Автореферат и диссертация по ветеринарии (16.00.03) на тему:Аллергический метод диагностики казеозного лимфаденита (псевдотуберкулеза) овец

ОНСКйЗ -ГОСШи" !'-Ср-иншп ТЕТЕРИ?АРза

г. г й---------------------------------------

- ,■ г- -1

„ у,- : Из п;:згах рукописи

и V • - • * •

3 А 3 и т И н ПЛПКСЕЯ АЛЕКСАНДРОВИЧ

УДК 013*610 - 002.?1:035,3

АЛЛЕРГИЧЕСКИЙ МЕТОД ДИАГНОСТИКИ КАЯЕОЗНОГП ЯИЗСЙДЕНИТ-Ч (НСЕВДОТЗБЕРКНЛЕЗП) О П Е Ц

I

16.00.03 - встеркиарнаа микробиология. вирусо-. логия, эпизоотология, йчкология и иннднология

ДВТОРЕЭЕРЙТ диссертации из соискание очэлсй степс»» кандидата автеркнарних нацк

О а С К -

19 9 3г.

.Работа выполнена в лабораториях кафедр эпизоотологии, ииаробиоипгии и вирусологии Омского государственного витери-нзрнсго института,

Надчнкв руководигегк: доктор ветеринарных начк, профессор КОЛЫЧЕВ К.И. кандидат ветеринарнах наук, доцвнт ТРОФИМОВ И,Г.

Офг.цяапышс счшнантн: доктор ветеринарных наук, профессор ОЦЁПКОВ В,Г. кандидат биологических наук, стараий научный сотрудник ХОДУН Л.Н.

Ведущее учревдение; Казанский ордена Ленина ьетери-нарннй институт ин. Н.Э.Баумана

Защита состоится Шу2£^й£.ЛШ г. в ¿¿ часов

на заседании специализированного совета К 120.48.01, при Омском государственной институте ветеринарной ведицшш ((54400?, Оиск, ця. Октябрьская 92).

С диссертацией ыозио ознакомиться в библиотеке Оыскг^о государственного ветеринарного института.

Автореферат разослан "¿¿н 1333 г.

Зчснай секретарь специализированного

совета, доцэнт Б.И.Барабанов

1. ¡ЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность тема. Овцеводство - вамная отрасль в струк-тцре вивотноводства Российской Федерации и поэтому профилактика и борьба с инфекционными бплозняки инэет вягкое народно-хозяйственное значение.

На,первое января 191В года в России насчитывалось 121200 твс. овец и коз, В настоящее вреая поголовье овец б Российской Федерация не преназает 50-ти нияяаоиов.

По Окской области на 01.01.1910г. поголовье овец и коз составляло 514 тис, (Данные Омского областного статуправле-ниа). Тан с 1132 тнс, голов в 1.952г. количество овец в Омской области уменьвилось до 700 тле. - в 1930г. и до настоящего времени не достигло уровня 1916 года.

Кроне того, инфекционные болезни, которым долгое время не уделялось долгного внимания, ежегодно приводят к гибели значительное количество животных. Одной из таких болезней является казеозний лиафаденит. Зкононический учерб наносимый этой болезньв настолько велик, что обусловливает необходимость более глубокого изучения инфекция я разработки эффективных методов диагностики и профилактики.

До иастоацего времени ни у пас в страна, ки за рубевеа на разработана научно-обоснованные методы профилактики и ликвидации казеозиого лимфаденита.

Для успевноп борьба с болезньв необходим яйигнзшнши методы диагностики, которые позволили би устанавливать диагноз в ранний период развития инфекции.

Аллергический нетод в настоящее время явлается наиболее ранниа критерием п диагностика инфекционная балззней.

Неоднократно предпринимались попнткн использовать аллергический метод диагностики казеозиого лимфаденита у овец, (0. СаззааадпайМ. 1931; О. Сагпа, 1932; С.Н. Савегоп, 1340 и другие) однако, до сих пор никому не удалось приготовить аллерген, способный отвечать требования«, предъявляемый к препаратам данного типа.

Цель работы. _ .Разработать эффективный метод диагностики казеозиого лиафаденита овец.

Задачи исследования:

1. Разработать методику и приготовить аллерген дли прижизненной диагностики казеозного лимфаденита овец;

2. Испытать аллерген в экспериментальных и производственных условиях;

3. Разработать рекомендации и практические предложения пи диагностике казеозного лиыфаденита;

Иаучеая новизна. Впервые в навей стране предлакен препарат и методика для аллергической диагностики казеозного лиа-фаденита у овец.

Практическая ценность. На основании полцчешшх данник с позоры) прижизненного метода (аллергического) диагностики изучена эпизоотическая ситуация по казеозному лимфадениту в некоторых хозяйствах Омской области и одном из хозяйств Липецкой области.

С поыоцьв,данного метода диагностики можно проводить це-ленаправленнул и планомерную работу при оздоровлении неблагополучных хозяйств, профилактировать занос возбудителя инфекции в благополучные хозяйства..

Апробация работы. _ .Материалы диссертационной работи доложены на двух внутривузовеккх конференциях профессорско-преподавательского состава ОГВИ (г, Омск) 1387; 1988гг.; на научно-практической конференции володых ученых и специалистов в г. Чимкенте (15-17 октября 1986 г.). Уетодические рекомендации по экспериментальной аллергической диагностике казеозного лимфаденита, одобрена клинической методической комиссией Омского ветеринарного института, (протокол К от ЛВ. ноября 1992г).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано пять печатных работ.

Обгем и структура диссертации. _Диссертация изложена на 146 страницах машинописного текста и вклачает введение, обзор литературы, собственные исследования,, обсуждение получении результатов, выводи, практические предложения, список литературы и приложение, Работа иллпетрирована 33 таблицами. 4 рисунками. Список используемой литературы включает 97 источника, из них 68 иностранных.

На защиту выносится методика приготовления аллергена и рекомендации по диагностике.казеозного лимфаденита овпц. г-

2. СОБСТВЕННИК ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Натериалы и методы исследований

По теме диссертационной работы исследовании проводили: на кафедрах эпизоотологии, микробиологии и вирусологии, в аевкафедральний биохимической лаборатории Омского государственного ветеринарного института, на Омской биофлбрикв. Ппробацию препаратов, клинический осмотр овец и изучение эпизоотологии казеозного лимфаденита проводили в четырех хозяйствах Омской и одной - Липецкой области. Ветеринарно-санитарную экспертизу туи баранины на казеозный лимфаденит -за иясокомбинатах Омской области в период с 1985 по 1392гг.

Объектов для исследований слуяили лабораторные животные (100 ыорских спннок и 20 белых кипой), 54 овцы породи Со- . зетский апринос. Клиническому осмотру подвергнуто всего 169 тыс. овец породи Советский меринос четырех совхозов Омской области и 41 ?-8 овец цигайской породи совхоза "Кировский" Липецкой области, Ветеринарно-санитчрной экспертизе подвергли более СО тис. туа бараншш, принадленацих хозайстваа Омской области, а аллергическим методой на казеозний лимфаденит исследовали 40516 яивотных.

Для приготовления антигена использовали культуры С.pseudotuberculosis в R-, 1-, S формах, выделенные от болышя казеозний лимфаденитом овец хозяйств Омской области (И.Г. Трофимов, 1984; О. Заболотных, 1989). В исследованиях использовали четыре атаама СИ Я 70-R, 50 -S, 50-S, 37-П, из которых готовили фенольные антигены и четыре йтаима (НН 70-R, 63-S, 140-S, 74-R) - 'для приготовления "ликфаденииа i". Следует ответить, что зтаамы Й,Ч 70-R, 71-R. 146—S приняты в ВГНКИ (г. Москва) 10.09,91г. в качестве референтных.

"Фен^льный" аллерген. _ .Готовили по методике Копикова С В.И. Тооарницкий, 1947), модифицированной сотрудниками Сиб-ЛИБИ.

- s -

¿¡нтьгетяе свойства ~$еноаъния" препарата определяли d перекрестных аллергических реакциях. Зарааали ыорских свинок теш! не аташаани культуры C.pseudotuberculosis. из которых готовили препарата 170-R, 37-1, 56-S, 50-S). В опит брали самцов -альбиносов, одинакового'возраста и веса, Заравали пидкохно, в области спины в дезе 200 тис. микробная тел.

Аллерген вводили через 15-30 дкий поело зарааеииа, внут-рикошш в области шшота, в дозе 0,1 ыл': Реакция учитывали через 0, 24, 4В, 72 часа. Оценивали - в баллах и по увеличении толцины коешзй складки в »зесте введение : аллергена.

Оеноль'ий антиген » аллергической реакции испытали в уотваях производства к клиники на 50j - спонтанно заразиз-aiaica, 48 - иодозраваених в заболевании, 2093 - подозреваемых в заражении и 20 здоривых. Использовали комплексный препарат, приготовлений из нескольких втаыхов R, .S, I - форм. Его Вэсдил:; в дозг 0,2 ил, учет реакции проводили через 6, 12, 24 часа. Выборочно произвели убой реагируадих овец и патологический материал исследовали гистологические нетодоа.

"Прсйсциокардии Е". D основу приготовления данного антигена била пояогена методика, описанная С.Н. Langenegger. 3. Langenegger, S.S. Costa (1SC7) и нодифицированная нами, исхода из фиш- и генотипических особенностей использованных ¡¿тангзев С. pseudotuberculosis. Суть методики заключается в следуищен: бактериальную кассу суспендировали в дистиллированной соде в соотнесении 1:5 и взбалтывали в течение двух часов на вутель аппарате с последугщим автоклавированиек при 120"С 20 ¡.;шут. Сунернатант, полученный сепарированной при 4 тыс. об/кин 15 кинут, содерзал растворимый протеин, кото-рнй осаждали трихлоруксусной кислотой. Яла этого 402-нуа трихлоругсуснуа кислоту добавляли к супернатанту в спотноае-нии 1:10, видераквали в течение часа и центрифугировали при 4 тыс. oû/кш 15 кинут. Выпавший протеин двукратно отбывали 1Х-ним раствором трихлоруксусной кислота и окончательно -0.022L' раствороа гидрофосфата калия. Полученный осадок растворили б 0»00БИ растворе гидрсфосфата натрия с рН 9,0 в соотношении 1:10 - этот раствор и являлся искоаны иредукгсш u pli 7.0.

- / -

Для увеличении прока годности препарата, srs стащы??»-зацин и удобства транспортировки "прейецпзкардпн Е" подвергали лнофильноку высуачваниш. С этой кельа окончательно отпитый О.022И раствором гидрофосфата калия протеин в количестве 2-х граииов помечали s пеняделлииовае флаконы и растворами его 5 шшшлитрани 0.080Й растворов гидрофосфата натрий. Весь процесс лисфилизации проводился гш технологии вцеуниванла вакцина "Ла-Сота" на сублкнаторз ТГ-50/4 (Германии).

Концентраций протест в аидвоз и диэфалыго-вкедненном аллергенах опроделали фотоветрическш*. зч-юдов. Исследовали по три пробн каздого образца. Концентрации протеина в каждой пробе нзиерали 20 паз, вычисляя срарнЕо и средива статистическую свибку. Результаты измерений ¡юранроехяись ча поглощение оптической квве.ти и растворителя - 0.022Ü фосфатного буфера. Контролен опыта слцзил сухой очизещшй СПИД) туберкулин дли аЛОКОПИТЛЕЦИХ.

йнъигеннцв свойства "прейецнокардина Е" _ .изучали кросс-реакциях на аорских свинках, а такие на гкеперииви-.тально i¡ спонтанно зараяоннах овцах.

Четырем группам морских-свинок (по три в опнтних группах й трен чинтрояыша), ■ зарааенних лодкоаис п. области епкни сниваын двух-суточиих куль;ур в дозе 230 тыс. иикробннх тел, втааааы'1 C.pseucioluberculosls грех генетических групп и, от-иесвшшх к R- и S-$opi'au по фенотипчческин признака«, внут-рииозно вводили в области гриднпп стенки пчлларат, п дозе 0,2 ил. Реакция учитывали через нзздцп час в течение б часов, а затем через 1?.. 24, 40, 72 часа. Реакции оценивали по четнрох-балытЯ гсяалс. Для более объективной! оценки опрэ-деляли увеличение толшпш коаной складки в месте введена« аллергена.

Кроне того, на этих se свинкая спустя 30 дней сравнил»: антигенное свойства двук адлергеноз - "фсиольиого" и "прейсцннКардина Е". Свиикая с лавзй сторонк sus о та вводи.«?, "прейецнокард;«! Е", а с правой - "©енолькнй", в доза 0,2 ssr но в разных разведениях, ка;: первого так и второго, начинай с концентрировшших и - в разведения" 1:1, 1:2. 1:4, 1:8.

Учет реакций вели через !, 3. О, 12, 24. 48. 72 часа. Оценивал): в баллах и по увеличение голзшш ковной складки.

Для гистологического исследования брали кусочки легких, печени, лимфатических узлов (поверхностных вейных и паховых; средостешше, бронхиальные, наружные и внутренние срамные), коми с кеста введения аллергенов. Материал фиксировали в 10% - пом растворе'нейтрального формалина, объем которого в 5-10 раз превквал объем патологического натеоиала или жидкости Корнуа, Парафиновые срезы окрашивали гемотоксилин-эозином,' по Еаба.наву, Браве и Ван-Гизену..

Статистическую обработку результатов исследований проводили на программируемом микрокалькуляторе МК - 61 и на персональной компьвтере ЮН ХТ/АТ процессор 286/287, с применением программ Вар Ан-1 (микрокалькулятор), "Quattro", "Stat", "Statgraf" (компьютер). Набор материалов диссертационной работы осуществляли по программе "Лексикон", распечатку - по программам "Prlntfx", "Лексикон" и "Quattro" на принтере "EPSOH FX -ВО". '

2,2. РЕЗЗДЬШЫ ИССЛЕДОВАНИИ >>

2.2.1. Изучение чувствительности, специфичности и сенсибилизирующих свойств "фепольного" аллергена • ' ' ~

Испытанней на экспериментально и спонтанно зараженных овцах "фепольного" антигена, приготовленного из разных штампов С.р5еи{МиЬсгси1о518, установили нестабильность ответной реакции по времени и по интенсивности проявления. Одни серии препарата вызывали максимальное проявление реакции через 3-6 часов, другие - через 24-48. Достоверно более яркими аллергические реакции были на атаммы, отнесенные по фенотипи-ческим свойствам к Я-формаи.

Генотипические свойства втаама (отнесение его к той или иной группе), вероятно, не играет значительной роли в патогенезе, а следовательно и антигенные свойства не зависят от генотяпических. Так, напрниер. интенсивность аллергической

реакции у морских свинок, зараженных культурами втаммов 70-!? и 37-1 (генетическая группа П, хота и нсдостовср»р (Р>0,05), но отличается.

"Фенольный" аллерген из смеси втаммов кчльтур Й-, 1-, 5-форм обладал более высокими аллергизирущими свойствами по сравнению с аналогичными препаратами, приготовленными из каядой культуры по отдельности.

Попытки добиться стабилизации сроков аллергической реакции и увеличения ее интенсивности изменениям концентрации антигена, не дали желаемого результата. Однако, было установлено, что на изначально приготовленный препарат (без его концентрации или разведения) ответная реакция сенсибилизированного организма лучне.

В опыте на овцах, сенсибилизированных айвой вирулентной культурой и инактивировашшй вакциной пропернли антигенные свойства "фенольного" препарата, хранивмегося при температуре + 4'С в течение двух месяцев и одного года: а также определяли оптимальное место для введения препарата. В результате не установили достоверного различия в интенсивности ответной реакции на препараты, храниввиеса » течение двух месяцев и одного года (Р>0.05). Это дает основание утверждать о сроке годности данного антигена в. течении года (срок наблидения) без снияения им полезных свойств.

Не отметили достоверного различия в интенсивности аллергической реакции на антигены вводимые в кожу наружной поверхности уяиой ракозииы и в иодхвостовув складку. Однако, в производственных условиях на .отаре баранов-производителей неблагополучного по казеозному. лимфадениту хозяйства, в исследованиях проведенных в летнее время отмечали аллергическую реакции на "фенолышй" антиген, вводимый в кожу наружной поверхности уха; а в холодное время года (ноябрь) в данном месте реакция отсутствовала, хотя проявлялась в подх-востовой складке. Результаты данного исследования показывают, что оптимальным местом для введения аллергена во все периоды года является подхвостовая складка.

Анализ результатов применения "фенольлого" антигена для аллергической реакции более чем на 3 тыс, овец, спонтанно и

- 1С -

экспериментально зараженная С.рзеш1о{.иЬсгси1оз15, показал, что данный препарат можно с успехом использовать в комплексе противозпизоотическах мероприятий в неблагополучных по казе-озному лиифадениту овец хозяйствах, так как с его покоцьв удается выявить до 41,1%животных с висцеральной формой течения заболевания.

Сенсибилизирующие свойства "фонольного" аллергена изучали на здоровых морских свинках й овцах. Во всех случаях у нивотнвх не отвечали изменений п месте инъекции препарата при трехкратном его введении с интервалов в десять дней.

2.2.2. Изучение чувствительности, специфичность- и сенсибилизирующих свойств "прейсциокарди.ча Е"

Па лабораторных животных и овцах, сенсибилизированных С. Р5аийо1аЬегсц1о515. отрабатывали методику приготовления "нрейсцнокардина Е", методику его стандартизации к контроля, способы введения и учета аллергической реакции. В результате пришли к заклвчениа, что более активный препарат иоано получить при накапливании биомассы на еидкой питательной среде с определенным коэффициентом ее аэрации. Полученный протеин, до расфасовки и яиофильного высувивания следует хранить в ; замороженном состоянии. На качество препарата не влияет многократное оттаивание и замораживание протеина, более того, эти условия в некоторой степени увеличивав? его аллергизиру-вцие свойства. Замороаенный протеин не утрачивал полезных свойств в течение трех несяцев {срок наблюдения). Лиофильио высцвеннай препарат, без достоверной утраты активности, ыо-ает храниться при +4'С в течение года (срок наблздениа). Ок нако, апробированная нами методика лиофилышго высувиваиил не годятся для данного препарата, поскольку снижает его активность. В дальнейаеы мц планируем продолжить исследования в этой направлении - по созданию оптимально приемлемого метода висуаившшя.

Для изготовления "прейецнокардина Е" следует использовать культура с явно вирйгенннми признакам И-фораы и, ¡зеро-

- и _

ятно, с высоким содерааниеа Г+Ц в ДИК. К таким внводаа нн пришли на основании получения болев ярких аллергических реакций на введение антигена, приготовленного из протеина втаина 70-й с содерганиеи Г+Ц 71,С мол.2 и отнесенного по гомологии нуклеотидних. последовательностей ДНК к группе I. Кроые того, старые культуры и многократно пассаяированнне на искусственных питательных средах, не годятся для получения протеина. Препарат из таких культур ие обладает аляергизиру-вцини свойствами, или они слабо вщзааены. Исходный итана долаен храниться в лиофилизированном шце в холодильной камера, для получения из него биомассы допускается не более трех пересевов на питательных средах.

Сенсибилизирцнцие свойства "прейсцнокардина Е" изучали на здоровых морских свинках и овцах. Во всех случаям у аи-вотных не отмечали- изменений в месте инъзкцни препарата при

трехкратном его введении с интервалом в десять дней,

»

2.2.3. Стандартизация и хранение "прейсцнокардииа Е"

Каядуэ сериа вновь приготовленного препарата следует проверять на активность. С этой цольэ препарат в дозе 0,1 или 0,2 мл вводчть вкутрн»зпно трен морским свинкам, зера-аеиаиа вирулентной культурой С,рпвцйа!и:Ьпгсц1сз1з в дозе 200 тыс, иикробиах тел подкогно, за две-три педели до постановки аллергической пробы.

Готовить антиген следует при строзайв-?!! выполнении правил ассептики, т.к. протеин или готовый антиген нельзя подвергать тернической обработке - утрачмваштся ЙГр аялергизи-руьзие свойства, П поскольку в технологическом прцессе предусмотрено центрифугирование - ие чсклвчена возиогность обсеменения банальной микрофлорой. Контроль на стерильность препарата следует проводить выеэвоа на среда с теллуритом калия, что позволяет идентифицировать керипебактерии (оии восстанавливают веталлический теллур и приобретавт чернуп окраску) от осталышх иикроорганизаов. Контроль на наличие патогенной микрофлоры и токсичность - подкожным введениеа 1

ил препарата морским евлшаы, 0,2 ал лываа.

2.2.4. Применение "Прейсцнокардина Е" на овцах в условиях производства

Для диагностики казеозного лимфаденита в условиях производства "прейсцнокардкн Е" следуот вводить внутрикоЕно и одну из подхвостовнх складок, в дозе 0,2 мЛл Введение препарата с шшоцьв шприца Провац-Рекорд на поголовье 25 30 тысяч овец являет собой весьна трудоемкий процесс. -В згом ыы убедились при исследовании овец "фенольным" антигеном. Применение безкгольнЬго -ингектора ИБ-7 типа "Овод" или "1ыель", снабяевного специальной насадкой, в несколько раз облегчает и ускориет операции но ввег.пша диагностикума. За двухлетний иерао,-, апробации/"прейсцнокардина Е" базиголышы инъектороы рведен препарат более чеы 42-уы тыс. овец.

Нчет аллергичзской реакции на введенный "прейецнокардин Е" следует проводить через 24 часа. Хотя в ряде опытов интенсивность реакции была более выраженной через 1С часов, в условиях производства у 2/3 животных даящих положительную реакции через 24 часа -через 48 она значительно ослабевает ваи вообч« исчезает. Оценивать реакции аозно визуально но наличию признаков воспаления в песте введения препарата, однако, не всегда реакция характеризуется полным набором этих признаков или некоторые из них едва заметны. В производственных условиях вполне достаточно визуально сравнить толщину обеих подхвостовых складок - нормальной и нсслсдуп- -мой, как это предусмотрено при аналогичном исследовании на бруцеллез. Более объективнную оценку, по нашему мнении, можно получить измеренкек толдини кожной складки в месте вве"п-низ аллергена. Увеличение толщины кожной складки на ?. ми и более можно расценивать как полояительную реакции.

В условиях производства аллерген "прейецнокардин Е" испытали на 36596 взрослых животных (табл. 1) и 7100 молодняка текучего года рождения. 3 взрослых овец лишь 15.12 имели клинические признаки заболевания, а 84.62 имел:', скр«тг .япатекаЕВДЕ инфекции (висцеральная форна заболевания). Таияа

образом. дашшй препарат превосходит по чувствительности "фенольный" в два раза.

Таблица 1. Реальное и процентное выражгчие числа реагирующих на "прейецнокардин Б" взрослых овцематок, имеющих и не имеющих клинические признаки заболевании

Область, год Исследовано всего (гол) Реагировало (гол) 7. рсагироваввих

всего (гол) с кл. призн. без кл. призн. с кл. призн. без кл. призн.

Омская 199! 13936 224 55 159 24.6 75.4

Липецкая 1991 4128 126 39 87 31.0 69.0

Омская 1992 18532 306 15 341 4.2 95.8

Итого: 3659В 706 109 597' 15.4 84.fi

2.2.4.1. Распространение иазооаного. лимфаденита у мериносовых овец в Омской области

Основным критерием по которому принято судить о распространении казеозного лимфаденита являются результаты всте-рииарно-санитлриой экспертизы ту» при убое овец на мясокомбинатах, В 1991 году нами была произведена экспертиза туи овец, поступивших из 18-ти хозяйств Омской области. Специфические поражения установлены в 854 туиах. Прсвалентность на 100 животных составила 7.08, и хотя она-'превысила превалеит-ность 1990 года на 0,05 - отметили ''снижение, интенсивности инфекции. Так, например, поражение поверхностных лимфатических узлов (лимфаденитная форма заболевания) сократилось с 14.до 102. п в 1992 году - до 2.4. легких - с 55 до 532. пе чени - с 31 до ?Ш- (табл. 2). Кроме того, гнойно-некротические очаги в перечисленных органах стали менее крупными, в сравнении с таковыми в предыдущие годы.

Следует отметить, что результаты ветерипарио-санитарной экспертизы туп не отражают действительной степени распрост-

- ^

ранении инфекции в стаде кивотных, т.к. в большинстве случаев на убой отправлявт старих. больных и источенных животных, а причиной истощенна очень часто является данная инфекция.

Таблица 2. Процентное выражение частоты пораяения отдельных органов и лимфатических узлов гнойно-некротическими очагами у взрослых овец хозяйств Омской обл.

Годы Обцее кол-во туш с ñopas. X nopaseiinux органов и лимфатических узлов .

легкие печень средос-тешше лимф.узлы поверхностные л/у.

шейный паховый оба

1987 494 39.47 7,49 15,38 . 5,26 4,25 9,51

1988 448 79,46 12,72 8,93 4,69 2.01 6,70

1989 635 42.83 ,41.86 14,71 1,57 не иссл. -

1990 2084 55,61 31,24 13,10 14.64 0,19 14,83

1991 854 53.98 20,14 20.84 10,77 - 10,77

1992 877 55,42 „25.88 18,70 2,39 0,11 2,51

В среднем:

54,46 23,22 15,27 6.55 1.64 В.86

Таблица 3. Результаты весеннего клинического осмотра овцематок на казеозный лимфаденит

N п/п Хозяйство Заболеваемость (на 100 еивотных) лимфаденитной формой, по годам

1992 199! 1990 1989 1988 ¡987

1 Паи.Мельникова 0.14 0,10 - - * _

2 Ореховский - 0,00 0.10 - - -

3 50 лет СССР 0.31 0,00 0,01 0,01 - -

4 Екатеринославск. 0.16 0,03 0,20 0,45 0,57 0,63

- исследования не проводились.

- !5 -О распространении инфекции так se нельзя судить и по результатам клинического осмотра, которым можно пияпить *ииот-г кых лияь с лимфаденитной формой заболевания, < она. как это видно из табл. 2. в среднем встречается у животных при убне в 8,86% случаев, а клиническим осмотром ее можно установить еще pese (табл. 3).

Следовательно, для контроля инфекции в стаде необходим прижизненный метод, нозволавций диагностировать скрыто про-текавцуи инфекции (висцеральную форму заболевания).

2.2.4.2. Аллергическая диагностика казеозного лиыфд-денита мериносовых овец Омской области

"Прейсцнокардин Е" в производственных условиях впервые апробировали на отаре валухов (из 963 животных), неблагополучного по казеозному лимфадениту совхоза "Память Мельникова"; Аллерген вводили внутрикожно, в одну из подхвостовых складок в дозе 0.2 мл. Учет реакции производили через 24 и 48 часов. Увеличение толцины кожной складки на 2 мм расценивали как положительную реакции. Через 24 часа поело введения аллергена среднестатистический показатель (М) толцины кожной складки у 28-ми животных составил 2,7 мм, а через 48 часов -1,3 мм. Это послужило основанием считать, что учет аллергической реакции следует производить через 24 часа после введения диагностикума.

На убое трех валухов, имсваих увеличение толцины кожной складки в месте введения препарата 2,' 3 и 5 мм, обнаружили висцеральные специфические для инфекции С,рзеисЫиЬегсн1о51з очаги. .

Всего за 1991 год в четырех совхозах Омской области исследовали 14936 животных, в том числе молодняка текучего года рождения 7100 (Табл. 4). Реагировали положительно 244 (2.6/1) животных. В 1992 году из 18532 исследованных клинически и в аллергий овец выявлено 370 больных, г том числе 35В реагировали положительно (1,9Х).

Из 244 взрослых овец, реагировавших на "прейсцнокардиК Е" положительно, у 55 отмечали клинические признаки заболе-

вания в виде увеличения поверхностных вейных лимфатических узлов, что составило 24,6% от общего числа реагкровавяих. Это позволяет заключить, что 75,4% овец с висцеральной (скрытой) коркой заболевания воено выявлять аллергическим методом^диагностики.

Из 60 голов молодняка, реагировавших на аллерген, клинические признаки лиифадешшшй .формы заболевания отвечали у 43 (28,3%). Процент положительно роагирувзих ко веса исследованный кгнятак составил 0,В5, *

Таблица 4 Реальное и'процентное вараяпнйе числа реагнрувчих на "прейсцнокардин Е" аивотнах, имеющих , и не имевших клинические признаки заболевания в 1931г.

Хозяйство Исследовано всего (гол) Реагировало (гол) 7. реагироваваих

всего (гол) с кл. призн. без кл. призн. с кл. призн. без кл. призн.

ВЗР0ШЕ ОВЦЫ

Лав.Мельникова 983 28 3 ' 25 10,7 89,3

.Ореховский 750 75 30 45 40.0 60,0

50 лет СССР 0667 77 16 61 20.7 79.3

Екатеринославс. 5556 • 44 6 38 13,6 86.4

• И того: 13936 224 55 169 24,6 75.4

■ ЯП 1ЯТА

Екатеринославс. 5481 48 31 17 64.6 35,4

Пам.Мельникова 1619 12 12 - 100,0 - - .

Итого: 7100 00 43 17 71,7 Т .3

2.2.4.3. Аллергическая диагностика казеозного лимфаденита цигайских овец Липецкой области

Б октябре 1991 года при убое на Липецком мясокомбинате 1350 овец цигайской прподы, кринадлсаацих овцеплсвсовхозч "Кировский" Добровского района, у 52 зивотных в легких и пе-

чеин обнаружен очага, 'сяредз черпай скс'ч ■»«акь*;»: йЙБК к?;« тдберкдлез?ше. Прввалеятяость на 'СО овец состапяла 8,0.

Бактериологическим исследованием патологического катера-ала в Липецкой областной ветеринарной лаборатории предварительный диагноз "тдберкулез" подтверзден но был. Позтоад, бактериологическая диагностика была направлена на выделение возбудителя казеозного лимфаденита с ярикэнениеа рекомендаций по диагностике этей инфекции, лредлоаеянай И.Г.. Трофимовна и др. (1990), В рездльтате вндеяен мшероорганизн типи-рованный как СогупеЬас1ег1иа рзеш!о1иЬегси1оз1з.

В видд отсутствия каких-либо ипстрдкцкЯ в ветеринарной законодательстве относительно мер борьба и профилактики с казеознны лнвфаденитоы овец, руководители сетеринарнсго отдела государственно-кооперативного объэдияеичо "Липецкагро-иолпрои" обратились1 в Омский государственный ветеринарный инсти-ут с просьбой об оказании пово^н в диагностике и про-, филактико заболевания овец в совхозе "Кировский".

Дяа подтверждения диагноза "казеозинй лимфаденит" и установления виротн распространенна инфекции в стадо, мы совместно с ветеринарной слизбой совхоза "Кировский" я работниками районной ветеринарной станции, под контролем заве-ддицего бактериологический отделок Липецкой областной ветеринарной лаборатории, заслузенного ветеринарного врача РСОСР Налькова А.П., с 23 пя 29 цгабря провели клшшко-эллерги-чеейое исследование 4128 овец С овцематок и периярок).

Аллергическое исследование проводили введение» "прейсц-нокардина Е", которий вводили эндтрикожн? в одни из подх-востових складок в дозе 0.2 ал с паноцьп безнгзльного инъек-тора "Зазль", обарудовашюго специальной насадкой для внут-рикоаного введения свиньяи и маралам. Реакции учитывали через 24 часа. Ззеличзнио толцини когной складки в нестз введения препарата на 3 ни и более расценивали как полохятель-й«а реакции, йкавяено положительно реагирувдкх 126 из 4123 исследованных озец, в том числе - с клиническими признаками казеозного лимфаденита - 39. 27 овец с клиническими признаками заболевания не реагировали на вводимый адлергзн.

Для подтверждения диагноза убов подвергли в овец: дой*.

киселях только лоловительнуя реакцию на препарат; трех, име-сцих клинические признаки лимфаденитной форын заболевания и положительную реакции; одну - иртоценнуп овцу без наличия специфических для казеозного лимфаденита клинических признаков и с увеличение»! толщины коаной складки на 1,5 им; двух не реагирующих и не иаевцих клинических признаков заболевании (контроль).

Характерные для казеозного лимфаденита овец патологоапа-тиниче'ские изменения различной степени тягести установили нрн комиссионном обследовании органов и тканей у вести уби тих овец. У обеих контрольных оаец каких-либо макроскопических изменений в лимфатических узлах и органах не обнару-вили.

Гнойно-некротические очаги от всех убитых длх; контроля овец исследовали в бактериологкческои отделе Липецкой областной лаборатории и выделили каталазополоаительные коринебак-терии.

В U Б О Д Н

1. Впервые в навей с/£ане разработан препарат, названный в честь 100-летия открытия Прейсцон и Нокардем возбудителя инфекции - "прейецнокардин £", который представляет собой водорастворимый протеин втаыыз С.pseudotuberculosis 70-R.

2. Препарат обладает достаточной чувствительностью и специфичностью. При вуутрикогнок введении в нодхвостовум складку в' дозе 0,2 мл через 24 часа у зараженных овец появляется гипериаированная болезненная отечность с повывениеа местной теинератури. Звеличение толщины кокной складки на 2 вы и более следует оценивать как полоаительнув реакции!,

3. Сенсибилизированные С.pseudotuberculosis евцы цигайской и ыериносовой пород в одинаковой мере чувствительны к "прейецнокардину Е",

4. Применяя аллергический метод диагностики в хозяйствах Омской области установили среднюю (за 1031/92гг.) заболеваемость взрослых овец 1,37, тогда как за этот se период клиническим методов она бала установлена линь ц 0,30 (на 100

- ! ■.

исследованных-аквотнал).

3, Аллергический кетод диагностики казеозного лнисздени-та позволяет получить более объективные данные о распространении инфекции в стаде, т.к. результаты ветеринарно-санитар-ной экспертизы тув на казеозиый лимфаденит зависят от качества производимой выбраковки зиватннх в хозяйстве.

П. С помояьп "прейсцнокардина Е" аоано выявить до 05% зивотшзх с висцеральной (скрытой) формой казеозного лимфаденита. что позволяет использовать аллергический аетод диагностики в комплексе противоэпизоотчческих керопризтай в неблагополучных по инфекции С.рдеш1о1иЬегси1а555 хозяйствах.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ ПРОИЗВОДСТВА

На основании проведенных исследований, йы считаеи нсоб-хадиаиа внести в коаплекс противоэпизоотическнх и профилактических ¡геропраятий следующие пункты:

1. В период 30-ти-дневного карантина, ввозимых в благополучно е по казеозному лимфадениту овец хозяйство, овец следует подвергнуть клииико-аллергическоау исследовании. Нивот-ных, ниеищих клинические признаки заболевания и ксловительно реагирующих на вводимый аллерген "прейсцнокардии Е" изолировать, подвергнуть диагностическоау убоп для подтверадения диагноза патологоанатоническиа и бактериологический методами исследования;

2. В благополучных но казеозноку лимфадениту хозяйствах, овец следует один раз в год (через-1-2 месяца после стриаки) подвергать клинике-аллергическом:; исследовании на инфекции С. р5еис1оЪиЬсгси1

3. В неблагополучных хозяйствах - клинико-аллергичкекое исследование проводить, как мкнинун. два раза в год. Первый раз весной - перед стризкой (для выявления и изоляции боль-пых зквопшх. котсрах елздует стричь в последим очередь), и второй раз - чорез 1,3-2 яесяца г.асле стрияки (спустя инкубационный период развития инфекции). Выявленных в первое я во второя исследования больных зивотных содержать отдельной изолированней группой и при первой вознозности убивать в хо-

зайстве ила сдавать на иясокоаОкнат:

4, Хозяйство считать оздоривлешшы от казсозного лимфаденита в том случав, если в течение двух лет подряд не будет выявлено нлиники-аллергичесяим и патологоанатскпчсскиы методами исследований ни одного случая заболевания,

СПИСОК 0П9БЛИК0ВАНШ РАБОТ ПО ДИССЕРТАЦИИ

1. Ваиутин fi.fi,, Троршов Й.Г. Аа^игенцае свойства втаи-ков возбудителя С.лу!й в аллергической реакции на, экспериментально зарактннах г:орскЕХ свинках // Проблема интенсификации вивотководства в Казахской ССР. Часть!. Алма-Ата/ 1305. С.101-102,

2*/Бгпдтин ft.fi., Трофиггеа К.Г. Антигенные свойства Я-, 5-, Ь-уэри возбудителя казсозного лимфаденита овец // Эпизоотология, диагностика и профилактика инфвкц. и инваз. болезней еивотнух: !!иевуз . текат, сб .науч .тр. / ОмСХй. 198В. С.29-3!.

3. Трофимов Й.Г,, Вааутин ft.fi. Изучение аллергического кетода диагностики казвозного лимфаденита овец в. эксперименте // Диагностика и профилактика кнфекц. и инваз. заболева-ийй с.-х. 21ШОТ1ШХ в Западной Сибири: Сб. научн. трудов / ОмСХИ.. - Оиск, 1380, С. 15-19.

4. Трофимов И.Г., Вавутин fi.fi., Тарасова В.П. Инфекционная аллергия при казеозноа лимфадените овец // Эпизоотология, диагностика и профилактика инфекц. и инваз. болезней Еивотнцх. Омск, 1988. С.27-29,

5. Трофимов Н.Г., Вавутин fi.fi, Казеозний лимфаденит у цигайских овец совхоза "Кировский" Липецкой области // Эпизоотология, диагностика к профилактика кнфекц. и инваз. болезней ливотнах.' Омск, 1393. (в печати)

и И II л л л- тир /ОС. 13 Зй> г