Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Распространение желудочно-кишечных болезней телят, вызываемых ассоциацией рота-, коронавирусов и эшерихии коли, совершенствование их терапии и специфической профилактики

На правах рукописи УДК 6.3:^62-053.2

2 0 моп ' ;

ХАМДАМОВ АСЛИДДИН ШАРИФОВИЧ

РАСПРОСТРАНЕНИЕ ЖЕЛУДОЧНО-КИШЕЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ, ВЫЗЫВАЕМЫХ АССОЦИАЦИЕЙ РОТА-, КОРОНАВИРУСОВ И ЭШЕРИХИИ КОЛИ, СОВЕРШЕНСТВОВАНИЕ ИХ ТЕРАПИИ И СПЕЦИФИЧЕСКОЙ ПРОФИЛАКТИКИ

16.00.03 - ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

АВТОРЕФЕРАТ диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

Душанбе - 2000

Работа выполнена в лабораториях вирусологии научно-исследовательского ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяйственных наук и эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, член-корреспондент ТАСХН И. Т. Сатторов (Тадж НИВИ), доктор биологических наук Н. Л. Соколова (ВИЭВ)

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор, академик УААН П. П. Фукс (ИЭКВМ)

доктор ветеринарных наук Н. Я. Ярбаев (ТаджНИВИ)

Ведущая организация: Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт патологии, фармакологии и терапии РАСХН

Защита состоится "¿У "Х^ДХ 2000 г. в 10.00 часов на заседании диссертационного совета Д 220.02.01 при Таджикском научно-исследовательском ветеринарном институте по адресу: 734005, г. Душанбе, ул. Кахорова, 43.

Автореферат разослан "о/су&ТТЛ 2000 г.

Ученый секретарь диссертационного совета, кандидат ветеринарных наук

//

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Одной из важных задач ветеринарной науки и практики является значительное увеличение производства продуктов животноводства с целью более полного удовлетворения потребностей питания. В выполнении этой задачи решающее значение принадлежит сохранению и выращиванию здорового молодняка сельскохозяйственных животных.

Многочисленными исследованиями, проведенными за последние годы, было доказано, что важную роль в возникновении желудочно-кшпечных болезней молодняка крупного рогатого скота играют рота-, корона-, парво- и аденовирусы, эшерихии коли, сальмонеллы, пастереллы, криптоспоридии и др. (О. В. Богатыренко и др., 1976; С. А. Полякова, 1976; В. Н. Сюрин, Н. В. Сорокин, 1979; Г. Ф. Коромыслов и др., 1980; Н. Л. Соколова и др., 1982; М. М. Гоголев и др., 1982; О. И. Шарабрин, И. Г. Коромыслов, 1983; И. Т. Сатторов, 1984; Ю. К. Гробов и др., 1984; Ш. Вазиров 1992; К. М. Масимов, 1994).

Наряду с патогенными микроорганизмами в этиологии массовых диарей телят немаловажную роль играет влияние внешних факторов на естественную резистентность и иммунологическую реактивность организма (Ю. Н. Федоров, М. Ю. Горбунова, 1982; В. Т. Самохин, М. А. Сидоров, 1983; Р. X. Хамдиев, 1983).

Очень часто при болезнях новорожденных телят с симптомо-комплексом диареи трудно определить роль одного этиологического агента. В возникновении болезни могут участвовать вирусы бактерии и простейшие в ассоциации (Г. Ф. Коромыслов и др., 1980; Е. Г. Зароза, 1985).

В связи с этим одним из важнейших направлений современного научного поиска является совершенствование и разработка более эффективных комплексных средств и способов специфической профилактики и терапии смешанных желудочно-кишечных болезней телят.

Цель исследований; изучить распространение смешанных рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят в животноводческих хозяйствах республики, усовершенствовать средства специфической профилактики и терапии данных заболеваний.

Задачи исследований:

изучить распространение рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза, протекающих в ассоциации;

определить эффективность пошшммуногема в профилактике рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза, протекающих в ассоциации;

выявить возможности применения полииммуногема, ДС - 1100 и тимощша для лечения телят при диарее, вызываемой рота-, коронавирусами и эшерихией коли.

Научная новизна. Вирусологическими и бактериологическими исследованиями установлено, что в неблагополучных по диарее телят хозяйствах в этиологии болезни преимущественную роль играют рота-, коронавирусы и эшерихии коли, как в отдельности, так и в сочетании.

Разработан химиотерапевтический препарат ДС - 1100, который обладает антимикробной активностью. (Рац. предложение №4 от 14.02. 1998 г., заявка на патент РТ № 20000628, 22.09.2000 г.). Установлено, что применение ДС - 1100, полииммуногема и

тимоцина способствует выздоровлению 95,3% телят, больных рота-, коронавирусным энетеритом и колибактериозом, протекающими в ассощгащт (Рац. предложение №5, 1999 г.). Выявлено, что использование иммуностимулятора в тимоцина в комплексе с полинммуногемом и ДС - 1100 повышает эффективность лечения больных телят. Усовершенствован способ пассивной профилактики смешанных рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят (Рац. предложите №6, 1999; заявка на патент № 20000627, 22.09.2000 г.).

Практическая ценность работы. Использование полииммуногема ДС - 1100 и тимоцина в сочетании обеспечивает сохранность телят от рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза до 95 - 98%.

Результаты исследовашш вошли в Наставление по применению тимоцина (утв. ГУВ МСХ РТ, 1998), Наставление по применению комплексного антибиотика ДС - 1100 (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999) и Наставление по применешпо вакцины против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту:

данные изучения распространения смешанных рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят;

результаты изучения профилактической и терапевтической эффективности полииммуногема в комплексе с антибактериальным (ДС - 1100) и иммуностимулирующим (тимоцин) препаратами при рота-, коронавирусных энтеритах и колибактернозе, протекающих у телят в ассоциации.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета Таджикского НИВИ (1996 -2000 гг.), на республиканских и областных семинарах-совещаниях ветработников РТ (1997 - 2000 гг.), на заседаниях научно-технического совета по животноводству и ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук (1998 - 1999 гг.), на конференциях Таджикского аграрного университета в честь 75-летия академика Р. Г. Мустакимова (Душанбе, 1999 г.) и ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН в честь 30-летия института (Воронеж, 2000 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 125 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов, выводы, практические предложения, список литературы и приложение. Содержит 9 таблиц и 5 рисунков. Список литературы включает 216 источников. В приложении представлены документы, подтверждающие практическую ценность работы.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 1996 - 2000 гг. по отраслевым научно-техническим программам в лабораториях вирусологии Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института и эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота Всероссийского научно-

исследовательского института экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко.

Научно-производственные опыты проведены в хозяйствах Республики Таджикистан на 378 головах крупного рогатого скота, 36 кроликах и 64 белых мышах.

В работе использовали инакгивированную гидроокись-алюминиевую формолвакцину против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят, изготовленную в ВИЭВ; иммуностимулятор тимощш, разработанный ТаджНИВИ и МП "Занд", антибактериальный препарат ДС - 1100, изготовленный ТаджНИВИ.

Для индикации и идентификации рота-, коронавирусов и эшерихии коли использовали реакции гемагглютинащш (РГА), торможения гемагглютинащш (РТГА), которые ставили в микромодификации согласно рекомендациям по их применению (Н. Л. Соколова и др., 1987) а также реакции агглютинации (РА) и иммуноферментный анализ (ИФА).

В исследоваших применяли наборы для диагностики рота- и коронавирусных энтеритов методами гемагглютинащш и иммуноферментного анализа, разработанные ВИЭВ.

Видовую принадлежность бактериальных агентов, выделенных при исследовании патматериала, устанавливали по определешпо микроорганизмов Берги (1984) после изучения их морфологии, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств.

Бактериологическим и вирусологическим исследованиям подвергнуто 778 проб фекалий больных с клиникой диареи и павших

телят, сывороток крови и молозива крупного рогатого скота из 13 хозяйств республики.

Эпизоотическую ситуацию по рота-, коронавирусным энтеритам и колибактериозу телят в хозяйствах республики выясняли по результатам собственных исследований патматериала от больных животных и по данным ветеринарной отчетности.

Антибактериальную активность препарата ДС - 1100 и тимоцина по отношению к изученным бактериям определяли в опытах in vitro методом серийных разведений в жидкой питательной среде.

Минимальное количество препарата, дающее полную задержку роста культуры, соответствовало наименьшей его концентрации, и по нему определялась чувствительность микробов.

Полииммуногем получали от коров, гипериммунизированных против рота-, коронавирусов и эшерихии коли.

Профилактическую и терапевтическую эффективность полииммуногема, тимоцина и ДС - 1100 в экспериментальных и производственных условиях изучали на 369 телятах. Критериями оценки эффективности препаратов являлись заболеваемость телят с клиникой диареи, продолжительность и тяжесть заболевания и сохранность животных.

Бактерицидную активность сыворотки крови телят определяли по методу В. Г. Дорофейчука (1968) в модификации Н. Б. Бердиева (1996), лизощшную активность - по методу И. В. Смирновой и Г. А. Кузьминой (1966).

Расчет экономического эффекта проводили согласно методическим указаниям по определению эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденным ГУВ МСХ СССР в 1982 г.

Полученные результаты статистически обрабатывали с применением общепринятых в биологии методов (Г. Ф. Лакин, 1980).

2.2. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.2.1. Распространение рота-, коронавирусных энтеритов и колпбактериоза телят

Изучение эпизоотической обстановки, анализ данных бактериологических и вирусологических исследований 479 проб фекалий больных с клиникой диареи и павших телят и 299 сывороток крови, молозива коров из 13 животноводческих хозяйств Республики Таджикистан позволило установить, что желудочно-кишечные болезни телят, обусловленные рота-, коронавирусами и эшерихией коли, регистрируются очень часто.

В результате лабораторного исследования эшернхия коли обнаружена в 87 (18,2%), ротавирусный антиген - в 52 (10,8%) и коронавирусный антиген - в 34 (7,1%) случаях. В отдельных неблагополучных по инфекционным энтеритам хозяйствах рога-, коронавирусов и эшерихии коли диагностировали в 31,6% случаев.

При идентификации выделенных культур эшерихии коли в основном были выявлены серотипы 08, 026, 032, 086, 0101, 0117 и 0137.

Титр ротавирусных антигенов в ИФА достигал 10,0 log?. Гемагглютинины к коронавирусу в РГА (РТГА) обнаруживали в титрах 5,0 - 11,0 log2.

Из 479 исследованных проб патматериала ассоциации эшерихии коли, рота-, коронавирусных агентов в различных сочетаниях были выявлены в 7,8 - 13,2% случаев.

Сравнительный анализ частоты выявления инфекционных агентов в патологическом материале в разрезе отдельных хозяйств показал, что основными предрасполагающими и способствующими факторами в возникновении смешанных желудочно-кишечных болезней телят в 37,1% случаев являются нарушение зооветеринарных правил по своевременному запуску стельных коров, переводу их в родовые группы, приему телят в дезинфицированные боксы, правильной обработке новорожденных и кормлению их первой порцией молозива.

При исследовании проб сывороток крови и молозива коров в 88% случаев отмечали положительную сероконверсшо к рота-, коронавирусам и эшерихии коли.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о важной роли ассоциации рота-, коронавирусов и эшерихии коли в возникновешш диареи у телят.

2.2.2. Изготовление и контроль полшшмуногема против рота-, коронавирусиых энтеритов и колибактериоза телят

С целью получения полшшмуногема осуществляли гипериммунизацию 18 коров ассоциированной ГО АЛ формолвакциной против рота-, коронавирусиых энтеритов и колибактериоза телят.

Вакцину вводили трехкратно, подкожно в паховую складку в дозах 5, 10 и 15 мл. Одновременно с вакциной животным подкожно вводили иммуностимулятор тимощш в дозе 0,02 мл/кг. Вторую и третью иммунизацию осуществляли на 20 и 30-й дай после первого введения вакцины. Перед каждой иммунизацией у животных определяли титр специфических антител в сыворотке крови.

Результаты серологического исследования показали, что титр антител до иммунизации у коров к ротавирусу составлял 2,0 log2, к коронавирусу - 3,0 log2 и к эшерихии коли - 5,0 log2.

На 10-й день после первой иммунизации эти показатели достигали 5,0; 5,2 и 8,0 loga соответственно. Спустя 10 дней после второй и третьей иммунизации титр антител к ротавирусу составлял 7,0 и 9,0, к коронавирусу - 7,2 и 8,6 и к эшерихии коли -10,0 и 12,2 log2 соответственно.

Изучение физико-химических и биологических свойств полииммуногема показало, чгго препарат представляет собой жидкость темно-красного цвета, он стерильный и безвредный для лабораторных и сельскохозяйственных животных. Концентрация водородных ионов - 6,8 - 7,6. Количество общего белка достигало 9,2%. Титр антител к рота-, коронавирусам и эшерихии коли составлял 8,6; 9,0 и 12,0 log2 соответственно.

2.2.3. Антибактериальная активность препаратов ДС -1100 н тимощпга в опытах in vitro

Испытанию были подвергнуты разработанные нами совместно с МП "Занд" препараты ДС -1100 и тимоцин.

ДС - 1100 - комплексный препарат, в состав которого входят антибиотики, сульфаниламиды, витамины, обезболивающие и адсорбирующие вещества.

Тимоцин представляет собой 0,04%-иый водный раствор координационного соединения шхзкомолекулярного пептида, обладающего активностью тимозина , с цинком.

Проведенные исследоваши показали, что тимоцин в концентрации 100 мг/мл не проявил бактериостатического и

бактерицидного действия в отношешш эшерихии коли, пастерелл, сальмонелл, стрептококков и протей.

Препарат ДС - 1100 обладал антимикробной активностью в отношении изучаемых микробов. Бактериостатическая активность препарата проявлялась в концентрации 0,11 - 0,47 мкг/мл (табл. 1), бактери-цидная - 0,47 - 3,7 мкг/мл. Данные свидетельствуют, что к препарату наиболее чувствительными оказались пастереллы. Бактериостатическая активность препарата проявлялась в концентрации 0,11 мкг/мл. Среднечувствительным к препарату оказались эшерихии коли и протеи. Активность ДС - 1100 по отношению к ним составила 0,23, сальмонелам и стафилококкам - 0,94 мкг/мл.

При изучении бактерицидной активности препарата ДС - 1100 по отношению к наиболее распространенным в хозяйствах республики серотипам эшерихии коли (08, 026, 032, 086, 0101, 0117) было установлено, что препарат в концентрациях 0,23 - 3,7 мкг/мл задерживает рост и развитие всех данных серотииов.

На активность препарата не влиял состав питательной среды. В мясопептонном бульоне и гидролизате молока бактерицидная активность ДС - 1100 проявлялась одинаково в концентрации 3,7 мкг/мл.

Полученные данные свидетельствуют о том, что препарат ДС -1100 обладает выраженным антимикробным действием. Чувствительность эшерихии коли, пастерелл, сальмонелл, стафилококков и протей колеблется от 0,11 до 3,7 мкг/мл.

Бактерностатическая активность препарата ДС -1100

Таблица 1

Бактерии Мшпшалышя подавляющая кощентращш, мкг/мл Контроль

60 30 15 7,5 3,7 1,87 0,94 0,47 0,23 0,11 0,06

Эшерпхия коли - - - - - - - - - + + +

Пастереллы 1 " " 1 1 - 1 " I1 " 11 " 11 " ' 1" 1" Г 1 - 1 ' 1 ' + 1

* ' ^альдшпсллы1 - -

Стафилококк I - - - ; - - 1 •

| Протеи - - - - - - - - ___ + + +

Примечание: - отсутствие роста в питательной среде, + наличие роста.

2.2.4. Профилактическая эффективность полшшмуногема

при рота-, коронавирусных энтеритах и колибактернозе, протекающих у телят в ассоциации

В экспериментальных условшх эффекпшность иммунного препарата изучали на 45 новорожденных телятах, разделенных на 5 групп, по 9 голов в каждой. Животных содержали в отдельных профилакториях и в течение 20 дней за ними вели клиническое наблюдение.

Телятам первой и второй групп, полученным от неиммунизированных против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза коров, через 20 - 30 мин после рождения выпаивали по 3 мл/кг массы тела полииммуногем, затем один раз в сутки в течение 5 дней к выпаиваемому молозиву добавляли полииммуногем в расчете 4 и 6 мл/кг массы тела соответственно.

Телятам третьей группы, полученным от коров, иммунизированных ассоциированной ГОАЛ формолвакщшой против рота-, коронавирусных энтеритов, полииммуногем выпаивали через 20 - 30 мин после рождения из расчета 3 мл/кг массы тела. Затем па 3, 4 и 5-й дни к выпаиваемому молозиву добавляли два раза в день полииммуногем в дозе 4 мл/кг массы тела.

Телята четвертой и пятой групп служили контролем. При этом в четвертой группе онн были получены от коров, иммунизированных против указанных болезней, а в пятой группе - от неиммунизированных. Животные этих групп не получали полииммуногем.

Критериями оценки эффективности препарата являлись заболеваемость телят диареей, продолжительность болезни и их сохранность.

Результаты исследования показали, что среди телят первой группы рота-, коронавирусный энтерит и колибактериоз были отмечены в трех случаях, а среди животных второй и третьей групп выявлено по одному случаю. Заболевание у всех животных протекало в легкой форме диареи и продолжалось у телят первой группы 5, у телят 2 - 3-й групп - 3, 4 дня. Случаев вынужденного убоя и падежа больных телят не отмечали.

У телят четвертой группы с клиникой диареи заболело 2 (22%) теленка. Случаев падежа не отмечали.

В пятой группе диареей заболело 5 (55%) телят. Болезнь протекала тяжело и продолжалась 8 дней. Пало 38% больных телят.

Результаты вирусологического и бактериологического исследований фекалий подопытных телят показывают, что рота-, коронавирусные антигены и эшерихия коли, как в отдельности, так и в сочетании, больше всего обнаруживали у телят 5 группы (табл. 2).

Эффективность полшшмуногема в производственных условиях изучалась на 180 телятах в пяти неблагополучных по смешанным желудочно-кишечным инфекциям хозяйствах (табл. 3).

Данные свидетельствуют, что профилактическая активность полииммуногема в отдельности и в сочеташш с иммунным молозивом матери достигает 91,7 - 96,7%, сохранность - 100%. В контрольных группах эти показатели составили 68,4 и 71,9% соответственно.

Результаты исследования фекалий больных телят на наличие рота-, коронавирусных антигенов и эшерихии коли

Таблица 2

Возбудитель Количество положительных проб (в скобках - %)

1 группа 2 группа 3 группа 4 группа 5 группа

Ротавнрус 1 (11,0) 0 0 0 4 (44,0)

Коронавирус 0 1(11,0) 0 1(11,0) 4 (44,0)

Эшерихин коли 2 (22,0) 1 (11,0) 1(11,0) 2 (22,0) 5 (55,0)

Ассоциация рота-, 1(11) 0 1(11,0) 3 (33,0)

коронавирусных антигенов

и эшерихии коли

Эффективность полииммуногема в профилактике рота-, коронавнрусных энтеритов и колибактериоза телят

Таблица 3

Группа Количе- Всего Количество животных,

животных ство забо- у которых выявлены рота-,

живот- Препарат, доза лело, короиавпрусы Сохран-

ных, гол. и эшерихня коли, гол. ность,

гол. (в скобках - %) %

1 опытная 60 полииммуногем (4 мл/кг) 12 5 (8,3) 100

2 опытная 60 полииммуногем (4 мл/кг) + иммунное молозиво 4 2(3,3) 100

3 контрольная 60 - 48 19(31,6) 71,9

Экономический эффект от проведения мероприятий по профилактике рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза составил на рубл затрат 5,2 рубл.

Таким образом, полученные результаты свидетельствуют о том, что применение полииммуногема в комплексе с другими специфическими мероприятиями является наиболее эффективным в профилактике рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят.

2.2.5. Эффективность полииммуногема, ДС -1100 и тимоцина при лечении телят, больных рота-, коронавирусным энтеритом и колнбактернозом

В экспериментальных условиях сравнительное изучение эффективности комплексного лечения телят, больных рота-, коронавирусным энтеритом и колнбактернозом, полииммуногеном, ДС - 1100 и тимоцином показало их преимущество по сравнению с известными в ветеринарной практике препаратами (табл. 4). Данные свидетельствуют о том, что наилучший терапевтический эффект был получен при применении полииммуногема в дозе 4 мл/кг, ДС - 1100 -0,3 г/кг и тимоцина - 0,03 мл/кг массы тела.

Установлено, что с использованием иммуностимулятора тимоцина повышается бактерицидная и лизощшная активность сыворотки крови подопытных телят и сокращается срок лечения.

Известные препараты, применяемые при лечении больных телят контрольной группы, по эффективности уступали разработанным.

Производствйшые испытания терапевтической эффективности препаратов на 84 больных рота-, коронавирусным энтеритом и

Таблица 4

Эффективность препаратов полииммуногема, ДС - 1100 и тнмощша при лечении больных рота-, коронавнрусным энтеритом и колибактериозом телят

Группа Препарат Доза на кг Кол-во Из них Средний

животных массы тела живот- выздоровели срок

ных, лечения,

гол. гол. % дни

1 опытная полииммуногем + ДС -1100 2 мл+ 0,1 г 12 10 86,0 5,6

2 опытная fill 1111 4 мл + 0,3 г 12 11 91,7 4,8

3 опытная mi им 6 мл + 0,5 г 12 11 91,7 4,6

4 опытная полииммуногем + ДС - 1100 + тимоцин 4 мл + 0,3 г +0,03 мл 12 11 91,7 4,0

5 контрольная цитрированная кровь животных-реконвалесцентов + тетрациклин + регидрат + Т-активин 4 мл + 0,02 г + 30 мл + 0,02 мл 12 9 75,0 7,8

Примечание. Полииммуногем, нитрированную кровь, регидрат применяли внутрь один раз в день в течение 5 суток. ДС - 1100 и тетрациклин - внутрь два раза в день в теченбие 5 суток, тнмоцнн и Т-актнвнн - подкожно одап! раз в день в течение 5 суток.

колибактериозом телятах были проведены в 4 животноводческих хозяйствах республики.

Исследования показали, что терапевтическая эффективность разработанных препаратов при совместном их применении достигала 95,3%. Средний срок лечения больных телят составлял 4,1 дня. При лечении таких животных по схеме, принятой в хозяйствах, эти показатели были следующими: 78,6%; 7,0 дня соответственно.

Экономический эффект от проведения лечебных мероприятий на рубл затрат составил 2,8 рубл.

Полученные результаты позволяют заключить, что препараты полииммуногем, ДС - 1100 и тимоцин являются эффективными средствами для терапии больных рота-, коронавирусным энтеритом и колибактериозом телят. Результативность лечения при совместном их использовании выше, чем при раздельном применении.

ВЫВОДЫ

1. Вирусологическими и бактериолопиескими исследованиями установлено, что в возникновении желудочно-кишечных болезней телят важную роль играют рота-, коронавирусы и эшерихии коли в ассоциации. Заболеваемость новорожденных телят в 1996 - 1999 гг. на этом фоне составила от 13,2 до 31,6%.

2. Основными предрасполагающими и способствующими факторами в возникновении смешанных желудочно-кишечных болезней телят являлись нарушение зооветеринарных правил по своевременному запуску стельных коров, переводу их в родовые группы, приему' телят в дезинфицированные боксы, правильной

обработке новорожденных и кормлению их первой порцией молозива.

3. Разработанный химиотерапевтический препарат ДС - 1100 обладает бактериостатической и бактерицидной активностью по отношению к ряду патогенных микробов, выделенных из желудочно-кишечного тракта больных телят. Пероральное примените его в дозе 0.3 г/кг массы тела два раза в день способствует выздоровлению больных телят.

4. Из крови гипериммунизированных коров с помощью относительно простой и доступной технологии получен стерильный и безвредный полииммуногем против рота-, коронавпрусов и эшерихии коли. Титр специфических антител в нем достигает 8,6; 9,0 и 12,0 log2 соответственно.

5. Профилактическая активность полшшмуногема при применении в дозе 3 мл на 20 - 30-е минуты жизни и добавлении его к выпаиваемому молозиву один раз в сутки в дозе 4 мл/кг массы тела достигает 91,7%. Выраженное профилактическое действие (96,7%) полииммуногем оказывает при добавлешш его к выпаиваемому молозиву коров, иммунизированных ассоциированной вакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза.

6. Сочетанное применение полшшмуногема, препаратов ДС -1100 и тимоцина является более эффективным при лечении больных телят, чем раздельное. Терапевтическая эффективность такого использования указанных препаратов составляет 95,3%.

7. Применение иммуностимулятора тимоцина повышает бактерицидную и лизоцимнуто активность сыворотки крови больных телят и сокращает срок их лечения.

8. Проведение комплекса мероприятий по предотвращению попадания патогенной микрофлоры в пищеварительный тракт и пассивной специфической профилактике с помощью полииммуногема и иммунного молозива матери позволяет предупреждать заболеваемость телят рота-, коронавирусным энтеритом и колибактериозом и предотвращать их гибель.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Наставление по применению препарата тимоцин: Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан, 23.07.1998 г.

2. Наставление по применению ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят: Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан, 04.02.1999 г.

3. Временное наставление по применению препарата ДС - 1100: Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан, 04.02.1999 г.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сатторов И. Т., Хамдамов А., Бобиев Г., Махмудов К. Пути повышения сохранности молодняка сельскохозяйствишых животных. - Душанбе, 1997. - 2 с. - (ИЛ/ТаджикНИИНТИ); №124-97.

2. Сатторов И. Т., Махмудов К., Хамдамов А., Гоголев М. М., Соколова Н. Л., Шегидевич Э. А. Уровень гуморальных антител у коров, иммунизированных ассоциированной ГОАЛ формолвакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных.: Сб. науч. тр. ТаджНИВИ (1997 - 1998 гг.). - Душанбе, 1998. - С. 8 - 9.

3. Сатторов И. Т., Махмудов К., Ахмеджанова Л. М., Хамда-мов А. Роль микроорганизмов в возникновении пневмоэнтеритов телят. // Тез. докл. Респ. науч.-практ. конф., поев. 75-летшо акад. Р. Г. Мустакимова. - Душанбе, 1999. - С. 42 - 43.

4. Хамдамов А. Профилактика инфекционных энтеритов новорожденных телят // Тез. докл. Респ. науч.-практ. конф., поев. 75-летию акад. Р. Г. Мустакимова. - Душанбе, 1999. - С. 41 - 42.

5. Хамдамов А. Факторы, способствующие возшпшовению смешанных инфекций желудочно-кишечного тракта новорожденных телят // Тез. докл. Международной конференщш "Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и зашита их здоровья в современных условиях", поев. 30-летию Всероссийского научно-исследовательского ветершгарного института патологии, фармаколопш и терапии РАСХН. - Воронеж, 2000. -С.229-231

Подписано в печать 20.10.2000. Формат 60x84/16.

Бум. тип. Печать офсетная. Уч.-изд. л. 1,25. ПИО НПИ Центра, 734042, г. Душанбе, ул. Айнн, 14а

.Заказ 518.Тнраж 100

Актуальность темы. Одной из важных задач ветеринарной науки и практики является значительное увеличение производства продуктов животноводства с целью более полного удовлетворения потребностей питания. В выполнении этой задачи решающее значение принадлежит сохранению и выращиванию здорового молодняка сельскохозяйственных животных.

Многочисленными исследованиями, проведенными за последние годы, было доказано, что важную роль в возникновении желудочно-кишечных болезней молодняка крупного рогатого скота играют рота-, корона-, парво- и аденовирусы, эшерихии коли, сальмонеллы, пастереллы, криптоспоридии и др. (О. В. Богатыренко и др., 1976; С. А. Полякова, 1976; В. Н. Сюрин, Н. В. Сорокин, 1979; Г. Ф. Коромыслов и др., 1980; Н. Л. Соколова и др., 1982; М. М. Гоголев и др., 1982; О. И. Шарабрин, И. Г. Коромыслов, 1983; И. Т. Сатторов, 1984; Ю. К. Гробов и др., 1984; Ш. Вазиров 1992; К.П. Юров, 1999, Никешина и др. 2000).

Наряду с патогенными микроорганизмами в этиологии массовых диарей телят немаловажную роль играет влияние внешних факторов на естественную резистентность и иммунологическую реактивность организма (Ю. Н. Федоров, М. Ю. Горбунова, 1982; В. Т. Самохин, М. А. Сидоров, 1983; Н.С. Шевырев, 1999).

Очень часто при болезнях новорожденных телят с симптомо-комплексом диареи трудно определить роль одного этиологического агента. В возникновении болезни могут участвовать вирусы бактерии и простейшие в ассоциации (Г. Ф. Коромыслов и др., 1980; Е. Г. Зароза, 1985).

В связи с этим одним из важнейших направлений современного научного поиска является совершенствование и разработка более эффективных комплексных средств и способов специфической профилактики и терапии смешанных желудочно-кишечных болезней телят.

Цель исследований: изучить распространение смешанных рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят в животноводческих хозяйствах республики, усовершенствовать средства специфической профилактики и терапии данных заболеваний.

Задачи исследований: изучить распространение рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза, протекающих в ассоциации; определить эффективность полииммуногема в профилактике рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза, протекающих в ассоциации; выявить возможности применения полииммуногема, ДС - 1100 и тимоцина для лечения телят при диарее, вызываемой рота-, коронавирусами и эшерихией коли.

Научная новизна. Вирусологическими и бактериологическими исследованиями установлено, что в неблагополучных по диарее телят хозяйствах в этиологии болезни преимущественную роль играют рота-, коронавирусы и эшерихии коли, как в отдельности, так и в сочетании.

Разработан химиотерапевтический препарат ДС - 1100, который обладает антимикробной активностью. (Рац. предложение №4 от 14.02.

1998 г., заявка на патент РТ № 04.1035, 22.09.2000 г.). Установлено, что применение ДС - 1100, полииммуногема и тимоцина способствует выздоровлению 95,3% телят, больных рота-, коронавирусным энетеритом и колибактериозом, протекающими в ассоциации (Рац. предложение №5,

1999 г.). Выявлено, что использование иммуностимулятора в тимоцина в комплексе с полииммуногемом и ДС - 1100 повышает эффективность лечения больных телят. Усовершенствован способ пассивной профилактики смешанных рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят (Рац. предложение №6, 1999; заявка на патент № 04.1034, 22.09.2000 г.).

Практическая ценность работы. Использование полииммуногема ДС - 1100 и тимоцина в сочетании обеспечивает сохранность телят от рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза до 95 - 98%.

Результаты исследований вошли в Наставление по применению тимоцина (утв. ГУВ МСХ РТ, 1998) и Наставление по применению комплексного антибиотика ДС - 1100 (утв. ГУВ МСХ РТ, 1999). Получено три удостоверения на рационализаторские предложения (№4, 1998 и №5, 6, 1999).

Основные положения диссертационной работы, выносимые на защиту: данные изучения распространения смешанных рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят; результаты изучения профилактической и терапевтической эффективности полииммуногема в комплексе с антибактериальным (ДС -1100) и иммуностимулирующим (тимоцин) препаратами при рота-, коронавирусных энтеритах и колибактериозе, протекающих у телят в ассоциации.

Апробация работы. Основные положения работы доложены и обсуждены на заседаниях ученого совета Таджикского НИВИ (1996 -2000 гг.), на республиканских и областных семинарах-совещаниях ветработников РТ (1997 - 2000 гг.), на заседаниях научно-технического совета по животноводству и ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук (1998 - 1999 гг.), на конференциях Таджикского аграрного университета в честь 75-летия академика Р. Г. Мустакимова (Душанбе, 1999 г.) и ВНИВИ патологии, фармакологии и терапии РАСХН в честь 30-летия института (Воронеж, 2000 г.).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 5 научных работ.

ВЫВОДЫ

1. Вирусологическими и бактериологическими исследованиями установлено, что в возникновении желудочно-кишечных болезней телят важную роль играют рота-, коронавирусы и эшерихии коли в ассоциации. Заболеваемость новорожденных телят в 1996 - 1999 гг. на этом фоне составила от 13,2 до 38,0%.

2. Основными предрасполагающими и способствующими факторами в возникновении смешанных желудочно-кишечных болезней телят являлись нарушение зооветеринарных правил по своевременному запуску стельных коров, переводу их в родовые группы, приему телят в дезинфицированные боксы, правильной обработке новорожденных и кормлению их первой порцией молозива.

3. Разработанный химиотерапевтический препарат ДС - 1100 обладает бактериостатической и бактерицидной активностью по отношению к ряду патогенных микробов, выделенных из желудочно-кишечного тракта больных телят. Пероральное применение его в дозе 0,3 г/кг массы тела два раза в день способствует выздоровлению больных телят.

4. Из крови гипериммунизированных коров с помощью относительно простой и доступной технологии получен стерильный и безвредный полииммуногем против рота-, коронавирусов и эшерихии коли. Титр специфических антител в нем достигает 8,6; 9,0 и 12,0 ^2 соответственно.

5. Профилактическая активность полииммуногема при применении в дозе 3 мл на 20 - 30-е минуты жизни и добавлении его к выпаиваемому молозиву один раз в сутки в дозе 4 мл/кг массы тела достигает 91,7%. Выраженное профилактическое действие (96,7%) полииммуногем оказывает при добавлении его к выпаиваемому

83 молозиву коров, иммунизированных ассоциированной вакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза.

6. Сочетанное применение полииммуногема, препаратов ДС - 1100 и тимоцина является более эффективным при лечении больных телят, чем раздельное. Терапевтическая эффективность такого использования указанных препаратов составляет 95,3%.

7. Применение иммуностимулятора тимоцина повышает бактерицидную и лизоцимную активность сыворотки крови больных телят и сокращает срок их лечения.

8. Проведение комплекса мероприятий по предотвращению попадания патогенной микрофлоры в пищеварительный тракт и пассивной специфической профилактике с помощью полииммуногема и иммунного молозива матери позволяет предупреждать заболеваемость телят рота-, коронавирусным энтеритом и колибактериозом и предотвращать их гибель.

84

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Наставление по применению препарата тимоцин: Утв. ГУ В МСХ Республики Таджикистан, 23.07.1998 г.

2. Наставление по применению ассоциированной вакцины против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят: Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан, 04.02.1999 г.

3. Временное наставление по применению препарата ДС - 1100: Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан, 04.02.1999 г.

РАБОТЫ, ОПУБЛИКОВАННЫЕ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сатторов И. Т., Хамдамов А., Бобиев Г., Махмудов К. Пути повышения сохранности молодняка сельскохозяйственных животных. -Душанбе, 1997. - 2 с. - (ИЛ/ТаджикНИИНТИ); №124-97.

2. Сатторов И. Т., Махмудов К., Хамдамов А., Гоголев М. М., Соколова Н. Л., Шегидевич Э. А. Уровень гуморальных антител у коров, иммунизированных ассоциированной ГОАЛ формолвакциной против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза // Диагностика, лечение и профилактика заболеваний с/х животных: Сб. науч. тр. ТаджНИВИ (1997 - 1998 гг.). - Душанбе, 1998. - С. 8 - 9.

3. Сатторов И. Т., Махмудов К., Ахмеджанова Л. М., Хамдамов А. Роль микроорганизмов в возникновении пневмоэнтеритов телят. // Тез. докл. Респ. науч.-практ. конф., поев. 75-летию акад. Р. Г. Мустакимова. -Душанбе, 1999. - С. 42-43.

4. Хамдамов А. Профилактика инфекционных энтеритов новорожденных телят // Тез. докл. Респ. науч.-практ. конф., поев. 75-летию акад. Р. Г. Мустакимова. - Душанбе, 1999. - С. 41 - 42.

5. Хамдамов А. Факторы, способствующие возникновению смешанных инфекций желудочно-кишечного тракта новорожденных телят // Тез. докл. Международной конференции "Теоретические и практические аспекты возникновения и развития болезней животных и защита их здоровья в современных условиях", поев. 30-летию Всероссийского научно-исследовательского ветеринарного института патологии, фармакологии и терапии РАСХН. - Воронеж, 2000. - С.229-231.

Автор выражает искреннюю благодарность научным руководителям настоящей диссертационной работы доктору ветеринарных наук, члену-корреспонденту Таджикской академии сельскохозяйственных наук И. Т. Сатторову и доктору биологических наук, ведущему научному сотруднику лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко Н.Л.Соколовой, а также сотрудникам лаборатории вирусологии и всему коллективу Таджикского научно-исследовательского ветещшарного института за оказанную помощь в подготовке настоящей ра^ты, за внимание и поддержку.

1.5. Заключение

Значительный отход молодняка крупного рогатого скота от желудочно-кишечных болезней сдерживает эффективное развитие животноводства во всех странах мира.

Проблема выращивания здорового потомства крупного рогатого скота приобретает особую актульность в условиях развития животноводства на промышленной основе.

Существенный ущерб развитию отрасли наносит заболеваемость телят диареей, в этиологии которой важную роль играют рота-, коронавирусы и эшерихия коли, как в отдельности, так и в сочетании.

Нарушение зоогигиенических и санитарных правил кормления и содержания стельных коров, подготовки их к отелу, приема новорожденных, кормления и содержания телят в первые недели жизни являются способствующими факторами для распространения диареи среди молодняка крупного рогатого скота. В то же время только соблюдения этих ветеринарных правил недостаточно для эффективной борьбы с данными заболеванием.

Энтерит с симптомами диареи, сопровождающийся депрессией и обезвоживанием организма, является основным клиническим и патогенетическим синдромом патологии, вызываемой рота-, коронавирусами и эшерихией коли.

Эффективность лечения и профилактики больных телят от вышеназванных инфекций зависит от своевременной их диагностики и дифференциальной диагностики.

В настоящее время достаточно изучены морфология и физико-химические свойства рота-, коронавирусов и эшерихии коли. В то же время синергизм их действия в ассоциации требует дальнейшего рассмотрения.

Анализ имеющихся литературных источников показывает, что специфическая активная иммунизация телят против рота-.

47 коронавирусных энтеритов и колибактериоза малоэффективна, так как заболевания эти поражают животных в первые дни жизни, с 2-3 недельного возраста.

Имеются разработки,свидетельствующие о том,что профилактика новорожденных телят от вышеуказанных заболеваний дает ощутимый эффект, когда она осуществляется в первые дни жизни путем своевременной дачи им иммунного молозива вакцинированных коров.

Действенность её может быть повышена при включении в систему профилактики различных химотерапевтических и иммуностимулирующих препаратов.

С учетом широкого распространения смешанных рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят в животноводческих хозяйствах республики встает необходимость усовершенствования средств специфической профилактики и терапии данных болезней.

Определение эффективности таких препаратов, изучение возможностей их применения для лечения телят при диарее, вызываемой рота-, коронавирусами и эшерихией коли, открывает новые горизонты для ветеринарной науки и практики и в конечном счете будет способствовать эффективному развитию животноводства, улучшению питания населения и укреплению его здоровья.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в 1996 - 2000 гг. по отраслевым научно-техническим программам в лабораториях вирусологии Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института и эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии имени Я. Р. Коваленко.

Научно-производственные опыты проведены в хозяйствах Республики Таджикистан на 378 головах крупного рогатого скота, 36 кроликах и 64 белых мышах.

В работе использовали инактивированную гидроокись-алюминиевую формолвакцину против рота-, коронавирусных энтеритов и колибактериоза телят, изготовленную в ВИЭВ; иммуностимулятор тимоцин, разработанный ТаджНИВИ и МП "Занд", антибактериальный препарат ДС - 1100, изготовленный ТаджНИВИ.

Для индикации и идентификации рота-, коронавирусов и эшерихии коли использовали реакции гемагглютинации (РГА), торможения гемагглютинации (РТГА), которые ставили в микромодификации согласно рекомендациям по их применению (Н. Л. Соколова и др., 1987) а также реакции агглютинации (РА) и иммуноферментный анализ (ИФА).

В качестве испытуемого материала для постановки ИФА использовали жидкую часть фекалий от больных диареей телят или надосадочную жидкость после центрифугирования 25 - 50% суспензии фекалий или кишечника. Кусочки кишечника тщательно измельчали ножницами и растирали в фарфоровой ступке до образования кашицеобразной однородной массы. Полученную суспензию промораживали в течение 18 - 20 ч при минус 20°С, оттаивали и осветляли центрифугированием при 4000 об/мин в течение 20 мин. Надосадочную жидкость сливали в стерильную посуду, добавляли антибиотики (пенициллин, стрептомицин по 2000 Ед/мл), инкубировали при 4°С в течение 2 - 3 ч и использовали для исследования

Разведение иммуноглобулинов и других компонентов реакции проводили на фосфатно-буферном растворе (рН 7,4), содержащем натрий хлористый (ФБР), для приготовления которого содержимое флаконов №8 и №9 набора растворяли в 2,0 л дистиллированной воды и хранили при 4 - 8°С.

На первом этапе реакции ампулу с иммуноглобулинами растворяли в 10 мл ФБР и вносили по 0,1 мл в лунки полистироловой плашки, закрывали крышкой, инкубировали в течение 2 ч при 36 - 37°С и затем 18 ч при 4°С. Удаляли раствор иммуноглобулинов и 3 - 4 раза отмывали лунки ФБР, содержащего 0,05% твина-80 или твина-20 (ТФБР) (на 1 л ФБР добавляли 0,5 мл твина-80 или твина-20 (флакон №7) и перемешивали до полного растворения.

Содержимое ампул с контрольными антигенами (положительным и отрицательным) растворяли в 0,2 мл ФБР, разливали по 0,1 мл и хранили в замороженном состоянии до использования в реакции.

На втором этапе реакции в лунки первого ряда плашек вносили по 0,1 мл специфического, отрицательного и исследуемых антигенов и готовили двукратные разведения начиная с 1:2 до 1:128 на ТФБР. При качественной постановке реакции (ответ «есть» или «нет») постановку осуществляли аналогично, но материал не титровали, а делали не менее трех повторностей с разведением испытуемой пробы 1:2, тщательно перемешивали в течение 5 - 7 секунд, инкубировали 1,5 - 3 ч при 36,5 -37,5°С и отмывали ТФБР лунки чашки от несвязавшихся антигенов.

Содержимое ампулы с антиротавирусным конъюгатом растворяли в 10 мл ТФБР и вносили по 0,1 мл в отмытые лунки плашек, инкубировали при 36,5 - 37,5оС 1,5 ч и вновь отмывали раствором (ТФБР).

Затем в лунки вносили по 0,1 мл субстратной смеси, которую готовили следующим образом.

Содержимое ампулы с 5-аминосалициловой кислотой (№5) растворяли в 10 мл подогретой до 30 - 40°С дистиллированной воды, охлаждали и вносили в полученный раствор содержимое ампулы с гидроперитом (№6).

Результат реакции учитывали через 40 - 60 мин по изменению окраски образовавшегося реакционного продукта.

При наличии специфического ротавирусного антигена в исследуемом материале содержание лунок имело коричневое окрашивание сравнимое с цветом в лунках с положительным антигеном.

Отрицательными считали пробы не изменившие окраску содержимого лунок, сравнимое с отрицательным антигеном.

За положительную реакцию принимали разведение антигена 1:2 и выше.

Для обнаружения коронавирусного антигена в фекалиях и кишечнике больных и павших животных применяли РГА, которую ставили в микро- (0,025 мл - 1 капля) и макро- (0,25 мл) - модификациях при комнатной температуре. Для этого во все лунки панели из прибора Токаччи или Титертека вносили по 0,025 мл (1капля) ФБР и делали двукратные разведения исследуемого материала. Затем во все лунки вносили по 1 капле 0,5% суспензии эритроцитов.

Учет реакции проводили через 1 час после оседания эритроцитов в контрольных лунках, которые содержали 1 каплю ФБР и 1 каплю 0,5% суспензии эритроцитов. Учет проводили по четырехкрестовой системе.

За гемагглютинирующий титр вируса принимали наибольшее его разведение, которое вызывало агглютинацию эритроцитов не меньше чем на ++.

Если титр гемагглютининов в исследуемом материале составлял 1:32 и выше, то для подтверждения специфичности реакции (т.е. принадлежности гемагглютининов коронавирусу) ставили РТГА со специфической сывороткой. Для этого в первый ряд лунок панели вносили по 1 капле ФБР, а во второй - по одной капле специфической гипериммунной антикоронавирусной сыворотки, разведенной 1:10 ФБР. Затем в обоих рядах лунок готовили двукратные разведения испытуемого антигена. Через 1 час контакта испытуемого материала с гипериммунной сывороткой и ФБР во все лунки обоих рядов панели разливали по 1 капле 0,5% суспензии эритроцитов.

Реакцию учитывали через 1 час. Реакция считается положительной, если специфическая сыворотка тормозит гемагглютинацию исследуемого материала не меньше чем на 16 АЕ, т.е. если титр гемагглютининов в первом ряду составил 1:128, то во втором ряду он должен быть не выше 1:8.

Для постановки РТГА с сыворотками крови, молозива, молока вначале определяли рабочую дозу вируса (4 или 8 АЕ), для чего проводили титрование антигена в РГА. Затем показатель титра антигена в РГА делили на 4 (или 8). Так, если титр антигена 1:256, то рабочее разведение будет составлять 1:64 (4 АЕ) или 1:32 (8 АЕ).

Перед постановкой основного опыта определяли правильность выбора 4 (8) АЕ. Для этого в 5 лунок раскапывали по 1 капле ФБР, а затем титровали рабочую дозу антигена, таким образом в первой лунке было 2 АЕ, во второй - 1 АЕ, в третьей - 0,5 АЕ. После этого в каждую лунку добавляли по 1 капле 0,5% суспензии эритроцитов, панели встряхивали и оставляли при комнатной температуре на 45 - 60 минут.

При правильном выборе рабочей дозы (4 АЕ) в первой и второй лунках должна быть агглютинация, а в третьей лунке агглютинации быть не должно. Если в третьей лунке - полная или частичная гемагглютинация, то это означает, что выбранная доза антигена содержит не 4 АЕ, а больше. В этом случае доза должна быть уменьшена. Особенно важно, чтобы во второй лунке, где должна быть 1 АЕ антигена, была бы полная агглютинация. Если в ней агглютинация не полная, то выбранная рабочая доза содержит меньше 4 АЕ в 0,025 мл и должна быть увеличена.

Уменьшение или увеличение рабочей дозы антигена проводили добавлением соответственно ФБР или антигена и повторно проверяли

Для постановки основного опыта в ряд лунок разливали по 1 капле ФБР и проводили титрование сыворотки. После этого во все лунки вносили по 1 капле рабочего разведения антигена (4 или 8 АЕ). Панели встряхивали и после часового контакта сыворотки с антигеном добавляли по 2 капли 0,5% суспензии эритроцитов. Для точности учета реакции ставили контроль: сыворотки для исключения присутствия гемагглютининов к мышиным эритроцитам (1 капля сыворотки, 1 капля ФБР и 2 капли 0,5% суспензии эритроцитов); стандартных диагностикумов (1 каплю рабочего разведения антигена, 1 каплю гомологичной положительной сыворотки и 2 капли 0,5% суспензии эритроцитов); эритроцитов на спонтанную агглютинацию (1 каплю ФБР и 1 каплю 0,5% суспензии эритроцитов).

В исследованиях применяли наборы для диагностики рота- и коронавирусных энтеритов методами гемагглютинации и иммуноферментного анализа, разработанные ВИЭВ.

Видовую принадлежность бактериальных агентов, выделенных при исследовании патматериала, устанавливали по определению микроорганизмов Берги (1984) после изучения их морфологии, тинкториальных, культуральных и биохимических свойств.

Бактериологическим и вирусологическим исследованиям подвергнуто 778 проб фекалий больных с клиникой диареи и павших телят, сывороток крови и молозива крупного рогатого скота из 13 хозяйств республики.

Эпизоотическую ситуацию по рота-, коронавирусным энтеритам и колибактериозу телят в хозяйствах республики выясняли по результатам собственных исследований патматериала от больных животных и по данным ветеринарной отчетности.

Антибактериальную активность препарата ДС - 1100 и тимоцина по отношению к изученным бактериям определяли в опытах in vitro методом серийных разведений в жидкой питательной среде.

Минимальное количество препарата, дающее полную задержку роста культуры, соответствовало наименьшей его концентрации, и по нему определялась чувствительность микробов.

Полииммуногем получали от коров, гипериммунизированных против рота-, коронавирусов и эшерихии коли.

Профилактическую и терапевтическую эффективность полииммуногема, тимоцина и ДС - 1100 в экспериментальных и производственных условиях изучали на 369 телятах. Критериями оценки эффективности препаратов являлись заболеваемость телят с клиникой диареи, продолжительность и тяжесть заболевания и сохранность животных.

Бактерицидную активность сыворотки крови телят определяли по методу В. Г. Дорофейчука (1968) в модификации Н. Б. Бердиева (1980), лизоцинную активность - по методу И. В. Смирновой и Г. А. Кузьминой (1966).

Расчет экономического эффекта проводили согласно методическим указаниям по определению эффективности ветеринарных мероприятий, утвержденным ГУВ МСХ СССР в 1982 г. Полученные результаты статистически обрабатывали с применением общепринятых в биологии методов (Г. Ф. Лакин, 1980).