лимфоидных органов мпшИ-гибридов ( свл х c5?ni/6 )F( , сенсибилизированных в течение 30 дней (доза препарата 50 мг/кг)

Группа! Пролп&оратизная активность (имп./мпн.)

! спонтанная !Коп—Л стимуллро- !ЛПС Я. со и -_? _Т ванная ' ст-.г.туугнг'гпа.чнзл

IC0D32,2+591,6 I G2 03,3+359,0 G53o,3+3II,3s 12037,0+403,8*

339904,7+505,0 57203,5+1-120,0 150231', 2+3923, СГ 43090,0+I2G3, 8х

327222,2+2158,2 . 113133,0+291,5 3-18093,7+1609,7 231491,5+1367,7*

902-1,3+273,8 1592,0+192,4 2473,7+24,3s 225,2+33,4*

Объект иссле-•дования

ПеЛровн контр. 1580,2+105,3 бляшки оп;;т 3-119,3+24-1,5К

Уезонта- контр.' 2193,2+141,3 л/узли опыт 2-117,2+71,0я "•

Селезен- контр. 7309,3+262,7 ка опыт 11755,7+335,5"

Тимус контр. 035,0+94,4 опыт 633,0+89,0"

* - Р £ 0,05

Как показано в таблице I ыитогенстимулированпая пролиферация Т- и В-лимфоцитов подавлялась соответственно в II и в 1,3 раза. В ыезентериашшх лимфоузлах эффект подавления спонтанной и ицду-цированной липополисахаридом пролиферации был вкра~ен слабое (в 2,1 к 1,1 раза). В селезенке спонтанная и индуцированная Кон А про-лиферативиая активность почти не отличалась от контроля, а пролиферация В-л11!.т1'юцптов била даже несколько выше контроля. Такая г.е закономерность наблюдалась при действии 1ЗДА. Порченная закономерность степени изменения прэлиферативной активности лиг.фоидных клеток в зависимости от анатомической локализации и пути поступления веществ в оргагазм, монет быть рекомендована в качество критерия при оценке действия структурно-близких аминосоединений на клетки-мишезгл органов и как показатель ограничения исачедований состояния лнм}юидных органов кииечника при воздействии других неметаболируе-I,шх веществ в случае энтерального их поступления.

На основе исследования по изучению аллергенного действия было установлено, что ИФДА в дозах 5 к 50" мг/кг. вызывал стимуляцию го-моцитотропных антител. При этом диаметр окрашенного пятна был равен 5,3+0,67 ц 6,1+0,4 ш, в контроле 1,9+0,4 мм. Титр гомоцито-тропкых антител (выраженный в 10£2 ), изменился соответственно с 1,1+0,3 до 2,37+0,4. Развитие гиперчувствительности замедленного типа оценивали по отеку лапки через 24 часа после введения разрешающей дозы антигена.

ПФДА в угнанных дозах существенно изменял индекс реакции (контроль 1,3+0,38$, опыт - 15,5+0,42 и 32,2+3,42%). ША вызывал у&елпчение индекса реакции тол,ко у 5 мыаей из 12. Сенсибилизация 1ОДА не приводила к образованию гомоцитотропных антител в изученном диапазоне доз и развитию, таким образом, повышенной чувствительности немедленного типа. ,

Приведенные дшппо позволяет считать, что ШДА вызывая развитие аллергических реакций I и 1У типа (по сен ' я coombs), а ГЦДА только шюточно-опосредовашюго типа.

При оценке аллергенной активности признаются более опасными то соединения, механизм действия которых приводит к развитию„перо-крестной" сеыс;:бпл:5заци:1. С целью выяснения зтого вопроса использовали метод перорашюй сенсибилизации ПФДА и ГЭДА и разрешение подкожным введением аллергенов различного типа (15$ раствор эритроцитов барана, 0,125,1 метилированный бычий сывороточный альбумин, Eaiciyiiia ЕШ и изучаемые вещества). Как видно из таблицы 2, у глпей, сенсибилизированных ПФДА наблюдалось достоверное изменение индекса реакции, после введения эритроцитов барана (8,35+2,5$), атьбуми-на (18,4+3,С?). При сенсибилизации янвотных ИЩА наблвдалл достоверное изменение реакция, по сравнению с контролем только на введение 75 мкг Б1Щ (12,6Bf3,5%). Отсвда следует, что изучаемые aj.ni-носоединения, особонно ПЗДА, обладают способностью вызывать "перекрестные" аллергические реакции клеточло-опосредованкогэ типа на аллергены другой природы. Таблица 2.

. Перекрестное взаимодействие эффекторов ГЗТ, индуцирова!шой

П5ДА и ГЦДА с атлергонами различного происхоадения

Агчерген ! Пнтактные ! Сенсибилизированные

! кивотные !-г

! (контроль) ! ПФДА (50 мг/кг) ! ПДДА ( 5 мг/ja')

ПДДА 0,87+0,3 3,1+2,07 . 7,12+1,5

1ВД» 0,6+0,12 27,41+4,15s . 6,01^2,1

ЭБ 0,54+0,14 8,96+2,5й 1,Ь7+С,7

МБСА 1,2+0,14 18,4+3,0х 7,54+2,8

ни 2,76+1,79 II,68+3,21х 12,68+3,5х

х - PC 0,05, п=12

На з аключн толь ном этапе исследования была поставлена задача выяснить обладают ли данныо амины способностью вызывать догрануляцию тучных меток, т.е. свойствами, гасташнолибераторов, шов.а словами обладать действием, подобным псевдоаллергенному эффекту. В настоящее время предложено оценивать псепдоаллергеш;ое действие соединений в опытах in vitro по способности избирательного высвобождения гистаашна из илеток-мишеней аллергии (тучные ¡елетга) при прямом контакте разлитых ковдоитраций изучаемых веществ (тест Шорр). Перптонеалыше тучные клетки мышей инкубировали с различными концентрациями аминов и определяли выход гистсмнна (в процентах) на флюорнметре Hitachi -840 (Япония). Начальная часть кривой высвобождения гистамина (рис. 1а,б), соответствующая атся-кию концентраций 1ЩА I0"1 -10~2Ы, ЩА - 1СГ3-10~4 М, объясняется цитотоксическш действием. Определение жизнеспособности клеток при действии данных концентраций показало, что процент их гибели составлял 32 и 38$. Вторая часть кривой высвобождения гпстампна (концентрация ПФДА - 10~%, ЩДА - 10~7М) характеризует избирательное (нецитотоксическое) действие аминов. Процент гибели клеток но превышал 5% в обоих случаях. Для доказательства избирательного действия были поставлены опыты по изучению влияния температуры на процесс секреции гкетампна. Наибольший выход (46 и 33,6$) был отмочен при температуре 37°С. Сгашзние температуры уменьшало выход гистамина до 8 и 12%. Такой ке эффект был получон в отношении известного гистаминолибератора ионофора А 23187. При сравнэ- ■ гага полученных результатов с действием известных гистаминолибера- ■ торов (вэщество 48/80, А 23187, полкмиксин В) (И.С.Гугг,:;:, З.Г.Вой-тенко, 1989) ыокно заключить, что изучаемые атаюсоедшюннл обладают потенциальной способностью вызывать псевдоаллергенный эффект, а по своей активности близки к действию классических гистаминоли-

15.

бераторэв.. "

Далее тест Шорр был применен в конце ЗО-дпевного эксперимента с использованием тучных клеток мылюй, подвергавшихся воздей-

•к

ствикз различных концентраций аминов. П5ДА. (рис. 1а) в диапазоне концентраций усиливал гисташнолиберацию из тучных

клеток мышей, сенсибилизированных 5 и 50 ыг/кг ГИДА и не изменял этот процесс у мнеей, сенсибилизированных 0,5 иг/кг. Секреция гис-тамина из тучных клеток мышзй, сенсибилизированных 0,05;0,5 и 5 мг/кг ГЦДЛ находилась на том :г.е уровне, что и у пнтактных животных (рис. 16).

Таким образом, "как ПФДА, таге и Г!,ЩЛ способны вызывать псевдо-аллергеннчй эффект. Предварительная сенсибилизация яивотных Нзу-чаемымл аминами приводит к повышенна чувствительности клеток-мишеней к действию ПОДА и но влияет на высвобождение гистамина при действиии ИЩА.

Оценка опасности химических веществ проводится на основе сопоставления различных видов эффектов. При соотношении порогов общетоксического и специфического действия аминов било виязлено.что у ПФДА на пороговом уровне проявлялся пммунотокспческий и аллергенный эффект. Это обстоятельство позволяет рекомендовать пересмотреть ПДК ПЭДА в воде с учетом •указанных патологических эффектов. Для ГЦДА к:ядунотоксическиЯ эффект проявлялся наряду с общелексическим, что позволяет подтвердить правильность существующей ПдК IÏ.UIA.

Проведенное изучение механизмов иммунотоксического, аллергенного и псевдоаллергенного действия аминов, дало основание для усовершенствования схемы аялергоопасностн химических загрязнителей воды (табл.З). Предлагаемая схема отличается от уse описанных в литературе тем,, что в ней предусматривается комплексность нссле—■

Рис. Влияние Л^ДА (а) и ГЭД5А (б) на высвобождение гистачина

из тучных клеток мышей - гибридов (сел «с. ?

1,1* 'ннтактныо мызи ■ •- • .

¡¿,3,4 - *.'ьгаи, сенсибилизированные ПЗДА в дозе 0,5, 5, 50 мг/кг соответственно .

мьши, сенсибилизированные П!ДА в дозе 0,05, 0,5 к 5 мг/кг соответственно

СХК.1Л СЦЕНКИ AJLTi?rOGHAC!i037.i ШШЕСЖ ОАКТОРОЗ СКРУЖАЩЕй СРЕД.!

Тараща 3.

I

г.асволие

Предварительный

Им

U'j О i,

Метода

*шьло;п:о потенциальных аллергенов

1. Анализ химической структуры соединения к его способности созываться с белками (по литератуткшм данным)

1. Вещество - не аллерген и но гадлуноген; ПДК устанавливать Сез учета аллергенного деист-, вил

2. Вещество - потенциальны:! аллерген, сто необходимо исследовать на этапе П.

;сс-оценка

Углубленная оценка аллорго опасности

Аллоргоскрпнинг

I.Выявление нотокснческих свойств вещества

З.Выязленке аллергических реакций

а)замедленного типа .

1. Тест увеличения массы лимфоузлов

2. Тест Шэрр.э системе

ir> vitro

3. Дегрануляция тучных • клеток

I. Определенно А0К,Р£ТЛ с различными митогенами, реакция ГЗГ.РТПХ с тест-антигеном, определено титра геглагглэтшшкоз

I. гзт

г.Гшгибпция тггшофагов : цитоз

млгоации ■1 лейко-

1. Вемостго по аллерген

2,- Вздэстео вызывает аллергенное действие, рекомендуется исследование на Ш этапе

I. Заявление чувствительных клеток-мг^оней

I. Выявлениз наиболее чувствительного показатеяч аллорген-кого действия

I_I

2

»

3

б)немедленного типа

в)реакция.вызванная кожяексои антиген-антитела

17. Гигиеническая оценка аллерго-опаснсста

с)цитотоксичэскке реакции

3.Выявление лок-ных(яоеэдоаллор-гичоских реакций)

Установление ми-нима^ъно-дейст- • вуючей дозы по лимитирующему показателю

4

_5

1.Постановка реакций АКА,

ПКЛ ■.■-.•..'•;.

2.Тест ШеллиСнепряиая^хе-: • грануляция тучных клеток)

I «1^фкулируяц!ю иыцукные ксиплексы 2.Гемолитическая адтив- -. ность . . '/- . . '

I.Реакция связывшзи комплемента ' /РСК/ ;.

1.Тест Шорр в системе?7

1п «1чо ••

довяний, учигаваотся здучонид всох «шов аисрпиесясЯ рошяая, вклэчая эффекты по тану псовдоаллергачосюпс реакций, сцзнху иммунс-токсического действ:« вещзстза 'на 'организм. Это способствует более полной характеристике дойстзит аллергена па организм. Введенный принцип зтаписсти предполагает выбрать лшлтируйешЗ, показатель ' при оценке аллергоопаспостл вещэста. Продкокетше методы аллерго-и иммуиоскриккнга (тост Шэрр, .вдцеко увелэтокпл массы лимфоузлов, реакция басттрансформавдн лкм$оцатоо) позволяют сократить объем исследований я тем са\пгл повысить экономичность разработок.

ВЫВОДИ-

I. При нормировании амикосоедиленяй обоснована необходимость учета их иммунотоксического действия, аллергенных и псевдоатлер-генчых эффектов. '

\ 2,. ГОДА и ПШ обладаот кммунотокейческимя свойствами; действие этих веществ направлено на Т- п В-ззенья жслунноП систем, а такко тучные кяотки-юппона аллергических реакций.

. 3, Выявленная затеномэрность (подавление иммуно-гоксического эффекта в системе пейровц бляш.чй>кез£нтер;шыше лимфоузлы > селезенка, тимус) зависит от анатомической локализации органов и пути поступления химически: гказста в организм.

4. П-5ГА Нормируй? а^лзргачоскио реакции! и'ТУ типа (по cell и cooebs ), ИЩА - слаботлфааенхшй клеточпо-сносредованный тип реакции.

5. Установлено, -{то помимо аллергенных эффектов; указанные аминосоэдиненля вызывают лпберацлю гистамина при прямом контакте с тучными клетками, что г-"де?елъствует о возмояности получения на эта вещества псоадогахоркг^гк роаздяЯ . .

о. Солостазлспио исех изученных вздов эТ$гьтов показало„ чтс ПЗДА обладает наиболее щраяошшм этодооодсачсокш« и аллергенным действием на уровне порога действия (0,1 ыг/л), ХОДА на том же уровне воздействия вызывает общетоксический и кглунотоксический эффект, что слодуе'"." учитывать при гигиеническом нормировании веществ в воде водоехюв. ." .

7. Наиболее чувствительной экспериментальной моделью для изучения как клмунотоксического, так и аллергенного действия амиио-соединений являются,?.дши-глбриды первого поколения (сва ж с57вх/о)г1

6. На основа изучения.кехшшзма кммунотоксического, аллергенного и псевдоачлергенного действия ПЗДА и Л>ША. усовершенствована методическая схема оценки амергоопасности химических веществ,базирующаяся на испсльзовашга.прмщг-аа отапиости з гигиенических исследованиях и позволяются комшгаксно характеризовать действие ачлергена, выбрать минимальный набор тестов, используя методы ал-лергоскрининга. -

СПИСОК ОСНОВНЫХ РАБОТ,ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЭЛБ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сенсибилизация к аминам.у мышей разных видов // Актуальные вопросы токсикологии. - Сб. научн.трудов. - Пермь, 1969. -.. с.30. . —

2. Оценка аллергенной активности лекарственных средств на стадии

доклинического испытания.// Тез. Докл. I Всесоюзного иммунологического съезда, Сочи, 1989. - с.33-37 (в соавторстве).

3. Методические аспекты исследования аллергизирупдего действия ле-

карственных препаратов в эксперименте. // Методология фундаментальных исследований в гягяене окружащей среды. - Сб. научных трудов. Косква, 1939..- С.33-37 (в соавторство).

4. Аллергены окруаавдей среды п .методология изучения механизмов

их сонсибилизирулпого действия. //' Методология фундамент :итъ-1шх исследований в гигиена окруяаш.ей среди. С<3. научи.тр. • 1,'оскпа, 1989. - С.14-20 (в соавторстве). Методяческле рекомендации но. оценке аллергенных свойств фармакологических лрепаратоз. // Утверждены 1.13 СССР. 5К 1\'3 СССР,-Москва, 1933. - 22 с. (п соавторстве)

6. Методические рекомендации по экспериментальному изучен;;:: имму-

котокскчяскнх свойстз химических факторов округащой среды. П Утвсрздены Проблемной комиссией "Научные основы гигиены окружающей среды". - Москва, 1989. - 47 с. (з соавторство).

7. Санитарные норму и правила по устройству и эксплуатации систем

горячего водоснабжения. // 7твер.?дены КЗ СССР Д 4723. - Москва, 1988. - 20 с. (з соавторство)