Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.02) на тему:Патоморфология и вопросы патогенеза гемобластозов крупного рогатого скота

МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА И ПРОДОВОЛЬСТВИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ имени К. И. СКРЯБИНА

Р«-Щ-—-

т з

На правах рукописи

- СНОЗ Григорий Васильевич

ПАТОМОРФОЛОГИЯ И ВОПРОСЫ ПАТОГЕНЕЗА ГЕМОБЛАСТОЗОВ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА

16.00.02 — патология, онкология и морфология животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Москва

1995

Работа выполнена в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина.

Научный консультант — доктор ветеринарных наук, академик РАСХН, Заслуженный деятель науки Российской Федерации, профессор Шишков В. П.

Официальные оппоненты:

1. Доктор ветеринарных наук, профессор Сулейманов С. М.

2. Доктор ветеринарных наук, профессор Касьяненко И. И.

3. Доктор ветеринарных наук, профессор Нахмансон В. М.

Ведущая организация — Казанская государственная академия ветеринарной медицины им. Н. Э. Баумана.

Защита диссертации состоится » 1995 г.

в /Сл г*, час. на заседании диссертационного совета Д 120.36.01 по защите диссертаций на соискание ученой степени доктора наук в Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина (109472, Москва, ул. Академика Скрябина, 23, тел. 37793-83).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке академии.

Автореферат разослан «> 1995 г.

Ученый секретарь диссертационного совета

Слесаренко Н. А.

I. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Актуальной задачей ветеринарной науки и практики являются гемобластозы (лейкозы и гемато-саркомы). И не потому, что они регистрируются повсеместно и уровень животных, больных лейкозами, в хозяйствах недопустимо высок, а мероприятия оздоровления крупного рогатого скота от лейкоза дорогостоящие. Самое главное заключается в том, что заболевание получает все более широкое распространение.

В связи с тем, что лейкоз крупного рогатого скота отнесен к инфекционным заболеваниям, ученым предстоит изучить возможную взаимосвязь между лейкозами крупного рогатого скота и человека, так как отмечается общая тенденция роста этих заболеваний. Сходство клинико-морфологиче-ского проявления и механизма этого заболевания у животных и человека дает основание считать лейкоз не только одной из опаснейших болезней, но и ставит его в ряд общебиологических и социальных проблем. В связи с этим борьба с лейкозом имеет важно е государственное значение. Однако эффективность мероприятий будет высокой лишь тогда, когда наука и практика будут располагать полным знанием этиологии, иметь на вооружении методы ранней диагностики, специфические средства профилактики и лечения больных животных.

В медицине все основные успехи в выяснении этиологии, патогенеза, эпидемиологии и в экспериментальной терапии злокачественных новообразований достигнуты на лейкозных объектах. Лейкоз, как справедливо отмечают В. М. Бергольц, Н. С. Кисляк, В. С. Еремеев (1978), может быть отправной точкой в решении проблемы рака в целом, а успехи в изучении лейкозов и борьбы с ними смогут быть распространены на другие формы злокачественных новообразований.

Наряду с изучением спонтанных опухолей, включая лейкозы животных, проводили и экспериментальные исследования. Истоком экспериментальной онкологии всего мира стала работа нашего соотечественника магистра ветеринарных наук Мстислава Александровича Новинского, который провел глубокие исследования по прививке и пассированию злокачественных опухолей. В 1876—1877 гг. им описаны методики трансплантации опухолей и перевивки кр>глоклеточ-ной саркомы наружных половых органов от больной собаки здоровой.

Гемобластозы поражают все виды животных, включая птиц. В настоящее время эта болезнь представляет большую

опасность для крупного рогатого скота, в меньшей степени поражаются овцы, свиньи, лошади, козы и другие сельскохозяйственные животные. Крупный рогатый скот болеет чаще, видимо, потому, что он используется дольше (8 лет и больше), тогда как продолжительность жизни свиней, находящихся на откорме, редко превышает 1 год.

Большой вклад в изучение гемобластозов крупного рогатого скота внесли Е. А. Андриян, Л. Г. Бурба, В. А. Бусол, А. Ф. Валихов, М. И. Гулюкин, Г. Ф. Коромыслов, В. А. Крикун, Т. П. Кудрявцева, Р. А. Кукайн, В. М. Лемеш, JI. И. Нагаева, В. М. Нахмансон, Э. М. Нымм, X. С. Салимов, Г. А. Симонян, В. П. Шишков, J. Ferrer, L. Gross, J. М. Miller, L. D. Miller, C. Olson, M. J. Van der Maaten и др. Открытие вируса лейкоза крупного рогатого скота позволили по-новому взглянуть на проблему этого заболевания и организовать профилактику. Особое значение в изучении проблемы гемобластозов имело выдвижение В. П. Шишковым (1979) вирусо-иммуно-генетической теории этиологии, профилактики и патогенеза лейкозов и ряда опухолевых заболеваний животных (лейкоз крупного рогатого скота, птиц, кошек, собак, лимфома Марека птиц, саркома кур, папилломатоз крупного рогатого скота, кроликов и др.).

Гемобластозы отличаются большим разнообразием клеточного состава и клинического проявления. Все это привело к созданию почти 200 классификаций гемобластозов человека и животных. В настоящее время по-прежнему господствует унитарная теория кроветворения, основы которой заложены А. А. Максимовым в 20-е годы. Он рассматривал малый лимфоцит как полипотентную клетку. Новое учение (И. Л. Чертков, А. И. Воробьев, 1973) о кроветворении и выделении лимфоцитоподобной родоначальной стволовой клетки позволило по-новому рассматривать механизм регуляции гемопоэ-за и классифицировать лейкозы. Последние экспериментальные данные не подтверждают роль ретикулярных клеток как исходных при гемопоэзе, и поэтому отпала необходимость использования термина «ретикулез» применительно к лейкозам.

Цель работы. Обобщить исследования, проведенные за последние 18 лет. Рассмотрев их в новом аспекте, дать па-томорфологическую характеристику спонтанных и экспериментальных гемобластозов крупного рогатого скота, включая сравнительную патоморфологию и патогенез экспериментального лимфолейкоза у каракульских овец. Обобщение на современном этапе данных, относящихся к патологоанатоми-ческой, гистологической и цитохимической диагностике ге-

«областозов, будет полезно для лучшего понимания проблемы лейкозов вообще и патоморфологической диагностики, в

1ЭСТН0СТИ.

Задачи исследования:

1. Изучить локализацию патоморфологических изменений в органах и тканях крупного рогатого скота при лейкозах и гематосаркомах на разных стадиях развития патологического процесса.

2. Найти наиболее часто и первоначально поражаемые лимфатические узлы и органы и разработать морфологиче-:кие критерии диагностики лейкозов и гематосарком на ранних стадиях патологического процесса.

3. Выяснить патоморфологическое состояние органов и тканей, используя гистоцитохимические методы исследования, у больных лейкозами коров и дать оценку этим методам при дифференциальной диагностике лейкозов.

4. Дать сравнительную характеристику цитоморфологиче-ских и гематологических данных и установить роль гистологического метода в диагностике гемобластозов.

5. Изучить особенности развития патологических изменений у крупного рогатого скота при гематосаркомах.

6. Разработать дифференциальную диагностику лейкозов \ гематосарком.

7. Изучить патоморфологию и патогенез эксперименталь-гых гемобластозов у крупного рогатого скота.

8. Изучить сравнительную патоморфологию и патогенез экспериментального хронического лимфоидного лейкоза у каракульских овец.

9. Установить возможность заражения овец вирусом лейкоза при манипуляциях одной иглой, контаминированной <ровью от инфицированной возбудителем коровы.

10. Воспроизвести лейкоз крупного рогатого скота и овец / коз.

11. Дать морфологическую характеристику лейкемоидных реакций.

Научная новизна. Выполнение поставленных задач позвонило экспериментально доказать и подтвердить патоморфо-тогическими исследованиями роль ВЛКРС в этиологии лейкозов крупного и мелкого рогатого скота, установить зако-юмерности поражения различных отделов кроветворной системы при лейкозах и гематосаркомах крупного рогатого :кота, дать морфо логическую характеристику лейкемоидных >еакций и ранних стадий гемобластозов крупного рогатого :кота.

В процессе работы определена также специфика морфологических изменений в органах и тканях крупного рогатого скота, больного лимфолейкозом в ранней стадии заболевания в сочетании с воспалительными процессами в органах. Получены и описаны характерные патоморфологические показатели лейкозов и гематосарком. Разработана дифференциальная диагностика этих заболеваний на основе применения комплекса патологоанатомических, гистологических, цитологических и гистоцитохимических особенностей. Изучена возможность заражения BJIKPC овец посредством иглы, кон-таминированной кровью инфицированного вирусом лейкоза животного. Определены отличия гемобластозов от лейкемоид-ных реакций.

Теоретическая и практическая значимость. Полученные результаты с использованием современных методов патомор-фологического исследования позволили расширить представления о патоморфологии и патогенезе гемобластозов в зависимости от стадии развития патологического процесса.

Научное значение работы заключается в изучении сравнительной патоморфологии спонтанного и экспериментального хронического лимфолейкоза у крупного рогатого скота и впервые воспроизведенного названного заболевания у каракульских овец, а у коз удалось получить онковирусную инфекцию. Разработаны критерии дифференциации лейкозов и гематосарком.

Практическая значимость исследований и развиваемых в диссертационной работе теоретических предложений нашли практическое выражение в следующих документах:

Информационном листке № 388—86 «Патолого-морфоло-гическая диагностика лимфоидных гемобластозов крупного рогатого скота» (1986);

Листовке ВДНХ СССР «Патолого-морфологическая диагностика гемобластозов крупного рогатого скота» (1986);

Лекции «Патолого-морфологическая диагностика гемобластозов крупного рогатого скота» (1986);

Лекции «Гемобластозы крупного рогатого скота» (1990);

Методических рекомендациях «Дифференциальная диагностика гемобластозов и онкорнавирусной инфекции у сельскохозяйственных животных (1990).

Апробация работы. Материалы исследований доложены на Всесоюзных научно-методических конференциях по патологической анатомии сельскохозяйственных животных: Львов — 1978, Витебск — 1981, Каунас — 1984, Саратов — 1987, Харьков — 1990, Воронеж — 1993.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 20 работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 186 страницах машинописного текста и включает: введение, обзор литературы, собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы, предложения, список использованной литературы включает 278 работ (205 — отечественных и 73 — зарубежных) и приложения. Диссертация иллюстрирована 40 микрофотографиями, 1 графиком, 8 таблицами, 1 схемой.

На защиту выносятся следующие вопросы:

1. Патоморфология и патогенез спонтанных и экспериментальных гемобластозов крупного рогатого скота.

2. Сравнительная патоморфология и патогенез экспериментального хронического лимфоидного лейкоза каракульских овец.

3. Дифференциальная диагностика лейкозов и гематосар-ком и нх отличия от лейкемоидных реакций.

II. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Материалы и методы исследований

Исследования проводились в 1977—1994 годах в научно-■исследовательской лаборатории по изучению гемобластозов и иммуномодуляторов сельскохозяйственных животных Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина, а также на Московском, Ногинском и Егорьевском мясокомбинатах.

Материалом исследований спонтанного лейкоза служили лимфатические узлы, висцеральные органы, скелетная мускулатура и грудная кость от 905 больных коров черно-пестрой породы, убитых на мясокомбинате или павших в возрасте ¡3—9 лет. Для выяснения патоморфологических особенностей костной ткани на разных стадиях развития хронического лимфоидного лейкоза у крупного рогатого скота использовали все кости скелета 35 коров холмогорской породы, убитых в возрасте 5—8 лет на мясокомбинате. Гистологически исследовали грудную кость и шестое ребро на месте соединения кости с хрящом в продольном и поперечном сечении. "При серологических исследованиях (в реакции иммунодиф-

фузии — РИД) у этих животных выявили четкие линии преципитации с вирусспецифическим антигеном. При изучении распространения гемобластозов в хозяйствах клинико-гемато-логические исследования проведены совместно с А. Е. Га-латюком.

Для изучения экспериментального лейкоза крупного рогатого скота проводили опыты на четырех годовалых телятах черно-пестрой породы, полученных от здоровых коров, свободных от лейковирусной инфекции. Культуральную жидкость (48 часовая культура крови лейкозной коровы), содержащую вирус лейкоза крупного рогатого скота, вводили вну-трибрюшинно в дозе 100 мл на одного теленка. Трое животных были контрольными — им вводили в таких же дозах среду Игла (В. А. Крикун). Для проведения опытов по воспроизведению лейкоза у эстонских (аборигенная, эстонская красная, эстонская черно-пестрая) пород крупного рогатого скота 15 новорожденных телят были приобретены из хозяйств, благополучных по лейкозу. В начале опытов возраст подопытных животных составлял 5—39 дней.

Для заражения использовали очищенный онкорнавирус, цельную кровь коровы, больной лейкозом, культуру мико-плазм, суспензии клеток, выделенных из молока больной лейкозом коровы. Онкорнавирус был выделен из первичных культур лейкоцитов и клеток лимфатических узлов, почки, селезенки больных лейкозом коров. Данные вирионы имели структуру типа С. Очищенная культура микоплазм выделена из тех же первичных культур, из которых был выделен исследуемый онкорнавирус. Вирус был введен телятам в костный мозг (интрастернально), в предлопаточный лимфатический узел, внутримышечно, подкожно, внутривенно. Кровь больной лейкозом коровы в количестве 50 мл была введена внутримышечно ,(М. И. Парфанович, Э. М. Нымм).

Для выяснения роли онковируса в этиологии лейкоза овец в опыт взяли 22 каракульских ягненка в возрасте 3 месяцев, свободных от лейковирусной инфекции. Ягнят разделили на 4 группы по принципу аналогов. Шесть ягнят I группы заражали дважды, с интервалом 3 месяца нативными лимфоцитами крови коровы, больной хроническим лимфоидным лейкозом, дозами 625Х106 клеток в объеме 1 мл внутрибрюшин-но, внутривенно и внутрикожно. Восемь ягнят II группы заразили таким же способом краткосрочной культурой клеток крови лейкозной коровы с содержанием онковируса в дозе 100 мл. Для аналогичного заражения восьми ягнят IÍI группы использовали фильтрованный онковирус в дозе 100 мл! Четыре ягненка IV группы были контрольными—им вводили

в таких же дозах среду Игла. Перед введением вируссодер-жащего материала, через 5 и 15 дней после заражения, а затем ежемесячно проводили клинико-гематологические, серологические исследования животных для обнаружения вирус-специфических преципитирующих и комплементсвязывающих антител в сыворотках крови. Кроме того систематически проводили вирусологические исследования (X. С. Салимов, В. А. Крикун). Нами же проведен патоморфологический анализ органов и тканей овец после падежа животных.

Для опыта по воспроизведению лейкоза крупного рогатого скота и больных этой же болезнью овец у коз были подобраны пять групп козлят (Е.А. Андриян). В I группу включили семь козлят, которых с 14—36-дневного возраста в течение 20—28 дней выпаивали молоком от больной хроническим лимфолейкозом коровы под кличкой Соломка, а затем через 3—10 дней козлятам в течение 130 дней спаивали молоко от другой больной хроническим лимфолейкозом коровы- № 1198. У коровы под кличкой Соломка количество лейкоцитов было в пределах 154—290 тыс./мкл крови, лимфоцитов 91—99%, у коровы № 1198 — 23,2—38,6 тыс./мкл и 72—97% соответственно.

Во II (контрольную) группу включили трех козлят-аналогов, которые получали кипячен ое молоко этих же допоров. Наблюдение за животными I и II групп продолжалось в среднем в течение 3 лет 3 месяцев, а затем был проведен диагностический убой. В III группу включили трех козлят, которым в возрасте 9 месяцев 13 дней, 7 месяцев 3 дней и 7 месяцев 25 дней однократно подкожно с гепарином вводили кровь в дозе 45—60 мл соответственно от овец № 113, 244, 113, больных хроническим лимфолейкозом. Диагностический убой этих животных был проведен через 3 года 7 месяцев. У овцы № 113 количество лейкоцитов составило 560 тыс./мкл крови, лимфоцитов 99%, у овцы № 244 — 700 тыс./мкл и 99% соответственно.

В IV группу включили 5 козлят, которым в возрасте от 2 дней до 1 года 3 дней однократно подкожно с гепарином вводили кровь в дозе 10—20 мл от больной хроническим лимфолейкозом коровы под кличкой Соломка. Убой животных с диагностической целью проведен через 3 года 3 месяца (4 животных) и через 5 лет (одного животного). В V группу включили трех козлят. Козленку под № 29 в 24-дневном возрасте введена подкожно с гепарином кровь в дозе 40 мл от больной хроническим лимфолейкозом овцы № 241, козленку № 30 в 78-дпевиом возрасте введена кровь в дозе 45 мл больной козы № 12. У овцы № 241 лейкоцитоз дости-

гал 268 тыс./мкл, лимфоцитов было 99%, у козы № 12 соответственно 32 тыс./мкл и 94%. Козленку под № 31 в 62-дневном возрасте введена подкожно кровь в дозе 45 мл больной козы № 12. Убой с диагностической целью животного, которому ввели кровь больной овцы № 241, проведен через 3 года 12 дней, а тех, кому ввели кровь больной козы.№ 12 — через 1 год 11 месяцев. Следует отметить, что все доноры, кроме козы № 12, пали. На секции и при гистологическом исследовании у них подтвержден хронический лимфолейкоз. Коза № 12 была убита с диагностической целью. У нее на секции характерных для лейкоза изменений не установлено.

Кроме того, проводили сравнительный анализ гематологических и патоморфологических исследований при гемоблас-тозах крупного рогатого скота и распределение лейкозов и гематосарком в пяти хозяйствах.

С целью изучения возможного заражения овец вирусом лейкоза при манипуляциях одной иглой, контаминированной кровью инфицированной возбудителем лейкоза коровы, использовали четырех ягнят каракульской породы в возрасте 6 месяцев с негативными тестами на ВЛКРС. В полость инъекционной иглы помещали немного крови донора, затем тщательно ее выдували. Далее шприцем с этой иглой набирали 10 мл физраствора и подкожно вводили по 2,5 мл каждому, реципиенту (Бутаев М. К.). Контрольными были два ягненка-аналога, которым физраствор в той же дозе вводили через иглу» контаминированную кровью неинфицированного ВЛКРС" животного.

При изучении отличий гемобластозов от лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота использовали лимфатические узлы, висцеральные органы, костный мозг (грудная кость) 45 коров черно-пестрой породы, которых в возрасте 4—8 лет убили на мясокомбинате. В наших опытах до убоя животных, больных только серозным и катаральным маститом или бронхопневмонией, среднее количество лейкоцитов у них составило 17,5 тыс./мкл крови, лимфоцитов — 76%, у животных с начальной стадией хронического лимфолейкоза в сочетании с маститом или бронхопневмонией соответственно — 24 и 75 и, наконец, у животных с начальной стадией лимфоцитарной лимфосаркомы в сочетании с маститом или бронхопновмонией — 14 и 74.

Материал для гистологического исследования фиксировали 10%-ным водным нейтральным формалином и жидкостью Карнуа. Декальцинацию костной ткани проводили 5—7%-ным раствором азотной кислоты. Для гистоэнзиматических иссле-8

даваний применяли срезы, полученные при помощи криостата или замораживающего микротома. Гистологические срезы, • изготовленные из парафиновых и целлоидиновых блоков (костная ткань) окрашивали гематоксилин-эозином.

В целях углубленного изучения гистоструктурных и гистохимических изменений применяли дополнительно: для выявления липидов — судан-3, соединений железа — метод. Перлса, гликогена — метод Шабадаша, кислую фосфатазу устанавливали по Гомори, пероксидазу — по Крейбиху и Фишелю в модификации Леле.

Препараты—отпечатки лимфатических узлов, грудной кости, селезенки после высушивания на воздухе и фиксации в парах 10%-ного нейтрального формалина в течение 3 минут окрашивали по Романовскому—Гимза, а для идентификации клеток обрабатывали на пероксидазу по Сато и Селкия, неспецифическую эстеразу — по Пирсу в модификации Лефф-лера, хлорацетатэстеразу—методом одновременного азосо-четания по Молони, Мак-Пирсо ну и . Флигельману, кислую и щелочную фосфатазу — по Гомори; гликоген определяли ШИК-реакцией по Мак-Манусу. Цитохимические исследования выполнены совместно с П. М. Мусиенко. Для автоматизации анализа исследований использовали компьютер IBM PC с применением интегрированного пакета LOTUS 1—2—3.

2. Результаты исследований

2.1. Патоморфология и патогенез спонтанных гемобластозов крупного рогатого скота

По нашим данным, у крупного рогатого скота из опухолей системы крови или гемобластозов наиболее часто встречаются лимфоидные лейкозы (острый лимфобластньш, хронический лимфоидный), а из гематосарком — лимфосаркомы (лимфоцитарная, пролифоцитарная, лимфобластная (лимфо-бластическая), слабодифференцированная). Из лимфоидных. лейкозов чаще регистрируется хронический и реже острый.

2.2. Хронический лимфоидный лейкоз

Многолетнее изучение лейкоза крупного рогатого скота в динамике развития инфекционного и патологического процессов с помощью комплексных диагностических исследований позволило установить особенности проявления лейкоза на различных стадиях его развития, взаимосвязь между болезнью и предшествующей инфекцией, пути передачи и рас-

пространений ВЛКРС. Под стадией мы подразумеваем ступ-лень в развитии гемобластозов,характеризующуюся опреде-,

ленными морфоло тическими изменениями в органах и тканях, а также соответствующей клинико-гематологической картиной.

■ Хронический лимфоидный лейкоз у крупного рогатого скота имеет свои особенности клинического и морфологического проявлений. Инкубационный период (до появления морфоло-. гических изменений в периферической крови при экспериментальном заражении, длится 60—750 дней, а при спонтанном — 2—6 лет. Инфекционный процесс при лейкозе у крупного рогатого скота развивается медленно и незаметно. Хронический лимфоидный лейкоз характеризуется значительной пролиферацией малых лимфоцитов. Болезнь свойственна всем породам и возрастам.

В течение хронического лимфоидного лейкоза можно выделить три стадии: I начальную (предклиническую), II —, четких клинико-анатомических изменений, III — генерализованную (прогрессирование опухолевых поражений и дистрофических изменений — 50—380 тыс./мкл лейкоцитов в крови и выше). Начальная стадия характеризуется незначительным увеличением количества лейкоцитов в периферической крови (свыше 9 и до 20 тыс./мкл), стойким лимфоцитозом (в среднем до 80%), отсутствием других клинических и па-тологоанатомических (макроскопических) изменений в лимфатических узлах, в которых иногда при тщательном осмотре можно выявить беловато-сероватые образования неправильной формы.

При гистологическом исследовании капсула лимфатических узлов головы, шеи слегка инфильтрирована клетками, которые по морфологическим признакам напоминают малые лимфоциты. У некоторых животных инфильтрацию лимфоцитами капсулы можно также наблюдать в лимфатических узлах коленной складки, печени, средостения, брыжейки. Рисунок строения лимфатических узлов слегка стерт. Светлые центры фолликулов расширены и заполнены преимущественно лимфобластами. Некоторые фолликулы, особенно заглоточных лимфатических узлов, в результате слияния теряли четкость границ. Краевые, воротные, промежуточные корковые и мозговые синусы, а также мякотные тяжи, воротные и капсулярные трабекулы заполнены опухолевыми клетками, напоминающими малые лимфоциты. Плазматические клетки формировали в мякотных тяжах небольшие гнездные скопления.

В селезенке некоторых животных можно наблюдать лим-фоидную инфильтрацию капсулы, у всех животных была ин-

фильтрация трабекул. Большинство фолликулов расширены .и без условных границ. В таких расширенных фолликулах возрастает число лимфобластов, которые расположены как в расширенных светлых центрах, так и за их пределами между зрелыми лимфоцитами. Отмечено и отсутствие светлых центров некоторых фолликулов. Просветы синусов заполнены лимфоцитами. Скопления лимфоцитов в виде муфт наблюдали вокруг сосудов. Красная пульпа инфильтрирована клетками лимфоидного типа, среди которых преобладают малые лимфоциты.

В костном мозге наблюдали небольшие диффузно-очаго-вые разрастания клеток, похожих на малые лимфоциты. Некоторые бластные клетки имели атипичное строение, принимали неправильную форму. В синусоидах печени' некоторых животных выявляли лимфоидные инфильтраты в виде небольших цепочек. Очаговые лимфоидно-гистиоцитарные инфильтраты обнаруживали в печеночных триадах, вокруг некоторых почечных телец и канальцев. Изменения в сердце, легких, скелетной мускулатуре и в мышечной оболочке желудочно-кишечного тракта отсутствовали.

Следовательно, при хроническом лимфолейкозе в ранний период болезни лейкозные изменения проявляются в мякот-ных тяжах, светлых центрах фолликулов и синусов лимфатических узлов головы и шеи, а вскоре лейкозный процесс переходит на все наружные и внутренние лимфатические узлы с обязательным вовлечением в патологический процесс селезенки, костного мозга, а иногда и печени. В заключение следует сказать, что мы выделяем эту стадию, обозначая ее как начальную, исходя из того, что она диагностируется морфологическими (гистологическими) методами.

Стадия четких клинико-анатомических изменений (II) характеризуется увеличением количества лейкоцитов в крови до 50 тыс./мкл при стойком лимфоцитозе, а также увеличением селезенки и некоторых наружных (коленной складки, поверхностных шейных, подчелюстных) и внутренних (средо-стенных, брыжеечных, почечных) лимфатических узлов. Некоторые лимфатические узлы становятся тестоватой консистенции. Капсула увеличенной селезенки напряжена, пульпа мажущейся консистенции, красная, зернистая, увеличенные фолликулы серо-белого цвета. Могут выявляться изменения в виде незначительных саловидных разрастаний в органах, не связанных с кроветворением: сердце, печени, почках, преджелудках, кишечнике и пр.

Под микроскопом в лимфатических узлах выявляли сглаживание рисунка строения. Сохранившиеся фолликулы рас-

ширины, а их светлые центры заполнены лимфоцитами и лимфобластами. Краевые, воротные, промежуточные корко- ' выёй мозговые синусы, а также мякотные тяжи трудно различимы, 'Заполнены однородными клетками, напоминающими ■ малые лимфоциты. Такими же клетками инфильтрированы капсулы и трабекулы лимфатических узлов. В селезенке наблюдали увеличение фолликулов, многие из них в результате расширения сливаются. В некоторых фолликулах светлые центры становятся незаметными. Красная пульпа, синусы, а также участки вокруг синусов в виде муфт переполнены лимфоцитами.

В костном мозге грудной кости выявляли значительные диффузные или диффузно-очаговые разрастания клеток, напоминающих малые лимфоциты; в печени, почках, сердце, легких — лимфоидные инфильтраты. В печени они локализовались в междольковой соединительной ткани и в синусоидах в виде цепочек, в почках — пре имущественно около сосудов, телец и между канальцами. В миокарде и скелетной мускулатуре инфильтраты располагаются между мышечными волокнами, в легких — вокруг бронхов и сосудов.

Генерализованная (III) стадия характеризовалась значительным лейкоцитозом, вовлечением в процесс всех висцеральных органов, нарушением гистологической структуры лимфатических узлов. В этот период болезни можно легко найти увеличенные лимфатические узлы, которые в норме мало заметны. К таким лимфатическим узлам относятся межреберные, средостенные дорсальные и вентоа^ьные. На этой стадии заболевания могут развиться значительные конгломераты лимфатических узлов в средостении, брюшной и (паховых областях. Капсула напряжена, пульпа на разрезе мягкой консистенции серо-белого цвета, иногда можно наблюдать кровоизлияния, а также очаги коликвационного некроза, проявляющегося в виде разжижения и расплавления ткани. В тяжелых случаях кроме увеличения селезенки (до 1 м) увеличиваются размеры печени, почек, а в сердце появляются очаговые или диффузно-очаговые образования серо-белого цвета. Капсула увеличенной селезенки плотная, на разрезе серо-красног о цвета, с выраженным крупно-зернистым рисунком лимфатических фолликулов.

В сердце значительные изменения наблюдали в правом предсердии, мышца которого утолщена, а в результате разрастания лейкозной ткани имеет пестрый рисунок.. Диффузные и очаговые опухолевые разрастания наблюдали также в мио- и эндокарде. Печень увеличена, мягкой консистенции, паренхима органа пронизана лейкозными разрастаниями. По-

чкй увеличены, в корковом веществе под капсулой могут быть диффузио-очаговыё лейкозные разрастания. Из других органов изменения могут быть в матке, легких, кишечнике, сычуге, скелетной мускулатуре (жевательные, брюшные, грудные мышцы, а также мышцы диафрагмы) и других органах.

Под микроскопом в большинстве лимфатических узлов рисунок стро ения стерт. Мякотные тяжи и светлые центры фолликулов трудно или совсем не различимы. Корковое и мозговое вещество в большинстве случаев не различимо и представлено в основном скоплениями лимфоцитов, который заполняли синусы, инфильтрировали капсулу и трабекулы» Сохранившиеся трабекулы мозгового вещества, как правило; вследствие их инфильтрации значительно-истончены и часто подвергались гиалиновой дистрофии. В селезенке наблюдали значительное увеличение фолликулов, а светлые центры становились незаметными. Красная пульпа переполнена клетками, напоминающими малые лимфоциты. Трабекулы истончены, инфильтрированы лимфоцитами.

В печени, почках, сердце, легких громадные диффузные или диффузно-очаговые инфильтраты, состоящие преимущественно из клеток, напоминающих малые лимфоциты. Отмечена лимфоидная инфильтрация скелетной мускулатуры и мышечной оболочки желудочно-кишечного тракта. Кроме того, наблюдали сильные дистрофические изменения в паренхиматозных органах и костной ткани (табл. 1).

Гистологические изменения костной ткани в начальной стадии болезни незначительны. Исключение составляет костный мозг, в котором отмечали диффузно-очаговое разрастание лейкемических малых лимфоцитов, наличие нормоблас-тов; в небольшом количестве встречались мегакариоциты. Для второй стадии болезни характерно истончение коркового слоя с небольшим количеством трабекул, тонких, различной формы с неровными краями. В каналах остеонов, а также в костном мозгу множество сосудов, переполненных кровью. Каналы остеонов неодинакового размера. Большинство из них сильно расширены и превращены в лакуны, границы последних выстланы остеобластами и остеокластами. В костномозговых полостях отмечается замещение миелоидных клеток малыми лейкемическими лимфоцитами.

При генерализованной стадии хронического лимфолейко-за изменения в костной ткани такие же, как и во второй стадии болезни, но выражены сильнее. Исключение составляет костный мозг, в котором установили уменьшение клеточных элементов и разроет фиброзной ткани.

1. Локализация патологоанатомнческих и гистологических изменений: в.,органах и тканях крупного рогатого скота при спонтанных лейкозах

и гематосаркомах на разных стадиях развития патологического процесса,.

% . . '

Органы

Макроизменения Гистологические изменения стадии

I

II

III

Лимфатические

узлы Селезенка Печень Почки Сердце Легкие Преджелудки Сычуг

Скелетная мускулатура Матка

Молочная железа Серозные покровы

— 100/100 100/100 100/100 100/100

_, 100/3 100/4 100/— 100/56

—. 10/10 20/19 50/1 100/10

—. 110/10 32/40 15/4 18/10

—1 —■ 36/46 34/- 43/20

—. — 4/3 10/1 15/6

—1 — 8/114 -/8 2/14

—I —• 8/13 1—/12

—' — -/1'1 —

_, _. 1/11 ■__ 1/-

—1 —■ 4/2 -1 5/3

— —' -/14 -/12 -/17

100/100

100/60 100/30 50/76 89/56 29/16 9/20 ( 8/35 7/20

1/11 5/4 —/,60

Примечай и е. В числителе указаны лейкозы (п =350), в знаменателе — гематосаркомы (п=150).

2.3. Острый лимфобластный лейкоз

Острый лимфобластный лейкоз встречается у крупного рогатого скота в основном в возрасте 3 лет и старше. Заболевание характеризуется такой же стадийностью и локализацией патологического процесса, как и хронический лимфоид-ный лейкоз, высоким лейкоцитозом (до 360 тыс./мкл крови) и выраженным стойким лимфоцитозом (86—90%). Следует отметить, что в основе подразделения лейкозов на острые и хронические лежит строение опухолевых клеток. К острым относятся лейкозы, клеточный субстрат которых представлен бластами, а к хроническим — зрелыми элементами.

При микроскопическом исследовании в зависимости от степени прогрессирования лейкозного процесса выявляли системную диффузную лейкозную инфильтрацию в костном мозге, селезенке, лимфатических узлах, а также пейеровых бляшках и солитарных фолликулах кишечника, в печени, почках, сердце, легких, скелетной мускулатуре. В костном мозге грудной кости возрастает число лимфобластов (10— 15%) « недифференцированных клеток с нуклеолами. К лим-14

фобластам относили клетки размером 9—14 мкм на дрепа-; ратах—отпечатках и 4—6 мкм на гистопрепаратах, с округлыми ядрами, содержащими 1—3 крупные нуклеолы и нежную сеть хроматина. Некоторые клетки имели неправильную . форму ядра, более широкий ободок цитоплазмы и напоминали моноциты.

В селезенке отмечали значительное увеличение фолликулов и более частое, чем при хроническом лимфолейкозе, их слияние. Фолликулы были заполнены лимфобластами с описанными выше морфологическими признаками. Лимфоблас-ты также преобладали и в красной пульпе, чаще вблизи фолликулов и истонченных трабекул.

В лимфатических узлах капсула инфильтрирована лимфоцитами, лимфобластами и пролимфоцитами. Синусы плохо различимы, заполнены лимфобластами и лимфоцитами. Светлые центры фолликулов, как правило, содержат много лим-фобластов. Некоторые фолликулы в результате расширения теряют границы. Кроме того, в лимфатических узлах, особенно около истонченных и «изъязвленных» трабекул мозгового вещества, находили поля, сплошь состоящие из лимфоблас-тов. Эти очаги имели нечеткие границы и нередко сливались,, приводя к нарушению структуры лимфатических узлов. В таких случаях лимфобласты располагались диффузно с равномерно инфильтрированными между ними зрелыми лимфоид-ными клетками. Сохранившиеся местами трабекулы так же, как и при хроническом лимфолейкозе, подвергались гиалиновому перерождению. Иногда в лимфатических узлах наблюдали пролиферацию крупных клеток неправильной формы со светлыми ядрами, морфологически напоминающими иммуно-бласты. В других органах и тканях лейкозные изменения во многом напоминали хронический лимфолейкоз.

На гликоген реагировали 25,8% лимфобластов. Характерной гистохимической особенностью заболевания явилась крупногранулярная ШИК-положительная реакция. В препаратах отпечатках лимфатических узлов она составила 12,5%. Реакция лимфобластов на кислую фосфатазу слабоположительная (75% клеток реагировали отрицательно). Активность неспецифической эстеразы также низкая. В большинстве лимфобластов она не проявлялась, и только 5% клеток содержали крупные единичные глыбки фермента. Реакция на пероксидазу, липиды, щелочную фосфатазу, хлорацетатэсте-разу были отрицательными.

Таким образом, пролиферация и инвазия лейкозных клеток в организме животных приводят к различным тяжелым морфофункциональным изменениям в кроветворных и некро-

ветворных Брганах, Нарушению обмёйа веществ, кахексий й смерти.

2.4. Особенности развития патологических изменений у крупного рогатого скота при гематосаркомах

У крупного рогатого скота наиболее часто из гематосар-тсом встречаются различные варианты лимфосарком. Лимфо-саркома — злокачественная опухоль с первичным поражением лимфатических узлов. В отличие от лейкоза при лимфо-саркомах нет специфических изменений костного мозга и периферической крови. ЛимфОСаркома в отличие от лейкозов обычно характеризуется отсутствием макроскопических изменений в селезенке и в некоторых лимфатических узлах. Чаще поражаются средостенные и забрюшинные, реже паховые и подмышечные лимфатические узлы. Обладая агрессивным инфильтрирующим ростом, лимфосаркоматозные элементы прорастали капсулу лимфатических узлов, проникали в соседние ткани и органы. Пораженные лимфатические узлы резко увеличены, бугристые, нередко срастались и формировали опухолевые конгломераты.

При микроскопическом исследовании лимфатических узлов и селезенки светлые центры и очертания фолликулов становятся незаметными вследствие пролиферации в пара-фолликулярных зонах новообразованных клеток. В зависимости от преобладающего типа клеток лимфосаркому подразделили на варианты: лимфоцитарный, пролимфоцитарный, лимфобластный, слабодифференцированный. Основанием для постановки диагноза на лимфоцитарную лимфосаркому служило выявление в опухолевом субстрате мелких лимфоидных клеток с темно-окрашенными и зазубренными ядрами. В по-ра!женных лимфатических узлах и в новообразованиях находили множество обломков ядер и частицы цитоплазмы, которые скапливались вокруг клеток и создавали грязный фон. В отличие от хронического лимфолейкоза при лимфоцитар-ной лимфосаркоме более выражен клеточный атипизм.

Преобладание больших округлых клеток типа пролимфо-цитов с расщепленными ядрами и имеющих просветленные грубые глыбки хроматина, а также равные им по величине клеточные элементы с темными ядрами и нередко отростча-той цитоплазмой (большие лимфоциты) позволили нам диагностировать пролимфоцитарную лимфосаркому. Лимфобласт-ная лимфосаркома более гетерогенна в цитологическом отношении. Клеточный состав представлен атипичными лим-фобластами, отличающимися неровным контуром ядер. Эти

-лимфобласты, величиной 3—8 мкм, имели округлые, овальные угловатые ядра, часто с неглубоким вдавлением. Ядра содержали мелкоглыбчатый хроматин и отчетливые нукле-олы в количестве от 2 до 5. Ободок цитоплазмы узкий, ба-зофильный, нередко с расширением на одном полюсе клетки; 5,6% лимфобластов содержали гликоген, они обладали низкой активностью кислой фосфатазы и неспецифической эстеразы. Реакции на пероксидазу, хлорацетатэстеразу были отрицательными. При слабодифференцированном варианте лпмфосаркомы выявляли лимфоидные элементы различной степени анаплазии.

'Таким образом, малигнизация не приводит к развитию значительных цитоморфологических и цитохимических особенностей. Тем не менее, при тщательном исследовании и при соответствующем опыте совокупность ряда признаков позволяет решить вопрос о доброкачественности или злокачественности клетки. Важным признаком злокачественности клеток является их полиморфизм, который особенно выражен при лимфосаркомах.

2.5. Сравнительный анализ гематологических и патологоморфологических исследований при гемобластозах

Изучая особенности распространения гемобластозов крупного рогатого скота по материалам гематологических и пос-леубойных исследований установили непостоянное подтверждение прижизненного диагноза патоморфологическими тестами. Максимальное совпадение их было 72,2%, что объясняется несовершенством прижизненных методов исследований, стадийным развитием патологического процесса и особенностями пролиферативного процесса при разных формах лейкозов. Среди подтвержденных диагнозов 85% опухолей составляли лейкозы, в т. ч. 82,7% — лимфолейкоз, 2,3% другие лейкозы, 14,7% занимали гематосаркомы (из них 10,6% составляли лимфобластная и лимфоцитарная лимфосаркомы). Опухоли другого происхождения составляли 0,3%.

Для определения достоверности распределения лейкозов и гематосарком использовали метод хи-квадрат (табл. 2). Во всех случаях установлена достоверность распределения общей заболеваемости и формы (Р<0,005—0,001).

2. Результаты патоморфологических исследований материала от животных с прижизненно установленным диагнозом «лейкоз»

Хозяйства Исследован патматериал от животных, гол. Диагноз подтвержден гистологически Вт. ч. установлены

гол. % лейкозы, % гематосаркомы, %

Первое 78 42 Э3,84 82,75 17,25

Второе 99 57 57,58 85,25 ¡114,79

Третье И92 114 59,38 85,66 14,3)5

Четвертое 116 64 55), 17 80,6 19,4

Пятое 1Т2 48 42,86 84,25 15,75

2.6. Дифференциальная диагностика гемобластозов

При лейкозах крупного рогатого скота наблюдали системное поражение кроветворной ткани, стойкий лимфоцитоз. Причем характерным патологоанатомическим признаком,, особенно во второй и третьей (генерализованной) стадиях, лейкозов, является увеличение селезенки. На разрезе она зернистая, увеличенные фолликулы серо-белого цвета. При ге-матосаркомах отмечают изолированное поражение отдельных или нескольких лимфатических узлов грудной и брюшной полостей, а также отсутствие макроскопических изменений в селезенке. И лишь при генерализации заболевания может значительно увеличиваться селезенка с неразличимыми на. разрезе фолликулами. .

Следует отметить, что хронический лимфоидный и острый лимфобластный лейкозы имеют некоторое сходство. Диагноз при указанных формах лейкоза устанавливают морфологически на основе выявления преобладающих по степени зрелости клеточных форм. Вспомогательным тестом могут быть гистохимические реакции на гликоген и неспецифическую эс-теразу. Наличие мелких и средних гранул гликогена в клетках и слабая диффузная реакция их на неспецифическую эстеразу указывают на хронический лимфоидный лейкоз. Крупногранулярная ШИК-реакция на гликоген и присутствие в небольшом числе клеток единичных глыбок неспецифической эстеразы характерны для острого лимфобластного лейкоза.

Гематосаркомы характеризуются наличием в части ана-плазированных элементов крупногранулярной ШИК-реакции на гликоген. При гематосаркомах в отличие от лейкозов более выражен клеточный атипизм.

2.7. Патоморфология и патогенез экспериментальных . гемобластозов

2.7.1. Патоморфология и патогенез экспериментальных гемобластозов крупного рогатого скота

После заражения культуральной жидкостью, содержащей ВЛКРС, у животных через три месяца были выявлены признаки лейковирусной инфекции, а через 7—9 месяцев — изменения картины крови, характеризующиеся нарастанием количества лейкоцитов и увеличением процента лимфоцитов.

В результате заражения непокрытая телка № 377 пала в возрасте 66 месяцев с характерными для лейкоза изменениями. Непокрытую телку № 349 через 7 лет и вола № 1314 через 59 месяцев после заражения убили в тяжелом состоянии с выраженными клинико-анатомическими изменениями, характерными для гемобластозов. Непокрытую телку № 350 через 6 лет после заражения убили в здоровом состоянии.

Характеризуя экспериментальных животных, следует отметить, что у животного № 377 через 4 года в крови выявили 150 тыс./мкл лейкоцитов, 90% лимфоцитов (абсолютный лимфоцитоз составил 135 000).

В последние месяцы жизни отмечены прогрессирующее исхудание, незначительн.ое увеличение наружных лимфатических узлов (предлопаточных, околоушных, поверхностных паховых).

На секции выявили системную гиперплазию лимфатических узлов и лимфоидной ткани, гиперплазию селезенки, опухолевые разрастания в стенке сычуга, в правом предсердии, эндо- и миокарде; абсцесс печени, серозную атрофию эпи-кардиального жира. При гистологическом исследовании у животного установили генерализованный хронический лимфо-лейкоз.

У телки № 349 изменения в крови, как и у животного № 377 начали проявляться через 9 месяцев после заражения, затем они постепенно нарастали, и к концу опыта количество лейкоцитов достигло 200 тыс./мкл, лимфоцитов — 97% (абсолютное количество лимфоцитов 194 00). При послеубой-ном осмотре животного установлены увеличение и салоид-ность на разрезе подкожных шейных, почечных, тазовых, а также печеночных и лимфатических узлов рубца. В средо-стенных лимфатических узлах выявили опухолевые разрастания (35X13X8 см), саловидные на разрезе. Селезенка увеличена (90X30X10 см), на разрезе зернистая. Увеличенной была также печень. Макроскопические изменения в лимфоидной и других тканях и органах были характерны для хрони-

ческого лимфоидного лейкоза. В патологических клетках гликоген выявили в виде единичных крупных, средних и мелких гранул.

У вола № 1314 изменения в крови обнаружены через 7 месяцев после заражения. Через 51 месяц абсолютный лим-фоцитоз составлял 64 930, спустя 3 месяца резко снизился до 38 500.

За. месяц до гибели у животного стали резко увеличиваться . предлопаточные, коленной складки, околоушные, заглоточные и поверхностные паховые лимфатические узлы и снизился лейкоцитоз. После убоя установлено также увеличение подключичного, средостенного, брыжеечных и лимфатических узлов преджелудков. Грудной передний и лимфатические узлы, располагающиеся по бокам грудной кости, у основания ребер, также увеличены, на разрезе саловидны со стертым рисунком. Опухолевые разрастания выявлены в стенке сычуга, сетки, книжки, мочевого пузыря, в правом предсердии, эндо и миокарде. Селезенка слегка увеличена. Из других па-тологоанатомических изменений выявлены серозно-фибриноз-нын плеврит и перитонит, острый катаральный гастроэнтерит, серозная атрофия эпикардиального жира, компрессивный ателектаз сердечных и передних частей диафрагмальных долей легких, узуры суставных хрящей конечностей.

При гистологическом исследовании макроскопически измененных лимфатических узлов наблюдали полную стертость рисунка строения. Их ткань была замещена крупными лимфо-бластоподобными клетками, которые преобладали также и в новообразованиях. Сохранившиеся в фрагментальном виде трабекулы подвергались разволокнению и гиалиновому перерождению. В корковом и мозговом веществах встречали небольшие гнездовидные скопления малых лимфоцитов, оставшиеся, по-видимому, от нормальных фолликулов.

В селезенке отмечено также нарушение гистологической структуры. Однако трудно сказать, была ли селезенка в данном случае первичным очагом заболевания или вторичным, так как исследования проводили уже на секционном материале. При спонтанных злокачественных лимфомах она, как правило, поражается вторично. В данном случае гистологические изменения проявлялись как в белой, так и в красной пульпе. Фолликулы уменьшены, что видимо связано со значительной инфильтрацией красной пульпы опухолевыми лимфобластами. Некоторые фолликулы увеличены с выраженным лимфоблас-тозом. Патологические клетки красной пульпы имели угловатую, овальную, реже грушевидную форму и содержали большие светлые ядра с 2—3 нуклеолами или диффузным мелкого

глыбчатым хроматином. Выявлены также диффузно-очаговые лимфоидные инфильтраты в костном мозге грудной кости.. Диффузные опухолевые инфильтраты обнаружены в мочевом пузыре, сердечном ушке и миокарде. Мышечные волокна миокарда и сердечного ушка находились в состоянии зернистой дистрофии. Инфильтрация печени и легких была слабой и носила очаговый характер. В почках установили острый сероз-но-фибринозный гломерулонефрит.

ШИК-реакция патологических клеток была нвзначитель-" ной, однако в-единичных клетках она проявлялась в виде типичных для лимфобластной лимфосаркомы крупных гранул. На основании проведенных комплексных исследований у вола диагностирована генерализованная лимфобластная лим-фосаркома.

2.7.2. Результаты воспроизведения лейкоза у эстонского крупного рогатого скота

Для воспроизведения лейкоза у эстонского крупного рогатого скота был поставлен опыт продолжительностью 986— 1271 день. За период наблюдений проводились регулярные клинико-гематологические и другие специальные прижизненные исследования на лейкоз. Характерных изменений для лейкоза у животных не обнаружено и поэтому их направили на диагностический убой. На основании данных патоморфо-логического, серологического и вирусологического исследований у 6 из 15 подопытных животных был установлен лимфо-лейкоз. Гистологические изменения были характерны для начальной стадии хронического лимфоидного лейкоза.

Как показали результаты экспериментального воспроизведения лейкоза крупного рогатого скота, у эстонских пород это заболевание можно воспроизвести путем введения очищенного онкорнавируса и различного вируссодержащего материала больных лейкозом коров (лейкоцитарная масса, культуральная жидкость). Однако часть зараженных животных не заболевает. Введение очищенного вируса в лимфатические узлы часто не вызывало заболевания животных.

2.7.3. Сравнительная патоморфология и патогенез экспериментального хронического лимфолейкоза каракульских овец

Исследования на каракульских овцах показали, что из 18 животных у 10 (55,55%) через 6—92 месяца после экспериментального заражения онковирусным материалом были вы-

явлены типичные патоморофологические признаки хронического лимфолейкоза. У трех животных, зараженных фильтрованным онковирусом, заболевание возникло через 6—8 и 62 месяца после введения. У четырех баранов, зараженных двухсуточной культуральной жидкостью хронический лим-, фолейкоз развился через 21—32, 82 месяца после опыта. Из I группы овец зараженных нативными лейкоцитами, лимфолейкоз установлен у трех через 83, 86, 92 месяца после заражения.

На секции у 10 животных установлено увеличение в 2—3 раза предлопаточных, надколенных, паховых, подчелюстных, средостенных, брыжеечных, подвздошных лимфатических узлов. На разрезе сильно увеличенных лимфатических узлов рисунок строения сглажен. На поверхности большого сальника и на серозных оболочках преджелудков у четырех овец отмечены множественные саловидные разрастания диаметром 0,5—9 см. У одного животного, павшего через 2 года после заражения, в брюшной части вдоль позвоночника обнаружены опухолевые разрастания (12X9X5 см). Средостенные лимфатические узлы, срастаясь между собой, образовывали большой конгломерат, который у некоторых животных доходил до 16—13x3—4 см. У восьми животных отмечено увеличение селезенки.

В зависимости от тяжести заболевания обнаруживали лейкозные изменения в органах, не связанных с кроветворением, — в преджелудках, печени, почках, сердце и пр. В тяжелых случаях наблюдали дистрофические изменения в паренхиматозных органах. Хронический лимфолейкоз сопровождался пневмониями.

"При гистологическом исследовании в костном мозге выявили диффузно-очаговые разрастания клеток, напоминающих малые лимфоциты. Изменения лимфатических узлов, селезенки и других органов не отличались от хронического лимфоидного лейкоза у крупного рогатого скота.

Наши опыты на животных этой породы свидетельствуют о ведущей роли ВЛКРС в этиологии этого заболевания. Более того, патоморфологический анализ не только подтвердил экс-. периментально индуцированный хронический лимфоидный лейкоз у каракульских овец, но и свидетельствовал о глубоких растройствах жизнедеятельности организма подопытных животных. Причем в экспериментальном материале по сравнению со спонтанным при летальном исходе хронический лимфолейкоз проявлялся более выраженной генерализацией поражения лимфатических узлов и других органов и тканей.

2.7.4. Результаты опыта по экспериментальному воспроизведению лейкоза коз

Опыты проведенные на козлятах, показали, что в I группе животных, которые получали молоко от больных лейкозом коров, гематологические показатели находились в пределах физиологической нормы. Через разные сроки после заражения у четырех козлят, при серологическом исследовании (РИД) выявили четкие линии преципитации с вирусспецифи-ческим антигеном. Остальные животные I опытной и II контрольной групп при исследовании в РИД были отрицательными. У животных III группы, которых заражали подкожно кровыо от больных лейкозом овец, гематологические показатели находились в пределах физиологической нормы. Однако через 36 месяцев все животные этой группы стали РИД-положительными. Все животные IV группы, которым однократно подкожно вводили кровь от больной хроническим лимфолейкозом коровы, через 3 года стали РИД-положительными. У двух козлят из пяти этой группы наблюдали сублейкемические показатели крови: у одного под № 11 через 39 месяцев после заражения количество лейкоцитов не превышало 18 тыс./мкл при лимфоцитозе 84%, у другого № 12 через 60 месяцев после заражения лейкоцитов было 32 тыс./ /мкл, лимфоцитов — 94%. У животных V группы, которым подкожно введена кровь от больной лейкозом овцы и козы № 12, гематологические показатели были в пределах нормы, однако через 18 месяцев козлята стали РИД-полож ительны-ми. При патоморфологических исследованиях животных всех групп изменений, характерных для лейкоза, не установлено.

Таким образом, экспериментальное заражение коз молоком больного лейкозом крупного рогатого скота и кровью лейкозных овец показало, что из 18 козлят лишь у двух (№ 11 и 12), которым в возрасте 1 года 3 дней подкожно ввели кровь больной лейкозом коровы, установлена сублей-кемическая картина крови без проявления клинических признаков лейкоза. Наши исследования показали, что по степени восприимчивости к ВЛКРС козы не отличаются от овец. Основная разница заключается в том, что козы более устойчивы к развитию узловатой (опухолевой) формы лейкоза.

2.7.5. Возможность заражения овец вирусом лейкоза при манипуляциях одной иглой, контаминнрованной кровью от инфицированной возбудителем коровы

В этом разделе приведены данные экспериментального заражения ВЛК.РС овец в условиях, максимально прибли-

женных к естественным: при манипуляциях одной и той же иглой, контаминированной кровью от инфицированной возбудителем лейкоза коровы. Спустя 1—3 месяца у всех четырех подопытных овец при описанном пути распространения болезни развилась инфекция ВЛКРС, которую тестировали с гликопротеидным антигеном онкорнавируса. У одной из подопытных особей (у нее далее развилась генерализованная стадия болезни: прогрессирование опухолевых поражений и дистрофических изменений) с 10-го месяца после инфицирования выявляли антитела к внутреннему полипептидному антигену онкорнавируса. За этим животным наблюдали в течение 46 месяцев. У животного отмечали стабильный относительный лимфоцитоз (72—86%) при нормальном уровне лейкоцитов. За 6 месяцев до убоя овца резко похудела и ее в состоянии агонии убили.

На секции у нее отмечены опухолевые поражения различной величины в сердце, печени, почках. Лейкозные поражения отмечены во всех лимфатических узлах. Увеличенные печеночные лимфатические узлы вместе с нов ообразованиями сливались в сплошной конгломерат. Почечные, средостенные и бронхиальные лимфатические узлы увеличены в 5—6 раз, на разрезе сочные, саловидные, серо-белого цвета. Селезенка утолщена, ее капсула напряжена.

При гистологическом исследовании установили, что рисунок строения лимфатических узлов стерт, мякотные тяжи и светлые центры фолликулов трудноразличимы. В большинстве лимфатических узлов корковое и мозговое вещество нельзя различить, они представлены в основном скоплениями лимфоцитов, которые заполняли синусы, инфильтрировали капсулу и трабекулы. Сохранившиеся трабекулы мозгового вещества вследствие инфильтрации значительно истончены. . Красная пульпа селезенки наполнена клетками, напоминающими малые лимфоциты; трабекулы истончены и инфильтрированы лимфоцитами. В печени, почках сердце обнаруживали дистрофические изменения и значительные диффузные инфильтраты, преимущественно состоящие из клеток, напоминавших малые лимфоциты.

Таким образом, с помощью патологоанатомических и гистологических исследований у экспериментально зараженного животного выявили хронический лимфолейкоз. Значит, инфицирование овец ВЛКРС при нарушениях правил асептики во время ветеринарно-зоотехнических обработок возможно и может быть одним из путей распространения болезни. 24

2.8. Отличие гемобластозов от лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота

Под лейкемоидными реакциями понимают патологические состояния крови, сходные с картинами крови при гемоблас-тозах, в частности при лейкозах, но имеющие другое происхождение. Такие реакции часто наблюдают при мастите и бронхопневмонии, что затрудняет постановку диагноза в ранний период заболевания лейкозом.

Мы провели исследования по изучению специфики морфологических изменений в лимфатических узлах, селезенке, костном мозге коров, больных маститом или бронхопневмонией, а также при сочетании этих заболеваний с хроническим лимфоидным лейкозом или лимфоцитарной лимфосаркомой на ранней стадии.

Проведенные исследования показали, что у больных маститом или бронхопневмонией животных патологоморфологи-ческие изменения, характерные для лейкемоидных реакций, проявляются только в регионарных лимфатических узлах и в отличие от гемобластозов характеризуются отсутствием гиперпластических процессов лимфоидной ткани в органах лим-фопоэза, полиморфноклеточной (гистиоцитами, нейтрофила-ми, ретикулярными и плазматическими клетками) инфильтрацией последних.

При сочетании начальной стадии хронического лимфоид-ного лейкоза с маститом или бронхопневмонией изменения, свойственные лейкемоидным реакциям, более выражены в регионарных лимфатических узлах, а характерные для лейкозов четко проявляются в нерегионарных лимфатических узлах, расположенных в области головы и шеи. При сочетании начальной стадии лимфоцитарной лимфосаркомы с маститом или брнхопневмонией морфологические изменения, свойственные лейкемоидным реакциям, выражены в регионарных лимфатических узлах, а картина лимфоцитарной лимфосаркомы проявляется только в месте локализации опухоли и близрасположенных лимфатических узлах.

2.9. Гемобластозы крупного рогатого скота и их осложнения

Исследования показали, что осложнения спонтанных лейкозов и лимфосарком различными патологическими процессами зависят от периода (стадии) болезни.

Пролиферация и инвазия лейкозных клеток в организме животных приводят к различным патологическим изменениям, которые сопровождаются дистрофическими процессами в паренхиматозных органах (печени, почках, средце). Наиболее ярко такие изменения, свидетельствующие о гипоксии и

интоксикации организма , проявлялись при лимфосаркомах, остром лимфобластном лейкозе и генерализованной стадии хронического лимфоидного лейкоза. Наши исследования согласуются с данными А. Е, Галатюка (1986) и других исследователей, которые подтверждают, что при хроническом лим-фоидном лейкозе процессы созревания и функционирования иммунокомпетентных клеток нарушены в меньшей мере, чем-при остром лимфобластном лейкозе и гематосаркомах.

6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Заболевания, объединенные термином «гемобластозы», у крупного рогатого скота являются наиболее тяжелыми. Опыты показали, что пролиферация и инвазия лейкозных клеток в организме животных приводят к различным патологическим изменениям в кроветворных и других органах. Лейкоз-ные клетки, подобно всем опухолевым, характеризуются ати-пизмом и анаплазией разной степени выраженности. Однако они сохраняют основные морфологические и гистохимические особенности тех кроветворных клеток, из которых они про-' изошли. Эта схожесть опухолевых клеток системы крови с нормальными кроветворными элементами легла в основу морфологической классификации гемобластогов.При гематосаркомах более выражены признаки злокачественности клеток, на что указывает их полиморфизм.

Основная особенность лейкозных клеток, составляющих морфологический субстрат лейкоза, характерная для опухолевых клеток вообще, — это неспособность к правильной дифференциации, созреванию.-В нормальном гемопоэзе кроветворные клетки, созревая, теряют способность к делению; тем самым дифференциация является как бы физиологическим тормозом пролиферации. Лейкозные клетки могут проходить значительно большее число циклов деления, чем нормальные клетки крови, что и создает огромную клеточную продукцию, характеризующую лейкоз.

Важное место в дифференциации . гемобластозов имеет ШИК-реакция патологических клеток на гликоген и неспецифическую эстеразу. При хроническом лимфоидном лейкозе ШИК-положительный материал выявляется вокруг ядер некоторых лимфоцитов в виде ободка, состоящего из средних и малых, а иногда и единичных крупных гранул на неокрашенном фоне. Лимфоцитарная лимфосаркома помимо этого характеризуется наличием в части анаплазированных элементов крупногранулярной ШИК-реакцией на гликоген. При остром лимфобластном лейкозе и лимфобластной лимфосар-

коме наблюдается наличие в некоторых лимфобластах крупных множественных гранул гликогена на неокрашенном фоне. Иногда ШИК-положительный материал располагается на одном полюсе клеток. Процент реагирующих клеток и интенсивность ШИК-реакцин при лимфосаркомах в сравнении с лимфоидными лейкозами заметно ниже. Активность неспецифической эстеразы проявляется в некоторых клетках в виде слабого диффузного окрашивания цитоплазмы (при хроническом лимфолейкозе и лимфоцитарной лимфсаркоме) или одиночных глыбок (при остром лимфобластном лейкозе и лимфобластной лимфосаркоме.

Следовательно, определение природы патологических клеток надежно может быть осуществлено на основе применения комплексных гистологических, гистохимических, цитологических и цитохимических методов исследований. Применение гистологических и гистоцитохимических методов исследований, в частности, при определении в клетках хлорацетатэсте-разы, неспецифической эстеразы и гликогена, позволяет иден*-тифицировать клетки, а следовательно, проводить дифференциацию гемобластозов с большой точностью.

В экспериментах, проведенных на телятах и ягнятах, получены убедительные доказательства онкогенности и инфек-ционности in vivo вируса типа С крупного рогатого скота, так как осуществлена триада Генле-Коха (выделен от больного животного возбудитель, проведено заражение животного с воспроизведением клинических признаков и выделение от зараженного животного идентичного возбудителя). Экспериментально воспроизведенный у крупного рогатого скота хронический лимфоидный лейкоз по клинико-морфологичес-кому проявлению существенно не отличается от спонтанного. Экспериментально воспроизведенная лимфобластная лимфо-саркома по характеру изменений в кроветворных органах и морфологии клеточных элементов имеет признаки, сходные со спонтанной, но отличается сильно выраженной генерализацией.

III. ВЫВОДЫ

1. При спонтанном лимфоидном лейкозе в ранний период болезни лейкозные изменения начинают проявляться в мя-котных тяжах, светлых центрах фолликулов и синусов лимфатических узлов головы и шеи, а вскоре лейкозный процесс переходит на все наружные и внутренние лимфатические узлы с вовлечением и патологический процесс селезенки, костного мозга, а иногда и печени.

2. Наиболее уязвимым местом поражения при гематосар-комах являются лимфатические узлы преджелудков и кишечника с поражением соседних тканей и органов. Кроме того, патологоморфологические изменения при гематосаркомах могут начинаться также с поражения лимфатических узлов периферических групп и локализоваться в любых органах и системах.

3. Вирус лейкоза крупного рогатого скота является основным этиологическим агентов лейкоза крупного рогатого скота. Экспериментальное заражение этим вирусом приводит к развитию лейкозного процесса с проявлением клинико-гема-тологических и патологоморфологических изменений. У телят черно-пестрой породы лейкоз удалось воспроизвести в 75%' случаев, эстонской 1— в 40%, у каракульских овец — в 55% случаев.

4. По степени восприимчивости к вирусу лейкоза крупного рогатого скота козы не отличаются от овец, однако козы более устойчивы к развитию опухолевой (узловатой) формы лейкоза. ;;

5. При экспериментальном заражении телят вирус лейкоза крупного рогатого скота, по-видимому, может трансформировать клетку в лейкозную или лимфосаркоматозную.

6. Лейкемоидные реакции характеризуются разной степенью поражения лимфатических узлов, отсутствием или слабой выраженностью гиперпластических процессов лимфоид-ной ткани в органах лимфопоэза, лолиморфноклеточной (гистиоцитами, нейтрофилами, ретикулярными и плазматическими клетками) инфильтрацией последних.

• 7. При сочетании хронического лимфоидного лейкоза с воспалительными заболйваниями преобладают патологоморфологические изменения, свойственные лимфолейкозу. Поэтому сопутствующие заболевания можно считать как осложнения лейкозного процесса.

IV. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

На основании проведенных исследований материалы дис-серации нашли применение в учебном процессе Московской государственной академии ветеринарной медицины и биотехнологии им. К. И. Скрябина и практике, опубликованы в следующих источниках:

1. Сноз Г. В., Бывальцев А. А., Мусиенко П. М. Патолого-морфологическая диагностика лимфоидных гемобластозов крупного рогатого скота: Информационный листок № 388— .28

86. — М.: Моск. обл. территориальн. центр НТИ и пропаганды, 1986.

2. Сноз Г. В. Патолого-морфологическая диагностика лейкозов крупного рогатого скота: Листовка ВДНХ СССР: — М.: Государственный агропромышленный комитет СССР, 1989.

3. Сноз Г. В. Патолого-морфологическая диагностика ге-мобластозов крупного рогатого сьота: Лекция для слушателей факультета повышения квалификации ветеринарных врачей. — М.: Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина, 1986. — 28 с.

4. Сноз Г. В., Масимов Н. А. Гемобластозы крупного рогатого скота: Лекция для студентов ветеринарного факультета. — М.: Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина, 1990. — 32 с.

5. Дифференциальная диагностика гемобластозов и он-корнавирусной инфекции у с.-х. животных/В. П. Шишков, А. Д. Белов, Б. 3. Иткин, В. А. Крикун, В. Б. Бронштейн, 3. Н. Меньшикова, А. Р. Слепченко, С. П. Павленко, Г. С. Петровский, Г. В. Сноз и др. // Метод, рекомендации (рассмотрены и утверждены координационным совещанием по проблеме лейкозов человека и с.-х. животных и учебно-метод. комиссией ветеринарного факультета Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина, протокол № 8 от 20 апреля 1990 г.). М.: Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина, 1991. — 88 с.

V. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ

1. Для постановки первичного диагноза на лейкоз крупного рогатого скота при подозрении по гематологическим показателям необходимо проводить гистологические исследования даже в том случае, если отсутствуют патологоанатомические признаки.

2. Тест-органами для практической диагностики лейкозов-могут служить селезенка, костный мозг, лимфатические узлы (заглоточные, подчелюстные, поверхностные шейные, средостенные), а также печень. При подозрении на лимфо-саркому, кроме пораженных лимфатических узлов тест-органами могут быть селезенка, сердце, почки, сычуг.

3. При ветеринарно-санитарной оценке туш и органов необходимо учитывать гистологические изменения лимфатических узлов, селезенки, костного мозга и печени, так как при лейкозе в начальной стадии макроскопические изменения в органах и тканях не выявляются.

4. При дифференциации гемобластозов с целью определения природы патологических клеток необходимо применять методы по выявлению гликогена, хлорацетатэстеразы и неспецифической эстеразы.

VI. СПИСОК НАУЧНЫХ ТРУДОВ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Сноз Г. В. Патоморфологическое состояние органов и тканей при начальных стадиях лимфолейкоза крупного рогатого скота//Изучение патоморфологических изменений в организме с.-х. животных: Сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1978. — Т. 100. — С. 103— 104.

2. Сноз Г. В. Значение гистологических исследований в дифференциальной диагностике лейкозов крупного рогатого скота // Теоретические и практические вопросы лейкозов и злокачественных опухолей с.-х. животных: Сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1979. — Т. 107. — С. 53—56. '

,3. Сноз Г. В. Патоморфологическое состояние костной ткани на разных стадиях развития хронического лимфолейкоза у крупного рогатого скота // Теоретические и практические вопросы лейкозов и злокачественных опухолей с.-х. животных: Сб. науч. тр./Моск. вет. акад. — 1979. — Т. 107. — С. 57—60.

4. Сноз Г. В., Мусиенко П. М. Дифференциальная диагностика начальной стадии хронического лимфолейкоза и лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота//Доклады ВАСХНИЛ. — 19,80. — № 3. — С. 30-32.

5. Сноз Г. В., Мусиенко П. М. Патоморфологическое состояние органов и тканей при остром лимфобластном лейкозе крупного рогатого скота // Изучение физиологических изменений в организме с.-х. животных: Сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1980. — Т. 112.— С. 104—109.

6. Сноз Г. В., Мусиенко П. М. Патоморфологическая характеристика различных вариантов лимфосаркомы крупного рогатого скота//Инфекционные болезни и лейкоз с.-х. животных: Сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1981. — Т. 120, — С. 75—78.

7. Сноз Г. В., Мусиенко П. М. Дифференциальная диагностика лим-фобластной лимфосаркомы, хронического лимфоидного и острого лимфо-бластного лейкозов у крупного рогатого скота // Актуальные вопросы патологоанатомической диагностики болезней животных: Материалы VIII Всес. конф. по патолог, анатомии животных, 15—17. сентября 1981 г. — Витебск. Л.: Леиингр. вет. ин-т, 1982. — С. 277—280.

8. Сноз Г. В., Мусиенко П. М. Патолого-морфологическая характеристика лейкозов и злокачественных лимфом крупного рогатого скота в сравнительном аспекте//Актуальные вопросы этиологии, патогенеза и диагностики неоплазий с.-х. животных: Сб. науч. тр. / Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1984. — С. 45—51.

9. Сноз Г. В., Мусиенко П. М. Патолого-морфологическая характеристика лимфоцитарной лимфосаркомы крупного рогатого скота//Актуальные вопросы этиологии, патогенеза и диагностики неоплазий с.-х. животных: Сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1984.— С. 51)—55,

|10. Сноз Г. В., Мусиенко П. М. Патологоморфологические особенности хронического лимфоидного и острого лимфобласгного лейкоза крупного рогатого скота на ранних стадиях развития // II Всес. съезд гематологов и трансфузиологов; Тез. докл. (15—18 ктября 1985 г. Львов). — М. — 1985'. — С. ЗД9[.

11. Экспериментальное воспроизведение лимфолейкоза у овец вирусом лейкоза крупного рогатого скота /В. П. Шишков, X. С. Салнмов, Б. 3. Иткин, В. А. Крикун, 3. Н. Меньшикова, Г. В. Сноз // Вестник с.-х. науки. — 15)85. — № 12. — С. 97—102.

12. Сноз Г. В. Патолого-морфологические особенности органов и тканей крупного рогатого скота при спонтанных и экспериментальных лимфо-лейкозе и лимфобластной лимфосаркоме//Лейкозы крупного рогатого скота: Сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1985. — С. 74—78.

13. Клинико-гематологическая и патоморфологическая характеристика экспериментальных геиобластозов у крупного рогатого скота/В. П. Шишков, Г. В. Сноз, Г. С. Петровский, В. А. Крикун, П. М. Мусиенко // Проблемы патоморфологнческой диагностики болезней в промышленном животноводстве: Материалы IX Всес. научио-производ. конф. по пато-морфологии с.-х. животных. — Вильнюс. Мокслас, 1986. — С. 301—305.

14. Сноз Г. В. Некоторые особенности патолого-морфологических изменений в организме крупного рогатого.скота при начальной стадии хронического лимфоидного лейкоза //Теоретические и практические вопросы ветеринарии: Тез. науч. конф. «Современные методы профилактики и оздоровительные мероприятия по лейкозу крупного рогатого скота». Тарту, 1987. — С. 68—70.

15. Сноз Г. В. Лейкоз крупного рогатого скота и его осложнения // Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с.-х. животных: Межвуз. сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1988. — С. 78—79.

Щ. Сноз Г. В. Особенности развития патологических изменений у крупного рогатого скота при лимфосаркоме //Проблемы лейкоза и инфекционных заболеваний с.-х. животных: Межвуз. сб. науч. тр./Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1988. — С. 79—81.

,17. Сноз Г. В. Морфологические изменения крупного рогатого скота при лимфолейкозе//Диагностика, патоморфология, патогенез и профилактика болезней в промышленном животноводстве: Межвуз. науч. сб. / Саратовский зооветинститут. — 1990. — Ч. 1. — С. 128—130.

18. Сноз Г. В. Отличие гемобластозов от лейкемоидных реакций у крупного рогатого скота // Актуальные вопросы инфекционных и инвазионных болезней животных: Сб. науч. тр. / Моск. вет. акад. им. К. И. Скрябина. — 1993. — С. 83Ь-86.

19. Шишков В. П., Сноз Г. В. Патоморфология гемобластозов крупного рогатого скота // Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней с.-х. животных: Материалы Всерос. научно-метод. конф. по пат. анатомии с.-х. животных, 19—21 октября 1993 г. — Воронеж, 199 3— С. 30—31.

20. Сноз Г. В. Локализация патоморфологических изменений у крупного рогатого скота при гемобластозах на разных стадиях развития патологического процесса // Актуальные вопросы инфекц. и инваз. бол. животных: Сб. науч. тр. / Моск. госуд. акад. вет. мед. и биотехн. имени К. И. Скрябина, 19,94. — С. 137—139.