Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Синтез и биологическая активность, производных 4-замещенных 2,4-диоксобутановых кислот и гетероциклических соединений, полученных на их основе

На правах рукописи Для служебного пользования Экземпляр №

МАХМУДОВ Рамиз Рагибович

СИНТЕЗ И БИОЛОГИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ, ПРОИЗВОДНЫХ 4-ЗАМЕЩЕННЫХ 2,4-ДИОКСОБУТАНОВЫХ КИСЛОТ И ГЕТЕРОЦИКЛИЧЕСКИХ СОЕДИНЕНИЙ, ПОЛУЧЕННЫХ НА ИХ ОСНОВЕ

15.00.02 - фармацевтическая химия и фармакогнозия

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Пермь -1998

Работа выполнена на кафедре органической химии Пермского государственного университета и в лаборатории биологически активных веществ Естественнонаучного института при Пермском госуниверситете

Научные руководители: заслуженный деятель науки России,

доктор химических наук, профессор АНДРЕЙЧИКОВ Юрий Сергеевич

кандидат медицинских наук, старший научный сотрудник

пидэмский

Евгений Леонидович

Официальные оппоненты: доктор фармацевтических наук, профессор

МАШЕВСКАЯ Мария Сергеевна

доктор химических наук, ШКЛЯЕВ

Юрий Владимирович

Ведущая организация: Башкирский государственный медицинский университет

Зашита состоится « 2 » февраля 1998 года в 13 часов на заседании диссертационного совета Д 084. 70. 01 в Пермской государственной фармацевтической академии по адресу : 614600, ГСП-277, г. Пермь, ул. Ленина, 48

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ПГФА

Автореферат разослан «_»

.1997 года.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат фармацевтических наук, доцент

МетелеваЕ.В.

Общая характеристика работы

Актуальность работы. Поиск новых высокоактивных, малотоксичных, лишенных нежелательных побочных эффектов препаратов является актуальной проблемой фармацевтической науки и практики. Многочисленные работы, осуществленные в последние десятилетия, показали перспективность в этом отношении синтезов на основе 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот (АДБК) и их производных. Для соединений этого типа характерны реакции с моно- и бинуклефилыгыми реагентами, протекающие с образованием производных АДБК и гетероциклических соединений. К настоящему времени синтезировано огромное количество различных производных АДБК, в том числе и гетероциклических, и синтез соединений этой группы продолжается до сих пор. Многие из синтезированных соединений обладают широким спектром биологического действия при довольно низкой токсичности. Исследование фармакологических свойств соединений, полученных на основе АДБК, привело к выявлению активного противовоспалительного препарата 3-(4-метилбензоилметилен)пш1еразин-2-она (мефепирона), который имеет противовоспалительную активность (ПВА), близкую к лучшим нестероидным противовоспалительным препаратам, применяющимся в клинической практике, таким как вольтарен, бутадион, индометацин, пироксикам, но имеющий значительно меньшую как острую, так и хроническую токсичность. Несмотря на то, что на кафедрах фармакологии Пермских медицинской и фармацевтической академий и в лаборатории биологически активных соединений Естественнонаучного института при ПГУ исследована противовоспалительная активность сотен соединений, полученных на основе АДБК, остается непонятным, какие структурные факторы обусловливают противовоспалительную активность соединений этого типа.

Поэтому синтез новых производных 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот и гетероциклических соединений на их основе, а также нахождение закономерностей, связывающих структурные факторы синтезированных соединений с их ПВА, является актуальной задачей.

Цель работы. Целью данной работы является целенаправленный синтез производных 2,4-диоксобутановых кислот и гетероциклических соединений на их основе, а также изыскание новых эффективных и малотоксичных биологически активных соединений этого типа.

Задачи исследования.

1. Обобщение имеющихся данных по ПВА и анальгетической активности (АА) производных АДБК и соединений, полученных на их основе, выявление связи между структурными факторами этих соединений и их биологической активностью.

2. Разработка методов получения и синтез ранее неизвестных производных АДБК и гетероциклических соединений на их основе и исследование их ПВА и АА.

3. Определение ПВА и АА соединений этого типа, синтезированных на основе проведенного нами анализа ранее полученных данных на кафедре фармацевтической химии Пермской государственной фармацевтической академии и на кафедре органической химии Пермского государственного университета.

4. Выявление корреляционной связи между противовоспалительной и антипро-

г

стагландиновой активностями с целью изучения возможности использования последней для скрининга и выявления механизма действия флоголитиков.

Научная новизна. Впервые обобщены данные по ПВА и АА производных АДБК и соединений, полученных на их основе. Результаты анализа данных, большая часть которых не была до сих пор опубликована, классифицированы по производным АДБК. Произведен анализ влияния электронных и стерических факторов на фармакологическую активность.

Реакцией метилового эфира антраниловой кислоты, 1-нафтиламина, р-ацил- и Р-арилсульфонилэтиламинов, 4-аминопиридияа, 4- и 5-ашшохинолинов, 4-п-толил-1,3-тиазол-2-амина, 2-оксоцинхонилгидразина с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами получены, соответственно, о-карбометоксифенил-, 1-нафтил-, р-ацил- и р-арилсуль-фонилэтил-, 4-пиридил-, 4- и 5-хинолил-, 4-п-толшх-1,3-тиазол-2-ил- 2,4-диоксобута-новые кислоты.

Показано, что аминоглиоксим взаимодействует с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандио-нами с образованием 5-фенадалиден-6-оксо-4Н-1,2,4-оксадиазин-3-формальдоксимов.

Показано, что продуктами реакции между 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами и 4-аминофуразан-З-карбоксамидохсимом являются О-ароилацетил-4-аминофуразан-З-карбоксамидоксимы.

Исследована ПВА синтезированных нами соединений, а также 113 соединений, синтезированных по нашему предложению на кафедре фармацевтической химии Пермской государственной фармацевтической академии. Результаты исследования показывают, что в изученных рядах соединений отсутствуют единые закономерности, связывающие структуру соединений с их ПВА, что свидетельствует о различных механизмах реализации флоголигаческого действия у соединений различного типа.

Установлено, что в случае 6-метцл-2-пиридиламидов АДБК и З-ацетюхметилен-2-пиперазинонов ПВА обусловлена стерическими свойствами заместителей в ароиль-ном фрагменте, в то время как в случае о-метоксикарбонилфениламидов АДБК, О-ацилпирувоилкетохсимов и 3-ацилметилен-1-фенил-2-пиперазинонов ПВА обусловливают стеричные заместители в фрагменте, примыкающем к атому азота.

В случае Р-ацил амино- и р-фенилсульфонилэтиламидов АДБК и 3-ацилметилен-б-метил(фенил)-2-пиперазинонов ПВА способствуют элекгронодонорные заместители и препятствуют электроноакцепторные заместители в ароильном фрагменте. В случае Р-тозилсульфониламиноэтиламидов АДБК проявлению ПВА способствуют элекгронодонорные заместители в ароильном фрагменте.

Образование пиразольного цикла при взаимодействии АДБК с гидразином, как правило, приводит к снижению ПВА.

Практическая значимость. Разработаны методы синтеза новых производных АДБК, которые могут быть использованы как препаративные в органической химии при поиске новых биологически активных соединений.

В процессе работы синтезировано 88 неописанных в литературе органических соединений. 126 Соединений подвергнуты тестированию на ПВА, АА, 19 соединений на антипростагландиновую активность. Обнаружены вещества с высокой ПВА. Выявленные закономерности зависимости фармакологической активности от строения

синтезированных соединений открывают перспективу направленного синтеза препаратов упомянутого спектра фармакологического действия.

Выявлено 24 соединения, обладающих высокой ПВА и АА, многие го которых перспективны для углубленных фармакологических исследований с целью создания новых эффективных противовоспалительных препаратов.

Предложен простой и удобный способ определения ПВА, основанный на определении степени подавления исследуемыми соединениями диареи, вызываемой введением лабораторным животным арахидоновой кислоты.

Апробация работы. Основные положения диссертационной работы представлены на VIII международной конференции по химическим реактивам «Химические реактивы, реагенты и процессы малотоннажной химии» (Уфа-Москва, 1995), на международной научной конференции «Перспективы развития Естественных наук на Западном Урале» (Пермь, 1996), на П и III Российском национальном конгрессе «Человек и лекарства» (Москва, 1995, 1996), на I съезде Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные исследования как основа создания лекарственных средств» (Москва-Волгоград, 1995), на Всероссийской научной студенческой конференции, посвященной 50-летшо РАМН «Актуальные вопросы медицины» (Москва, 1994), «Актуальные вопросы фармации» (Тюмень, 1995; Барнаул, 1995), на итоговых научных конференциях профессорско-преподавательского состава Пермского госуниверситета и Пермской фармацевтической академии в 1992, 1993 и 1995 годах.

Публикации. По материалам работы опубликовано 25 работ в центральной и местной печати, получены 1 патент и 1 авторское свидетельство на изобретение.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа общим объемом 179 страниц машинописного текста состоит из введения, шести разделов, выводов. Список литературы включает 174 работы отечественных и зарубежных авторов. Диссертация содержит 61 таблицу, 2 рисунка, 1 схему.

В разделе 1 излагается современное состояние синтеза биологически активных соединений на основе 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот и их производных.

В разделе 2 приведены результаты собственных исследований диссертанта.

Раздел 2.1 посвящен анализу экспериментального материала, полученного ранее в Естественнонаучном институте при Пермском государственном университете, Пермской государственной фармацевтической академии, Пермской государственной медицинской академии. В разделе 2.2 представлены результаты собственных исследований диссертанта ПВА и АА производных АДБК и гетероциклических соединений, полученных на их основе. В разделе 2.3. приводятся результаты исследований по синтезу соединений, полученных на основе производных АДБК, их ПВА, АА, а так же некоторые закономерности, связывающие химическую структуру и фармакологическую активность. Раздел 2.4 посвящен изучению роли арахидоновой кислоты в патогенезе воспаления и механизме действия флоголитиков.

В разделе 3 приводятся методики синтеза и исследования фармакологической активности.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Исследования противовоспалительной активности ранее синтезированных соединений, полученных на основе 4-замещенных 2,4-диоксобутановых кислот и их производных

Исследование фармакологической активности 2,4-диоксобутановых кислот и соединений, полученных на их основе, было осуществлено ранее на кафедрах фармакологии Пермской медицинской академии, Пермской фармацевтической академии и в лаборатории биологически активных веществ Естественнонаучного института при Пермском университете. Несмотря на то, что многие исследованные соединения проявляют высокую ПВА, полученные результаты никогда ранее не обобщались, что препятствовало установлению зависимости между структурой исследованных соединений и их ПВА.

Поэтому на первой стадии работы мы подвергли анализу ранее полученные данные по ПВА 313 соединений, относящихся к 22 типам производных 2,4-диоксобутановых кислот и соединений, полученных на их основе.

Ках оказалось, соединения с высокой ПВА были выявлены среди 2-ариламино-4-арил-4-оксо-2-бутеновых кислот и их эфиров, амидов и гидразидов АДБК, 3-фенаци-лиден-2-пиперазинонов, 3-фенацшшден-3,4-дигидро-2-хиноксалонов, 5-фенацилиден-2-имино-1,3-оксазолидонов, 2-замещенных 6-арил-1,3-оксазин-4-онов, 3-замещенных 4-арилсульфонил-2,4-дигидро-2-шфролонов и -2-фуранонов. Так как синтез этих соединений производился для решения химических задач, несмотря на кажущееся обилие экспериментального материала, отсутствуют данные для установления многих важных фармакологических закономерностей. Так, например, недостаточно данных по влиянию на ПВА элекгронодонорных, электроноакцепторных или стеричных заместителей. При наличии нескольких заместителей имеются часто данные по влиянию только одного из них. Очень часто в рядах синтезированных соединений отсутствуют вещества, от которых следовало бы ожидать максимальной активности.

Поэтому нами была исследована ПВА и АА 124 специально синтезированных на кафедрах органической химии Пермского госуниверситета и кафедре фармацевтической химии Пермской фармацевтической академии соединений, относящихся к некоторым вышеуказанным классам соединений, и был произведен анализ полученного фармакологического материала, дополняющего ранее полученные данные.

1.1. Пиридиламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот

Ранее было установлено, что увеличение стерических свойств ароильного фрагмента в 2-пиридиламидах АДБК способствует повышению ПВА. Поэтому нами были исследованы 2-(6-метил)- и 5-бром-2-пиридиламиды АДБК, содержащие стеричные заместители в амидном фрагменте.

Было обнаружено, что в случае б-метшширидиламидов АДБК ПВА также обусловливают стеричные и электродонорные заместители в ароильном фрагменте.

В случае 5-бром-2-пиридиламидов АДБК ПВА способствуют электроноакцептор-ные заместители в ароильном фрагменте.

1.2. Гндразиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот

При анализе ПВ А ранее исследованных 2-метил- и 2-фенил-4-хинолилгвдразидов АДБК бьио обнаружено, что все испытанные соединения проявили высокую ПВА, что, по нашему мнению, могло быть обусловлено стерическими свойствами заместителей в хинолильном фрагменте соединений. Поэтому нами была исследована ПВА о-и м-оксибензоилгидразидов и И-метил- и ]М-фенилантранилгидразидов АДБК, также содержащих стеричные заместители в амидном фрагменте.

Было обнаружено, что исследованные соединения проявили лишь умеренную ПВА. Оказалось, что ПВА м-оксибензоилгидразидов АДБК, в которых м-оксигруппа создает меньшие стерические препятствия, чем о-оксигруппа, обладают несколько более высокой ПВА по сравнению с о-оксибензоилгидразидами АДБК. Полученные результаты, по-видимому, обусловлены недостаточной стеричностью группировок в амидном фрагменте исследованных соединений.

1.3.3-Ацилметилен-2-пнперазиноны

Как показали рацее полученные данные по ПВА З-арощметилен-2-пиперазинонов, все ранее испытанные аналоги мефепирона, содержащие различные заместители в фенильном кольце, обладают лишь умеренной ПВА.

Так как набор заместителей у ранее испытанных соединений весьма ограничен, нами были исследованы еще 6 соединений, в том числе содержащих в фенильном кольце о- заместители. Кроме того, были испытаны З-ацилметилен-2-пиперазиноны, содержащие нафтильные и некоторые гетероциклические заместители. Исследования З-ацилметилен-2-пиперазинонов подтвердили, что все соединения также обладают лишь умеренной ПВА. Введение о- заместителя не приводит к повышению ПВА. Отмечено, что электроноакцепторные заместители снижают ПВА. Высокая ПВА у 3-(2-нафтоил)- и 3-(21-метил-5|-метоксибензофураноил)метилен-2-пиперазинона и мефепирона обусловлена, вероятно, специфическими эффектами варьируемых заместителей.

Исследования ПВА 3-арошшетш1ен-1-метил(фенил)-2-пиперазинонов показали, что метальная группа в положении 1 существенно не влияет на ПВА. В ряду 1-фенилзамещенных введение фенильного заместителя во всех случаях приводило к резкому увеличению ПВА. Исключением является 1-фенил - аналог мефепирона, совершено не проявивший ПВА.

Причиной этого может являться то, что роль группировки, обеспечивающей ассоциацию с субстратом в ряду З-ароилметилен-2-пилеразинонов, переходит от ароиль-ной группы к фенилпиперазиноновой. Ароильный заместитель, в случае аналога мефепирона, обладающий сходными стерическими свойствами, конкурирует с фенил-пиперазиноновым фрагментом при ассоциации с рецептором. Однако, после ассоциации за счет ароильного фрагмента пиперазиноновое кольцо, по-видимому, не в состоянии участвовать в ингабировании отека вследствие воздействия фенильного заместителя в положении 1.

В случае 6-метил-3-ароилметилен-2-пиперазинонов в противоположность соедине-

ниям, не содержащим метальной группы, минимальной активностью обладают соединения с злектронодонорными заместителями. И в этом случае совершенно не проявил ПВА аналог мефепирона, содержащий в положении 6 метальную группу. Среди соединений этого типа обнаружены соединения с высокой ПВА, содержащие 4-бром-и 4-хлорарильные заместители. Это не может быть следствием влияния только элек-троноакцеггшрных свойств этих заместителей, так как 4-Р-замещенное соединение совершенно неактивно.

1.4. 4-Замещенные 0-2,4-диоксобутирилкетоксимы

Как было отмечено выше, среди амидов АДБК был обнаружен ряд соединений с высокой ПВА. Для исследования влияния на ПВА разобщения амидного и ацилпиру-воильного фрагментов при внедрении между ними атома кислорода нами была исследована ПВА 15 соединений 4-замещенных 0-2,4-диоксобугирилкетоксимов.

Почти все исследованные соединения проявили ПВА. Однако, 0-4-арил-2,4-ди-оксобутирилкетоксимы проявили лишь умеренную ПВА, причем активность мало зависит от характера заместителя в ароильном фрагменте. Все это свидетельствует о том, что введение атома кислорода в ароильний фрагмент не способствует ПВА.

Значительно более сильное влияние оказывает характер заместителей, входящих в состав иминогруппы. Если оксимы ацетофенона проявляют лишь умеренную ПВА, то для оксимов салицилового альдегида характерен средний уровень ПВА. Производным адамантана присуща высокая ПВА, в то время как оксимы камфоры имеют очень высокую ПВА. Интересно, что увеличение стеричности радикалов альдегида и кетонов, образующих оксимы, возрастает симбатно с увеличением ПВА.

2. Исследования анальгетической активности ранее синтезированных соединений, полученных на основе 4-замещенных 2,4-дноксобутановых кислот и их производных

Анализ ранее полученного фармакологического материала показал, что для соединений, полученных на основе АДБК и их производных, наряду с ПВА характерна так же и АА. В большей мере этот вид активности характерен для 2-ариламино-4-арил-4-оксо-2-бутеновых кислот и их эфиров и некоторых амидов АДБК. Поэтому с исследованием ПВА соединений, описанных выше, мы изучали их АА.

Почти для всех исследованных соединений характерна слабая или умеренная АА. Однако, сравнивая полученные данные с АА амидопирина, следует учитывать, что соединения были исследованы нами в дозах в два раза меньших, чем амидопирин. Так, 3-ароил-метилен-1-фенил-2-пиперазиноны в этих условиях проявили АА, близкую к АА амидопирина. При этом отчетливо прослеживается, что сильные электроно-донорные заместители в ароильном фрагменте способствуют проявлению АА.

Однако, чаще всего обнаруживается отсутствие влияния электронных и стериче-ских факторов на АА. Последнее может быть объяснено тем, что АА в таких рядах соединений обусловлена метаболитами, образующимися при распаде соединений, которые не содержат варьируемые группы. Наиболее перспективными в этом отношении оказались О-ацилпирувоилоксимы адамантана и камфоры. Почти все исследо-

ванные соединения оказались активнее амидопирина. Интересно, что эти же соединения проявили наибольшую ИВА.

Более высокую активность в два раза меньшей дозе по сравнению с амидопирином проявил и 4-фторбензоилметилен-б-метил-2-липеразинон.

3. Синтез производных 4-замещенных 2,4-диоксобутановых кислот и гетероциклических соединений, полученных на их основе и исследование их противовоспалительной активности

3.1. 2-Метоксикарбонилфениламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот

Ранее было обнаружено, что о-метоксикарбонилфениламид 4-(п-метоксифенил)-2,4-диоксобутановой кислоты обладает высокой ПВА. Возможно, что причиной высокой ПВА этого соединения являются сильные электродонорные свойства заместителя в ароильном фрагменте. Для проверки этого предположения нами были синтезированы и исследованы соединения с различными заместителями в ароильном фрагменте.

2-Метоксикарбонилфениламиды АДБК ( 1 -4 ) были получены при взаимодействии 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионов с метиловым эфиром антраниловой кислоты в инертном растворителе при комнатной температуре. Целевые продукты образуются с выходами 87-91%.

со осп.

а'=11г=н (I), а'=сн3, я2=н (2), я'^^сн3 (З), я!=н (4>

Спектральные свойства соединений 1-4 соответствуют свойствам ранее опубликованных соединений этого типа.

Исследования ПВА соединений 1-4 показало, что они обладают высокой ПВА независимо от характера заместителей в ароильном фрагменте. Причиной этого, по-видимому, является то, что ПВА у соединений этого типа обусловлена только стери-ческим эффектом, создаваемым о-метоксикарбонидьной группой в амидном фрагменте. При этом стерические эффекты, создаваемые в ароильном фрагменте, не сказываются на ПВА.

3.2. а-Нафтиламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот

Из исследованных ранее а-пиридиламидов АДБК максимальной ПВА обладает соединение, содержащее в амидном фрагменте в положении 6 пиридинового цикла ме-тильную группу. Можно предположить, 'что такое повышение активности обусловлено стерическим эффектом метальной группы и пиридинового атома азота.

Нами были синтезированы а-нафтиламиды АДБК, в которых аннелированное бензольное ядро создает подобно метальному заместителю стерические препятствия. Синтез был осуществлен взаимодействием эквимолекулярных количеств 5-арил-2,3-

дигидро-2,3-фурандионов с а-нафтиламином в среде безводного диоксана при комнатной температуре.

Я2=Н: Я^Н (5), СНз (6), С1 (8), С2Н50 (9); К1= И2= СН3 (5-9)

В ИК спектрах соединений 5-9, снятых в вазелиновом масле, присутствуют полосы поглощения 3376-3380 см'1 (НН),1690-1704 см'! (СО амид.). Полосы валентных колебаний у-карбонила уширены и не проявляются в ИК спектрах, что соответствует литературным данным. В спектрах ПМР соединений 5-9, снятых в ДМСО-с^, присутствует синглет при 6,58-7,25 м.д. (СН=), сигнал при 10,85-12,65 м.д. (ЫН), группа сигналов с центром при 7,48-7,85 м.д. (аром.). Таким образом, соединения 5-9 полностью енолизованы.

Из этих соединений удалось определить ПВА только для а-нафтиламида 4-(п-хлорфенил)-2,4-дноксобутановой кислоты. Как оказалось, это соединение тормозит развитие отека через 4 часа после введения каррагенина на 35%. Несмотря на сравнительно небольшое значение ПВА для этого соединения, результаты испытаний этого соединения можно считать обнадеживающими, так как для электронодонорных заместителей в ароильном фрагменте можно ожидать более высокой ПВА.

3.3. [З-Ациламино- и р-арилсульфониламиноэтиламиды 4-арил-2,4-диоксо-бутановых кислот

Известно, что многие 3-ацилметилен-2-шшеразиноны обладают очень высокой ПВА. Представляло большой интерес выявить, связана ли ПВА с образованием 2-пи-перазинонового цикла или ПВА обусловливают отдельные структурные элементы 3-ацилметилен-2-тшеразинонов, или их сочетание.

Для этого мы синтезировали (З-ациламиноэтиламиды АДБК (10-17) реакцией № ацетилэтилендиамина с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандиоками в безводном диоксане при комнатной температуре. Реакцией Ы-арилсульфонилэтилендиамина с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами были получены арилсульфониламиноэтиламиды АДБК (18-28).

^¡ЧНСНгСНгЛНг

н'= СНзСО (10-17), С6Н55 02(18-22), 4-СН3СбН4802(23-28);

К2=Н (10,18, 23), 4-СНз (11-17,19, 20, 24, 25), 4-СНэО (13, 26), 4-Г (14), З-Вг (15), 4-Вг (16, 21,27), 4-С1 (17, 22, 28);

Я3= Н (10,11,13-19,21-24,26-28), 2-СЕ3 (12,20,25)

Хотя в этом случае сравниваемые соединения отличаются от З-ацилметилен-2-пи-перазинонов на ацильную группу, сравнение позволяет ориентировочно оценить вклад циклообразования в ПВА сравниваемых соединений.

В спектрах ПМР соединений 10-28 присутствуют сигналы в области 3,12-3,55 м.д. (-СН2СН2-), синглет при 7,05-7,24 м.д. (-СН=), сигнал 8,25-8,60 и 8,85-9,12 м.д. (группы N11), группа сигналов с центром при 6,85-7,96 м.д. (аром.). Кроме синглета метанового протона в спектрах присутствует малоинтенсивный синглет при 4,51-4,56 м.д., обусловленный протонами Р-метиленовой группы ароилпирувоильного фрагмента, что свидетельствует о неполной енолизации соединений и присутствии в растворах кетоформы. Судя по интегральной интенсивности сигнала, содержание кето-формы составляет 5-6%.

Данные биологических испытаний показывают, что все исследованные соединения проявляют в той или иной степени противовоспалительный эффект. Наиболее активны соединения 10, 18, 25, 28. Наибольшей активностью обладают незамещенные в ароильном фрагменте соединения. Переход от ацетильных к фенилсульфонильным производным сопровождается некоторым повышением противовоспалительного действия. Переход к тозилсульфокильным производным сопровождается повышением активности у соединений, имеющих в ароильном радикале электронодонорные заместители, причем, чем выше электронодонорный эффект заместителя, тем значительнее повышение противовоспалительного действия. Таким образом, р-ациламиноэтил-амиды АДБК являются весьма перспективными объектами для поиска эффективных противовоспалительных средств, особенно в тех случаях, когда ацильная группа является арилсульфонильной.

С целью выявления влияния положения пиридинового атома азота на ПВА пири-диламидов 4-арил-2,4-диоксобутаковых кислот представляло интерес синтезировать и исследовать ПВА 4-пиридиламидов АДБК.

4-Пиридиламиды АДБК (29 -32) были получены при взаимодействии эквимолекулярных количеств 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионов и 4-аминопиридина в смеси безводного диоксана с ледяной уксусной кислотой при комнатной температуре.

3.4. 4-Пиридиламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот

п-ЯСбЩ

О

О

+ N112'

О

п-КСбН4СОСН2СОСОГЧТ1 29-32

И= Н (29), СНз (30), ОСНз (31), С1 (32)

В ИК спектрах соединений 29-32, снятых в виде суспензии в вазелиновом масле,

присутствуют полосы поглощения 3200-3260 см"1 (ЯН), 1670-1690 см"1 (СО амид), 1612-1620 см"1 (хелатный цикл). В спектрах ПМР данных соединений, снятых в ДМСО-ё«, имеются сигналы при 11,45-12,35 м.д.(ГЩ), синглет при 6,75-7,05 м.д. (СН=), группа сигналов с центром при 8,05-8,11 м.д. (пиридиновый цикл), группа сигналов с центром при 7,21-7,85 м.д. (аромат.).

К сожалению, нам не удалось исследовать биологическую активность соединений 29-32 из-за отсутствия лабораторных животных.

3.5. 4- и 5-Хинолиламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот

В связи с тем, что многие пиридиламиды АДБК при скрининге проявили высокую ПВА, представляло интерес исследовать влияние на ПВА аннелирования пиридинового кольца с бензольным. Для этого нами были синтезированы 4- и 5-хинолиламиды АДБК (33-38) реакцией эквимолекулярных количеств 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фуран-дионов и аминохинолинов в безводном диоксане при комнатной температуре.

И'СНэ (33), С2Н50 (34), Н (35), СНз (36,37), С1 (38); И2= Н (33-36,38), СН3 (37)

В ИК спектрах хинолиламидов 33-38 присутствуют полосы валентных колебаний 1690-1692 см"1 (СО амид), 1602-1612 см"1 (хелатный цикл), 3200-3260 см'1 (Ш), что соответствует структуре этих соединений. В спектрах ПМР хинолиламида 34, снятого в ДМСО-с^, присутствует синглет при 6,62 м.д. (-СН-), уширенный сигнал при 13,55 м.д. (N11), группа сигналов с центром при 7,51 м.д. (аромат.), триплет при 1,35 м.д. и квадруплет при 4,05 м.д. (С2Н5О).

Данные по ПВА соединений этого типа не были получены.

3.6. Р-Ароилпирувоилгидразиды 4-оксоцинхониновой кислоты

Учитывая, что производные 2-аминоцинхониновой кислоты, а также амидов 2-гидразиноцинхониновой кислоты, обладают ПВА, представилось целесообразным синтезировать соединения, которые сочетали бы в одной молекуле два фармакофор-ных фрагмента - ароилпирувоильного остатка и амида 2-оксоцинхониновой кислоты.

Для этого нами были синтезированы р-ароилпирувоилгидразиды 2-оксоцинхониновой кислоты (39-45). Синтез был осуществлен при сливании растворов эквимолекулярных количеств 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионов и гидразида 2-оксоцинхониновой кислоты в безводном диоксане при комнатной температуре.

ГШ о

*ГУ<

Ш——ОТСНгСОСШШга 112

39-43

К'=К2=Н (39); СНз (40,41), С1 (42), С2Н50 (43); И2= Н (40, 42,43), СН3 (41)

Полученные ароилпирувоилгидразиды 39-43 бьши вовлечены в реакцию с о-фенилендиамином. Реакцию проводили при нагревании эквимолекулярных количеств растворов реагентов в ледяной уксусной кислоте в течение 15-20 минут при 100-105°С. Образующиеся 3-фенацилиден-3,4-дигидро-2-хиноксалоны (44-47) выделяли прибавлением воды.

Н'=Я2=Н (44); Н1=СНз (45, 46), О (47); И2=Н (45,47), СН3 (46) Исследования соединений 39 и 40 показали слабую ПВА.

3.7.4-(п-Толил)-1,3-тиазол-2-иламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот

Для определения зависимости между структурой производных АДБК и их ПВА, а также с целью обнаружения высокоактивных соединений, представляющих интерес для углубленных фармакологических исследований, нами были синтезированы 4-(п-толил)-1,3-тиазол-2-иламиды АДБК (48-53). Для их получения растворы эквимолекулярных количеств 2-амино-4-п-толил-1,3-тиазола и 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандио-нов в абсолютном диоксане сливались при комнатной температуре.

48-53

ЯЧ*2- Н (48), СНз (49,50), С2Н50 (51), С! (52), а-нафтил (53); И2= Н (49,51-53); СНз (50)

В ИК спектрах п-толилгиазолиламидов (48-53) присутствуют полосы валентных колебаний амидного карбонила 1698-1705 см'1, полосы валентных колебаний ароиль-ного карбонила, вовлеченного в ВМВС при 1610-1640 см'1, полосы валентных колебаний ИН-группы при 3200-3300 см"1. ИК и ПМР спектры соединений 48-50 соответствуют литературным данным и подтверждают их структуру. Исследование соединений 48 и 49 показало, что им присуща лишь умеренная ПВА.

3.8. 5-Фенацилиден-б-оксо-5,6-дигидро-4Н-1,2,4-оксадиазин-3- формальд-оксимы*

Представляло интерес ввести в реакцию с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами функционализированные амидоксимы, содержащие в а-положении к амидоксимной группировке ВН-нуклеофильные заместители. Увеличение количества нуклеофиль-ных групп в реагенте увеличивает его препаративные возможности в реакциях с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами, а также дает возможности выйти на новые типы соединений и проследить за влиянием на ПВА различных сочетаний двух фармако-форных группировок.

В качестве функционализированных амидоксимов нами были использованы ами-ноглиоксим и 4-амшофуразан-З-карбоксамидоксим. Эти соединения имеют структурные возможности вступать в реакции не только как 1,2-бинуклеофилы, подобно другим амидоксимам, но и как 1,3-бинуклеофшш (4-аминофуразан-З-карбоксамидок-сим) и даже 1,4-бинуклеофилы (аминоглиоксим), что дает возможность надеяться на образование при взаимодействии с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами продуктов необычного строения.

При взаимодействии 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионов с аминоглиоксимом в безводном диоксане при комнатной температуре в течение 1 часа нами были выделены с выходом 24-29% 5-фенацшшден-6-оксо-5,6-дигидро-4Н-1,2,4-оксадиазин-3-формальдоксимы (54- 57).

XX — Л л

п-КСбЩ О ^О N011 ИОН п-ЯСбН+СОаГ N сн=тн

н 54-57

Я=Н (54), СБз (55), ОСН, (56), С1 (57)

В ИК спектрах соединений 54-57, снятых в вазелиновом масле, имеются полосы

поглощения, соответствующие валентным колебаниям следующих связей: 1610-1615 см"1 (СО фенацил.), 1718-1720 см'! (СО лает.), 3140-3170 см'1 (связь N-11), 3290-3310 см'1 (связь О-Н в оксиминогруппе).

В спектре ПМР соединения 55, снятого в растворе ДМСО-&, присутствуют синг-леты при 2,37 м.д. (СНз) и при 7,11 м.д. (-СН=), сигналы четырех протонов ароматического кольца при 7,17-7,95 м.д., синглет (-СН=ЫО-). Спектры ПМР других соединений имеют аналогичный характер.

Присутствие в ИК спектрах соединений 54-57 поглощения в области 1718-1720 см"1 позволяет исключить го рассмотрения альтернативную структуру 5-ароилацетил-2-оксимино-1,2,4-оксадиазола, образование которого возможно в данной реакции:

Н(Ж=СЕк

О СОСЕЬСОСвВиЫ-п

По-видимому, образование соединений протекает в соответствии со следующей схемой: на первой стадии реакции происходит раскрытие цикла 5-арил-2,3-дишдро-

2.3-фурандионов под действием гидроксила океимяногруппы реагента. Затем происходит замыкание цикла за счет первичной аминогруппы интермедиата и енольного а-гидроксила в ароилпирувоильном фрагменте с образованием 5-фенацилиден-6-оксо-5,б-дигидро-4Н-1,2,4-оксадиазин-3-формальдоксимов (54 -57).

Соединение 54 показало высокую ПВА.

3.9.0-Ароилацетнл-4-аминофуразаи-З-карбоксамиды*

При взаимодействии 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фуравдионов с 4-аминофуразан-З-кар-боксамидоксимом можно было ожидать, что последний будет реагировать подобно

3.4-диаминофуразану или диаминоглиоксиму как 1,3-диаминосоединение. Однако, при нагревании в кипящем диоксане смеси эквимолекулярных количеств 5-арид-2,3-дигидро-2,3-фурандионов и 4-аминофуразан-З-карбоксамидоксима в течение 1 часа неожиданно были выделены О-ароилацетил-4-аминофуразан-З-карбоксамиды (58-61).

гш2

п-КСбКЦ о ^о

.л;

+ N112 —* 1 1 о

КОСОСЯ2СОСб1Щ-п

Х]Г ]| 58-61

Н=Н (58), СНз (59), ОСНз (60), С! (61)

») Данные разделы диссертации выполнены совместно с сотрудником Института технической химии УрО РАН в г. Перми, к. х. н. Некрасовым Д.Д.

В ИК спектрах соединений 58-61 присутствуют полосы поглощения, обусловленные валентными колебаниями двух карбонильных групп в области 1640-1655 см'1 (кетонный карбонил) и 1765-1775 см"1 (сложноэфирный карбонил). В области 31603470 см"1 присутствуют три широких пика, соответствующие валентным колебаниям двух первичных аминогрупп.

В спектре ПМР соединения 59 присутствует синглет трех протонов меггильной группы при 2,34 м.д„ синглег двух протонов метиленовой группы. Два уширенных сигнала при 5,34 и 5,90 м.д. соответствуют четырем протонам двух первичных аминогрупп. Дублет дублетов с центром при 7,51 м.д. соответствует четырем ароматическим протонам. Спектры ПМР других соединений имеют аналогичный характер.

Испытанные соединения 58 и 59 показали высокую ПВА.

3.10. Амиды 5-арил-З-пиразолкарбоновых кислот

Для того чтобы проследить влияние замыкания пиразольного цикла на противовоспалительную и анадьгезирующую активность, мы ввели все типы синтезированных нами соединений, содержащих ароидпирувоильный фрагмент в реакцию с гидра-зингидратом (62 - 77):

К1=Кг=Н (62, 65, 75); К1=К2=СН3 (67, 71, 76); Я'=СН3 (63, 66, 70, 77), С! (64, 69), ОС2Н,

(68), ОСНз (72), Р (73), Вг (74); И2=Н (63,64,66,68-70,72-74,77); 143= о-метоксикарбонил (62-64); а-нафтнл (65-69); ацетиламиноэтил (70-74); 5-хинолил (75,76); 4-хинолил (77)

Реакция осуществлялась при кратковременном кипячении амидов АДБК с эквимолекулярным количеством гидразингидрата в этаноле.

В ИК спектрах р-ациламиноэтиламидов 70-74 присутствуют полосы поглощения в области 3340-3360 см"1 (валентные колебания МН пиразольного цикла), 32203290 см'1 (валентные колебания N11 амидных групп), 1680-1700 см"1 и 1630-1656 см'1 (валентные колебания амидных карбонильных групп). ИК и ПМР спектры соединений 62-77 соответствуют литературным данным и подтверждают их структуру.

Образование пиразольного цикла за счет ароилпирувоильного фрагмента существенно снижает ПВА о-метоксикарбонилфенил амидов 62-64. В случае Р-ацетиламино-этиламидов (70-74) образование пиразольного цикла приводит к снижению ПВА только в случае присутствия в ароильном фрагменте элекгронодонорных заместителей. В случае же электроноакцеоторных заместителей даже происходит некоторое повышение ПВА.

3.11. 2-Оксоцпнхонилгндразиды 5-арил-З-пиразолкарбоновых кислот

В связи с тем, что нами был получен ряд ароилпирувоилгидразидов 2-оксоцин-хониновой кислоты, представляло интерес исследовать влияние образования пира-зольного цикла на ароилпирувоильном фрагменте на ПВА. С этой целью растворы ароилпирувоилгидразидов 2-оксоцинхониновой кислоты в ДМФА ввели в реакцию с эквимолекулярным количеством гидразингидрата в изопропаноле при комнатной температуре, что привело к образованию 2-оксоцинхонилгидразидов 5-арил-З-пира-золкарбоновых кислот (78, 79).

Ы=Н(78),С1(79)

Спектры ПМР соединений 78-79 соответствуют литературным данным. Вследствие отсутствия лабораторных животных нам не удалось исследовать ПВА этих соединений.

Как показали исследования АА, многие ацетил-4-тозиламиноэтиламиды АДБК в дозе 50мг/кг'проявили АА, близкую к АА амидопирина в дозе 100 мг/кг. Однако, наибольшую АА проявил 5-(п-метилфенацилиден)-6-оксо-5,6-дигидро-4Н-1,2,4-оксади-азин-З-формальдоксим. Этот класс соединений интересен также и тем, что подобные соединения перспективны и для поиска эффективных противовоспалительных средств.

5. Выявление антипростагландиновой активности с использованием ара-хидоновой кислоты - новый тест для скрининга и изучения механизма действия флоголитиков

Выраженный антипростагландиновый эффект, лежащий в основе механизма действия флоголитиков, явился предпосылкой для разработки новой модели скрининга противовоспалительных средств. С этой целью была использована арахидоновая кислота (АХК), которая, как известно, являясь источником эндогенного биосинтеза про-стагландинов (ПГ), сама проявляет ПГ эффекты, в частности, усиление перистальтики кишечника и диарею.

В опытах на беспородных белых мышах нами было изучено влияние различных доз АХК при однократном оральном введении на моторику желудочно-кишечного

О

78,79

4. Анальгетическая активность синтезированных соединений

тракта. В дозах 12-100 мкг/кг АХК вызывала выраженную диарею, начинающуюся через 2 часа с момента введения, достигающую максимума к 4 и заканчивающуюся через 6 часов. Среднеэффективная доза АХК - 29,5 мкг/кг. В дозе 100 мкг/кг АХК вызывает диарею у подавляющего числа животных, что может быть использовано при моделировании.

Предварительное введение известных флоголитиков: вольтарена, индометацина, бутадиона, анальгина, аспирина, амидопирина в дозах 50 мг/кг по каррагениновому воспалению, в той или иной степени, препятствовало развитию диареи, индуцированной АХК.

Был определен % подавления диареи этими препаратами в дозе 50 мг/кг. Полученные результаты хорошо коррелируют с ПВА этих же препаратов на каррагениновой модели воспаления (г = 0,986). Столь же хорошо коррелируют % подавления диареи и ПВА по каррагениновой модели и 19 синтезированных нами соединений, взятых в дозе 50 мг/кг (г = 0,979).

Полученные нами данные, прежде всего, позволяют рекомендовать использование арахидоновой кислоты для скрининга флоголитиков и обнаружения антипростаглан-диновой активности, с целью разработки новых, более эффективных, лишенных побочных эффектов противовоспалительных препаратов.

Предлагаемый нами метод, в отличие от существующих, прост, достоверен, воспроизводим, не требует сложного, дорогостоящего оборудования, приборов и позволяет проводить опыты по скринингу на мелких лабораторных животных, дает возможность их многократного использования.

Противовоспалительная и анальгетическая активность наиболее перспективных исследованных соединений

___ Таблица 1

я2 ПВА АА

я" Я3 Л&о, Ингибирова- Время обо-

мг/кг нке отека, в % ронительно-

к контролю го рефлекса.

через 4 часа в сек

1 2 3 4 5 6

Н Н С«Н,СООСНэ-о >1500 56,0

СНз н СбЩСООСНз-о >1500 54,0

СНз СНз СдаООСНз-о >1500 55,0

Н Н СН2СНаШСОСН3 >1000 34,4 24

Н н СНгСЩЫШОгСбНз >1000 39,0 24

СН30 н СН2СН2Ш302СбН4СНз-п >1000 43,4 22

Н н 6-метил-2-пиридил >1600 60 22

СН30 н б-метил-2-пиридил >1600 41,0

H H 5-бром-2-пиридил - 47,5 14,4

СНз H 5-бром-2-пиридил 2820 51,1 13,0

Cl H 5-бром-2-пиридил 2580 56,5 . -

H H CF3CONH - 48,0

СНз H o-OHCÄNH >1000 28,0 24

Cl H m-OHC6H,NH >1000 31,0 24

N

А n-RC{H4COCH H CH=NOH

H >1000 42,4

CH3 NH2 >1000 27,3

H

СН3

2-нафтил

nh2v

NOCOCHÍCOC6H4R-

N N

>1000 42,4 >1000 50,2

т о

NH'^chcor

>1000 45,0

R

NH ,jCHCOCéH4 —Ri

О

N

ßz

H C«H5 H 45,0

1 -нафтат C6H5 H 40,0 17

Cl H CH3 48,0

F H СНз 31

Br H СНз 47,0

Ri- /Яг

-к У—COCH2COCOO- N=C

\=J

СНз CH, Ad 40 27,2+2,9

H СНз Ad 38 24,4±4,7

H H C9HI6 40 27,4±2,3

СНз H C9Hi6 37 24,4±4,1

C2HS H C9H16 48 29,0±7,1

Ci H C9H,6 47 34,1±4,2

H СНз 2-НОСбНд 38 25,3±5,1

ВЫВОДЫ

1. Впервые обобщены ранее полученные данные по противовоспалительной и анальгетической активности производных АДБК и соединений, полученных на их основе. Результаты анализа данных, большая часть которых не была до сих пор опубликована, классифицированы по производным АДБК. Произведен анализ влияния электронных и стерических факторов на фармакологическую активность.

2. Реакцией метилового эфира антраниловой кислоты, 1-нафтиламина, Р-ацил- и р-арилсульфонилэтиламина, 4-аминопиридина, 4- и 5-аминохинолинов, 4-(п-толил)-1,3-тиазол-2-амина, 2-оксоцинхонилгидразида с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами получены, соответственно, о-карбометоксифенил-, 1-нафтил-, р-ацил- и р-ариясуль-фониламиноэтил-, 4-пиридил-, 4- и 5-хинолил-, 4-(п-толил)-1,3-тиазол-2-ил- и 2-оксо-цинхониламиноамиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот.

3. Показано, что аминоглиоксим взаимодействует с 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фуран-дионами с образованием 5-фенацилиден-6-оксо-4Н-1,2,4-оксадиазин-3-формальд-оксимов.

4. Показано, что продуктами реакции между 5-арил-2,3-дигидро-2,3-фурандионами и 4-аминофуразан-З-карбоксамидоксимом являются О-ароилацетил-4-аминофуразан-3-карбоксамидоксимы.

5. Исследована противовоспалительная активность синтезированных нами 81 соединения, а также 113 соединений, синтезированных на кафедре фармацевтической химии Пермской государственной фармацевтической академии. Результаты исследования показывают, что в изученных рядах соединений отсутствуют единые закономерности, связывающие структуру соединений с их противовоспалительной активностью, что свидетельствует о различных механизмах реализации противовоспалительной активности у соединений различного типа.

6. Установлено, что в случае 2-(6-метил)пиридиламидов 4-арил-2,4-диоксо-бутановых кислот и З-ацетилметилен-2-штеразинонов противовоспалительная активность обусловлена сгерическими свойствами заместителей в ароильном фрагменте, в то время как в случае о-метоксикарбонилфешшамидов 4-арил-2,4-диоксо-бутановых кислот, О-ацилпирувоилкетоксимов и 3-ацилметилен-1-фенш1-2-шшерази-нонов противовоспалительную активность обусловливают стеричные заместители во фрагменте, примыкающем к атому азота.

7. В случае р-ациламино- и Р-фенилсульфонилэтиламидов 4-арил-2,4-диоксобу-тановых кислот и 3-ацилметилен-6-метил(фенил)-2-шперазинонов противовоспалительной активности способствуют электронодонорные заместители и препятствуют электроноакцепторные заместители в ароильном фрагменте.

В случае р-тозилсульфониламиноэтил амидов 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот проявлению противовоспалительной активности способствуют электронодонорные заместители в ароильном фрагменте.

Образование пиразольного цикла при взаимодействии 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот с гидразином, как правило, приводит к снижению противовоспалительной активности.

8. Предложен простой и удобный способ определения противовоспалительной активности, основанный на исследовании степени подавления исследуемыми соединениями диареи, вызываемой введением лабораторным животным арахидоновой кислоты.

9. Выявлено 24 соединения, обладающих высокой противовоспалительной и анальгетической активностью, из которых наиболее перспективными для углубленных фармакологических исследований, являются 4-амино-3-[0-(п-толуилацетил)]-фуразанкарбоксамидоксим, 2-метоксикарбонилфениламиды и ß-ациламино- и ß-фе-нилсульфонилэтиламиды 4-арил-2,4-диоксобутановых кислот.

Основное содержание диссертации опубликовано в работах:

1. A.c. 1804061 (СССР). 4-Амино-3-[0-(п-голуилацетил)]фуразанкарбоксамидок-сим, проявляющий противовоспалительную активность / Ю.С. Андрейчиков, Д. Д. Некрасов, Р. Р. Махмудов и др. - Публикация в открытой печати запрещена. -1992.

2. Милютин A.B., Сафонова Н.В., Махмудов P.P. и др. Синтез и биологическая активность замещенных пиперазинонов-2 // Сб. тез. Международной и 49-й научной конференции проф.-препод, состава ПГФИ. -Пермь.- 1993.-С. 101-102.

3. Некрасов Д. Д., Андрейчиков Ю.С., Чиж В. Г., Махмудов P.P. О-ароил-пирувоил- и О-ароилацетилоксимы: синтез и исследование биологической активности. // Хим.фарм.ж., - 1994. - № 4. - С. 30-34.

4. Мшпотин А. В., Сафонова Н. В., Махмудов Р. Р. и др. Синтез и биологическая активность 3-ацилметилензамещенных 2-пиперазинонов // Хим. фарм. журн. - 1994. -№ 12. - С. 37-39.

5. Милютин А. В., Сафонова Н. В., Махмудов Р. Р. и др. Синтез и биологическая активность 3-арошшетилензамещенных 1-метил(фенил)пиперазин-2-онов. // Хим. фарм. журн. -1996. - № 3. - С .42-44.

6. Милютин А. В., Амирова Л. Р., Махмудов Р. Р и др. Синтез и биологическая активность замещенных пиридиламидов ароилпировиноградных кислот // Хим. фарм. журн.-1996.5.-С. 47-49.

7. Милютин А. В., Махмудов Р. Р., Андрейчиков Ю.С. и др. Поиск биологически активных соединений в ряду ß-ацетиламино- и ß-арилсульфаминоэтиламидов ароилпировиноградных кислот // Хим. фарм. журн. - 1996. - № 6. - С. 20-22.

8. Пат. 2067579 РФ, МКИ С 07 Д 241/08; А 61 К 31/495. 3-(2'-Нафтоилметш1ен)-пиперазинон-2 и 1-К-фенил-3-фенацилиденпиперазинон-2, проявляющие противовоспалительную активность / А. В. Милютин, Н. В. Сафонова, Р. Р. Махмудов и др. (РФ) - № 94037754/04; Заявлено 07.10.94. - Опубл. 10.10.96., Бюл.№ 28.

9. Милютин А. В., Сафонова Н. В., Махмудов P.P. и др. Синтез потенциально биологически активных производных ароилпировиноградных кислот в реакциях с гидразидами уксусной и трифторуксусной кислот // Перм. фарм. акад. - Пермь, 1996. - 7 с. - Деп. в ВИНИТИ. 16.07.96., № 2386. - В 96.

10. Милютин А. В., Сафонова Н. В., Махмудов Р. Р. и др. Синтез, свойства и биологическая активность р-(о-окси- и м-оксибензоил)гидразидов ароилпировиноградных кислот // Перм. фарм. акад. - Пермь. - 1995. - 7 с. - Деп. в ВИНИТИ

25.01.96. -Ks 305, -В 96.

11. Амирова JI. Р., Милютин А. В., Махмудов Р. Р. и др. Поиск новых фармакологически активных соединений в ряду пиридиламидов ароилпировиноградных кислот // Актуальные вопросы медицины: Сб. научн. статей. - Москва, 1994. - Ч. 2. -С. 146.

12. Милютин А. В., Сафонова Н. В., Махмудов Р. Р. и др. Синтез 1-бензил-З-фена-цилидензамещенных пиперазин-2-онов II VIII Международная конференция по хим. реактивам. «Реакгив-95»: Тез. дохл. -Уфа-Москва. - 1995. - С. 98.

13. Милютин А. В., Сафонова Н. В., Махмудов Р. Р. Поиск биологически активных соединений в ряду замещенных пиперазинонов-2 // Межвуз. сб. науч. тр. Актуальные вопросы фармации. - Тюмень. - 1995. - С. 70.

14. Пидэмский Е. Л., Махмудов Р. Р., Тульбович Г. А. Выявление антилростаг-ландиновой активности с использованием арахидоновой кислоты - новый тест для скрининга и изучения механизма действия флоголитиков //1 съезд Российского научного общества фармакологов «Фундаментальные, исследования как основа создания лекарственных средств». - Тез. докл. - Москва-Волгоград. - 1995. - С. 334.

15. Милютин А. В., Сафонова Н .В., Махмудов Р. Р. и др. Метод модификации структуры молекул с целью поиска физиологически активных соединений в ряду 2-пиперазинона // Второй Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». Тез. докл. - М., - 1995. - С. 17.

16. Милютин А. В., Амирова JL Р., Махмудов Р. Р. и др. Анальгетическая и противовоспалительная активность 2-замещенных ß-ароилпирувоилгидразидов цинхо-ниновой кислоты // Третий Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». - М., - 1996. - С. 36.

17. Милютин А. В., Амирова Л. Р., Махмудов Р. Р. и др. Анальгетическая и противовоспалительная активность 2-тиазолиламидов ароилпировиноградных кислот // Третий Российский национальный конгресс «Человек и лекарство». -М., -1996. -С. 36.

18. Махмудов P.P., Милютин A.B., Авдрейчиков Ю.С. и др. Противовоспалительная и анальгетическая активность ß-ацетиламино- и ß-арилсульфамино-этиламидов ароилпировиноградных кислот // Международная конф. «Перспективы развития Естественных наук на Западном Урале». - Пермь. - 1996. - Том 1. - С.43.

19. Махмудов Р. Р., Милютин А. В., Авдрейчиков Ю. С. и др. Потенциально биологически активные нафтиламиды ароилпировиноградных кислот // Международная конф. «Перспективы развития Естественных наук на Западном Урале». -Пермь. - 1996,-Том 1.-С. 44. __