Автореферат и диссертация по медицине (14.00.30) на тему:Внутривидовое типирование кампилобактеров как элемент эпидемиологического надзора за кампилобактериозом

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ СССР ЦЕНТРАЛЬНЫЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭПИДЕМИОЛОГИИ

На правах рукописи

МИНАЕВА Наталья Захаровна

Внутривидовое типирование кампилобактеров как элемент эпидемиологического надзора за кампилобактериозом

14.00.30 — Эпидемиология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Москва — 1992

Работа выполнена в Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии Министерства здравоохранения СССР.

Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор ЧЕРКАССКИЙ Б. Л.; доктор медицинских наук, профессор АНДРЕЕВА 3. М.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор СОЛОДОВНИКОВ Ю. П.; доктор медицинских наук, профессор АКАТОВ А. К.

Ведущая организация — Киевский НИИ эпидемиологии и инфекционных болезней им. Л. В. Громашевского. ^^

Защита состоится « 1992 г. в ¿Г ча-

сов на заседании специализированного совета Д 074.19.01 при Центральном научно-исследовательском институте эпидемиологии Минздрава СССР (111123, Москва, ул. Новогиреевская, д. 3 а).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ЦНИИЭ Минздрава СССР.

Автореферат разослан

Ученый, секратарь

специализированного совета кандидат медицинских наук М. Н. Пименова

Проблема кампилобактериоза у дюдей во многих странах мира остается актуальной свше 20 лет( J.P.:Butzler,M.B.Skirxovj,l984). Данйая инфекция заняла одно из ведущих мест в этиологической структуре острых лгаечных инфекций. В результате в большинстве регионов показатели заболеваемости дампкяобакгврнозоы превысили показатели заболеваемости сашяжеллеаом и дизентерией«За рубекои в целях соверденстЕования эпидемиологического-обследования и анализа широко используют методы внутривидовой дифференциации возбудителей (эпвдемиодогическое маркирование), что позволяет более полно кзуад^зшщегмологкз данной инфекции ( н.Ыог, 1984; P.Eüegraua, 1987; J.G.2cx, 19S9 ).

В Советской Соозе изучение пробяеглы кампилобактериоза качалось в последние 7-3 лет. Удалось установить удельккй вес этой инфекции в криологической структуре ОКИ, которой зарыфуе? в за-вйскиосуи о? рогагяа и контингента обследуемых лиц от 1,7 до-.25,0$ СЛ.Б.Хазекгои с соалт., 1986 г., Т.Б.Сафоноза с coas?., 1Ш7 г., Д.В.Гореяоэ, IS9 г.). К началу настояаей работы практически не изучалась одна из сторон биологической основы эпидемического процесса при ванпияобактеркозе, именно биологические свойства циркулирующих штаммов возбудителей. Не били разработаны критерии эпидемиологического маркирования каыпилобактеров в целях развития и совершенствования эпидемиологического надзора за этой инфекцией.

С учетом йзложенкого весьма актуальным для нашей страш направлением научных исследований является комплексное изучение биологических свойств возбудителей-яа(.!Лшгоб&ктерйоза, что в конечном итоге позволит уточнить эпидеыиояогячвекие особенности этой кнфеяции в нашей стране и будет способствовать рациональному проведении профилактических и противоэпидемических мероприятий.

Цель к .задачи исследования. Далью работ язкяось: на основа комплексного изучений биологических мойств гермофильшк кампшга-бактеров и их экологии разработать схему *аденгифигации и эпидемиологического маркирования камдклобактарсв для совершенствования эпидемиологического надзора за кшочным кашилобактернозом.

Исходя из цели работа, определена следующие основные задачи:

1. Изучить наиболее стабильные культурально-биохимические свойства термофильных кашшлобактеров.

2. Провести серологическое типкрование -штаммов термофильных кампилобактероз.

3. Охарактеризовать чувствительность термофильных кампияо-бактеров к лекарственным препаратам.

4. Разработать оптимальную комплексную схему внутривздового минирования (эпидемиологического маркирования) и изучить на ее основе некоторые-экологические аспекты эпидемиологии кишечного кам-пшшбактериоза. " ■

* 5. Апробировать значимость предложенных эпидемиологических маркеров на штамма^ термофильных каапилобактеров, выделенных при различных эпидемических ситуациях.

Научная новизна. Впервые в нашей стране на основе комплексной схемы внутривидового типирования предложен набор эпидемиологических маркеров термофильных кадшидобахтеров, обеспечивавших совершенствование эпидемиологического надзора за этой инфекцией.

~ Впервые в нашей стране предложена схема биохимического гипирования термофильных кашшлобактеров.

- Впервые охарактеризована чувствительность циркулирующих в нашей стране штаммов термофильных кампилобактероз к антибактериальным препаратам, установлен рост числа резистентных шташов, а

такяе географическая неоднородность штаммов по этому признаку; впервые на территории нашей страны обнаружены штаммы с.зедина, резистенткке к талидиксовой кислоте, что имеет дифференциально--диагностическуя ценность.

- Впервые определены доминирующие био- и сероварианты кампи-лобактеров» распространенных ка определенных территориях страны.

- Впервые проведена сравнительная оценка наиболее распространенных схем типирования термофильных кашшлобактеров и предложена наиболее рациональная схема их дифференциации иидентификаций.

Практическая ценность работы. Усовершенствована общепринятая схема вденпфиации термофильных кампилобактеров.

Различия в биологических свойствах пташов термофильных кампилобактеров позволили создать набор эпвдекиологячесяих иаркеров в целях покоди практически« элздениологам в раетйЬровке случаев вагазклсбакториоза у людей.

С цальэ установления одного из основных эпидемиологических маркеров пталаов возбудителей нампилобеятеркоза обоснована необходимость производства антительного диагностического набора для проведена серологического типирозания термофильных кампшгобактеров.

Полученше данные о чувствительности термофильных кампилобактеров к лекарственным препаратам являются теоретическим обоснованием необходимости организации и проведения систематического медицинского надзора за резистентностью к лекарственным препаратам циску-лиругаих итаммов возбудителей камшлобактериоаа с целью возможного предупреждения формирования 1нс полирезистентных вариантов.

При проведении гпвдеииодсгичеекого надзора за каишшобахтери-озо.ч обоснована необходимость применения кошхяеяса гпидеаиолсгже-ских гдаркеров щт&шов термофильных кашилобактероэ.

Внедрение полученных .результатов.Результаты проведенной ра-

бога кашли отражение в Инструкции по клинкчгской и лабораторной диагностике кампилобактерноза» утзарзденкоЯ Ю СССР в 1239 г.; Информационном письме "Эпидемиология, клиника и лабораторная диагностика кампилобактериоза", утвержденном МЗ СССР в 1989 г.; Информационном письме "Кампилобактериозы, пути их распространения, про-филактша и методы исследования", утвержденном Ш Армянской ССР в 1989 г.; Методических рекомендациях по лабораторной диагностике и эпидемиологии кампилобактерноза, утвержденных МЗ Казахской ССР в 1990 г.; Информационной письме "Эпидемиология, клиника, бактериологическая диагностика, лечение и профилактика кашилобактери-оза", утвержденном Гор. CSG г.Москва в 1288 г.

Апробация работ». Основные иатеркалы диссертации доложены и обсуждены на: Международной конференции по проблема« зооноэов (Брно; ЧОЗР, ÏSB8) ; Всесоюзном семинаре, посвященном 90-летш З.В.Ерыольевой. (Ыосква, I96Q); ХУШ Всесоюзном съезде, аикробиоло-гов, эпидемиологов н паразитологов. (Алма-Ата, 1Й39) • '4-х Всесоюзных' конференциях (Ыосгва,'1988; Львов, 1Ш8; Новосибирск, I9B9; Москва, 1990), 4-х Республиканских съездах эпидемиологов, микробиологов и инфекционистов (Таллин, 1987; Ташкент, 1987; Алушта,. -1990; Якутск, 1990); заседании московского городского общества . микробиологов, эпидемиологов и паразитологов (Москва, 1988); заседании московского городского общества детских инфекционистов. (Москва, 1989); научно-практичесайаГконференциях молодых ученых (Москва, 1988; Ростов-на-Дону, 1969).

Диссертационная работа апробирована на апробационной комиссия Центрального научно-исследовательского института эпидемиологии Минздрава СССР 9 октября Ï99I г.

Публикаций. Основное содержание диссертации отражено в 38 опубликованных научных статьях.

Структура и объем работы. Диссертация изложена на 16В листах машинописи и состоят из введения, обзора литературы, о глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованной литературу» Работа иллюстрирована 5 рисунками и 30 таблицами. Библиография вклвчает 229 источников, в том числе 44 отечественных и 185 иностранных авторов.

Собственные исследования

Материалы и методы исследования. Решение поставленных в работе задач осуществлялось комплексно с применением микробиологических, эпидемиологических и статистических методов. Изучено 695 штаммов термофильных кампилобактеров, выделенных из различных источников н ври -разных эпидемических ситуациях на 6 территориях Советского Ссвза в период с 1965 по 1990 гг. В числе исследованных щгашов - 235 культур изолированных от людей; 33 - выделенных от-животных (врупный рогатьй скот, свиньи, грызуны, экзотические животные - обезьяны, полуобезьяны, барсы, кенгуру); 336 полученных от птиц (куры, цесарки, дикие птицы - вороны, голуби, воробьи, лебеди, утки); 92 штамма изолированных из объектов окружающей среда (вода открытых водоемов, сточная жидкость, смывы с оборудования по ходу технологического процесса на птице-перерабатываших комбинатах). Территории, на которых проводилось исследование,подбирались с учетом принадлежности к различным климато-географичееким зонам (г.Москва и Московская область, г.Вологда, г.Астрахань, г.Ереван, г.Алма-Ата, г.Самарканд).

Материалами для эпидемиологических обобщений сяуаили данные эпидемиологического обследования 256 очагов кампилобакгериоза у людей и животных, данные изучения двух вспышек этой инфекции, а также паспорта шташов кампилобактеров, выделенных в различных

;

регионах страны.

Для установления возможных источников, факторов и путей передачи возбудителей каышшобактвриоза проведено обследование 185 животных (домашних и диких, в том числе грызунов) и диких городских птиц (г.Москаа, г.Ереван); 973 пробы пищевых продуктов животного происхождения и 18? проб воды из открытых водоемов (пруда, реки), а.также 539 лиц, общавшихся с больными кампилобахтериозом.

В ряде экспериментов в качестве контроля использовались эталонные штаммы кампообактеров: ССМ 6214 - C.jejuni.-M 457 - Z c.jejuai получены из чехословацкой коллекции микроорганизмов в г.Брно в I9B5 г.); » 602 - C.jejunis » 1728 / MB 25423 -C.lariâia; » Ш -C.jertuni;- & 7502 / ВС 4964 C.jeduai (из лаборатории Института Пастера, г.Оттава, Канада).

Штаммы каыпилобактарэв хранили в жидкой глицериново-пептонной среде при - У5°С.

Исследование нативного материал0, на присутствие кампилобакте-ров," а также установление родовой и годовой принадлежности выделенных культур проводили с помощью методов, вошедших в разработанную нами "Инструкции по клинической и лабораторной диагностике -каыпидобахтериоза" (» 15-6/28 утверждена 21 ноября IS69 г.).

С цельо поиска наиболее информативных и-стабильных признаков, позволяющих проводить внутривидовую дифференциацию кампилобакте-ров, была изучена 21 физиолого-биохимическая характеристика штаммов, в том числе 7 тестоа выполнялись по модифицированным нами методикам.

Серологическое типирование проводилось по двум схемам: мевду-. народной схеме н.Lier и модифицированной нами чешской схеме. Для серотипирования по схеме H.Uor использовали коммерческий набор антисывороток, выпускаемых фирмой Sopar-Biochera (Бельгия), вклю-

Чаший: 4 поливалентных сыворотки, 25 моновалентных неадсорбиро-йанных и 25 соответствующих им моноспецифических адсорбированных ант«сывороток. Серотипирование по модифицированной чешской схеме Осуществляли с помощьп созданного совместно со специалистами

диагностического набора, содержащего 2В антисывороток. Разработка схемы проводилас! в рамках целевого проекта "Тест система для серологической идентификации штаммов Сатру1оЪв<^ег ¿еЗи~ е±", выполнение которого было возложено на сотрудников Института гигиены и эпидемиологии (ИГЭ), г.Прага (ЧСЙ?) пЦШИВ Минздрава СССР, г.Москва (лаборатория зоонозов). Уне имеющаяся схема в результате дополнена 3 антисыворотками к штаммам с.^еЗип!» ранее на встречавшимся на территории ЧССР. Кроме того, нами осуаествле-на мод^икацйя, схемы серогшшрования: приготовлено б поливалентных сывороток.

Изучена чувствительность кампилобактеров я 22 антибактери- -альннм препаратам различных химических груш. В их числе лая-' тамные антибиотики; тетрациклин; аминогликозеды; макролвды; полипептиды; препараты нитрофуранового ряда; а также антибиотики, Принадлежащие к самостоятельным группам: хлораыфеникол, фуаидин, ванкомицин, метронвдазол, налкдиксовая кислота. В работе применялся метод двукратного разведения препаратов в плотной питательной среде. Резистентным штамм считался при отсутствии видимой задержки роста в присутствии антибактериального препарата в среде а пороговой концентрации. Минимальные подавляющие концентрации лец карственных средств.установлены для 200 штаммов кампилобактеров, а диапазонах концентраций препаратов а питательной среде; от 4100,0 до 0,06 шг/шг.

Активность лекарственных препаратов з отношении кампилобак-

•геров оценивали по таким ясказатеяям, как МШ (минимальная концентрация антимикробного средства, яри которой подавляется рост бактерий), MVKgQ и Шдф (концентрация препарата, подавляющая рост 50 и 90$ штаммов соответственно).

Ера статистической обработке полученных результатов были, использованы метода вариационного и корреляционного анализов с определением относительных величин, вычислением медианы и мода, коэффициента корреляции.

Результаты собственных исследований

У всех использованных в работе штаммов проведено определение родовой и ведовой принадлежности по культурально-морфологи-ческим и биохимическим свойствам в соответствии с предложенной нами оптимальной схемой идентификации возбудителей кишечного кампилобахтериоза.

Установлено, что изученные штаммы относились к видам: С.jejuni (72,4£), C.coli (23,9£) и C.Iaridls (3,7^). С.jejuni обнаружены нами практически во всех объектах исследования.за исключением диких городских птиц, c.coli распространены у больных людей, птиц, выводе открытых водоемов и у животных^ причем к этому виду принадлежали все штаммы, полученные от свиней. Наиболее широкая циркуляция C.laridia отмечалась среди диких птиц, кроме того штаммы этого вида встречались у людей (5,0%) и а воде открытых водоемов (14%).

Анализ видового пейзажа кашшобактеров, выделенных на раз*

ных территориях, позволил предположить существование географической неравномерности в распространении кампилобактеров различных ведов. Так, все штаммы, воделенные в Самарканде, относились к виду с. jejuni, as Алма-Ате и Астрахани отмечался значительный

удельный вес с,coll среди других видов камлилобактеров (32,3 и 35,355 соответственно).

В результате изучения ферментативных характеристик были отобраны наиболее стабильные и информативные признаки, дозволяющие проводить внутривидовую дифференциацию камлилобактеров. В итоге впервые в СССР предложена схема биохимического типирова-ния термофильных Еймпялобактеров, насчитывавшая 32 бювара, з основу которой положены комбинации результатов по 5 ферментативным тестам: гидролиз гшшурата натрия, Твина 40, Теина 80, дезок-с«рибонуклеиновой кислоты (ДНК) и продукция щелочной фосфатазы.

Способность к гидролизу ДНК отмечалась у 32,3$ шташов с, jejuni, у 42,4$ оташаов C.coli и 2L,J$ -с.laxidia. "Активность щелочной фосфатдзы установлена у 71,9; 22,1 и 43, 55? штаммов С.Jejuni, с,coli и С»laxiäis соответственно. Твин 40 я 60 гидролизозаяи 70,2 и 37,шташов С.jejuni, ВОД и 60,855 штаммов C.coli соответственно. Способность к гидролизу Твина 40 отмечалась у Т3$ шташов c.iaridis, Твин SO штаммы этого вида не раскепляли. Во даннш литературы, у шташов c.iaridis перечисленные свойства ранее не изучались, кроме'того ранее не проводился анализ результатов изучения ферментативных свойств штаммов с. coli отдельно от a.jejuni.

С помощью предложенной схемы установлена циркуляция на изученных территориях 28 биоваров камлилобактеров. Все штаммы С.jejuni удалось подразделить на 15 биоваров, c.coli - на 12 и c.laxidis - на 5 биоваров. Причем биовары 20, 24, 30 и 32 встречались как среди нтаммов c.coli, так и среди c.iaridis.. Доминирующими являлись бковары: 5, 6, 25, 8 , 2, 30 ( 56,2$), а ведущим - биойар 5 (12,1$).

Мо^го-средпалонкгь существование географической крредоомер-

ностив распространении биоваров. Так, в Москве и Иоскбасяой области в числе доминирующих получили распространение 5, .25; биова-ры в Алма-Ате - б, 8, 10; в Ереване - 4, 31;в Самарканде - биовар I; в Астрахани - биовар прамичес*и не встречающиеся на других территориях. Штаммы, циркулирующие в различных объектах в пределах одного региона, в основной относились к одним и тем же бюварам.

Преимуществами предложенной нами впервые в нашей стране схемы биотилирования являются: возможность более тонкое, чем с помощью имевшихся схем дифференциации возбудителей килечного каи-пияобактериоза, Применение отечбственшх реагентов и сред, что обеспечивает доступность и экономическую выгоду» а также простота постановки тестов за счет их модификации, позволяющая применять методику типирования в практических лабораториях страны.

Оба»известно, что метод серологического типирования возбудителей инфекционных заболеваний являптся наиболее специфичным, и информативным. В навей странеяе был разработан ДО настоящего времени высожодшжршинантмй метод» позволяющим проводить' уикфюрфо-Ванную дифференциацию термофильных кампилобаятеров по сёр<»Ш?1Мв-ским свойствам. С пощщлшдафицированно* чешской схемы -серологического титрования стало возможным проводить типирование 82у# итаммов c.jeiunl и c»eoli, тогда как C.larldia не удалось подразделить на серовары.

Установлено, что на изученных территориях доминировали камй* лобактеры сероваров. 7,16,5,8,10, их доля 46,^.Наиболее распространенными являлись серовары 7 и 16 - которые составляли 27,556 от всех Изученных штаммов. В то же время i 4Qfi?,no данным a.Kah-lich et ai., 1989 г., Превалировали йеровары 1,9,2 и 3 (45,8?). штаммы с двумя или тремя антигенными детерминантами встречались

в изученных регионах нашей страны в 5,9? случаев, причем наиболее часто - серовары 2/7 и 22/24.

С помощью серогипирования по вышеназванной схеме установлены различия в сероваровом пейзажа кампилобактеров, циркулирующих в различных объектах на разных территориях. Так, в числе доминирующих в Алма-Ате широко распространены серовары 26,27,25; в Ереване - серовары 3,14, 19; в Самарканде - серовар 5; а Москве и Московской области - 8,10,11. Таким образом, существую? определенные особенности географического распространения кампилобактеров5различных сероваров.

Сопоставление сероварового пейзажа кампилобактеров, изолированных из различных объектов, показало,что мохе« наблюдаться практически полное совпадение доминирующих сероваров кампилобактеров, выделенных у людей и кур,что можно проследить на примере штаммов из Алма-Аты (коэффициент корреляции О,ЗД,005). я,наоборот, подобного явления может не наблюдаться (на примере штаммов из Московской области).

Анализ данных по серотипированию кампилобактеров ,вцделенвых в различные года на одной и той же территории (на примере Москвы и Московской области) позволил впервые проследить смену сероварового пейзажа возбудителей.Так, в 1966-1968 гг. доминировали серовары - 16,7,5,1; а в 19В9и1990 гг. - 7,б,П,2.

В то же время установлено, что с помощью модифицированной чешской схемы не удалось типироэать подавляющее большинство культур из Астрахани, процент нетипирующихся, среди штампов изолированных в Ереване достиг 21,8?, в Самарканда - 21,££, в Алма-Ате - 14.5& в то же время в Москве и Московской области удельный вес нетипирующихся штаммов составил лишь 1,855.

Таким образом, впервые проведенное широкомасштабное изучение

серологических свойств кашшлобавтеров, циркулируэщах на территории нашей страны, показало принципиальную возможность использования предложенной модифицированной чешской схемы для внутривидовой дифференциации кампилобактеров и изучения их экологии. Однако было показано, что схема нуждается в доработке, которая позволит проводить типироаание с.laridle, а таяже устанавливать серовары у нетширушихся в настоящее время штаммов С» jejuni и С.coll.

" Проведенное впервые а Советском Союзе изучение серологических свойств кампилобактеров по кеидународной схеме H.Lior дало возможность сравнить сзрсзарсвьй пейзаж кампилобактеров, циркулирующих в нашей стране,о распространением сероваров с.jejuni,С.coli и c.laxiâis в странах мира. Серовары были установлены у 96,0% ¡яташов C.3ejmi, 84,- С.coli и у 76,- C.lariâis»

В число доминирующих вошли серовары Lio II,lio 29,Mo 5,lio 20, Lio 4, bio .55 (65,Oí штаммов), при этом серовар Ио 4, по мнению исследователей из различных стран (».Ваг et al., 1989, H.Lior, 1964; p.Megrauö, : 1967) получили повсеместное распространение.

Число патинирующихся культур по схема H.Lior достигло в среднем 5,6ÇÎ, среди штаммов,ввделенных в Ыоскве и Московской области, эта величина составила -1,758,тогда как в АлшгАте - 10,что одна- • ко нэ превышает установленное и. Йог среднее число нетияирувщкхся культур .В то же время штаммы,выделенные в Астрахани, удалось типи-ровать только в 60,055 случаев.

Осложняла проведение серотипироаания полиагглютинабельность штаммов кампилобактеров,причем более высокая, чем при использовании модифицированной чешской схемы <17,6 и 7,0% соответственно).

Сопоставление данных серотипирования по двум схемам было проведано впервые, в результате не удалось обнаружить точного соог-

-зетстапя-серозаровг,- Однако несомненно существует-определенная антигенная взаимосвязь1 между некоторыми сероварами по схемам: Н.Мог и модифицированной чешской.

Таким образом, показана возможность использования модифицированной чешской схемы,в основном не уступающей по своим характеристикам иеадународной схеме Й.Ыог, для внутривидовой дифференциации с.^езип/аозд, циркулирующих на Европейской территории нашей страны.

Учитывая предпочтительность комплексного подхода к'зыбору методов внутривидовой дифференциации возбудителей,а также определенные трудности, возникающие при- серологическом типировании кампилобактеров» затрудняющее маркирование всех изучаемых штаммов, представлялось целесообразным охарактеризовать лекарственную резистентность кампилобактеров.

Анализ данных об устойчивости к 22 лекарственным препаратам 605 штаммов показал,- что все они характеризовались резистентно-стыз к цефалотину,- рнфашицину, колисгину, яанхомщхну и были чувствительны к: гентамицику,. йГорамфекикояу и солафуру»

Установлено,что доля штаыйбв,резистентных к некоторым препаратам, оставалась стабильной среди кампилобактеров различного происхождения с. небольшой вариабельностью показателей в зависимости от региона выделения штаммов, гак усТойчйвойть к вбйицилляну отмечалась у 89,8-92,036 культур* к фузидину - у 72,0 - 76,5?, бацитраци-ну - у 90,0 - 99,0%. У 1,5^ штаммов отмечалась резистентность к фуразолидону,причем все они были выделены у людей.По данным литературы, последнее явление чрезвычайно редкое,хотя устойчивость к данному препарату встречается» по данным А.ЯеЪег е* а1,1984 г., у 10,0-15,0? штаммов, полученных от свиней.

Процент штаммов кампилобактеров резистентных к метронидазолу,

азлоцшглину и полиминсину Б,на всех изученных территориях практически одинаковый и изменялся в пределах отдельно взятой территории исключительно в зависимости от источкшавццеления.Таким образом, наибольиая вариабельность данных получена в отношении 7 препаратов : тетрациклина .ампициллина .карбенициллина,стрептомицина, канамщина.ааикаина и еритромицина;процент штаммов резистентных к ним варьирует как в зависимости от источника выделения,так и от региона,где проводилось исследование, Ос обо необходимо отметить, что впервые нами обнаружен? штаммы кашшобактероа резистентные к амикацину,число их достигло 12,Sí,

Установлено,что резистентность к карбеняциллину не встречалась средиштаммов,выделенных у птиц:среди последних преобладала устойчивость к ампициллину (62,3$ втаммов) и тетрациклину<54,35?) » Среди штаммов .изолированных из вода,превалировала резистентность к ампициллину (63,3$} »Культуры,ввделешше от людей и у животных, характеризовались широкий разнообразием детерминант резистентности.

Можно предположить,что на каждой из изученных территория получили преимущественное распространение нтаммы кампялобахтеров с определенный набором детерминант резистентности.Так,штаммы,ввде-ленные в Ереване,характеризовались в большинстве случаев устойчивостью х тетрациклину и эритромицину (87,3 и 74,штаммов соответственно)^ Алма-Ате - а канаыицину,ампициллину,стрептомицину к амикацину (97,6; 89,8; 70,1; и 40,& штаммов соответственно), в Астрахани - IOOÍ резистентность к ампициллину.Среди штаммов,выделенных в Москве и Московской области отмечался наиболее высокий удельный вес резистентных к карбенициллину (22,8%) и наиболее низкий - устойчивых к амикацину (4,53?) ,канамицину (14,и ампициллину (30,3%).

На примере штаммов из двух регионов страны показано увеличе- •

низ частоты ффкуляцикштамиов кампилобактеров резистентных* некоторым антибиотикам.В Москве и Московской области набявдался в 1969-1990 гг. по сравнении с 1966-1968 гг. рост числа штаммов, устойчивых к ампициллину (в 4,7 раза),канамицину.карбеницидлину, азлоциллину (в 3,2-3,1 раэа),яолимдасину Б (а 2,6) и амихацину (в 2,3 раза) и некоторое снижениэ резистентности к тетрациклину (а 1,5 раза).Значительный рост числа хампклобактеров.устойчивых к стрептомицину,в 1969-1990 гг.отмечался в Алма-Ате (в 3,1 раза по сравнению о 1988-1939 гг.) .Аналогичное явление можно проследить и на штампах, изолированных в данных регионах из различных источни-. ¡£08(у людей,кур,из воды открытых водоемов). До настоящего времени а литературе имелись лишь единичные сообщения об увеличении в последние годы частоты обнаружения штаммов,резистентности•к лекарственный препаратам {З.КиЪааако,19В6; б.Кааеиеь! st а1.,1983).

Анализ устойчивости камсилобактеров по числу детерминант резистентности показал,что ктаыш,выделенные в Алма-Ате,хараятери-эоаалкёь значительно большим число детерминант устойчивости ¿91,1% каипилбб&ктерЬй3 были резистентны в 3-6 из 7 избранных препаратов. Штаммы из Самарканда,Астрахани,Москвы и Московской области в -основном были устойчивы к 1-3 лекарственным препаратам (й2,4;66,?{ 70,55С штаммов соответственно) .При этом резистентность, и & препаратам ».94,6$ й&мечалас* среди; итймвово* сельскохоэяй-с'Й&екнм* Слой* (кур)

Впервые й практике изучений яашшлобакгериоза в СССР нами определены фенотипы резистентности еампилобактеров.циркулирующих на территории страна по 7 детерминантам устойчивости.Общее число фенотипов достигло 56,в число доаинируювдх оказались спектры АрТсКпЗ-бг Еч Ам1с» Тс; АрКп; Ар; АрТсЕч; АрТсКп, которые составили 39,3$ от числа изученных штаммов.Сопоставление фенотипов ре-

зистектностк кашюгобактеров.доыииирукжих на различных территориях, еще раз подтвердило предположение о преимущественной циркуляции в пределах отдельной географической местности штаммов кам-пилобактеров с определенным фенотипом. Одновременно обращает«вним; ние сходство антибиотикограш штаммов,вдаеяенных из различных источников на отдельных территория».

Анализ данных о мшшальшзсддаг^б^угарх жонценхрациях{МШ) препаратов в отношении 200 штаммов «зд^вдф$да»вроа|вьщеленных на различных территориях страны,показал 'сущствование бимодального распределения значений Ш£ большинства антибактериальных препаратов. Обращает внимание высокий уровень значений МИК препаратов в отношении штаммов,резистентных к амикацицу к метронидазолу: Ме и Мо Ш£ амикацина и метронвдазола - 256,0 мкг/мл; для чувствительных штаммов Ме и ¡&> ЫИК амикацина - 4,0 шсг/мл, иетрошщазола - 16,0 мкг/мл. Кроме того,установлены довольно значительные предв' лы Еолебаныя МИК некоторых препаратов;в частности,по 6 препаратам для резистентных штаммов кампилобактеров и по 9 препаратам - для чувегвительных.Полученше данные дают возможность предполагать о незавершенности процесса формирования лекарственной устойчивости кампилобактеров и существования на территории страны двух* популяций камшиобактеров, различающихся по устойчивости к антибактериальным препаратам.

Необходимо подчеркнуть,что впервые в СССР нам удалось обнаружить 6,0/5 штаммов с.^еЗииЗ., резистентных к налидиксовой кислоте, причем эта штаммы были выделены от людей и из воды открытых

л. ■ • *

водоемов.'Гаким образом,на территории нашей страны получили распространение втаммы с.ЗеЗип! вариант Над, й.

Б итоге результаты внутривидового типкрования штаммов канпи-лобактеров позволили -предложить досгатсчно -дкекршшнанткуи • скс?е~

му-маркирования-возбудителей,включающую установление сербваровой принадлежности,спектров резистентности к 7 лекарственным препаратам (тетрациклину,эритромицину,канамицину.ампициллину,стрептомицину,амикацину,карбенициллиду) и в качестве дополнительного маркера - биоваровой принадлежности по 5 признакам.

Как показали данные типирования с помощыз предложенного набора эпидемиологических маркеров каыпилобактеров,выделенных при различных эпидемических ситуациях,изучение только одного из параметров,как это нередко принято в зарубежной практике,в некоторых случаях не позволяло достоверно точно установить тождество штаммов и могло привести к ошибочным выводам,противоречащим данным эпидемиологического обследования.Необходимость комплексного подхода к ти-пированию возбудителей показана в работах R.M.Roop et al,1984; M.A.Xarmali et al.,1985 и др.авторов.Данный прием позволял установить тождество штаммов и таким образом подтвердить эпидемиологические связи между ними.

Использование комплексной системы типирования оказало помощь в установлении конкретных источников и путей распространения возбудителей в ходе расследования вспышек и семейных очагов каыпило-бактериоза. Сопоставление фенотипических характеристик изученных штаммов помогло подтвердить роль больных животных как источников инфекцйи (обезьян) и здоровых (крыс) при расследовании вспышки и роль птиц (цыплят,кур) при распространении возбудителей кампило-бактериоза в семейных очагах.Как установлено,немаловажное значение принадлежит человеку ках источнику инфекции в семейных очагах. Так,указания на контакт с больными ОНИ в анамнезе имели 3,4% детей с кампилобактериозной инфекцией,в то же время обследование 505 человек,общавшихся с больными членами семьи а очагах кампило-бактериоза позволило у 6,555 лиц обнаружить кампилобактеры.Внутри-

видовое тидирозаше штампов подтвердило -существование эпидамиоло гических связей между детьми раннего возраста и их матерями,кото рые реализуется при несоблюдении последними элементарных гигиени ческих норм.Заслуживает внимания тот факт,что комплексное типиро ванне кампилобактеров позволило в нескольких случаях,в том числе у детей раннего возраста,установить наличие смешанной инфекции, вызванной двумя различными штаммами кампилобактеров.Подобное явление описано и в,зарубежной печати ( N.Figure, 1937).

Результаты изучения распространенности кампилобактеров у жи вотных и птиц показали,что потенциальными источниками возбудителей могут быть сельскохозяйственные животные (телята,свиньи),грь зуны (белые и серые мши),дикие городские птицы (голуби,воробьи, вороны,утки,гуси, лебеди) инфицированность которых может достига* 100,0%,а также домашние птицы (цесарки).

Учитывая данные D.Eobinsoa, 1961,о довольно низких минималг кых инфицирующих дозах кампилобактеров-для человека,можно предпе ложить,что возникновение упомянутых выше очагов и вспышки кашш-лобактериоза обусловлено активным действием бытового пути переда • Возможности пищевого пути передачи можно было проследить пс полученным .нами данным бактериологического обследования пищевых продуктов.Обсемененность кур,поступающих в торговую сеть,по наш данным,достигало 22,7%,причем в летнее время увеличивалось до 45,5£.$енотиш!чески штаммы кампилобактеров,выделенные от кур,в 42,0? случаев оказались сходными со штаммами,полученными от боЛ! Six людей, пр ожиа ающих в Москве и Московской об ласти.Наличие выс< кой степени родства штаммов и эпидемиологическая значимость кур как источников возбудителей инфекции подтверждается в роде случг ев обнаружением у людей и птиц кампилобактеров,имеющие парные ai тигенные детерминанты.

Немаловажное значение,по данным о.п;ау1Ьг «г ах, 1963, и др. в распространении хампилобактериоза имеет водный путь передачи возбудителей инфекции.Нами установлено присутствие кампилобакте-ров в 42,3-90.0? проб воды открытие водоемов,причем максимальная инфицированность воды отмечалась в реке Москва с максимальной вариабельностью фенотипов кампилобактеров.Из воды городских прудов и у больных людей (г.Москва)выделены штаммы кампилобактеров с идентичными фенотипами.Сравнение фенотипов показало,что в воде открытых водоемов г.Москвы циркулируют в основном те же штаммы кампилобактеров, что и среди людей, сельскохозяйственных птиц и животных данного региона.

Сопоставление фенотипов изученных штаммов кампилобактеров дало возможность подтвердить^ одних схучаях,существование эпидемиологических связей между курами и людьми (по данным Москвы и Московской области,Астрахани и Еревана) и возможное отсутствие подобных связей (на материалах га Алма-Аты) - в других случаях.

В то же время нами установлено,что высокодискркминантная, в принципе,система не обеспечивала дифференциации всех изучаемых штаммов,это требует внесения определенных поправок в схему типиро-вания.Результаты показали,что нуждается в совершенствовании схема серотипирования с целью создания тест-систеы, адекватных каждому "региону,где проводится исследование на, кампилобактериоз.

Таким образом, у становлена необходимость комплексного подхода к проведению эпидемиологического маркирования штаммов кампилобак-. теров и показана пригодность такого комплекса маркеров в целях усовершенствования эпидемиологического надзора за кампилобактериозом.

Выводы

I. Доказана пригодность внутривидового типирования кампилобактеров при комплексном использовании трех избранных маркеров

(сероваровой принадлежности,спектров резистентности к отдельным лекарственным препаратам и биоваровой принадлежности возбудителей) в качестве элемента эпидемиологического надзора за кампи-лобактериозом.

2. Эпидемиологическое маркирование позволило установить,что основное значение среди источников возбудителей кампилобактерио-за для человека в нашей стране клеит куры.Показана высокая активность пищевого пути передачи.Бытовой путь передачи реализуется в основном дри общении человека с инфицированными птицами и больными кампилобактериозом животными.Роль человека как источника возбудителей камшиобактериоза установлена в 6,5$ случаев,

3. Среди возбудителей кишечного кампияобактериоза,циркулирующих на территории Советского Союза,доминируют C.^ejuni (72ДЙ).Видовой пейзаж кампилобактеров на разных территориях страны своеобразен.

4. Еа.изученных территориях Советского Союза установлена циркуляция 28 биоваров кампилобактеров,при атом в 56случаев встречались шесть биоваров: 5,6,25,8,2,30.

5. Штаммы кампилобактёров,циркулирующие на территории,ряда регионов нашей страныfхарактеризуются 56 спектрами резистентности-к 7 лекарственным препаратам.Установлено существование двух популяций кампилобактеров,различающихся по устойчивости к антибактериальным препаратам.

6. По предложенной схеме установлены серовары у 92,4$ штаммов С. и С. cola, 4o,S5? циркулирующих штаммов относились к пяти сероварам(7Д6,5,8,10).По международной схеме H.Idor -оттипи-ровано 96,0% штаммов С.jejtrai.C.colí и C.laxidis, из них 65,0% отнесены к шести сероварам ( Lio П, 29, 5, 2, 4, 55).

7. В каждом из изученных регионов получили преимущественное

распространение штаммы кампилобактеров, характеризующиеся специфическим фенотипом.

Список работ,опубликованных по теме диссертации

1. Методические аспекты микробиологической диагностики кампило-бактериоза / В.И.Ыинаев,Г.И.Герок,В.Г.1уховицкий,М.А.Голови-нова,Н.Э.Александрова // Тез.докл. У Республ.съезда гигиенистов »санитарных врачей,эпедемиологов,микробиологов и инфекционистов Узбекистана.- Ташкент, 198?, - С.199-200.

2. Эпидемиологические аспекты бактериологической диагностики кампилобактериоза. /БД.Черкасский,В.И.Минаев,Н.З.Александрова и др. // Тез.докл.У Республ.съезда эпидемиологов,микробиологов, инфекционистов и гигиенистов Эстонской ССР - Таллин, IS87. - С.51-52.

3. Организация бактериологической диагности яампилобактериоза в лабораториях практических учреждений здравоохранения./В.И.Ыи-наев,В.Г.Щуховицкий,Г.И.Герок,Н.З.Александрова и др.// Тез. докл.научн.практич.'конференц. "Вопросы региональной гигиены санитарии и эпидемиологии". - £чутск,1987. - С.86-88.

4. Опыт, надзора за резервуаром возбудителей каипилобактериоза./ В.И.Минаев,Н.З.Александрова,Ю.П.Пчельников и др.// Сб.научных трудов ЦНИИЭ ЫЗ СССР "Эпидемиологический надзор за инфекционными болезнями". - M., 1987» - G. 134-138.

5. Некоторые вопросы лабораторной "Диагностики кампилобактериоза/

B.И.Минаев,Н.З.Александрова,В.Г.йуховицкий и др. // Тез.докл. П съезда гигиенистов,санитарных врачей,микробиологов,эпидемиологов и паразитологов Молдавской ССР. - Кишинев,1987.- Ч.П. -

C.317-319.

6. Разработка метода индикации кампилобактерий в питьевой воде / Ю.Г.Талаева,Н.В.Чугунихина,А.И.Дородников,В.Й.Минаев,

К.З.Алексагщрова // Тез.докл. X Всесоюзной конф."Гигиеническое изучение биологического загрязнения окружающей среды и разработка оздоровительных мероприятий". - М., 1998. -4.1. - C.III-IX2. 7. Индикация кампилобакгерий в пищевых продуктах. / В.И.Минаев, Н.З.Александрова,Ю.ШПчельниксв и др.// Там ке.-Ч.П.-С.НЗ-114.

В. Epidemiologic aspects of caapylobacteriosis in the USSR /

B. Xu Chericaaekiy.y. I. Minaec ,Xf. Z.Alexandro?s, T. I.Kuzmina//Abst. Anna.Congress Zoonoae3.-Bmo(Czschoslovakia),19S8.-P.4-14.

9. Александрова Н.З. Эпидемиологические аспекты резистентности Campylobacter к антибактериальным препаратам // Материалы Всесоюзной кок$ерещии "Эпизоотология.зшщемиология,средства диагностики,терапии и специфической профшдатикк инфекционных болезней общих дзш челрвейа и гшвотяых". - ЛьвовДШБ. -

C.414-415.

10. Минаев В.И. .Александрова В.3.Эпидемиологическая роль диких виботяых-и п|иц как резервуаров кампилобактериоза. // Там не. - С.425-426.

И. Черкасский Б.Л. .Алексаедрова Н.З.',Минаев В.И.Кампияобантериог в странах Европы. / ЩШзлвдемиологии U3 СССР. - M.,IS68. -21 с. - Деп.во ВШШИ МЗ СССР 22.05.68. $ Д-15568."

12. Александрова Н.З. ,Ь!инаев В.К.Некоторые вопросы идентификации лашилобактерий // ЦНИИэпвдемиологкк Ш СССР,М.,1989, 5 с.

- Деп. so ВНШШ Щ СССР 16.02.69 г. Р Д-Х7159.

13. Случай кацашюбактеркоза у новорожденного./ В.И.Минаез, Н.З.АлексацдроБа.Т.И.Куэьиина и др.// Лурн.шкргбиологии, эпидемиологии и иммунобиологии, - IS89, $ 3. - C.II5-II7.

14. Разработка питательной среди для вультивироэания иихроорга-

низмов .рода Сап;ру1оЬас4ег / Б.Л.Черкасски8,В.И..Иинаеэ, В.3. Александрова и др. // Яурн.гигиеш,шкробиол. и иммунологии (Прага). - 1589. - 33, 3 2. - С.Л9-222.

15. Клинико-зпидеыиологические аспекты каштелобаатериоза в Мосаве и Московской области. / Б .Л.ЧеряасскиЛ.В.И.Ыинаев.Н.З.Александрова и др. // Журн.ыикробиологии,эпидемиологии и иммунобиологии. - 1989, » 8. - С. 40—43-.

15. Камдилобактериоз: современные аспекты эпидемиологии и лабораторной диагностики в СССР. / Б.Л.Черкасский,В.И.&инаев,В.Г.Жу-ховицкий,Н.З.Минаева и др.// Материалы ХУШ съезда микробиологов, эпидемиологов и паразитологов.-Алма-Ата,Г989.-С.143-150.

17. Минаев В.й..Александрова Н.З. Экологические ниши возбудителей кампилобактериоза в свете учения о природной очаговости // Тез.докл. ХП Всесоюзной конференции по природной очаговости бояезкгй. - Новосибирск ,1989. - С.76-78.

18. Мкнаеза Е.З. Система биохимического типирования термофильных кампилобактерий и ее эпидемиологическая значимость.// Тез. докл.обл.научн.конфер.молодах уче!шх."Эпидемиология.микробиология и иммунология бактериальных и вирусных инфекций" -Ростов-на-Дону, 1989. - С.33-35.

19. Александрова Н.З.,Минаев В.И.»Горелов А.'В.Антибиотикорезистент-ность кампилобактерий и ее. эпидемиологическое значение // Антибиотики. -1990. - Т.35, »3. - С.34-36. -20. Минаева Н.З.,Черкасский Б Л.,Минаев В.И.Тест-система для типо-

' вой дифференциации термофильных каипилобактеров. // Тез.докл. Республ.конф. "Новые методы диагностики СПЩ,других вирусных и бактериальных заболеваний в практике инфекционной и противоэпидемической службы". - Алушта,1990. - С.91.

21. Минаев В.й.,Черкасский Б.Л.,Ымнаева H.3.Использование фильтров для выделения кашшлобактеров // Там es. - С.92.

22. Минаева Н.З..Черкасский БД.,Минаев B.Jf. Оригинальная тест-, система для серологической идентификации кампилобактеров. // Тез.докл.Всесовзной конферен. "Разработка и производство преп; ратов медицинской биотехнологии.-Махачкала,IS90. £ С.84.

23. Выделение кампилобактеров из воды./Ю.Г.Таяаева,А.И.Дороднико1 Н.З.Минаева и др.// Тез.докл.научн.практ.конференции "Вопрос! региональной гигиены,санитарии и эпидемиологии". - Екутск, 1990. - Вып.З. - С. 127-128.

24. Этиотродная терапия кашилобактериоза у детей. / А.В.Горалов, Н.В,Воротшцева,Н.З.Укнаева и др. // Сб.научн.трудов ЖШКИ. - 1990. - C.6I-63.

25. Лабораторная диагностика кампилобакгериоза в совреыенньа ус-ловиях./В.И.Мина^,БД.Черкасский,Н.З.Минаева и др.// 2урн. микробиологии,эпидемиологии и имууко'био логии.-1991,Р 8,-C.IS-2I.

26. Эпидемиологические аспекты кашшлобактериоза. у детей в аридной зоне / В.И.Минаэв,С.Х.Вафакулоз,Я1.П.Холкеров3Б.Л.Черкасский, Н.З.Микаеза,М.А,Гсясвинова // 2урн.микробиологии,эпидемиологии и иммунобиологии. - 1991, $ 12. - 0.25-23.

27. Факторы риска и пути передачи возбудителей кампияобактеризза на промышленных птицекомплексах / БД.Черкасский,АД.Котова,

B.Й.Ыинаев,Б.Т.Жалшбаева,Н.З.Минаева и др.// Там же. -

C.28-3I.

28. Characterization of Campylobacter jejuni strains occuring in the USSR and the Czech Republic / H.I.liotovâ,B.Alâova,D.Baua-вег, Ï. Ro ch, В. Ь» Cîierbassky,"V. I.titnaev,H. Z»Kinaefe // J.Kyg. Epidem.MicTobiol.XigBuno^» - 1951.-Vol.35,H 2.- P.209-216«

" ~ ягУбря '_,

.Поднесено к печати 23.Ci.9Z. Формат бтьшгя бОхУО I/XS Ооъеы: i,5 ¡ач.ллС^бук.л.; авттч.-азд.я. Изд. В ' Sait. S I9$2 г.

З&юграфая В4Ф