Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Использование препарата "Антакон" для профилактики кишечных болезней молодняка птиц

МБ оа

. \ ^Министерство сельского хозяйства

республики казахстан АЛМАТИНСКИЙ ЗООВЕТЕРИНАРНЫЙ ИНСТИТУТ

На правах рукописи

КХУНСИ СИСЕНГ

ИСПОЛЬЗОВАНИЕ ПРЕПАРАТА „АИТАКОГ ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ КИШЕЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ МОЛОДНЯКА ПТИЦ

16.00.03 — Ветеринарная микробиология, иммунология, эпизоотология и инфекционные болезни животных

Автореферат

диссертации на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук

АЛМА.ТЫ 1894

Работа выполнена на кафедре микробиологии и вирусологии Алма-тинского зооветеринарного института.

Научные руководители: доктор ветеринарных наук, профессор Бияшев Кадыр Бияшевич,

доктор биологических наук,

профессор Толысбаев Божбанбай Толысбасвич.

Ведущая организация: Казахский научно-исследовательский ветеринарный институт.

Официальные оппоненты: доктор ветеринарных наук, профессор Лопат-

ников Геннадий Иванович,

кандидат ветеринарных наук ТуякЗаепа Ботлгоз Маратовна.

Защита состоится ---1994 г. в -¡/^ » часов

на заседании специализированного Совета Д 18.01.02 при Алматинс-ком зооветеринарном институте (480013, Алматы, пр. Абая, 28).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Алматинского зооветеринарного института.

Автореферат разослан «» /-С& —__ 1994 г. (

Ученый секретарь специализированного Совета, кандидат ветеринарных наук,

децент (7^/ и- н- АХМЕТСАДЫКОВ

'введение

Актуальность темы. Проблема экологии микроорганизмов, населяющих открытые полости организма молодняка сельскохозяйственных животных весьма актуальна. Поскольку макроорганизм и его микрофлора - единая экологическая система, находящаяся в состоянии динамического равновесия, а микробы желудочно-кишечного тракта, участвуют в метаболических процессах-, которые протекают в организме, состав его микрофлоры относительно посто -'янны. Мевду тем, компенсаторные возможности молодняка животных и птиц часто весьма ограничены. С этих позиций микрофлора пи -щеварительного' тракта выступает в качестве высокочувствитель -ной индикаторной системы, которая реагирует составом на изме -нение физиологического состояния животных. Весьма ванна роль микрофлоры в возникновении кишечных заболеваний, в том числе • тяжелых форм дисбантеоиозов, которые значительно усиливаются в, .условиях ко1щентрации производства, 'когда на организм постоянно воздействует целый ряд стресс-факторов. Это способствует широкому охвату поголовья молодняка сельскохозяйственных на -вотных кишечными заболевашями, среди которых одно из ведущих мест занимают инфекционные болезни - колибактериоз, сальмонел-лез и другие, так же воспалительные неинфекционные■заболевания, такие как диспепсия, гастроэнтерит, гастроэнтероколат.

■ В настоящее время спектр патологии, вызываемой колибакте-риями, сальмонеллами значительно расширился, и наиболее значительный ущерб испытывает птицеводство. Названные заболевания сопровождаются болезнью в, гибелью цыплят.

Несмотря на очевидные успехи в борьбе с колибактериозами я сальмонеллезами сельскохозяйственных животных и птиц, исследования по разработке более совершенных методов диагностики и

средств специфической профилактики и ликвидации этих болезней остаются в центре внимания современного научного поиска.

Б последние годы благодаря широким и целенаправленным исследованиям, изучены мнбгие вопросы краевой эпизоотологии, клиники и патогенеза кишечного заболевания молодняка птиц, раз работаны и внедрены диагносгикумы, вакцины и рациональные меры борьбы с этими инфекциями (Матвиенко Б.А., 1973; Борсук И.Ф., Тимошко К.А., 1986; Интизаров М.М., 1986; Попова П.П., Ремен -цова М.М., Ким A.A., 1987; Бияшев К.Б.; 1992). Вместе с тем, распространенность вспышек кишечных заболеваний молодняка птиц в ряде хозяйств Казахстана л за рубежом, наблюдаются се -годня довольно часто.

■. В Казахстане и за его пределами против колибактеряоза и сальмонеллеза птиц предложены убитые вакцины. По наблюдениям практических работников ветеринарной слукбв, результаты применения вакцины не равнозначны.

Сегодня наличие в хозяйствах Республики Казахстан высокого процента гибели молодняка птиц от кишечной инфекции, а именно: колибактериоз.а и сальмонеллеза, а также от сянегнойнои

палсрки и протея, вызывает необходимость, а ..раз-работке новых 1 « ^

эффективных методов профилактики против вышеназванных болезней.

Пель и задачи исследований. Исходя из выщеизлояенннх про -блем, целью наших исследований является изучение биологических и профилактических свойств препарата "Антакон",'использование его в целях профилактики -кишечных заболеваний молодняка птиц.

3 соответствии с поставленной целью были намечены следующие задачи:

"I. Изучение биологических свойств выделенных культур бак -тержг'из патматериала в связи с выяснением этиологической

- з -

структуры кишечных болезней молодняка птиц;

П. Изучение биологических свойств штамма используемого для приготовления препарата "Антакон";

Ш. Изучение профилактических свойств препарата "Антакон" в опытах на белых мышах и морских свинках, и цыплятах, как в лабораторных, так » в производственных условиях.

Научная новизна работы. Установлена этиологическая структура кишечных заболеваний молодняка пгиц и изучены биологические свойства выделенных культур от павших цыплят. Наряду с этим определены биологическая характеристика адгезивного штамма Е-15 и его антагонистические свойства. Кроме того, получены экспериментальные и производственные данные,. показывающие эффективность использования препарата "Антакон" для профилактики кишечных заболеваний молодняка птиц.

Практическая ценность работы. Установлена причина гибели

молодняка птиц в птицефабриках Алматинской области Республики

* ■ ■ ■ ч •

Казахстан." Гибель цыплят вызывалась кишечными", сальмонеллезны -

ми, синегнойннми палочками и протеями. Инфекция у них протека -

ла в виде моно- и смешанных инфекций.

Разработан способ профилактики кишечных заболеваний молодняка птиц путем применения препарата "Антакон", который мояет найти эффективное практическое применение в различных птице -водческих хозяйствах Республики Казахстан и России, что поз -воляет снизить количество заболевших и погибших цыплят, а так-,яе значительно уменьшить материальные затраты на проведение профилактических мероприятий.

Внедрение результатов исследований. С разрешения Главного управления ветеринарии Кинистерства сельского хозяйствам продовольствия Казахской ССР от 10.07.1391 г. препарат

"Антакон" из штамма Е-15 для профилактики кишечных болезней молодняка ¿швотных и птиц широко применяется в хозяйствах, неблагополучных по нолпбангернозу и сальмокеллезу.

Предложенный нами способ'внедрен,з различных хозяйствах Павлодарской в Алматинской областях Республики г.азахстан и в Алтайском крае (Россия).

Апообация работы. Основные положения работы доложены и обсуадены на:

- научных конференциях профессорско-преподавательского состава, аспирантов и соискателей Алматинсиого Зооветеринарного института в 1993 году;

- расширенном заседании кафедры микробиологии и вирусологии в 1ЭЭЗ году;

- Международной научно-практической конференции по аграрным проблемам, Алматы, 1333 год.

Основные полонвния диссертации, выносимые на защиту:

1. Установление этиологической структуры кишечных заболеваний молодняка птиц;

2. Определение биологической характеристики-адгезивного штамма £-15;-

3. Обоснование к применению препарата "Антакон" из штам -ма Е-15 против кишечных заболеваний молодняка птиц с установ -лением его экономической эффективности.

Публикация. По теме диссертации опублинозано5- статьи.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на

страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов исследования, резульга -тов исследований, состоящих из 3 глав, обсуздения полученных результатов, выводов, списка литературы и приложений.

Материалы диссертации'иллюстрированы 31 таблицей, I ри сукком. Список литературы включает 160 источников, из hííx 31 иностранных авторов.

СОБСТБШШЕ ИССЛЕДОВАНИЯ '' Материалы я методы......

Работа выполнялась в /лыатинском зооветеринарном институте на кафедре микробиологии и вирусологии. Производственные ..... опыты проводились в дтицехозяйствах Алматинсной, Павлодарской областей Республики Казахстан и Алтайского краягРоссийской федерации. . ... . . . . ..

Для изучения этиологических структур болезней молодняка птиц были использованы 210 голов павших цыплят в возрасте I, 3, 5 и 7 суток. Посевы делались на простые и дифференциально диагностические среды (МПА, Эндо и др.) из паренхиматозных органов, костного мозга и тонкого отдела кишечника. Первичный отбор* культур бактерией изучение ах проводились на основании характерных морфологических,.тинкториальных, культурально-био-химячесиих свойств в агглютинабй'льноста со специфически/ли диагностическими сыворотками. Протеолитичесяие свойства иссле-. довали на ШЖ и молоке; саха политические свойства - на"среде Андредэ с 12 углеводами; образование сероводорода - по Морри -су, ивдола - по Морели; проекцию ацетилиетилкарбинола с по -мощью реакции Фогес-Проснауэра; определение образования кис -лой или щелочной зоны на среде Кларка'с глюкозой путем постановки реакции с метилротом, уреазную активность на среде Христенсена; гемолиз - на MIA с эритроцитами крови барана по Пальтауфу; бактериоциногенную активность культур контактным методом Хомона /1959/; антигенные свойства бактерий изучали

....... - б -

реакцией агглютинации на стекле с использованием 0-колисыворо-ток по отношению к различным сероварам кишечной палочки и поли валентных 0- и 0-моносывороток, а также монорецепторных Н-сывс роток для сальмонелл; чувствительность бактериальных культур к антибиотикам - методом бумажных дисков, содержащих антибиотики Определение видовой принадлежности бактерий проводилось по мор фологическим, тинкториальным, культурально-биохимическим свойствам и антигенной структуре с использованием определителя Бес ги /1974, 1984/.

Вирулентность штаммов кишечной пало.чки и. сальмонелл . изу». ли на белых мышах, культур протея и синегнойной палочки - на к риных эмбрионах.

Для получения эффективного антагонистического препарата против патогенной кишечной микрофлоры, необходим штамм с доста точно высокими биологическими свойствами, который хорошо при» вается, непосредственно, в организме животного'и птиц.

У полученного адгезивного штамма кишечной палочки, изучал морфологические, тинкториальные, биохимические, культуральные свойства, чувствительность к антибиотикам, сроки элиминации, а тагонистическую активность в отношении некоторых "патогенных ба терий; в эксперименте ца лабораторных животных.«'молодняке пти установлена вирулентность и токсичность штамма.

Подопытные животные, В лабораторных экспериментах было ио пользовано 900 белых милей ( живой массой 12-14 г ), 300 морск свинок ( живой массой 250-270 г ) и 800 цыплят ( массой 35,6-40',8 г ).

Статистическая, обработка результатов осуществлялась по м тоду, описанному Р.Ф.Сосовым и А.Л.Глушковьм /1974/.

Уровень достоверности определяли по таблице Стъюдента. Данные считали достоверными при Р <0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

'I. Этиологическая структура кишечных болезней у птиц

Нами изучалась этиологическая структура кишечных болез -; ней молодняка птиц. Для бактериологического исследования мы

использовали павших цыплят в возрасте I, 3, 5 и 7"суток. Сбор . материала проводился на птицефабриках "Абайская",: "Алматин -•екая", "Аватская" Алматинской области.

Всего подвергнуто бактериологическому исследованию 210 павших цыплят.

В результате исследования выделено 322 культуры различ -ных микроорганизмов, в том числе 115 штаммов Б.coli (36,16 %), из них в. coli 078 (13), 02 (10), Olli (10) ', 0119 (9), 0141 (5), 086 (3), Ol (4) и не типичных груцп - 61 культура; 96 сальмонелл (30,18 %) из НИХ 50 S. enteritidis , 21 S.gallinarum, 9 s.dubiin и 16 не относятся к тому или иному с^ротйпу сальмонелл; 10 синегнойной палочки (3,14 %); 15 протея (4,71 %) и 86 других бактерий (кокки: стафилококки, сарцины,'диплококки).

' Все это свидетельствует о том, что в этиологической структуре кишечных инфекций цыплят доминируют,в основном, бактерии кишечной группы (семейство enterooacteriar.eae )

2. Характеристика выделенных культур бактерий

'Выделенные штаммы кишечной палочки имели типичные морфологические, тинкторальные . и культурально-биохимические свойства, характерные для данного вида. Однако биохимические свойства колебались в зависимости от штаммов. Так, все штаммы ферментировали арабинозу, глюкозу, манит (с образованием

' "- !

- В г

кислоты я газа), галактозу (разлагают НО штатов), ксилозу (108), лантозу (108), сахарозу (70), глицерин (97), дульцит (65), сорбит (113); кроме того, ряд штаммов обладает уреазной (6 штаммов) и гемолитической активностью; образование сероводорода отмечалось у небольшого количества штаммов (всего 10 штаммов), наоборот, у большинства штаммов (84) наблюдалось образование индола, что характерно для штаммов кишечной палочки; у 14 штаммов отмечается положительная реакция Фогес-Прос -кауэра (образуется ацетилметилкарбинол) и у 104 штаммов с ме -тилротом (образование кислой зоны, т.е. образование COg и Hg в отношении 1:1).

Серологическая идентификация штаммов е.coli с помощью РА на стекле показала наличие следующих сероваров к 01 (4 штамма), 02 (10), 078 (13), 086 (3), 0IÏI (10) ; 0119 (9), 0141 (5), т.е. 54 штамма удалось типизировать серологически, тогда как 61 штамм.остался нетипизированным. Для исследования представляли интерес серозары 0$, 078, '086, Olli кишечной па -лочки, которые по .литературным данным обладают адгезивными свойствами, что является признаком-их патогенности.

Определение чувствительности к антибиотикам показало, что 115 штаммов были чувствительными к ампицалину, ИЗ - ле -вомицетину, ПО - неомицину, 89 - мономицину, 84 - окситетра-цикляну, 13 - стрептомицину; все штаммы были не чувствительными к пенициллину, полвминсину и эритромицину. У двух сероваров 078 и 0III кишечной'палочки выявлено образование бактериоцинов. Наряду с вышеуказанными у 26 штаммов из различных сероваров (использовались также не типизированные штаммы)в.coli определялась вирулентность на белых мышах. Заражение их проводи -

с с

лось подкожно в дозах I0J и 2,5-10 микробных клеток. Из

160 зараженных-мышей в течение 1-3 суток пало 38; через 4-7 суток .-. 49; 73 из них не пали через 7 суток после заражения (контрольные мыши остались живыми). При бактериологическом исследовании из внутренних органов от всех павших'и оставшихся в живых высевались зараиающие культуры.

Таким образом, проведенные эксперименты по заражению мышей подтвердили высокую патогенность сероваров 02,078,086, OUI кишечной палочки по сравнению с другими сероварами (0.1, 0119, 0141).

Для нас определенный интерес представляли также сальмонеллы (96 штаммов).

Культуры сальмонелл были типичными по морфологическим, тинкторальным, вультуральным и биохимическим свойствам.

Проводилось' исследование по типированию их О-полизалент-ными, 0 и Н-монорецепторньшя сыворотками.

В результате 50 штаммов сальмонелл типизировано как' S.enteritidis. •21 «-S.gaiainarunr g _S:duMin- f a 16 штам'"-мов остались не типизированными.

Для изучения биохимической активности были отобраны 23 штамма из группы сальмонелл. Изучение их показало, что все штаммы ферментируют арабинозу, ксилозу,' глюнозу, галактозу, мальтозу, манниг, дульцит, сорбит. В отношении лактозы, сахарозы, инозита -они инертны. Со всеми штаммами отмечаются об -разование сероводорода (при отрицательной реакции на индол) и положительная реакция с метилротом.

Сальмонеллы оказались чувствительными к леЕОмицетину-90 штаммов, к ашицилину-77, к неомицину-41, к мономицину-59; слабая чувствительность их отмечалась по отношению к пеницил- ■ лину, стрептомицину, особенно к полиминсину и эритромицину.

Определялась также вирулентность сальмонелл на белых мы -шах, для чего использозалось 23 штамма из трех видов (з.ег^е-г11;1(Нз - 10 штампов, з.йа11:шаг1ш-10,з.<ЗиЬ11п -3). Заражающая доза для мышей штаммами s.enteritidiз и5.<ЗиЫй1

6 7 составляла 2x10' м.к., а шгаша_8.ваШпагша-¿Л^Ць.к. в на -

честве контроля использовался вирулентный штамм з^урЬ:шиг1и1п

- 371. В результате опыта все зараженные мыши кульгурамиз.е^е

гхь1(Из,3.ва11111агшп, б. typhimuгiuш пэли на 10 сутки,

При бактериологическом исследовании из внутренних органов вы -

делялись заражающие культуры.

Как уке отмечалось выше наш выделено из павших цыплят 15 штаммов вульгарного протея. Эти штаммы по морфологии тонкие «■ - -подвижные палочки, хорояга окрашиватциесячанилиновыми красками, а по Граму - отрицательно. -'•*'

Биохимическая активность.их весьма вариабельна. Тан, все штампы ферментируют глюкозу, галактозу, глицерин с образованием кислоты и газа. Большинство из них активно з отношении сахарозы (12 штаммов), сорбита (14), маннита (14) и мальтозы (9); остальные углеводы ими не ферментируются. Хорошо выражена уре-а.зная активность и способность к образованию сероводорода; с 14 штаммами вульгарного протея реакции с мегилротом - положи -тельные, а £огес-Проскаэра - отрицательные.

•Определение чувствительности к антибиотикам показывает чувствительность всех щгаммов протея к левомицетину и ампициллину, II штаммов - к мономицину, по 5 штаммов - к неомицину и стрептомицину; к остальным они не чувствительны.

- Вирулентность тташов протея изучалась в опытах с нуринь-ми эмбрионами при заражающей дозе 10 микробных клеток. В ре -зультате все эмбрионы погибли в течение 1-3 суток. При умень -

о

шении заражающей дозы до .10 м.к. (брались 16 эмбрионов'на 5 штаммов) гибель их продолжалась в течение 10 суток -и составила примерно 80 % от общего количества. От погибших эмбрионов при бактериологическом исследовании высевались исходные культуры. В«Гвсех~опытах в качестве контроля использовался эта -лонный штамм протея'OXjg.

В ходе экспериментов нами выделено также 10 штаммов си -негнойной палочка (Ps.aeruginosa ), открытой Еессаром в ■ 1882 г. Они тонкие подвижные палочки, не образующие спор и капсул, хорошо окрашивающиеся анилиновыми красками,а по Граму-отрицательны; по характеру дыхания - аэробы или факультативные анаэробы, легко культивируемые на простых средах при температуре 37 °С и: оптимуме pH 7,2. В МПБ отмечается равномерное по -мутнение с сероватым иногда с зеленоватым оттенком пленки, а такзе осадок на дне пробирки; на ¡ША - колонии гладкие, блестящие, в начале прозрачные, потом серовато-зеленые и коричневатые.

Все исследованные штаммы синегнойной палочки инертны в отношении ферментации углеводов,за исключением одного штамма, который разлагает глюкозу, мальтозу, сахарозу с образованием только кислоты й манита с образованием кислоты и газа.

Гемолитическая активность штаммов хорошо выражена,а уре-азноЯ активностью обладают только лишь 3 штамма.

Исследование чувствительности к антибиотикам показало, что большинство штакмоз синегнойной палочки слабо или вовсе не чувствительны к использованным антибиотикам (4 штамма чувствительны к левомицегину, 3-к ампицялину и по I - штамму - к неоглицину и моноглицину), что явно свидетельствует о значительной устойчивости еа к применяемым в настоящее время антибиотикам.

При заражении 15 куриных эмбрионов в дозе 10° м.к. и 30 - в дозе 10^ м.к., первые погибли в течение I суток, а из вторых - II в течение первых суток, 19 - в течение вторых-третьих суток, от которых выделялись исходные зара.тающяе культуры, что подтверждает высокую вирулентность штаммоз синегнойной палочки к куриным эмбрионам.

Таким образом, проведенные исследования и соответственно полученные данные.убедительно доказывают,что причиной гибели молодняка птицы являются колибактериоз и сальмонеллез птиц (пуллороз).При этом доминируют в основном серояары;/E.coli .0113

078, 085, S.enteritidis и 3-gallinarum. На этом фоне найдут благоприятные условия для развития и другие бактерии как вульгарны** протей и синегнойная палочка.Все это говорит о не -обходимости проведения целенаправленных исследований по отра -ботке профилактических мероприятий, эффективных против названных выше инфекционных болезней в птицеводстве.

Исходя из вышеизложенного для нас 'являлось интересным изучение возможности применения кишечной палочки в целях создания, препарата, применяемого для предупреждения алиментарного зара-' f,.e яения молодняка птиц и животных - возбудителями колибактерио -зов и сальмонеллезов, а также регуляции качественного соотношения облигатной микрофлоры в желудочно-кишечном тракте.

В этой связи была проведена селекционная работа с целым рядом полевых штаммов кишечной палочки,из которых были выбраны культуры,обладающие адгезивным антигеном и способные-к генетической реконструкции,с. целью использования.их как "активного посредника" между макроорганизмом и.патогенной кишечной микрофлорой.

• -33' -

2. Характеристика nvav.v.a Escherichia coli е. 15.

В результате селекционной работы нами был отобран адге -зивный штамм кишечной палочки E-I5.который, использовался для изготовления препарата.

Важное значение в связи с этим имеет изучение морфологических,биохимических,культуральных,антигенных и бактериоцино -генных свойств,а также константности остаточной вирулентности и антогонистической активности штамма E-I5 по отношению к не -которым патогенным бактериям.

Культуральные свойства штамма изучали на питательных средах.На МПА наблюдается равномерный хороший рост о голубоватым оттенком, образуются круглые, гладкие, полупрозрачные колонии. На средах Эндо. в чашках Петри E-I5 растет в виде маляновокрас-нь'х колоний. Бактерии обладают хорошей подвижностью.Оптимальная температура роста 37-38 °С, pH среды 7,0-7,2. При микроскопиро-вании мазков можно видеть беспорядочно расположенные палочки. При посеве на'МПБ отмечается равномерное помутнение среды с образованием на дне пробирки легко разбивающегося осадка.

Определение антигенной, структуры проводили с'общими "0"-коли и. моковалентныма агглютинирующими сыворотками .При этом штамм E-I5 агглютинирует поли (+-н-+)- и моновалентные 0III(++++) сыворотки, что подтверждает его полноценные антигенные свойства.

Ферментацию углеводов определяли на П2А (содержание 'агара 0,075 %) с индикатором Андредэ с различными сахарами и многоатомными спиртами.Реакция с образованием кислоты и газа отмечалась на средах с глюкозо'й,лактозой,сахарозой,мальтозой, манна-том,сорбитом и дульцятом.

Все эти.данные подтверждает типичность морфологических, тинкториальных.культурально-биохимичесних и антигенных сеойств

штамма E-I5.характерных для бактерий рода Escherichia.

Одним из тестов изучения поставленной задача было опред

ление антагондстичесной активности исследуемого штамма в сра

нении с культурами e.cöü 017 и 023.

Проведенные исследования in vitro (табл. I) показали,

что штамм S-I5 через 24 часа подавляет рост Proteus vulgaris. Pseudomonas fluorescens, S.tyDhimurium, S.enteritidis,

s. galiinarum , e. coli что происходит благодаря мик

роциногеннкм свойствам исследуемого штамма.

Таблица I.

Антагонистическая активность штамма E.coli-15 в отношении некоторых патогенных бактерий

Наименование культур¡^нГмпд совместно1,° нультивирова-

т

:__контроль_____

017 Т 023

- ; , ..ШЦ наименование культуру' на_ЩАт____________

.'штамм S-I5 г

1. P.vulgaris - •+ +

2. Ps.fluorescens - + s +

3. S.tyohimurium - + +

4. S.enteritidis - ' + +

5. S.gallinariujn - + +

6. Е. coli _ .+ ■ +

Примечание: "+"-.наличие рос та. на ША;

"-" - отсутствие роста на ША.

хх

■Результаты, 'полученные при исследовании "Р"штамма E-I5 на-лабораторных животных '(белые мыши, морские свинки) полностью подтвердили результаты, полученные in vitro (табл.2 Эффективность антагонистических свойств штамма Е-15(тгбл. изучали в опытах на лабораторных животных (200 белых мышей, 90 морских свинок), путем выпойки перорально 'белых мышей, в

"Символ "Р" означает наличие адгезивного антигена.

-15 -

с £ ту о

дозах -10°, -10 , -10 , -10 микробных клеток и вольной выпой-

с с 7

кой в поилке с концентрацией в I мл воды -10 , -10 , -10 , -I08 микробных нлеток.

Морские свинки выпаивали перорально в дозе 10^, 2x10^ м.и. и вольной в поилке с концентрацией в I мл годы -I09, -2хЮ9м.к.

Через трое суток после выпойки .тавотные заражали вирулентной нультурой в.coli- 078, путем выпойки, мышей з дозе -108-м.к,

Q '

а морских свинок - 2хЮ микробных клеток.

Полученные результаты показывают,что во всех использован -ных дозировках у белых мышей и морских свинок создается прочная устойчивость организма защищая их в 100 % случаев от летального заражения.

Для получения эффективного антагонистического препарата против.патогенной кишечной микрофлоры,необходим штамм о достаточно высокими стабильными биологическим свойствами.способствующими хорошей приживаемости в организме животного.которые повазаны в табл. 3. Из таблицы видно, что штамм E-I5 на агаре образует колонии s -формы, рост наблюдается при pH среды 7,27,6, устойчив к желчи (20 %).поваренной соли (2 %) .фенолу (0,3 %), спирту (0,6 7о) и терморезистен к температуре +65°С в течение 60 мин и не проявляет гемолитическую активность.

Таким образом-, проведенные нами-исследования подтвердили, что изучаемый штамм E-I5 обладает хорошей способностью к приживаемости в организме " и проявляет высокую антагонистическую активность в отношении некоторых патогенных бактерий, при наличии слабой остаточной вирулентности.

Нами проведены экспериментальные исследования по изучению профилактических свойств препарата "Антакон" из микроциноген -кого E-iö на цыплятах. В опыте находилось 520 суточных-

Таблица 2

Профилактические свойства штамма Е-15 в опытах на белых мышах и морских свинках

Наимено- 1Вид вание ¡живот-штамма ¡ного !

Кол-во I Результаты заражения вирулентной культурой зара ______ 078 ______ т_____

и метод введения, (выжило{пало) % выживас-ж-ных ,м>к# I мости

Е-15

Е-15

белые мыши

белые мыши

морские свинки

Контроль-белые ные мыши

Конт- морские рольные свинки

40 40 40 40 20 20 20 20 25 25 20 20

•10

10° пероралыю

Юб

Ю7

м£ -"-

¿иц " 10%

мл вольный

10 /-£ мл -"-

1(Р/1 мл -"-

Ю8/т мл -"о 1

10 орально 2-

•Ю9

10/т мл вольный 2-10VI мл вольный

10 -

40 40 38 38 20

Ю8

20 18 25 25 20 19

10

Ю8 перорально

Ю8 -Ю8 -Ю8 -Ю8 -

Юв -Ю8 -"-2-Ю9 -"-2-Ю9 2-Ю9 2-Ю9

Ю8 орально

10 2 »10 орально

40 40 38 38 20 20 20 18 25 25 20 19

100 100

100 100 100 .100 100 100 100 100 100 100 100 100

I

4—1

о\

Примечание: сроки наблюдения 15.суток после заражения

Таблипа 3.

Характеристика биологических свойств штамма В-15

Изученные свойства ■ Рост на ЬША при Рн

Рост на среде с келчьа, %

т

i

Штамм £-15

7,2 7,4 7,6

20 40

Рост на среде с фенолом, %

Рост на среде со спиртом, %

Рост на среде с поваренной солью, %

Г

■ 2 4

0,1 0,2

0,3 , 0,4

0,2 ' 0,4

0,6 0,8

.Образование углекислого газа Образование явдола Образование сероводорода Гемолитическая активность Терморезистентность при температура 60 °С,-

30 минут 80 минут

: ■:.; \ г. • ■ 9.0 минут

при температуре 65 °С 30 минут 60 минут . 90 минут

Примечание: "+" - наличие роста на МПА,

"-" - отсутствие роста на МПА.

+-+ +

+ +

+ +

+ + +

+ + + • + + '

+

цыплят" (табл. 4).

Результаты данного исследования показали, что применение препарата "Антакон" против колибактериоза и сальмонеллеза моло няка птиц методом перорального и вольного поения в дозе 10® и

■ "п ■■ ' 1 ~ ...... " ~ ' ----- - ....... —

Ю ы.к., способствовало повышению процента"'выгсиваемости до 70 90 % после заражения.вирулентными культурами Е-078 и s.galli-иагшп . А в группах, где исследуемый препарат применялся тем же способом, но в дозах 10®, 5xI08, 8xI08, Ю9, 2х109 м.к. все цыплята остались живыми, при 100 % гибели контрольных цыплят.

Таким образом, установлено, что введение в организм тольк что вылупившихся цыплят препарата "Антакон" до первого кормле ния не позднее 60 минут, изготовляемого из штамма е.coli - 15 вызывает у них доброкачественную общую и местную реакции я небольшое повышение температуры (0,5°С) без снижения аппетита.

Благодаря микроциногенным свойствам энтеробактерий обеспе чивается регулирование состава популяций микроорганизмов в же ■ лудочно-кишечном тракте организма. Микроцину являются защитным фактором как для бактерий (при межвидовом и внутривидовом анта гонизме), гак и для макроорганизма (при избыточном размножении попавших в него патогенных' микробов). Микроциногенные штаммы эшерихий обладают селективным экологическим преимуществом при колонизации кишечника (М.И.Назарчук, Б.А.Сибирный, Н.Е.Крилин-ская, 1980; Л.Д.Борисов, 1976; F.Baguero;C.Asencio » I97S). Исходя из полученных"нами результатов можно отметить, что применение препарата "Антакон"-из мнкроциногенного штамма E-I5 в

первые кинуты жизни после вывода цыплят из инкубатора в дозе

Я '

5x10 м.к. перорально или зольным способом, позволяет сохранит

цыплят от заболеваний колябактериозом и сальмонеллезом.

Профилактические свойства препарата "Антаяон"

Кол.

НИВ'

•во ¡Доза ' ¡введения, ¡м.к.

из штамма Е-15

-х

I

I

Т--

I 2

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

10

10е ю6 10? 10?

ю8 ю8г

5x10'

5x10

8x10£

8хЮ£

Ю9

Ю9

2хЮ9

2хЮ9

5хЮ8

8x108

Время введения мин

| Метод введения^кол-вЗ!

Таблица 4. в опыте на цыплятах

30-60

30-60

30-30

30-60

30-60

30-60

30-60

| 30-60

30-60

' 30-60

30-60

30-60

30-60

30-60

120 после кормления

I___'

1 4 ~

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально■

вольный

перорально

вольный '

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

перорально

¡зара ___^Ультат _зараявния"

¡женных вируленг-¡'доза Тмеготг ~

|£Г" ;'^аКУЛЬ-

т--

\ 5

10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 9

10 . 10

¡м.к.

I е-.Т>

,5хЮ6

Е-078

5хЮ

Е-078 Е-078

5x10

I

т

перорально

перорально

вьш-;пало ло ,¡гол. гол.•;

~ 9 "Г 10

гибели

Г ~П ~ ~

9 7

9 10

10 10 10 10 10 10 10 10 10

9

6 5

I 3 I

10 30 10

40 50

1 ~ 9 I 2

VI

тт

ю ю ю ю ю ю 10 10 10 , 10 10 10 -10 10 10

10

Контроль

10° ю6 ю7 ю7 ю8 ю8

5x10е

5хЮ8

8хЮа

8x10а

Ю9

Ю9

2x10°

2x10"

5хЮ8 120 после кормления

8хЮ8 -"-

30-60

30-60 30-60 30-60 30-60 30-60

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

вольный

перорально

перорально

10 Б. gallinarшIl

ГО'-10 10 10 10 10 10 10 10 10 10 10

ю • 10 10 >

10 Е-078

10. Э.ваШпагит

Продолжение таблицы 4.

7 ! 8 ¡' 9 Í ю [и

5хЮ7 перорально 8 2 - 20

7 3 30

— 8 2 20

ft it 9 Л 10

.. п — 10 - -

5хЮ7 10 - -

10 - - ■

10 - -

перорально 10 -

— И_ 10 - • -

10 - -

5хЮ7 10 - -

— 10 -

— П— —f1i 10 - -

_ — 7 3 30

—!|— 5 • 5 50

5хЮ6 перорально - 10 100 5хЮ7 ■ - 10 100

5.Пp0JABJ>ACJTB_9,4HJiS. ЛОйДаШХа JLAil^QH'Lла Аышштах

Полученные наш положительные результаты экспериментов по ■ испытании препарата "Антакон" как на лабораторной модели, так и на цыплятах,явились основанием для дальнейших апробаций его непосредственно в производственных условиях.

Препарат "Антакон" из штамма е.coli-15 применяли для профилактики кишечных болезней '-молодняка птиц в птицесовхозе • "Авангард" Павлодарского района Павлодарской области,птицефабрика Шелаболинлиского района Алтайского края, Аватсной птицефабрике Энбекшя.-Казахсного района Алматинской области. В опытах было использоеэно 27500 суточных цыплят, из которых 16350 - получили препарат до первого кормления орально дозированным пое -нием.а 10900 цыплят - вольным поением з литровых банках. В ' контрольной группе было 250 цыплят.

Результаты производственной апробации показали, что использование препарата "Антакон" не только полезно,так как снижается заболеваемость цыплят желудочно-кишечными болезнями,но и значи- '■ тельно улучшается их общее состояние организма,благодаря улуч -'шению аппетита и лучшему усвоению норма. Об этом, з частности, можно; судить по привесам, полученным среди цыплят опытных и контрольных групп (табл. 5).Так, если среда контрольных цыплят средний живой вес в возрасте 30 дней составил 560-580 г, то вес ' цыплят в подопытных группах колеблется в пределах 625-630 г. Причем, наиболее высокие привесы были отмечены среди цыплят, получавших препарат "Антакон" перорально дозированным методом с первого часа жизни. Средний живой вес цыплят в этой группе составил БЗО г, в то время' как жизой зес цыплят, получавших препарат "Антакон" с первого часа яизнн зольным поением, был несколько ниже и составил 625 г.

Таблица 5.

Результаты применения препарата "Антакон" для профилактики кишечных:заболеваний цыплят ..

группы-

Коли

{чество

¡цыплят

Пало голов

%

) Осталось

•f---

j голов

! t

; Средний вес ¡1-го цыплен-¡ка в 30-ти

дневном воз-

трасте, г

1-ая под- •■

опытная 16350 1145 7,0 15205 93,0 630

контрольная' 150 . 45 30,0' 106 . 70,0 560

2-ая под- ' ' ' : - ■

опытная 10900 981 9,0 9919 - 91,0 625

контрольная 100 31 . 31,0 69 69,0 " 580

Обобщая полученные данные можно прийти к заключению о це

лесообразности широкого применения в птицеводстве препарата

"Антакон"...

Применение препарата "Антакон"' обеспечивает 91-93 % сох ... »

ранность цыплят при ЗО-ЗГ % гибели цыплят контрольных групп.

Кроме того, за 30 дней выращивания.дополнительный прирос живой массы ^аздого'цыпленка на фоне применения препарата сос тавляет от 30 до 50 г,что свидетельствует о наличии в препара те комплекса физиологически активных веществ, оказывающих по ■ лоеттельнкй эффект на организм.

Препарат "Ангокон" обладает высокой адгезивной способное тью.легко прибивается в кишечнике цыплят за счет продуцируемы, физиологически активных веществ.оказывает бактериостатический эффект по отношению к патогенным и условно патогенным бактери ям 'и способствует саморегуляции нормальной микрофлоры кишечни: Применение препарата "Антакон" 'групповым методом с питье вой водой не требует больших затрат труда и средств.

В отличие от лекарственных препаратов он лишен любого вредного воздействия на организм и не оказывает отрицательное

- 23 -

влияния на качество продукции.

Резюмируя изложенное, мы считаем, что с целью создания устойчивости цыплят кишечному заболеванию специфическая биопрофилактика их препаратом "Антакон" из ;»шкроцйногек;;ого штамма Е-15 • является весьма перспективной.

ВЫВОДЫ

1. Проведенные клинико-эдизоотологичесние, серологические л бактериологические исследования доказали,что причиной гибели цыплят в хозяйствах Алматинской области являются кишечные(35,7.2), сальмонзллезнне(29,3 %), синегнойные палочки (3,1.2) ,а также протеи(4,7»).встречающиеся в виде кона- и смешанных инфекций.

2. Культуры кишечной,сальмонеллезной.сннегнойной палочки и протеи.выделенные от павших цыплят,обладали типичными морфологическими .биохимическими.антигенными свойствами »присущими этим видам.

3. Изученные патогенные кишечные и сальмонеллезныз палочки были высокочувствительны ампициллину, левомацетлну, неомицину, мономицину и слабочувствительны стрептомицину, эритромицину и полимиксину.

4. Исследования по изучению биологических и антагониста -ческих свойств адгезивного штаммаз.coli Е-15 показали, что

-штамм Е-15 через 24 часа подавляет рост вирулентных культур

Proteus vulgaris ,Pseudomonas fluorecsns, Salmonella tychimurium, S. enteritidis, S.gallixiarum ■ et Escherichia coli .

5. Установлено, что при введении в организм цыплят адгезивного штамма Е-15 и зараженных вирулентными культурами кишечной палочки и сальмонелл все подопытные цыплята остались живыми, при 100 % падежа контрольных животных.

5. Результаты производственной апробации показали, что применение препарата "Антаион из штамма Е-15 значительно

улучшает общее состояние организма птиц, обеспечивает 91-93 % сохранность цыплят при 30-51 » гибели их в контрольных группах. В отличие от лекарственных препаратов'"Антакон" лишен любого вредного воздействия на организм и не- оказывает отрицательного влияния на4качество продукции.

'-.•"• - ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ '

1. Разработана временная инструкция по изготовлению я контролю препарата "Антакон" для профилактики кишечных заболеваний молодняка сельскохозяйственных.животных и птиц, утвержденная Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства и продовольствия Казахской ССР от 10.07.91 г.

2. Разрешение Главного управления ветеринарии ЫСХ на применение препарата "Антакон" в хозяйствах Республики Казахстан от

I июля 19Э2 г. за Н 20-1-6/27.. .

3. Результаты исследований рекомендованы для использования в учебном процессе со студентами ветеринарного факультета.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Г.Кхунси Сисенг. Этиология кишечных болезней у молодняка птиц//Вестник с/х науки Казахстана.-1Э94,& 7.-С.110-113.

2. Кхунся Сисенг, А.Я.Макбузов. Этиологическая структура кишечных заболеваний молодняка птиц//д1атериалы I Меядународн. научко-практич.конф.по аграрным проблемам.-Алматы.-1ЭЭЗ.

3. Кхунси Сисенг Биологическая характеристика бактерий, выделенных от павших цыплят//Труды АоЗИ.-1Э9Л.-С.29-34.

4. К хулен Сисенг, А.^.шанбузов.Изучение антагонистических свойств кишечной палочки на лабораторной моделц//Вестник с/х науки Казахстана.19Э4, й 9.-С.110-116.

о. Временная инструкция по изготовлению и контролю препара-

та"Антакон" для профилактики кишечных заболеваний ¡¿олодняка с/х животных и птиц.Утвержден ГУ8 г.йХ КазССР от 10.07.91 г.

КХУНСИ СИСЕНГ

Тауын; балапаныныц imeK ауруларыныц алдын алуга "Антакон" препаратын к; о л дану Ветеринария гылымдарыныц кандидаты Мамандыгы 16.00.03 ТШРЫМЬ:

Бул жумыста тауык; балапаныныц хшек ауруларын зерттеу барысын-да auibiHFaH нэтижелер келтчрхлген, аурулардын таралуы жэне олардыц • алдын алуга цолданылатын эсерлх биопрепараттар усынылган.

' Тауык; фабрикаларындагы балапандардыц шыгыны нег131нен зшери-хиялар /35,^/ мен сальмонеллалардыц /29 себеб1нен болатыны анкк;тал ган.

Бел1п алшган эшерихиялар мен сальмонеллалар зардалты штамм-дарыныц ампицилинге, левомицитинге", неомицинге.мономицинге ете сезхмтал екендхг1 аньщталган.

Адгезивт1 E.coÜ Е-15 шташшныц биологиялыд жэне антагонис-тхк цасиетж .in vitro жене in vivo жолдарымен зерттеу нэтижесхнде оси штаммныч 6ipn;aTap зардапты микроорганизм ecÍHfliлерхне царсы бактериоциногендхк белсенд1л1к цасиетх барлыгы дэлелденген.

Микроциногенд1 Е-15 штаммынан дайындалган "Антакон" препараты тауыц балапандарын /93/У колибактериоз .яэне сальионеллез ау-руларынан са^тайды.

. - -cfi-

KHOUNSY SYSEHG "Using "AUTAKOM"prenar»tion for Dronhyl»ctic of intestine sickness in young chicks " The degree of candidate ( Ph . D.) Speciality -16.00.03.

J>UMNARY_

Results of study of .the cause (etiology) of intestine infection in young chicks, its snread and the use of bionre-paration in prevention of the.infection .

The cause of the death of chicken in poultry farm is Esch< richia( 35,and Salmonella (¿9,8^ ) .

Secretion of Escherichia and Salmonella pathogens are highly senstive to Ampicillin, Levomycitin, Neomycin and Monomycin .

Results of the study (in vitro and in vivo ) of binchemis-

in antagonist, property,showed that Escherichia coli -15 was

kent,because has got bacteriocinogen active with rela-

•' 9* . - * tion to virulent culture .

The use of "AETAKON" preparation has sicrocinogens E-I5 which hel^s chicken to survive alr.ost 93/« froia colib&cterios and Salnonallosis dissases.