Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.04) на тему:Фармако-токсикологические исследования препаратов хиноксалина и их применение в ветеринарии

На правах рукописи

ШУКЛИН ВЛАДИМИР ПЕТРОВИЧ

Фармако-токсикологические исследования препаратов хинокеалипа и их применение в ветеринарии

16.00.04 - Ветеринарная фармакология с токсикологией

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук

Краснодар - 2006 г.

Работа выполнена в отделе химиотерапевтических препаратов Федерального государственного учреждения «Всероссийский государственна Центр качества и стандартизации лекарственных средств для животных и кормов» (ФГУ «ВГНКИ»), ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт, ГНУ ВНИИ патологии, фармакологии и терапии.

Научный консультант

Официальные оппоненты

доктор ветеринарных наук, профессор, заслуженный деятель науки РФ Антипов В.А

доктор ветеринарных наук, Шипицын А.Г

доктор ветеринарных наук, профессор Герунова Л.К.

доктор ветеринарных наук, профессор Шабунин C.B.

Ведущая организация Казанская академия ветеринарной

медицины им. Н.Э. Баумана

Защита состоится 2006 г в часов

на заседании диссертационного совета Д 220.038.07 в Кубанском государственном аграрном университете (Россия, 350044, г. Краснодар, ул. Калинина, 13)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Кубанского государственного аграрного университета.

Автореферат разослан ц^/^»__2006 г

Ученый секретарь диссертационного совр д.в.н.

.Родин

1. ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Высокая заболеваемость и гибель сельскохозяйственных животных, особенно, молодняка, в значительной степени препятствует росту отечественного производства животноводческой продукции. Поэтому улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка более эффективных методов и средств профилактики и лечения широко распространенных заболеваний является актуальной задачей для ветеринарной науки и практики (Андреев Е.В., Драгомир А.Б., 1978; Андросов В.А., 1978; Бородай Г.П., 1981; Данилевский В.М., 1974; 1985; Дегтярева И.Н. и др., 1981).

Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии и профилактике, позволяющей значительно снизить наносимый ими экономический ущерб (Дымко Е.Ф., 1992; Me Kercher S., 1978). Для этого используют различные фармакологические средства, наибольшее распространение из которых получили антибиотики, сульфаниламиды, нитрофураны (Амирбеков М.А. и др., 1985; Гладенко И.И. и др., 1977, Головизнин Ю.В., 1980; Жамантаев А и др., 1980; Качанова С.П., 1979; Ковалев В.Ф. и др., 1988; Arotison A.Z., 1980; Brumfitt M., 1979; Con-zelman Y.M., 1980; Larson Z., 1980). Однако их эффективность в последнее время значительно снизалась из-за проявления множественной резистентности (Агроник С.Е., 1976, Антипенко В.П., Антипов A.B., 1978; Виолин Б.В., 1988; Дымко Е.Н, 1992; Anderson R.C. et al 1975; Benveniste R„ Davis J., 1973; Chang W.U., Carter G.R., 1975).

Все это требует поиска и разработки новых химиотерапевтических средств с разным механизмом антимикробного действия (Навашин С.М., Фомина И.П., 1982). Интенсивный поиск таких препаратов ведется среди соединений хиноксалина, цефалоспоринов, триазола, бензимидазола и других (Потопальскнй А.И., Лозюк Л.В., Миролюбова А.Н. и др., 1991; Яковлев C.B., 1999, Падейская E.H., 1972, 1974; Падейская E.H., Яковлев В.Н, 1995).

Наиболее перспективными оказались производные хиноксалина (Падейская E.H. и др., 1966) и в частности, препараты диоксидин и хиноксидин (Падейская E.H., 1972, 1974; Козырев Ю.А., Антипов В.А., Шахов А.К., 1979; Локес П.И., 1989; Мартынова A.B., 1998).

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследования является разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии новых химиотерапевтических производных хиноксалина и препаратов на их основе для лечения и профилактики ряда заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы. Для реализации этой цели были поставлены задачи:

1. Разработать состав и изучить биологическую активность диоксидина, эридина, диоксицина, метрагеиа в отношении основных возбудителей отдельных заболеваний животных и птицы;

2. Определить наиболее специфические токсикологические и фармакологические свойства диоксидина, эридина, диоксицина и метрагена;

3. Разработать показания к применению этих препаратов, установить их лечебно -профилактическую эффективность при отдельных заболеваниях животных и птицы.

4. Разработать нормативную документацию на их контроль и применение в целях внедрения в практику ветеринарии и животноводства.

Научная новизна работы. В результате проведенных исследований для ветеринарии и животноводства предложены четыре новых препарата диоксидин, эридин, диокси-цин, метраген, являющихся представителями производных хиноксалина, изучены их биологическая активность. В соответствии с требованиями Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ РФ, определены их фармацевтические свойства, основные фар-мако-токсикологические характеристики.

Свидетельством научной новизны являются: Авторское свидетельство СССР № 1424170, патент РФ № 1424170, Авторское свидетельство СССР № 1801254, патент РФ № 1801254, Авторское свидетельство СССР № 1251536, патент РФ № 2192850.

Практическая значимость работы. Для практической ветеринарии предложены новые оригинальные препараты диоксидин, эридин, диоксицин, метраген, обладающие высокой лечебной и профилактической эффективностью при ряде заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы.

Определены показания к применению этих препаратов животным различных видов, установлены оптимальные дозы, кратность и интервалы между введениями, противо-показшшя и сроки возможного использования животноводческой продукции после применения препаратов.

Практическая ценность препаратов подтверждается положительными результатами широтах производственных испытаний и наставлениями по применению в ветеринарии, одобренными Ветфармсоветом (Ветфармбнокомиссией) и утвержденными Департаментом ветеринарии в установленном порядке.

Внедрение результатов исследований. Производство разработанных препаратов организовано АО «Ветпрспараты», НПФ «Фармакон», ЗАО НПП «Агрофарм», ЗАО «Мосагроген», агрофирмой Армавирской биофабрики.

В условиях животноводческих и птицеводческих хозяйств России обеспечено их применение в качестве высокоэффективных лечебно-профилактических средств.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены:

На заседании Ветфармсовета (Ветфармбиокомиссии) Департамента ветеринарии МСХ РФ, (1987, 1989, 1990, 1991, 1993, 1997,2001,2003, 2005).

На научпо-практических конференциях: Ленинград (1989) Москва (1989), Смоленск (1992, 1993), Витебск (1996), Краснодар (1996).

На заседаниях Ученого Совета ВГ'НКИ по итогам научно-исследовательской работы за.1985-2002 гг.

На производственных совещаниях ветеринарных специалистов многих регионов России (Воронежская, Рязанская, Смоленская области, Краснодарский край и др.) в 19952005 г.

Основные положения, выносимые на защиту:

- результаты исследований биологической активности производных хиноксалина: в частности, диоксидипа, эридина, диоксицина, метрагена;

- результаты их фармако-токсикологических исследований;

- результаты разработки показаний к применению и изучение лечебно - профилактической эффективности при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных;

- практические предложения по применению и внедрению диоксидина, эридина, диоксицина, метрагена в ветеринарии;

- методы контроля качества разработанных препаратов.

Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 33 научных статьях в различных изданиях с изложением основных положений и выводов по изученным вопросам, в том числе 15 в ведущих научных журналах и изданиях.

Объем II структура диссертации. Диссертация изложена на 288 страницах машинописного текста, включает 106 таблиц, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, собственных исследований, выводов, предложений для практики, списка литературы, который включает 194 отечественных и 172 иностранных источников.

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Диссертационная работа, включая экспериментальные исследования, была выполнена в 1983 - 2005 гг во ВГНКИ ветпрепаратов, Краснодарском НИВИ, ВНИИ патологии, фармакологии и терапии (г. Воронеж). Клинические эксперименты и производственные испытания проводили в животноводческих хозяйствах Воронежской, Московской, Смоленской, Ростовской областей, Краснодарского края, республик Украииыи Латвииидр.

При постановке экспериментов были использованы физиологические, фармакологические, токсикологические, клинические, микробиологические, морфологические и другие методы исследований.

Биологическую активность препаратов изучали путем выяснения их антимикробных, антигельминтных, антимикотических, акарицидных и овоцидных свойств.

Антимикробную активность препаратов in vitro изучали на 15 музейных и полевых штаммах микроорганизмов методами серийных разведений в бульоне Хоттингера, МПБ и МПА, для чего делали разные концентратом препарата в питательных средах по Г.Н. Першину (1974). Определение антимикробной активности проводилось также с использованием общепринятого метода диффузии в агар по В.Ф.Ковалеву с соавт. (1988).

Антимикробную активность in vivo оценивали по Керберу и Першину (ЕД5о) ПРИ экспериментальной кокковой и эшерихиозной септицемии белых мышей при интраназальном и внутрибрюшинном заражении летальными дозами микроорганизма.

Антимикотическое действие препаратов определяли в отношении грибов, возбудителей дерматомикозов, антигельминтное - возбудителя аскаридоза кур и дождевых червей, акарициднос - возбудителя псороптоза кроликов, и овоцидное - на яйца Псороптес куникули. Эти исследования проводили методом контакта с токсицированными поверхностями, обработанными препаратом.

Токсические свойства препаратов изучали путем определения параметров острой, и субхронической токсичности, изучение общего влияния на организм, мсстно-раздражающего действия, а также ветерипарио-санитарной оценкой продуктов убоя и патоморфологическимя исследованиями органов и тканей, животных после назначения им препаратов.

Изучение острой токсичности препаратов проводили на белых мышах, белых крысах и поросятах, телятах при их назначении в разных дозах однократно внутрь и подкожно. Среднюю смертельную дозу определяли для лабораторных животных по Беренсу, Керберу и Литчфилду и Уилкоксону (1963), а для телят по Дейхману и Ле Бланку (1943).

Хроническую токсичность препаратов изучали на белых мышах, белых крысах, телятах и поросятах при многократном введении внутрь в оптимальных терапевтических и трех-, пяти- и десятикратно превышающих рекомендуемые лечебные дозы в течение 21 дня. При ежедневных наблюдениях учитывали клинические показатели: общее состояние, аппетит, показатели дыхания, пульса и температуры тела, функции органов пищеварения и мочеотделения, динамику прироста массы тела. Во время проведения экспериментов у животных исследовали кровь общепринятыми методами, в которой определяли основные морфо-иммуно-биохимические показатели: содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, общего белка, липидов, мочевины, глюкозы, лактата и пирувата, белковых фракций в сыворотке крови, НЭЖК, ß-липопротеидов, холестерина, креатинина, мочевины, глюкозы, ACT, АЛТ, холи-нэстеразы, щелочной фосфатазы. Наблюдение за клиническим состоянием живот-пых вели на протяжении 31 суток от начала опыта. Определение массы тела у всех животных проводили до начала введения препарата и на 7, 14,21 и 31 сутки.

На 21 сутки от начала введения препарата на 10 мышах и крысах проводили определение детоксицирующей функции печени с помощью гексеналовой пробы. В этот же срок на других 10 мышах проводили пробу с плаванием, а на 10 крысах бромсульфалеи-повую пробу с целью оценки экскреторной функции печени.

В те же сроки у 10 крыс из каждой группы определяли относительную массу внутренних органов - печени, почек, легких, сердца, селезенки и надпочечников.

Изучение мутагенной активности препарата проводили на 160 белых крысах линии "Вистар" массой 120-130 г по методике Japa (1944). Кумулятивные свойства изучали по методу, описанному A.B. Гольдбергом и В.Е. Баумштейном (1967) и по мето-

ду Першика А.Г. (1974), позволяющим количественно определить как степень кумуляции, так и обратимость токсического действия.

Фармакологические исследования проводили по методикам и в объеме требований, предъявляемых Ветеринарным фармакологическим советом.

Обоснование состава препаратов в опытах in vitro. Определение минимальных ингибирующих концентраций эритромицина, гентамицина, левомицетина и диок-сидина (МИК) проводили на мясо-пептонном агаре (МПА) методом серийных разведений по Ковалеву В.Ф. с соавт (1988). Культуры являлись музейными штаммами ВГНКИ. По видимой задержке роста микроорганизмов определяли минимальную инги-бирующую концентрацию (МИК) отдельных компонентов, а также их сочетаний.

Определение влияния препаратов на формирование устойчивости проводили при последовательных пассажах на МПА, содержащем увеличивающиеся количества АДВ. Увеличение МИК препарата в отношении стафилококков и стрептококков в 10-15 раз считали уровнем сформировавшейся резистентности к антибиотику.

Обоснование состава препаратов в опытах in vivo. Определение эффективных терапевтических доз компонентов в различных соотношениях проводили при экспериментальной пневмонии белых мышей, вызванной стрептококком, стафилококком, кишечной палочкой.

Заражение животных проводили смывом суточных агаровых культур возбудителей интраназально под легкими эфирным наркозом или внутрибрюппгано. Разведения культур делали на физиологическом растворе. Концентрацию микробных тел определяли по стандарту мутности

Лечение мышей начинали при стрептококковой инфекции через 2 часа, а при ко-либациллярной через. 1 - 6 часов. Препараты вводили 1 раз в сутки через зонд внутрижелу-дочно в 0,5 мл 1 % раствора крахмала. Животные контрольных групп лечения не получали. О терапевтической эффективности препаратов судили по количеству выживших мышей после лечения и числу мышей - дней жизни в каждой группе через 10 суток после инфицирования. На основании полученных результатов были подобраны оптимальные комбинации антибактериальных компонентов.

Фармакокинетику эридина изучали в двух опытах. В первом использовали 5 телят. Препарат вводили однократно перорально в дозе 200 мг/кг массы тела. Через 0,5,1,2, 3,4, 6, 12, 15, 21 II 24 часа после введения препарата у животных брали кровь и в сыворотке крови проводили определение содержания АДВ. Второй опыт проводили на 24 телятах. Препарат животным вводили однократно в дозе 200 мг/кг, затем через 1, 3, б, 9, 12, 18 и 24 часа после введения препарата производили убой животных. Концентрацию эритромицина и диоксидипа определяли в скелетной и сердечной мышцах, легких, печени, почках, сыворотке крови и моче. В каждый срок исследовали образцы органов, тканей и биологических жидкостей от трех телят.

Определение сроков выведения диоксидина проводили на 12 телятах, которым в течение 10 суток вводили эридин в дозе 400 мг/кг. Через 48, 72 и 96 ч после последнего введения препарата убивали по три теленка и определяли содержание диоксидина в скелетной и сердечной мышцах, печени, почках, легких, сыворотке крови и моче. Содержание антибиотиков в биосубстратах определяли микробиологическим методом, чувствительность метода 0,002 мг / г /мл. В качестве тест-культур использовали Micrococcus luteus АТСС 9341.

Определение содержания диоксидина в биосубстратах проводили также газохро-матографическим методом, с помощью хроматографа «Цвет».

Фармакологические изучение вели, исследуя основные показатели белкового, ли-пидного и углеводного обменов, морфологический состав крови и рост массы тела животных.

Отработку показаний к применению, терапевтической дозы и кратности назначения препарата проводили на телятах и поросятах больных колибактериозом или гастроэнтеритами

и бронхопневмонией. При этом определяли лечебную и профилактическую эффективность. Кроме того, изучено лечебно-профилактическое действие препаратов при гинекологических заболеваниях коров.

Эффективность изучали в сравнении с наиболее широко применяемыми антибактериальными средствами при этих показаниях (позитивный контроль) и отрицательным контролем. Заключение о положительном действии препарата делали на основании результатов комплексных клинических, биохимических, гематологических и иммунологических методов исследований.

При определении терапевтической эффективности препаратов сравнения учитывали сохранность животных, длительность курса лечения (выздоровевшими считали животных, у которых клиническое выздоровление наступило к 10 суткам от начала применения препаратов), кратность применения препаратов.

В производственных условиях терапевтическую эффективность препаратов изучали в хозяйствах Воронежской, Московской. Смоленской и Рязанской областей РСФСР и Латвийской ССР при бронхопневмониях телят и поросят, желудочно-кишечных, акушерско-гинекологических заболеваниях коров.

Для стандартизации и контроля качества препаратов, изучения их стабильности при хранении были разработаны соответствующие методы исследования.

Для проверки препаратов на токсичность были предложены методы биологической проверки при пероральном введении препаратов белым мышам массой 18-22 г в установленных опытным путем тест-дозах; определения массовой доли эритромицина и левоми-цетина - спектрофотометрические методы их определения в лекарственных формах с предварительной экстракцией специально подобранными растворителями; определения содержания гентамицина - микробиологический метод.

Изучение стабильности препаратов проводили, как «методом искусственного старения», так и при хранении при естественных условиях.

Статистическую обработку полученных результатов проводили методами вариационной статистики, используя руководство Малеты Ю.С. и Тарасова В.В.(1982). Экспериментальный материал обрабатывали методом вариационной статистики (ЭВМ «Электроника» - ДЗ-28), а также с помощью программы «Microsoft» с определением средних арифметических, их стандартных отклонений и доверительных границ. Разницу между двумя величинами считали достоверной при уровне вероятности р<0,05.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Изучение биологических свойств диокецшша

Антимикробную активность дноксидина (1% раствора) изучали методом серийных разведении в отношении: кишечной палочки, сальмонелл, стафилококка, микрококка, пас-терелл, аэрококка, бордетелл, стрептококка и синегнойной палочки. В каждую группу входили как музейные, так и свежевыделенные (полевые) штаммы от животных, больных желудочно-кишечными и респираторными заболеваниями. Результаты проведенных экспериментов по определению чувствительности различных микроорганизмов к препарату диоксидин представлены в таблице 1, из которой видно, что все исследованные штаммы микроорганизмов проявляли к диоксидину высокую чувствительность. Однако относительно более высокая активность проявлялась в отношении грамотрицательных бактерий. Наиболее чувствительной к препарату оказалась пастерелла. При этом минимальная бак-териостатическая концентрация препарата к ней составила 0,39-3,12 мкг/мл, а минимальная бактерицидная - 0,78-6,25 мкг/мл. Примерно аналогичную чувствительность к препарату проявил аэрококкус вириданс, которая составила в обоих случаях 1,56-3,12 мкг/мл. Несколько меньшее антимикробное действие препарат проявил в отношении синегнойной палочки, которое составило; бактериостатическос в концентрации 3,12-12,5 мкг/мл и бактерицидное 6,25-25,0 мкг/мл. Salmonella typhymurium u Micrococcus lysodecticus по своей чувствительности к препарату оказались примерно равными. МИК в отношении обоих микроорганизмов составила 12,5-25,0 мкг/мл.

Различные серотипы кишечной палочки были примерно аналогично чувствительными к диоксидину. При этом их чувствительность проявлялась в концентрациях от 12,5 доЮОмкг/мл.

Антимикробное действие диоксидина

Таблица 1

Наименование штаммов МИК (мкг/мл)

Escherichia coli - 0119 50-100

Escherichia coli - 072 100

Escherichia coli - 04 12, 5-50

Escherichia coli 200

Salmonella cholerae suis 100

Salmonella dublin 25-50

Salmonella typhymurium 6,25-25

Staphylococcus aureus 400-500

Micrococcus lysodeicticus 12,5-25

Pasteurella multocida ЛП-2 "Аврора" 0,39-0,78

Pasteurella multocida "Воробьевка" 0,78-3,12

Pseudomonas aeruginosa 6,25-100

Aerococcus viridans . 1,56-3,12

Streptococcus pneumoniae ЛП-4 "Аврора" 100-400

Bordetella bronchiseptica 25-100

Proteus vulgaris 1000

Klebsiella pneumoniae 50

Наиболее устойчивыми были грамположитсльные микроорганизмы, it, в частности, рода Staphylococcus u Streptococcus. Эта чувствительность варьировала в пределах от 100 до 400 мкг/мл.

Антибактериальная активность комплексных препаратов на основе диоксидина представлена в таблице 2.

Таблица 2

Антимикробное действие препаратов

Микроорганизмы Минимальная ингибирующая концентрация (мкг/мл)

Диоксидина Эридина Диоксицина Метрагена

E. coli 50 - 200 12,5-100 25-50 50-100

Salm, cholerae suis 50 - 200 25-50 12,5-25 25

Salm, dublin 25-50 25-50 12,5-25 25

Salm, typhymurium 12,5-25 25 12,5 25

St. aureus 62.5-500 2,5-5,0 25-100 12,5

Str. pneumoniae 100-400 5,0-10,0 50-100 12,5

Past, multocida 0,39-3,13 12,5 12,5 25

Ps. aeruginosa 3,12-12,5 50 12,5 50

Miere, lysodeicticus 12,5-25 25 25 12,5

Aerococcus viridans 15,6-3,12 12,5 - -

Bord, bronchiseptica 25 25 - -

Proteus vulgaris 25-200 12,5-25 25 25

Klebsiella pneumoniae 25-50 25 25 25

Различные комбинации диоксидина с эритромицином, левомицетином и гентами-ципом существенно изменяли его антимикробную активность, как в отношении грампо-ложительных, так и в отношении грамотрицательных микроорганизмов.

Химиотерапевтическую активность диоксидина изучали на модели эшерихиозной инфекции, которую вызывали внутрибрюшшшым введением белым мышам смертельной дозы суточной культуры эшерихий в дозе 2 млн. микробных тел. Штамм обладал всеми признаками патогенной активности. Диоксидин вводили в различных дозах перорально и внутрибрюшинно за 1 час до заражения, а также через 1 и 3 часа после заражения.

В результате установлено, что диоксидин проявлял терапевтическое действие при экспериментальной эшерихиозной инфекции. При этом эффективная доза препарата зависела от способа введения. Так, при внутрибрюшинном назначении на 15 день опыта отмечали 100% выживаемость белых мышей от дозы 10 мг/кг. ЕД50 составила 2,5 мг/кг. При введении диоксидина внутрь параметры ЕДя), была выше и достигала 51,5 мг/кг. Диоксидин, введенный через час после заражения животных предохранял белых мышей от гибели в дозе 10 мг/кг, ЕД50 при этом равнялось 4,1 мг/кг. Введение диоксидина через 3 часа после заражения увеличивало ЕД50 по сравнению с его введением через 1 час, и составила 7,0 мг/кг.

Биологическую активность диоксидина, изучали также путем выяснения его антн-микотического действия в отношении грибов дерматофитов: Trichofiton gypseum u Micro-sporum ¡anosum, а также Aspergillus fumigatus, Stachybotris alternans, Candida albicans, Penicillum commune, Fusarium monilliforme. Фунгицидную активность диоксидина определяли по методу В.В. Титова.

Установлено, что диоксидин проявляет слабую фунгиостатическую активность в отношении грибов дерматофитов, которая составила на Т. gypseum и М. lanosum в дозе 10 мг/мл. По отношению Stachybotris alternans препарат проявлял губительное действие в концентрации 4 мг/мл, а по влиянию на фузарин, аспергилл и пеницилл это действие проявлялось в концентрации 0,5 мг/мл. На кандид диоксидин не действовал.

Установлено, что 1 % раствор диоксидина не обладает овоцидпым и акарицидным действием в отношении псороптеса, поскольку гибель клешей и их яиц не отмечали. Выведение личинок при воздействии диоксидином происходило аналогично контролю. Диоксидин не оказал и ларвицидного действия на личинок мух. По сравнению с контролем выведение личинок существенно не изменялось. Через 2-3 суток они окукливались.

3.2. Токсические свойства диоксидина

Острая токсичность. Изучение острой токсичности диоксидина проводили на разных видах животных при разных способах введения.

При определении параметров острой токсичности использовали метод Беренса (М.Л. Беленький, 1963).

Результаты опытов по изучению острой токсичности диоксидина для различных видов животных представлены в таблице 3.

Таблица 3

Токсикологические параметры диоксидина (мг/кг)_

Вид животного Путь введения МПД ЛД50 ЛДюо

Белые мыши перорально 800 1200 1400

Белые крысы перорально 800 1031,5 1400

Белые крысы подкожно 600 815,7 1000

Поросята перорально 1200 1350 1700

Изучение хронической токсичности диоксидина проводили на беспородных белых крысах и поросятах 2-х месячного возраста, разделенных на три равные группы. Первая опытная группа получала препарат в дозе 10 мг/кг (терапевтическая доза), а вторая опытная - 30 мг/кг массы тела, что соответствует трехкратной ориентировочной терапевтической дозе. Третья группа была контрольной и получала основной рацион. Препараты

вводили с кормом в течение 21 дня ежедневно однократно. За всеми животными в течение всего срока назначения препаратов проводили наблюдение, учитывая клиническое состояние, аппетит, сохранность, динамику роста массы тела. После окончания эксперимента животных убивали декапитацией, брали пробы крови, в которой проводили морфологические и биохим!гческие исследования.

Проведено взвешивание их внутренних органов (легкие, селезенка, сердце, печень, почки, желудок).

В результате проведенных опытов было установлено, что диоксидин в терапевтической и 3-х кратной лечебной дозе не оказывал выраженного токсического действия на организм животных.

При предубойном наружном осмотре и при патологоапатомическом вскрытии животных не выявлено видимых изменений покровных тканей и внутренних органов. Результаты биохимических исследований крови крыс представлены в таблице 4.

Содержание общего белка в сыворотке крови крыс второй группы при назначении препарата соответствовало контрольному показателю: 78,2±1,7 и 78,4+1,7 г/л, в концентрации лнпидов, мочевины и глюкозы существенных отличий не регистрировали.

Таблица 4

Показатели крови крыс в опыте по изучению хронической токсичности _диоксидина * _

Показатели Контроль Диоксидин, 10мг/кг Диоксидин. 30 мг/кг

Общий белок, г/л 78,4 ± 1,7 78,2+ 1,8 78,2 ± 1,7

Общие липиды, г/л 6,6 ± 1,4 6,2 + 0,6 6,1 ±0,3

Мочевина, мг% 45,46 + 7,3 43.0 ± 7,8 40,9 + 6,6

Гемоглобин, г/л 114,0 ±6,0 116,1 ± 10,2 113,1 ±11,3

Цветной показатель 1,39 + 0,05* 1,4 ±0,18' 1,37 + 0,12

Глюкоза, ммоль/л 8,1 ± 1,0 7,9 ± 1,6 8,2+1,9

Лактат, ммоль/л 2,2 ± 0,2 2,4 + 0,2 2,3 ± 0,3

Пируват, ммоль/л 90,8 + 22,7 90,8 + 4,5 85,5 ± 10,2

Эритроциты, 10"/л 14,0 ± 1,5 14,1 ±0,8 16,8 ± 1,3*

Лейкоциты, 10у/л 10,3 ±0,4 11,6 ± 0,5 9,9 ±1,1

* - разница достоверна, р<0,05

В опытах на свиньях установлено, что диоксидин в указанных дозах не оказывал ярко выраженного токсического действия на организм животных. Не отмечалось отклонений в общем состоянии, поведении, аппетит был выражен. Поросята хорошо росли и развивались. Через 21 день от начала эксперимента прирост массы тела составил в среднем 3,4; 2,6 и 2,3 кг соответственно в первой, второй и контрольной группах.

Результаты биохимических исследований крови поросят представлены в таблице 5.

Таблица 5

Показатели крови свиней при изучении хронической токсичности диоксидина

Показатели Контроль Диоксидин, 10 мг/кг Диоксидин 30 мг/кг

1 2 3 4

Общий белок, г/л 58,7± 1,51 62.52 ± 0,78 60,75+1,54

Общие липиды, мг% 5,72 ± 0,65 5,97 ± 1,57 5,86+0,45

Мочевина, мг% 7,27 ± 1,39 6.86 ± 0,4 7,03+0,86

Неорганический фосфор, мг% 2,29 ± 0,50 2,33+0,14 2,31+0,19

Кальций, ммоль/л 2,61 ±0,10 2,59 + 0,18 2,14+0,14'

Магний, ммоль/л 0,85 ± 0,65 0,92 ± 0,94 0,87+0,54

Гемоглобин, г/л 113,2 ± 1,30 105,2 ± 5,24 108,9+6,4

и

Продолжение таблицы 5

I 2 3 4

Эритроциты, 10 "/л 8,78 ± 0,98 8,96 ±0,91 9,12+0,76

Лейкоциты, 10ч/л 8,42 ± 0,27 8,6 ± 0,44 9,01 ±0,53

Юные нейтрофилы, % 0,4 ±0,1 0,8 ±0,1 0,5+0,1

Палочкоядерные нейтрофилы, % 4,60 ± 1,24 4,0 ± 1,0 4,3+0,7

Сегмет-оядерные нейтрофилы, % 16,80+ 1,13 22,20 ± 1,72 19,7+1,7

Эозинофилы, % 6,80 ± 1,52 4.20 ± 1,27 4,7+1,3

Моноциты, % 1,8 ±0,35 1,81 ± 1,21 1,75+0,56

Лимфоциты, % 71.2 + 0,60 68,4 ±12,3 69,05+6,15

Как видно из данных таблицы 5 диоксидин, длительно назначаемый в ориентировочной терапевтической и трехкратной терапевтических дозах, не оказал выраженного токсического действия на организм животных. Однако длительное применение в дозе 30 мг/кг привело к некоторому снижению содержания в сыворотке крови кальция.

Следовательно, диоксидин, длительно назначаемый в терапевтической и трехкратной терапевтических дозах, не оказывает выраженного токсического действия на организм животных.

Изучение местного действия диоксидина проводили методом накожных аппликаций и конъюнктивальной пробой, а кожно-резорбтивное - методом погружения хвоста в раствор диоксидина (Ю.И. Кундиев, 1970). В экспериментах использовали 27 кроликов породы шиншилла и 6 белых крыс.

Для исследования конъюнктивальной пробы использовали стерильный йодный раствор диоксидина 1% концентрации. О реакции конъюнктивы судили через 30 минут, 1, 3,6, 12 и 24 часа по изменению состояния слизистой, а также слезотечению.

При введении диоксидина в конъюнктивальньгй мешок наблюдали кратковременное покраснение, связанное со слабым раздражающим действием, которое исчезало в течение часа.

В результате проведенных исследований на крысах было установлено, что после накожного применения диоксидина как в форме порошка, так и растворов, видимого раздражающего действия не наблюдалось.

Влияние диоксидина на функцию печени. Влияние диоксидина на протеин-, фермента- и пигментообразовательные функции печени исследовали на крысах и поросятах при изучении хронической токсичности. Для этого у них брали кровь в конце опыта.

Результаты исследований у крыс показали отрицательную реакцию на билирубин, а также отсутствие нарушения структуры белков и наличия в сыворотке грубодисперсных глобулинов. Количественное содержание билирубина, грубодисперсных белков в сыворотке крови и, ферментов AJIT и ACT у опытных и контрольных поросят существенно не различалось. Так, количество грубодисперсных белков в опыте составило: 1,63+0,7, а в контроле - 1,8±0,4г%, билирубина соответственно - 0,27±0,01 и 0,27±0,04г%, АЛТ -37,7±1,3 и 37,6±0,8, ACT - 34,2+0,5 и 34,3 ±0,1 ед./мл.

Следовательно, диоксидин при длительном назначении негативно не влияет на наиболее специфические функции печени.

Влияние диоксидина на пищеварение. Исследования проводили на поросятах при изучении хронической токсичности. О действии диоксидина на функции пищеварительного канала поросят судили по физико-химическим свойствам фекалий. Последние собирали на 7, 14 и 21 дни эксперимента и проводили органолептическую оценку, обращая внимание на консистенцию, форму, цвет, запах, присутствие посторонних примесей. Кроме этого изучали физико-химические свойства каловых масс: рН - лакмусовой бумагой, наличие крови - бензидиновой пробой, желчных пигментов - пробой Тарквея, жира и крахмала - микроскопически общепринятыми методами.

В опыте по изучению влияния диоксидина на пищеварение было установлено, что диоксидин в оптимальных и трехкратных терапевтических дозах при длительном назначении не оказывал выраженного отрицательного действия на процессы пищеварения.

Влияние диоксидина на мочеотделение. Исследования проводили на животных, находившихся в опыте по изучению хронической токсичности. Изучение физико-химических свойств мочи проводили трехкратно с семидневным интервалом в течение 21 дня. При этом определяли цвет, консистенцию, запах (органолептически), прозрачность, удельный вес урометром Фогеля. Наличие или отсутствие в моче белков определяли при помощи пробы Роча, кипячением с азотной и сульфосалициловой кислотой, углеводов -пробой Гайнеса, кровяных и желчных пигментов - бензидиновой пробой Тарквея соответственно.

Установлено, что у поросят опытных и контрольных групп акты мочеиспускания были произвольными, регулярными, безболезненными, в естественной позе. Моча была светло-желтого цвета, прозрачная, без осадка, водянистой консистенции, острого специфического запаха. Удельный вес ее колебался в пределах 1,017-1,019 ед. На 7 и 14 дни исследования, белка, альбумин, углеводов, кровяных и желчных пигментов не было обнаружено.

Таким образом, длительное назначение оптимальных и трехкратных терапевтических доз диоксидина не влияет отрицательно на функции органов мочеотделения и в частности на функции почек.

Ветеринарно-санитарная оценка мяса поросят, получавших диоксидин. При наружном осмотре туш животных из контрольной и опытной групп внешним признакам они не отличались между собой. Все туши имели хорошо видимую корочку подсыхания. Мышечная ткань на разрезе имела светло-коричневый цвет. При осмотре внутренних органов и покровных тканей убитых поросят видимых изменений не отмечалось. Запах мяса на поверхности и в глубине (при разрезе) был специфическим для свиного мяса, а консистенция его упругая. Об этом свидетельствовало быстрое исчезновение ямки после надавливания. На разрезе мясо было плотное, мелкозернистое. Шпик и жир имели специфический запах, признаков осаливания их не наблюдали. Консистенция жира была мягкой, эластичной, а шпика - плотной, упругой. Сухожилия были блестящими, белыми, упругими.

Дегустационная оценка мяса показала, >гго диоксидин не изменял его вкусовых свойств. Так, при определении запах паров бульона (после его закипания), во всех пробах был ароматным, приятным. Посторонних запахов не выявляли. Бульон, получаемый при варке мяса, был прозрачным, со скоплением жировых капель разных размеров на поверхности. Вареное мясо имело светло-серый цвет, было сочным, нежным, со специфическим приятным запахом и вкусом. Посторонних запахов и привкуса при этом также не обнаруживали.

Концентрация водородных ионов в бульоне мяса от животных контрольной группы достигала 6,0±0,3, опытной - 6,0±0,1. Реакция на лероксидазу и с сернокислой медью в бульоне были положительными, что характеризовало мясо как доброкачественное.

Следовательно, диоксидин ие изменял качество мяса поросят, получавших препарат длительное время.

Патоморфологические исследования при назначении диоксидина. При наружном осмотре и при вскрытии убитых животных видимых изменений покровных тканей, а также внутренних органов не обнаружено не было. Гистологическими исследованиями морфологических изменений выявить также не удалось. Так, в печени поросят опытной и контрольной групп сохранена и хорошо просматривалась дольчатая структура органа. Дольки печени имели на срезе форму шестиугольника. Между ними располагалась рыхлая соединительная ткань. Гепатоциты, формирующие дольки печени, располагались неправильными рядами. Они содержали хорошо очерченные округлые ядра и глыбчатую цитоплазму.

Почки у всех поросят имели бобовидную форму. Капсула почти не изменена. Па разрезе хорошо заметны корковый и мозговой слои. Клубочки коркового слоя представлены извилистыми петлями капилляров, окруженных капсулой Боумена - Шумлянского, гиперемии клубочков и расширения капсулы не выявляли. У некоторых животных 2 группы отмечали слабые очаговые инъецирования капилляров.

Селезенка окружена соединительнотканной капсулой. Форма ее и размеры не изменены. На разрезе внутренняя часть органа представлена белой и красной пульпой, а пограничная зона между ними хорошо просматривается. Видна также лимфоидная ткань, переходящая в фолликулы и фолликулярная артерия.

Структура слизистой оболочки и в целом стенки кишечника существенно не изменены. Она представлена обычными слоями, которые не утолщены, не деформированы, сосудистая реакция отсутствовала. Слизистая оболочка кишечника образована пальцевидными ворсинками, покрытыми энтероцитами. Они полностью покрывали воронки от крипт до верхушек, десквамации их не было заметно. У отдельных поросят второй группы отмечали слабое катаральное воспаление слизистой желудка и тощей кишки.

Гистологическими исследованиями структуры сердца и мезентериального лимфоузла гистологических изменений не выявили.

Таким образом, проведенными исследованиями установлено, что диоксидин, применяемый поросятам в трехкратной терапевтической дозе в течение 21 дня структурных изменений внутренних органов не вызывал.

3.3. Терапевтическая и профилактическая эффективность диоксидина.

Исследования проводились в ряде хозяйств Воронежской области. Для определения оптимальной профилактической дозы диоксидина было сформировано пять опытных и одна контрольная группы по 10 голов из 30-ти суточных телят в каждой. Телята 1-5 групп в течение пяти суток получали диоксидин в дозах 2,5; 5; 10; 15; 20 мг/кг массы. Контрольная группа диоксидин не получала. Им проводили курс профилактики, по принятой в хозяйстве схеме. В течение 20 суток за телятами всех групп вели ежедневное клиническое наблюдение с учетом заболеваемости, падежа и прироста массы тела (таблица 6)

Таблица 6

Дозы диок- Количество Заболело, Пало, голов Масса тела, Масса тела,

сидина, мг/кг голов в голов кг (фон) кг (через 20

группе дней)

2,5 10 4 1 44 57,4

5 10 2 - 42 58,2

10 10 1 - 43 59,4

15 10 3 1 44 59,2

20 ю 5 1 43 58,8

контроль 10 8 2 44 58,4

Из приведенной таблицы видно, что наиболее оптимальной дозой диоксидина для профилактики желудочно-кишечных и респираторных заболеваний телят является 10-15 мг/кг массы.

Следующим этапом работы являлось определение оптимального цикла применения диоксидина в дозе 10 мг/кг массы. Было сформировано пять опытных и одна контрольная группы по 10-30-ти суточных телят в каждой. Телятам опытных пяти групп задавали влутрь диоксидин в дозе 10 мг/кг в течение 1, 3, 5, 7, 9 и 11 суток соответственно. Телята контрольной группы диоксидин не получали, а им проводили курс профилактики, принятой в хозяйстве. В течение 20 суток за телятами всех групп вели ежедневное клиническое наблюдение, с учетом заболеваемости, падежа и массы тела.

В результате проведенных исследований было установлено, что наиболее оптимальным сроком дачи диоксидина в дозе 10 мг/кг массы с целью профилактики желудочно-кишечных заболеваний является 5-7 суток.

Для определения лечебной эффективности диоксидина при гастроэнтеритах телятам с момента появления первых признаков заболевания давали внутрь препарат в дозах 5,10, 15 и 20 мг/кг массы тела в течение 5-7 суток. Было сформировано восемь опытных и одна контрольная группы. В течение 30 суток за телятами всех групп вели ежедневное клиническое наблюдение с учетом заболеваемости, падежа и массы тела.

Проведенные исследования показали, что оптимальной лечебной дозой диоксидина для телят является 10-15 мг/кг, которую задают в течение 5-7 суток.

Производственные испытания диоксидина на 100 телятах 30-ти суточного возраста показали, что дача его два раза в дозе 10 мг/кг в течение 7 суток с 10-дневным перерывам на протяжении двух месяцев откорма снижала заболеваемость желудочно-кишечиыми и респираторными заболеваниями, повышала сохранность до 99%, среднюю массу одной головы на 2,3-3,5 кг.

Для определения лечебной эффективности диоксидина при колибактериозе телятам с момента появления первых признаков заболевания давали внутрь препарат в дозах 5, 10, 15 и 20 мг/кг массы в течение 5-7 суток. Было сформировано восемь опытных и одна контрольная группы по 10 голов в каждой. В течение 30 суток за телятами всех групп вели ежедневное клиническое наблюдение, с учетом заболеваемости, падежа и массы тела.

Проведенные исследования показали, что наиболее выраженным лечебным эффектом при колибактериозе обладает доза диоксидина 15 мг/кг массы, которую задают телятам в течение 5-7 суток с момента появления первых признаков заболевания (терапевтическая эффективность-94,5%).

Лечебно-профилактическое действие при диареях поросят. В первой серии опытов определяли лечебную эффективность диоксидина при гастроэнтеритах поросят-отъемышей. Для этого было сформировано три группы животных. Поросятам первой группы (10 голов) препарат вводили внутримышечно в дозе 0,2 мл на кг массы тела однократно в день, в течение 5 дней подряд. Животные второй опытной группы получали 1% раствор диоксидина внутрь в дозе 1,5 мл па кг массы тела. Контрольные животные препарат пе получали.

За животными в течение всего периода назначения препарата и 7 дней спустя вели наблюдения, учитывая клиническое состояние поросят, течение болезни, выздоровление и сохранность. В начале и конце эксперимента у опытных и контрольных животных брали кровь для проведения морфологических и биохимических исследований. В крови определяли количество эритроцитов, содержание в них гемоглобина, лейкоцитов, гематокритное число и цветной показатель, общее содержание белка, мочевины, липидов, глюкозы, лак-тата, пирувата, АЛТ и АСТ.

Установлено, что в первой группе исчезновение клинических признаков диареи наблюдалось на второй день лечения. У животных улучшалось общее состояние, восстанавливался аппетит и функции желудочно-кишечного тракта. К 4-у дню лечения все животные были клинически здоровы. Лечебная эффективность достигала 100%. У животных второй группы улучшение общего состояния, наступало на 3-4 день лечения, а полное выздоровление наблюдалось к 6 дню лечения. К 7 дню с момента начала опыта в этой группе выздоровело 8 животных, лечебная эффективность диоксидина составила 80%.

Гематологическими исследованиями показано, что в картине красной и белой крови в конце эксперимента у опытных и контрольных животных существенных изменений не отмечали. Общее содержание белков в сыворотке крови при назначении диоксидина было выше контроля, причем в первой опытной группе это повышение было достоверным. В жировом обмене отличий не наблюдалось. Содержание мочевины в группе, где препарат применялся внутрь, было достоверно ниже, чем в контроле 4,5±0,1 против 5,9±0,1 ммоль/л. У животных получавших препарат в дозе 5 мг/кг понижалось на 1,3

ммоль/л содержание глюкозы и на 2,3 ммоль/л лактата. Но это снижение было статистически недостоверным. Помимо этого, в крови животных обеих опытных групп достоверно падал уровень пирувата. В контрольной группе этот показатель достигал 376,5±49,1 ммоль/л, в первой опытной - 180,4±2,6 ммоль/л, во второй - 161,214,47 ммоль/л. Ферментные комплексы аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы существенно не изменялись.

Следовательно, влияние диоксидина на кровь сводилось к некоторому снижению уровня глюкозы и уровня пирувата, повышению общего белка.

Профилактическую эффективность диоксидина изучали на поросятах 2-3 месячного возраста. В опытной группе (68 голов) препарат применяли внутрь в дозе из расчета 15 мг/кг на прием, однократно в день, ежедневно в течение 5 дней подряд. Контрольным животным (67 голов) препарат не назначали. При этом учитывали клиническое состояние, заболеваемость, сохранность в течение 15 дней с начала дачи препарата.

В результате проведенных экспериментов установлено, что легкая форма расстройства желудочно-кишечного тракта отмечалась у отдельных (трех) опытных животных на 4 день и продолжалась до 7 дня без признаков нарастания и дальнейшего охвата поголовья. На 8 день применения препарата эти признаки исчезли и рецидивов больше не наблюдали. У животных также не отмечали побочных явлений при назначении диоксидина. Гибели поросят в опытной группе не было. В контрольной группе на 4-6 день наблюдения у 5 животных (12%) отмечались клинические признаки гастроэнтерита с последующим их нарастанием. На 10-й и 15-й день от гастроэнтерита пало 2 поросенка. Следовательно, профилактическая эффективность препарата составляла 95%.

Таким образом, диоксидин является эффективным средством при лечении и профилактике гастроэнтерита поросят.

Лечебная и профилактическая эффективность диоксидина при диарейиых заболеваниях изучалась также в колхозе "Победа" Каширского района Воронежской области на поросятах в двух сериях опытов.

В первой серии определили лечебную эффективность диоксидина при гастроэнтеритах поросят-отъемышей. Для этого было сформировано три группы животных. Поросятам первой группы (10 голов) препарат вводили внутрь в дозе 10 мг/кг массы тела однократно в день в течение 7 дней подряд. Животные второй опытной группы получали диоксидин групповым способом вместе с комбикормом в дозе 5 мг/кг массы тела. Контрольные животные содержались на основном рационе и препарат не получали. За животными в течение всего периода назначения препарата и 7 дней спустя вели наблюдения, учитывая клиническое состояние поросят, течение болезни, выздоровления и сохранность. В начале и конце эксперимента у опытных и контрольных животных была взята кровь для проведения морфологических и биохимических исследований. В крови определяли количество эритроцитов, содержание в них гемоглобина, лейкоцитов, общее содержание белка, мочевины, глюкозы, белковых фракций сыворотки крови.

Установлено, что в первой группе исчезновение клинических признаков диареи наблюдалось на второй день лечения. У животных улучшалось общее состояние, восстанавливался аппетит и функции желудочно-кишечного тракта. К 4-му дшо лечения все животные были клинически здоровы. Лечебная эффективность составила 100%. Во второй группы улучшение общего состояния наступало на 3-4 день лечения, а полное выздоровление наблюдалось к 6 дню лечения. К 7 дню с момента начала опыта в этой группе выздоровело 8 животных, лечебная эффективность составила 80%.

Гематологическими исследованиями показано, что в картине красной и белой крови в конце эксперимента у опытных и контрольных животных существенных изменений не отмечали. Так, содержание эритроцитов в первой опытной группе было 5,5±0,1; во второй - 5,03+0,2; в контрольной - 4,25±0,2 1012 г/л. Лейкоциты претерпевали незначительные изменения. Уровень гемоглобина в контроле был достоверно ниже на 13,0%. Общее содержание белков в сыворотке крови при назначении диоксидина было выше контроля

на 14%, причем в первой опытной группе его повышение было достоверным: 8,48±0,3 г/л, тогда как в контроле - 7,3±0,23.

Профилактическую эффективность диоксидина изучали во второй серии опытов на поросятах 2-3 месячного возраста. С этой целью было сформировано 2 группы животных: опытная и контрольная. В опытной группе (68 голов) препарат применяли внутрь из расчета 5 мг/кг на прием, однократно в день, ежедневно в течение 10 дней подряд. Контрольным животным препарат не назначали. При этом учитывали общее клиническое состояние, заболеваемость, сохранность в течение 15 дней с начала дачи препарата.

Установлено, что легкая форма расстройства желудочно-кишечного тракта отмечалась у отдельных (трех) опытных животных на 4 день профилактики и продолжалась до 7 дня без признаков нарастания и дальнейшего охвата поголовья. На 8 день применения препарата эти признаки исчезли и рецидивов не наблюдали на протяжении всего периода наблюдения. Гибели поросят в опытной группе не было. В контрольной группе на 4-6 день наблюдения у 5 животных отмечались клинические признаки гастроэнтерита с последующим их нарастанием. На 10-й и 15 день от гастроэнтерита пало 2 поросенка. Следовательно, профилактическая эффективность препарата составила 95%.

Был проведен опыт, в котором определяли лечебное действие диоксидина при дизентерии поросят 2-4- месячного возраста при внутримышечном и внутреннем применении препарата в дозе 20 и 15 мг/кг массы двукратно в день в течение 5 дней подряд. Для этого было сформировано 3 группы животных по 5 голов в каждой. В 1 группе препарат применяли сочетало внутрь и парэнтерально. Во 2 и 3 группах диоксидин в дозе 20 и 15 мг/кг применяли соответственно внутримышечно и внутрь однократно в день в течение 5 дней подряд.

Установлено, что ослабление клинических признаков дизентерии у животных 1 группы отмечали на 2-3 день лечеиия. У них улучшалось общее состояние, восстанавливался аппетит, отмечалась тенденция к восстановлению функции желудочно-кишечного тракта. К 5 дню лечения все животные были клинически здоровы. У животных 2 и 3 групп улучшение общего состояния наступало на 3 день лечения, а полное выздоровление отмечалось к 5 дню лечения. Рецидивов заболевания не регистрировали.

Взвешивание показало, что среднесуточный привес опытных животных превышал контроль на 18-22%.

Таким образом, диоксидин является эффективным средством при лечении и профилактике диспепсии, гастроэнтерита, колибактериоза и дизентерии поросят. Оптимальной терапевтической дозой является 15 мг/кг при двукратном назначении в течение 7-10 дней, оптимальная профилактическая доза составляет 5 мг/кг однократно в день в течение 10 дней.

■ Лечебно-профилактическая эффективность при пневмониях поросят. Первый опыт был проведен в МХП колхоза "Победа" Семилукского района. Для опыта подобрали 28 клинически здоровых поросят 2-4 месячного возраста, которых разделили на 2 группы по 14 голов. Животным 1-й группы ежедневно внутрь в течение 10 дней подряд применяли 1 % раствор диоксидин в дозе 1,5 мл/кг массы тела. Поросята 2-й группы препарат не получали (контроль). За животными вели клиническое наблюдение в течение 1 месяца, учи-тыв&ти заболеваемость, падеж, скорость роста. В течение опыта брали кровь для проведения гематологических, иммунобиохимических и серологических исследований.

При клиническом изучении профилактической эффективности диоксидина установлено, что препарат в 100% случаев предупреждал появление пневмоний, тогда как в контрольной группе пневмониями заболело 4 (28,6%) подсвинка. В опытной группе среднесуточный прирост массы составил 183,0 г, а в контроле -170,0 г.

Диоксидин оказывал благоприятное влияние на показатели крови клинически здоровых животных. Под действием препарата происходило достоверное увеличение содержания гемоглобина на 15-й день опыта с 116,6+3,18 до 120,4±4,17 (Р < 0,02); эритроцитов на 30-й день с 5,46±0,15 до 5,94±0,07 (Р<0,05); ФАЛ с 95,0±0,82 до 96,4±0,38; ФЧ с

10,61 ±0,52 до 12,1 ±0,33 (Р<0,05); ФИ с 11,13+0,97 до 12,55±0,34 (Р<0,05); комплементарной активности с 20,34±0,49 до 24,85±1,25 (Р<0,01). У животных отмечено увеличение содержания альбуминов на 15-й день с 32,32±5,31 до 37,56+3,69 и уменьшение гаммаглобу-лннов с 39,36±3,84 до 36,02±5,38.

В 2 опыте использовали 148 поросят 2-4,5 месячного возраста, больных бронхопневмонией, Из животных было сформировано две группы: опытная (86 голов) и контроль (62 головы). Животные опытной группы получали диоксидин с кормом на протяжении 5 дней, дважды в сутки в дозе 10 мг/кг. Животные второй группы обрабатывались аналогично применяли фармачин. Наблюдения за животными вели на протяжении всего опыта и пяти дней после прекращения дачи препаратов, учитывая клиническое состояние животных, течение болезни, выздоровление и сохранность поросят.

Вторую серию опытов проводили в этом же хозяйстве на поросятах 1,5-2,5 мес. возраста. Для опыта было отобрано 216 больных животных. Из них было сформировано две группы: опытная (112 гол.) и позитивного контроля (104 гол.). Животные первой группы получали диоксидин, второй - фармазин. Препараты задавали с кормом, дважды в день на протяжении 5 дней, в дозе 5 мг/кг живой массы. Наблюдения за животными вели в течение 8 дней, учитывая заболеваемость, сохранность и их падеж.

В результате установлено, что диоксидин, применяемый с кормом обладает определенным лечебным действием на поросят больных бронхопневмонией. Действие препарата начиналось на третий день, о чем свидетельствует повышение аппетита у животных. К пятому дню опыта отмечалось заметное снижение кашля, он становился влажным, в легких при аускультации у большинства поросят не отмечалось хрипов и не прослушивалось жесткого везикулярного дыхания, температура оставалась в пределах нормы. Повышалась подвижность. Лечебная эффективность в этой группе составила 65,1%.

Терапевтическая эффективность диоксидина при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите у коров. Клинические испытания диоксидина при остром послеродовом эндометрите у коров проводили в хозяйствах Краснодарского края и Воронежской области.

В первом опыте больным коровам (72) после удаления содержимого матки внутри-маточно вводили 1% раствор диоксидина в дозе 100 мл через каждые 24-48 ч. до клинического выздоровления. Животным также назначали средства патогенетической терапии и маточные препараты. Учитывали кратность введения препарата, срок лечения, количество излеченных животных с восстановлением воспроизводительной функции.

Анализ результатов опыта показал, что диоксидин обладает высокой терапевтической эффективностью - от 88 до 96,6 процентов, в среднем 90,9%, кратность введения составляет от 5 до 6,3 раза, или в среднем 5,8; срок лечения коров колебался в пределах от 9,0 до 10,1 дня, в среднем - 9,4 дня.

В следующем опыте определяли терапевтическую эффективность препарата в сравнительном аспекте на 65 коровах с острым послеродовым катарально-шойным эндометритом, по принципу аналогов разделенных на 4 группы. Коровам первой (опытной) группы (20 животных) диоксидин вводили внутриматочно в дозе 100 мл, один раз в день через каждые 24-48 часов до клинического выздоровления; коровам второй (контрольной) группы (15 животных) внутриматочно назначали 5%-ную эмульсию активированного стрептоцида, в третьей (контрольной) группе (15 животных) использовали аналогично препарат лефуран в дозах по 100 мл до клинического выздоровления. Коровам четвертой (контрольной) группы (15 животных) внутриматочно вводили 5%-ную эмульсию фуразо-лидона на подсолнечном масле в дозе 100 мл. Во всех группах местную этиотропную терапию сочетали с применением патогенетической терапии и маточных средств.

Основным критерием оценки эффективности лечения являлось восстановление воспроизводительной способности у леченых коров, процент выздоровевших животных.

Курс лечения при применении диоксидина был па 1,2-9,2 дня короче, с меньшей кратностью введения препарата, а терапевтическая эффективность была на 3,3-16,6% вы-

ше, чем у других препаратов. Установлено, что у коров первой, второй и третьей групп, имевших повышенные показатели температуры тела, пульса и дыхания на второй день лечения эти показатели нормализовались, а в четвертой это произошло к концу третьего дня лечения. Прекращение маточных выделений у животных первой группы (в 90% случаев) отмечали на 10-й день, в третьей группе (у 86%) - на 12-13-й, во второй группе (у 86%) -на 13-14-й, а в четвертой группе (у 73% коров) - на 19-20-й день после начала лечения.

При ректальном исследовании восстановление ригидности матки у коров первой и третей групп наблюдали на 5-6-й день, второй группы - на 7-8-Й день, а четвертой - 10-12-й день после начала лечения. К этому времени матка находилась в тазовой полости, была эластично упругой и отвечала на массаж сокращениями.

В процессе наблюдений не отмечено отрицательного побочного влияния диокси-дина на леченных больных животных. Подтверждением этого является результаты гематологических и иммунологических исследований животных.

Установлено, что после лечения, в сравнении с исходным уровнем, отмечается: снижение СОЭ с 0,60±0,01 до 0,55±0,02 мм/ч (на 8,3%), увеличение содержания в крови гемоглобина с 92,5+1,5 до 115,4+2,4 г/л (на 22,9%), эритроцитов с 5,0±0,01 до 6,1±0,02 1012/л (на 22%), снижение количества лейкоцитов с 11,9+2.1 до 8,5±2,2 109/л (на 28,5%) при Р<0,05; в лейкограмме отмечено увеличение количества эозинофилов с 3,0 до 4,0%, лимфоцитов с 52,5 до 64%, моноцитов с 2 до 5%, но уменьшение числа палочкоядерных с 12 до 6% и сегмептоядерных нейтрофилов с 29 до 28%; ГЦП возрос с 0,79+0,10 до 1,6±0,05 (Р<0,05). У коров контрольных групп в то же время отмечено снижение СОЭ с 0,59±0,02 до 0,54+0,01 мм/ч (на 8,5%), увеличение количества гемоглобина в крови с 91,5±2,5 до 110,3±3,1 г/л (на 20,5%) и эритроцитов с 4,8±0,02 до 5,7±0,01 10|2/л (на 18,8%), снижение количества лейкоцитов с 11,9±2,1 до 9,0+1,3 109/л (на 25%) при Р<0,05; в лейкограмме - снижение количества, юных нейтрофилов, палочкоядерных - с 13 до 8%, сегментоядерных - с 28 до 22,5%, но увеличение количества эозинофилов - с 2,5 до 3%, лимфоцитов - с 51,5 до 61,5%, моноцитов с 2 до 5%, при возрастании ГЦП с 0,8±0,15 до 1,4±0,03 (Р<0,05).

Иммунологическими исследованиями коров опытной группы выявлено увеличение уровня показателей общей неспецифической реактивности организма: фагоцитарной активности лейкоцитов крови - с 45,4+2,1 до 71,5+1,2% (на 26,1%), фагоцитарного числа - с 1,3+0,06 до 5,0±0,1, бактерицидное™ крови - с 52,0+2,5 до 75,5±2,5% (на 23,5%) при Р<0,05. За этот же период у коров контрольных групп отмечено увеличение фагоцитарной активности лейкоцитов - с 44,5+2,4 до 65,2±2,3%, (на 46,5%), фагоцитарного числа - с 1,1 ±0,03 до 3,9±0,05 (в 3,5 раза), бактерицидности крови - с 50,0+3,1 до 60,0±2,5% (на 20,0%).

При проведении широкого производственного опыта по испытанию терапевтической эффективности диоксидина при остром послеродовом гнойно-катаральном эндометрите коров на базе хозяйств ряде регионов было подвергнуто лечению 6932 коровы. В контрольной группе (5500 коров) применяли 5%-ную эмульсию активированного стрептоцида или лефуран. Наряду с местной этиотропной терапией в обеих группах применяли средства патогенетической терапии (тканевый препарат по В.П. Филатову из селезенки), маточные средства (0,5%-ный раствор прозерина) и витаминный препарат (тривитамин) согласно инструкциям по их применению. Результаты клинического эксперимента представлены в таблице 7.

Препарат диоксидин зарекомендовал себя эффективным средством при лечении и профилактике эндометритов у коров.

Таблица 7

Результаты широкого производственного опыта по определению терапевтической эффективности диоксидина при эндометритах коров

Показатели Опыт (диоксидин) Контроль (лефуран, стрептоцид)

1 2 3

Количество леченных животных 6932 5500

Расход препарата на одно животное, мл 610 950

Кратность введения препарата, раз 6,1 8,1

Длительность лечения, дни 11,1 16,0

Количество и % коров, у которых исчезли клинически выраженные признаки эндометрита 6447/93,0 4521/82,2

Срок от начала лечения до оплодотворения, Дни 57,5 66,8

Продолжительность бесплодия, дни 41,0 50,3

Индекс осеменения 2,0 2,7

Излечено коров (%) с восстановлением плодовитости 6189/89,3 4069/74,0

Из них оплодотворились: после 1 -го осеменения после 2-3-го осеменения 2915/47,0 3274/53,0 1705/41,9 2364/58,1

Лечебная эффективность диоксидина при мастите коров. Было проведено испытание 1% водного раствора диоксидина при остром серозном и катаральном маститах. В опыте использовали 76 коров больных маститом. Препарат в дозе 10 мл вводили в больную четверть вымени через сосковый канал после предварительного сдаивания молока с интервалом 12 часов в течение 2-3 дней. В результате был достигнут 100% лечебный эффект, что свидетельствует о хорошем действие препарата при этих показаниях.

Также было проведено изучение терапевтического действия диоксидина при лечении лактирующих коров, больных хроническим катаральным маститом.

Перед началом лечения из больных четвертей вымени сдаивали молоко, кожу вымени и сосков обмывали теплой водой, соски обрабатывали теплой водой и этиловым спиртом. Препарат вводили в течение трех дней через каждые 24 ч в цистерну вымени больных коров через сосковый канал с помощью стерильных молочного катетера и шприца.

Коровам первой опытной группы (7 гол.) вводили 1% водный раствор диоксидина в дозе 10 мл, второй опытной группы (7 гол.) в дозе 15 мл. В течение всего периода лечения и в течение 10 дней после него за животными вели постоянное наблюдение, обращая особое внимание на состояние молочной железы. Результаты лечения оценивали по количеству и проценту вылеченных животных и четвертей вымени через 5 и 10 дней от начала лечения.

После трехкратного применения препаратов через 5 дней от начала лечения в первой опытной 1руппе выздоровело - 2 коровы (25,6%), во второй - 6 (85,7%). В третьей, контрольной группе выздоровления не регистрировали. Через 10 дней от начала лечения в первой опытной группе выздоровело 3 коровы (42,9%), во второй - 7 (100%), в третьей - 1 (90%). У трех коров первой опытной группы при отсутствии роста микробов в пробах молока отмечены сомнительная реакция с 2%-ным мастидином и положительная проба отстаивания. Из 7 коров второй опытной группы были вылечены все животные (100%). Однако, у одной из леченых коров отмечена гипогалактия одной четверти вымени.

Из 10 животных контрольной группы выздоровела 1 больная корова. (90%). У всех коров этой группы установлены положительная реакция с 2%-ным мастидином, а при бактериологическом исследовании проб молока - рост агалактийного стрептококка.

Таким образом, установлена оптимальная терапевтическая доза диоксидина для лечения мастита лактирующих коров, составляющая 10-15 см3 1% раствора на одно интра-пистернальное введение.

3.4. Разработка состава, изучите фармако-токсикологических свойств и эффективности эрнднна

Определение минимальных ингибирующих концентраций эритромицина и диоксидина (МИК) проводили на мясо-пептонном агаре (МПА) методом серийных разведений. Агар в чашке делили на несколько секторов, каждый из которых засевали с помощью бактериологической петли одним из испытуемых штаммов микроорганизмов: Е. coli 1308 сероваров 026, Е. coli 320 серо-варов 078, Streptococcus pneumoniae штамм 102 серогруппы «С», Staphilococcus aureus штамм 1. Через 18-20 часов по видимой задержке роста микроорганизмов определяли МИК, а также различных сочетаний этих препаратов.

Определение влияния препаратов на формирование устойчивости при последовательных пассажах на МПА, содержащем увеличивающиеся количества антибиотика (от 0,05 мкг/мл до 10,0 мкг/мл) проводили со штаммами Staph, aureus №1 и Str. pneumoniae №102. Материалом для каждого последующего пассажа служила культура, давшая рост на среде, содержавшей наибольшее количество антибиотика. В качестве контроля использовали пассажи микроорганизмов на тех же питательных средах с возрастающим количеством антибиотика, но без диоксидина. Увеличение МИК препарата в отношении стафилококков и стрептококков в 10-15 раз считали уровнем сформировавшейся резистентности к антибиотику.

В результате проведенных исследований было установлено, что для штамма E.coli 1308 серовара 026 с уровнем резистентности к эритромицину и диоксидину 200 мкг/мл, совместное применение антибиотика и диоксидина позволило уменьшить МИК эритромицина до 2-3 мкг/мл (в 50-100 раз), а для диоксидина - до 50-100 мкг/мл (2-4 раза).

Аналогичный результат был отмечен в опытах с E.coli 320 серовара 078: исходный уровень чувствительности к диоксидину - 100 мкг/мл, а к эритромицину - более 200 мкг/мл. МИК эритромицина уменьшилась до 2-5 мкг/мл (в 30-50 раз), а диоксидина до 2040 мкг/мл (в 5-10 раз).

В результате проведенных исследований было установлено, что МИК эритромицина в отношении штамма St.aureus штамм 1 была концентрация 0,75 мкг/мл, а для диоксидина 150 мкг/мл. При совместном применении этих препаратов МИК для эритромицина снижалась до 0,01-0,05 мкг/мл (в 10-20 раз), а для диоксидина до 60-80 мкг/мл (в 2-3 раза).

В отношении штамма Str.pneumoniae МИК эритромицина составляла 0,1 мкг/мл, а диоксидина 240 мкг/мл. Совместное применение антибиотика с диоксидином позволило уменьшить МИК эритромицина до 0,005-0,01 мкг/мл, (10-50 раз), а для диоксидина до 6080 мкг/мл (в 3-4 раза).

Резистентность микроорганизмов при пассировании их на средах с эритромицином возрастала быстро и достигла уровня 10,0 и 1,75 мкг/мл соответственно, через 4-5 пассажей. При внесении в питательную среду с эритромицином диоксидина через 10 последовательных пассажей чувствительность к антибиотику практически не изменялась и была у Staph, aureus № 1 и Str.pneumoniae Xa 102 1,5 и 0,2 мкг/мл соответственно. Следовательно, дяокендин замедляет развитие резистентности к эритромицину у изученных штаммов микроорганизмов.

Изучение антибактериального действия сочетаний эритромицина и диоксидина позволило установить наличие взаимоусиливающего действия в отношении стрептококка, стафилококка, эшерихий и замедление образова образования антибиотикорезистентности.

Определение эффективных терапевтических доз эритромицина и диоксидина, а также этих компонентов в различных соотношениях проводили при экспериментальной пневмонии белых мышей, вызванной стрептококком, стафилококком, кишечной палочкой. Заражение животных проводили смывом суточных агаровых культур возбудителей интраназально.

Лечение мышей начинали при стрептококковой инфекции через 2 часа, а при коли-бацнллярной через 6 часов. Препараты вводили 1 раз в сутки через зонд внутрижелудочно в 0,5 мл 1% раствора крахмала. О терапевтической эффективности подобранных доз препаратов судили по количеству выживших мышей после окончания лечения и числу мышей - дней жизни для каждой группы через 10 суток после инфицирования.

При экспериментальной пневмонии белых мышей, вызванной чувствительными к эритромицину штаммами лечение эритромицином одновременно с диоксидином обеспечивало максимальную сохранность животных в пределах 85-100%, что было выше ira 1540% по сравнению с раздельным применением препаратов. Лечение диоксидином одновременно с эритромицином, при экспериментальной пневмонии белых мышей, обеспечивало максимальную сохранность животных в пределах 85-100%, по сравнению с раздельным применением диоксидина (15-70%) и эритромицина (0-85%). Отмечено увеличение суммарной продолжительности жизни мышей на 15-44 дня также в группах, подвергнутых лечению диоксидином совместно с эритромицином.

В опытах in vivo было определено, что эритромицин при совместном применении с диоксидином обладает высокой активностью при экспериментальной пневмонии мышей, эффективен при инфекциях, вызванных эритромицинорезистентными штаммами.

Таким образом, в результате изучения антимикробного действия эритромицина в сочетании с диоксидином в опытах in vivo и in vitro установлено, что эти препараты обладают взаимоусиливаюхцим действием в отношении изученных штаммов микроорганизмов: Str. pneumoniae № 102, Staph, aureus штаммы № 1, E.coli 1308-026 и F,.col i 320-078 замедляют развитие резистентности к эритромицину.

На основании полученных результатов были подобраны комбинации препаратов и предложен комплексный антибактериальный препарат на основе диоксидина, эритромицина и лактозы, получивший название эридин. При изготовления эридина используют: эритромицин по ФС - 10%, диоксидин по ФС - 5%, лактоза по ТУ - до 100%.

Для стандартизации и контроля качества эридина, изучения его стабильности при хранении проводится: определение массовой доли эритромицина при фотоколориметрическом определении оптической плотности окрашенного соединения эритромицина с концентрированной серной кислотой при длине волны 440 нм, а также определение массовой доли диоксидина основанный на спектрофотометрическом определении оптической плотности раствора при длине волны 375 нм с использованием калибровочного графика.

Определение срока годности эридина исследуют в соответствии с «Инструкцией по определению сроков годности лекарственных средств на основе метода «ускоренного старения» при повышенной температуре.

В результате проведенных исследований установлено, что потери активно действующих веществ в эридине при хранении в течение 15 месяцев не превышали 10% (для эритромицина - 5,1% и для диоксидина - 0,5%). При проверке через 18 месяцев количество активно действующих веществ в эридине снижалось более значительно (эритромицин — на 10,4%, диоксидин - на 1,95%), через 24 месяца потеря активности эритромицина превысила 16%.

Полученные результаты позволили рекомендовать в качестве гарантийного срока хранения - 1 год.

Острую токсичность препарата изучали на 214 беспородных белых мышах обоего пола, на 70 беспородных белых крысах и 6 телятах черно-пестрой породы. Препарат вводили однократно через зонд в желудок в 1% растворе крахмала в различных дозах.

Высшие дозы (для мышей свыше 20000 мг/кг, а для крыс свыше 25000 мг/кг) вводили в два приема, по половине дозы с интервалом 2 часа. Наблюдение за клиническим состоянием подопытных животных проводили в течение 14 суток после введения препарата. Павших животных подвергали патологоанатомическому вскрытию.

Изучение острой токсичности эридина показало, что препарат в дозах от 1000 до 20000 мг/кг не вызывает гибели животных. Гибель животных от больших доз наступала через 4 -24 часа, в зависимости от дозы.

Введение телятам эридина в дозах до 8000 мг/кг не вызывало гибели животных. От больших доз эридина гибель животных наступала через 24-36 часов после введения.

По общепринятым параметрам острой токсичности эридин относится к практически нетоксичным соединениям. Согласно ГОСТ 12.1.007 эридин относится к 4 классу опасности (вещества малоопасные).

Хроническую токсичность препарата изучили на беспородных белых мышах, белых крысах обоего пола. Препарат вводили ежедневно в течение 20 суток через зонд в 1% раствор крахмала в дозах 1/5 ЛД50, 1/ ЮЛД50, 1/20 ЛД30 и ориентировочной терапевтической. Наблюдение за клиническим состоянием животных вели на протяжении 31 суток от начала опыта. На 21 сутки на 10 мышах и крысах проводили определение деток-сицирующей функции печени с помощью гексепаловой пробы. В этот же срок на других 10 мышах проводили пробу с плаванием, а на 10 крысах бромсульфалеиновую пробу с целью оценки экскреторной функции печени.

В те же сроки у 10 крыс из каждой группы определяли относительную массу (коэффициенты) внутренних органов - печени, почек, легких, сердца, селезенки и надпочечников.

Наблюдение за клиническим состоянием телят вели в течение 31 суток от начала опыта. До опыта, а также на 11, 21 и 31 сутки после начала введения препарата проводили клиническое и биохимическое исследование крови (количество эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобина, лейкоцитарная формула, содержание глюкозы, молочной, пировиноградной кислот, общего белка и общих липидов и др.).

В эти же сроки оценивали функциональное состояние почек по анализу мочи, в которой с помощью диагностических полосок «Окта» фирмы «Хемапол» определяли содержание белка, углеводов, билирубина, уробилина, кетоновых тел, восстанавливающих веществ, рН, а также по определению в сыворотке крови количества креатннина и мочевины. О функциональном состоянии печени судили по изменению активности гепатоспецифических ферментов.

Установлено, что при изучении хронической токсичности эридипа гибели мышей и крыс во всех группах на протяжении опыта не регистрировали.

У мышей 1 группы, получавших наибольшую дозу препарата, на протяжении всего опыта отмечали наименьший прирост массы тела, что свидетельствует о наличии токсических свойств. Однако через 11 суток после отмены введения препарата показатели прироста массы приближаются к контрольным, что говорит о быстрой обратимости изменений, происходивших в организме белых мышей под воздействием препарата. В тоже время у животных 2-4 групп на 21 и 31 сутки опыта регистрировали наибольшие увеличения массы тела.

Время плавания животных этих групп достоверно не отличалось (р>0,05) от контрольной группы. В тоже время введение препарата в более высокой дозе (1/5 ЛД50) оказало влияние на компенсаторно-приспособительные способности животных. Так на плавания животных 1 группы на 21 день опыта оказалось примерно меньшим, чем у животных других групп. Однако необходимо отметить, что на 31 день опыта достоверных различий, по сравнению с контролем, не наблюдали. Это также свидетельствует о быстрой обратимости негативного влияния большой дозы эридина на организм белых мышей.

У животных, получавших эридин в дозах 1/20 ЛО50 и терапевтической продолжительность медикаментозного сна не отличалась от контрольной (Р>0,05) во все сроки не-

следования. Введение препарата в дозе 1/10 и 1/5 ЛД50 оказало существенное влияние на антитоксическую функцию печени. На 21 день опыта продолжительность медикаментозного сна была в 2,05 и 2,65 раза больше, по сравнению с контролем. На 31 день опыта показатели продолжительности сна не отличались достоверно от контроля, т.е. изменения в антитоксической функции печени были обратимыми.

У животных 1 группы регистрировали статистически достоверное повышение задержки бромсульфалеина (Р<0,05) с одновременным увеличением среднего времени медикаментозного сна. Эти данные свидетельствуют о нарушении экскреторной и детокси-цирующей функции печени. Препарат в доза 1/10, 1/20 ЛД5о и терапевтической не влияет на результаты функциональных проб.

Изучение хронической токсичности эридина в опытах на лабораторных животных показало, что препарат в терапевтической (200 мг/кг), дозе и 1/20 ЛД5о (1350-1425 мг/кг) при двадцатидневном введении не вызывает функциональных изменений в организме белых мышей. Применение эридина в дозе 1/5 (5400-5700) и 1/10 ЛД50 (2700-2850) вызывало временные и обратимые изменения в организме белых мышей и белых крыс.

Показатели клинического состояния телят всех групп в течение всего опыта находились в пределах нормы: Гематологические исследования, проведенные до начала введения препарата свидетельствовали об отсутствии достоверных различий в показателях картины крови у опытных и контрольных телят (Р>0,05). Данные исследований крови телят представлены в таблице 8.

В результате установили, что показатели крови телят всех опытных групп во все сроки исследования находились в пределах нормы и достоверно (Р>0,05) не отличались от контроля. Активность сывороточных аминотрансфераз, а также содержание билирубина, креатинина и мочевины у животных всех опытных групп находились в пределах нормы.

Таблица 8

Показатели крови телят при применении эридпна

Показатели Дозы эридина Контроль

терапевт. 1/5 ЛД,0 1/10 Л Д,0

Глюкоза (ммоль/л) 4,7±0,2 4,6±0,2 4,9±0,3 4.8+0,3

Мочевина (ммоль/л) 6,1 ±0,3 5,9+0,2 6,2±0,3 6,1 ±0,2

Креатинин (мкмоль/л) 9б,4±66,6 94,3±7,2 91,9±8,1 92,6±7,7

Аспартатаминотрансфера-за (ед/мл) 43,6±4,6 41,8±2,9 42,9±4,1 42,7±3,3

Алашшаминотрансфераза (ед/мл) 27,1+2,2 26,7±2,0 28,0±2,5 27,3±2,3

Общий белок (г/л) 65,7+3,3 63,4±4,2 64,3 ±3,9 63,3±3,4

Пировиноградная кислота (мкмоль/л) 83,2±4,3 87,1±6,7 84,7±5,2 82,3±5,1

Молочная к-та (ммоль/л) 1,25±0,03 1,3±0,02 1,2+0,02 1,26±0,02

Общие липиды (г/л) 3,7±0,5 3,9±0,3 3,8±0,4 3,7±0,3

Моча животных всех опытных и контрольной групп во все периоды исследования соответствовала норме: прозрачная, желтого цвета, рП 7,2-8,1, удельный вес 1,016-1,033. Белок, углеводы, билирубин, уробилин, индикан и кетоновые тела не регистрировали. Отсутствие изменений в моче, нормальный уровень креатинина и мочевины в сыворотке крови свидетельствуют о том, что эридин не обладает нефротоксическим действием во и не вызывает других функциональных изменений в организме телят.

При изучении кумулятивных свойств суммарно введенные дозы эридина - 114000 мг/кг для белых мышей и 108000 мг/кг для белых крыс не вызвали гибели животных. Это

не позволило рассчитать коэффициент кумуляции по показателю смертельный эффект, но, учитывая, что полученные дозы составляют 4 ЛД50, то возможный коэффициент кумуляции превышает 4 и эридин относится к веществам со слабо выраженной кумуляцией.

Изучение мутагенной активности препарата проводили на 160 белых крысах линии «Вистар» массой 120-130 г по методике Japa (1944). Животных разделили на 10 групп по 20 голов в каждой. В результате установили, что эридин во всех испытанных дозах и диоксидин в дозе 10 мг/кг не обладают мутагенной активностью. Диоксидин в дозе 135 и 270 мг/кг при даадцатидневном введении обладает мутагенным действием. Установлена возможность снижения мутагенной активности диоксидина при его совместном применении с другими препаратами, обладающими высокими восстановительными свойствами.

Фармакокинетику эридина изучали в двух опытах. В первом использовали 5 телят массой 60-65 кг. Препарат вводили однократно перорально в дозе 200 мг/кг массы тела. Через 0,5, 1, 2, 3, 4, 6, 12, 15, 21 и 24 часа после введения препарата у животных из яремной вены брали кровь и в сыворотке крови проводили определение содержания эритромицина и диоксидина. Второй опыт проводили на 24 телятах. Препарат животным вводили однократно в дозе 200 мг/кг, затем через 1, 3, 6, 9, 12, 18 и 24 часа после введения препарата производили убой по 3 животным. Концентрацию эритромицина и диоксидина определяли в скелетной и сердечной мышцах, легких, печени, почках, сыворотке крови и моче.

Определение сроков выведения диоксидина проводили на 12 телятах, которым в течение 10 суток вводили эридин в дозе 400 мг/кг. Через 48, 72 и 96 ч после последнего введения препарата убивали по три теленка и определяли содержание диоксидина в скелетной и сердечной мышцах, печени, почках, легких, сыворотке крови и моче. Содержание эритромицина в биосубстратах определяли микробиологическим методом диффузии в агар. В качестве тест-культуры использовали Micrococcus luteus АТСС 9341. Далее определение проводили по методике, описанной В.В. Ковалевым с соавторами (1988).

Полученные результаты представлены в таблице 9.

Таблица 9

Содержание эритромицина и диоксидина в сыворотке крови телят после однократного введения эридина (мхг/мл)

Сроки исследования (часы) Эритромицин Диоксидин

0 0 0

0,5 0 0,51 ±0,06

1 0,25±0,02 1,49+0,08

2 0,34±0,03 2,68+0,15

3 0,95±0,09 3,89+0,11

4 1,59±0,163 4,51 ±0,08

6 1,06-ь0,11 2,52±0,05

9 0,80±0,06 1,52+0,08

12 0,57+0,03 0,96+0,06

18 0,40+0,05 0,38±0,04

24 0,22+0,03 0,12+0,05

Терапевтическую эффективность препарата изучали в хозяйствах Московской, Смоленской и Рязанской областей РСФСР и Латвийской ССР при бронхопневмониях телят.

Эффективность препарата изучали в сравнении с наиболее эффективными препаратами аналогичного назначения. Кроме антибактериальных препаратов применяли симптоматические и патогенетические средства. При определении терапевтической эффективности препаратов сравнения учитывали сохранность животных, длительность курса лечения (выздоровевшими считали животных, у которых клиническое выздоровление наступило к 10 суткам от начала применения препаратов), кратность применения препаратов.

Применение эридина при респираторных заболеваниях в дозах 250 и 200 мг/кг массы тела 2 раза в сутки обеспечивало высокую сохранность телят, (соответственно 97,8 и 96,6%), доза 250 мг/кг 1 раз в сутки оказала более слабое действие (94,8%). Выраженный терапевт!гческнй эффект (92,8%) был получен и при лечении телят препаратом в дозе 200 мг/кг 1 раз в сутки, но длительность курса лечения при этом была на 2,0-2,4 дня больше. Разница в эффективности между дозами 200 мг/кг 2 раза в сутки и 250 мг/кг 2 раза в сутки была статистически недостоверна (Р>0,05). Применение эридина позволило добиться полного выздоровления в 6-8 дневный срок 90-95% телят.

Препарат эридин при острых формах бронхопневмонии зарекомендовал себя как эффективное средство. Терапевтическая эффективность эридина в наших опытах была выше, чем у препаратов аналогов - тетраолсандомицина, тетраолеана, тримеразина, авиапена. Сроки выздоровления и кратность применения эридина были меньше по сравнению с препаратами сравнения.

3.5. Разработка состава, изучение фармако-токснкологических свойств и эффективности диокенцина

При проведении микробиологического обоснования состава препарата использовали патогенные и условно-патогенные штаммы, выделенные из секрета вымени, из содержимого матки и музейные штаммы - всего 22 штаммов микробных культур. Было проведено определение чувствительности микроорганизмов к компонентам препарата и их комбинациям (комплексным препаратам) методом диффузии в агар.

Обоснование состава препарата было также проведено на модели экспериментальной септицемии белых мышей, вызванной кокковой микрофлорой.

Наиболее эффективной была комбинация 0,5% диоксидина и 0,5% левомицетина.

Исходя из проведенных исследований, in vitro и in vivo, был предложен следующий состав препарата: диоксидин, лсвомицетин, цветки коготков мелконарезанные, диметил-сульфоксид, вода дистиллированная.

Ветеринарный препарат диоксиции, представляет собой густую жидкость желтого цвета, содержащую диоксидин по ФС 42-1232-0,5%, левомицетин по ГФ Х-0,5% , цветки коготков мелконарезанные по ГФ -2,5%, диметилсульфоксид по ТУ 6-09-3818-30% н дистиллированную воду по ГФ - до 100%.

Для стандартизации и контроля качества диоксицина, а также изучении его стабильности при хранении проводили в соответствии с ТУ исследования по внешнему виду, безвредности, подлинности и массовой доли левомицетина, подлинности и массовой доли диоксидина, массовой доли флавоноидов, микробиологической чистоты, плотности. Срок годности препарата равен 2 годам.

При изучении острой токсичности диоксицина использовали белых беспородных мышей обоего пола массой тела 17,0-23,0 г. Препарат вводили при помощи шприца и иглы однократно, внутрибрюшинно в дозах от 5 до 60 гм3/кг. Регистрацию гибели подопытных мышей проводили на протяжении 7 дней. В результате опыта была определена ЛД.чо, составившая 52,2 (49,7 - 54,8) см3/кг или 57200 (54670-60280) мг/кг.

Проверку раздражающего действия диоксицина проводили на конъюнктиве глаз кроликов и при внутрикожном методе введения кроликам с последующим внутривенным

введением 1% раствора трипанового синего. Окраску зон в местах введения препаратов исследовали через 30, 60 и 180 минут после инъекции красителя. Раздражающий эффект оценивали по интенсивности окрашивания тканей согласно схеме (В.В. Гацура, 1974). Установлено, что после закапываний диоксицина в коныопктивальные мешки глаз не наблюдали гиперемии конъюнктивы, изменений в склере или выделений из глаз подопытных кроликов. При внутрикожном методе введения кроликам установлено, что препарат обладал незначительным раздражающим действием (интенсивность окрашивания тканей колебалась в интервале от очень слабого до слабого).

Для определения субхронической токсичности диоксицина подопытных мышей распределили на две группы: опытную и контрольную - по 18 животных. Мышам опытной группы диоксицин вводили один раз в день внутрибрюшиппо в дозе 5,2 см3/кг массы тела (1/10 от ЛДзо)- Препарат вводили на протяжении 20 дней. Мышам контрольной группы препарат не вводили. На протяжении опыта определяли массу тела животных. На 6 и 11 дни декапитированием умертвили половину животных из каждой группы и отобрали пробы крови. В крови определяли содержание гемоглобина, количество эритроцитов и лейкоцитов, а также определяли функциональное состояние печени.

При определении хронической токсичности с расчетом коэффициента кумуляции использовали 10 белых мышей. Препарат вводили внутрибрюшюшо в дозе 26,1 см3/кг (1/2 от ЛД50) один раз в день в течение 61 суток (до гибели всех подопытных мышей). На протяжении всего опыта проводили наблюдение за состоянием здоровья мышей (визуально) и определяли массу тела. В результате установили, что ЛД50 при многократном введении равняется 896,6 см3/кг, а коэффициент кумуляции равен 17,1. Длительное введение диоксицина не оказало отрицательного влияния на организм животных, показатели крови.

Изучение влияния длительного введения диоксицина на некоторые морфо- и биохимические показатели у коров проводили на животных, больных острым послеродовым эндометритом. Препарат вводили 5 коровам, больным острым послеродовым эндометритом, при помощи шприца Жане и катетера по следующей схеме: 1-2 введения по 200,0 см. а в последующие - по 100,0 см3 на введение внутряматочно с интервалом 72-96 часов. До начала на 10-15 день и через 5-10 дней после окончания лечения брали пробы крови.

Установлено, что колебания в содержании гемоглобина, эритроцитов и лейкоцитов, а также в лейкограмме крови у коров в течение опыта не имели статистической достоверности в сравнении с фоном. Па 10-15 день лечения наблюдалось повышение уровня содержания общего кальция в сыворотке крови (с 8,96 до 9,79 мг%, = 2.86, Р<0,05), а на 5-10 день после окончания лечения повышение уровня содержания магния (t = 3,06, Р<0,05).

Исследования по определению сроков выделения активнодсйствующих веществ с молоком проводили в НОХ "Сигулда" Рижского района Латвии и в лабораториях ЭПЛ "Сигфарм".

Было поставлено 2 опыта, в которых использовали 5 коров бурой латвийской породы, больных острым послеродовым эндометритом. Диоксицин вводили внутриматочно при помощи осемснительной пипетки и шприца Жане в дозе 200 см3 /жив. Перед однократным введением и через каждые 12 часов в течение 3 суток брали пробы молока. Затем этим же коровам вводили диоксицин с интервалом 72-96 часов. После последнего пятого введения с интервалом 12 часов брали пробы молока, в которых определяли количественное содержание диметилсульфоксида, диоксидина и левомицетина.

Показано, что даже при внутриматочном введении препарата компоненты всасываются в кровь, а из нее проникают в молоко и обнаруживаются в нем в значительных концентрациях. Компоненты препарата после пятикратного введения обнаруживаются в молоке в течение 108 часов после окончания применения диоксицина. После одно- и пятикратного внутриматочного введения диоксицина коровам установлено, что пробы молока свободны от содержания диметилсульфоксида через 48 часов после одно-

кратного и через 84 часа после пятикратного введения препарата. Диоксидиц не обнаруживали через 72 и 120 часов соответственно. Антибиотик левомицетин - после одно- и пятикратного внутриматочного введения в молоке обнаруживался в течение 96 часов.

Терапевтическая эффективность диокспцина при эндометритах коров. Изучали на комплексе "Юдажи" НОХ "Сигулда" Рижского района Латвийской ССР. Коров, больных острым послеродовым эндометритом, распределяли на 2 группы. Коров контрольной группы ( 19 голов) лечили препаратом неофур, коров опытной группы ( 11 голов) лечили диоксицином. Внутриматочные палочки неофур перед введением растворяли в теплой воде (5 палочек на 200 мл воды) и вводили в полость матки коров в дозе 200 мл на I животное. Диоксицин вводили впутриматочно в дозе 150,0 см на животное. Введение препаратов проводили 1 раз в день с интервалом 72-96 часов (т.е. 2 раза в неделю) при помощи катетера, соединенного резиновой трубочкой со шприцем Жанэ. В составе комплексной терапии использовали: сразу после родов внутриматочцо инъецировали окситоцин в дозе 50 ЕД и трижды, с интервалом в 10 дней - эстрофан, по 2 мл на инъекцию. Кроме того, всем коровам вводили тривитамин в дозе 10 мл на животное.

Лечебную эффективность препаратов оценивали по количеству выздоровевших животных, кратности введения, интервалу времени от начала до окончания лечения, интервалу времени от окончания лечения до оплодотворения, индексу осеменения, количеству оплодотворенных коров, количеству израсходованного препарата для лечения одного животного.

Второй опыт проводили на молочной ферме "Петерниеки" совхоза "Олайне" рижского района Латвии. Коров, больных острым послеродовым эндометритом, по мерс выявления распределяли на 2 группы. Коров 1 группы (31 животное) лечили препаратом ле-фуран, 2 группы (37 животных) - препаратом диоксицин.

В результате испытаний в 1 опыте установлено, что в контрольной группе коров выздоровело 84,21% животных, и из этого числа было оплодотворено 75% коров. В опытной группе эти показатели были 90,0% и 80,0% соответственно. При практически одинаковом количестве ведений препаратов (6,1 ±0,34 в контрольной и б,2±0,20 в опытной группе) в опытной группе время, затраченное на лечение, было на 3 дня меньше.

Во 2 опыте в контрольной группе животных, леченных препаратом лефуран, выздоровело 83,87% коров. Из этого числа оплодотвореио 84,62% животных. В опытной группе эти показатели были 89,19 и 83,33% соответственно. При одинаковом количестве введений препарата интервал времени от окончания лечения до оплодотворения был ira 5,9 дня меньше чем в опытной группе.

3.6. Разработка состава, изучение фармако-токсикологических споиств и эффективности метрагена

При проведении микробиологического обоснования препарата метраген использовали патогенные и условно-патогенные штаммы, выделенные из секрета вымени, из содержимого матки и музейные штаммы - всего 8 штаммов микробных культур.

Проведено определение чувствительности микроорганизмов к компонентам препарата и их комбинациям методом диффузии в агар. На основании этих исследований был предложен состав: диоксидин-1%, гентамицина сульфат-2%, диметилсульфокснд-30%, вода дистиллированная - до 100. Препарат получил название метраген.

При изготовлении препарата метраген используется следующее сырье: диоксидин по ФС 42-2308 - 1%, гентамицина сульфат по ФС 42-2626 - 2%, диметилсульфоксид по ТУ 6-09-3818 - 30% и вода дистиллированная но ГФХ-до 100%. По физико-химическим свойства препарат должен соответствовать ТУ.

Дальнейшие исследования по изучению токсичности метрагена при однократном подкожном введении препарата проводили на белых крысах массой 180-200 г и белых мышах массой 19-23 г. Опыты выполняли в двух повторностях для каждого вида животных.

При изучении острой токсичности были сформированы по восемь опытных групп белых мышей и белых крыс и по одной контрольной группе (по б животных в каждой). Животным опытных групп вводили метраген в дозах 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0; 10,0; 11,0 и 12,0 мл/кг массы тела. Перед введением препарат подогревали до 36°С. Результаты опыта представлены в таблице 10.

Таблица 10

Параметры острой токсичности метрагена для лабораторных _животных при подкожном введении, мл/кг_

Вид животных Параметры токсичности Показатель ошибки виь

1Л)16 1Х>50 Ш84 ЬОюо

Белые мыши 5,78 8,15 10,04 12,0 0,69

Белые крысы 6,18 8,30 9,89 12,00 0,74

Субхроническая токсичность метрагена. Изучена на лактирующих коровах, больных послеродовым катаральным эндометритом. Больным животным в течение 15 дней внутриматочно вводили по 100 мл препарата. Для определения влияния метрагена на морфо- и биохимические показатели крови коров до начала лечения, на 10-15 день лечения и через 5-10 дней после последнего введения препаратов у подопытных животных из яремной вены брали пробы крови.

Результаты исследований крови коров представлены в таблице 11

Таблица 11

Показатели крови коров при применении метрагена_

Показатели Период исследования

До начала лечения На 10-15 день лечения Через 5-10 дней после последнего введения

метраген палочки с фура-золидопом метраген палочки с фу-разолидоном

Эритроциты, 1012/л 5,5610,21 5,89±0,24 5,47+0,38 5,5510,23 5,8310,27

Лейкоциты, 107л 9,1810,37 9,18+0,81 8,9911,37 8,87+1,83 8,73+1,61

Гемоглобин, г/л 109,37± 3,67 108,75+ 2,99 109,75+ 2,21 109.291 3,21 108,89+ 3,89

Общий белок, г/л 80,82±3,87 80,86+3,52 82,3212,55 82,41+5,33 81,7613,14

Альбумины, % 37,98±1,45 37,97±2,38 38,6713,65 37,8912,43 38,8412,96

а-гдобулины, % 15,77±0,63 15,3410,54 15,98+0,25 15,3110,24 15,1810,41

('-глобулины, % 16,87+1,31 16,7611,32 16,3310,31 16,2711,40 16,84+1,54

у-глобулины, % 22,18±0,73 22,8110,85 22,4110,65 21,5710,25 21,5410,86

Нейтрофияы, % юные

Палочкоядерные 1,89+0,54 2,12+0,31 2,2110,32 2,3610,57 2,4510,13

сегментоядерные 39,17±3,51 39,95+3,41 38,76+3,81 38,8913,66 38,1813,35

Эозинофилы 5,76±1,76 5,69+1,45 5,3612,30 5,1211,49 5,2812,11

Базофилы - - - - -

Моноциты 2,11+0,23 2,15+0,47 2,28+0,47 1,9910,69 2,0110,45 6

Лимфоциты 50,5713,25 49,26+3,48 50,19+3,53 49,1613,88 50,31+2,21

Полученные данные свидетельствуют о том, что внутриматочное введение препарата метраген не оказывает существенного влияния на биохимические и морфологические показатели крови опытных животных, на содержание в сыворотке крови общего белка и его фракций. Не установлено достоверных изменений после введения препарата и в лей-кограмме крови.

Аналогичные исследования были проведены и на свиноматках. В начале опыта и через 10-15 дней после окончания лечения из ушной вены брали пробы крови для соответствующих исследований. Результаты опыта представлены в таблице 12

Таблица 12

Показатели кроки свиноматок при назначении метрагена

Показатели Препарат

Метраген Палочки с фуразолидоном

в начале опыта в конце опыта в начале опыта в конце опыта

Эритроциты, 10"/л 3,51±0,12 3,61+0,13 3,6110,29 3,63+0,15

Лейкоциты, 10*/л 13,211,77 11,89±0,80 12,65+1,74 12,93+1,15

Гемоглобин, г/л 102,2+0,42 102,4310,29 101,78+0,63 103,44+0,51

Общий белок, г/л 81,4б±0,22 83,52±0,19 82,02±0,18 82,8610,28

Кетоновые тела, мг% 2,58+0,67 2,39+0,21 2,54+0,84 2,5810,36

Сахар, мг% 47,38+3,36 48,06+2,62 49,114,67 49,57±4,86

Са, мг% 9,49+0,21 9,85+0,19 9,49+0,20 9,52+0,16

Р, мг% 7,97+0,38 8,0410,35 7,75±0,51 7,73+0,55

Мд, мг% 3,27±0,0б 3,19±0,05 3,2910,09 3,4410,07

Резервная щелочность, мг% 399±6,41 390+5,47 39415,26 39715,12

Альбумины, % 3,45±0,12 3,54+0.12 2,99+0,13 2,9710,12

а-глобулины, % 1,78±0,08 1,97±0,05 1,6910,05 1,8010,11

Р-глобулины, % 1,78+0,12 1,7510,07 1,6910,07 1,67+0,11

у-глобулины, % 1,64±0,07 1,79+0,10 1,7810,07 1,7410,07

Из таблицы следует, что морфологические и биохимические показатели проб крови свиноматок опытной группы, как в начале опыта, так и после окончания опыта находились в пределах нормы, за исключением в первой группе в начале опыта было повышено количество лейкоцитов. Уровень содержания кетоновых тел был повышен в начале опыта у животных обеих групп, а в конце опыта у животных второй группы. Уровень содержания резервной щелочности был понижен у всех опытных свиноматок, как в начале, так и в конце опыта.

Установлено, что после закапывания метрагена в конъюнктивальные мешки глаз не наблюдали гиперемии конъюнктивы, изменений в склере или выделений из глаз опытных кроликов. При проверке раздражающего действия при внутрикожном введении кроликам установлено, что препарат обладал незначительным раздражающим действием (интенсивность окрашивания тканей колебалась в интервале от очень слабого до слабого).

При изучении сроков выведения остаточных количеств препарата из организма проведен опыт на четырех коровах в лактационный период. Трем коровам опытной группы внутриматочно с помощью шприца Жанэ и катетера вводили 100 мл метрагена один раз в сутки с интервалом 24 часа в течение 5 дней. Одна корова служила контролем и ей препарат не вводили.

У коров опытной и контрольной групп брали молоко, кровь и мочу для определения остаточных количеств диоксидина и гентамицина через 12; 24; 72 и 96 часов после последнего введения метрагена.

Установлено, что через 72 часа после внутриматочного введения метрагена коровами в исследуемых биологических жидкостях (молоке, крови и моче) активподейст-вующие вещества диоксидин и гентамицин не обнаруживаются.

Определение остаточных количеств диоксидина и гентамицина сульфата в крови и моче у свиноматок проведено на четырех свиноматках опытной группы, которым внутриматочно вводили 50 мл препарата один раз в сутки с интервалом 24 часа в течение 5 дней. Одна свиноматка служила контролем, ей препарат не вводили. У всех свиноматок брали кровь и мочу для определения остаточных количеств диоксидина и гентамицина через 24; 72 и 96 часов после последнего введения метрагена.

Установлено, что через 72 часа после внутриматочного введения метрагена в исследуемых биологических жидкостях (крови и моче) активнодействующие вещества ди-оксидин и гентамицин не обнаруживаются.

Опыты по изучению эффективности применения метрагена для лечения эндометритов у коров проведены в хозяйствах Воронежской области.

Животным опытной группы применяли препарат метраген, который вводили в полость матки по 100 мл с интервалом 24 часа до клинического выздоровления. Коровам контрольной группы для лечения применяли препараты, применяемые в хозяйствах.

Для усиления сократительной функции матки и удаления патологического экссудата из полости матки больным коровам применяли внутримышечно 1 % масляный раствор синестрола в дозе 4-5 мл дважды с интервалом 24 часа с последующим введением внутримышечно 40-50 ЕД окситоципа. За животными в течение опыта проводили ежедневное клиническое наблюдение, учитывая время исчезновения клинических признаков заболевания, проявление первой охоты сроки плодотворного осеменения.

Результаты опыта представлены в таблице 13.

Таблица 13

Лечебная эффективность метрагена при лечении эндометрита у коров

Показатели Группа животных

Метраген Палочки с фуразолидоном

Количество животных, гол. 54 49

Срок выздоровления, дни 10,92±0,91 14,01+1,27

Количество введений препарата 3,81±0,35 4,3610,54

Выздоровело, гол 50 36

% 92.59 73,47

Период от отела до оплодотворения, дни 48,12±1,31 57,51 ±2,98

Оплодотворилось при 1 осеменении, гол. 43 32

% 79,63 65,30

Индекс оплодотворения 1,36±0,17 1,86±0,15

При изучении эффективности применения метрагена для лечения эндометритов у свиней. Препарат вводили в полость матки также по 100 мл с интервалом 48 часов до клинического выздоровления.

Сводные данные об изучении эффективности метрагена при лечении эндометрита у свиноматок представлены в таблице 14. Приведенные данные свидетельствуют о том, что препарат является эффективным терапевтическим средством при лечении эндометрита у свиноматок.

Таблица 14

Эффективность метрагена для лечения эндометрита у свиноматок

Показатели Метраген Палочки с фуразолидопом

ОАО «Рамонь»

Количество животных, гол. 59 55

Выздоровело, гол 55 47

% 93,2 85,4

Продолжительность лечения, дни 10,7+0,15 13,1+1,11

Осталось больных, гол. 5 9

% 8,4 16,3

СХА «Александровское»

Количество животных, гол. 49 47

Выздоровело, гол 46 41

% 93.8 87,2

Продолжительность лечения, дни 10,1 ±0,3 5 13,9 + 1,40

Осталось больных, гол 3 6

% 6,1 12.24

Таким образом, комплексные препараты на основе диоксидина обладают высокой лечебно-профилактической эффективностью при заболеваниях животных.

4. ВЫВОДЫ

1. Диоксидин (l,4-ÄH-N-oKHCb 2,3 бис - оксиметилхиноксалина) - новый химиоте-рапевтический препарат хиноксалинового ряда, перспективный для применения в ветеринарии.

2. Диоксидин и комбинированные препараты на его основе обладают высокой антимикробной активностью широкого спектра действия, как in vitro, так и in vivo. Наиболее высокую активность он проявляет по отношению к грамотрицательным микроорганизмам. Более устойчивы к нему кокковые формы (от 100 до 1000 мкг/мл). Наиболее чувствительны к препарату была пастерелла (3,12-12,5 мкг/мл). Он проявляет выраженное химиотерапевтическое действие при экспериментальной эшерихиозной инфекции, при этом доза препарата существенно зависела от способа его введения.

Препарат не обладает акарицидным и овоцидпым действиями в отношении клещей псороптес. Установлено слабое антигельминтное действие препарата на аскаридий кур.

Препарат проявляет слабую фупгнстатическую активное» (0,05-0,1%) в отношении грибов-дерматофитов и некоторых возбудителей микотоксикозов животных. На кандид препарат не действует.

3. Диоксидин и его препараты являются малотоксичными средствами для лабораторных и сельскохозяйственных животных. LD;o препарата при внутреннем введении для разных возрастных групп варьировала от 1550 до 1700 мг/кг.

При длительном многократном введении производных хиноксалина в оптимальных, трех-, пяти- и десятикратных терапевтических дозах они не оказывали токсического влияния на организм животных, на процессы пищеварения и мочеотделения, функции печени, не вызывали морфо-функциональных изменений в других органах и тканях, а также не оказывали отрицательного влияния на физико-химические свойства и вкусовые качества мяса, не проявляет местно-раздражающего и кожно-резорбтивного токсического действий.

4. Диоксидин, эридин, диоксицин и мстраген являются новыми отечественными химиотерапевтическими препаратами. В состав этих препаратов входит производное хи-

ноксалнна - диоксиднн. Контроль качественных и количественных показателей препаратов осуществляется в соответствии с разработанными методами. Эти показатели включают: внешний вид, подлинность и массовую долю действующих веществ, массовую долю влаги, плотность, стерильность, микробиологическую чистоту и токсичность (безвредность).

5. Изучение фармакокинетики позволило установить, что диокендин хорошо всасывается при внутреннем (пероральном) и местном (внутриматочном и внутрицистер-нальном) применении. После однократного перорального введения препаратов в рекомендуемых дозах терапевтические концентрации диоксидина в сыворотке сохранялись в течение 12 часов.

Полная его элиминация происходит в течение 72 - 96 часов. Рекомендуемый срок убоя животных на мясо после назначения препаратов составляет 5-6 суток.

6. Фармакодннамика препаратов обусловлена выраженной антимикробной активностью в отношении возбудителей многих заболеваний животных, а также разносторонним фармакологическим действием, проявляющимся в положительном влиянии па отдельные стороны белкового, жирового обменов веществ и процессы пищеварения животных.

7. Диоксидип рекомендуется в качестве эффективного лечебно-профилактического средства при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях свиней, он способствует быстрому исчезновению признаков этих заболеваний. Диоксидин показан и при гипотрофии свиней.

Благодаря применению диоксидина в дозах 10-15 мг/кг заболеваемость поросят кишечными заболеваниями уменьшалась на 10-25%, респираторными - на 7-16%.

Применение диоксидина телятам с профилактической целью в дозе 5-10 мг/кг позволило уменьшить заболеваемость телят респираторными заболеваниями на 8-12,5%.

С лечебной целью диоксидип назначают перорально 2 раза в сутки в дозах 10-20 мг/кг в течение 5-7 суток.

Препараты хиноксалина также высокоэффективны при применении с целью лечения и профилактики акушерско-гинекологических и хирургических заболеваний крупного рогатого скота и свиней.

Диоксидин в кормах повышает эффективность откорма молодняка свиней на 1012%. При этом он предохраняет свиней от заболеваний гастроэнтеритом и бронхопневмонией.

8. Эридин комплексный препарат диоксидина и эритромицина рекомендуется использовать в дозах 100-200 мг/кг 2 раза в сутки для лечения респираторных заболеваниях телят. Применение препарата в указанных дозах позволило повысить эффективность лечения бронхопневмонии на 7-11%.

9. Диоксицин комбинированный препарат диоксидина и левомицетина, является эффективным этиотропным и, частично, патогенетическим средством в профилактике и лечении эндометритов коров.

Его применение позволяло сократить период выздоровления животных на 5,1-5,9 дней. При этом сократились сроки до успешного оплодотворения животных. По сравнению с применением лефурана терапевтическая эффективность лечения повысилась на 5,3%, а по сравнению, с неофуром - на 6,1%. Сервис период при применении диоксицина сократился по сравнению с пеофуром на 9,3 дня, а с лефурацом - на 7,1 дня. При этом оп-лодотворяемость повысилась на 5,7 и 5,1% соответственно.

Введение препарата с профилактической целью позволило существенно снизить заболеваемость животных эндометритами.

10. Метраген, представляющий собой комплекс диоксидина с гентамицином высокоэффективен при лечении эндометрита у коров и свиней, превосходя действие полочек с фуразолидоном соответственно на 19% и 6,6-7,8%.

5. ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИКИ

В результате проведенных исследований разработаны и предложены для ветеринарной практики новые эффективные антибактериальные препараты на основе производных оксихинолина - диоксидин, диоксицин, эридии и метрагеп, предназначенные для лечения и профилактики желудочно-кишечных, респираторных и акушерско-гинекологических заболеваний сельскохозяйственных животных

В соответствии с материалами настоящих исследований разработаны и утверждены в установленном порядке:

- Временное наставление по применению диоксидина в ветеринарии, утвержденное 5 ноября 1991 г ГУВ СССР.

- Инструкция по применению 1% раствора диоксидина от 22.02.06., утвержденная Россельхознадзором РФ, ПВР-2-2.9/00075.

- Технические условия ТУ 10.07.136-89 и ТУ 9331-020-18009711-99 на 1% раствор диоксидина.

- Технические условия на опытную партию эридина ТУ 64-10-108-87, утвержденные Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 26 июня 1987 года.

- Технические условия ТУ 10.07007-93, утвержденные Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 25 января 1993 года.

- Временное наставление по применению эридина при бронхопневмонии телят, утвержденное Главным управление ветеринарии Госагропрома СССР 5 мая 1987 г.

- Наставление по применению эридина в ветеринарии, утвержденное Главным управлением ветеринарии Минсельхоза РФ 18 января 1993 года. Регистрационный № 10.07.32-92 овфп.

Временное наставление по применению диоксидина при эндометритах коров, утвержденное ГУВ Госагропрома ССССР 6 сентября 1989 г.

Технические условия на опытную партию диоксидина, ТУ оп 10. 07.112-89.

Временное наставление по применению метрагена в ветеринарии № 14-52/2002, утвержденное 15.06.00 Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ,

Технические условия на опытную партию метрагена ТУ 9337-07610590965-00.

6. СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Волков И.Б., Щуклин В.П. Усовершенствование методики контроля гептамицина / Контроль, стандартизация и применение химиотерапевтичсских, биологически активных препаратов, кормовых добавок и премиксов. М., 1985, С. 16.

2. Шуклин В.П. Новый препарат для лечения бронхопневмоний телят. /Тезисы докладов Всесоюзной конференции «Разработка и применение антибиотиков нсмсдиципского назначения», Москва, 9-10 декабря 1987 г, С.9-10.

3. Ковалев В.Ф., Шуклин В.П. Эридин - новый препарат для лечения бронхопневмоний телят Новые фармакологические средства в ветеринарии. Тезисы докладов 1-й Межвузовской научно-практической конференции, Ленинград, 1989 г, с.11.

4. Ибрагимов В.А., Шуклин В.П. Острая токсичность и биодоступность препаратов фурабиминаи биофузола, содержащих фуразолидон и долизон Е./ Новые фармакологические средства в ветеринарии. Тезисы докладов Н-й Межвузовской научно-практической конференции, Ленинград, 1990 г, с.21.

5. Ковалев В.Ф. Виолин Б.В., Шуклин В.П. Использование ростостнмулирующего препарата авотан при производстве мяса бройлеров.// Вестник сельскохозяйственной науки, 1991, № 1, с.118.

6. Ковалев В.Ф., Виолин КВ., Шуклин В.П., Аристов Б.М. и др. Высокоэффективны препараты фирмы АПДЖОН АГ/ВЕТ. // Журнал «Ветеринария», 1993, № 6,С. 18-21.

7. Ребезов М.Б., Виолин Б.В., Шуклин В.П., Сазонова Е.М. Изучение терапевтической эффективности илотетрина в производственных условиях.// Сб. науч. тр. ВГНКИ, 1995 г, т.58, С.41.

8. Виолип Б.В., Ребезов М.Б., Шуклин В.П. Изучение сроков выведения остаточных количеств антибиотиков из организма животных./ Курган, ЦНТИ, 1995, Инф.л. № 36.

9. Виолин Б.В., Ребезов М.Б., Шуклин В.П. Изучение острой и хронической токсичности илотетрина в опытах на телятах. / Курган, ЦНТИ, 1995, Инф.л. № 38

10. Ковалев В.Ф., Виолин Б.В., Ребезов М.Б. Шуклин В.П. Фармакотоксикологиче-ская оценка препарата илотетрин.// Сб. науч. тр. ВГНКИ, 1996, т.60, С.67-71..

11. Ковалев В.Ф., Виолин Б.В., Шуклин В.П. Терапевтическая эффективность эн-рофлона при кояибактериозе цыплят. // Сб. науч. тр. ВГНКИ, 1996, т.60, С.59-61.

12. Виолин Б.В., Ковалев В.Ф., Шуклин В.П. Изучение фармакокинетики, срок выведения остаточных количеств энрофлона. //Сб. науч. тр. ВГНКИ, 1996, т.60, С.56-59.

13. Ковалев В.Ф., Виолин Б.В., Шуклин В.П. Фармакотокси ко логическая оценка препарата амписур. //Сб. науч. тр. ВГНКИ, 1996, т.60, С.52-56.

14. Ковалев В.Ф., Виолин Б.В., Шуклин В.П. Изучение терапевтической эффективности препаратов флюмеквина. //Сб. науч. тр. ВГНКИ, 1996, т.60, С.62-67.

15. Виолин Б.В., Ковалев В.Ф., Шуклин В.П. Эффективность препаратов флюмеквина. //Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства. /Материалы I международной научно-практической конференции. Витебск, 1996, с.9.

16. Виолин Б.В., Ковалев В.Ф., Ребезов М.Б., Шуклин В.П. Изучение препарата илотетрин в опытах на телятах. Эффективность препаратов флюмеквина. //Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства. /Материалы I международной научно-практической конференции. Витебск, 1996, с. 10.

17. Виолин Б.В., Ковалев В.Ф. Шуклин В.П. Энрофлоксащщ при колибактериозе цыплят. //Ветеринарные и зооинженерные проблемы животноводства. /Материалы I международной научно-практической конференции. Витебск, 1996, c.l 1.

18. Шуклин В.П., Лобова П.С., Ковалев В.Ф., Грибко С.М. Изучение биоэквива-лептности препаратов Бициллин-3 производства РФК «Фарма» и АКОС «Син-тез».//Сборник научных трудов НИИМСиППЖ, Волгоград. Проблемы производства продуктов питания повышенной пищевой и биологической ценности. 1998, издательство Волгоградского университета, С.291-293.

19. Шуклин В.П., H.H., Лобова П.С., Ковалев В.Ф., Касперович В.П. Изучение биодоступности метронидазола из таблеток.// Сборник научных трудов НИИМСиППЖ, Волгоград. Проблемы производства продуктов питания повышенной пищевой и биологической ценности. 1998, издательство Волгоградского университета, С.295-296.

20. Шуклин В.П., H.H., Лобова П.С., Ковалев В.Ф., Выдуйкииа А.П. Изучение био-эквиваяентности таблеток тетрациклина.//Сборник научных трудов НИИМСиППЖ, Волгоград. Проблемы производства продуктов питания повышенной пищевой и биологической ценности. 1998, издательство Волгоградского университета, С.291-292.

21. Шуклин В.П., Ковалев В.Ф., Касперович В.П. Сравнительное изучение биодоступности метронидазола из таблеток. // Сборник научных трудов ВГНКИ, Москва, 2001, т.61, С.130-132.

22. Шуклин В.П., Ковалев В.Ф., Нечаев С.А. Изучение острой и субхронической токсичности препарата дорин в опытах на телятах. //Сборник научных трудов ВГНКИ, Москва, 2001, т.61, С.154-162.

23. Шуклин В.П., Ковалев В.Ф., Касперович В.П. Сравнительное изучение фарма-кокинетики препаратов левомицетина сукцинаг. //Сборник научных трудов ВГНКИ, Москва, 2001, т.б 1, С. 174-177.

24. Шуклин В.П., Ратникова И.Н., Нечаев С.А. Изучение токсичности дорина в опытах на лабораторных животных.// Сборник научных трудов ВГНКИ, Москва, 2001, т.63, С.148-154.

25. Шуклин В.П., Нечаев С.А. Изучение острой и субхронической токсичности до-рина в опытах на поросятах. /Тезисы докладов Всероссийской паучной конференции «Совершенствование методов контроля, стандартизации и сертификации ветеринарных препаратов», 2001, С.177-178.

26. Шуклин В.П., Ковалев В.Ф., Виолин К.В. Изучение биоэквивалентиости препаратов линкомицина. Сборник научных трудов ВГНКИ, Москва, 2001, т.63, С.170-174.

27. Борисова В.В., Виолин Б.В., Сазонова Е.М., Шуклин В.П. Изучение острой токсичности, фармакокинетшсп и сроков выведения остаточных количеств цсфквинома из организма телят. // Сборник научных трудов ВГНКИ, Москва, 2004, С.

28. Шуклин В.П., Касперович В.П., Русаков C.B. и др. Изучение фармакокинетики и сроков выведения диоксидина из организма коров.//Встеринария, 2006, №2, С.51-53.

29. Авторское свидетельство СССР № 1424170 на изобретение «Препарат «Эридин» для лечения бронхопневмонии телят» с приоритетом от 12 августа 1986 г.

30. Патент РФ на изобретение № 1424170 от 30 июня 1993 г,

31. Авторское свидетельство СССР № 1801254 на изобретение «Препарат для лечения эндометритов у коров «Диоксицин» с приоритетом от 26 ноября 1990 г.

32. Патент РФ на изобретение № 1801254 от 9 октября 1992 г.

33. Авторское свидетельство СССР № 1251536 па изобретение «Штамм Streptomyces cremeus subsp. nebramycini № 2242 - ЛБ, используемый для получения апрамнцина» с приоритетом от 20 июля 1984 г.

Подписано в печать 25.03.2006 Заказ № 234 Формат 60\84"]6

Объем 1,5 п.л. Тираж - 100 экз.

Бумага офсетная Офсетная печать

Отпечатано в типографии ФГОУ ВПО «Кубанский государственный аграрный университет» 350044, г. Краснодар, ул. им. Калинина, 13

Актуальность темы. Улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка более эффективных методов и средств профилактики и лечения широко распространенных заболеваний является актуальной задачей для ветеринарной и биологической науки и практики (Е.В.Андреев, А.Б. Драгомир, 1978; В.А. Андросов, 1978; Г.П. Бородой, 1981; В.М. Данилевский, 1974; 1985; И.Н. Дегтярева и др., 1981).

Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии и профилактике, позволяющей значительно снизить наносимый ими экономический ущерб (Е.Ф.Дымко, 1992; S.McKercher, 1978). Для этого используют различные фармакологические средства, . наибольшее распространение из которых получили антибиотики, сульфаниламиды, нитрофура-ны (М.А. Амирбеков и др, 1985; И.И.Гладенко и др., 1977, Ю.В.Головизнин, 1980; А. Жамантаев и др, 1980; СП.Качанова, 1979; В.Ф.Ковалев и др, 1988;

A.Z. Aronson, 1980; M.Brumfitt, 1979; Y.M.Conzelman, 1980; Z.Larson, 1980). Однако их эффективность в последнее время значительно снизалась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных и антигенных свойств. Устойчивые формы патогенных возбудителей болезней, в качестве новой биологической популяции циркулируют в природе и инфицируют животных и птицу, что существенно затрудняет их профилактику и терапию (С.Е. Агроник, 1976,

B.П. Антипенко, А.В. Антипов, 1978; А.П. Красильников, 1982; Б.В. Виолин, 1988; Е.Н. Дымко, 1992, В.Е.Завьянцев, 1977; B.C. Зуева 1970; М.Т. Коняев и др., 1979; М.Н Лебедева., С.Д.Водопаева, 1972; В.М. Подкопаев и др., 1977; Э.А.Светоч, М.К.Шунисов, 1975; Е.Т.Тришкина, 1975; Е.С. Anderson et al

1975; R.Benveniste, J.Davis, 1973; W.H.Chang, G.R.Carter, 1975; W.E.Clapper etal., 1956).

В условиях интенсификации животноводства и перевода его на промышленную основу возрастает роль и значение новых инфекций со сложной этиологией, обусловленной повышением вирулентности условно-патогенных микроорганизмов, вирусов и грибов. Болезни чаще имеют общую симтоматику поражения респираторных путей и желудочно-кишечного тракта, приобретают характер смешанных бактериально-вирусных инфекций, отличающихся от классических форм проявления той или иной болезни с осложненным течением. Все это требует поиска и разработки новых химиотерапевтических средств с разным механизмом антимикробного действия (С.М.Навашин, И.П.Фомина, 1982).

Учитывая перспективность химиотерапевтического направления в проблеме лечения и профилактики таких заболеваний и других распространенных патологий, целесообразно создание препаратов на основе высокоэффективных компонентов из различных классов соединений, а также средств сочетанной фармакодина-мики (С.М. Кузнецова, 1983). Ассортимент этих лекарств постоянно растет.

Интенсивный поиск таких лекарственных препаратов ведется среди соединений хинолона, хиноксалина, цефалоспоринов, триазола, тио-семикарбазонов, производных бензимидазола, циклических аминов, карбонильных полиоксисоединений и других (А.И.Потопальский, JI.B. Лозюк, А.Н.Миролюбова и др., 1991; С.В.Яковлев, 1999, Е.Н.Падатская, 1972,1974; Е.Н. Падейская, В.Н. Яковлев 1995).

Наиболее перспективными оказались производные хиноксалина (Падейская Е.Н. и др., 1966) и в частности, препараты диоксидин и хиноксидин (Падейская Е.Н., 1972, 1974; Козырев Ю.А. (1979); Антипов В.А., Шахов А.К., 1979; Локес П.И., 1989; Мартынова А.В., 1998).

Цель и задачи исследования. Основной целью настоящего исследования является разработка, изучение и внедрение в практику ветеринарии новых химиотерапевтических препаратов производных хиноксалина и препаратов на их основе для лечения и профилактики ряда заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы. Эти лекарства являются новыми лекарственными средствами, содержащими диоксидин. Для реализации этой цели были поставлены задачи:

1. Разработать состав и изучить биологическую активность диоксидина, эридина, диоксицина, метрагена в отношении основных возбудителей отдельных заболеваний животных и птицы;

2. Определить наиболее специфические токсикологические и фармакологические свойства диоксидина, эридина, диоксицина и метрагена;

3. Разработать показания к применению этих препаратов, установить их лечебно - профилактическую эффективность при отдельных заболеваниях животных и птицы.

4. Разработать нормативную документацию на их контроль и применение в целях внедрения в практику ветеринарии и животноводства, а также промышленное производство.

Исследования выполнены по заданию 04.02 Российской ИТП фундаментальных и приоритетных исследований на 1991-1995 гг. с № гос.регистрации 01.9.400007588.

Научная новизна. В результате проведенных исследований для ветеринарии и животноводства предложены четыре новых препарата диоксидин, эри-дин, диоксицин, метраген, являющихся представителями производных хиноксалина, изучены их биологическая активность; в соответствии с требованиями Ветфармбиокомиссии Департамента ветеринарии МСХ РФ, определены их основные фармако-токсикологические характеристики; отработаны показания к применению, оптимальные схемы и дозы при лечении и профилактике наиболее распространенных заболеваний животных.

Свидетельством научной новизны являются: Авторское свидетельство СССР № 1424170, патент РФ № 1424170, Авторское свидетельство СССР № 1801254, патент РФ № 1801254, Авторское свидетельство СССР № 1251536, патент РФ № 2192850.

Практическая значимость. Для практической ветеринарии . предложены новые оригинальные препараты диоксидин, эридин, диокси-цин, метраген, обладающие высокой лечебной и профилактической эффективностью при ряде заболеваний сельскохозяйственных животных и птицы.

Практическая ценность препаратов подтверждается положительными результатами широких производственных испытаний и Наставлениями по применению в ветеринарии, одобренными Ветфармсоветом (Ветфарм-биокомиссией) и утвержденными Департаментом ветеринарии в установленном порядке.

Внедрение результатов исследований. Производство новых отечественных препаратов организовано на АО «Ветпрепараты», НТФ «Фарма-кон», ЗАО «Агрофарм», аргрофирмой Армавирской биофабрики.

В условиях животноводческих и птицеводческих хозяйств России обеспечено их применение в качестве высокоэффективных лечебнопрофилактических средств.

Апробация работы. Материалы диссертации были доложены:

На заседании Ветфармсовета (Ветфармбиокомиссии) Департамента ветеринарии МСХ РФ, (1987,1989,1990,1991,1993,1997,2001,2003,2005).

На научно-практических конференциях: Ленинград (1989) Москва (1989), Смоленск (1992,1993), Витебск (1996), Краснодар (1996).

На заседаниях Ученого Совета ВГНКИ по итогам научно-исследовательской работы за 1985-2002 гг.

На производственных совещаниях ветеринарных специалистов многих регионов России (Воронежская, Рязанская, Смоленская области, Краснодарский край и др.) в 1995-2005 г.

На защиту выносятся:

- результаты исследований биологической активности производных хиноксалина: в частности, диоксидин, эридин, диоксицин, метраген;

- результаты их фармако-токсикологических исследований;

- результаты разработки показаний к применению и изучение лечебно-профилактической эффективности при различных заболеваниях сельскохозяйственных животных;

- практические предложения по применению и внедрению диоксидина, эридина, диоксицина, метрагена в ветеринарии;

- методы контроля качества разработанных препаратов. Публикации. Основные материалы диссертации опубликованы в 47 научных статьях в различных изданиях с изложением основных положений и выводов по изученным вопросам, в том числе 30 в ведущих научных журналах и изданиях.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

6. ВЫВОДЫ

1. Диоксидин (1,4-ди-М-окись 2,3 бис - оксиметилхиноксалина) - новый химиотерапевтический препарат хиноксалинового ряда, перспективный для применения в ветеринарии.

2. Диоксидин и комбинированные препараты на его основе обладают высокой антимикробной активностью широкого спектра действия, как in vitro, так и in vivo. Наиболее высокую активность он проявляет по отношению к грамотрицательным микроорганизмам. Более устойчивы к нему кокковые формы (от 100 до 1000 мкг/мл). Наиболее чувствительны к препарату была пастерелла (3,12-12,5 мкг/мл). Он проявляет выраженное химиотерапевтиче-ское действие при экспериментальной эшерихиозной инфекции, при этом доза препарата существенно зависела от способа его введения.

Препарат не обладает акарицидным и овоцидным действиями в отношении клещей псороптес. Установлено слабое антигельминтное действие препарата на аскаридий кур.

Препарат проявляет слабую фунгистатическую активность (0,05-0,1%) в отношении грибов-дерматофитов и некоторых возбудителей микотоксико-зов животных. На кандид препарат не действует.

3. Диоксидин и его препараты являются малотоксичными средствами для лабораторных и сельскохозяйственных животных. LD50 препарата при внутреннем введении для разных возрастных групп варьировала от 1550 до 1700 мг/кг.

При длительном многократном введении производных хиноксалина в оптимальных, трех-, пяти- и десятикратных терапевтических дозах они не оказывали токсического влияния на организм животных, на процессы пищеварения и мочеотделения, функции печени, не вызывали морфо-функциональных изменений в других органах и тканях, а также не оказывали отрицательного влияния на физико-химические свойства и вкусовые качества мяса, не проявляет местно-раздражающего и кожно-резорбтивного токсического действий.

4. Диоксидин, эридин, диоксицин и метраген являются новыми отечественными химиотерапевтическими препаратами. В состав этих препаратов входит производное хи ноксалина - диоксидин. Контроль качественных и количественных показателей препаратов осуществляется в соответствии с разработанными методами. Эти показатели включают: внешний вид, подлинность и массовую долю действующих веществ, массовую долю влаги, плотность, стерильность, микробиологическую чистоту и токсичность (безвредность).

5. Изучение фармакокинетики позволило установить, что диоксидин хорошо всасывается при внутреннем (пероральном) и местном (внутрима-точном и внутрицистернальном) применении. После однократного перораль-ного введения препаратов в рекомендуемых дозах терапевтические концентрации диоксидина в сыворотке сохранялись в течение 12 часов.

Полная его элиминация происходит в течение 72 - 96 часов. Рекомендуемый срок убоя животных на мясо после назначения препаратов составляет 5-6 суток.

6. Фармакодинамика препаратов обусловлена выраженной антимикробной активностью в отношении возбудителей многих заболеваний животных, а также разносторонним фармакологическим действием, проявляющимся в положительном влиянии на отдельные стороны белкового, жирового обменов веществ и процессы пищеварения животных.

7. Диоксидин рекомендуется в качестве эффективного лечебно-профилактического средства при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях свиней, он способствует быстрому исчезновению признаков этих заболеваний. Диоксидин показан и при гипотрофии свиней.

Благодаря применению диоксидина в дозах 10-15 мг/кг заболеваемость поросят кишечными заболеваниями уменьшалась на 10-25%, респираторными-на 7-16%.

Применение диоксидина телятам с профилактической целью в дозе 510 мг/кг позволило уменьшить заболеваемость телят респираторными заболеваниями на 8-12,5%).

С лечебной целью диоксидин назначают перорально 2 раза в сутки в дозах 10-20 мг/кг в течение 5-7 суток.

Препараты хиноксалина также высокоэффективны при применении с целью лечения и профилактики акушерско-гинекологических и хирургических заболеваний крупного рогатого скота и свиней.

Диоксидин в кормах повышает эффективность откорма молодняка свиней на 10-12%. При этом он предохраняет свиней от заболеваний гастроэнтеритом и бронхопневмонией.

8. Эридин комплексный препарат диоксидина и эритромицина рекомендуется использовать в дозах 100-200 мг/кг 2 раза в сутки для лечения респираторных заболеваниях телят. Применение препарата в указанных дозах позволило повысить эффективность лечения бронхопневмонии на 711%.

9. Диоксицин комбинированный препарат диоксидина и левомицетина, является эффективным этиотропным и, частично, патогенетическим средством в профилактике и лечении эндометритов коров.

Его применение позволяло сократить период выздоровления животных на 5,1-5,9 дней. При этом сократились сроки до успешного оплодотворения животных. По сравнению с применением лефурана терапевтическая эффективность лечения повысилась на 5,3%, а по сравнению с неофуром - на 6,1%.

Сервис период при применении диоксицина сократился по сравнению с не-офуром на 9,3 дня, а с лефураном - на 7,1 дня. При этом оплодотворяемость повысилась на 5,7 и 5,1% соответственно.

Введение препарата с профилактической целью позволило существенно снизить заболеваемость животных эндометритами.

10. Метраген, представляющий собой комплекс диоксидина с гентами-цином высокоэффективен при лечении эндометрита у коров и свиней, превосходя действие полочек с фуразолидоном соответственно на 19% и 6,67,8%.

В соответствии с материалами настоящих исследований разработаны и утверждены в установленном порядке:

- Временное наставление по применению диоксидина в ветеринарии, утвержденное 5 ноября 1991 г ГУВ СССР.

- Инструкция по применению 1% раствора диоксидина от 22.02.06., утвержденная Россельхознадзором РФ, ПВР-2-2.9/00075.

- Технические условия ТУ 10.07.136-89 и ТУ 9331-020-1800971199 на 1% раствор диоксидина.

- Технические условия на опытную партию эридина ТУ 64-10-108-87, утвержденные Главным управлением ветеринарии Госагропрома СССР 26 июня 1987 года.

- Технические условия ТУ 10.07007-93, утвержденные Главным управлением ветеринарии Министерства сельского хозяйства Российской Федерации 25 января 1993 года.

- Временное наставление по применению эридина при бронхопневмонии телят, утвержденное Главным управление ветеринарии Госагропрома СССР 5 мая 1987 г.

- Наставление по применению эридина в ветеринарии, утвержденное Главным управлением ветеринарии Минсельхоза РФ 18 января 1993 года. Регистрационный № 10.07.32-92 овфп.

- Временное наставление по применению диоксицина при эндометритах коров, утвержденное ГУВ Госагропрома ССССР 6 сентября 1989 г.

- Технические условия на опытную партию диоксицина, ТУ оп 10. 07.112-89.

- Временное наставление по применению метрагена в ветеринарии № 14-5-2/2002, утвержденное 15.06.00 Департаментом ветеринарии Минсельхозпрода РФ,

- Технические условия на опытную партию метрагена ТУ 9337076-10590965-00.

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВУ

Ветеринарной практике и животноводству рекомендуется препараты хиноксалина - диоксидин, эридин, диоксицин и метраген для профилактики и лечения желудочно-кишечных, респираторных, акушерско-гинекологичес-ких и хирургических заболеваний, а также гипотрофии животных.

Применение препаратов регламентируется утвержденными в установленном порядке Наставлениями по применению.

Организовано промышленное производство производство препаратов в соответствии с разработанными и утвержденными в установленном порядке Техническими условиями.

257

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Улучшение ветеринарного обслуживания животноводства, разработка более эффективных методов и средств профилактики и лечения широко распространенных заболеваний является актуальной задачей для ветеринарной и биологической науки и практики (Е.В.Андреев, А.Б.Драгомир, 1978; В.А.Андрюсов, 1978; Г.П.Бородой, 1981; В.М.Данилевский, 1974; 1985; И.Н. Дегтярева и др., 1981).

Мировой опыт борьбы с заболеваниями животных показал, что основная роль при этом отводится лекарственной терапии и профилактике, позволяющей значительно снизить наносимый ими экономический ущерб (Е.Ф.Дымко, 1992; S.McKercher, 1978). Для этого используют различные фармакологические средства.

Однако их эффективность в последнее время значительно снизалась из-за изменения биологических свойств микроорганизмов, проявления множественной резистентности после многократного пассажирования и усиления их вирулентных свойств. Устойчивые формы возбудителей, в качестве новой биологической популяции циркулируют в природе и инфицируют животных и птицу, что существенно затрудняет их терапию (С.Е.Агроник, 1976, В.П.Антипенко, А.П.Красильников, 1982; В.А.Антипов, 1978; Б.В.Виолик, 1988; Е.Н.Дымко, 1992, В.Е.Завьянцев, 1977; В.С.Здева и др., 1970; М.Т. Ко-няев и др., 1979; М.Н.Лебедева, С.Д.Водопаева, 1972; В.М.Подкопаев и др., 1977; Э.А.Светоч, М.К.Шунисов, 1975; Е.Т.Тришкина, 1975; Л.А.Нечаева и др, 1981; R.C. Auderson et al 1975; R.Benveniste, J.Davis, 1973; W.H.Chang, G.R.Carter, 1976; W.E. Clapper et al, 1956).

В условиях интенсификации животноводства и перевода его на промышленную основу возрастает роль и значение новых инфекций со сложной этиологией, обусловленной повышением вирулентности условно-патогенных микроорганизмов, вирусов и грибов. Болезни чаще имеют общую симтоматику поражения респираторных путей и желудочно-кишечного тракта, приобретают характер смешанных бактериально-вирусных и грибных инфекций, отличающихся от классических форм проявления той или иной болезни с осложненным течением. Все это требует поиска и разработки новых химиотерапевтических средств с разным механизмом антимикробного действия, обладающих также противовирусной и противо-грибной активностью (Навашин С.М., Фомина И.П., 1982).

Наряду с широко применяющимися для этих целей химиотерапевти-ческие препараты разных групп, в последние годы в мире стали широко использовать антимикробные соединения хиноксалинового ряда и, в частности, препарат фирмы "Байер" байонокс, действующим веществом которого является олаквиндокса тритурат (D. Schneider et.al., 1976; ANON "Bayonox", 1978), а также карбодокс, мекадокс, циадокс.

В нашей стране во Всесоюзном научно-исследовательском химико-фармацевтическом институте разработаны два новых перспективных производных хиноксалина диоксидин и хиноксидин, которые нашли достаточно широкое применение в медицине и производятся на фармацевтическом объединении "Октябрь" (Санкт-Петербург). Эти препараты обладают разносторонним фармакологическим действием, малотоксичны и поэтому перспективны для применения в животноводстве и ветеринарии.

Все вышеприведенное послужило основанием для фармако-токсикологического исследования диоксидина с целью разработки его применения в ветеринарии и создания на его основе новых комплексных препаратов.

Проведенными исследованиями установлено, что производные хиноксалина обладает разносторонней биологической активностью и, в частности, высоким антимикробным действием в отношении многих микроорганизмов.

Относительно более высокая активность препарата проявлялась в отношении грамотрицательных бактерий. Из этих микроорганизмов наиболее чувствительной к препарату оказалась пастерелла. Минимальная бактериостатическая концентрация препарата к ней составила 0,39-3,12 мкг/мл., а минимальная бактерицидная - 0,78-6,25 мкг/мл. Примерно аналогичную чувствительность проявил аэрококкус вириданс, которая составила в обоих случаях 1,56-3,12 мкг/мл. Несколько меньшее антимикробное действие он проявил в отношении синегнойной палочки , которое тем не менее оказалось достаточно высоким и составило: бактериостатическое в концентрации 3.1212,5мл и бактерицидной - 6,25-25,0 мкг/мл. Сальмонелла и микрококк по своей чувствительности к препарату оказались примерно равными. При этом его минимальная бактериостатическая концентрация в отношении обоих микроорганизмов составила 12,5-25,0 мкг/мл. Другие серотипы сальмонелл были более устойчивы к диоксидину. При этом бактериостатическая и бактерицидная активности Salmonella dublin равнялись 25-50 мкг/мл, а Salmonella cholerae suis 50,0-200 мкг/мл.

Антимикробное действие препарата на бордетеллу также оказалось достаточно выраженным и составило 25- 100 мкг/мл.

Различные серотипы кишечной палочки были примерно аналогично чувствительными к препарату. При этом их чувствительность проявлялась в концентрациях от 12,5 до 100 мкг/мл. Наиболее устойчивыми из изученных штаммов микроорганизмов были грамположительные и, в частности, стафилококки и стрептококки, чувствительность которых варьировала в пределах от 100 до 400 мкг/мл.

Активность диоксидина по отношению к вульгарному протею была сравнительно низкой. Его бактериостатическое действие составило в концентрации 100мкг/мл, а бактерицидное - 200 мкг на 1 мл среды. Клебси-елла была более чувствительной к препарату, действие которого проявлялось в концентрации 25-50 мкг/мл.

Препараты хиноксалина также проявлял выраженное химиотерапевти-ческое действие при экспериментальной эшерихиозной инфекции.

При этом его доза зависела от способа введения. Так, при внутрибрю-шинном назначении на 15 день опыта отмечали 100% выживаемость белых мышей от дозы 10 мг/кг. ЕД50 в этом случае составила 2,5 мг/кг, при введении же олаквиндокса внутрь параметры ЕД50 были выше и достигали 49,6 мг/кг.

Препарат, введенный через час после заражения животным предохранял белых мышей от гибели в дозе 10 мг/кг, ЕД5о при этом равнялось 4,4 мг/кг. Введение его через 3 часа после заражения увеличивало ЕД и составило 7 мг/кг.

Проведенными испытаниями установлено, что 1% раствор не обладает акарицидным действием в отношении клещей псороптес, поскольку существенного изменения состояния клещей и их гибели не отмечали. Аналогичный результат был получен в контроле. Не отмечалось и овоцидного действия препарата. Выведение личинок в данном случае происходило аналогично контролю.

При изучении его антигельминтного действия установлено слабое губительное действие на дождевых червей. При этом их гибель наступала через 90 минут. Картина интоксикации характеризовалась слабым возбуждением червей с последующим параличом и гибелью.

Гибель аскаридий кур наступала после 10 часовой экспозиции.

Установлено, что диоксидин проявляет слабую фунгистатическую активность^,05-0,1%) в отношении грибов-дерматофитов. По отношению к возбудителям микотоксикозов (фузарий) препарат проявлял губительное действие в концентрации 40 мг/кг, а влияние на Stachybotris alternans это действие проявлялось в концентрации 0,5 мг/кг. На кандид он не действовал.

Таким образом, препарат обладает слабым антигрибным и антигель-минтным действием.

Изучение основных токсикологических параметров диоксидина показало, что он является малотоксичным препаратом. Его максимально переносимые дозы для белых мышей при внутреннем применении, взависимости от возраста составляют от 600-1000 мг/кг. ЛД5о при этом варьировали от 1031,5 до 1212,5 мг/кг. Доза 1400 мг/кг вызывала гибель всех мышей.

Для белых крыс при подкожном введении препарата эти параметры составили соответственно 600; 815,7 и 1000 мг/кг.

Клиническая картина интоксикации характеризовалась угнетением, понижением болевой чувствительности, отсутствием аппетита, комой.

При длительном внутреннем назначении (21 день) в 3-х кратной терапевтической дозе препарат не оказывал выраженного токсического действия на клинический статус животных, показатели крови и массу внутренних органов. При этом показатели температуры, пульса, дыхания кроликов на всем протяжении опытов (15 дней) не претерпевали существенных изменений.

Он не оказывал местно-раздражающего и кожно-резорбтивного токсического действия при накожных аппликациях и коньюктивальных пробах.

Диоксидин не вызывал нарушений основных функций печени, а также процессов пищеварения и мочеотделения.

Гистологическим исследованием внутренних органов животных, длительно получавших трехкратные терапевтические дозы диоксидина не выявлено морфологиченских изменений в печени, почках, сердце. Лишь у отдельных животных животных отмечены слабоочаговые инъецирования капилляров в почках, а также слабое катаральное воспаление слизистой желудка и тощей кишки.

Проведенная ветеринарно-санитарная экспертиза продуктов убоя свиней показывает, что туши опытных (получавших диоксидин) и контрольных животных по внешним признакам не отличались между собой, видимых изменений их внутренних органов и тканей также не установлено.

Диоксидин не изменяет вкусовых качеств мяса, о чем свидетельствует его комиссионная дегустационная оценка и биохимическое исследование мяса от свиней, получавших препарат.

Фармако-кинетические параметры диоксидина характеризуются хорошим всасыванием и распределением его в органах и тканях. Максимальные концентрации препарата в сыворотке крови при пероральном введении достигались через 3-6 часов. Затем происходило довольно плавное снижение концентраций. При этом его следы отмечали через 72 часа после введения только в почках, печени и селезенке. Через 96 часов диоксидин не был обнаружен ни в одном из исследованных органов.

Таким образом, полная элиминация препарата происходит в течение 7296 часов, поэтому рекомендуемый срок убоя животных на мясо после лечения диоксидином составляет 5-6 суток.

Проведенными исследованиями отдельных сторон фармакодинамики установлено, что диоксидин помимо выраженного антимикробного действия оказывает разностороннее влияние на функции пищеварительного канала.

При исследовании биохимических показателей крови установлено, что высокая активность препарата, которая характеризуется усилением энергетического и белкового обмена у животных. При этом регистрируется повышение содержания общего белка, РНК, а также альбуминовой фракции сыворотки крови, что свидетельствует об активизации белкового обмена. Уменьшение же мочевины указывает на более рациональное течение этих процессов и лучшую утилизацию белков организмом.

Вместе с тем, результаты этих экспериментов указывают также на усиление энергетического обмена как углеводного, так и жирового, в частности, более оптимального их течения, а, следовательно, лучшего энергетического обеспечения протекающих в организме биохимических процессов. В конечном итоге все это' способствовало большему приросту массы тела опытных животных.

При проведении клинических испытаний диоксидина с целью разработки показаний к его применению установлено, что выраженные химиотера-певтические свойства и разностороннее фармакологическое действие способствуют высокой лечебной и профилактической эффективности препарата при различных заболеваниях животных, а также для стимуляции их роста.

При изучении лечебно-профилактической эффективности при диарей-ных заболеваниях поросят показано, что назначение диоксидина способствовало быстрому улучшению общего состояния, восстановлению функций желудочно-кишечного тракта и исчезновению клинических признаков заболевания в течение 2-4 дней лечения. Лечебная эффективность препарата составила от 80-100%.

Назначение препарата с профилактической целью способствовало значительному облегчению их общего состояния и аппетита. В результате профилактическая эффективность диоксидина составила 95%.

При этом препарат не оказывал выраженного токсического действия на морфобиохимические показатели крови свиней и не проявлял других побочных действий.

При этом отмечено, что животные хорошо поедали корм с препаратом и токсических явлений на их организм не установлено. Действие на кровь отмечено положительным влиянием на содержание эритроцитов и насыщения их гемоглобином, повышением уровня общего белка, у опытных свиней отмечается больший выход всех категорий мяса, а также костной ткани. При назначении больших доз препарата регистрируется уменьшение выхода жирного мяса и увеличение количества нежирного. Характерным является повышение содержания количества триптофана и оксипролина и как следствие - улучшение белково-качественного показателя мяса. Содержание воды в мясе понижается, а жира и белка повышается. Параллельно у животных отмечается увеличение массы внутренних органов (печени, почек, сердца). После прекращения воздействия препарата масса этих органов в основном восстанавливается.

Материалы настоящих исследований фармакологических и токсиколо-ческих свойств диоксидина, его эффективности при различных заболеваниях, разработанная нормативно-техническая документация на его применение одобрена Ветфармбиокомиссией Департамента ветеринарии МСХ и ПРФ, что послужило основанием для утверждения в установленном порядке Временного ряда наставлений по применению препаратов диоксидин в ветеринарии.

Таким образом, хиноксалино-диоксидин и комбинированные препараты на его основе являются малотоксичными лекарственными средствами, обладающими выраженной фармакологической и химиотерапевтической активностью. Они эффективны в качестве лечебного и профилактического средства при заболеваниях пищеварительного и респираторного каналов, а также при акушерско-гинекологической и хирургической патологиях.