Автореферат и диссертация по медицине (14.00.30) на тему:Социальные и биологические аспекты эпидемиологии чумы

' 1 О П

„' VII

На правах рукописи

КОКУШКИН Александр Михайлович

СОЦИАЛЬНЫЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ ЭПИДЕМИОЛОГИИ ЧУМЫ

14.00.30 - эпидемиология

АВТОРЕФЕРАТ Диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Саратов, 1995

Работа выполнена в Российском научно-исследовательском противочу ном институте «Микроб» Государственного комитета санитарно-эпиде.у логического надзора Российской Федерации.

Научный консультант: доктор медицинских наук, профессор, член-корреспондент РАЕН, акг мик МАНЭБЖ А.В.Наумов.

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор,член-корресподент РАТН,

А.К. Адамов.

доктор медицинских наук, профессор А.В.Липницкий доктор медицинских наук, профессор Б.Н.Мишанькин

Ведущая организация: Центральный научно-исследовательский инсти эпидемиологии Государственного санитарно-эпидемиологического над:

Российской Федерации. Защита состоится « 22 » декабря 1995 г. в 13 ^часов на заседани Диссертационного Совета Д. 074.32.01 при Российском научно-исслед тельском противочумном институте «Микроб» Госкомсанэпиднадзора (410071,г.Саратов, ул.Университетская, 46).

С диссертацией можно ознакомиться в научной библиотеке Рос-НИП

«Микроб».

Автореферат разослан « 21 » ноября 1995 г.

Ученый Секретарь

Диссертационного Совета,

доктор биологических наук, профессор

Г.А. Корне

ВВЕДЕНИЕ

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Чума, являясь одной из наиболее шасньгх инфекционных болезнен человека, известна давно. В связи с <атастрофическими последствиями эпидемии, сведения о наиболее массовых юраженнях людей были документированы в ряде стран мира, по крайней чере с V века до нашей эры (до н.э.). Однако эпидемические проявления чумы не имевшие масштабов национального бедствия, стали находить этражение в литературных источниках лишь с VII века н.э., а сведения о проведении целенаправленных противоэпидемических мероприятий известны с конца XII - начала XIII веков. К восьмидесятым годам XIX столетня были созданы научная база и социальные условия обеспечивающие выявление и регистрацию не только вспышечных, но также групповых и спорадических случаев чумы в некоторых странах, число которых увеличилось в XX веке до 93. В этот период были разработаны все основные мероприятия по локализации и ликвидации эпидемических очагов, а также Международные санитарные правила, препятствующие межгосударственным и межконтинентальным завозам чумы.

Качественно новый взгляд на эпидемиологию чумы, возникший с конца XIX века, базировался на открытии в 1894 году Ш.Китозато и А.Иерсеном возбудителя чумы - бактерий Yersinia pestis (Lehmann, Neumann - van Loghem, 1944). С этого времени выявление новых экологических ниш возбудителя и получение данных о его взаимоотношениях с различными биотическими и абиотическими объектами, в большинстве случаев достигались с помощью лабораторных методов диагностики, совершенствование которых было связано преимущественно с прогрессом в изучении фенотипи-ческих свойств и генетической организации бактерий чумы. Так, использование бактериологического метода привело к выявлению чумы у сннантропных (А.Иерсен, 1894) и диких грызунов (П.Симон, 1898; Д.К.Заболотный 1911), а также их блох (А.Бако и С.Мартин, 1915). Полученные данные позволили Д.К.Заболотному в 1899 году предположить, а в 1912 году доказать возможность сохранения чумы в межэпидемические периоды среди диких грызунов. Более поздние исследования отечественных н зарубежных авторов привели к созданию теории природной очаговости ряда болезней, блестяще сформулированной Е.П.Павловским (1939,1940,1946). К настоящему времени, с помощью микробиологических и иммунологических методов природные очаги чумы выявлены в 46 странах мира, где обнаружены более 250 видов теплокровных животных - носителей ( основных, второстепенных, случайных) и 30 видов блох - переносчиков (активных и малоактивных) чумы. Полученные данные явились основой для создания системы профилактики чумы в природных очагах этой инфекции, проявившей свою

высокую эффективность в ряде стран , включая СНГ.

Обнаружение одной родо- и двух видоспецнфнческнх плазмид, код] ющих почти все известные детерминанты вирулентности чумного мпкро Ю.А.Попов с соавт., 1980; D.M. Ferber, R.R. Brubaker,1981; R.Ben-Gur A.Shafferman 1981; О.А.Проценко с соавт., 1982,1983), с учетом данш разнообразии плазмидного профиля у некоторых штаммов (C.B. Бал нов, 1989; A.A.Филиппов с соавт., 1992), во многом предопределило ин сивное изучение генетической организации возбудителя чумы до настоя: времени. Однако диагностические приемы и средства, разработанные основании достижений в изучении генетики и молекулярной биол< бактерий чумы, еще не нашли широкого применения в практической ра чумологов.

Вопросам эпидемиологии и природной очаговости чумы t посвящено много фундаментальных исследова

(А. И. Судаков, 1897;Ф.А. Дербек, 1 905 ;Н. Ф.Гамалея, 1 9 Д. К.Заболотнын , 1912; Г. Ф. Вогралик, 1935; Wu Lien-teh, 1) Г.П.Руднев, 1938; В.Н.Федоров,1946; R.Pollitzer, 1954; Ю.М.Ралль,1 M.Baltazard, 1959; О. В. Бароян, 1967; H .И .Николаев, Ii А.К.Акнев, 1970; Е.П.Голубинскнй, И.Ф.Жовтый, Л.Б.Лемешева, 1 И.С.Солдаткнн, Ю.В.Руденчик,1988; Ю.З.Рнвкус,1990; М.П.Ко, 1990,1993; И.В.Домарадский,1993) и значительно больше других н ных трудов, что свидетельствует о том внимании, которое прнвле проблема.

Часть вопросов эпидемиологии чумы, имеющих практическое и тео{ ческое значение, не решены до настоящего времени. Так не сопостав: динамика и интенсивность заболеваемости чумой в мире и СНГ, а пото> полностью установлены причинно-следственные связи между этими соб ями имеющие, вероятно, как социальную так и биологическую основу проведена комплексная оценка неравнозначности эпидемической актш ти чумы в различных, в том числе природно-очаговых, регионах СНГ конкретизированны факторы, влияющие на это явление. Не имеется с щенной трактовки возможной роли в эпидемическом и эпизоотиче процессах штаммов чумного микроба, отличающихся по ряду фен генотипических признаков, которые были изолированы в природных оч различного типа. Неясно, какие именно генетические особенности чум микроба обеспечивают ему способность, в отличие от возбудителей боль: ства других зоонозных инфекций, распространяться среди людей и Ж1 ных и реализовать при этом несколько механизмов передачи ннфекщ

Между тем, современный уровень развития эпидемиологии и смежг ней дисциплин (включая микробиологию и молекулярную биологию) воляет получить ответы или сформулировать обоснованные предложен!

решению большинства из перечисленных выше вопросов.

В связи с изложенным, мы предприняли попытку рассмотрения результатов ретроспективного анализа эпидемических и эпизоотических проявлении чумы по литературным и архивным данным, материалов собственных наблюдении в природных и эпидемических очагах, а также экспериментальных данных с позиции современной соцнально-экологнческон концепции в эпидемиологии (Б..Л.Черкасский, 1988), используя в качестве инструмента анализа системный подход (И. И.Шмальгаузен, 1968; M.D.Mesarovich, 1970; Gigch van V.P., 1981) подразумевающий изучение эпидемического процесса в качестве открытой системы, состоящей из двух основных подсистем -социальной и биологической (Б.Л.Черкасский, 1987,1988,1991). При этом на уровне нзучення биологической подсистемы, мы в значительной степени исходили из концепции о саморегуляции паразитарных систем, особенно в ее части, касающейся возможной регулирующей роли молекулярно-генети-ческих механизмов (В.Д.Беляков, Д.Б.Голубев, Г.Д.Каминский,В.В.Тец 1987).

Выбранный методический подход позволяет решить изложенные ниже задачи и достичь основной цели исследования.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ - получение новых сведений о роли социальных и биологических факторов в морфологической структуре эпидемиологического и эпизоотического процессов при чуме ( на соцэкоссистемном, экосистем-ном, организменном, тканево-органном и молекулярном уровнях).

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Сопоставить особенности динамики и интенсивности заболеваемости чумой в мире н СНГ для выявления причинно-следственных связей этих явлений (соцэкосистемный глобальный уровень).

2. Оценить эпидемическую активность проявлений чумы в различных регионах СНГ с учетом природной очаговости этой инфекции и выявить социальные и биологические факторы, влияющие на эпидемическую неравнозначность территорий (соцэкосистемный региональный и экоснстемный уровни).

3. С помощью современных методов (скринннг-электрофорез плазмид и генетическое зондирование) изучить фено- н генотипнческую неоднородность штаммов чумного микроба, изолированных в природных очагах этой инфекцнн (экоснстемный, клеточный и молекулярный уровни).

4. Создать коллекции вариантов штаммов чумного микроба, содержащих разные сочетания собственных плазмид и пригодных для нзучення эффективности различных механизмов заражения чумой и передачи инфекции на моделях лабораторных и диких грызунов.

5. Изучить роль вндоспецнфических плазмид чумного микроба в реализации различных механизмов передачи чумы и сохранении в почве (экоснс-

темный, организменнын н молекулярный уровни).

6. Установить роль видоспецнфическнх плазмид в способности воз дителя чумы вызывать различную тяжесть течения болезни у грызу! (организменный, тканево-органный и молекулярный уровни). НАУЧНАЯ НОВИЗНА РАБОТЫ.

Систематизированы доступные литературные и архивные сведения эпидемических проявлениях чумы в мире и СНГ за 2495 лет, в связи с ' получены новые данные о прнчинно-следственных связях между эт1 событиями на глобальном соцэкосистемном уровне эпидемического про1 са. На энзоотичных территориях земного шара динамика числа поражень чумой стран на разных континентах имела одинаковый циклический хар тер с периодическими подъемами и спадами, что свидетельствует в пол преобладания биологической сущности процесса, выражающейся вероя в изменениях эпизоотической активности природных очагов и риска зара ния людей в дикой природе. Последующее региональное антропоноз распространение ннфекцин было связано уже с преобладанием значимо социальных факторов. На неэнзоотнчных по чуме территориях, динам числа пораженных стран, в следствие межгосударственных и межконтш тальных завозов инфекции, отражала процессы, происходившие в стра выноса инфекции, а степень антропонозного распространения чумы зав ла в большей степени от социальных факторов, не исключающих значимс биологических, в частности изменении вирулентности возбудителя и восг нмчивости населения к инфекции.

Возникновение пандемических распространи!! чумы вероятно опред лось совпадением периодов наиболее высокой активности биологичес факторов, способствовавших повышению частоты заражений люден в I роде и социальных, обеспечивавших бурное антропонозное, в том ч] межгосударственное н межконтинентальное, распространение инфекш

Впервые, при аналнзе заболеваемости чумой на региональном соцэкс темном уровне, была установлена эпидемиологическая неравнозначн природных очагов чумы. В 18 из 43 природных очагов стран СНГ слу заражения чумой выявлено не было, а в 25 других - эпидемнче активность значительно отличалась , что было связано с влиянием ] установленных биологических (особенности свойств возбудителя, экол! носителей и переносчиков) и социальных (промысловая ценность но( лей, условия трудовой, хозяйственной и бытовой жизни населения, нал блох жилья человека, грызунонепроницаемость жилья, миграционна; тивность населения, его медицинская обеспеченность ) факторов. Забо. емость чумой на неэнзоотичной территории была связана как с внутри] дарственным распространением чумы из природных очагов (преиму твенно из регионов Северного Прикаспия и Забайкалья), так и с меж

дарственными завозами инфекции из пораженных антропонознон чумой сопредельных стран. Межконтинентальных завозов в страны СНГ установлено не было.

На экосистемном уровне приоритетным является выявление среди циркулирующих в природных очагах Северного Прикаспня до 61% «атипичных» штаммов, а среди них, не менее 10% штаммов чумного микроба, отличающихся по данным скрининг-электрофореза и изучения соответствующих фенотипическнх признаков отсутствием родо- и видос-пецифпческих плазмид, которые в большинстве случаев были интегрированы в хромосому, что подтверждено молекулярным зодированием с использованием специфичных структурным генам плазмндДНК-зондов. В связи с этим высказывается предположение, что интеграция плазмид в хромосому и выход их в автономное состояние является своеобразным регулятором вирулентности бактерии на молекулярном уровне, которая отражается особенностями проявлении чумы на органнзменном и интенсивности эпизоотических проявлений на экосистемном уровнях. Показано, что возможен лабораторный контроль такой регуляции.

Впервые в экспериментах на лабораторных и диких грызунах была изучена роль собственных плазмид возбудителя при реализации различных механизмов передачи инфекции. При этом установлено, что видоспецифн-ческая плазмнда молекулярной массой (м.м) 6 мегадальтон (мДа) обеспечивает более эффективное, в сравнении с бактериями утратившими этот репликон, внедрение возбудителя в организмы грызунов (всех изученных видов) при аэрогенном, трансмиссивном и алиментарном заражении, а также развитие у животных острых генерализованных форм болезни с высокой летальностью. Аналогичная роль в развитии инфекционного процесса видоспецифической плазмиды возбудителя м.м 65 мДа выявлена на модели более резистентных к чуме, среди взятых нами в эксперименты животных - малых сусликов, но не на мелких песчанках и белых мышах, высокочувствительных к чуме. Экспериментально показана также роль плазмиды м.м 65 мДАав повышении эффективности трансмиссивной передачи чумы. Бактерии, утратившие этот репликон хуже образовывали блок преджелудка у насекомых и быстро элиминировались из эктопаразитов при повторных подкормках на здоровых животных.

Моделирование фекально-оральной передачи чумы показало,что грызуны хорошо заражаются через контаминированные возбудителем объекты внешней среды (корм, подстилка). Бактерии внедряются в организмы биопробных животных через лимфоидную ткань по ходу пищеварительного тракта, вызывая соответствующие патоморфологнческне изменения и клиническую картину, чаще менее острую, чем при трансмнсснвном и аэрогенном внедрении микробов. Больные чумой животные обильно выделяют

возбудитель инфекции с мочой н калом, инфнцпруя объекты внешн среды и обеспечивая возможность дальнейшего фекально-оральнс распространения инфекции. Таким образом, впервые эксперименталь показано, что отсутствие переносчиков в достаточном для обеспечен трансмиссии количестве не прерывает передачу чумы среди грызунов.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. Результаты исследовании вклю ны в Руководство по профилактике чумы (под общей редакцией А. В. Науме и Л.В.Самойловой) Саратов, 1992; Кадастра и библиографии эпидемич кпх проявлений чумы в России и других странах СНГ с 1873 по 1992 год (г редакцией А.В.Наумова и А.М.Кокушкина), рекомендованного к опубли ваншо Ученым Советом Рос НИПЧИ «Микроб» Протокол N11 от 4.10.9. проекта Санитарных правил по профилактике и борьбе с чумой человек животных, подготовленных к опубликованию в 1995 году Госкомсанэп надзором РФ.

Сконструированная коллекция из 11 штаммов возбудителя чумы, от чающихся по наличию собственных плазмид и обладающих надежн селективным маркером канамнцинорезистентности, депоннрованаЗО.ОЗ.' в Государственной коллекции патогенных микроорганизмов прн М\ живых культур Рос НИПЧИ «Микроб» и используются в настоящее вр' в экспериментальной работе лабораторий молекулярной генетики, эпи: тологин и НОППМ института «Микроб».

Утверждены директором РосНИПЧИ «Микроб» по региональному у; ню «Методические рекомендации по оральному заражению жнвотш (протокол N7 от 17.05.92); «Методические рекомендации по цепользова! аппарата для работы с инфицированными блохами» (протокол N3 3.04.93); «Методические рекомендации по выделению возбудителя чум! загрязненных посторонней микрофлорой объектов», «Методические р> мендации по хранению и транспортировке клеточных лизатов кул! чумы, холеры, псевдотуберкулеза для последующего выявления плазм (протокол N2, февраль, 1994г).

Разработанный способ дозированного орального введения чумного : роба в агаровых гранулах может быть использован на моделях др} энтеробактерий, например возбудителей псевдотуберкулеза, кишеч) иерсинеоза и сальмонеллеза грызунов.

Показана целесообразность и подтверждена на практике реальн эффективного использования в диагностических целях современных м кулярно-бнологическнх методов исследования (скрининг-электрофорез п мид и генетическое зондирование).

Разработан способ выделения бактерий чумы из контаминироваь сопутствующей микрофлорой образцов, основанный на выявлении у вс дителя естественной резистентности к селективному агенту -фосфомш

Чвторское свидетельство N 1730155 от 3.01.92.). На основе указанного зобретения были сконструированы селективные диагностические среды пя выделения бактерий чумы, из контаминированных посторонней мик-эфлорой проб,показавшие при полевых испытаниях более высокую эффек-1вность, чем известные аналоги.

Теоретические положения и практически значимые результаты диссерта-[П1 включены в цикл лекций «Эпидемиология чумы» для слушателей урсов первичной специализации и усовершенствования'врачей по особо тасным инфекциям при РосНИПЧИ «Микроб» (1993-1995). ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ. ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ.

1. Для стран, расположенных на различных континентах, но имеющих а своих территориях природные очаги чумы, характерно цикличное и шхронное нарастание и снижение эпидемической активности этой болезни, го может отражать действие единых биологически обусловленных механиз-ов регулирования активности эпизоотических проявлений инфекции в тобальных масшабах.

2. Распространение чумы на неэнзоотичных территориях, в целом гражает динамику эпидемических проявлений в энзоотичных странах ыноса инфекции, но имеют над собой преимущественно социальную очву,связанную с особенностями внутри- и межгосударственной миграции зупп населения, а также наличием условий для реализации трансмиссив-ого и аэрогенного механизмов передачи инфекции среди людей.

3. Природные очаги чумы в странах СНГ неравнозначны по своей тидемической активности. Среди них имеются 18 природных очагов, на фритории которых заболеваний людей чумой выявлено не было, и 25 риродных очагов, в которых были зарегистрированы эпидемические продления чумы различной интенсивности и продолжительности. Проведена шдемиологическая дифференциация природных очагов чумы в СНГ. оказана наиболее высокая эпидемическая значимость для России приро-ных очагов СНГ, расположенных в регионе Северного Прикаспия и абайкалье.

4. В природных очагах Северного Прикаспия от носителей и переносчи-эв чумы выделяют до 10% штаммов, у которых родо- и видоспецифические лазмиды (одна или несколько) интегрированы в хромосому, что сопровож-ается утратой экспрессии ряда специфических признаков возбудителя, редполагается, что механизм интеграции собственных плазмид в хромосо-у и их выход в автономное состояние может служить регулятором актив-ости эпизоотических проявлений.

5. Видоспецифические плазмиды чумного микроба, находящиеся в фулентных бактериальных клетках в автономном состоянии, обеспечива-т ему более эффективную реализацию трансмиссивного, алиментарного и

аэрогенного механизма передачи, а также наиболее острое течение болезш 3' зараженых указаными способами лабораторных и диких грызунов ] сравнении с вирулентными вариантами возбудителя, обладающими одно1 родоспецифической плазмидой.

6. В природных очагах чумы при малой численности и активноси переносчиков инфекции возможна циркуляция возбудителя между грызуна ми фекально-оральным путем (как и при большинстве других зоонозны: инфекций), о чем свидетельствуют результаты успешного алиментарногс заражения лабораторных и диких грызунов с внедрением возбудителя 1 лимфоидную ткань по ходу пищеварительного тракта, развитием соответ ствующей клинической картины болезни и выделением бактерий чумы в< внешнюю среду с мочой и калом. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.

Материалы диссертации доложены и представлены на международны: научных конференциях по проблемам эпидемиологии и профилактики чумь в Монголии (Улан-Батор, 1990); России (Саратов, 1992); Китае (Баи чен,1993, Пекин, 1994) и Казахстане (Алма-Ата, 1994); на V съезд! Всесоюзного общества генетиков и селекционеров им.Н.И.Вавилова (Мое ква,1987); XII Всесоюзной конф. по природной очаговости болезней (Ново сибирск,1989), Российский научной конференции «Разработка и произвол ство препаратов медицинской биотехнологии» (Махачкала, 1990); на Рос списком съезде общества генетиков и селекционеров (Саратов, 1995); н; научной конференции «Генетика и биохимия возбудителей особо опасны."-инфекций» (Волгоград, 1992); на ежегодных итоговых научных конферен циях РосНИПЧИ «Микроб» (1987 - 1994 гг), на Научно-производственны) советах Уральской, Астраханской и Элистинской противочумных станцш (1987-1992).

ПУБЛИКАЦИИ. По теме диссертации опубликована 42 научная работа 1 авторское свидетельство и соавторство в Руководстве по профилактию чумы (Саратов, 1992). Список публикаций приведен в конце автореферата

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ.

Диссертация состоит из введения, 2 глав обзора литературных данных 4 глав собственных исследовании, включающих описание материалов I методов исследований, изучения особенностей эпидемических и эпизооти ческих проявлений чумы по литературным данным, архивным источника:* (включая первичные документы) и собственным наблюдениям в природны> очагах чумы, а также результатов экспериментов на моделях лабораторные и диких грызунов; заключения, выводов.

Работа изложена страницах 431 машинописного текста, иллюстрирова на 23 рисунками и 71 таблицами. Список литературы содержит 37' цитированных работ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

Глава 1. Характеристика эпидемических проявлений чумы с древнейших времен по XIX столетие.

Сведения о чуме, как о болезни имеющей четкие диагностические 1рпзнаки (массовое поражение людей, набухание желез или кровохаркание, зысокая летальность), известны с древнейших времен (В.М.Флоринскпй. 18.97). С учетом указанных дифференциально-диагностических особенностей, были рассмотрены 35 обзорных научных работ, датированных концом Ч1Х - началом XX столетий. Систематизированы и обобщены данные о числе пораженных стран с V века до н.э. по XIX столетне н.э. и о продолжительности эпидемии на их территориях по десятилетиям. Отражены сведения об интенсивности эпидемических проявлений чумы в наиболее крупных населенных пунктах и портах, особенностях межгосударственных заносов инфекции и распространении болезни внутрн пораженных стран, а также о других условиях способствовавших или препятствовавших развитию эпидемий. Анализ собранных материалов показал, что эпидемические проявления чумы в мире регистрировали почти каждое столетие на протяжении 2495 лет. Исключение составляют 2 периода. Первый- с II века до н.э. по I век н.э., второй в 1У-\' веках н.э. Эти перерывы можно связать не столько с прекращением эпидемий, сколько с отсутствием упоминаний о них в сохранившихся литературных и документальных источниках. Однако уже начиная с VI века н.э. чума регистрировалась в наиболее цивилизованных странах в виде интенсивных эпидемий каждое столетне. При этом число пораженных стран в мире циклически изменялось на протяжении рассматриваемого периода (рис. 1). р»1Г~>< 1

Промежутки между максимальными числами вовлечения стран в эпи. мическнй процесс последовательно составляли 2-1-2-2-1 столетие. Начин с: XVIII века увеличение числа стран пораженных чумой отражало не толь вовлечение их эпидемический процесс, но и улучшение диагностики эт болезни. В последнее десятилетие XIX века, чуму стали диагностиров! практически повсеместно - в странах Европы, Азии, Африки. Америки Океании.

В течение каждого рассмотренного по десятилетиям века также бы отмечена общая тенденция неравнозначности распространения чумы в ми] Распространение начиналось, как правило в конце столетня (10 десяти, тие), затем число пораженных стран достигало максимума к середине ве и плавно уменьшалось до 9 десятилетня.

Важно отметить, что повышение заболеваемости чумой и увеличег числа пораженных стран всегда и практически синхронно начиналиа государств, на территории которых имеются природные очаги чумы, синхронность указанных изменений не влияли отдаленность таких стр друг от друга (регионы Юго-Восточной, Средней и Юго-Западной Аз1 Северо-Восточной Африки, Восточной Европы); отсутствие между ни торговых или иных связей обеспечивающих реальный занос инфекш различия государственного устройства, а также особенности быта и социа. ного.уровеня жизни населения. В связи с изложенным, можно обоснова! говорить о том, что на территориях энзоотичных по чуме стран, в услов1 отсутствия мероприятии снижающих риск заражения людей в дикой при де, изменения заболеваемости чумой среди населения обуславливали п имущественно биологические факторы - изменения эпизоотической акт ностп в природных очагах, носящие глобальный экосистемный характе

Динамика распространения чумы по всем странам мира отражала из нения эпидемической активности чумы в энзоотичных по этой ннфек! государствах, но на более высоком уровне (рис.1). Завозы инфекции неэндемичные территории до XVIII века носили долговременный, межгс дарственный характер и были обусловлены военнымн действиями I экономическими связями. В страны Европы чума проникала из энзоотичи по чуме государств, расположенных в бассейнах Средиземного и Черн морей (Ирана, Сирии, Ливии, Египта, России). В России заболеваемо чумой была связана как с завозами инфекции из пораженных стран Еврс и Азии, так и с выносом инфекции из собственных природных оча! расположенных в Нижнем Поволжье (Астраханские и Калмыцкие степ По девяностые годы XIX века было документировано 87 завозов чум: Россию. Из них, 33 завоза из Европейских стран через западную гран: (гг.Псков, Новгород, Смоленск, Полоцк) по XVII век; 42 завоза из Тур| и Персии через Украину, Молдавию и Кавказ в ХУП-Х1Х веках и 12 зава

- из Северного Прнкаспня вверх по Волге, с распространением инфекции в центральных регионах России в XI, XIII, XIV. ХУП-Х1Х веках. Завозы осуществлялись, как правило, по основным путям маятниковой миграции населения со скоростью перемещения транспортных средств (морских, речных, гужевых). При этом всегда сначала поражались наиболее крупные узлы миграционных связей (порты, центры торговли), а уже затем, чума распространялась от них в радиальных направлениях в другие населенные пункты.

Внутри пораженных чумой неэндемнчных стран, распространение инфекции носило эстафетный, сезонный характер. Экспансивные качества чумы усиливались в весеннее время с оживлением миграционной активности населения, к ранней осени чума охватывала все новые и новые территории, а заболеваемость этой болезнью достигала максимальных показателей. В осенне-зимний период распространение чумы практически прекращалось, а заболеваемость резко снижалась или затухала совсем. Продолжительность антропонозного сохранения чумы в неэнзоотпчных странах колебалась от I до 10 лет, но чаще всего составляла 1-3 года. Факторами способствовавшими временному укоренению инфекции являлись: обилие блох жилья человека, скученность и низкий саннтарно- гигиенический уровень жизни большинства населения, а также несвоевременность и неполный объем противоэпидемических мероприятий в очагах.

В связи с отсутствием доступных статистических даннных, об интенсивности эпидемических проявлений чумы до XIX века можно было судить только по описаниям вспышек чумы в крупных городах различных стран мира. По имеющимся сведениям характеризующим отдельные вспышки инфекции можно сказать, что заболеваемость и летальность от чумы в различных регионах мира были практически одинаковыми на каждом этапе ретроспективного поиска. Большинство авторов отмечали наличие в начале и конце эпидемических вспышек более легкого клинического течения и преобладание бубонных клинических форм болезни, в ряде случаев оканчивавшихся выздоровлением. В разгар эпидемических вспышек преобладали скоротечные септические и легочные формы болезни, оканчивавшиеся смертью. Эти наблюдения могут свидетельствовать об изменении вирулентности штаммов возбудителя в ходе эпидемического процесса. Эпидемии часто оканчивались и тогда, когда от чумы погибала большая часть населения или были приняты меры по разобщению больных и здоровых люден. К концу XVIII века эпидемии чумы полностью исчезли из стран Западной Европы, что можно связать с улучшением социально-гигиеничес-кнх условий жизни населения, почти полным уничтожением блох жилья человека, а также с принятием эффективных мер, снижавших риск завоза инфекции.

В начале н середине XIX века чума наиболее постоянно проявляла се в странах Юго-Восточной и Юго-Западной Азии. К концу столетня бы отмечена активизация эпидемических проявлении в энзоотнчных по чу странах, которая в Индии и Китае приняла катастрофический характер. 1894 года зарегистрировано пандемическое межконтинентальное и межгос дарственное распространение инфекции, преимущественно морским трг спортом. В ряде неэнзоотичных стран возникали относительно стоик (продолжительностью до 25 лет) антропургнческие очаги чумы сре сннатропных крыс. Однако характерно то, что таких опустошительн] эпидемий чумы, как в предыдущие столетия в Европе больше не возника в связи с отсутствия социальных условий для антропонозного распростра! ння этой инфекции.

Обобщая изложенный в 1 главе материал следует, отметить, что особ( ности эпидемических проявлений чумы в мире за период с V века до н.э. XIX столетие н.э., свидетельствуют о том, что во время сохранения чум! межэпндемические периоды и на этапах активизации эпидемического п] цесса в энзоотичных по чуме странах, на глобальном соцэкосистемн уровне преобладало влияние биологических факторов (эпизоотичеср активность природных очагов) над социальными (особенности трудовс бытовой и хозяйственной деятельности населения). В то же время, на эт; антропонозного распространения чумы как на энзоотичной, так и неэнзоотичной территории, доминирующее влияние на эпидемический п] цесс оказывали социальные факторы (условия жизни населения, направл ность и частота миграционных потоков, эффективность противоэпидемич ких мероприятий).

Следует также подчеркнуть, что до XIX столетия чума многокра' принимала значительное распространение в неэнзоотичных по этой инф цин странах, но наиболее катастрофические последствия пандемичесю распространения были отмечены в VI веке (1 пандемия чумы), когда от э~ болезнн погибло 100 млн. человек или более половины Римской ампер (А.И.Судаков, 1897; Г.П.Руднев, 1938) и в XIV веке (2 пандемия чум] когда от чумы в Европе погибло 25 млн. человек (Нескег, 1865; Р.51аск,199 ав Азии-37млн.человек (Г.Ф.Вогралик, 1935; В.Н.Федоров, И.И.Рогоз: Б.К.Фенюк, 1955). Генез таких интенсивных эпидемических проявле! чумы вероятно определялся совпадением периодов наивысшей активно' биологических с действием ряда социальных факторов, влиявших эпидемический процесс на его соцэкосистемном глобальном уровне.

Глава 2. Сведение об эпидемиологии чумы в XX веке.

Качественно новый взгляд на эпидемиологию чумы возник с конца >

века и базировался на открытии возбудителя чумы -бактерий Yersinia pestis японским ученым Ш.Кнтозато и французским исследователем А.Иерсеном (Kitozato,1894;Yersin,l894). С этого времени прогресс в изучении фенотп-пических свойств н генетической организации чумного микроба определял совершенствование методов специфической профилактики болезни, ее диагностики у людей и животных, а также выявления бактерий в объектах внешней среды.

Глава состоит из трех подразделов. В первом из них охарактеризовано современное состояние изучения энзоотии чумы и представлены обобщенные сведения о природных очагах этой инфекции, выявленных к настоящему времени в 46 странах Евразии. Африки и Америки. Более подробно охарактеризованы 43 автономных природных очага, расположенные на территории 9 стран СНГ (Азербайджана, Армении, Грузии, Казахстана, России, Таджикистана, Туркмении и Узбекистана). Приведены краткие литературные данные о динамике и особенностях эпизоотических проявлений чумы в природных очагах различного типа (сурчиного, сусликового, песчаночьего, пищухового и полевочъего).

Во втором разделе приведена краткая характеристика материалов об особенностях эпидемических проявлении чумы в мире и СНГ в течение XX века отраженных в различных литературных источниках. Наиболее подробно раскрыты вопросы, связанные с реализацией различных механизмов заражения людей в дикой природе, развитием у больных различных клинических форм и тяжести течения инфекции, а также с дальнейшим антропонозным распространением болезни соответствующими механизмами передачи инфекции. При этом показано, что эпидемиологически важной задачей является выяснение генетической основы уникальной способности чумного микроба реалнзовывать различные механизмы передачи инфекции как среди людей, так и среди животных.

Акцентировано внимание на возможности оценки эпидемической неравнозначности энзоотичных по чуме территории на соцэкоснстемном глобальном и региональном уровнях, что в дальнейшем может являться основой для дифференцированного подхода к определению направленности, сроков и объемов обследовательской и профилактических мероприятий в природных очагах России и других стран СНГ. Показано, что с этой целью необходимо провести ряд дополнительных исследований, сбор, систематизацию и аналнз материалов об эпидемических проявлениях чумы в период III пандемни этой инфекции, как в мире, так и в СНГ. Тем более, что начиная с 1938 по 1986 гг, в СССР не было открытых публикаций на эту тему.

В третьем разделе главы представлены сведения о некоторых эпидемиологических значимых фенотипических и генотипических свойствах возбудителя чумы, установленных на современном этапе его изучения. Показано,

что в природных очагах чумы циркулируют штаммы, уклоняющиеся индикации обычными приемами, варианты чумного микроба различи вирулентности н бактерии, отличающиеся по ряду других фенотнпическ и генотипических признаков. В связи с изложенным, обосновывав необходимость конструирования новых селективных питательных ср облегчающих поиск бактерий чумы в различных экологических нишах также привлечение к практике диагностических исследований компле) методов, включающих изучение фенотипическпх признаков бактерий, на. чпе плазмид в автономном состоянии (скринннг-электрофорез), нали1 пзазмид в интегрированном в хромосому состоянии (ДНК-зонднрованп

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 3. Материалы и методы.

В качестве источников информации использовали опубликованные на ные труды, информационные сообщения ВОЗ и противочумных учре» ний, паспорта выделенных штаммов возбудителя чумы, ннформациош сообщения сотрудников противочумных учреждений о работе в эпндемн1 ких очагах чумы, протоколы собственных экспериментов и полевых нее дованнй.

При выполнении настоящей работы были изучены фено- и генотишг кие особенности 317 штаммов чумного микроба, изолированных в 1967 -1 гг от носителей и переносчиков инфекции в природных очагах Россн Казахстана, расположенных в Северном Прикаспии. В экспериментах конструированию селективных сред были нспользованы, полученны Музее живых культур РосНИПЧИ «Микроб» 196 штаммов возбудит чумы, 12 - кишечной палочки, 6 -вульгарного протея, 4 - сальмонелл, стафилококков, 2 -шигелл, 1 - стрептококков. В экспериментах по мод( рованию механизмов передачи чумы на лабораторных и диких грызу использовано 1.5 штаммов возбудителя чумы, из которых 4 были получ в МЖК РосНИПЧИ « Микроб», а 11 - сконструированы в ходе исслед* ний. Сконструированные пзогенные варианты бактерий отличались ме: собой по наличию собственных родо - и видоспецифпческих плазмн. также по экспрессии признака пигментсорбции.

В экспериментах использовали 42 морские свинки, 375.5 белых мыш получены в виварии РосНИПЧИ «Микроб»); 655 полуденных и гребен ковых песчанок, 1051 малых сусликов (отловлены в природных оч; Северного Прикаспия); 19900 блох Nosopsyllus laeviceps, 2850 - Xenops conformis, 2165 - Nosopsyllus mokrzeckyi, 13500 - Citellophillus tesguoi 3020 - Neopsylla setosa, 915 - Xenopsylla cheopis ( получены в ннсекте

РосНИПЧИ «Микроб»),

Для изучения фено - и генотипнческих особенностей бактерий чумы использовали обычные методы изложенные в соответствующих руководствах ( Руководство по профилактике чумы, Саратов, 1992; Т. Маннатис, Э. Фрич, Дж. Сэмбрук, Методы генетической инженерии, М, 1984 ). В иммунологических исследованиях использовали коммерческие эрнтроци-тарные диагностикумы на основе капсульного антигена чумного микроба, а также экспериментальные эритроцнтарные диагностикумы, изготовленные на основе мембранных белков возбудителя чумы ( А.А.Щербаков, 1991).

Конструирование вариантов штаммов возбудителя чумы осуществляли методом селекции бактерий, утративших соответствующие признаки и клонированием таких вариантов; элиминацией плазмиды м.м б мД при 4 градусах С ( Г.П.Шведун, О.А.Проценко, 1983); крнотрансформацией бактерии чумы ДНК плазмид ( А.М.Кокушкин, 1983 ). Контроль утраченных и приобретенных свойств проводили с помощью изучения фенотнпичес-кон экспрессии соответствующих признаков, скринннг-электорофореза плазмид ( C.Kado, S.T.Liu, 1981), ДНК. ДНК гибридизации ( Т.С. Маннатис ссоавт., 1984 ) с использованием молекулярных зондов, сконструированных в лаборатории молекулярной генетики РосНИПЧИ «Микроб» ( Ю.А.Попов, 1991).

Аэрогенное заражение животных проводили в лаборатории аэрозолей РосНИПЧИ «Микроб», используя горизонтальную аэродинамическую камеру с давлением сжатого воздуха в распылителе 0,425 атм н образованием аэрозоля на 90,3','i, состоявшего из частиц диаметром 1-10 микрон. Метод аэрозолировання описан ранее Л.В.Самойловой, Н.И.Николаевым (1972).

Трансмиссивное заражение н изучение блокообразовання у блох осуществляли согласно требованиям « Общей инструкции по паразнтологнческой работе в противочумных учреждениях СССР» ( Саратов, 1978).

Оральное введение чумного микроба проводили скармливая здоровым животным трупы погибших от чумы зверьков или вводя им в ротовую полость агаровые гранулы, содержавшие дозированное число бактерий чумы ( Т.Н.Донская, М.П.Салабуда, А.М.Кокушкин с соавт.. 1993; А.М.Кокушкин с соавт., 1994 ).

Результаты исследования анализировали используя общепринятые статистические методы ( И.П.Ашмарин, А.А.Воробьев, 1962; Г Ф.Лакин, 1980; Т. Ю. Каспарова, 1994).

Графический и текстовой материал оформлен на персональных компьютерах IBM 486 DX2 - 66 в программах Lexicon 1.3; Aldus Page Maker 4,0; Word 6.0; dr.Halo.

Глава 4. ВЛИЯНИЕ РЯДА СОЦИАЛЬНЫХ И БИОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ НА ХАРАКТЕР ЭПИДЕМИЧЕСКИХ ПРОЯВЛЕНИЙ ЧУМЫ В КОНЦЕ XIX - XX ВЕКЕ.

Глава состоит из двух разделов. В первом из них приведены данш анализа эпидемических проявлении на соцэкосистемном глобальном мире), а во-втором - на соцэкосистемном региональном (в СНГ) уровня:

В разделе 4.1, по данным из 71 литературного источника, в наибов полном виде обобщены сведения об эпидемических проявлениях чумы в ми за период 1890 - 1994 гг. При этом приведены и неизвестные ранее полност] материалы о заболеваемости чумой в СССР с 1938 по 1986 гг и в Китае с 19 по 1988 гг.

Динамика заболеваемости чумой в мире за период 1890-1994г, отраж< ная в десятичных логарифмах на рисунке 2, свидетельствует, что пос повышения заболеваемости чумой в 43,5 раза в 1900-1909 гг ( в сравнен с 1890-1899гг), наступил период снижения числа зарегистрированныз бо. ных в 1,5-2,3 раза каждые 5 лет вплоть до периода временной стабилизац положения в 1935-1944 гг, когда чумой поражалось в мире около 31 тыс.ч* в год. За указанный период число пораженных стран изменялось незна1 тельно повышаясь от 34 в 1915-1919 гг до 56 в 1920-1924, а затем вне снижаясь до 39 в 1940-1944 гг.

В 1945-1949 гг. последовал рост заболеваемости чумой в мире в 2,2 ра сопровождавшийся увеличением числа пораженных стран с 39 до 47. ' могло быть связано с усилением миграции населения после окончания 2 мировой воины.

РВСУЮК 1

ЗАБОЛЕВАЕМОСТЬ В СТРАНАХ МИРА ПО КОНТИНЕНТАМ (1«) ЗА ПЕРИОД 1ЯЭ0-1М4 гг.

т—I—\—\—г—I—I—I—I—!—;—I—I—I—1—I—I—I—г—I—[—I

04 99 01 09 К 19 21 29 31 ¡9 41 49 54 59 М 69 74 84 89 !М

годы

В 1950-1959 гг - зарегистрировано резкое, в 17 раз снижение заболеваемости чумой в мире, сопровождавшееся уменьшением числа пораженных стран почти в 2 раза.

В 1960-1969 гг. подъем числа больных чумой в мире в 4,2 раза, а затем в течение 15 лет ежегодное снижение заболеваемости чумой в 1,5-2,5 разав год до 1985 года. Затем, после пятилетней стабилизации заболеваемости на уровне чуть менее 1 тыс.чел. в год, вновь зарегистрирован подъем уровня заболеваемости почти в 3 раза в 1990-1994 гг

Всего с 1890 по 1994 гг чумой заболели в мире 18 352 648 человек. Из них в периоды с 1890-1899 гг. заболели 224 520 человек; 1900-1924 гг - 16 348 115 человек (89,1%); 1925-1954 гг.- 1 633 73.9 человек (8.9%); 1955-1979 гг. -114 359 человек (0,65%) и 1980-1994 гг.- 28 915 человек (0,15%). В большей степени были поражены страны Азии, на долю которых приходится 98,06% от всех случаев чумы. Менее были поражены страны Африки - 1,5%; Америки0,3%; Европы - 0,08% и Океанни -0,06'% от всех больных чумой в мире. В связи с этим, общую динамику эпидемических проявлений чумы в мире определяли события в Азиатских странах. Однако, следует отметить постепенное увеличение доли выявленных больных в странах Африки и Америки, которое происходило на фоне резкого снижения заболеваемости в странах Азии (рпс.З). При этом обращает на себя внимание совпадение периодов подъема и спада заболеваемости чумой на всех континентах, где имеются природные очаги этой инфекции (рис.2). Это может свидетельствовать о влиянии общих, глобальных факторов на проявления чумы на соцэкоснстемном уровне, скорее всего в биологической подсистеме эпидемического процесса, к которой следует отнести события в природных очагах

Рисунок 3

доля больных чумой по континентам в динамике за период 1890 - 1994 гг. (в %)

-1-*---1-к---1-

|*«-ТЧУ9 ГЗиО-|52< 1925-1954 1955-1979 КИО-гт

этой инфекции. Характерной особенностью проявлении чумы в конце XI и в течение XX века является то, что 99,6% больных этой инфекцией бы; выявлены в энзоотичных по чуме странах, тогда как в предшествовавш] столетня наиболее пораженными были Европейские страны, натеррптор1 которых (Кроме России и Казахстана) нет природных очагов чумы, период третьей пандемии чумы число выносов инфекции на неэнзоотичш территории не уменьшилось, но отсутствие социальных условий для антр понозного распространения чумы в неэнзоотнчных странах Европы Океании привело к тому, что несмотря на образование в ряде случа антропургических очагов чумы среди синантропных грызунов, доля эт1 стран в общей заболеваемости чумой за анализируемый период состави. лишь 0.14%.

Тем не менее, завозы чумы на неэнзоотнчные территории представля. значительную опасность для населения и выражались как в спорадически так и вспышечных проявлениях. Поэтому, нами были проаналнзирова! особенности 142 случаев межгосударственных завозов инфекции за пери' с 1890 по 1994 г.. Анализ показал, что число завозов чумы коррелирова. с интенсивностью эпидемических проявлена этой болезни в странах мир Так . в период 1890-1899 гг было отмечено 28 (19,7%), 1900-1924 гг -(60,0%): 1925-1954 гг - 20 (14,1%); 1955-1979 гг - 6 (4,2%) и в 1980-1994 - 2 (1.4%) случаев завоза чумы в зарубежные страны. В литературш источниках имеются данные о видах транспортных средств, посредств' которых было осуществлено 129 завозов инфекции. Из них в 109 (84,5' случаев, завозы чумы происходили морским транспортом, в 8 (б.2%! сухопутными (гужевым, автомобильным) транспортными средствами, е (4.7%)- авиационным, в 3 (2,3%)- речным и в 3 (2.3%) -железнодорожш транспортом. Следует отметить, что уменьшение количества завозов на фс снижения интенсивности эпидемических проявлений, начиная с 30-х годе произошло за счет морских перевозок. В этот период в странах мира ста проводить наиболее эффективные мероприятия по истреблению крыс судах и в портовых сооружениях. Кроме того, продолжительность морск межгосударственных перевозок часто превышала срок ннкубацноннс периода при чуме, поэтому было возможным выявление больных на бор судна и принятие своевременных адекватных противоэпидемических ме| пунктах прибытия.

На этом фоне, увеличение числа межгосударственых завозов авиашк аым транспортом, отмечаемое с 60-х годов, представляет значительн опасность. Кратковременность межгосударствнных и межконтинентальн перевозок позволяют больному чумой в срок инкубационного перис миновать санитарные барьеры в пунктах пропуска через государственн границу и заболеть уже на территории страны. Именно такие случаи бы

отмечены в 1970 году (завоз из Индии во Францию) и в 1990 году (завоз из Боливии в США). Первый случай интересен тем, что в Индии с 1968 года проявлений чумы на людях официально не регистрировали. По всей вероятности, [^регистрировавшиеся спорадические случаи бубонной чумы имели место в этой стране вплоть до 1994 года, когда эпидемические проявления приняли угрожающий вид и не могли не привлечь внимания медицинских работников.

Частота случаев межгосударственных завозов чумы неравномерно распределялась между государствами различных частей света. Из 142 случаев-49 ( 34,5%) было зарегистрировано в странах Азии, 39 (27,5%)-Европы, 36 (25,3%)-Афрнки, 16(11,3'%)-Америки и 2 (1,4%)-Океании. Во всех случаях, завозы носили экономический характер и происходили по основным путям маятниковой миграции населения. В 44 (31%) случаях межгосударственные завозы инфекции были межконтинентальными, а в остальных - поражались сопредельные или близкорасположенные страны.

Приведенные сведения являются неполными, так как реальное развитие эпидемических событий в странах различных континентов свидетельствует о значительно большем числе межгосударственных завозов чумы. Говоря о завозах инфекции, нельзя коротко не остановиться на государствах, из которых инфекция была экспортирована. Обычно, в странах выноса инфекции во время этих событий отмечали высокую эпидемическую активность чумы, но имели место и исключения. В литературных источниках документировано 75 случаев выноса инфекции за рубеж. Из Индии различными видами транспортных средств чуму вывозили 23 (30,7%) раза, из Китая - 14 (18,7%), Турции - 12 (16%), Аргентины - 7 (9,3%), Бразилии и Камбоджи по 3 (8%), Вьетнама и Австралии по 2 (5,3%), а также из Йемена, Ганы, Сенегала, Туниса, Парагвая, Португалии и с Азорских островов по 1 (12%) разу.

Таким образом, эпидемическая активность природных очагов чумы связана как с биологическими, так и с социальными фактора-ми. К первым из них относятся характеристика эпизоотических проявлений чумы в природных очагах, ко вторым - характер деятельности, условия жизни и уровень специализированного санитарно-гигиенического и лечебено-проф-нлактического обеспечения населения.

В снижении эпидемической активности природных очагов, помимо влияния биологически глобальных факторов, определяющее значение играла направленная социальная деятельность человека, выражающаяся в оправданном антропогенном воздействии на ландшафты и окультуривании земель, а также в проведении целенаправленных профилактических и противоэпидемических мероприятии.

В разделе 4.2. по материалам 249 литературных, в том числе архивных

источников впервые представлены обобщенные данные об эппдемическ проявлениях чумы в странах СНГ с 1875 по 1994 год. Нижняя грани периода ретроспективного поиска обусловлена возможностью диффереш. ации случаев чумы местного и завозного происхождения.

В целом за указанный период динамика интенсивности эпидемическ проявлений чумы в СНГ (таблица 1) совпадало с изменениями эт проявлений в мире, что отражает общин характер экосистемных глобальн и региональных изменений эпидемического процесса.

За указанный период в 10 государствах СНГ чумой заболели 10< человек из которых 9054 больных умерли.

В плане административного деления заболеваемость чумой распреде лась следующим образом: Казахстан - 4709. Россия - 4540, Киргизия - 2 Таджикистан - 249. Украина - 195. Туркмения - 146, Узбекистан - 1 Азербайджан - 133, Грузия - 106 и Армения - 3 случая чумы у лю; Следовательно, основные эпидемические проявления чумы, были заре] трированы в Казахстане и России, на долю которых приходилось 9 больных или 88,5% всех случаев чумы в СНГ.

В географическом плане, большая доля эпидемических проявлений случаев) зарегистрирована в европейской, а меньшая (4879) - в азиате части содружества. При этом следует отметить, что эпидемические собь особо высокой интенсивности были зарегистрированы в регионе Север: Прнкаспия и Нижнего Поволжья (Россия, Казахстан), из которог прошлом, чума неоднократно заносилась в центральные регионы Росс

Таблица 1

Динамика эпидемических проявлений чумы в СНГ за период с 1875 по 1994 год

Генез эпи-

Чиою больных ( умераих) по десятилетиям

проявлений 1875 1864 1885 1894 1835 1904 1905 1914 1915 1924 1925 1934 1935 1944 1945 1954 1955 1964 1965 1974 1975 1984 1985 1994 ИТ

После за -раженхй г природных очагах 685 (437) 76 (60) 1152 (1095) 3153 (2951) 1815 (1719) 1580 (1294) 213 (170) 403 (288) 35 (10) 62 (23) 10 (6) 11 (7) 31 (80

В следст -вне межгосударствен них завозов - - 53 (20) 561 (446) 610 (519) - - - - - - - 12 (Е

В лабораториях и госпиталях - - 2 (1) 6 (4) 2 (2) 14 (6) 4 Ш 1 (0) 2 (0) 1 (0) 1 (0) 1 (0) с:

В результате всех причин 685 (437) 76 (60) 1207 (1116) 3720 (3401) 2427 (2240) 1594 (1300) 217 (174) 404 (288) 37 (10) 63 (23) 11 (6) 12 (7) ю. (9

Среди всего числа больных, на неэнзоотичной по чуме терри

заболели 813 человек (7,8%), на территории природных очагов чумы - 9606 (91,9%) и при уходе за больными или при лабораторном изучении инфицированного материала - 34 человека или 0,3% от общего числа. Анализ имеющихся данных позволяет считать, что подавляющее число заболеваний людей чумой являлось результатом территориально ограниченного антропо-нозного распространения инфекции от лиц, заразившихся в дикой природе. Заносы инфекции внутри страны и из-за рубежа в крупные населенные пункты, как правило, оканчивались спорадическими или вспышечными заболеваниями в пределах одного города. Всего за изученный период было установлено заболевание чумой у 8952 (85,6%) сельских и только у 1501 (14,4%) городских жителей СНГ. Чумой практически в равной степени поражались женщины и мужчины всех возрастных групп, кроме младенцев до 1 года. Особенности характеристик половозрастных и профессиональных групп больных чумой соответствовали обстоятельствам и механизмам заражения первых больных, а также возможностям реализации того или иного механизма распространения инфекции.

Таким образом,основная масса заболеваний чумой была зарегистрирована в различных географических регионах страны на территориях природных очагов этой инфекции и являлись следствием заражения людей от носителей и переносчиков, а также дальнейшего антрополнозного распространения инфекции. В связи с этим требовалось рассмотреть влияние некоторых социальных и биологических факторов, влияющих на эффективность заражения людей в дикой природе и развитие эпидемического процесса.

К настоящему времени на территории стран СНГ определены границы автономных 43 природных очагов чумы. Природные очаги чумы СНГ неоднозначны по своей эпизоотической и эпидемической активности. Эпидемические проявления зарегистрированы в 25 и не выявлены в 18 из них.

Оценка числа заражений людей в природных очагах за последние 120 лет позволила условно выделить несколько групп природных очагов.К ним относятся очаги, в которых эпидемические не были зарегистрированы, очага в которых было выявлено до 5 случаев заражения людей в природе в течение от 1 до 3 эпидемических лет ( очаги с низкой эпидемической активностью), до 50 случаев заражения и от 6 до 11 эпидемических лет - (средняя эпидемическая активность), а также более 50 случаев и от 20 до 37 эпидемических лет (высокая эпидемическая активность). В трех сибирских горных очагах ( Горно - Алтайский, Тувинский, Саглинский) случаев заболевания людей чумой зарегистрировано не было. В 7 природных очагах Кавказского горного региона ( Центрально -Кавказском, Присеванском, Иорском, Дагестанском высокогорном) заболеваний чумой также выявлено не было, а в 5 других ( Ленинаканский, Зангезуро - Карабахский,

Приараксинский, Кобыстанский и Мильско - Карабахский ) выявлен редкие спорадические случаи заражения людей и они отнесены к груп очагов с низкой эпидемической активностью. Среди природных очаге расположенных в Средне - Азиатском горном регионе имеются эпидемичес неактивные ( Алайский, Таласский ), обладающие низкой ( Аксайски Гиссарский ) и средней ( Сарыджанский, Верхненарынский ) эпидемии* кой активностью. В Средне - Азиатском пустынном регионе в 5 природн) очагах ( Зааральском, Копетдагском, Муюнкумском, Таукумском, Бетп

- Долинском ) эпидемических случаев чумы у людей установлена, е отмечена низкая ( Устюртский, Северо - Приаральский, Прибалхашски] и в 6 средняя ( У рало - Эмбенский, Предустюртский, Мангышлакск! Приаральско -Каракумский, Каракумский, Кызылкумский) эпидемичес! активность. В регионе Северного Прикаспия эпидемические проявле} чумы не были отмечены в 1 природном очаге ( Терско - Сунженском) природный очаг ( Дагестанский равнинно - предгорный ) обладал низк 1 средней ( Прикаспийский песчаный ) и 4 высокой ( Прикаспийский Сев!

- Западный, Волго - Уральский степной, Волго - Уральский песчаны! Зауральский ) эпидемической активностью. К очагам с высокой эпидемии кой активностью относился, до уничтожения сурков-тарбаганов , и Заб кальскин природный очаг чумы.

При этом, из 9195 больных выявленных на энзоотичной по ч территории, в И природных очагах с малой эпидемической активное зарегистрировано 833 (9,0%), в 9 очагах со средней эпидемической ак' ностью 867 (9,4%) и в 5 очагах с высокой эпидемической активностью 7 (81,6%) случаев заболевания чумой людей.

Изучение социальных и биологических особенностей в очагах, отли' шихся по эпидемической активности, показало следующее. Отсутство! прямая связь с плотностью постоянного населения. Так в 18 очагг неустановленной эпидемической активностью плотность населения кол лась от 11,2 до 411,1 чел/км2; в 11 с низкой от 2,1 до 232,0 чел/ км2; в средней от 1,6 до 40,5; и в 5 с высокой эпидемической активностью от 4, 87,6 чел/'км2. Не удалось установить зависимости и с количеством вре ного населения. Так по данным Ю.В.Руденчика с соавторами (1985 средняя численность населения, подвергающаяся повышенному риску з жения чумой, в горных очагах в 5-10 раз выше чем в равнинных. Одн за указанный период эпидемические проявления были зарегистрирова 9 из 21 горного и в 16 из 22 равнинных природных очагов чумы.

На протяжении всего рассматриваемого периода, в целом в СНГ отдельным очагам ( со средней и высокой эпидемической активност прослеживалась связь повышения числа заражений людей в природе снижения с соответствующими изменениями эпизоотической активы

чумы, а также с некоторыми особенностями иаразитобиоценозов природных очагов. Но одна только эпизоотическая активность не определяла числа заражения людей в природе. Из 7 природных очагов чумы, характеризовавшихся постоянной и высокой эпизоотической активностью, в 2 очагах эпидемических проявлений чумы не было выявлено совсем, в 2- была зарегистрирована низкая эпидемическая активность без антропонозного распространения чумы, а в 3 - средняя степень эпидемической активности с локальным распространением инфекции среди населения.

При изучении особенностей штаммов возбудителя чумы, изолированных в природных очагах различного типа , было установлено, что варианты чумного микроба (сурчиный, сусликовый и песчаночий) , не разлагающие рамнозу и вирулентные для морских свинок, циркулируют в природных очагах с различной степенью эпидемической активности, а зараженный ими человек становится опасным для окружающих, в результате чего часто следует антропонозное распространение инфекции. В отличие от них, рамнозопозитивные, авирулентные для морских свинок штаммы (пол-евочьей и пищуховой разновидности) возбудителя чумы выявлены только в тех очагах, где эпидемические проявления чумы установлены не были, либо в тех, где была зарегистрирована низкая эпидемическая активность и не установлены случаи передачи чумы от человека к человеку. Эпидемическая активность природных очагов была связана также со своеобразием их биоценозов, а также с особенностями экологии носителей и переносчиков чумы. Высокая эпидемическая активность была отмечена в тех природных очагах, где основными носителями являлись зимоспяшие грызуны (сурки и суслики), а в осенний период, как правило, к эпизоотическому процессу подключались мелкие (полуденные и гребенщиковые) песчанки и домовые мыши.

Определяющее значение в эпидемической активности природных очагов чумы имел характер контакта населения с их паразитобиоценозами.

В связи с этим, нами были рассмотрены обстоятельства заражения людей в природных очагах чумы СНГ.

Из 753 зарегистрированных случаев заражения людей в дикой природе в 369 (48,4%) обстаятельства заражения не ясны. Но известно, что в течение инкубационного периода больные чумой находились на эпизоотийной территории в тесном контакте с паразитоценозом очагов (сельскохозяйственная, иная трудовая или экспедиционная деятельность без должных мер предосторожности). Обстоятельства 394 (51,6%) случаев заражения людей в природных очагах установлены. Среди них 32,2% случаев связаны с промыслом основных носителей (сурков и малых сусликов); 26,7% - с эпизоотиями в осенне-зимний период среди синантропных грызунов (домовых мышей); 18,3% -с укусами блох основных носителей (в подавляющем

случаев больших песчанок); в 11,4% - с вынужденным забоем и разделке больных верблюдов; в 9,1% - с сельскохозяйственными работами (убо кой сена и кумарчика) во время эпизоотий среди мышевидных и в 2,3% с промыслом случайных носителей (зайцев, лис, сайгаков и др.).

В природных очагах с высокой эпидемической активностью установлен обстоятельства 285 заражения людей в природе. При этом в очагах Севе ного Прикаспия заражения людей в природе отмечались в осенне-зимш период во время миграции синантропных мышей из открытых стаций жилье человека (43,2%), в весенне-летний период во время промыс. сусликов (40,2%), летом во время сенокоса и уборки кумарчика на фо; эпизоотий среди грызунов (8,7%) и летом-осенью в результате вынужденн го забоя и разделки больных чумой верблюдов (7,9% всех случаев зараж ний). Напротив, в Забайкальском природном очаге чумы все установленш случаи заражения людей чумой в дикой природе происходили в лети осенний период во время охоты на сурков-тарбаганов (их разделки, употре ления в пищу) или раскопок их нор (бутанов) с целью добычи спяпн грызунов. Единственное исключение в этом очаге составил случай зараж ния человека при промысле даурского суслика (после уничтожения тарб ганов).

В равнинных природных очагах со средней эпидемической активносп установлены обстоятельства 99 случаев заражения людей в природе. Бол шинство из них связано со случайной встречей с основными носителями укусами их инфицированных блох (49,4%). В этих природных очаг значительную роль играл также вынужденный забой больных верблюд (26,3%) и охота на случайных носителей - лис, зайцев, сайгаков (9,1%)

В природных очагах с низкой эпидемической активностью из 24 зареп трированных случаев эпидемических проявлений обстоятельства заражен: первых больных известны лишь в 10, что затрудняет определение основн! обстоятельств заражения людей чумой.

Таким образом, эпидемическая активность природных очагов чуг связана как с биологическими, так и с социальными факторами. К первь из них относятся характеристика вирулентности штаммов чумного микро и особенности эпизоотических проявлений чумы в природных очагах, вторым - характер деятельности, условия жизни и уровень специализирова ного санитарно-гигиенического и лечебено-профилактического обеспечен населения. Так, в природных очагах, где циркулируют высоковирулентн; для морских свинок рамнозонегативные штаммы возбудителя чумы, основные носители инфекции являются объектом массового целенаправле ного поиска (промысла) для населения, либо больные синантропные гры: ны сами активно мигрируют к жилью человека, при недостаточном санита но-эпидемиолошческом обеспечении регистрируется высокая эпидемич<

кая активность. В тех природных очагах, где циркулируют высоковнрулен-тные для морских свинок рамнозонегативные штаммы чумного микроба, но основные носители либо не являются объектом промысла, либо в их промысле учавствуют ограниченные группы люден, регистрируется, как правило средняя и низкая эпидемическая активность. В природных очагах, где в основном циркулируют слабовирулентные пли авирулентные для морских свинок рамно.чополитивные штаммы возбудителя чумы ( возможно, и другие слабовирулентные варианты чумного микроба), а основные носители не являются объектом промысла населения, регистрируется низкая эпидемическая активность или ее отсутствие.

В снижении эпидемической активности природных очагов, помимо влияния биологически глобальных факторов, определяющее значение играет направленная социальная деятельность человека, выражающаяся в оправданном антропогенном воздействии на ландшафты и окультуривании земель, а также в проведении целенаправленных профилактических и противоэпидемических мероприятий.

Так. при сравнении эпидемических проявлений чумы за период с 1990 по 1994 год в энзоотичных по этой болезни странах и исключив страны с максимальной заболеваемостью (Индию н Китай) установлено, что за приблизительно одинаковое число эпидемических лет (э.л) в СНГ (86 э.л) было выявлено 9955, в Индонезии (54э.л) - 271849, в Бирме (90 э.л) - 190029, во Вьетнаме (68 э.л) - 45995, в ЮАР (66 э.л) - 44267, на Мадагаскаре (96 э.л) - 43943, в Кении (69 э.л) - 26864, в Эквадоре (73 э.л) - 12342 и в Перу (91 э.л) - 26887 случаев чумы. При этом следует отметить, что до конца XIX века ( создание противочумной службы в 1897 г), Россия была одним из мировых лидеров по заболеваемости чумой (табл.2).

Таблица 2

Изменение характера распространения чуыы з странах СНГ в 1875-1994 гг.

Показатели 1375 1884 1885 1694 1895 1904 1905 1914 1915 1924 1925 1934 1935 1944 1945 1954 1955 1964 1965 1974 1975 1984 1985 1994

Число заражений от носителей и переносчиков 4 7 10 116 114 309 60 47 35 28 10 12

Число больных чумой приходя*, на один случай заражения в природе 171,2 7,8 77,2 27,2 23.0 7.2 5,8 8,0 2,3 2.6 1.09 1,0

Эффективность противоэпидемических мероприятии, выражающаяся 170-кратном снижении антропонозного распространения чумы за анализ руемый период представлена в таблице 2, а эффективность профилактнче ких мероприятий, направленных на снижение риска заражения людей дикой природе ( при сохраняющейся эпизоотической активности в прир дных очагах) за последние 50 лет наблюдения на рисунке 4.

Рисунок 4

Динамика проводимых профилактических мероприятий в природных очагах чумы

Следует однако отметить, что начиная с 1993 года, значительно сокр; лась площадь распашки земель и степень антропогенного прессинга на в регионе Северного Прикаспия , с чем связано увеличение численно грызунов-носителей чумы. В связи с этим, эпидемическая обстановка з; может резко обостриться, что подтверждают неоднократные случаи выд ния чумы от домовых мышеи в населенных пунктах осенью 1995 года.

В Забайкальском природном очаге начато восстановление численн тарбаганов, что без должного контроля со стороны противочумных уч| дений может привести к восстановлению эпизоотических проявлений на; животных.

Таким образом, установлено, что на региональной соцэкосистеу уровень эпидемического процесса при чуме влияют как биологические и социальные факторы, в комплексе определяющие различную эпидем! кую активность в конкретных природных очагах.

В связи с этим требуется коррекция тактики использования сущест щих в настоящее время методов обследования природных очагов и и

цлактпки чумы с учетом неравнозначности эпидемической опасности конкретных энзоотнчных территорий для населения.

Глава 5. Изучение некоторых фено- и генотнпических особенностей штаммов возбудителя, изолированных в природных очагах и оценка возможностей совершенствования индикации и идентификации чумного микроба при полевой диагностической работе.

Эпнзоотологнческое обследование является существенной частью эпидемиологического надзора за чумой, а также изучение биологической подсистемы эпидемического процесса на экоснстемном уровне. Оно базируется, в основном, на результатах изучения фенотипических маркеров бактерий с помощью бактериологического (и биологического). атакже серологического исследования грызунов, эктопаразитов, некоторых объектов внешней среды. Результаты эпнзоотологического обследования, как и при других зоонозных болезнях, отражают не полную картину событий, а только ее часть, соответствующую разрешающей способности использованных методов диагностики болезни.

В связи с изложенным, дальнейшее совершенствование методов диагностики. может основываться на выявлении у бактерий чумы надежных генетических маркеров, сохраняющихся постоянно и обеспечивающих выявление возбудителя в его различных экологических нишах.

При бактериологическом исследовании проб, добытых при эпизоотическом обследовании природных очагов чумы (внутренних органов животных, суспензий эктопаразитов, почвы и т.п.) посевы культур нередко оказываются загрязненными сопутствующей микрофлорой, значительно затрудняющей выделение возбудителя чумы. По нашим данным за 1985-1994 гг. только в природных очагах Северного Прнкаспия сопутствующей микрофлорой (стафилококки, стрептококки, кишечная палочка, вульгарный протей, сальмонеллы, плесень) было контаминировано от 20 до 81% проб подозрительного на чуму материала.

В связи с этим, нами был проведен поиск естественных маркеров резистентности у бактерий чумы, использование которых способствовало бы выделению возбудителя из смешанных культур.

При изучении 17 лекарственных препаратов и их комбинаций было установлено, что к 8 из них бактерии чумы имеют естественно детерминированную резистентность хромосомной локализации, что подтверждено контрольными посевами бактерий чумы, утративших собственные плазмиды. Среди 8 препаратов, наиболее эффективными ингибиторами различных родов бактерии часто сопутствующих чумному микробу оказались антибиотики фосфомицин (50 мкг мл), эритромицин (8 мкг мл), олеандомицин

(8 мкг/.чл), а также химические вещества теллурнт калия (1:400 тыс.) бриллиантовый зеленый (1:1 млн). Эти препараты, добавленные в указа ных концентрациях и различных сочетаниях к агару Хоттингера рН 7,2-8 обеспечили конструирование двух селективных сред. Среда ФЭТ-зелен (фосфомицин, эритромицин, теллурнт калия и бриллиантовый зеленый) влияла на ростовые качества чумного микроба, но подавляла рост вульгз ного протея, кишечной палочки, шнгелл, сальмонелл, стрептококков, с филококков, плесени. Среда ФТ-зеленая (фосфомицин, теллурнт калия бриллиантовый зеленый) в отличие от первой среды не подавляла рос кокковой микрофлоры. В экспериментах по оценке эффективности ce.is цин, на пластинки агара Хоттингера с соответствующими добавками (Ф* и ФТ) высевали Ю2КОЕ бактерий чумы н Ю6КОЕ сопутствовавшей мнкро лоры по отдельности и в различных сочетаниях. Селективные качест сконструированных сред испытали в 33 экспериментах, связанных с высев разведений перечисленных выше культур микроорганизмов, при изучен экскретов (мочи, кала) 225 зараженных чумой белых мышей, 19 мал! сусликов, а также мазков отпечатков органов забитых и погибших от чу; (в том числе 100 загнивших) животных. Во всех случаях удалось, практически свободных от посторонней микрофлоры пластинках ага] выделить возбудитель чумы (не менее 30% от внесенных в пробы бактер чумы). В контрольных экспериментах на слабощелочном (рН 7,2) агар генцианвиолетом отмечался обильный рост посторонней микрофлоры, ь правило, полностью подавлявшей бактерии чумы.

В связи с тем, что штаммы возбудителя чумы неоднородны по куль ральным, биохимическим, ферментативным, питательным потребностям также по наличию собственных плазмид, нами было проведено изуче! ростовых качеств на сконструированных селективных средах 192 штам> чумного микроба, изолированных от людей, носителей, переносчиков, объектов внешней среды различных очагов всех частей света. Резульп исследований показалии, что 191 штамм обладал соответствующими структивным требованиям ростовыми качествами. Исключением явля. вакцинный штамм ЕВ, бактерии которого не вырастали на плотных сред содержавших даже самые низкие концентрации фосфомицина.

В течение 1991-1992 года в полевых отрядах Астраханской и Уральа противочумных станций были проведены испытания селективных с; ФЭТ-зеленая и ФТ-зеленая (исследовано 850 грызунов и 1800 эктопара тов) при посевах отпечатков органов, суспензий органов и эктопаразит Испытания показали, что на среде с генцианвиолетом, обычно применяем при эпизоотологическом обследовании, рост посторонней микрофлс отмечался в 77% , а на средах с добавкой фосфомицина в 15% случг Причем на опытных средах, в отличие от контрольных, рост посторон

микрофлоры был крайне скудным, что облегчало просмотр посевов. При испытании в Прикаспийском лес чаном очаге, на среде ФТ-зеленая было выделено на 3 культуры возбудителя чумы больше (17 штаммов), чем на контрольной (14 штаммов) среде с генцпанвиолетом.. Интересно, что в двух случаях, возбудитель чумы был выделен только из желчного пузыря малых сусликов, что свидетельствует в пользу возможного хронического носнтель-ства этой инфекции при алиментарном заражении грызунов.

Изучение фенотипической и генотиппческой неоднородности популяции штаммов возбудителя чумы, было проведено на примере культур, выделенных в различные периоды эпизоотической активности природных очагов Волго-Уральского междуречья, относящихся к группе очагов с высокой эпидемической активностью.

Ландшафтные условия, а также характер жизнедеятельности основных носителей и переносчиков в этих очагах имеют существенные различия. В Волго-Уральском степном очаге (ВУС) основным носителем и хранителем инфекции является малый суслик, в Волго-Уральском песчаном (ВУП) основной носитель -полуденная песчанка. Результаты изучения 300 штаммов возбудителя чумы, выделенных специалистами Уральской противочумной станции за период с 1967 по 1992 год показал, что среди них имеются варианты с ослабленной вирулентностью для лабораторных животных, неоднородные по экспрессии фенотнпических признаков кодируемых родо - и видоспецифнческимн плазмидамн (cad,pst,fra), способности абсорбировать краситель из среды культивирования (psb), а также имеющие особенности питательной потребности в дополнительных факторах роста (arg,leu). Изменения по всем, и в отдельности по каждому из перечисленных признаков, для облегчения исследований считали показателями «атиппчности» штаммов возбудителя чумы. Данные, представленные в таблице 3, свидетельствуют о том, что частое выявление «атипичных» штаммов в природных

Таблица 3

Характеристика зггаммов чумного микрс5а, изолированны s Волго-Уральском междуречье по фенотгагаческим прианакам.

! Показатели з S от 210 изученных штаммов зоз-[ будителя чумы ВУП ВУС

Всего атипичных и ииеших популяционную

неоднородность от числа изученных 51 61

49 59

...... в том числе от переносчиков 51 41

Штаммов авирулентных и с ослаЗлеаной 50

Еирулентасстыо 24

Штаммов Cad" л гетерогенных по этому

признаку 53 51

SiTavMoB Psb" и гетерогенных з по этому

признаку 49 49

Штаммов Fra" и гетерогенных в пс этому

признаку 7 9

Штауыов Fst" и гетерогенных в по зтсму 21 23

признаку

Примечание: "ВУП" - Волго-Уральский песчаник очаг изучено 150 втаммов "ВУС" - Вслго-Уральскии степной очаг изучено 60 птаммов

очагах (от 51 до 61% среди всех изученных) не позволяет считать таковыми. Видимо это бычное явление, эпизоотологнческое и эпндемио; гпческое значение которого до настоящего времени не установлено.

Анализ материалов о выделении атипичных по перечисленным вы признакам штаммов и штаммов с повышенной гетерогенностью популяц в разные периоды эпизоотической активности позволил установить преобладание (р<0,01) в ВУП в период спада активности. В ВУС чис таких штаммов было самым большим в период начала активности снижалось в период пика и спада (р<0,002). Не исключено, что тар показатели, в дальнейшем смогут являться прогностическими и исполь. ваться в практической работе противочумных станций.

Для получения дополнительных сведений, нами был проведен скрннн электрофорез плазмид у культур, 300 штаммов чумного микроба изолн] ванных в Волго-Уральском степном (ВУС) Зауральском степном (ЗУС Волго-Уральском песчаном (ВУП) природных очагах Северного Прик пня. Результаты исследований показали, что наряду с бактериями обла. ющими тремя основными плазмидами возбудителя pPst, pCad и pFra природных очагах выявляется до 14,3 % штаммов имеющих отличие по эт характеристике. Кроме основных плазмид, дополнительные криптичеа репликоны молекулярной массой 30 МД содержат 5,7%, а м.м. 70 МД 1, изученных культур. В то же время среди изученных были выявлены штаммов возбудителя утративших pPst, 1,3% - pCad, 1% - pCad и pFra, 0, pPst и pCad и 0,3% - утративших pFra. При этом следует иметь в виду, ' в отдельных случаях отсутствие собственных плазмид возбудителя в ав номном состоянии может быть связано не с элиминацией репликонов, а с интеграцией в хромосому возбудителя.

Обращает на себя внимание тот факт, что дополнительные криптичеа плазмиды были выявлены у штаммов возбудителя выделенных толью Волго-Уральском песчаном очаге. Не исключено, что это связано с особ ностями паразитобиоценозов очагов и сможет служить дополнителы территориальной меткой выделенных штаммов.

Для проверки возможной интеграции плазмид чумного микроб; хромосому использовали 143 свежевыделенных в Волго-Уральском меж речье штаммов чумного микроба, используя для этого параллельно , метода - скрининг-электрофорез плазмид и ДНК / зондирования с cooti ствующими родо- и вндоспецифическими зондами.

Полученные при молекулярном зондировании результаты, при сраЕ нин с методом выявления плазмид чумного микроба скрининг-электрофс зом, свидетельствуют, что при выявлении плазмид на скрининг-электрод резе всегда отмечается соответствующий положительный сигнал в реаю молекулярной гибридизации. В то же время, отсутствие плазмидной пол(

при электрофорезе не всегда сопровождается отсутствием генов, кодируемых данным репликоном и выявляемыми методом генного зондирования. Так, у штамма чумного микроба X 128, выделенного от блох гребенщиковой песчанки, при электрофоретическом исследовании отсутствовали плазмиды рРга и рСас!, однако образцы давали положительный сигнал при гибридизации с зондами Р1 и С1. Такой же результат был получен при исследовании штаммов 115 и 117, выделенных от малого суслика и блох малого суслика. Штамм 151, не содержал по данным электрофореза плазмиды пестициноген-ности, вто же время при молекулярном лондпрованнн давал положительный сигнал с зондом Р1, выявляющим ген фнбринолизина. У штамма 186, при электрофорезе отсутствовала полоса, соответствующая плазмпде рРга, тогда как выявлялся положительный сигнал с зондом Р1. Аналогичную картину регистрировали еще у 19 выделенных в природе штаммов чумного микроба.

При клонировании штамма 1490 (получениеего бесфракционного производного) по данным электрофореза произошла элиминация плазмиды рРга. однако сохранялся положительный снгнал с зондом Р1, что свидетельствует об интеграции автономного реплпкона в хромосому.

У всех штаммов, плазмидные репликоны которых были интегрированы в хромосомы бактерий, одновременно с этим явлением прекратилась фено-тнпическая экспрессия признаков, детерминируемых соответствующими плазмидами. Такое явление может иметь значение молекулярного регулятора взаимодействия бактериальных клеток с переносчиками и носителями инфекции на тканево-органном, организменном и локальном экосистемном уровне биологической подсистемы эпидемического процесса при чуме.

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ ВИДОСПЕЦИФИЧЕСКИХ ПЛАЗМИД ВОЗБУДИТЕЛЯ ЧУМЫ В ЕГО СПОСОБНОСТИ РЕАЛИЗОВЫВАТЬ РАЗЛИЧНЫЕ МЕХАНИЗМЫ ПЕРЕДАЧИ

ИНФЕКЦИИ

Проведенные исследования подтвердили, что лабораторные и дикие грызуны могут заражаться чумой не только при трансмиссивном, но и при аэрогенном, контактном (через поврежденные кожные покровы) и оральном введении возбудителя. Причем эффективность перечисленных способов заражения весьма высока. В среднем, учитывая невозможность определения показателя ЛД50 при трансмиссии, можно говорить, что при введении беспородным белым мышам возбудителя чумы, обладающего полным набором детерминант вирулентности, от генерализованной формы болезни при подкожном заражении погибали до 100 "о, при аэрогенном около 50 "о, при алиментарном до 89,3 % н при трансмиссивном около 30 % животных.

Впервые нами показано, что возможно не только оральное заражение

лабораторных и диких грызунов, но и реализация среди них фекаль: орального механизма передачи инфекции. Обеспеченность указанного ме нпзма передачи доказана экспериментальным подтверждением:

- высокой эффективности орального заражения грызунов от контами рованного чумным микробом корма, объектов внешней среды (подстилк банках из-под погибших от чумы зверьков) и при каннибализме;

- внедрения возбудителя в лимфоидную ткань по ходу пищеварительн тракта, преимущественно в глоточном кольце и илео-цекальном учас кишечника;

- развития специфических патоморфологических изменений в пищева тельном тракте грызунов и других органах.

- высокой вирулентности бактерий чумы при оральном введении (." для 6.мышей 1.9 х Ю'КОЕ, для п.песчанок 1,9хЮ7КОЕ и для м.сусли 2,2хЮ7КОЕ), соответствующей или превышающей аналогичные показат для других кишечных инфекций грызунов (сальмонеллезов и иерсинпоз<

- обильного выделения возбудителя из из организмов больных чу животных с фекалиями и мочой, а также инфицирования экскремент объектов внешней среды.

Подтверждает реальность существования фекально-орального расп транения чумы в природе и факт выявления при обычном эпизоотологн ком обследовании, но с использованием новой селективной среды, ма сусликов с наличием бактерий чумы только в содержимом желчного пуз[

Попавшие во внешнюю среду (в почву) бактерии сохраняются (при 6'С) в нестерильных условиях длительное время (15 мес. срок наблюден При этом установлено не нарастание или сохранение числа бактер! образцах почвы, а снижение концентрации возбудителя, особенно пос. х месяцев хранения. Следует также отметить, что при повышении темг туры хранения или снижении влажности в образцах, продолжптельн выживания бактерий во внешней среде резко сокращались (до 25 дней Г22-26)С). Поэтому в настоящее время есть основания считать объ внешней среды (в частности почву) не основным резервуаром сохран возбудителя, а случайным (фактор передачи инфекции).

Установлено также, что бактерии чумы, обладающие полным наб< детерминант вирулентности, при всех испытанных способах зараж белых мышей, полуденных песчанок и малых сусликов вызывали тяж' форму течения инфекционного процесса, как правило сопровождавш интенснвной, от 103 до 109 КОЕ/'мл крови, септицемией и высокой ле ностью (от 9,1 до 27,6% при трансмиссии, 75,2-89,3% при алиментарг 67,3-100% при подкожном заражении).

Следует отметить, что блохи оказались способными инфицироват при низких показателях бактеремии, начиная с концентрации 103 КО!

крови. Однако в этих случаях частота блокообразования у блох невелика. 1 укусы неблокнрованных блох обладали, в наших экспериментах, низкой инфекциозностыо и чаще вели не к проникновению возбудителя под кожу животных, а к обсеменению кожных покровов.

, Рвсунок 3

Летальность животных: сопровождаемая (А) и несопровождаемая (Б) бактериемией при разных способах заражения изогенными штаммами чумы.

подкоап«* :ирлженне ор.гльиое

заражение

И. II.

12 3 12 3 12 3

[лШк

12 3 12 3

И. I..

-а

□

Примечании. 1- вирулентные бактерии содержат младмиды и м. бмД., мЛ, 65 мЛ, 2 - отсутствует плазмида м м. 65 мД; ! - отсутствует плазмида м м 6 мД.

Вероятнее всего в таких случаях заражение грызунов происходило через поврежденные при расчесах кожные покровы животных. Однако уже при концентрации бактерий 104 КОЕ на 1 мл крови, эктопаразиты быстро заражались и у .5% из них наблюдалась закупорка преджелудка. С увели-

чением интенсивности бактериемии до 109 КОЕ мл также повышалас частота блокообразовання до 90%. Блокированные блохи более эффекта вводили бактерии чумы грызунам и число проб с проникшим под кс возбудителем увеличивалась до 60%.

Бактериемия у зараженных любым способом животных сопровождав выделением в 61,1% случаев бактерии чумы из организмов зверько экскретами (мочой и фекалиями). Таким образом, создавались условия дальнейшей реализации, как трансмиссивный (при наличии блох), та фекально-оральной (при отсутствии эктопаразитов) передачи чумы ср грызунов.

От 23 до 59% зверьков, выживших после орального и от 33 до 70% - пс трансмиссивного заражения, отвечали выработкой антител к мембран? белкам и капсульному антигену возбудителя. Несмотря на то, что ср выживших после орального заражения животных число грызунов раз! видов со специфическими антителами в крови было на Ю-20/o меньше, после трансмиссивной передачи, можно с уверенностью говорить, что ср выявленных в природных очагах серопознтивных зверьков имеются осс заразившиеся как тем, так и другим способом передачи инфекции.

Роль вндоспецнфических плазмнд н некоторых других элементов ген возбудителя чумы в реализации различных механизмов передачи, патоп за и иммуногенеза инфекции, а также в способности сохраняться бакте в объектах внешней среды изучались впервые.

Плазмнда м.м. 6 МД обеспечивала наиболее острое течение ннфекщ ного процесса, сопровождавшееся предагональной септицемией и высо летальностью при всех способах заражения лабораторных и диких жи ных. Отсутствие этого репликона, при наличии остальных детермин; приводило к снижению вирулентности бактерий чумы при аэроген заражении более, чем в 10 раз; при алиментарном в 10-100 раз н трансмнсснвном не менее, чем в 10 раз. При этом следует отметить, отсутствие продуктов, детерминируемых pPst мало влияло на блокообр ванне у блох (у ряда штаммов увеличивало, а у других уменьшало част блокообразовання), но всегда отрицательно сказывалась на развитии фекционного процесса после укусов эктопаразитов. Отсутствие плазм] пестициногенности при всех испытанных способах заражения взяты опыты лабораторных и диких грызунов снижало также интенсивш бактериемии и частоту развития генерализованных форм инфекцион! процесса, приводило к развитию подострых и хронических форм болез] поражением соответствующих механизму проникновения возбудителя р ональных лимфатических узлов и органов, а также в ряде случае выздоровлению животных. Среди выживших после заражения бактери утратившими pPst животных не отмечалось значительных изменений i

'.топки серопозптивных зверьков, в сравнении с аналогичными результатами на модели исходного полноценного штамма. Результаты введения шпрулентных вариантов возбудителя, содержавших одну лишь pPst или 1меющнх все детерминанты, кроме pPst+ и Psb+, также не свидетельствуют ) какой либо существенной роли плазмпды в иммуногенезе чумы и формировании специфической резистентности животных к возбудителю.Наличие ми отсутствие р Pst в клетках чумного микроба не влияло также на 1родолжительность сохранения возбудителя в объектах внешней среды.

Плазмида м.м. 65 МД обеспечивала клеткам чумного микроба, в сравне-«iii с вариантами лишенными этого репликона, лучшую способность к образованию блока преджелудка блох и. следовательно, более эффективною ( не менее,чем в 10 раз в сравнении с неблокированнымн блохами) реализацию трансмиссивной передачи инфекции. Отсутствие этой плазмиды / возбудителя приводила к более частому развитию подострых и хроничес-<пх форм болезни у более резистентных к чуме малых сусликов, но практически не влияло на эффективность орального заражения высокочув-ггвительных белых мышей и полуденных песчанок.

При алиментарном заражении малых сусликов показатель ЛД30 для лтаммов утративших pFra( 1,3х Ю9КОЕ ) был в 100 раз ниже,чем для исходного варианта (1,9хЮ7КОЕ). В целом, значение pFra в патогенезе пнфекцнн прослеживалось наиболее ярко на модели малых сусликов (более резистентных к чуме, чем белые мыши и полуденные песчанки), у которых на фоне снижения летальности, чаще развивались локальные и периферические патоморфологические проявления, соответствующие месту внедрения возбудителя в макроорганнзм, а также подострые, хронические клинические формы и выздоровление после болезни. Среди выздоровевших после заражения такими штаммами животных, от 41 до 50% особей отвечали выработкой специфических антител к мембранным белкам возбудителя. Естественно, что антнтел к капсульному антигену, детерминируемому плазмиде м.м. 65 МД, выявлено не было. В экспериментах по иммунизации белых мышей авнрулентными штаммами, содержавшими одну pFra и лишенными этой плазмиды было установлено, что наличие у бактерий чумы плазмиды м.м. 65 МД обеспечивает протектнвные свойства от вирулентного возбудителя, сохранившего все детерминанта вирулентности 80,2% зверьков, а от возбудителя, утратившего эту плазмиду 50% животных. Следует отметить, что введение вакцинного штамма ЕВ (обладающего, как известно, всеми детерминантами кроме Psb+) предохраняло, в аналогичных условиях 84,8% зверьков. Таким образом, подтверждена роль детерминируемых плазмндой pFra продуктов в формировании специфической резистентности жнвотных к чуме. Необходимо добавить, что и уровень прослойки серопозптивных зверьков среди иммунизированных бактериями содержавшими

одну ррга (57%) был близок к таковому для иммунизированных ЕВ (62/ При изучении сохранения возбудителя чумы в объектах внешней среды, было выявлено отличии показателен для штаммов, содержавших и утрат: ших ррга.

Плазмида м.м.45 МД, в подтверждение сведений многочисленных ли ратурных источников, в сочетании с признаком РэЬ+ обеспечивала патог ность чумному микробу при подкожном заражении. Однако нам не удал! воспроизвести трансмиссивной передачи таких бактерий. А вирулентно возбудителя, обладающего указанной характеристикой, для белых мыв при аэрогенном заражении (ЛД30 3,3.103 КОЕ) была в 10 раз ниже, че: варианта, утратившего одну плазмиду пестициногенностн (Л Д30 4х Ю4КОЕ 100 раз ниже, чем у бактерий лишенных одной ррга (ЛД<0 1 х 103 КОЕ) 1000 раз ниже, чем у бактерий сохранивших все три основные плазмид ЛД30 6,7x102). При алиментарном заражанпи была отмечена сход: тенденция.Однако вирулентность РэЬ+рСас! вариантов возбудителя . полуденных песчанок (ЛД50 2хЮ'КОЕ) и малых сусликов (ЛД50 1,7x1 была лишь соответственно в 10 и 100 раз ниже, в сравнению с пзогеннь вариантами возбудителя, обладавшими полным набором детерминант ви лентности (соответственно ЛД50 1,9хЮ7КОЕ). Во всех случаях отсутст двух видоспецнфических плазмид, при наличии одной родоспецифнческ после введения вирулентных возбудителей отмечали резкое снижение ост ты инфекционного процесса у грызунов, увеличение числа локалы поражений, удлинение средней продолжительности жизни заражен] грызунов, повышение числа стертых и хронических форм болезни, а та выздоровления от нее. Среди выздоровевших после заражения различи! методами зверьков, было выявлено от 33 до 50% особей, ответившн> введение моноплазмидного возбудителя выработкой антител к мембран! белкам. Такие показатели практически не отличались от аналогичн полученных после введения вакцинных штаммов. Последнее обстоятель< создает возможность направленного поиска вариантов чумного микр утративших ррга ( или с нарушением фенотипической экспрессии : плазмиды) в природных очагах чумы.

Таким образм установлено, что эпидемиологически важные свои чумного микроба выражающиеся в способности реализовывать разлн^ механизмы передачи инфекции (аэрогенный, трансмиссивный, контакт! алиментарный) связаны с наличием у него видоспецнфических плазмид 6 МД, и 65 МД. Изменения генотипа на молекулярном уровне, связаг с отсутствием у него одной или обеих видоспецнфических плазмид отр; ются, по крайне мере, на тканево-органном и организменных уро! биологической подсистемы эпидемического процесса.

В ЗАКЛЮЧЕНИИ подведены итоги работы и определены переспек'

льнейших исследований. Отмечено, что получение новых данных о ияшш социальных и биологических факторов на различные структурные овни (от молекулярного до глобального) биологической и социальной дсистем эпидемического процесса при чуме не только являются существен-[м вкладом в изучении особенностей природной очаговости и эпидемиоло-и этой инфекции, но могут быть использованы для оптимизации обследо-гельской и профилактической работы противочумных и других заинтере-занных учреждений, с учетом реальной значимости и опасности для селения конкретных энзоотичных территорий стран СНГ.

ВЫВОДЫ

1. Динамика регионального уровня заболеваемости и территориального спространения чумы в СНГ соответствовала изменениям в мире за весь эк ретроспективного поиска (с 1030 по 1994гг.), что свидетельствует о здействии на эпидемический процесс при чуме общих глобальных фактов.

2. В отличие от других Европейских стран, антропонозное распространив чумы в России было связано не только с межгосударственными юзами инфекции, но и с распространением чумы по основным транспор-э1М магистралям из собственных природных очагов.

3. В период третьей пандемии (с 1894 года) заболеваемость чумой в СНГ ла преимущественно обусловлена заражением людей в дикой природе и кальным антропонозным распространением инфекции среди них (9195 I. или 87,9% случаев). Следствием межгосударственных заносов в порто-е города было возникновение 1224 (11,7%) случаев чумы, а в лаборато-ях при диагностической работе чумой заразились 34 (0,4%) человека.

4. При анализе заболеваемости чумой в СНГ за последние 120 лет ■ановлено, что эпидемические проявления чумы не были выявлены в 18 из

автономных очагах чумы. Активность эпидемических проявлений в ,'гих 25 природных очагах чумы отличались по числу заражений в троде, количеству эпидемических лет, интенсивности антропонозного шространения инфекции. В связи с этим выделено 4 группы природных 1ГОв: очаги с невыявленной эпидемической активностью, низкой, средней ысокой активностью.

5. Эпидемическая активность природных очагов на региональном уровне зана с воздействием как биологических, так и социальных факторов. К 1вым из них относятся характеристика вирулентности штаммов чумного <роба и особенности эпизоотических проявлений в очагах, а ко вторым -»актер деятельности, условия жизни и уровень медицинского обеспечения еления.

6. На основании сравнения данных об эпидемической активности прирс дных очагов и некоторых особенностей у изолированных в них от носителе и переносчиков штаммов чумного микроба, среди глицеринопозитивны бактерий чумы, выделяемых в СНГ можно выделить две основные эпид( миологически значимые разновидности возбудителя чумы. К первой п них относятся высоковирулентные для морских свинок, рамнозонегативнь: штаммы, выделенные в очагах с различной эпидемической активностью. К второй - слабовирулентные и авирулентные для морских свинок, фермент1 рующие рамнозу бактерии чумы, являющиеся причиной редких, не сопрс вождающихся антропонозным распространением заражением людей в пр! родных очагах.

7. Среди изученных штаммов возбудителя чумы выделенных от носит лей и переносчиков в природных очагах Северного Прикаспия, у 10' штаммов родо-и видоспецифические плазмиды чумного микроба(по одно или две) были интегрированы в хромосому. Интеграция в хромосом сопровождалась прекращением фенотипической экспрессии соответствуй щих признаков. Выявлениетаких вариантов чумного микроба стало возмоя ным в результате использования в практике эпизоотического обследовани современных молекулярно-бнологических методов скрининг- электрофор за и молекулярного зондирования.

8. На основе штаммов возбудителя чумы 629 М, 358, 3577 и 6: сконструированы изогенные, генетически охарактеризованные и маркир' ванные варианты чумного микроба, отличающиеся по наличию собственна плазмид и признаку пигментсорбции, а также обладающие устойчивостью канамицину, что обеспечивает возможность изоляции бактерий из объекте обильно контампнированных сопутствующей микрофлорой.

9. При аэрогенном введении возбудителя чумы было установлено, ч-наиболее острую генерализованную форму болезни вызывают бактерш обладающие тремя основными плазмидами и признаком пигментсорбци: Утрата видоспецифических плазмид, а особенно плазмиды пестициноге: ности, приводила к резкому снижению вирулентности возбудителя, увел: ченшо средней продолжительности жизни больных зверьков и появлени локальных негенерализованных форм клинического проявления инфекци

10. При трансмиссивном заражении возбудителя чумы было показан что наиболее яркую клиническую картину, острое течение болезни высокую летальность обуславливает введение вариантов возбудителя, им ющих три основные плазмиды и обладающие признаком пигментсорбци Утрата обеих видоспецифических плазмид или рРга и признака пигме] сорбции приводила к прекращению трансмиссивной передачи чумы. Пр утрате одной из видоспецифических плазмид эффективность трансмисс1 снижалась. Это было обусловлено тем, что в отсутствии рРга резко сниж

ась частота блокообралованпя и, следовательно, ннфекциозность блох, а тнмннацня р Pst приводила к снижению вирулентности после проникнове-ия бактерий в макроорганизм и сопровождалась увеличением числа вяло гкущнх и хронических форм болезни.

11. Лабораторные и дикие грызуны эффективно заражались при ораль-ом введении возбудителя чумы. Бактерии проникали в организм через имфондную ткань по ходу пищеварительного тракта (преимущественно в лоточном кольце и илео- цекальнои области кишечника), вызывали специ-шческпе патоморфолсгическне изменения и выделялись в окружающую реду с фекалиями и мочой. Эффективность орального заражения и тяжесть ечения болезни были связаны с наличием видоспецпфическнх плазмнд [умного микроба. Их отсутствие приводило к возникновению частых вяло екущих н хронических форм болезни. На модели высокочувствительных 1елых мышей и песчанок для развития таких форм болезнен было достаточ-ю элиминации одной рPst. Роль pFra преимущественно проявлялась после >рального заражения более резистентных малых сусликов.

12. Вндоспецифическпе плазмиды возбудителя чумы находящиеся в штономном состоянии обеспечивают ему возможность более эффективной зеалнзацни аэрогенного, трансмиссивного п фекально-орального механизмов передачи инфекции,а также развитие острых генерализованных форм течения болезни. Наличие и отсутствие видоспецпфическнх плазмид не влияет на продолжительность сохранения возбудителя чумы в почве. Бактерии чумы сохраняются в нестерильной почве при температуре 4-б°С более 15 месяцев (срок наблюдения). При этом наблюдается не сохранение, 1 уменьшенне количества бактерий чумы в пробах.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Попов Ю.А., Проценко O.A., Аннснмов П.И., Кокушкнн А Можаров О.Т. Обнаружение плазмнды пестицнногенности чумного ми ба методом электрофореза в агарозном геле// Профилактика особо с ных пнф. — Саратов, 1980. — С.20-25

2. Проценко O.A., Аниснмов П.И., Можаров О.Т., Попов Ю.А., Koi кнн A.M., Коннов Н.П. Внехромосомная наследственность чумного ми ба Эпидемиология и профилактика природно-очаговых ннф. — С тов, 1981. - С.131-140

3. Проценко O.A., Аннснмов П.И., Попов Ю.А., Можаров О.Т., Ко кнн A.M., Коннов Н.П. Генетическая природа детерминанта синтеза г гена фракции 1// Совр.проблемы серологических исследований в пр дных очагах СССР. — Саратов, 1987. — С.24-26

4. Кокушкнн A.M. Трансформация чумного микроба ДНК собстве! плазмид/ Молекулярная биология и генетика возбудителей особо onai ннф. - Саратов, 1982. - ч.2. - С.34-40

5. Проценко O.A., Аниснмов П.И., Можаров О.Т., Коннов Н.П., П Ю.А., Кокушкнн A.M. Выявление и характеристика плазмид чу> микроба, детерминирующих синтез пестицина 1 и экзотоксина «мышиг токсина// Генетика, 1983. - т.XIX, N 7. - С.1081 - 1090

6. Кокушкин A.M., Можаров О.Т., Шведун Г.П., Шавина Н.Ю. Ко сформацпя, как метод, облегчающий идентификацию собственных пла чумного микроба/'/' Природная очаговость и эпидемиол.особо опа инф. - Саратов, 1983. - С.92-94

7. Попов Ю.А., Аниснмов П.И., Кокушкин A.M. Перспективы нее ваннй в микробиологии чумного микроба с использованием генной нн: рни. V Съезд Всесоюзного об-ва генетиков и селекционеров им. Н.И.Вав. (Москва, 24 - 28 ноября 1987) М., 1987, Тез.снмпознальных докладов - С.205.

8. Кологоров А.И., Васенин A.C., Рогаткин А.К., Кокушкнн . Кабин В.В., Кузнецов A.A., Козлова Т.А. Некоторые закономер эпизоотического процесса в Прикаспийских очагах чумы в 1975-1986 го

Тез. обл.научн. -практ.конф. «Итоги л перспективы профилактики опасных инф.» — Астрахань, 1989. — С. 8 — 9.

9. Марысаев В.Б., Кокушкнн A.M., Величко Л.Н., Кологоров

зережнов А.З., Товстуха Л.И.. Журавлев В.И., Пушкарев В.И. Результаты изучения плазмидного профиля штаммов чумного микроба, выделенных в 987 году на территориях курируемых Астраханской и Элистинской ПЧС

Тез. обл.научн.-практ.конф. «Итоги и перспективы профилактики особо >пасных инф.» — Астрахань, 1989. — С. 11 — 12

10. Топорков В.П., Кокушкин A.M., Васенин A.C., Бережнов А.З., <ологоров А.И. Об оптимизации эпидемиологического надзора за чумой ••

Природная очаговость, микробиол. и профилактика зоонозов. — Саратов,

1989. - С.9 - 16.

11. Величко Л.Н., Кокушкин A.M., Бережнов А.3. Исследование экскрементов зараженных чумой лабораторных животных, - Природная очаго-зость, микробиол. и профилактика зоонозов. — Саратов, 1989. — С. 76 — 77.

12. Кокушкин A.M., Величко Л.Н., Бережнов А.З., Марысаев В.Б. Результаты изучения подкожного и алиментарного методов заражения белых мышей штаммами чумного микроба, отличающимися по плазмидному профилю//Природная очаговость, микробиол и профилактика зоонозов. - Саратов, 1989. - С.76 - 77

13. ГуровЮ.В., Васенин A.C., Кокушкин A.M., ХотькоН.И., Свистунов В.М., Бережнов А.З. К механизму трансмиссивной передачи возбудителя чумы и формированию неспецифнческой резистентности макроорганизма/

Тез.докл. XII Всесоюзн.конф. по природной очаговости болезней (10-12 октября 1989 г., Новосибирск) - М., 1989. - С. 51 - 53.

14. Попов Ю.А., Булгакова Е.Г., Шишкина О.Г., Куличенко A.A., Кокушкин A.M., Лежнев А.И., Федотов Э.А., Величко Л.Н., Донская Т.Н. Разработка ДНК-зондов для идентификации возбудителя чумы / / Тез.конф. 29-30 мая 1990 г. «Разработка и пр-во преп.мед.биотехнол.» — Махачкала,

1990. - С. 22 - 23.

15. Величко Л.Н., Князева Т.В., Кокушкин A.M., Щербаков A.A. Антителообразованне у лабораторных животных в зависимости от способа заражения и плазмидного состава возбудителя чумы / /'Микробиол., биохимия и спецнф.профнлакт. карантинных инф. — Саратов, 1990. — С. 99 — 105.

16. Кологоров А.И., Кокушкин A.M., Васенин A.C., Бережнов А.З., Топорков В.П., Кушнерев Ю.Ф., Марысаев В.Б. Анализ эпидемических проявлений чумы с 1940-1989 гг..''-' Эпизоотол. и профилакт. особо опасных инф. в антопогенных ландшафтах. — Саратов, 1990. — С. 137 — 144.

17. Величко Л.Н., Белобородов P.A., Кокушкин A.M. О патогенезе и морфологии чумы у белых мышей при коннибалнзме//' Эпизоотол. и профилакт. особо опасных инф. в антопогенных ландшафтах. — Саратов,

1990. - С. 119 - 124.

18. Наркевпч М.И., Онищенко Г.Г., Наумов A.B., Федоров Ю. Кокушкин A.M. Роль противочумной службы в предупреждении и лш дацин эпидемических проявлений наиболее опасных инфекционных заб| ваннй в стране/ / ЖМЭИ, 1991. - N 10. - С. 22 - 25.

19. Наркевпч М.И., Онищенко Г.Г., Наумов A.B., Федоров Ю. Кокушкин A.M., Кологоров А.И., Бережнов А.З. Характер эпидемичес проявлений чумы в СССР за период с 1920 по 1989 гг/ / ЖМЭИ, 1991 N 12. — С. 31 — 33.

20. Кокушкин A.M., Величко Л.Н., Князева Т.В., Аниспмов П Мокроусова Т.В. Изучение роли собственных плазмид и признака пип тсорбцни в способности бактерий чумы инфицировать блох и вызывать у блокообразования // Природно-очаговые инф. и их профнлакт. — С тов, 1991.- С. 110 - 118.

21. Донская Т.Н., Салабуда М.П., Кокушкин A.M., Кушнерев Ю Марысаев В.Б., Попова Л.Н. Метод орального заражения эксперимент ных животных /' Природно-очаговые инф. и их профилакт. — Сара

1991. - С. 87 - 89.

22. Дмитрюк С.Д., Кокушкин A.M., Попов A.A., Федотов Э.А. Исп зованне генетических зондов для тестирования выделенных штаммов Y.p /'/' Генет.н биохим.вирулентности возбудителей особо опасных и: Матер.Рос.научн.конф. — Волгоград, 1992. — С. 151.

23. Кушнерев Ю.Ф., Кокушкин A.M..Донская Т.Н., Салабуда М Ибрагимов С.И., Корнеев Г.А., Бондарев В.А. Эффективность ораль; заражения чумой малых сусликов /'/' Проблемы особо опасных инф Саратов, 1993. - Вып. 3.- С. 47 - 57.

24. Салабуда М.П., Кокушкин A.M., ДонскаяТ.Н., Солодовников Н Плотников О.П., Амплеева Э.А., Кушнерев Ю.Ф., Ежов И.Н., Дро И.Г. Фосфомицин-селективный препарат, способствующий выделению буднтеля чумы из объектов, загрязненных посторонней микрофлоро! Проблемы особо опасных инф. — Саратов, 1993. — Вып.З. — С. 98 —

25. Онищенко Г.Г., Наумов A.B., Кокушкин A.M., Дроздов И.Г. За^ научно-методического обеспечения профилактических и противоэпид ческих мероприятий в отношении особо опасных инфекций// Проб;; особо опасных инф. — Саратов, 1993. — Вып. 1 — 2. — С. 4 — 9.

26. Величко Л.Н., Белобородов P.A., Кокушкин A.M. Особенн течения и патоморфологии экспериментальной алиментарной чумы у бе мышей и малых сусликов при заражении штаммами pFra ' / / Проб; особо опасных инф. — Саратов, 1993. — Вып. 1 — 2. — С. 73 — 79.

27. Кокушкин A.M., Величко Л.Н., Князева Т.В., Мокроусова Влияние концентрации возбудителя чумы на зараженность блох и блок

разованпе Проблемы особо опасных ннф. — Саратов, 1993. — Вып. 1

- 2. - С. 45 - 50.

28. Kokvlukhh A.M.,Донская Т.Н., Салабуда М.П., Кушнерев Ю.Ф., Чекашов В.Н., Щербаков A.A., Марысаев В.Б. Результаты дозированного орального заражения белых мы-шеи штаммами возбудителя чумы, отличающимися по плазмндному профилю / ' ЖМЭИ. — 1994. — N 2. — С. 15

- 20.

29. Попов Ю.А., Федотов Э.Л., Величко Л .Н., Куличенко А.Н., Донская Т.Н., Булгакова Е.Г., Лежнев А.И., Кириллина O.A., Шишкина О.Г. Детекция бактерии Yersinia pestis в органах животных н блохах методом генетического зондирования/ / ЖМЭИ. - 1.994. - .V 5. - С. 80 - 82.

30. Онищенко Г.Г., Кокушкнн A.M., Кологоров А.И., Касьян А.Ф., Донская Т.Н., Кушнерев Ю.Ф., Салабуда М.П., Марысаев В.Б., Наумов A.B. От чумы и холеры - границу на замок . / Гражданская защита. — Москва, 1994. - N 3, - С. 25 - Ж

31. Величко Л.Н., Кокушкнн A.M., Князева Т.В., Мокроусова Т.В., Марысаев В.Б. Применение аппарата для работы с инфицированными чумой блохами / /''Проблемы особо опасных ннф. — Саратов, 1994. — вып.4. — С. 3 — 28.

32. Кокушкнн A.M., Наумов A.B., Кологоров А.И., Марысаев В.Б. Эпидемическая активность природных очагов чумы в России и других странах содружества независимых государств за 120 лет - / Проблемы особо опасных ннф. — Саратов, 1994. — С. 3 — 28.

33. Кокушкнн A.M., Величко Л.Н., Князева Т.В., Белобородов P.A., Гордненко Т.Г., Пушкарев В.И., Денисенко Т.Н., Мокроусова Т.В., Буга-ков A.A., Вербин Ю.Н., Бочаев Б.М., Денисенко И.И. Некоторые особенности алнментарного заражения и проявление чумы у диких грызунов /'/' Проблемы особо опасных ннф. — Саратов, 1994. — вып. 5. — С. 23 — 31.

34. Величко Л.Н., Белобородов P.A., Кокушкин A.M. К патогенезу и морфологии чумы при алиментарном заражении животных штаммом, лишенным pPst 'Проблемы особо опасных ннф. — Саратов, 1994. — Вып. 5. - С. 75 - 84.

35. Величко Л.Н., Князева Т.В., Кокушкнн A.M., Белобородов P.A., Мокроусова Т. В. К вопросу о роли хромосомного маркера Psb возбудителя чумы при различных механизмах передачи инфекции ,/', Актуальн. проблемы профилактики особо опасных инф.болезнен. — Иркутск, 1994. — С. 21 — 22.

36. Кокушкнн A.M., Величко Л.Н., Князева Т.В., Гордненко Т.Г., Денисенко Т.Н., Денисенко И.И., Вербин Ю.Н. Взаимоотношения вариантов возбудителя чумы, отличающихся по плазмндному профилю с высоко-чувсвнтельными грызунами и их блохами / Матер.межгосуд.научн.кон.

«Профилакт. и меры борьбы с чумой». — Алматы, 1994. — С. 97.

37. Величко Л.Н., Кокушкнн A.M., Щербаков A.A. Антнтелообразс нне к мембранным белкам при иммунизации изогеннымн вариант чумного микроба // Матер, межгосуд. науч.кояф.<<Проф. и меры бор с чумой». — Алматы, 1994. — С. 82 - 83.

38. Величко Л.Н., Белобородов P.A., Кокушкин A.M. Патогенез чу> морфологические изменения при алиментарном заражении грызунов во днтелем чумы с различным плазмидным профилем 'Акт.вопр.проф.ч; и др.ннф.заболеваний. — Ставрополь, 1994. — С. 16 — 17.

39. Кокушкнн A.M., Величко Л.Н., Гордненко Т.Г., Мокроусова Т Вербин Ю.Н., Бочаев Б.М., Колесников В.Д., Денисенко И.И., Дмитр ко В.В. Реализация трансмиссивного механизма передачи дефектным] плазмидному составу штаммами возбудителя чумы в популяции ма сусликов //Пробл. особо опасных ннф. — Саратов, 1994. — вып.6. -Й - 17.

40. Величко Л.Н., Князева Т.В., Кокушкнн A.M., Гордненко Подсвнров A.B., Дмнтриенко В.В., Санджиев В.Б-Х. Заражающая спс ность блох песчанок для неспецефических хозяев в Северо-Запа; Прикаспин / 'Пробл. особо опасных инф. — Саратов, 1994. — Вып. i С. 18 - 24.

41. Величко Л.Н., Кокушкнн A.M., Князева Т.В., Мокроусова Длительное выживание возбудителя чумы, дефектного по плазмид] профилю в мертвых блохах / /Пробл.особо опасных инф. — Сар; 1994. - вып. 6. - С. 44 - 51.

42. Кокушкнн A.M., Величко Л.Н., Князева Т.В., Гордненко Мокроусова Т.В., Денисенко И.И., Подсвиров A.B. Зависимость инте! ности бактериемии животных от наличия плазмид у бактерий чумы Пробл. особо опасных инф. — Саратов, 1994. — Вып. 6. С. 94 — 10