Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Эпизоотология, диагностика, терапия и профилактика коронавирусного энтерита телят в условиях Республики Таджикистан

ВСЕРОССИЙСКИЙ НАУЧНО-ИССЛЕДОВАТЕЛЬСКИЙ ИНСТИТУТ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЙ ВЕТЕРИНАРИИ им. Я. Р. КОВАЛЕНКО

(ВИЭВ)

РОССИЙСКАЯ АКАДЕМИЯ СЕЛЬСКОХОЗЯЙСТВЕННЫХ НАУК

(РАСХН)

РГБ ОД

' На правах рукописи

I ? ФЕВ

САТТОРОВ Изатулло Табарович

ЭПИЗООТОЛОГИЯ, ДИАГНОСТИКА, ТЕРАПИЯ И ПРОФИЛАКТИКА КОРОНАВИРУСНОГО ЭНТЕРИТА ТЕЛЯТ В УСЛОВИЯХ РЕСПУБЛИКИ ТАДЖИКИСТАН

16.00.03— ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва — 1995

Работа выполнена в лаборатории вирусологии научно-исследовательского ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяйственных наук и лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного рогатого скота Всероссийского научно-исследовательского института экспериментальной ветеринарии имени Я- Р. Коваленко.

Научный консультант:

заслуженный деятель науки РФ, академик РАСХН, доктор биологических наук, профессор Г. Ф. Коромыслов

доктор ветеринарных наук О. И. Сухарев (Департамент ветеринарии МСХ РФ) доктор ветеринарных наук, профессор А. Л. Семенихин (ВНИИВВиМ)

доктор ветеринарных наук, профессор Б. Г. Орлянкин (ВИЭВ)

Ведущее учреждение — Всероссийский научно-исследовательский и технологический институт биологической промышленности (ВНИиТИБП)

Защита диссертации состоится » 1995 г.

в /у часов на заседании диссертационного Совета Д 020.28.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук при Всероссийском научно-исследовательском институте экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко (109472, Москва, Кузьминки, ВИЭВ).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке института.

Официальные оппоненты:

Автореферат разослан « ¡У »

1995 г.

Ученый секретарь диссертационного Совета кандидат ветеринарных наук

Ф. Г. Терешков

ОБЩ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Важной народнохозяйственной проблемой ветеринарной науки и практики остается задача охраны молодняка крупного рогатого скота от желудочно-кишечных болезней, наносящих огромный ущерб скотоводству.

В настоящее время установлено, что в возникновении диарея телят проимущеотвенну» роль играют рота-, корона-вируеы, шзрихни коли, реже парво-, аденовирусы-.

Короввзяруоный энтерит телят был впервые диагностирован в 1972 г. Stair и др. В последующие годы Sharpee, Mobaa (1976) и др. проводила исследования по выяснению роли коронавируса в этиологии диареи у телят, разработка методов диагностики и оредотз специфической профилактики.

Проблемой норонавируоного витерита телят в России и других странах СНГ занимались 0.2.Богатырепко и др'.(1Э76), B.C.Авилов а др. (IS82), Г.О.Корошслов и др.- (1982), ЖЛ1. Соколова н др.' (1982), 0;Н.1арабрин и др. (1883) и др. Однако ьжогие вопросы эпизоотология, дифференциальной диагностики, гарашш и профилактики корокавируоного энтерита о учетом природно-влшлатжчооках и других особенностей оо-тагтся до оих пор неретаинжи.

Необходимость изучения этой проблемы в Республика Тад-жакиотаа обусловлена развитием молочнотоварных комплек-ооз и возникновением в них массовой диареи невыясненной этиологии у молодняка крупного рогатого охота.

Актуальность проблема требовала усовершенствования методов диагностики, поиска путей создания средств опеца» фичвокой профилактики и терапии корояавируояого энтерита. Для этого необходимо бало изучать эпизоотология вирусного

еитерхта телят.

Цель исследования. Изучить впивоотологиэ коронавирусного витерита, разработать и внедрять методы н средства диагностики, лечения и профилактики.

Задачи исследования:

ввделить возбудителя коронавирусного энтерита телят к научить его физико-химические и биологические свойства;

изучить эпизоотологию и клиническое проявление коронавирусного энтерита телят в условиях Республики Таджикистан ;

разработать набор для диагностики коронавирусного витерита телят методами гемагглютинации и адсорбции-злвция-гемагглютинации;

изыскать новые терапевтические средства п испытать их эффективность в лабораторных и производственных условиях;

разработать систему мероприятия по профилактике коронавирусного энтерита телят и внедрить ее в производство.

Научная новизна. От больных с клиникой диареи телят из различных хозяйств Республики Таджикистан изолированы два штамма коронавирусе и изучены некоторые их физико-химические и биологические свойства.

Выяснена роль коронавируса в возникновении желудочно-кишечных болезней телят,изучены особенности клиническом) проявления коронавирусного энтерита. Разработан набор диагноста кумов для выявления коронавирусного антигена и антител к нему (A.c. * Т628294 от Т5.Т0.Т990 г.) и усовершенствована диагностика коронавирусного энтерита телят в результате использования метода адсорбции-элсции-Гемагглютинации (Рацпредложение * 23 От Т5. Т0ЛЭ87 г.)

Впервые синтезирован новый препарат, относящийся к

ооеданениям триЯодадов» который обладает антивирусной и антимикробной активность© (патент й 1793919 от 08.10.1992 Г;)* Разработан лекарственный оостев для терапии желудочно-кишечных болезней молодняка сельскссозяйстЕенных ашзоткых (полояительное уведомление ЩИИШЭ на изобретение $ 93032731/ 15 (032279) от 23.06.1993 г.). Разработан способ пассивной профилактики корокшщзуспого энтерита телят (патент Й 1793990 от 08.10.1992 г.).

Практическая данность. Разработан комплекс научно обоснованных мероприятий по диагностике, профилактике ж лвченш коронавируоного энтерита телят:

нормативно-техническая донушнтеяая на набор для дааг>* востикн коронавирусного энтерита крупного рогатого скота ме» тодом гемагглатанацши (утвзрздона ГУБ Госагропрома 00СР, 1988 Г.)}

методические рекомендации по нрншненип метода адсорб-цяи-^элгвди-гемагглатшшцаи дая выявдания коронавируса крупного рогатого скота (одобрены на заседания секция "Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней яивотннх" ВАСХЕЖ 16.12.1987 г.У*

нормативно- техническая документация на препарат "Поли— вшшлэтшшлтримеишашврадол о йодом (ПБЗНТй)" (утвэрздэна 17В МСТ Р§ 3I.I2.I992 г*)*

нормативно-техническая докугантацая на препарат "Рзгн-дропектат" (утверздена 17В МЕЖ Реозублиет Тедажзастен 5*08.1993 гД*

рекомендации по дифференциальной диагностика ж лэчевзэ рота» и коронавирусннх энтеритов телят (утвэрядвкы 173 ГАЯ Тадаиксной ССР 12.05.1990 г.)$

рекомендации по профилактике и лечению яелудочно-ки-иечннх болезней телят (коронавирусный энтерит и кояабакте-риоз) (утверадены ГУБ МСХ Республики Таджикистан, 1993 г.){

сиотегла мероприятий по борьба о желудочно-кишечными и респираторными заболеваниям! телят (утвервдена ТУЗ ТАП Таджикской ССР, 1990 ri);

система мероприятий по профилактике смешанной инфекция желудочно-кишечного тракта телят (утвервдена ГУБ MCI Республики Таджикистан, 1994 г.);

рационализаторские предложения (удостоверение J6 28, 1987; & 42, 1988; » 43, 1988; » 17, 1989).

Разработанные препараты иопытаны в неблагополучных хо~ аайствах и позволяют снизить заболеваемость телят коронави-русныы энтеритом и летальность.

Апробавдш работ». Основные положения диссертационной работы доложены и обоуадены на заседаниях Ученого совета Таджикского НИШ в 1984-1994 гг; на республиканских, областных и районных оеминарах-совещаниях и конференциях в г.Душанбе (1985,1987,1990), Гатлонской (1986-1993) и Ленинабад-ской областях (1983-1990), районах республиканского подчинения (1986-1993); заоедании Ученого совета ВИЭВ (1987); республиканской научно-теоретической конференции молодых учета и специалистов' Таджикской ССР (1987); заседании секции "Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней животных" Отделения ветеринарии ВАСЖНИЛ (1987); Ш Всесоюзной конференции по эпизоотологии (Новосибирск,1991); научно-производственной конференции профессорско-преподавательского состава Таджикского аграрного университета (1988,1993 г.); заседании оекцки ветеринарии НГС Госагропрома Республики Тад-

жикистан (1988,1990); научно-производственной конференции, посвященной 50-летию Таджикского КУБУ (1993); заседании научного совета по животноводству и ветеринарии Таджикской академии сельскохозяйственных наук (1992-1994 гг).Основные этапы исследований прошли комиссионную проверку, результаты работы доложены на годичных заседаниях Ученого совета Таджикского НИВИ (1984-Т994 гг.) и. ГУВ МСХ Республики Таджикистан (1985,Т9еГ7,Т988,Т990,1993 гт).

Препараты и набор диагностикумов демонстрировались на ВДНХ СССР и других выставках,проводимых в республике. Диагностический набор был удостоен серебряной медали ВДНХ СССР (Т989 г.).

Основные положения диссертапионной работы.выносише на защиту;

выделение коронавируса крупного рогатого скота и изучение его физико-химических и биологических свойств;

изучение эпизоотологии и клинического проявления корона-вирусного энтерита телят;

разработка и внедрение набора для диагностики коронаш-русного энтерита телят методами гемагглютинации и адсорб-п?!и-влюпии-ремагглгтинации;

разработка и внедрение в ветеринарную практику препаратов для терапии и профилактики коронавирусного энтерита телят;

испытание системы мероприятий по профилактике коронавирусного энтерита телят в экспериментальных и производственных условиях.

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 27 печатных работах, ТЗ нормативно-технических документах, утвержденных ГУВ Госагропрома СССР, МСХ

России и Республики Таджикистан, одном авторском свидетельстве, двух патентах и-одном положительном уведомлении ВНИИГПЭ на изобретение.

Объем ж структура диссертации. Диссертация изложена на 246 страницах машинописного текста и включает введение, обзор литературы, собственные иооледования, обсуадение результатов, вывода и практические предложения, описок литературы и прилоаение. Работа иллюстрирована' 19 таблицами и 8 рисунками. Спиоок использованной литературы включает 212 источников, из них 165 иностранных. В приложении представлено 20 документов, подтверадащих наиболее важные результаты етапов исследований и их практическую ценность.»

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Материалы и методы исследований

Работа выполнена в период 1984-1994 гг. по общесоюзной и отраслевым научно-техническим программам в лаборатории вирусологии Таджикского научно-исследовательского ветеринарного института Таджикской академии сельскохозяйственных наук и лаборатории эпизоотологии, диагностики и профилактики вирусных желудочно-кишечных болезней крупного ро-' • .. гатого скота ВИЭВ. Научно-производственные опыты, апроба-пдя к производственные испытания полученных результатов проведены в 32 животноводческих хозяйствах Республики Таджикистан.

В ряде комплексных исследований принимали учаотие Н.Л. Соколова, М.М.Гоголев, Г.А.Надточей, М.Амирбеков, С.Н.Степнова, Н.СДумаев, М.Адаятбеков, которым автор выражает искреннюю признательность за оказанную помощь и сотрудни-

чество. ■

Нормативно-техническая документация (НТД> на набор для диагностики коронавирусного энтерита крупного рогатого скота методом гемагглютииации и препаратов (ПВЭНТИ, регидропек-тат) согласована с Всесовзным государственным научно-контиоль-ным институтом ветеринарных препаратов (ВГНКИ), Главным управлением биологической промышленности Госагропрома СССР и утверждена в Главных управлениях ветеринарии с государственной ветеринарной кнсперпией россни и Республики Таджикистан.

Подопытные животине. В исследованиях были использованы материалы от 2317 коров и телят различного пола, возраста и породы, 46 кроликов, 2366 белых мышей,крыс,морских'свинок и хомячков.

Вирусы. В опытах использовали эпизоотические штаммы ко-ронавируса крупного рогатого скота КТ-85 и КГ-87, изолированные нами из фекалий больных с клиникой диареи телят в 19851907гг. и референтный итамм КЛ-2, полученный в ШЭВ.

Культуры клеток и среды. Использовали перевиваемые линии клеток НРГ-Т8 (аденокарцинома прямой кишки человека), ЛЭК (легкие эмбриона коровы^ и МДВК (почки теленка). Культуры ■ клеток для проведения вирусологических исследований готовили по общепринятой методике (Л.П. Дьяконов и др.,1986).

Для выращивания клеток применяли среды гидролизат лак-тальбумина (ГЛД), Игла, 199 и их смеси с ТО-ннм содержанием сывороток крови телкт или фетальной сыворотки.

Титрование вируса. Инфектцтоннуто активность вируса устанавливали по цитопатогенному действию или гемадсорби-рутацей активности в культуре клеток и рассчитывали по методу Рида и Менча. Для определения титра вируса готовили Ю-

кратные разведения его в среде Игла и каждым разведением в объеме 0,1 мл заражали четыре пробирочные культуры клеток. Реакцию оценивали по четирехкрестовой системе, описанной А.Ф.Каршевой и В.Н.Сюриныы (1980), и выражали в тканевых гемадсорбирувдшс дозах (ТГАдД50дм) или ТЦЦ^д^.

Электронная микроскопия. Исследования проводили совместно с сотрудником ВИЭВ ЕА.Надточием под электронным микроскопом $sew-74 методом негативного контрастирования.

Биологические и физико-химические свойства коронавируса крупного рогатого скота. Спектр гешгглютшшрувдей и гемад-сорбируюцей активности вируса изучали с эритроцитами мышей, хомячков, морских овинок, кроликов, кур, голубей, собак, свиней, коз, баранов, коров, лошадей и человека.

Степень антигенного родства между штаммами коронавиру-сов определяли по результатам реакции торможения гемагглюти-нятлга (рггА). Для установления степени антигенного родства использовали формулу Archetti u Horsfall (1950).

Чувствительность коронавируса к действию э$ира и хлороформа определяли по методикам соответственно Burks (1973) и Mayr,Bogel (1961).

Серологические и вирусологические исследования. В ра- ■ боте применяли реакции нейтрализации (pH), гемадсорбции (РГАдЪ иммунофлюоресценции.(ШФ), гемагглотинацш (РТА), торможения гемагглютинации (РГГА) и адсорбщш-элющш-гемагглготинации (РАД-Э-ГА). РТА и РГГА ставили в микромодификации согласно рекомендациям по их применению (II.Л.Соколова и др.,1987). Методика проведения РАд-Э-ГА была раэоаботаня нами. Она подробно изложена в разделе 2.2.6.2.

то

Вирусовыделение проводили в культуре клеток из фекалиА больных и содержимого кишечника пеших телят.

Серологическим и вирусологическим исследованиям подвергнуто П88 проб фекалий больных и клинически здоровых телят и торов, 2050 проб сыворотки крови и молозива крупного рогатого скота из 39 хозяйств республики.

Бактериологические исследования. У выделенных культур бактерий изучали морфологические, тинкториальные, биологические, серологические и патогенные свойства с использованием общепринятых методов.

Вакцина. Дня иммунизации животных применяли инактивированную гидроокисьалюминиевуто вакцину против коронавирусного энтерита крупного рогатого скота, изготовленную в ВГОВ.

Препараты. В исследовании использовали ноше препараты: по-ливинилтинилтриметилпиперидол с родом (ПВЭНТИ), разработанный наш совместное доктором химических наук, академиком Д.Х.Хали-ковым, доктором ветеринарных наук М. Амирбековым и др., регидропектат и противокоронавирусную сыворотку. Для сравнения использовали йодинол и регвдрат, широко применяемые в ветеринарии.

Эпизоотологические исследования. Эпизоотическую ситуацию по желудочно-кишечным болезням телят в Республике Таджикистан выясняли по данным ветеринарной отчетности и результатам исследования патматериала от животных.

При изучении показателе» проявления эпизоотического процесса были использованы методики И.А. Бакулова и др. (19821

и А.А.Конопаткина,И. А.Бакулова (1984).

Противовирусную активность препаратов ПВЭНГИ и регидро-

пвктата по отношению к коронавирусу (штамм КТ-85 и 101-2) определяли по методике Т.А. Бектемирова и др. (Т979). Цитопато-генное действие на культуре клеток изучали по влиянию препаратов на морфологию клеток. За максимальную переносимую концентрацию принимали 1/2 дозы, которая не вызывала видимых токсических изменений в монослое клеток.

Культуры клеток заражали коронавирусом штаммов КГ-85 и КЛ-2 с множественностью заражения 0,Т и Т,0 ТЩ^/клетка* Пэсле I ч адсорбции их промывали раствором Хэнкса,затем в часть матриц вносили испытуемый препарат на среде Т99 в концентрациях от 2 до 32 мкг/мл. Через 36 ч после инфицирования просматривали культуру, регистрируя интенсивность поражения монослоя,дважды замораживали и оттаивали е5 и после центрифугирования при IООО об/мин в течение Т5 мин в надосадочной жвдкости определяли инфекционный титр вируса путем титрования на линии клеток МДВК.

Химиотерапевтический индекс определяли методом выявления зависимости доза-эффект (Л.В.Денисова и-др.,1974).

Получение гипериммунной сыворотки. Гипериммунную сыворотку получали на кроликах и коровах. Кроликов иммунизировали по схеме, предложенной А.Т.Кравченко и др.(1978). Для этого за неделю до инъекции антигена,подкожно в обе задние лапки вводили по 0,5 мл полного адыованта Фрейнда, затем непосредственно в оба подколенных лимфатических узла и подкожно в области обеих лопаток соответственно по 0,25 и 0,5 мл антигена в смеси с равным объемом адыованта ФреРнда. Через месяц при реиммунизации вводили 2 мл антигена внутривенно.Кровь для исследования брали через Т и 3 недели после иммунизации и через неделю песле реиммунизации животных.

Определенна показателей гушралькых факторов естественно Я резистентности. Количества общего белка в сыворотке крови определяли биуретовки методом, яшушгах глобулинов -фотоне-фелоивтркчяским методом, лиэоцишув активность -по методу В.Г. Дорофэйчука (1968), баотеркцаднуя активность - то методу Й.В. Смирновой и Г.А. КузьняноЯ (Г9бб).

Терапевтическую эффективность препаратов ПВЭНТЙ,регсздропек-тата и протавокоронавнруской сыворотки в экспериментальных и производственных условиях изучали на 595 телятах 2-Т0-диевного возраста. Критериями оценки эффективности препаратов, применяемых как в отдельности, так я в сочетании, являлись продолжительность я тяязсть заболевания, вынужденный убой и падси жиоотгалс.

З^ктивнссть стастетгы меропраяткй по профилактике короиа-вярусной инфекции нзутаяа а эксперииантаяьных и производственных условиях на 1665 телятах. Оценка эффективности систем проводилась путей учета заболеваем сти телет с клиникой диареи н ях сохранности.

Расчет экономического в$фекта от лроводтагяг лечебно-профилактических мероприятий проводили согласно , Методическим указаниям по определенно эффективности взгеринарнкх корся-ряятяй, утвэрйсденкшс ГУВ ЫСХ СССР в 1982 г.

Статистическая обработка результатов. ГЬлученннэ результаты статасгячосга обраватавалясприменением общепринятая а бколопш иетодов (Г.§. Латан, 1980).

2.2. Результаты исследований

2.2.1. Выделение и идентификация коронавируоа от больных телят

В результате заражения перевиваемых линии клеток НИ-18 и 1ЭК элюатами, полученными из фекалий больных диареей телят из совхоза "Конституции" Яванского и колхоза "Роосаты" Ленинского районов, были выделены в 1985 и 1987 гг. два штамма (КГ-85 и КГ-87) вируса.

В культурах клеток НКГ-18 на 3-й и 1ЭК на 4-е сут инкубирования к 5 и 6-му паосажу отмечали накопление гемагглюти-нинов к обоим штаммам в титрах 4,3*0,12 - 5,0*0,17 РГГА со специфической сывороткой против коронавируса гемагглю-тинация антигенов задерживалась, в то время как о гетерологи-ческими сыворотками против вируса ЛГ-З и ротавируса этого не происходило.

Штаммы КТ-85, КТ-ЕГ? и эталонный штамм КЯ-? кооонавируса в культурах клеток НЕС-18 и 1ЭК размножались без видимых цито-патических изменений. При культивировании этих штаммов в культуре клеток МДВК к 6 и 8-му пассажу на 3-й сут титр ге-ыагглютининов достигал 7,0*0,26 - 8,0*0,26 Средний инфекционный тйтр к атому времани к указанным штаммам составлял ; 4,0*0,83 - 4,5*0,41 1} ТЦД^д^.

Штаммы вируса ' в культуре клеток МДВК через 48-72 ч вызывали выраженное ЦЦД в виде появления сети из групп клеток и цатоплазыатических тяжей. Методом иыьунофлуоресценции в культурах клеток ЩЩК и ННГ-18, зараженных коронавирусок штаммами КГ-85, КГ-87 и эталонным штаммом КЛ-2, обнаруживали к 48-72 ч яркое желтовато-зеленоватое свечение в пери-

нуклеарной зона клеток.

При электронно-микроскопическом исследовании культураль-ной жидкости зараженных культур клеток наблвдали отдельные ви-рионы круглой и овальной формы размером 80-140 нм, которые были окружены булавовидными отростками длиной 20-22 нм.

Инфицированные штаммами КГ - 85, КГ - 87 и KJ1 - 2 перевиваемые культуры клеток ВДВК и НЕГ-18 адсорбировали только эритроциты мышей, крыс и хомячков. Адсорбция эритроцитов на монослое зараженных культур клеток тлела диффузный характер и была прочной: эритроциты не удавалось удалить при неоднократном отмывании монослоя раотвором Хенкса.

Используемые штаммы коронавируса обладали сходной гемаг-глютинирутацей активностью по отношению к эритроцитам мышей, крыс и хомячков.

Гемадсорбирутоцая и гемлгглютинирующая активность штаммов коронавируса полностью подавлялась специфической противокоро-навирусной сывороткой, в то же время торможения гемадсорбции и гемагглгаинации при использовании гетерологических сывороток не происходило,

Гемагглютинирупцая и инфекционная активность штам -мов КГ-85, КГ-87 и КЛ-2 под воздействием 20%-кого эфира и 5^-ного хлороформа через 2 ч и при нагревании до 65°С спустя 30 мин полностью исчезала. Формалин в концентрации 0,0555 в течение 3 ч полностью инактивировал инфекционную и не влиял на гемагглютинируюцую активность вируса.

Как при естественной коронавирусной инфекции, так и при экспериментальном заражении, в сыворотке крови тавотных обнаруживали вируенейхрализупцие, преципитирующие и анти-гемагглютинирущие антитела. У зараженных телят наблюдали клинические признаки, характерные для коронавирусного энта-

рита.

В перекрестной РГГА эталонный штамм КЛ-2 коронавируса крупного рогатого скота являлся ангигенно родственным штаммам КГ-85 и КГ-87, выделенным на территория Республики Таджикистан.

Результаты исследований показывают,что выделенные штаммы вируса по своим физико-химическим и биологическим свойствам сходны с эталонным штаммом КЛ-2 коронавируса крупного рогатого скота и способны вызвать у телят клинически проявляющиеся гастроэнтериты.

2.2.2. Распространение коронавирусного энтерита в животноводческих хозяйствах Республики Таджикистан

Анализ данных ветеринарной отчетности в период Х985-Т994гг показал, что в животноводческих хозяйствах республики желудочно-кишечные болезни телят,обусловленные патогенными микроорганизмами и неспедифичвскими факторами внешней среды регистрируются очень часто. Заболевают до 70-80$ телят. Летальность варьирирует от 14 до

При исследовании патологического материала больных с клиникой диареи телят кз 39 хозяйств республики этиологическая роль коронавируса установлена в 35 (табл.1). При этом корона-вирусный энтерит зарегистрирован как на молочно-товерных, так и на откормочных комплексах.

Коронавирусный антиген из 94Т пробы фекалий был выявлен в 365 ( 38,60И случаях. Титр вирусного антигена, выявляемого методами гемагтлягинации и адсорбцяи-элюциии-гемагглюти-

Таблица I

Результаты исследований фекалий больных с клиникой диареи телят на наличие коронавирусного антигена

Область» районы

Всего :Мз них небла- "Исследо-'йз пит по-зозяйств • гополучшпс по :вано делительных :коронавируско-.проб .му энтериту * ;

• хозяйств : ;

» •

Районы респуб- 20 18 (90,0) 693 285 (41,1)

ликанского

подчинения

Хатлонская

область II 9 (81,8) 184 55 (29,8) Ленинабадская

область 8 8 (100) 64 25 (39,1)

Итого 39 35 (89,7) 941 365 (38,8)

Примечание. В скобках данные в процентном выражения.

нации, колебался от 4,0 до Н,0

При электронно-микроскопическом исследовании проб фекалий больных диареей телят были обнаружены полиморфные коронавируоные частицы размером 90-180 нм о булавовидными отростками длиною 20-22 юл. У отдельных частиц отростки до 70$ были отломаны. Бирусше частицы находились в виде еде-ничных вирионов или конгломератов.

Коронавирусный энтерит в животноводческих хозяйствах отмечали как в вида моноинфекции, так и в различных ассоциациях. Результаты исследований отражены в табл.2.

Данные табд2 свидетельствуют, что поронавирус у больных телят может встречаться в сочетании с ротавирусом и эшерихи-ей хот в 6,4-17,3? случаях.

У переболевших и клинически здоровых животных регистрировали положительную свроконверсию к коронавиру су. При ио~ 'следовании 2050 проб сывороток крохж и молозива животных

Т7

Таблица 2

Результаты исследований фекалий больных с клиникой диареи телят на наличие вирусных и бактериальных агентов

Возбудители !птоб° количество положительных : проб Количество положительных проб, в %

Коронавирусный антиген 2Т9 33 Т5,Т

Корона- + рота-вирусные антигены 4Т9 24 ТО, 9

Корона шрусный антиген + эшерихии коли 419 38 17,3

Корона- + рота-вирусные антигены и эшерихии коли 2?9 74 6,4

антигемагглютйнины в титрах 4,3 ± 0,04 - 5,7±0,37 выявляли у 49,0 - 51,Т? животных.

Результаты исследований подтверждают широкое распространение коронавируса крупного рогатого скота как в отдельности, так и в различных ассоциациях с ротавирусом и эшерихией коли в хозяйствах Республики Таджикистан, неблагополучных по желудочно-кишечным болезням телят.

2.4.3. Заболеваемость телят коронавирусным энтеритом в зависимости от времени года, возраста, пола

и породы животных Наивисшие показатели заболеваемости телят коронавирусным энтеритом отмечались в осенно-зимный период - 69,3$ больных от общего количества эаболеяпих за год. Весной заболеваемость составляла летом-Т^.ЗЯ. В разные периоды года она за-

висела от имеющегося количества воспрю№ивых к коронавирусу животных.

Телята различного возраста неодинаково подвержены заболеванию коронавирусннм энтеритом. Наибольшее количество случаев заболевания приходилось на первую неделю жизни.- 71,9/!, во вторую неделю заболело 23 £%, в третью - только 4,3 ив четвертую - лишь 0,9 % (табл.3).

Таблица 3

Возрастная динамика заболеваемости телят коронавирусннм энтеритом

Находи- :Заболело лось : всего Из них заболело в возрасте (дней)

1-7 : 8-14 : 15-21 22-29

под нао-:г : * лишением:" гол.; % :гол: X !гол.| % ГОЛ. 1 %

523 207 39,5 149 71,9 47 23,0 9 4,3 2 0,9

Коронввирусным энтеритом заболевали телята черно-пестрой, шведкой, бурокарпатской и холмогорской пород. Определенной связи заболеваемости с полом животных не отмечали.

2.2.4. Источники, пути выделения и факторы передачи возбудителя коронавирусного энтерита

Установлено, что источником возбудителя коронавирусного энтерита являются клинически здоровые коровы-вирусоносители (6,3$), переболевшие (22,8$) и больные коронавирусннм энтеритом телята (100$).

Возбудитель коронавирусного энтерита выделялся из организма животных.о фекалиями. Выделения его о молозивом, молоком, кровью, околоплодной жидкостью, носовым истечением и мочой не было отмечяно.

С целью определения факторов передачи возбудителя были

исследованы сшвы со стен помещений, подстилки, одежды обслуживающего персонала и предметов ухода, контаминированных фекалиями больных коронавирусным энтеритом телят. Установлено, что животные выделяют возбудителя во здешнюю среду с фекалиями и контамкннруют различные объекты с частотой от 5,5 до 33,ЭЙ.

2.2.5. Клинические и патологоанатомические проявления коронавирусного энтерита телят

Клинические и патологоанатомические признаки корояавирусно-го энтерита изучали при естественном и экспериментальном.заражении у ТТ4 телят в Т2 хозяйствах республики. Инкубационный период длился 24-48 ч. В первые 24-36 ч болезни у телят отмечали угнетение, понижение аппетита, ослабление реакции на внешние раздражители. Животные мало двигались и больше лежали. Температура тела была в пределах нормы (39,4 ¿0,05). Частота пульса достигала Т20-Т60 ударов в минуту. С развитием болезни пульс становился нитевидным, дыхание поверхностным - до 42-65 в минуту. Спустя 36-48 ч от начала болезни у животных появлялся понос. Консистенция фекалий вначале была мазеподобиой, цвет желтовато-белым или желтовато-серым. В дальнейшем фекалии становились жидкими, с примесью слизи, непереваренными сгустками казеина, а иногда кпови. Наблюдалось обезвоживание организма.

Результаты изучения естественной резистентности организма больных коронавирусным энтеритом телят показали, что содержание общего количества белка, альбуминов, бета- и гамма-глобулинов уменьшилось и составляло соответственно

4,33*0,04 1$; 36,1*0,615?; 21,3*1,12$; 19,2*0,60$. Количество альфаглобулинов было повышено до 20,1*0,87$. Бактерицидная и лизоцимная активность сыворотки крови больных телят по сравнению со здоровыми била ниже в 2 раза.

Основные патологоанатошческие изменения при коронави-русном энтерите выявляли в органах пищеварительного тракта. Слизистая оболочка сычута, тонкого и толстого отделов кишечника была покрыта слизью, местами гиперемирована, на ней имелись точечные и пятнистые кровоизлияния. Мезентериальные лимфатические узлы тонкого и толстого отделов кшечника увеличены и гипеоемиповоны.

Результаты исследований показывают, что коронавируо у телят вызывает сходные с другими кишечными инфекциями клинические и патологоанатошческие изменения. В связи с этим окончательный диагноз может быть установлен при вирусологическом исследовании патматериала.

' 2.2.6. Диагностика и дифференциальная диагностика коронавирусного энтерлта телят

2.2.6.1. Изготовление и контроль набора для диагностики коронавирусного энтерита телят. Для изготовления специфического антигена и сыворотки к нему делали натровую рао-плодку путем размножения коронавируса штамма КЯ-2 в культуре клеток НКГ-18. Дчя этого вирус из шлпулы разводили в среде Игла 1:3-1:5 и заражали монослой культуры клеток. Через 5 сут матрасы с вируосодержащей жидкостью замораживали и оттаивали. Вируссодерлсащую жидкость с гемагглютинируидим' титром не ниже 5,0 использовали дяя изготовления

инактивированного антигена.

Антикоронавируоцую сыворотку получали путем гиперпшу-шзации телят. Антигеном для пшершдыукизацаи служила инак-тивированная формалином влруссодегжащая жидкость, в которую добавляли равный объем масляного адьюванта. Гиперишунизацшо телят проводили двукратным введением вируссодержащего материала по следующей схеме: при первичной иммунизации коронави-руоный антиген с гемагглютинирукщим титром не менее 7,0 ¿"9л > смешанный с масляным адъювантом в равных объемах, в количества 0,5 мл, вводили в предлопаточше лимфатичеокие узлы. Одновременно делали инъекцию антигена с масляным адъювантом по 5 мл подкожно в область обеих лопаток о последующей (через месяц) внутривенной инъекцией антигена без адьюванта в количестве 10 мл.

Контрольную (отрицательную) сыворотку получали от телят перед их иммунизацией коронавирусным антигеном.

Активность антигена в РТА и специфической сыворотки в РТГА была не ниже 5,0 и 7,0 Со)д. соотвегственно. Контрольная ■ сыворотка была отрицательной.

Коронавирускый антиген, специфическую и контрольную сыворотку расфасовывали по I мл в ампулы, лиофилиэировали и запаивали под вакуумом.

Для проверки качества компонентов в каждой серии набора определяли .внешнйй вид, цвет, наличие посторонних примесей, растворимость, массовую долю влаги, стерильность, полноту инактивации, активность и специфичность антигена и сывороток по общепринятым методикам.

В результате проведенных исследований нами был разработан набор для диагностики норокавирусного энтерита крупно-

го рогатого скота методами гемагглютинации и адсорбции-элюции-гемагглхшшации.

2.2.6.2. Отработка оптимальных условий постановки реакции ацсорбции-элгоции-гемагглютинадии. Реакция ад сорбции-элюции-гемагглютинации (Ад-Э-ГА) основш? на адсорбции вируса на фор-малинизировашых эритроцитах мышей при 4°С, удалении неадсор-бировашгого материала, элюции адсорбировавшегося вируса при 37°С и определении гемагглютинирующей активности элгоатов,

С целью выявления вирусного антигена жидкую часть фекалий смешивали с ЗС$-ной суспензией формалинизированных эритроцитов мышей в соотношении 3:1. Смесь инкубировали в течение 60-90 мин при 4°С. После её центрифугирования в течение 10 мин при 1000 об/мин надосадочную жидкость (элюат) удаляли, эритроциты промывали охладденным до 4°С 0,15 М фосфатно-буферным раствором (ФБР) и ресуспендировали их в этом же раотворе в количестве, равном исходному объему при исследовании материала от больных, и в количестве 1/10 исходного объема при исследовании материала клинически здоровых животных.

Суспензию эритроцитов после процесса адсорбции инкубировали в течение 90 мин в водяной бане при 37°Сдчя элюции вируса. За этот период смесь триады взбалтывали. После инкубирования её вновь центрифугировали, и элюат брали дая определения титра вирусного антигена в ЕГА. Если титр гемагглютшшнов в элюате составлял 1:32 и выше, то для подтверядения специфичности реакции ставили РТГА с сыворотками к коронавирусу, рота-вирусу и к вирусу ПГ-З.

Реакция считалась положительной, если только специфичео-.кая антикоронавирусная сыворотка тормозила гемагглюишацию

влюатов не менее, чем на 16 АЕ.

2,2.6.3. Сравнительная зффактивноотьреякпии Ад-Э-ГА при обнаружении коронавируса крупного Рогатого скота. Эффективность реакции Ад-Э-ГА по сравнению о РТА определяли при обнаружении коронавирусного антигена в культур альной жидкоо-ти инфицированных культур клеток, суспензии фекалий больных диареей телят и клинически здоровых коров-матерей. Результаты исследований представлены в табл.4.

Таблица 4

Сравнительная эффективность реякпии Ад-Э-ГА при диагностике коронавируоного энтерита телят

Метод исследования ' Исследованный : материал Всего проб •Количество полежи— : тельных : проб ''% подавитель« :шх проб i

АД-Э-ГА Культуральная жидкость 42 42 100

Фекалии больных телят 212 79 37,2

Фекалии клинически здоровых коров 198 16 8,1

РТА Культуральная жидкость 42 42 100

Оекалии больных телят 212 58 27,7

Фейалии клинически здоровых коров 198 . 4 2,0

Из данных таблицы 4 видно, использование реячдаи АД-Э-ГА позволяет обнаружить короиавирусяый антиген в разнообразных материалах .Данная реакция более чувствительна, чем РТА. Он я выявляет в 4 раза больше животншс-вирусоносителей, Титр коронавирусного антигена при использовании реакции Ад-Э-ГА колебался от 4,3±0,12 до 11,3*0,21 л в РТА от 4,0±0,0 до

9,0*0,17

В РГГА со специфической сывороткой гешгглютинация антигена задергивалась не менее чем на 16 АЕ, что указывает на принадлежность гемагглютикинов коронавирусу крупного рогатого скота.

2.2.6.4. Дпффере!щиальная диагностика коронавирусного энтерита телят. Взвду полиэтиологпчности болезни и сходства её клинических признаков с радом других заболеваний своевременная дифференциальная диагностика желудочно-кишечных болезней новорожденных весьма ваяна для профилактики и•эффективного лечения больных телят.

Дифференциальная диагностика коронавирусного энтерита телят основала на данных эпизоотологии, клинических признаках, патолого-анатомических изменениях и результатах лабораторных исследований патологического материала на наличие вирусного антигена и специфических к нему антител.

Коронавирусный энтерит телят дифференцировали от колибак-териоза, сальмонеллеза, диплококковой септицемии, ротавируо-ной инфекции и диспепсии.

Колибактерлоз дифференцировали бактериологическими исследованиями (выделение культуры эшерихии коли, патогенной для белых мышей) и учитывали, что при этой болезни противоколибак- '■ териозная сыворотка, антибиотики и сульфаниламидные препараты оказывают лечебное Действие.

Сальмонеллез отличали от коронавирусного энтерита по результатам бактериологических исследований (выделение культуры сальмонеллы, патогенной для белых г.лшей) и патолого«*нчилвгчесн8Р экспертизы. Сальмонеллез постоянно солровоздается высокой

температурой. Наблюдается перемежающийся понос.Селезенка и печень увеличены, на их поверхности наблюдают точечные кровоизлияния. Противосальмонеллезная сыворотка, антиб'иотики и сульфаниламидные препараты оказывают лечебное действие.

Диплококковую септицемию дифференцировали по результатам выделения культуры диплококка, патогенной для белых мышей, и учитывали,что'при этой болезни редко наблюдается понос. Температура тела повышена до 42°С. Печень и селезенка увеличены, капсула селезенки напряжена (каучукообразная). Противодипло-кокковая сыворотка, антибиотики и сульфаниламидные препараты оказывают лечебное действие.

Рота вирусный энтерит дифференцировали вирусологическими исследованиями (выделение и идентификация ротавируса) и учитывали, что при этой инфекции чаще всего слизистая оболочка • тощей и подвздошной кишки изменена. Антибиотики и сульфанил- ' амидиые препараты не оказывают лечебного действия.

Диспепсия, в отличие от коронавирусного энтерита, возникает чаще все о из-за погрешностей в кормлении и содержании.При • этом возбудитель болезни отсутствует. Понос чаще все о отмечается с первого дня жизни, через несколько часов после дачи молозива. Специфические сыворотки, антибиотики и сульфаниламидные препараты не оказывают лечебного действия..

Результаты исследований показывают, что при дифференциальной диагностике этих заболеваний решающее значение имеют данные вирусологических 'и бактериологических исследований патологического материала больных животных.

2.2.7. Изготовление и контроль сыворотки против коронавируса крупного рогатого скота

С целью получения противокоронавирусной сыворотки проводили гипериммуни зацию 52 коров коротщвкрусннм антигеном с Ге-магглютинирующим титром 7,6* 0.26-б/д.

Антиген животным вводили трехкратно, подкожно в паховую складку в дозах 5, 10 и 15 мл соответственно. Вторую и третью иммунизации проводили на 20 и 30-й дни после первого введения антигена.

В результате гипериммунизации титр антигемагглютишшов в сыворотке крови животных через Ю дней после третьего введения антигена достигал 8,6*0,63

Физико-химические свойства, стерильность, безвредность и активность сыворотки определяли согласно ТУ 42.14.

По физико-химическим и биологическим свойствам противо-коронавирусная сыворотка была слегка опалесцируидей, со -ломенно - желтого цветя. Конпенттапия водородных ионов составила от 6,8 до 7,6. Титр антигемагглютининов был не ниже 7,0 ¿¿Sj.

2.2.8. Исследования по изысканию новых химиотерапевтичесхих средств

Испытанию подвергал:! разработанные нами совместно с Институтом химии All Республики Таджикистан и ВИЭВ препараты: полквшшлэтинилтршлетилшшеридол с йодом (ПВЭНГИ) и репщро-пектат.

ПВЭНГИ представляет собой смесь комплекса полпвинилэти-нилтриметилпиперидс*,йода с йодидом калия.

Регидропектат - комплексный препарат, в состав которого

входят белая глина, пектин, глюкоза и электролиты.

Оценку активности препаратов проводили по противовирусной активности на культуре клеток и эффективности лечения больных коронавирусным энтеритом животных. Пооледшло изучали, применяя препараты как в отдельности, так и в сочетании с антикоронавирусной сывороткой.

2.2.B.I. Противовирусное действие препаратов. Регидро-дектат в концентрации 200 мг/кл не проявил противовирусного эффекта' в отношении коронавируса и не был отобран для дальнейшего исследования. Противовирусная активность ПВЭН1И была изучена в сравнении с йоцинолом.

В первоначалышх опытах была определена БО^-ная токсическая доза испытуемых препаратов для монослоя культуры клеток. Цитопатогенное действие их на линию клеток ВДВК изучали по влиянию на Морфологию последних.

ПВЭНГИ в концентрации 104 мкг/мл не вызывал визуально наблюдаемых изменений внешнего вида монослоя клеток в течение 24 ч, через 48 ч дегенерировало приблизительно 257«, а через 72-96.ч *■ около 50$ клеток. Препарат в более низких концентрациях практически не влиял на морфологию клеток в течение 96 ч. Максимально переносимая культурой клеток концентрация известного препарата йодинола к 96 ч составила 32 мкг/мл.

Изучение противовирусной активности ПВЭНГИ показало, что испытуемый препарат в концентрации 32-16 мкг/мл обладает способностью полностью предотвращать репликацию коронавируса в культуре клеток, при более низких его концентрациях -частично, йоданол в концентрации 15-10 мкг препятствовал

размножению коронавируса на 2,0 (д ^^о/мл"

Полное подавление ЦПД обнаруживалось в тех случаяг, когда урожай вируса подавлялся не тнев чем на 3,0 ф ^^бо/мл" Результаты исследований отражены в табл.5.

Таблица 5

Противовирусная активность ПВЭНГИ и Яодинола в культуре клеток 1ДЦВК ( ,/» =3)

:Множест~ 'Копквнт- 'Снижение урожая .

Препарат:венность грация г.вируоа_

препарата,. К0р0НаЗЕр7са

• -ттГ • А : итеш ЙЕ-2

пвэнти

1,0

од

йодинол 1,0

ОД

32 16

8 4 2

32 16 8

4 2

15 ГО

5

2,5 1.2 15 10

5

2,5 1.2

4.0x0,33 3,33±0,П

2,66x0,18 4,(^0,33

2,Зз±о,и 1.0±0 6

2,33x0,11 2,33±0,П 2,0±0 1,0±0 О

2,66x0,18

2.33x0,11 2,0^0,33

1,0*0 О

коронавпруса штамм КГ-85

4, (¿0,33

1.0=4? О

4,0±0,33 3.6б£о,П 2,0*0 1,0*0 О

2,33x0,11

1,0=0

о

2.33x0,11 2,(Ж) 2,0*0,33

1,0*0

О

Примечание. В контрольных культурах, необработанных

препаратагдт, коронавируо рэзгаожался в. титре

"5,0 тВДеоАя

10

Приведенные даняке свидетельствуют, что гспктэннне на?-л препарата обладали лпгнбиругада." свойство»' в отноиенпи обоих )пта?ч,:ов коронршрусе крупного рогетого скота. При 1>:ожествен-ностя ннфпцкрояркз'я I и ОД ТДДгл/г-пРтКа УГ°,7аЖ вируср в присутствия ЛВШГИ сяазклся но 2-4 Ц ТПДг/./,,^, в то т>г«>!'Л кяк

в присутствии йодинола - на 1-2 (Ц ТЦД^д^. Если сопоставить минимальные дозы испытанных препаратов, подавляющие репликацию коронавируса на 2-3 ^ОДдо/мл' 0 т°кскческт."и концентрациями, то для ПВЭНГИ и йоданола эти величины (хишотерапев-тический индекс) составляют 13 и 6,4 соответственно.

Результаты опытов показали , что ПВЭНГИ обладал низкой токсичностью для культуры клеток, а также выраженной эффективностью антикоронавирусного действия и превосходи по степени активности известный препарат йодинол.

2.2.8.2. Изучение терапевтической эффективности препаратов при коронанируоном энтерите телят. Эффективность разработанных препаратов ПВЭНГИ, регадропектата и антикорона-вирусной сыворотки для лечения больных коронавирусным энтеритом телят изучали в сравнении с терапевтическим действием таких известных в ветеринарии препаратов, как йодинол регидрат. Критериям! вффективности их служили продолжительность диареи у заболевших животных и их сохранность.

Экспериментальные исследования. Результаты проведенных в экспериментальных условиях опытов по определению терапевтического эффекта ПВЭНГИ, регадропектата и антикоронавирус-ной сыворотки-представлены в табл.6. Данные свидетельствуют«!**», что применение вышеназванных препаратов в дозах 2-3 мл/кг, 30-40 мл/кг и 4-6 мл/кг соответственно позволило вылечить 84,2-90,9$ больных коронавирусным энтеритом телят. Средний срок лечения колебался от 3,8*0,45 до 4,2*0,25 дней.

Наилучший терапевтический эффект достигнут при сочетанием применении ПВЭНГИ, регадропектата и антикоронавирусной

Таблица 6

Эффективность препаратов при лечении большое коронавирусным энтеритом телят

Группа »ивот- : Препарат •Доза :препара- 'Кол- :во Из них выздоровело "Средний :Срок ле-

шсс . та .живот— :ных голов % .чения Зцни)

I ПВЭНГИ I мл/кг 22 18 81,8 4,2-0,14

2 ПВЭНГИ 2 лл/кг 22 19 86,4 4,0*0,15

3 ПВЭНГИ 3 мд/кг 22 19 86,4 3,8-0,45

4 Регидро-пентат - 20 мл/кг 22 17 77,2 4,3*0,25

5 Регидро-пектат 30 мл/кг 22 19 86,4' 4,0*0,20

6 Регидро-пектат 40 мл/кг 22 20 90,9 4,0*0,20

7 Антикорона- вирусная сыворотка 2 мл/кг 19 15 78,9 4,5*0,10

8 Антикорона- вирусная сыворотка 4 мл/кг 19 16 84,2 4,1*0,45

9 Аятикорона- вирусная сыворотка 6 ил/кг 19 16 84,2 4,1*0,25

Ю йодинол + регидрат 4 мл/кг+ 30 ял/кг 22 17 77,2 5,8*0,34

Примечание. Противокоронавирусную сыворотку применяли

1 раз в день в течение 2-х дней. ПВЭНГИ -

2 раза, остальные препараты - 3 раза в день в течение 4-х дней. Способ применения -внутрь.

сыворотки. В этом случае процент вызцоеюшшх телвт составляя 96,2, а средний срок лечения - 3,1*0,11 дня.

Известные препараты йодинол л регидрат значительно уступали по терапевтическому эффекту разработанным препарата',;.

Производственные опыты. Терапевтический эффект препаратов изучали такте в производственных условиях но 206 больных коронавлруоякл' энтеритом телятах 8 животноводческих хо-

зяйств Таджикистана, неблагополучных по желудочно-кишечным ифккгам. Результаты исследований отражены в табл.7.

Таблица 7

Эффективность препаратов ПВЭНТИ, регидропектата и внтикоронавирусной сыворотки при лечении в производственных условиях больных коронавируеным витеритом телят

Группа животных

Доза, 'Кол-во'Из них внздо-

мл/кг :живот-: ровело_

■•ННХ

:гол. : %

Средний срок ле-чениждни)

206 198 96,1 3,2±0,Ю

94

71

75,5 5,б±0,П

Опытная ПВЭНТИ+ре- 3+304 гкдропектат+ антгашронв-вирусная сыворотка

Конт- Йодинол+- 4+30 рольная регидрат

Примечание. Протавокоройав ярусную сыворотку применяли

1 раз в день в течение 2-х дней. ПВЭНТИ -

2 раза, остальные препараты - 3 раза в день в течение 4-х дней. Способ применения -внутрь.

Данные свидетельствуют, что терапевтическая аффект ев- , пость разработанных препаратов при комбинированном их применении достигала 96,3$. Средний срок лечения больных телят составлял 3,2*0,10 дня. Применение известных препаратов йодинола с регидратом при лечении больных телят способствовало выздоровлению 75,5$ животных, при этом средний срок леченая ооотавлял 5,6*0,11 дней.

Результаты экспериментальных и производственных исследований показали , что препараты ПВЭНТИ, репщропектат к противокоронавлрусная сыворотка являются эффективными средствами для лечения больных коровдвирусшк энтеритом телят, особенно при комбинированном их применении.

Экономический эффект от применения препаратов при лечении (Зольных коронавирусным энтеритом телят па рубль зат- , рат составил I руб. 97 коп.

2.2.9. Испытание системы мероприятий по профилактике коронавирусного энтерита телят

Профилактика коронавирусного энтерита телят включала комплекс взаимосвязанных и обязательных мероприятий:

создание благоприятных условий содержания и кормления стелышх коров и нетелей;

овоевременная диагностика клинически здоровых коров-вирусоносителей и предотвращение заражения от них телят;

иммунизация стельных коров и нетелей за 40 и 20 дней до отела ТОМ формолвакциной против коронавирусного энтерита;

санитарная обработка нарушая половых органов и вымени стельных животных непосредственно перед родами и проведение родов в чистых дезинфицированных боксах;

создание необходимых условий для приема новорожденного теленка и проведения ветеринарно-санитарной обработки;

своевременная выпойка новорожденных телят противокорона-вирусной сывороткой и тздунны» молоз11вом матери.

2.2.9.1. Экспериментальные исследования. Эффективность системы мероприятий по. профилактике коронавирусного энтерита в экспериментальны! условиях изучали на 105 стельных коровах и полученных от них телятах.

Помимо проведения других вышеуказанных мероприятий, коров (21 гол.) первой подопытной группы за 40 и 20 дней до

отела вакцинировали цротивокорояавирусной ГОАЛ формолвакци-ной двукратно, подкожно по 5 гл. За 10-15 дней до отела фекалия стельных коров исследовали на наличие коронавирусного антигена методом адсорбщш-элюции-гемагглютинации. Клишчес-ки здоровых коров-вирусоносителей изолировали, и их отел происходил в отделышх боксах. Сразу после рождения у телят, полученных'от коров этой группы, ротовую полость проживали раствором 1ШЭНГИ в объеме 100 мл и на 20-30-ю минуты жизни их выпаивали противокоронавирусной сывороткой в дозе I млДг пассы тела. Спустя 60-90 мин после рождения новорожденных телят выпаивали молозивом матери из расчета 20-30 мл/кг массы тела, в дальнейшем - 3 раза в день по 20-30 мл/кг массы тела. При этом на 3 и 5-й'дни к выпаиваемому молозиву добавляли 2 раза в день противокоронавирусную сыворотку в дозе I мл/кг;.

Кивотиых второй и третьей групп (по 21 гол.в каждой) обрабатывали по той же схеме опыта, как и для животных пор-вой группы. Только новорожденных телят выпаивали противокоронавирусной сывороткой в дозе 2 и 3 мл/кг массы тела соответственно.

Стельные коровы четвертой и пятой групп (по 21 гол. в каждой) и полученные от них телята служили контролем. При этом коров четвертой группы иммунизировали противокоронави-• русной ГОМ формолвакциной, а коров пятой группы не вакцинировали и телят спустя 60-90 мин после рождения выпаивали только молозивом коровы-матери.

Критериями оценки эффективности системы мероприятий являлись заболеваемость, продолжительность диареи у заболевших и сохранность телят.

Исследования показали, что заболеваемость телят корона-вирусным энтеритом в первой груше составила 9,5«, а во второй и третьей группах - 4,7)2. Заболевание протекало в виде легкой диареи, продолжалось в течение 2,8*0,04 дней. Случае? вынужденного убоя и падежа больных телят не отмечали.

В четвертой и пятой группах коронавирусшм энтеритом заболело соответственно 14,3 и 38,3$ животных. Заболевание с клиникой диареи, особенно у телят пятой группы, протекало тяжело и продолжалось 6,21*0,01 дней. Пало и вынужденно'убито 14,3$ больных телят.

Для определения динамики накопления противокоронавирус-шх антител в крови и содержимом кишечника новорожденных телят и з!зучения их роли в профилактике коронавирусного энтерита исследовали выпаиваемое молозиво, сыворотку крови и фекалии телят второй опытной и пятой контрольной групп. С этой целью ежедневно в течение 10 дней отбирали пробы материала и исследовали в ЕГА и ИГА.

Результаты исследования показали, что в сдаоротке крови телят опытной группы средний титр антител в первые 4 суток составлял 6,8*0,01 в дальнейшем он снижался и к 10 сут достигал 5,2*0,19¿сдл. В фекалиях титр антител в первые 4 сут колебался от 8,2*0,20 до' 10,0*0,20^, затем он снижался и к 10 сут составлял 4,4*0,09 ¿¿"/л.

Исследование фекалий телят на наличие коронавирусного антигена показало, что на 6 и 8-е сут титр антигена повысился до 5,0*0,25^2 голов.

Средний титр антител в сыворотке крови телят контрольной группы в первне 4 сут достигал 2,3*0,19 затем

он постепенно снижался и к 10-м суткам составлял 1,9*0,03 Б фекалиях антитела в первые 3 суток определяли в титре 4,4*0,19^.!, затем последний резко снижался и к 6-10-м суткам составлял 0,220,04 ¿¿»/д. По мере снижения титра специфических антител в фекалиях повышался титр вирусного антигена, и у 8 телят отмечалась диарея. Титр коронавирусного антигена у больных колебался от 6,0*0,24 до 10*0,34

В молозиве коров опытной группы в первые 4 суток антитела определяли в титре от 8,2*0,44 до 4,3*0,20 далее титр снижался и в 10-м суткам составлял 0,4*0,04

Уровень антител в молозиве коров контрольной грзипы с каждым днем после огела снижался: к 4-м суткам он составлял 0,50*0,03¿о$х и к 6-10 суткам антитела не обнаруживали.

Результаты проведенных- исследований показали, что уровень антител в крови и фекалиях телят зависел от титра и количества их в выпаиваемом молозиве. Поступающие в желудочно-кишечный тракг теленка антитела не все всасывались в кровь, большая часть их выделялась с фекалиями. Титр коронавирусно»-го антигена в содержимом кишечника находился в обратной зависимости от титра антител в нем, Прешлущественную роль в профилактике коронавирусного энтерита играли антитела, содержащиеся в просвете кишечника телят.

Установлено, что своевременное выявление коров-вирусо- ■ носителей и их изоляция, вакцинация коров против коронавирусного энтерита, обработка ротовой полости телят раствором ПВЭНТИ, пероральное введение противокоронавирусной сыворотки из расчета 2-3 мл/кг с последующей выпойкой телят молозивом матери позволяют эффективно осуществлять профилактику корона-

вирусного энтерита.

2.2.9.2. Дроизводствешше опыты. Профилактическая аффек-тивность систеш в' производственных условиях изучалась на 1560 стельных коровах и полученных от них телятах в 6 неблагополучных по коронавирусной инфекции хозяйствах. Результаты исследований представлены в табл.8.

Таблица 8

Эффективность систеш мероприятий по профилактике коронавирусного энтерита телят

Группа1Кол-во"Всего забо-'Выявлен "Средняя про- :Из них живот-:живот-:лело с кж-:корокави-:должительность :пало пых :ных :никой дна- .русннй .диареи (цни) фолов)

: :реи(голов1 'энтерит _:_:_ягодой _:_

Опытная 1012 128 (12,6) 62 (6,1) 1,8*0,12.' I (1,6)

Контрольная 548 281 (51,3) 191 (35) 5,7*0,59. 25 (13,1)

Примечание. В скобках данные в процентном выражении.

Из дашшх таблицы 8 видно, что в опытной группе переболело коронавцрусшм энтеритом в легкой форме 6,1/5 животных, продолжительность болезни составила 1,8*0,12 дней. В контрольной группе заболевание регистрировали у 35$ животных, протекало оно тяжело. Продолжительность его в расчете на" одного теленка составила 5,7*0,59 дней. Смертность достигала 13,1$.

Результаты исследований свидетельствуют о том, что разработанная система мероприятий является эффективной и позволяет значительно снизить заболеваемость *ивотч"у корона-вирусны!'. энтеритом и летальность.

Экоиошческий эффект от прпгененпя сксте:.и г.еропрглтЕй по профилактике коронавирусного энтерита телят по оценке на

Т января ?994г на рубль затрат составил 7 руб.36 коп.

ВЫВОДЫ

I. Установлено, что желудочно-кишечные болезни молодняка крупного рогатого скота широко распространены в животноводческих хозяйствах Республики Таджикистан и наносят значительный экономический ущерб. Заболеваемость телят на молочно-товерных и откормочных комплексах достигает 70-80^.

?.. Вирусологическими и серологическими исследованиями показано,что в этиологии желудочно-кишечных болезней телят в Таджикистане важную роль играет коронавирус. Уз 39 исследованных хозяйств коронавирусный энтерит диагностирован в 35 (89,71. Заболеваемость новорожденных телят в Т984-Т994гп составила 38,8£.

3. Коронавирус крупного рогатого скота выявлен как в отдельности (?5так и в различных ассоциациях: с ротави-русом (Т0,9£>, эшерихией коли (Т7,3$\ ротавирусом и эшерихией коли (6,4^1.

4. Выделенные от больных телят штаммы вируса идентифицированы как кооонавирус крупного рогатого скота. Виоус чувстви-■ телен к воздействию эфира, хлороформа, прогреванию при 65°С; обладает гемагглютинирующеС и гемадсорбирукщей активностью

по отношению к эритроцитам мышей, крыс и хомячков; вирионы разметом 80-140 нм, с характерной для коронавирусов морфологи ей.

Изолированные штаммы коронавирус« были антигенно родственны референтному штамму.

5. Коронавирусным энтеритом болеют главным образом (94,9Ю телята 2-Т4 - дневного возраста независимо от пола, по-

роды скота и сезона года.

6. Источником возбудителя коронавирусного энтерита являются больные, переболевшие телята,клинически здоровые кopoто-виpvcoнocитeли, которые выделяют возбудитель

с фекалиями во внешнюю среду.

Факторами передачи коронавируса служат контаминкрован-ные вирусом кормушки, решетки, подстилка, а также одежда обслуживающего персонала.

7. В экспериментальных условиях при заражении коронави-русом штамма КТ-85 воспроизведено у телят заболевание с симп-томокомплексом, характерным для коронавирусного энтерита

(апатия,анорексия, диарея, дегидратация). При патологоана-тотгческом вскрытии пактах и убитых телят, больных корона-вирусным энтеритом, установлено катаральное воспаление сычуга, кишечника и серозное воспаление меэентериальных лимфатических узлов.

8. °аэработан набор для диагностики коронавирусного энтерита телят методами гемагглютинапии и адсорбции-элюции-гемагглютинации.

9. Определены оптимальные условия постановки реакции адсорбпии-элюции-гемагглютинапии при диагностике коронавирусного энтерита и установлено ,■ что указанная реакция по сравнению с Р^А является более чувствительной.Она позволяет выявлять в 4 раза больше положительных проб, чем РГА.

ТО. Отработана технология приготовления и контроля про-тивокоронавирусноР сыворотки из крови гипериммунизированных коров, активность которой колебалась от 7,0 до 9,0 &>$г . Выраженная терапевтическая эффективность препарата проявлялась при двукратном его применении внутрь больным коро-нявирусныу энтеритом телятам в дозе 4-6 мл/кг с интервзлом

в один день,

"тт. Разработаны и внедрены химиотерапевтические препараты ПВЭНТИ и регидропектат для лечения больных коронавирусным энтеритом телят. При пероральном применении препаратов выздоровление отмечалось у 86,3 и 88,7% больных телят.

ГЧ. Совместное применение химических и биологических препаратов (ПВЭНТИ,регидропектат,сыворотка! является более эффективным. Терапевтическая эффективность комбинированного использования указанных препаратов составляет 96,ТЯ.

ТЗ. Разработан способ профилактики коронавирусного энтерита телят с использованием гипериммунной специфической сыворотки. Показано, что преимущественную роль в профилактике коронавирусного энтерита телят играли антитела, содержащиеся в просвете кишечника животных.

Титр коронавирусного антигена в содержимом кишечника телят находился в обратной зависимости от титра антител в нем. При наличии антител в титре 5,0 выше отмеча-

ли отсутствие размножения коронавируса в кишечнике.

14. Установлено,что система мероприятий, включающая меры по предотвращению заражения телят коронавирусом,активную иммунизацию стельных коров противокоронавирусной вакциной и повышение специфической резистентности новорожденных телят с помощью специфических антител, позволяет снизить заболеваемость молодняка крупного рогатого скота корона вирусным энтеритом в 3-4 раза и предотвратить гибель телят.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДИ02ЕНЙЯ

1. Инструкция по изготовлению и контролю набора для диагностики коронавирусного энтерита крупного рогатого скота методом гемагглютинацил: Утв. ГВУ при Госкомитете Совмина СССР по продовольствию и закупкам 11.08.90 г.

2. Технические условия на набор для диагностики коронавирусного энтерита крупного рогатого скота методом гемагглютинации : Утв. Г7В при Госкомитете Совмина СССР по продовольствию и закупкам II.08.90 г. Зарегистр. МЦСМ Госстандарта СССР 29.11.90 г.; й 005/023405.

3. Наставление по применению набора для диагностики го-ронавирусного энтерита крупного рогатого скота методом гемагглютинации: Утв. 173 П.08.90 г. (A.C. № 1628294 от

15.II.90 г.).

4. Технические условия на препарат "Полившшлэтшшл-триметилпаперидол с йодом (ПВЭНГИ)": Утв.ГУВ ЛКХ Российской Федерации 31.12.92 г.

- 5. Наставление по применению препарата ПВЭНГИ для лечения и профилактики желудочно-юшечгшх и респираторных заболеваний с.-х. животных: Утв. ГУВ МСХ Российской Федерации 31.12.92. (Патент Л I7939I9 от-ß.10.92 г.).

6. Инструкция по изготовлению и контролю регидропекта-та для лечения желудочно-кишечных болезней молодняка с.-х. животных: Утв.ГУВ МСХ Рёспублики Таджикистан 5.08.93.

7. Технические условия на препарат регидропектат: Утв. ГУВ МСХ Республики Таджикистан 5.08.93.

8. Наставление по применению регадропектата для лечения яелудочгго-гашечшос болезней молодняка с.-х. етвотных:

Утв. 1УВ МСК Республики Таджикистан (Положительное уведомле-шв на изобретение № 93032731/15 (032279) от 23.06.93).

9. Рекомендации по дифференциальной диагностике и лечению рота- и коронавирусных энтеритов телят: Утв. 17В Госагро-проыа Таджикской ССР 12.05.90 г.

10. Рекомендации по профилактика и лечению желудочно-кишечных болезней телят (коронавируоный витерит и колибакте-риоз): Утв.ТУВ ЫСХ Республики Таджикистан, 28.12.1993 г.(патент # 1793930 от 08.10,92 г. Способ профилактики коронави-русного энтерита телят).

11. Обнаружение короназируоа методом адсорбции-элюцки-гемагглютинации /Удостоверение на рационализаторское предложение № 28 от 15.10.87 г., выданное ГАП Таджикской ССР.

12. Устройство для удаления шшей из лунок агара / Удостоверение на рационализаторское предложение № 42 от 04.01.1988 г., выданное ГАП Таджикской ССР.

13. Способ лечения рота- и коронавирусных энтеритов новорседенннх телят /Удостоверение на рационализаторское предложение Л 43 от 18.01.88 г., выданное ГАП Таджикской ССР.

14. Система сохранения и выращивания здоровых телят на откормочных.комплексах /Удостоверение на рационализаторское предложение № 17 от 2.11.89 г., выданное межхозом им.Фрунзе ГАП Тадаикской ССР.

15. Система мероприятий по борьбе о желудочно-кишечными и респираторными заболеваниями телят в хозяйствах Республики Тадаиквстан: Утв. 1УВ Госагропрома Таджикской ССР 11.09.90 г.

16. Методические рекомендации по применению метода ад-

сорбции-элюции-гемвгглстмнацим для выявления коронавируса крупного рогатого скота: Одобрены секцией "Эпизоотология и профилактика инфекционных болезней животных" BACXHWI' 76Л9Д987 .

Т7. Система мероприятий по профилактике смешанной инфекции желудочно-кишечного тракта молодняка крупного рогатого скота: Утв. ГУВ ТОС Республики Таджикистан Т8.Т2Л994 .

Список работ, опубликованных по теме диссертации:

1. Сатторов WЛ., Соколова H.JI.,,Авилов B.C.1 Гемаггто-тинирующие свойства коронавируса крупного рогатого скота //Еш.ин-та/ВГОВ, В.59, Т985,-С.37..39.

2. Сатторов И.Т., Салихов У.Х. Профилактика диареи телят в молочный периоц // Сельское хозяйство Таджикистана. т985, » fi. - С.28...29.

3. Сатторов И.Т., Языков А., Салихов У.Х. Предупрежде-денив желудочно-кишечных болезней новорожденных телят //Ин-форм. листок /Таджик ДОИНТУ/ Т985, » 77-85. 3 с.

4. Сатторов И.Т., Белкин Б.Л., Жумаев Н.С. Диагностика вирусной диареи новорожденных телят //Сельское хозяйство Таджикистана, тдеб, » б. - С.2Р>...77.

5. Соколова Н.Л., Мникова Л.А.,' Сатторов И.Т. Обнаружение коронавируса крупного рогатого скота методом непрямой иммуно-йшуоресценции /Аруды ин-та/ВКЭВ, т987, т.64. -С. ^б...17.

6. Сатторов И,Т. Серологическое исследование крупного рогатого скота на рота- и коронавирусную инфекции /Дез. докл.Респ.науч.-практ.конф.молодых ученых и специалистов Таджикской СС° /Душанбе,^Р?,- С.TIT.

7. Жумаев Н.С.,Белкин Б.1., Сатторов F.T. Профилактика

и меры борьбы с желудочно-кишечными болезнями телят //Сельское хозяйство Таджикистана. Т9ЕГ7, «6. - С. ЗТ...ЗЗ.

В. Сатторов И.Т., Жумаев Н.С. Лечение энтеритов новорожденных телят //Агропромышленные комплекс Таджикистана. Т988, й I. - С.43...44.

9. Сатторов И.Т., Соколова H.JI. Коронавирусный энтерит телят (диагностика и лечение) // Ветеринария, Т989, u 9.-С. 37...38.

ТО. Сатторов И.Т., Куш ев Н.С. Ассоциированое течение рота- и коронавирусных энтеритов телят // Меры борьбы и профилактики с инфекционными.инвазионными и незаразными болезнями с.-х. животных в Таджикистане: Сб.науч.тр.Тадж.НИВЙ, Т989, -С. 40...42.

П. Сатторов И.Т., Амирбеков М., Шумаев Н.С.,Аюбов H.A., Дяураев М. Опыт профилактики пневмоэнтеритов телят в откормочных комплексах //Информ.листок/ Таджик НИШГН/ Т990, • ю 4-90. -3 с.

12. Сатторов И.Т., Жумаев Н.С. Дифференциальная диагнос- • тика желудочно-кишечных болезней телят //Сельская жизнь, Т990, «■ 8. - С. 20...23.

13. Сатторов И.Т. Сравнительная оценка серологических и электронно-микроскопических исследований в диагностике коро-навирусного энтерита телят // Ветеринарно-санитарнив и лече&ж мероприятия на комплексах и фермах Таджикистане: Сб.науч.тр. Таджик.НИВИ / Т990, - С. 20...23.

2Г4.Сатторов И.Т., Еумаев Н.С. Мутобикан муайн кардйни касалихои меъдаю рудаи гусалахои навзод //Хаёти дехот.Т990,

* 8. - С. Т9...23.

т5. Сатторов И,Т., Жумаев Н.С. Ассоциированное течение вирусного энтерита и колибактериоэа телят //Тез. докл.ИТ Всес.конф. по эпизоотологии. Новосибирск, Т991,- С.349..25Т.

т6. Сатторов И.Т. Условия, способствующие возникновению коронавирусного энтерита новорожденных телят // Вогтр, диагностики и профилактики заболеваний с.-х. животных в Таджикистане: Сб.науч.тр. Тадж. НИВИ. т99т, -С.3т...34.

17. Сатторов И.Т. Соколова Н.Л. Роль антител э содержимом кишечника телят в предотвращении коронавирусного энтерита // Труды ин-та/ ВИЭВ, Т99Т, - С. 8Т...85.

Т8. Сатторов У.Т., Степнова С.Н..Турдиев Ш. Применение препарата ПВЭНТИ при желудочно-кишечных заболеваний телят // Информ.листок/Таджик НИИНТИ/Т992,» 27-9?.-2с.

Т9. Сатторов ч.Т.,М.Амирбеков М., Степнова С.Н»,Аноятбеков М., Холов С. Изучение антибактериальных свойств поливянилэти-нилтриметилпиперндола с йодом (ПВЭНТ1Л // Вопр. охраны здоровья животных: Сб. науч.тр.Тад*. НИВИ, Т992, - С-40 42.

20. Сатторов И.Т. Коронавирусный энтерит новорожденных телят и меры борьбы с ним // Вопр. охраны здоровья животных: Сб.науч.тр. Тадж.ШВИ, 1992, - С. 32...39.

2Т. Сатторов И.Т., Степнова-С.Н., Халиков Д.Х., ТУрдиев Ш. ' Опенка эмбриотоксической и тератогенно« активности ПВЭНТИ на эмбрионах кур// Информ.листок/Таджик НУ№17/1993,"79-93-20.

22. Сатторов ИЛ. Противовирусная активность препарата ПВЭНТИ // Унформ.листок/Таджик НИЯТГИ/ Т993, 80-93. - 2 с.

?3. Сатторов И.Т.,Холов С.Х., Халиков Д.Х Антибактериальная активность препарата ПВЭНТИ в зависимости от концен-

трации полимера // Материалы науч.-произ.конф.посв.йО-леткю Таджикского НИШ / Душанбе,1993. - С. 39...42.

24. Сатторов И.Т., Аноятбеков М., Амирбеков М., Холов С. Результата изучения токсических свойств ПВЭНТИ // Материалы науч.-произв.конф.поев. 50 леткю Таджикско о НИВИ / Душанбе, Т993. - С. 48...50.

25. A.c. Р Т628294, ТбЛОЛЭЭО, Способ получения диагнос-тккума для выявления коронавкрусной инфекции крупного рогатого скота / Соколова Н.Л.,Гоголев М.М., Сатторов И.Т.//.

26. Патент »> Т7939Т9, 8.Т0.Т992. Состав для лечения бронхопневмонии животных /Амирбеков М.,Халиков Д.X.,Холов С., Сафиулина Ф.Х..Степнова С.Н,.Саггоров К.Т..Аноятбеков М., Мусоев З..Равшанов В.//

27. Патент » 1793930,.8. 10.1992. Способ профилактики коровавярусного энтерита телят / Сатторов И.Т., йумаев Н.С., Соколова Н.Л.//