Автореферат и диссертация по медицине (14.00.16) на тему:Универсальная реакция крови в системе Ин Витро для оценки реактивности организма

ШНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ЧЕЛЯБИНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯ

р. На правах рукописи

* ^

Ч »V

л ^

^ Ч

V

Рочев Валерий Павлович

УНИВЕРСАЛЬНАЯ РЕАКЦИЯ КРОВИ В СИСТЕМЕ ИН ВИТРО ДЛЯ ОЦЕНКИ РЕАКТИВНОСТИ ОРГАНИЗМА

14.00.16 - Патологическая физиология 14.00.36 - Аллергология и иммунология

Автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Челябинск - 1996

Работа выполнена в Пермской государственной медицинской академии, в институте экологии и генетики микроорганизмов Уральского отделения Российской академии наук, в Пермском областном институте повышения квалификации работников образования.

Научные консультанты:

Член-корреспондент РАН, доктор медицинских наук, профессор В.А.Черешиев

Официальные оппоненты:

доктор медицинских наук, профессор И.Ф.Елъкии, доктор медицинских наук, профессор С.Н.Теплова, доктор медицинских наук, профессор Б.Г.Юшков

Ведущее учреждение: институт экспериментальной медицины РАМН (Санкт-Петербург)

Защита диссертации состоится "_"_1996 года

в_час на заседании диссертационного совета Д.084.04.01

при Челябинской государственной медицинской академии по адресу: 454092, г. Челябинск, ул. Воровского, 64.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке Челябинской государственной медицинской академии.

Автореферат разослан "_"_ 1996 года.

Ученый секретарь диссертационного совета доктор медицинских наук,

профессор Л.В.Кривохижина

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время очень актуальными в медицине являются исследования основных закономерностей изменения, механизмов регуляции, разработка новых способов оценки и повышения индивидуальной величины неспецифической и специфической защиты организма от микробов, токсических препаратов и других биологически активных веществ (БАВ). Эта актуальность связана, прежде всего, с тем, что абсолютное большинство населения страдает различными заболеваниями, в механизме которых очень часто ведущую роль играет изменение величины активности и продукции неспецифических (лизоцим, комплемент) и специфических (Т- и В-лимфоциты) факторов иммунитета (ФИ).

В связи с этим для лечения больных широко применяются им-муномодуляторы (Б.С.Утешев, 1981, Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин, 1.985). При этом установлена обратная зависимость уровня повышения неспецифической защиты организма от микробов от её исходной величины при лечении больных иммуностимуляторами (Д.Н.Лазарева, Е.К.Алехин, 1985). Однако эта закономерность прослеживается не у зсех обследуемых. В связи с этим имеются трудности прогнозирования изменения индивидуальной величины неспецифической защиты эрганизма от микробов при лечении больных иммуномодуляторами. В то же время принцип индивидуализированного подхода при лече-таи больных является одной из основных задач медицины.

Специфическая защита организма от микробов основана, прежде всего, на иммунной реакции (ИР), которая проявляется измене-шем активности и числа Т- и В-лимфоцитов при наличии в ор-•анизме инфекции или в условиях вакцинации (Р.В.Петров, 1976, ^987; В.И.Покровский с соавт., 1979; М.М.Авербах с соавт., 1985). Ха-)актерной особенностью ИР является длительный скрытый период. Эта реакция определяется через несколько дней и даже недель пос-ie поступления антигена в организм. В связи с этим иммунодиагно-:тика инфекционных заболеваний и оценка эффективности вакцина-щи, основанные на определении активности и количества специфи-геских ФИ, носят поздний характер.

В литературе имеются работы, свидетельствующие об обратной ависимости величины ИР на микробный антиген от исходной актив-ости ряда ФИ (У.Бойд, 1969; И.В.Фельдблюм с соавт., 1982; -1.М.Авербах с соавт., 1985). Однако эта закономерность, как и :ри лечении больных иммуностимуляторами, прослеживается не у сех обследуемых. Недостаточно также исследована регуляторная оль полинуклеарных фагоцитов и неспецифических антител в ме-анизме регуляции ИР на антиген. В связи с этим их исходная ак-ивность и количество, как правило, не учитываются в способах рогнозирования изменения индивидуальной величины ИР при вак-инации против инфекций. В то же время определение конкретной

(к данному антигену) реактивности (реакции) ещё до иммунизации -проблема огромной важности (Р.В.Петров, 1987).

В иммунологии недостаточно изучены основные закономерности и механизмы раннего, прямого взаимодействия микробного антигена с гуморальными и клеточными ФИ. В связи с этим большой интерес представляют работы, свидетельствующие о возможности специфического изменения активности ФИ в первые минуты и часы после вакцинации и в ранние сроки инфекций - в период циркуляции в крови микробных антигенов. По определению уровня этой специфической реакции (CP) ФИ проводится ранняя иммунодиагностика инфекционных заболеваний (Е.И.Житова, 1948; В.Н.Каплин, 1969, 1980, 1982; В.А. Черешнев, 1970; А.Ф.Колесникова, 1984). Однако недостаточно исследованы основные закономерности формирования и механизмы этой CP на микробный антиген.

В настоящее время оценка уровня неспецифической и специфической защиты организма от микробов проводится, как правило, путём выделения и дальнейшего исследования активности и количества отдельных клеточных и гуморальных ФИ. Однако большинство способов такой оценки отличается большой трудоёмкостью и недостаточной точностью. При исследовании требуются дорогостоящие, дефицитные реактивы и сложная аппаратура. Общим же недостатком всех способов является то, что они, как правило, не позволяют оценить одновременно суммарную способность клеточных и гуморальных факторов цельной крови агглютинировать, фагоцитировать и фиксировать микробный антиген.

Цель работы - разработать новые способы исследования универсальной реакции крови в системе ин витро для оценки реактивности организма.

Задачи исследования:

1. Разработать простые, точные, малотрудоёмкие, информативные экспресс-способы оценки антимикробной активности (AMA) цельной крови.

2. Исследовать основные закономерности изменения AMA крови при, лечении больных иммуномодуляторами, оперативными способами и в условиях санатория.

3. Изучить в системе ин витро влияние биологически активных веществ на AMA крови.

4. Разработать способы отбора лиц для лечения иммуностимуляторами и прогнозирования изменения неспецифической защиты организма от микробов при лечении больных.

5. Исследовать основные закономерности специфического изменения активности ФИ на микробный антиген и разработать оптимальные условия для оценки этой реакции.

6. Разработать способы отбора лиц для вакцинации против инфекций.

7. Изучить возможности использования разработанных способов для иммунодиагностики инфекционных заболеваний как со специфическим повышением, так и со снижением активности ФИ на микробы.

8. Исследовать роль антител, фагоцитов, эритроцитов, генетических факторов, иммуномодуляторов и токсических веществ в механизмах регуляции специфического изменения активности ФИ на микробный антиген.

9. Обосновать и сформулировать основные правила, принимающие участие в механизмах регуляции универсального, дозозави-симого и разнонаправленного характера изменения индивидуальной величины активности ФИ под влиянием иммуномодуляторов, токсических веществ, микробных антигенов и других факторов.

Научная новизна. Впервые для оценки неспецифической и специфической защиты организма от микробов разработаны принципиально новые способы, основанные на определении AMA цельной крови по способности ее клеточных и гуморальных факторов одновременно агглютинировать, фагоцитировать и фиксировать микробный антиген.

Установлено, что у абсолютного большинства больных с различными заболеваниями при лечении их иммуномодуляторами наблюдается обратная зависимость уровня повышения неспецифической защиты организма от микробов от её исходной величины.

Выявлен универсальный, дозозависимый и разнонаправленный характер изменения AMA крови ин витро под влиянием БАВ, который проявляется в том, что при контакте крови с большими концентрациями адреналина гидрохлорида и токсических веществ отмечается снижение уровня AMA крови, прямо коррелирующее с её исходной величиной. И наоборот, при взаимодействии крови с иммуностимулирующими концентрациями БАВ (дибазол, левамизол, ко-карбоксилаза и др.) наблюдается повышение уровня AMA крови, которое находится в обратной корреляционной зависимости от ее исходной величины.

Установлен универсальный, дозозависимый и разнонаправленных! характер специфического изменения активности ФИ на микробный антиген. Эта универсальность проявляется в том, что при взаимодействии крови с антигеном высокой активности отмечается снижение уровня AMA крови и фагоцитарной активности лейкоцитов (ФАЛ), которое находится в прямой корреляционной связи с их исходной величиной. И наоборот, под влиянием иммуностимулирующей концентрации антигена в системе ин витро и после вакцинации людей и экспериментальных животных наблюдается повышение активности ФИ в форме усиления AMA крови, фагоцитоза и продукции иммунных антител, обратно коррелирующее и с их исходными величинами. Реакция ФИ на микробный антиген носит строго специфический характер, который проявляется в том, что в отношении

контрольных антигенов активность ФИ не меняется или отмечается снижение их величин.

Доказано регуляторное влияние полинуклеарных фагоцитов и неспецифических антител на величину изменения продукции иммунных антител при вакцинации людей против инфекций.

Установлено регуляторное влияние антител, эритроцитов, генетических факторов на механизмы раннего распознавания фагоцитами микробного антигена.

Обоснованы и сформулированы основные правила, участвующие в механизмах регуляции универсального, дозозависимого характера изменения индивидуального уровня активности ФИ под влиянием иммуномодуляторов, оперативных способов лечения, микробных препаратов, токсических веществ и других факторов: первое правило - "правило исходной величины активности ФИ", второе -"доза БАВ - эффект".

Практическая ценность работы заключается в том, что в ней разработаны простые, точные, малотрудоемкие, информативные, экспресс-способы оценки неспецифической и специфической защиты организма от микробов, три из которых: методика исследования AMA, антибактериальной активности (АБА) и бактериофиксирую-щей активности (БФА) крови позволяют одновременно оценить суммарную способность как клеточных,так и гуморальных факторов цельной крови агглютинировать, фагоцитировать и фиксировать микробный антиген. Способы отличаются высокой точностью - процент средней ошибки колеблется от 3,1 до 6; практически 100-процентной воспроизводимостью, простотой, и экспрессностью исполнения; позволяют оценить индивидуальную величину неспецифической и специфической защиты организма, контролировать и прогнозировать эффективность лечения.

Способы, основанные на определении величин изменения AMA и АБА крови ин витро под влиянием активизирующих концентраций иммуномодуляторов, повышают точность прогнозирования изменения индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов в сравнении с методами, в которых оценивается только исходная активность ФИ, с 84% до 94-97% больных, что позволяет проводить отбор лиц для лечения иммуностимуляторами.

В связи с тем, что выявлена прямая корреляционная связь между уровнями специфического изменения фагоцитоза при взаимодействии крови ин витро с активизирующими концентрациями вакцин или иммунных антител и специфического изменения ФАЛ и продукции иммунных антител на микробный антиген разработан способ отбора лиц для вакцинации против бактериальных инфекций, позволяющий прогнозировать эффективность иммунизации у 80-90% обследуемых лиц.

Установлена обратная зависимость между исходными величинами индекса соотношения (ИС) титров антител (ТА) и уровнями

специфического повышения продукции иммунных антител к дифтерийному и столбнячному анатоксинам, что позволяет повысить точность прогнозирования эффективности вакцинации в сравнении с методом,основанным только на определении исходных ТА к анатоксинам, с 85 до 92% (91-97%) обследуемых - проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций.

Установленный универсальный, дозозависимый и разнонаправленный характер специфического изменения активности ФИ на микробный антиген позволяет рекомендовать разработанные и применяемые в иммунологии способы для иммунодиагностики инфекций как со специфическим повышением, так и со снижением активности ФИ. Использованный для этой цели модифицированный способ оценки специфического фагоцитоза в сравнении с методом, основанным только на определении величины ФАЛ к специфическому объекту фагоцитоза, повышает точность иммунодиагностики гонорейной инфекции на +70%.

Установлено, что точность количественной оценки индивидуальной величины неспецифической и специфической активности клеточных ФИ повышается не менее чем в два раза при уменьшении времени инкубации смеси с 45 мин до 10-15 мин при температуре 37°С. При этом выявлено, что с увеличением времени обработки смеси более 15 мин определяется суммарный результат исходной и стимулированной активности клеточных ФИ, связанной со специфическими активизирующими свойствами индикаторной концентрации микробного антигена, что приводит к резкому снижению разницы в индивидуальных величинах активности ФИ.

Реализация и внедрение работы. По материалам работы получены шесть авторских свидетельств и патентов, одно положительное решение и одна приоритетная справка на патент.

Разработанная нами методика исследования БФА крови с успехом была использована для ранней иммунодиагностики дизентерии (В.Н.Каплин, Е.З.Лейбович, 1976, 1979), оценки индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов в условиях клиники и эксперимента (Л.А.Иванова, 1976, 1980; Л.А.Иванова с соавт., 1978; В.Н.Каплин с соавт., 1976, 1984; А.И.Фефелов с соавт., 1976; А.А.Гаслова, 1978; В.Л.Некрылов, 1984; Т.С.Москвина, 1986; и др.); определения уровня аллергии при различных заболеваниях (В.Н.Каплин с соавт., 1976; Ю.И.Шилов, 1976; Л.В.Софронова, 1978). Авторами полностью подтверждены высокая точность и информативность методики исследования БФА крови.

Модифицированный способ определения специфического фагоцитоза широко применяется для иммунодиагностики различных инфекционных заболеваний (Г.А.Клевцова, Н.А.Минина, 1984; И.Н.Дунец, 1985; И.Н.Дунец, Г.И.Кунщикова, 1986; В.Н.Каплин, 1986 и

дрО-

Универсальный характер неспецифического изменения ФАЛ подтвержден в наших совместных исследованиях с Л.А.Мозговой (1986, 1988, 1989), в которых установлена обратная зависимость уровня повышения фагоцитоза от его исходной величины при облучении крови ин витро и слизистой носа кроликов гелий-неоновым лазером.

К настоящему времени разработаны и внедрены в научно-исследовательскую работу ряда вузов г.Перми два новых способа оценки неспецифической защиты организма от микробов. Первый способ позволяет оценить резистентность организма от микробов по AMA слюны (Рочев В.П., Мозговая Л.А., Фокина Н.Б. Способ контроля эффективности лечения заболеваний полости рта/ Заявка на патент. Положительное решение N 93008702 от 06.05.95.).

Второй способ основан на оценке концентрации антител в слюне (Рочев В.П., Мозговая Л.А., Фокина Н.Б. Способ определения неспецифической защиты организма от микробов/ Заявка на патент. Приоритетная справка N 95101368 от 31.01.95).

Установлено, что способы отражают величину неспецифической защиты организма от микробов как здоровых, так и больных, и позволяют контролировать и прогнозировать эффективность лечения.

Выявленные закономерности изменения активности ФИ под влиянием различных БАВ были использованы при описании основных закономерностей изменения, механизмов регуляции различных видов памяти, в том числе и иммунологической, в методическом пособии (Рочев В.П., Рочева Л.И., Яницкая Т.Е. Основы внимания и памяти. Пермь: ПОИПКРО. 1996, 70 е.). Материалы этого пособия широко применяются в учебно-методической и научно-исследовательской работе в системе образования и здравоохранения г.Перми и области.

Апробация работы. Материалы диссертации докладывались и обсуждались на 7 Северо-Кавказской конференции по иммунологии, аллергологии и молекулярной биологии (Краснодар, 1983), на 12 научной конференции патофизиологов Урала (Пермь, 1986), на научно-практической конференции стоматологов (Пермь, 1987), на научно-практической конференции токсикологов (Пермь, 1987), на региональной конференции природноочаговых инфекций (Омск, 1988), на конференции по иммунологии (Челябинск, 1988), на 13 научной конференции патофизиологов Урала (Ижевск, 1989), на Всесоюзном съезде иммунологов (Сочи, 1989), на Международном симпозиуме по иммунологии (Цхалтубо, 1990), на Международном симпозиуме по психосоматической медицине и психотерапии (Германия, Кельн, 1992), на межвузовской научно-практической конференции сотрудников образования и медицины Уральского региона (Пермь, 1993), на Международной конференции токсикологов, эпидемиоло-

-ов и экологов (Москва-Пермь, 1994), на Международной конференции по иммунореабилитации (Турция, 1996).

Публикации. По теме диссертации опубликовано 52 работы, в гом числе получено 6 авторских свидетельств и патентов, 1 положительное решение и 1 приоритетная справка на патент.

Структура и объём работы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследо-заний, в том числе разработанных автором, 3 глав, излагающих ре-»ультаты собственных исследований, обсуждения, выводов, практи-1еских рекомендаций и указателя литературы. Материалы диссертации изложены на 292 страницах машинописного текста, иллюстри-зованы 49 таблицами и 26 рисунками, литературный указатель жлючает 494 отечественных и зарубежных авторов.

На защиту выносятся следующие положения диссертации:

1. Для оценки индивидуальной величины неспецифической и •лецифической защиты организма от микробов, контроля и прогно-¡ирования эффективности лечения, отбора лиц для лечения имму-[остимуляторами и вакцинации против инфекций, иммунодиагности-:и инфекционных заболеваний разработаны точные, информа-■ивные, простые экспресс-способы.

2. Методики исследования AMA, АБА и БФА крови отражают |ДИОвременно суммарную способность гуморальных и клеточных факторов цельной крови агглютинировать, фагоцитировать и фик-ировать микробный антиген. Эти способы отличаются высокой точ-юстью - % ошибки составляет не более 4-6, практически 100% вос-[роизводимостью, простотой и экспрессностью, позволяют контроли-ювать и прогнозировать эффективность лечения.

3. По уровням изменения AMA и АБА крови ин витро под лиянием микроконцентраций иммуностимуляторов можно достаточ-о точно прогнозировать изменение индивидуальной величины не-пецифической защиты организма от микробов у 94-97% больных, то позволяет использовать эти способы для отбора лиц при лечении х иммуностимуляторами.

4. По уровню специфического изменения фагоцитоза при вза-модействии крови ин витро с иммуностимулирующими концент-ациями иммунных антител можно прогнозировать специфическое зменение индивидуальной величины ФАЛ и продукции иммунных нтител при вакцинации у 80-90% обследуемых. В связи с этим раз-аботанный способ может быть полезным при вакцинации против нфекций.

5. Выявленная обратная корреляционная связь между исход-ыми индивидуальными величинами ИС ТА и уровнями специфиче-кого повышения ТА к дифтерийному и столбнячному анатоксинам озволяет прогнозировать эффективность вакцинации у 92%(91-97%)

обследуемых - проводить отбор лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций.

6. Изменения индивидуальной величины активности ФИ под влиянием иммуномодуляторов, токсических веществ и микробных препаратов подчиняется двум правилам: "правилу исходной величины активности ФИ" и правилу "доза (концентрация) БАВ - эффект".

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для решения поставленных задач использовали бактериологические, иммунологические, фармакологические, патофизиологические и статистические методы.

Исследования проведены с кровью 223 доноров, 225 больных с различными соматическими и инфекционными заболеваниями, 129 лиц, подлежащих вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций, 56 кроликов и 18 мышей чистой линии, со слюной 409 здоровых и больных детей и взрослых лиц.

Методы исследования. В работе были разработаны и использованы следующие способы оценки неспецифической и специфической защиты организма от микробов:

1. Методика исследования AMA крови. (Авторское свидетельство. N 1640652 от 8.12.1990 г, соавт. Н.И.Аверьянова, A.A. Гаслова). Эта методика позволяет оценить способность гуморальных и клеточных факторов цельной крови одновременно ин витро нейтрализовать активность микробного антигена с определением величины AMA цельной крови по остаточной активности этого антигена в антигенных единицах (АЕ) в реакции торможения пассивной гемагглюти-нации (РТПГА) с использованием иммунных сывороток.

Для оценки уровня AMA крови к 0,1мл крови, стабилизированной гепарином, добавляли 0,1 мл антигена высокой активности 8-15 АЕ/10 мл в РТПГА. Смесь выдерживали при температуре 37°С в течение 10-15 мин. Затем для снижения метаболических процессов в клетках крови смесь охлаждали до температуры 3-5°С. При этой температуре снижается или полностью прекращается активность фагоцитов (А.Д. Адо, 1961). Однако при низкой температуре сохраняется способность антигена вступать в контакт с иммунными антителами.

Для определения остаточной активности антигена к смеси добавляли иммунную сыворотку, специфичную к этому микробному антигену. Сыворотку получали из неадсорбированной иммунной сыворотки путём центрифугирования при 3 000 об/мин в течение 15 мин для осаждения её конгломератов и разводили до титра 8-32 АЕ в 0,5 мл в РПГА с использованием физраствора.

После контакта смеси с иммунной сывороткой при температуре 3-5°С в течение 20-30 мин пробы центрифугировали при 1500 об/мин 5 мин. Супернатант в количестве 0,5 мл переносили в планшет для

макроварианта постановки РПГА, раститровывали и по инструкции определяли активность антигена в АЕ в РТПГА. Одновременно ставили контрольные исследования. В них определяли исходный титр в РПГА и активность антигена в АЕ в РТПГА. По разнице активности добавленного антигена в кровь и супернатанта после контакта крови с антигеном определяли AMA крови в АЕ.

Из рис.1 видно, что величина AMA крови на 4/5 состоит из активности антигена, блокированного гуморальными факторами крови, и около 1/5 приходится на нейтрализацию активности антигена клетками крови. Методика отличается простотой исполнения, высокой точностью - процент средней ошибки составляет около 5, практически 100% воспроизводимостью.

Эритроциты 15%

Рис.1. Роль гуморальных и клеточных факторов в формировании величины антимикробной активности цельной крови

2. Способ отбора лиц для лечения иммуностимуляторами.

(Патент. N 2007722 от 15.02.1994 г., соавт. В.А.Черешнев, Н.И.Аверьянова). Эта методика основана на исследовании уровня изменения AMA крови ин витро под влиянием активизирующих концентраций иммуностимулятора с последующим делением больных на две группы. И у лиц первой группы с повышением величины AMA крови предполагали усиление величины неспецифической защиты организма от микробов, а у обследуемых второй группы со снижением AMA крови или без изменения к микробам реакцию крови не отмечали или определяли снижение ее уровня после лечения.

3. Методика исследования АБА крови. (Авторское свидетельство. N 1814070 от 10.10.1992 г., соавт.: В.А.Черешнев, Н.Г.Смердова).

Эта методика основана на определении суммарной способности клеточных и гуморальных факторов цельной крови агглютинировать, фагоцитировать и фиксировать бактерии и оценке их количества в млн. микробных тел с использованием калориметра фотоэлектрического концентрационного.

Для исследования величины АБА крови использовали взвеси коммерческих,стандартизованных бактериальных диагностикумов: сальмонелл брюшного тифа, паратифа В и другие. Взвесь диагно-стикума с содержанием в 1 мл 3 млрд. микробных тел тщательно смешивали и разводили физраствором натрия хлорида. Затем в объёме 0,25 мл исходную взвесь бактерий и различные её разведения переносили дозатором в пробирки. Эту взвесь дополнительно разводили физраствором до объёма 2.25 мл. В качестве контрольной пробы использовали аналогичное количество физраствора. Определяли оптическую плотность в % калориметром фотоэлектрическим концентрационным (КФК-2 или КФК-3) с использованием кювет объёмом 2,25 мл и длины волны 227-230 нм. По результатам исследований составляли шкалу, позволяющую определить соответствие 1% оптической плотности количеству бактерий в млн. микробных тел. В коммерческих бактериальных диагностикумах с содержанием 1 мл 3 млрд. микробных тел 1% оптической плотности соответствует, как правило, 12-29 млрд. микробных тел.

Перед началом исследований АБА крови взвесь бактериального диагностикума тщательно смешивали и для осаждения крупных конгломератов бактерий её центрифугировали при 1 500 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную взвесь бактерий переносили в другую пробирку и использовали для оценки АБА крови. Для этой цели к 0,10-0,25 мл крови, взятой из пальца или вены, и стабилизированной гепарином из расчёта 50 АЕ/мл, добавляли 0,25 мл взвеси бактерий с содержанием 200-400 млн. микробных тел, к контрольной пробе крови приливали аналогичное количество физраствора. Смесь смешивали и выдерживали при температуре 37 °С в течение 10-15 мин, центрифугировали при 1500 об/мин 5 мин. Супернатант смеси в количестве 0,25 мл переносили в пробирки, разводили в 2,25 мл физраствора, определяли оптическую плотность в % опытной и контрольной пробы крови. Из исходной величины оптической плотности бактерий вычисляли сумму, состоящую из оптической плотности су-пернатанта, контрольной пробы и коэффициента поправки. Полученный показатель умножали на количество бактерий, соответствующего 1% оптической плотности, и получали величину АБА крови в млн. микробных тел.

Коэффициент поправки для различных взвесей бактериальных диагностикумов величина постоянная и составляет от 7 до 20%.

Исследованиями выявлена высокая точность способа - процент средней ошибки не превышает 6, практически 100% воспроизводимость, простота и экспрессность исполнения. Результаты исследова-

ний известны в период завершения опыта. В серийных исследованиях для определения одной величины АБА крови требуется не более 5-10 мин.

Из рис.2 видно, что величина АБА крови состоит на 50% из количества бактерий, блокированных клеточными и на 50% гуморальными факторами крови. Из этой величины на долю фагоцитоза приходится не более 5% из бактерий, связанных кровью.

4. Методика исследования БФА крови была разработана автором совместно с В.Н.Каплиным и Л.В.Софроновой (1976) и основана на взаимодействии крови с бактериями, меченными радиоактивным изотопом, с последующей оценкой количества бактерий по их радиоактивности, фиксированных кровью.

Для метки бактерий применяли радиоактивный фосфор - 32 (К2НРО4), оптимальная активность которого для метки бактерий составляет 0,37 мБк. Фосфор этой активности в объёме 0,1-0,2 мл добавляли на поверхность питательной среды, делали посев бактерий.

Для приготовления взвеси бактерий, меченных радиоактивным фосфором, к выращенной культуре бактерий добавляли 4-6 мл физраствора натрия хлорида, тщательно встряхивали и взвесь переносили в цетрифужную пробирку. Бактерии центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин для осаждения крупных конгломератов бактерий. Осадок удаляли, а надосадочную взвесь бактерий центрифугировали при 3000 об/мин в течение 10 мин для освобождения от невключившегося в бактериальные клетки радиоактивного фосфора.

Антитела 50%

Эритроциты 45%

Фагоциты 5%

Рис.2. Значение клеточных и гуморальных факторов в формировании величины антибактериальной активности цельной крови

К осадку бактерий, полученному после отмывания от невклю-чившегося в бактерии радиоактивного изотопа, добавляли надосадоч-ную жидкость бактерий, выращенных на питательной среде без добавления радиоактивного фосфора. Основанием для использования супернатанта из обычных бактерий явились данные литературы, свидетельствующие о том, что специфичность ранней СР фагоцитов на микробы связана, прежде всего, липо- и полисахаридами, которые легко отделяются от бактериальных клеток (В.Н.Каплин, 1969; Р.Б.Цынкаловский, А.К.Маслов, 1970, и др.).

Смесь тщательно встряхивали и центрифугировали при 1000 об/мин в течение 10 мин. Последнее центрифугирование необходимо для получения взвеси бактерий, неоседающей при центрифугировании при указанном числе оборотов. Взвесь разводили физраствором по стандарту мутности. Оптимальная концентрация стафилококков и кишечных палочек для оценки БФА крови составляет 1 млрд., противобруцеллёзной и коклюшных вакцин - около 3-4 млрд. микробных тел в 1 мл физраствора. Наиболее оптимальной является радиоактивность 0,1 мл взвеси бактерий, дающая около 800-1200 имп/мин.

Кровь стабилизировали гепарином, затем её смешивали с равным объёмом взвеси бактерий и выдерживали при температуре 37 °С в течение 15-20 мин. К пробам приливали по 4 мл физраствора, смешивали и центрифугировали 10 мин при 900 об/мин. Надосадочную жидкость с нефиксированными бактериями удаляли, а осадок переносили в чашки-мишени, которые высушивали и измеряли радиоактивность бактерий радиометром Б-4. С учётом исходной радиоактивности индикаторной дозы бактерий вычисляли количество бактерий в млн. микробных тел, фиксированных цельной кровью.

В результате исследований установлено, что величина БФА является суммарным показателем способности одновременно клеточных и гуморальных факторов цельной крови связывать бактерии. Как видно из рис.3, показатель БФА крови формируется на 3/4 из бактерий, связанных эритроцитами, на 1/4 из их агглютинации. Фагоцитоз в общей величине БФА крови составляет не более 5%.

Установлено, что оптимальными условиями для исследования БФА крови является использование гепарина в качестве стабилизатора в дозе 50 АЕ/мл, крови в объёме 0,1 мл, такое же количество бактериальной взвеси, содержащей 1-4 млрд. микробных тел в 1,0 мл и экспозиция смеси в течение 10-20 мин при температуре 37°С.

Методика отличается высокой точностью исследований, средняя ошибка исследования составляет 3,3%, простотой исполнения.

Антитела 20%

Фагоциты 5%

Эритроциты \______/

75%

Рис.3. Роль клеточных и гуморальных факторов в формировании величины бактериофиксирующей активности цельной крови

5. Способ отбора лиц для вакцинации против бактериальных инфекций (Авторское свидетельство. N 1800367 от 9.10.1992 г., соавт.: В.А.Черешнев, И.В.Фельдблюм) основан на взаимодействии крови ин витро с иммуностимулирующими концентрациями вакцины или иммунных антител и делении всех обследуемых лиц на две группы. При этом у лиц первой группы с повышением ФАЛ ин витро доказали специфическое увеличение продукции иммунных антител и фагоцитоза после вакцинации. И наоборот, у обследуемых второй группы со снижением или без изменений фагоцитоза ин витро реакцию со стороны ФИ не определяли или отмечали специфическое снижение их активности после вакцинации.

6. Способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций (Авторское свидетельство. N1720006 от 16.10.1991 г., соавт.: И.В.Фельдблюм). При разработке этого способа были учтены данные литературы, свидетельствующие о высокой прямой корреляционной связи между ТА здоровых людей к антигенам дизентерийной группы бактерий, сальмонелл, риккетский Провачека, вируса герпеса и других микробов (И.П.Корюкина, С.В. Дворянская, 1984; В.Н.Каплин, 1986; Н.А.Терехина, Н.Г.Гольдфельд, 1986; Л.В.Шалгина, 1986).

Эти данные литературы полностью подтвердились в наших исследованиях, что позволяет сделать заключение, что именно ТА к антигенам дизентерийной группы микробов и других лучше всего отражают исходную индивидуальную неспецифическую гуморальную защиту организма от микробов, от величины которой зависит индивидуальный уровень специфического изменения продукции иммунных антител к вводимой вакцине. Однако в наших исследованиях не выявлена прямая корреляция между ТА к дифтерийному

и столбнячному анатоксинам и антигенам дизентерийной группы бактерий, что, по-видимому, связано с массовой вакцинацией населений против дифтерийной и столбнячной инфекций. В связи с этим при разработке способа отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций одновременно исследовали ТА к анатоксину и контрольному антигену шигелл Ньюкестл не менее, чем у 25 лиц, подлежащих вакцинации. Вычисляли индивидуальные величины ИС ТА и по их величинам всех обследуемых делили на две группы. У лиц первой группы с низким индексом, равным, соответственно, менее 3,0 и 1,2 и ниже прогнозировали повышение продукции иммунных антител к дифтерийному и столбнячному анатоксинам. У обследуемых второй группы с высоким индексом реакцию не определяли или отмечали специфическую депрессию продукции иммунных антител к этим анатоксинам.

7. Способ определения специфического фагоцитоза (Авторское свидетельство. N 1627992 от 15.10.1990 г., соавт.: В.Н.Каплин, Г.А.Клевцова, Н.А.Минина., Л.П.Санакоева). Этот способ отличается от других методик оценки фагоцитоза тем, что в нём исследовали одновременно величину ФАЛ как к специфическому, так и к контрольному объектам фагоцитоза. В качестве объектов фагоцитоза использовали взвеси эритроцитов коммерческих антигенных диагностику-мов.

При определении величины специфической ФАЛ для иммунодиагностики гонорейной инфекции применяли объекты фагоцитоза собственного изготовления. К 0,2 мл 50% взвеси формалинизирован-ных контрольных эритроцитов для РПГА добавляли 1 мл гонококковой вакцины с содержанием 1 млрд. микробных тел. Смесь обрабатывали при температуре 37СС в течение 1 часа, центрифугировали со скоростью 1500 об/мин 10 мин. Супернатант удаляли, а осадок разводили физраствором до 1% концентрации эритроцитов. В качестве контрольных объектов фагоцитоза использовали взвеси эритроцитов антигенных диагностикумов шигелл Зонне, Ньюкестла и других, предварительно окрашенных 1% раствором анилинового красителя при температуре 100°С в течение 30 мин и отмытых физраствором путём многократного центрифугирования. Затем осадок разводили физраствором до 1% концентрации эритроцитов, которые прокрашивались в чёрный цвет.

Для оценки ФАЛ одновременно к крови в соотношении 1:1 добавляли взвеси специфических и контрольных объектов фагоцитоза. Смесь обрабатывали при температуре 37°С в течение 10-15 мин. Делали мазки и красили объекты по методу Романовского-Гимза. В мазке специфические объекты фагоцитоза прокрашивались в синий цвет, контрольные - в чёрный.

В результате исследований установлено, что разработанная методика определения специфического фагоцитоза проста в исполнении, точна и унифицирует исследования ФАЛ.

Кроме разработанных нами способов для оценки иммунного статуса в работе использовали РПГА и РТПГА, которые ставили по общепринятым методикам.

При определении величины ФАЛ использовали методики, описанные различными авторами (Н.И.Латышева, 1955, 1959; В.К.Берзинь, М.Я.Блумберг, 1958; В.Н.Каплин, 1964, 1969; и др.).

Для количественной оценки специфического изменения актив-нос-ФИ на микробный антиген использовали ИС ФИ, отражающего одновременно уровни активности ФИ как к специфическому, так и к контрольному антигену (В.Н.Каплин, Е.З.Лейбович, 1979).

Статистические методы. Результаты исследований обрабатывали статистически с использованием пакета программ для компьютера, любезно предложенного доктором медицинских наук В.В.Юшковым, а также пакет DJASTA на ПК IBM АТ/386; вычисляли t-критерий Стьюдента, коэффициенты корреляции. При ограниченном количестве показателей - менее 7 в ряде случаев использовали альтернативные математико-статистические методы (Е.В.Монцевичюте-Эрингене, 1964).

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

Исследование закономерностей изменения AMA цельной крови под влиянием иммуномодуляторов, токсических веществ и оперативных способов лечения. С использованием методик оценки AMA к АБА крови изучали основные закономерности изменения индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов при лечении больных детей и подростков с различными соматическими и инфекционными заболеваниями им-муномодуляторами, хирургическими способами и в санаторных условиях.

В первой серии исследовали закономерности изменения AMA крови у 18 часто и длительно болеющих 6-летних детей при их лечении дибазолом (иммуностимулятор, адаптоген). Результаты исследований введены в табл.1.

Как видно из таблицы средняя исходная величина AMA крови у детей составляет 3,8 АЕ, индивидуальные её показатели колеблются от 1,0 до 7,0 АЕ. Учитывая среднюю величину AMA крови, всех детей делили на две группы. К первой отнесли больных с AMA крови 4,0 АЕ и ниже (13 человек), ко второй - выше 4,0 АЕ (5 человек).

После профилактического лечения дибазолом отмечается склонность к повышению средней величины AMA крови с 3,8 до 4,0 АЕ. В то же время у детей первой группы с низкой исходной величиной AMA крови отмечается статистически достоверное повышение её величины с 3,1 до 4,0 АЕ. Из 13 детей этой группы у 11 наблюдается усиление AMA крови, у 1 её величина не меняется и только у 1 ребёнка определяется снижение её уровня.

Таблица!

Влияние дибазола на антимикробную активность крови у детей

Группа Количество детей Статистические показатели Антимикробная активность крови

обсле- до лечения после лечения

дуемых в АЕ в АЕ в % к фону

1 13 М±т 3,1±0,26 4,0+0,13* 129

1,0+4,0 3,5±4,5 88±350

II 5 М±т 5,7+0,37 3,9±0,19 68

5,0+7,0 3,5±4,5 58+80

1-11 18 М+т 3,8+0,36 4,0±0,10 105

1,0±7,0 3,5±4,5 58±350

Примечание:* - Р<0,05 в сравнении с исходной величиной.

И наоборот, у детей второй группы отмечается снижение средней величины AMA крови с 5,7 до 3,9 АЕ. При этом у всех детей из этой группы определяется снижение AMA крови.

Таким образом, по исходной величине AMA крови прогнозируется изменение индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов у 16 из 18 (89%) обследуемых больных детей до начала их лечения дибазолом.

У 18 обследуемых наблюдается обратная зависимость между исходной величиной AMA крови и уровнем её повышения после лечения дибазолом (г = - 84±0,07, р < 0,001).

Наблюдение за изменением состояния здоровья проведено у 13 обследуемых в течение 10 лет. При этом установлено, что у трех из 16-летних подростков из 8 обследуемых первой группы определяются хронические заболевания: у 1 - гломерулонефрит, 1 - тонзиллит и 1 - холецистит. В то же время у обследуемых второй группы (пять подростков) хронических заболеваний не выявлено. Таким образом, хронические заболевания формируются у обследуемых именно первой группы (у 38% подростков), что является подтверждением о правомерности деления обследуемых больных детей по исходной величине AMA крови на две группы.

Аналогичные закономерности обратной зависимости уровня повышения AMA крови от её исходной величины установлены у 17 больных детей с энцефалопатией смешанного генеза под влиянием лечения липамидом и поливитаминами в возрастных дозировках, у 27 детей с различными соматическими заболеваниями при их лечении в детском пульмонологическом санатории "Светлана" г.Перми, у 16 детей и подростков с абсцессами и флегмонами челюстно-лицевой области под влиянием лечения оперативными способами, антибиотиками и поливитаминами, у 12 детей с гемангиомой кожи при местном лечении клюкокортикоидами и у 7 детей с врожденными

уродствами челюстно-лицевой области под влиянием хирургических способов лечения. В целом по исходной величине AMA и АБА крови прогнозируется изменение индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов у 84-88% обследуемых больных лиц при их лечении.

Таким образом, с использованием разработанных способов оценки AMA и АБА крови установлен универсальный характер изменения индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов при лечении больных лиц иммуномодулято-рами, хирургическими способами и в санатории. Эта универсальность проявляется, прежде всего, в том, что у абсолютного большинства больных с различными заболеваниями при их лечении иммуномоду-ляторами, хирургическими способами и в условиях санатория отмечается обратная зависимость уровня повышения неспецифической защиты организма от микробов и от её исходной величины.

Аналогичный универсальный, дозозависимый и разнонаправленный характер неспецифического изменения индивидуальной величины AMA крови выявлен и ин витро под влиянием различных БАВ, который проявляется в том, что под влиянием иммуностимулирующих концентраций дибазола, левамизола, тиамина бромида, адреналина гидрохлорида, преднизолона, кокарбоксилазы отмечается повышение величины AMA крови, обратно коррелирующее с её исходной величиной. И, наоборот, после контакта крови с высокими концентрациями БАВ: преднизолона, адреналина гидрохлорида и токсических веществ - натрия фторида, мётиленовой сини, меди сульфата наблюдается снижение уровня AMA крови, которое находится в прямой корреляционной связи с её исходной величиной.

Специальными исследованиями установлена прямая корреляционная связь между уровнями повышения AMA крови под влиянием иммуностимулирующих концентраций различных БАВ.

С учётом выявленного универсального характера неспепифиче-ского изменения индивидуальной величины AMA крови при лечении больных различными способами и при контакте крови ин витро с БАВ обоснованным является предположение о возможности использования функциональных тестов, проводимых в условиях ин витро, для прогнозирования изменения индивидуальной величины неспе-цифич.гской защиты организма от микробов до начала лечения больных. Эти тесты отражают способность AMA крови обследуемого отвечать реакцией ин витро на БАВ. В дальнейшем по определению величины изменения AMA крови ин витро предполагали возможность проводить отбор лиц для лечения иммуностимуляторами и другими способами лечения.

Действительно, в результате исследований установлено, что у больных первой группы с повышением AMA крови ин витро под влиянием микроконцентраций дибазола отмечается значительное усиление этого показателя в условиях ин витро при лечении боль-

ных иммуностимуляторами и хирургическими способами. А у больных второй группы со снижением или без изменений ин витро AMA крови величина показателя ин виво не меняется или отмечается снижение её уровня. Выявлено, что точность отбора лиц для лечения иммуностимуляторами в сравнении со способами, основанными только на исследовании исходной активности ФИ, повышается с 84 до 97% обследуемых больных лиц. При этом важным является то, что в наших исследованиях определение индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов, контроль и прогнозирование эффективности лечения, отбор лиц для лечения иммуностимуляторами проводятся с использованием простых, точных экспресс-способов оценки AMA цельной крови, которые рекомендуются для широкого использования в практической медицине.

Исследование основных закономерностей формирования специфической реакции факторов иммунитета на микробы.

При изучении закономерностей изменения активности ФИ на микробные антигены одновременно исследовали величину активности этих факторов как к специфическому, так и к контрольному антигенам. При этом установлена высокая прямая корреляционная связь между исходными уровнями AMA крови, её клеточными и гуморальными (антителами) факторами у доноров и экспериментальных животных к различным микробным антигенам. У лиц с низкой исходной AMA крови к антигену шигелл Зонне определяется небольшая её величина к антигенам шигелл Ньюкестл. Флекснера и другим. И наоборот, у лиц с высокой исходной величиной AMA крови к антигену шигелл Зонне отмечается высокий аналогичный показатель к антигенам других групп микробов. Так, при одновременном исследовании AMA крови 6 доноров её величина к антигенам шигелл Зонне и Ньюкестл колеблется от 2,5 в 8,5 АЕ/0,1 мл в РТПГА. В то же время отмечается высокая прямая корреляционная зависимость между уровнями AMA крови к антигену шигелл Зонне и Ньюкестл (г = +0,97±0,12, Р < 0,001).

При взаимодействии крови ин витро с микробными антигенами установлен универсальный, дозозависимый и разнонаправленный характер специфического изменения AMA крови и её клеток. Эта CP ФИ индуцируется различными микробными антигенами: шигелл Зонне, Ньюкестл, Флекснера, риккетсий Провачека, туляремии, гонококковой вакцины и другими. Установлено, что под влиянием высокой концентрации (активнос¥и}^ст$ечается снижение активности ФИ, которое находится в прямой корреляционной зависимости от исходной активности этих факторов. Иммуностимулирующие концентрации антигена оказывают активизирующее влияние на активность ФИ, обратно коррелирующее с их исходными величинами. Изменение активности ФИ под влиянием различных концентраций микробных антигенов носит строго специфический характер, кото-

рый проявляется в том, что величина изменения активности ФИ в отношении контрольного антигена имеет несущественный характер.

В медицине для оценки исходной величины активности ФИ в различных методиках используют различное время обработки смеси, состоящей из этих факторов и микробных антигенов. При этом не учитывается возможность специфического изменения активности ФИ ин витро под влиянием индикаторной концентрации микробного антигена. В связи с этим нами проведены специальные исследования по изучению влияния времени обработки смеси на индивидуальную величину активности ФИ. С этой целью к 0,1 мл крови шести доноров добавляли 0,1 мл антигена шигелл Зонне активностью 10 АЕ в РПГА. Смесь обрабатывали при температуре 37°С в течение 10 мин и 45 мин, затем по вышеописанной методике оценивали величину AMA крови.

Результаты исследований изложены в табл.2.

Таблица 2

Влияние времени обработки крови с антигеном шигелл Зонне на индивидуальную величину антимикробной активности крови

Величина антимикробном активности крови

№№ крови, после инкубации смеси

статистические через 10 мин через 45 мин

показатели в АЕ в % к средней величине в АЕ в % к средней величине

1 2,5 50 6,0 82

2 4,0 80 7,5 103

3 5,0 100 6,5 89

4 5,0 100 7,0 96

5 5,5 110 7,5 103

6 8,0 160 9,0 123

М±ш 5,0±0,74 100 7,3±0,42* 100

Примечание:* - Р<0,05 в сравнении с исходной величиной.

Как видно из таблицы, после 10 мин обработки смеси крови с антигеном средняя величина AMA крови составляет 5,0 АЕ. Индивидуальные ее показатели колеблются от 2,5 до 8,0 АЕ. Разница меж-цу наибольшей величиной AMA крови различных доноров составляет 320%.

С повышением времени обработки смеси с 10 мин до 45 мин отмечается усиление средней величины AMA крови с 5,0 до 7,3 АЕ, обратно коррелирующее с ее исходной величиной, полученной при 10

мин обработке проб (г = - 0,8.9 + 0,23, Р < 0,01). У лиц с низкой исходной AMA крови с увеличением времени экспозиции смеси до 45 мин повышение ее величины носит более существенный характер. Однако несмотря на это повышение, определяется ггрямая корреляционная связь между величинами AMA крови после экспозиции смеси с использованием времени различной продолжительности (г = + 0,87 + 0,24, Р < 0,01). При длительной инкубации проб отмечается резкое снижение разницы в индивидуальных величинах AMA крови, которая составляет у различных доноров от 6,0 до 9,0 АЕ. Таким образом, разница между наименее низкой и наиболее высокой AMA крови у различных лиц снижается с 320 до 150%.

Таким образом, уменьшение времени обработки смеси с 45 мин до 10 мин повышает точность оценки индивидуальной величины AMA крови в этой серии исследований в 2,13 раза. При этом установлена двойная функция индикаторной концентрации микробного антигена. Первая его функция основана на способности неспецифически вступать в контакт с клеточными ФИ и оценить их исходную активность. Вторая функция антигена связана с его способностью специфически активизировать клеточные ФИ. В связи с этим для оценки индивидуальной исходной величины активности клеточных ФИ оптимальное время экспозиции смеси составляет не более 10-15 мин. С увеличением времени обработки этой смеси выявляется суммарная величина исходной активности ФИ и наведённой, связанной со специфической активизацией этих факторов индикаторной концентрацией микробного антигена. Следствием этой активизации является существенное снижение индивидуальной разницы в величинах активности ФИ.

Выявленные закономерности специфического изменения активности ФИ при взаимодействии крови с микробными антигенами ин витро полностью подтвердились ин виво при иммунизации животных бактериями. Так, при введении кроликам взвеси стафилококков в дозе 100 млн. микробных тел отмечается быстрое повышение величины БФА крови к этим микробам - через 15 мин и 1 час, а к 3 часам наблюдается снижение её величины. При этом установлена обратная зависимость уровня повышения БФА крови к стафилококкам и от её исходной величины. У животных с низкой исходной БФА крови в сравнении с высокой её величиной наблюдается более значительное усиление её уровня в ранние сроки после иммунизации. Повышение БФА крови к стафилококкам носит строго специфический характер во все сроки исследований, который проявляется снижением величины БФА крови к кишечным палочкам.

Учитывая данные литературы о регуляторной роли полинукле-арных фагоцитов на величину ИР на антиген (А.Я.Кульберг,1985) и результаты наших исследований об универсальном, разнонаправленном характере специфического изменения фагоцитоза на микробные антигены, в работе изучена связь между уровнями специ-

^ического изменения ФАЛ ин витро под влиянием иммуностимулирующих концентраций вакцин и иммунных антител и величинами шецифического изменения продукции иммунных антител и ФАЛ три иммунизации ин виво кроликов и обследуемых различными закцинами. При этом установлена прямая корреляция между уров-шми специфического изменения ФАЛ ин витро под влиянием акти-зизирующих концентраций вакцин и иммунных антител и фагоцитоза после иммунизации. У лиц первой группы с повышением специфического фагоцитоза ин витро наблюдается усиление продукции шмунных антител и ФАЛ после вакцинации. А у обследуемых второй группы со снижением или без изменений ФАЛ ин витро опреде-шется снижение продукции иммунных антител и ФАЛ или реакция этих ФИ не выявляется. Разработанный способ позволяет про-■нозировать индивидуальный уровень специфического изменения фодукции иммунных антител и ФАЛ до иммунизации вакцинами у 10-90% обследуемых в различных сериях исследований, что позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против бактериальных инфекций.

Второй способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной г столбнячной инфекций основан на определении исходной величи-[ы ИС ТА. Установлено, что индивидуальные величины ИС ТА до 1акцинации против дифтерийной инфекции у обследуемых колеб-[ются от 0,005 до 109,2. По величине этого показателя всех обследуе-ibix делили на две группы. К первой группе отнесли лиц с величи-[ой индекса менее чем 3, ко второй - равной более 3,0. После введе-:ия вакцины АДС-М в дозе 0,5 мл у абсолютного большинства обсле-;уемых первой группы определяется специфическое повышение про-;укции иммунных антител к дифтерийному анатоксину, а у лиц вто-юй группы отмечается снижение ТА к этому анатоксину, или реак-;ия не выявляется. По исходной величине ИС ТА прогнозируется пецифическое изменение продукции иммунных антител к дифте-ийному анатоксину у 92% (91-97%) обследуемых лиц до их вакцинами.

Аналогичные существенные колебания исходных величин ИС 'А определяются и у лиц, подлежащих вакцинации против столб-ячной инфекции - от 0,03 до 18,4. По исходной величине ИС ТА сех обследуемых делили на две группы: к первой отнесли лиц с ин-ексом равным 1,2 и ниже, ко второй - выше 1,2 (табл.3).

Как видно из таблицы, после вакцинации столбнячным анаток-ином у 25 (96%) из 26 обследуемых первой группы отмечается спе-ифическое повышение продукции иммунных антител к этому ана-оксину. И наоборот, у всех обследуемых второй группы повышения А к столбнячному анатоксину не выявляется. В этой серии иссле-ований способ позволяет прогнозировать индивидуальный уровень зменения продукции иммунных антител к столбнячному анатоксину 97% обследуемых лиц.

Таблица 3

Зависимость индивидуального уровня специфического изменения титра антител к столбнячному анатоксину от исходного титра антител к этому анатоксину и индекса соотношения титров антител

(числитель - титр антител к анатоксину, знаменатель - к контрольному антигену)

До вакцинации Результаты прогноза после вакцинации

Средняя Уровень изменения титра антител

№№ Количество Абсолютная Индекс абсолютная величина Кратность изменения повышение без изменений или снижение

групп обследуемых величина титра соотношения титров титров

антител титров антител антител к дифтерийному анатоксину антител к анатоксину количество лиц в % количество лиц в %

1 26 21+4(1-80) 52±7(40-60) 1,2 и менее 1036±126* 49,3 25 96 1 4

2 3 653±425(40-1280) 377±( 10-80) более 1,2 653±424 1,0 - - 3 100

1-2 29 87±59 50±7 1,0 1087±117* 12,5 25 96 4 4

Примечание:* - Р<0,001 в сравнении в исходной величиной.

Таким образом, по исходной величине ИС ТА можно прогнозировать специфическое изменение продукции иммунных антител к дифтерийному и столбнячному анатоксинам у абсолютного большинства обследуемых, что позволяет повысить точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций по сравнению с методами, основанными только на определении исходных ТА к анатоксинам, с 85 до 91-97% обследуемых в различных сериях исследований. Трудности в точности прогнозирования эффективности вакцинации отмечаются у лиц с очень низким индексом и величиной, равной от 1 до 3, что является показанием для дополнительных, прицельных исследований состояния иммунного статуса у этих обследуемых.

Из литературы известны данные о возможности использования методик исследования фагоцитоза для иммунодиагностики инфекционных заболеваний (Е.И.Житова, 1948; В.Н.Каплин, 1969; А.Ф.Колес-никова, 1984 и др.).

Однако методики определения фагоцитоза, особенно основанные на микроскопических методах оценки, не получили широкого распространения из-за трудоёмкости, субъективности и малой точности исследований.

В связи с этим нами разработан и апробирован модифицированный способ оценки специфического фагоцитоза для иммунодиагностики гонорейной инфекции. У здоровых людей ИС ФАЛ не выходит за пределы 0,78-1,39. С учетом этих результатов исследований для иммунодиагностики гонорейной инфекции использовали величину ИС ФАЛ, составляющую более чем 1,39 и ниже 0,78. Установлено, что у 10 больных гонорейной инфекцией из 16 обследуемых диагностически значимая величина ИС ФАЛ выходит за пределы 0,781,39.

Таким образом, модифицированный способ оценки специфического фагоцитоза повышает точность иммунодиагностики этой инфекции в сравнении с методами, основанными только на оценке величины ФАЛ к специфическому объекту фагоцитоза, с 38 до 63% ;1ли в 1,7 раза.

Таким образом, выявленные результаты исследований убедительно свидетельствуют об универсальном, общебиологическом ха-зактере специфического изменения активности и продукции ФИ на микробные антигены, что позволяет разработанные способы использовать при отборе лиц для вакцинации против инфекций и иммунодиагностики инфекций как со специфическим повышением, так и со шижением активности ФИ.

Исследование механизмов регуляции изменения активности факторов иммунитета под влиянием микробных препаратов и биологически активных веществ

При изучении механизмов регуляции изменения активности ФИ полностью подтвердились закономерности универсального, дозо-зависимого и разнонаправленного характера неспецифического изменения активности ФИ под влиянием иммуномодуляторов, токсических веществ и микробных препаратов. Так, при изучении связи между уровнями неспецифического изменения AMA крови под влиянием дибазола и специфического - на микроконцентрации антигена шигелл Зонне установлена обратная зависимость между уровнями повышения AMA крови под влиянием этих препаратов и исходными её величинами у доноров. При этом наблюдается прямая корреляционная связь между уровнями повышения AMA крови после её контакта с дибазолом и антигеном шигелл Зонне (г = + 0,92±0,03, Р<0,001). Результаты этих исследований свидетельствуют об общих механизмах, участвующих в изменении индивидуальной величины активности ФИ под влиянием неспецифических и специфических иммуномодуляторов (микробных препаратов).

Нами предложен способ, основанный на комплексном тестировании роли фагоцитов, антител, антигена и комплекса "антиген-антитело" в механизмах регуляции раннего специфического распознавания микробного антигена фагоцитами крови. С использованием этого способа установлена обратная корреляция между исходными ТА и уровнями специфического повышения ФАЛ при взаимодействии крови ин витро с иммуностимулирующими концентрациями микробных антигенов и иммунных антител и прямая - между величинами специфического повышения фагоцитоза под влиянием активизирующих концентраций различных микробных препаратов.

Регуляторное влияние антител на процесс раннего распознавания фагоцитами микробного антигена особенно ярко проявляется при одновременном контакте крови в различных её пробах ин витро с высокими концентрациями микробного антигена шигелл Зонне (активность ЮАЕ/мл в РТПГА),иммунными антителами к этому антигену (ТА 160 в 1 мл в РПГА) и комплексом "антиген-антитело", полученным путём взаимодействия этих препаратов в соотношении 1:1. После контакта крови с высокими концентрациями антигена отмечается статистически достоверное снижение ФАЛ к специфическому объекту фагоцитоза, которое имеет специфический характер: проявляется в том, что в отношении контрольного объекта фагоцитоза уровень снижения ФАЛ носит менее яркий характер. В связи с этим ИС ФАЛ активизированных фагоцитов снижается с 1,00 до 0,71. И наоборот, после взаимодействия крови с иммунными антителами отмечается статистически достоверное повышение ФАЛ к специфическому объекту фагоцитоза. Реакция носит также строго спе-

мифический характер. В отношении контрольного объекта фагоцито-ia отмечается склонность к снижению уровня ФАЛ. ВеличинаИС £АЛ активизированных фагоцитов повышается с 1,00 до 4,72. Акти-зизирующее влияние на ФАЛ наблюдается также у комплекса антиген-антитело", которое имеет специфический характер - в от-юшении контрольного объекта фагоцитоза отмечается снижение &АЛ. В связи с этим ИС ФАЛ повышается с 1,00 до 3,14.

Взаимосвязь между уровнями специфического изменения ФАЛ год влиянием больших доз антигена шигелл Зонне, иммунных антител и комплекса "антиген-антитело" наиболее чётко прослеживается фи сравнительной оценке величин ИС ФАЛ, активизированных 1тими препаратами. При определении разницы путём вычитания из ¡еличины ИС ФАЛ (4,72), отражающей уровень специфического посинения фагоцитоза под влиянием иммунных антител ИС ФАЛ ак-"ивизированных лейкоцитов комплексом "антиген-антитело" (3,14), юлучается величина индекса, равная 1,58. Этот показатель практи-1ески не отличается от ИС ФАЛ, отражающего кратность специфи-сеского снижения фагоцитоза под влиянием высоких доз антигена нигелл Зонне, полученного путём деления величины ИС ФАЛ ин-■актных лейкоцитов (1,00), на соответствующую величину ИС ФАЛ сосле контакта фагоцитов с большими концентрациями антигена 0,71) и составляющую 1,41.

Результаты этих исследований позволяют сделать предположе-[ие, что раннее специфическое распознавание микробного антигена гожет осуществляется через Fc-фрагмент комплекса "антиген-.нтитело" или при прямом контакте антигена с рецепторами фагоци-

'OB.

С учетом того, что фагоциты играют несущественную роль в >аннем специфическом повышении уровня AMA крови на микробный антиген исследована роль эритроцитов в механизме формиро-ания CP крови. При этом установлено, что активизированные мик-юбным антигеном эритроциты ин витро обладают способностью спе-;ифически повышать величину ФАЛ в отношении этих антигенов, то свидетельствует об эритроцитарном механизме раннего специфического распознавания фагоцитами микробного антигена. Резуль-аты этих исследований полностью коррелируют с нашими данными о роли активизированных эритроцитов в ранней CP фагоцитов а микробный антиген (В.Н.Каплин, В.П.Рочев, 1974).

Специальными исследованиями ряда авторов доказана возмож-ость специфического усиления антигенсвязывающей активности ритроцитов (АСАЭ) при взаимодействии крови и эритроцитов ин итро с различными микробными антигенами (В.Н.Каплин, 1980, 982; И.П.Корюкина, 1980; В.Ф.Кузнецов, 1982; В.П.Рочев, 1984; >.А.Черешнев, В.П.Рочев, 1992 и др.). По определению уровня специ-шческого повышения АСАЭ проводится ранняя иммунодиагностика нфекций (В.Н.Каплин, 1980; И.П.Корюкина, 1982 и др.).

Таким образом, в результате исследований с использование разработанных нами и общепринятых способов изучены основные зг кономерности формирования и механизмы регуляции как неспец* фического изменения активности ФИ под влиянием иммуномодул* торов, токсических веществ, так и специфического - на микробны препараты. При этом установлен универсальный, дозозависимый разнонаправленный характер изменения величины активности Ф] под влиянием различных препаратов, который подчинается дву основным правилам", "правилу исходной величины активности ФУ и правилу "доза (концентрация) БАВ - эффект". Эти правила особе* но ярко видны на рис. 4.

200 -150 -100 -

0

Фон

Средняя (иммуностимулирующая)

Высокая (иммуно-депрессивная)

Активность

факторов

иммунитета

После контакта с различными дозами (концентрациями) биологически активных препаратов

Рис. 4. Динамика изменения активности факторов иммунитета в зависимости от их исходной величины и дозы (концентрации)

биологически активных препаратов (чёрные столбики - у обследуемых с низкой исходной величиной активности факторов иммунитета, белые - с высокой)

Как видно из рисунка, после исследования исходной величин] активности ФИ обследуемые разделены на две группы: к первой от несены лица с низкой исходной активностью ФИ, ко второй - с вы сокой.

У лиц первой группы под влиянием лечения иммуностимулятс рами, в санаторно-курортных условиях, при контакте крови ин вит ро с иммуностимулирующими концентрациями БАВ, при иммуни зации обследуемых средними дозами вакцин отмечается существен ное повышение величины активностиФИ. И наоборот, под влияние]

высоких (иммунодепрессивных) доз БАВ определяется ярко выраженное снижение активности этих факторов. А у лиц Второй группы изменение величины активности ФИ на различные дозы БАВ носит несущественный характер.

Механизм универсального, дозозависимого характера изменения активности ФИ под влиянием различных препаратов нами рассматривается как высокоскорректированная,генетически контролируемая реакция этих факторов, которая связана с одновременным изменением экспрессии рецепторного аппарата и величины метаболических процессов клеток организма,в том числе иммунной системы. Основную роль в регуляции изменения универсального характера величины активности ФИ играют генетические факторы клеток организма: ДНК, хромосомы, гены и гликопротеиды, контролирующие все функции клеток.

К настоящему времени разработаны, апробированы и успешно внедрены в научно-исследовательскую работу ряда вузов г.Перми два новых способа оценки неспецифической защиты организма от микробов (В.П.Рочев, Л.А.Мозговая, Н.Б.Фокина, 1993-1995), основанные на определении величины AMA слюны и её гуморальных факторов (антител) к микробам. С использованием этих способов исследованы AMA и ТА слюны 409 здоровых детей и взрослых лиц и больных с различными заболеваниями. Установлено, что способы позволяют определить индивидуальную и групповую величину неспецифической защиты организма от микробов, выявлять иммунодефи-цитные состояния, оценить влияние экологических факторов, вредных для организма и величины умственной нагрузки на состояние здоровья детей и взрослых лиц, контролировать и прогнозировать эффективность лечения. Важным при этом является то, что определяется корреляционная зависимость между ТА слюны и количеством как клеточных (Т-лимфоциты), так и гуморальных (концентрация иммуноглобулинов) ФИ крови, а также частотой заболеваемости обследуемых.

Полученные результаты исследований свидетельствуют о высокой информативности разработанных нами способов, которые позволяют оценить индивидуальную величину как гуморального,так и клеточного иммунитета. Способы отличаются высокой точностью и безопасностью для обследуемых и рекомендуются для широкого использования в различных областях медицины.

Таким образом, разработанные и описанные в работе простые, точные, малотрудоёмкие, информативные экспресс-способы можно рекомендовать для оценки индивидуальной величины неспецифической и специфической защиты организма от микробов; контроля и прогнозирования эффективности лечения ; отбора лиц для лечения иммуномодуляторами и вакцинации против инфекций; иммунодиагностики инфекционных заболеваний и в других областях медицины.

выводы

1. Разработаны, апробированы и внедрены в медицину новь методы оценки индвидуальной величины неспецифической и спещ фической защиты организма от микробов, позволяющие контрол! ровать и прогнозировать эффективность лечения, проводить отбс лиц для лечения иммуномодуляторами и вакцинации против инфе] ций, иммунодиагностику инфекционных заболеваний.

2. Установлено, что три из разработанных методик позволяк оценить величину резистентности организма от микробов по сур марной способности клеточных и гуморальных факторов целый крови агглютинировать, фагоцитировать и фиксировать микроб: Методики отличаются высокой точностью - процент ошибки соста] ляет 3,3-6,0, характеризуются практически 100% воспроизвод] мостью и экспрессностью исполнения.

3. Выявлено, что у абсолютного большинства обследуемых бол ных с различными заболеваниями под влиянием лечения иммуном' дуляторами определяется обратная зависимость между уровнем п вышения неспецифической защиты организма и её исходной вел] чиной.

4. Установлен универсальный, дозозависимый и разнонапра] ленный характер изменения величины активности ФИ ин витро пс влиянием БАВ, который проявляется в том, что под влиянием имм; ностимулирующих концентраций препаратов отмечается повышен! активности ФИ, обратно коррелирующее с её исходной величино и наоборот, после контакта с большими концентрациями БАВ наблк дается снижение активности ФИ, которое находится в прямой ко] реляционной связи с её исходной величиной.

5. Разработаны способы контроля и прогнозирования эффекта; ности лечения иммуностимуляторами, основанные на изменении в личины активности цельной крови ин витро под влиянием имм; ностимулирующих концентраций БАВ. При этом у больных с повх шением AMA крови ин витро под влиянием БАВ отмечается усил ние величины неспецифической защиты организма от микробов,ч' повышает точность отбора больных для лечения иммуностимулят рами в сравнении с методами, основанными только на исследоваш исходной активности ФИ, с 84% до 97%.

6. Изучены основные закономерности универсального, дозозав] симого и разнонаправленного характера специфического изменеш активности цельной крови и её клеток ин витро под влиянием ми; робных антигенов. При этом установлено, что после контакта крови антигеном высокой активности отмечается снижение активности Ф] которое находится в прямой корреляционной зависимости от её и ходной величины. И наоборот, под влиянием иммуностимулируь щей концентрации микробного антигена определяется повышение а; тивности ФИ, обратно коррелирующее с её исходной величиной. И менение активности ФИ под влиянием микробного антигена разли

юй активности носит строго специфический характер, который прошляется в том, что реакция ФИ к контрольному антигену не выяв-гяется или отмечается снижение их активности.

7. Установлено, что у обследуемых со специфическим повыше-таем фагоцитоза при взаимодействии крови ин витро с иммуностимулирующей концентрацией вакцины или иммунных антител отметается усиление продукции иммунных антител и ФАЛ после имму-шзации, что позволяет прогнозировать эффективность вакцинации у ¡0-90% обследуемых, проводить отбор лиц для вакцинации против гафекций.

8. Разработан способ отбора лиц для вакцинации против дифте-шйной и столбнячной инфекций, основанный на определении инди-(идуальной величины ИС ТА. При этом у обследуемых с низкими шдексами, равными менее 3,0 и 1,2 и меньше прогнозируется соот-¡етственно специфическое повышение продукции иммунных антител : дифтерийному и столбнячному анатоксинам, что позволяет повы-:ить точность отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и толбнячной инфекций в сравнении с методами, основанными только га оценке исходных ТА к анатоксинам, с 85 до .92% (91-97%) обсле-(уемых.

9. Обоснована и практически реализована возможность имму-юдиагностики как со специфическим повышением, так и со сниже-мем активности ФИ на микробный антиген. Использование для этой (ели величины ИС ФАЛ выше 1,39 и ниже 0,78 повышает точность [ммунодиагностики гонорейной инфекции в сравнении с методом, снованным только на исследовании уровня фагоцитоза к специфи-:ескому объекту фагоцитоза, на + 70%.

10. Повышена точность количественной оценки активности кле-очных ФИ не менее, чем в два раза путём уменьшения времени об-1аботки смеси, состоящей из индикаторной концентрации микробного нтигена и ФИ, с 45 до 10-15 мин. При длительной инкубации смеси эолее 15 мин) выявляется суммарная величина как исходной актив-ости ФИ, так и наведённой, связанной со специфической активиза-;ией этих факторов микробным антигеном, следствием которой яв-;яется существенное снижение индивидуальной разницы в величи-ах активности ФИ.

11. Обоснованы и сформулированы основные правила, прини-[ающие участие в механизме регуляции изменения активности ФИ од влиянием БАВ: первое - "правило исходной величины актив-ости ФИ", второе - "доза БАВ - эффект".

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для оценки индивидуальной величины неспецифической и пецифической защиты организма от микробов, контроля и прогно-ирования эффективности лечения, отбора лиц для лечения имму-

ностимуляторами и вакцинации против инфекций, иммунодиагностики инфекционных заболеваний рекомендуются новые, простые, точные, информативные экспресс-способы.

2. Установлено, что три из разработанных способов: методики исследования AMA, АБА и БФА крови позволяют оценить резистентность организма от микробов по суммарной способности как клеточных, так и гуморальных факторов цельной крови одновременно агглютинировать, фагоцитировать и фиксировать микробы.

3. Предлагаются при отборе лиц для лечения иммуностимуляторами, контроля и прогнозирования эффективности лечения способы, основанные на определении уровня изменения величины AMA крови ин витро под влиянием иммуностимулирующих концентраций БАВ с последующим прогнозированием изменения индивидуальной величины неспецифической защиты организма от микробов у 97% больных.

4. Разработан для прогнозирования индивидуальной величины изменения активности ФИ в форме специфического изменения продукции иммунных антител и ФАЛ способ, отличительной особенностью которого является то, что у лиц, подлежащих вакцинации, определяют специфическое изменение фагоцитоза ин витро под влиянием иммуностимулирующих концентраций вакцины или иммунных антител к этой вакцине с последующим определением у обследуемых с повышением уровня фагоцитоза ин витро специфического усиления продукции иммунных антител и ФАЛ после иммунизации, что позволяет проводить отбор лиц для вакцинации против инфекций у 80-90% обследуемых.

5. Предлагается способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций, основанный на определении индивидуальной исходной величины ИС ТА. При этом у лиц с низким индексом, равным менее 3 и 1,2 меньше прогнозируется соответственно повышение продукции иммунных антител к дифтерийному и столбнячному анатоксинам. Способ позволяет повысить точность прогнозирования изменения продукции иммунных антител в сравнении с методом, основанным только на оценке исходных ТА к анатоксинам, с 85 до 92% (91-97%) обследуемых.

6. Рекомендуется для иммунодиагностики инфекций считать положительными результаты исследований как со специфическим повышением активности ФИ, так и с их снижением. Так, использование для этой цели величины ИС ФАЛ выше 1,39 и ниже 0,78 повышает точность иммунодиагностики гонорейной инфекции в сравнении с методом, основанным только на исследовании уровня фагоцитоза к специфическому объекту на + 70%.

7. Рекомендуется для оценки индивидуальной величины неспецифической и специфической активности клеточных ФИ от микробов обработка смеси, состоящей из этих факторов и микробного антигена, при температуре 39°С продолжительностью не более 10-

5 мин. Уменьшение времени инкубации смеси с 45 мин до 10-15 [ин повышает точность количественной оценки активности ФИ не [енее чем в два раза.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Изменение бактериофиксирующей способности крови как по-азатель иммунной реакции на введение микробов // Вопросы экс-ериментальной и клинической иммунологии. - Пермь, 1976. - Т.135. -.40-42.

2. Изменение бактериофиксирующей активности крови при вза-модействии с кардинальным и стрептококковым аллергеном как по-азатель аллергии при ревматизме у детей.// Вопросы эксперимен-альной и клинической иммунологии. - Пермь, 1976. - Т.135. С.3-6 :оавт.: В.Н.Каплин и Л.В.Софронова).

3. Эффекты начального иммунного взаимодействия организма с ятигенами и возможности ранней иммунодиагностики инфекций // 1еханизмы повреждения и адаптации функциональных систем орга-изма. - Свердловск, 1978. - С.77-81 (соавт.: В.Н.Каплин, А.А.Гаслова, .А.Иванова, В.Ф.Коломойцев, Е.З.Лейбович, Т.С.Москвина, .В.Софронова).

4. О методике изучения бактериофиксирующей активности кро-л // Экспериментальная разработка и применение в клинике со-эеменных методов иммунологического исследования. - Пермь, 1978. Т. 144. - С.5-9.

5. Изменение бактериофиксирующей активности крови как податель иммунной реакции на введение коклюшных бактерий // кспериментальная разработка и применение в клинике современ-лх методов иммунологического исследования. - Пермь, 1978. - Т.144. С.19-17.

6. Исследование ин витро процесса специфического взаимодей-■вия антигена с эритроцитами // Тез. докл. на 7 Северо-авказской конференции по иммунологии, аллергологии и молеку-фной биологии. - Краснодар, 1983. - С.119 (соавт.: В.Н.Каплин).

7. Изменение антигенсвязывающей активности эритроцитов при ;аимодействии ин витро с риккетсиозным антигеном // Новые ме-|ды иммунологического исследования и совершенствование специ-ической диагностики инфекций. Пермь, 1984. - Т.160. - С.11-13.

8. Факторы регуляции специфической фагоцитарной реакции на 1кробные субстанции // Новые методы иммунологического исследо-ния и актуальные вопросы иммунодиагностики и иммунопрофи-жтики инфекций. - Пермь, 1986. - С.22-29.

9. Материалы к изучению ин витро механизма начальной фаго-[тарной реакции на микробные агенты // Патологическая физиоло-я экстремальных состояний. Патологические аспекты гематологии и

иммунологии: Тез. докл. 12 научной конференции патофизиолог« Урала. - Пермь, 1986. - С.101-102.

10. Влияние излучения гелий-неонового лазера на фагоцитар ную активность лейкоцитов // Патологические аспекты гематологш и иммунологии: Тез. докл. 12 научной конференции патофизиолога Урала. - Пермь, 1986. - С.84-85 (соавт.: Л.А.Мозговая).

11. Регуляторное влияние некоторых лекарственных препарато] и микробных субстанций на антимикробную активность эритроцито: // Регуляция иммунного ответа. - Пермь, 1987. - С.71-76.

12. Сравнительный токсический эффект метиленовой сини ] азида натрия в тесте антигенсвязывающей активности эритроцито] // Тез. учредительной конференции областного общества токсиколо гов. - Пермь, 1987. - С.90-92.

13. Закономерности формирования специфической реакции эри троцитов при взаимодействии крови ин витро с антигеном шигел. Зонне // Деп. в ВИНИТИ, 1988. - N 7633. - В.88 - 8 с.

14. К обоснованию двойной функции микробов и их субстан ций при оценке антимикробной активности клеток крови //Деп. ] ВИНИТИ, 1988. - N 7634. - В. 88. - 11 с.

15. Изменение фагоцитоза ин витро под влиянием микробов 1 иммунных антител в зависимости от естественных факторов имму нитета // Факторы клеточного и гуморального иммунитета при раз личных физиологических и патологических состояниях. - Челябинск

1988. - С.111.

16. Обоснование зависимости критического эффекта лазероте рапии от состояния неспецифической резистентности организма /, Актуальные вопросы рентгенологии, физиологии и функционально] диагностики в стоматологии. Труды ЦНИИС. - М., 1988. - Т.19. С.88-89 (соавт.: Л.А.Мозговая).

17. Влияние бальнеотерапии на курорте Усть-Качка на анти микробную активность крови / / Бальнеотерапия: Тез. научно практической межтерриториальной конференции. - Пермь, 1989. С.20-21 (соавт.: Л.Г.Казанцева).

18. Влияние лекарственных препаратов на антигенсвязы вающую активность эритроцитов // Патология дыхания, крови I регулирующих систем организма и принципы коррекции наруше ний: Тез. докл. 13 конференции патофизиологов Урала. - Ижевск

1989. - С.93-94.

19. Значение параметров времени для наведения специфи ческой реакции крови и оценки её антимикробной активности // Па тология дыхания, крови и регулирующих систем организма и прин ципы коррекции нарушений: Тез. докл. 13 конференции патофизио логов Урала. - Ижевск, 1989. - С.93-94.

20. Регуляторное влияние антител на закономерности формиро вания специфической фагоцитарной реакции на микробные субстан ции // Деп. в ВИНИТИ, 1989. - N 4489. - В. 89. - 12 с.

21. Регуляция изменения антимикробной резистентности организма под влиянием токсических веществ, микробов и лекарственных препаратов // Актуальные вопросы в токсикологии. - Пермь, 1989. - С.18-19.

22. Определение и сравнительная оценка токсических веществ в методике исследования антимикробной активности крови // Актуальные вопросы в токсикологии. - Пермь, 1989. - С.108.

23. Регуляция изменения антимикробной резистентности организма под влиянием токсических веществ, микробов и лекарственных препаратов // Актуальные вопросы в токсикологии. - Пермь,

1989. - С.18-19.

24. Лазеротерапия в реабилитации детей с заболеваниями и повреждениями челюстно-лицевой области // Вопросы реабилитации в стоматологии. Тез. докл. научно-практической конференции, посвященной 50-летию Пермского областного научно-медицинского общества стоматологов. - Пермь, 1989. - С.29-31 (соавт.: Л.А.Мозговая, А.Б.Виноградов, В.А.Усачев).

25. О роли эритроцитов в формировании специфической фагоцитарной реакции на микробные субстанции // Деп. в ВИНИТИ,

1990. - N 234. - В. 90. - 9 с.

26. Изменение антиген связывающей активности эритроцитов гсак способ определения иммуномодуляторных и токсических свойств различных препаратов // Реабилитация иммунной системы: Тез. цокл. 2 Международного симпозиума. - Цхалтубо, 1990. - С.350 'соавт.: В.А.Черешнев).

27. Определение антимикробной активности крови как способ исследования неспецифической резистентности организма у детей // Реабилитация иммунной системы: Тез. докл. 2 Международного симпозиума. - Цхалтубо, 1990. - С.229 (соавт.: В.А.Черешнев, А.И.Плак-:ин, Н.И.Аверьянова, А.А.Гаслова, Н.Г.Смердова, Н.Г.Казанцева).

28. О регуляторном влиянии антител на раннюю специфи-тескую реакцию крови на микробы // Системные и клеточные меха-гизмы адаптации организма к действию повреждающих факторов: Гез. докл. На 14 конференции патофизиологов Урала. - Челябинск,

1991. - С.112-113 (соавт.: В.А.Черешнев, И.В.Фельдблюм).

29. Антимикробная активность крови как показатель неспеци-{шческой резистентности организма // Системные и клеточные механизмы адаптации организма к действию повреждающих факторов: Тез. докл. на 14 конференции патофизиологов Урала. - Челя-Зинск, 1991. - С.113-115 (соавт.: В.А.Черешнев, А.И.Плаксин, З.И.Аверьянова, А.А.Гаслова, Н.Г.Смердова, Н.Г.Казанцева).

30. Факторы риска возникновения поствакциональных осложне-шй и их профилактика в условиях кабинетов иммунопрофилактики V Поствакциональные осложнения: патогенез, профилактика, лече-ше: Тез. докл. Всесоюзной научно-практической конференции. -

JI.,1991. - С.117 (соавт.: И.В.Фельдблюм, О.А.Неволина, Н.С.Авдеева Р.Н.Ковязина, В.И.Ильина).

31. New mothods of immune status evalution at operatioi stress//Baltic Sea Conference on psychosomatics and psychotherap; Abstracts (Symposia/posters). - Kiel (Germany), 16-19 Septembe 1992. - P. 150 (Co-author V.A.Chereshnev, A.D.Shoutov).

32. Исследование специфического фагоцитоза при гонореи / Вестник дерматологии и венерологии. - 1992. - N 2 (16). - С.16-1; (соавт.: В.А.Черешнев).

33. Изменение специфической реакции эритроцитов под влия нием метиленовой сини и натрия азида // Гигиена и санитария. 1992. - N 5-6. - С.64-65 (соавт.: В.А.Черешнев).

34. New methods of individuals selection for vaccination am immune modulation treatment//Rehabilitation of immune system Abstracts '1st International Conference on immunorehabilitatio: (Dagomys, July 1-5, 1992) - Tskhaltubo, 1992. - P.34 (Co-autho V.A.Chereshnev).

35. О новых способах отбора детей для лечения иммуностиму ляторами// Медико-педагогические аспекты обучения, воспитания ] состояния здоровья детей и подростков: Тез. докл. - Пермь, 1993. С. 31-32 (соавт.: В.А.Черешнев, Н.И.Аверьянова).

36. Регуляция антимикробной активности слюны // Медико педагогические аспекты обучения, воспитания и состояния здоровь: детей и подростков: Тез. докл. - Пермь, 1993. - С.32-33 (соавт Л.А.Мозговая, Н.Б.Фокина, А.Д.Шустов, О.Е.Юрлова).

37. Иммуномодулирующее свойства света гелий-неонового лазе ра (СГНЛ), используемого при лечении стоматологических заболе ваний // Лазерная и магнитная терапия в экспериментальных ] клинических исследованиях: Тез. докл. - Обнинск, 1993. - Часть 1. С.127-129 (соавт.: Л.А.Мозговая, Н.Б.Фокина).

38. On appropriatness of the activity change of the immunit; factors under the influence of the toxic agents// The 199 international conference on environmental pollution, toxicology am epidemiology (Tcepts, 1973): Abstracts. - Moscow - Perm. 1993. - P.17 (co-author O.Livshits, N. Lyadova, L.Menshicova).

39. Профилактическое действие низкоинтенсивного лазерног излучения полупроводникового лазера // Профилактика и лечени основных стоматологических заболеваний: Материалы международ ной научно-практической конференции. - Ижевск, 1995. - С.64-6 (соавт.: Л.А.Мозговая, Н.Б.Фокина).

40. О новом способе определения иммунного статуса // Фи зиологические и гигиенические аспекты адаптации организма уча щихся к учебной нагрузке: Межвузовский сборник научных трудо! Пермь.: Изд-во ПГПУ. 1995. - С.57-63 (соавт.: И.П.Корюкинг Н.Б.Фокина, Л.А.Мозговая).

41. Основы внимания и памяти // Методическое пособие, -Пермь: ПОИПКРО, 1996. - 70с. (соавт.: Л.И.Рочева, Т.Е.Яницкая).

42. Профилактическое действие низкоинтенсивного излучения, полупроводникового лазера// Пермский медицинский журнал, -1996. - N 1. - Т.13. - С.12-14.

43. Методы индивидуального подбора доз иммуномодулято-ров// Международный журнал по иммунореабилитации: Тез. докл. Международной конференции по иммунореабилитации, - 1996. - N 2. - С.70.

44. Blood antimicrobial activity regulation// International Journal on Immunorehabilitation: Abstracts 1st International Conference on Immunorehabilitation. - Istambul (Turkey). 1996. - N3 (May). - P.29 (Co- author V.A.Chereshnev).

АВТОРСКИЕ СВИДЕТЕЛЬСТВА И ПАТЕНТЫ

1. Способы определения микробной резистентности организма. Авторское свидетельство. N 1640652. 8.12.1990 (соавт.: Н.И.Аве рьянова, А.А.Гаслова).

2. Способ иммунодиагностики инфекций. Авторское свидетельство. N 1627992. 15.10.1990 (соавт.: В.Н.Каплин, Г.А.Клевцова, Н.А.Минина, Л.П.Санакоева).

3. Способ отбора лиц для вакцинации против дифтерийной и столбнячной инфекций. Авторское свидетельство. N 1720006. 15.11.1991 (соавт.: И.В.Фельдблюм).

4. Способ отбора лиц для вакцинации против бактериальных ■гнфекций. Авторское свидетельство. N 1800367. 9.10.1992 (соавт.: З.А.Черешнев, И.В.Фельдблюм).

5. Способ оценки эффективности лечения инфекционных и соматических заболеваний. Авторское свидетельство. N 1814070. )1.10.1992 (соавт.: В.А.Черешнев, Н.Г.Смердова).

6. Способ отбора лиц для лечения иммуностимуляторами. Патент. N 2007722. 15.02.1994 (соавт.:В.А.Черешнев, Н.И.Аверьянова).

7. Способ контроля эффективности лечения заболеваний поло-:ти рта. Заявка на патент. Положительное решение N 93008702 от 15.02.95 (соавт.: Л.А.Мозговая, Н.Б.Фокина).

8. Способ определения неспецифической защиты организма от шкробов. Заявка на патент. Приоритетная справка N 95101368 от 11.01.95 (соавт.: Л.А.Мозговая, Н.Б.Фокина).

Отпечатано с оритил-макета. Подписано в печать 02.09 96.

Формат 60x84 1/1В. Усппечл. 2.0. Тираж 100 üK3.

Редакция "Пермского медицинского журчала" Адрес Пермь, ул-Бсльшевистская, 85.