Автореферат и диссертация по медицине (14.00.13) на тему:Состояние мембрано-дестабилизирующих процессов в тромбоцитах больных рассеянным склерозом

На правах рукописи

БЫЧЕНКО Светлана Михайловна

СОСТОЯНИЕ МЕМБРАНО-ДЕСТАБИЛИЗИРУЮЩИХ ПРОЦЕССОВ В ТРОМБОЦИТАХ БОЛЬНЫХ РАССЕЯННЫМ СКЛЕРОЗОМ

14.00.13—нервные болезни

Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук

Пермь 2004

Работа выполнена в ГОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия МЗ РФ»

Научный руководитель: доктор медицинских наук,

профессор

Рейхерт Людмила Ивановна

Научный консультант: доктор медицинских наук,

профессор

Галян Сергей Леонидович

Официальные оппоненты: доктор медицинских наук,

профессор

Шестаков Владимир Васильевич

кандидат медицинских наук Щипицина Наталья Ивановна

Ведущая организация: Челябинская государственная

медицинская академия

Защита состоится «_»_2004 года в_

часов на заседании диссертационного совета Д 208.067.01 в ГОУ ВПО Пермской государственной медицинской академии МЗ РФ (614990, г. Пермь, ул. Куйбышева, 39).

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пермской государственной медицинской академии МЗ РФ (614000, г. Пермь, ул. Коммунистическая, 26).

Автореферат разослан «_»_2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета

доктор медицинский наук, профессор Л. Е. Леонова

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность исследования. Рассеянный склероз (PC) является мультифакториальным заболеванием нервной системы с недостаточно изученным патогенезом, выраженной клинической вариабельностью и непредсказуемостью прогноза [Завалишин И. А., 1982; Гусев Е. И., Бойко А. Н. 2001; Lovis G. М., 1990; Martin С, 1991; Sadovnick A. D. et Ebers G. С, 1993, 1994; Riise Т., Wolfson С, i997]. Неясность ряда вопросов этиологии и патогенеза PC, трудности диагностики на ранних стадиях развития заболевания, своеобразие клинического течения, недостаток эффективных методов лечения при данной патологии и большая социальная значимость выводит изучение PC в круг наиболее актуальных задач неврологии в настоящее время [Гусев Е. И., Демина Т. Л., Бойко А. Н., 1997; Гусев Е. И., Бойко А. Н., 2001]. За последние десятилетия отмечен рост заболеваемости PC. На сегодняшний день число больных PC в России превышает 150000 [Завалишин И. А., 1982; Иерусалимский А. П., Малкова Н. А., 2000; Гусев Е. И., Бойко А. Н., 2001; Lovis G. W., 1990; Martin С. 1991; Sadovnick A. D. et Ebers G. С, 1993; Riise Т., 2001].

Согласно современному состоянию учения о патологии, в основу патогенеза различных воспалительных, дистрофических, дегенеративных, дисметаболических изменений в тканях и органах положена теория первичной или вторичной структурно-функциональной дестабилизации клеточных мембран. Данные процессы универсальны и не зависят от этиологических факторов [Александровский Ю. А, Поюровский М. В., Незнамов Г. Г., 1991; Захарова М. Н., Завалишин И. А., 1992, 2000]. Исходные мемб-рано-дестабилизирующие факторы реализуют свое действие через универсальные механизмы — повышение активности эндогенных фосфолипаз, увеличение активности процессов переокисления липидов (ПОЛ) клеточных мембран, ингибирование антиоксидантной системы защиты.

Высокий удельный вес липидов в ЦНС с одной стороны и факт демиелинизации в патогенезе PC с другой стороны позволяют предположить, что основу патофизиологических и пато-морфологических изменений при PC могут составлять мембра-нодестабилизирующие процессы.

Таким образом, анализ клинических проявлений PC с позиции мембранной патологии является актуальным и перспективным направлением в современной неврологии.

Исходя из состояния проблемы, в настоящей работе поставлена цель исследования: выявить связь между клиническими проявлениями PC и состоянием мембранодестабилизирующих механизмов; изучить у больных PC связь мембранодестабилизи-рующих процессов с состоянием процессов антиоксидантной защиты и структурой липидной фазы тромбоцитарных мембран.

Цель работы определила следующие задачи:

1) исследовать состояние активности фосфолипазы А2 и свободно-радикальных процессов (по содержанию диеновых конью-гатов и шиффовых оснований) и корреляционной взаимосвязи данных процессов с показателями дестабилизации мембран, а также с клиническими проявлениями патологии;

2) изучить у больных РС состояние антиоксидантных механизмов защиты и провести корреляционный анализ уровня ан-тиоксидантной защиты и выраженности мембранодестабилизи-рующих процессов;

3) изучить физико-химические критерии дестабилизации клеточных мембран у больных РС (по данным исследования фос-фолипидов и холестерина тромбоцитарных мембран) в зависимости от клинических проявлений заболевания;

4) оценить изменения состояния тромбоцитарных мембран в зависимости от тяжести заболевания и прогноза.

Научная новизна исследования. В работе установлена взаимосвязь клинических проявлений РС с мембранодестабилизиру-ющими процессами. Новым в проведенных исследованиях является установление роли процессов перекисного окисления мембранных липидов и избыточной активности эндогенных фос-фолипаз в реализации патофизиологических синдромов РС. Установлены четкие корреляции активности данных процессов с особенностями клинического течения заболевания. Новым в трактовке патогенеза мембранодестабилизирующих процессов при РС является положение о важной роли дефицита антиоксидантов в организме больного. В процессе работы установлена связь между интенсивностью ПОЛ, фосфолипидным составом мембран тромбоцитов,.и антиоксидантным потенциалом у больных РС в

зависимости от тяжести клинических проявлений и прогноза; разработаны дополнительные критерии диагностики тяжести процесса и его прогноза. В процессе работы изучена структур-но-функциональная организация липидной фазы мембран тромбоцитов, определена выраженность мембранодестабилизирующих процессов во взаимосвязи с состоянием механизмов. антиокси-дантной защиты у больных PC. Доказана патогенетическая роль выявленных изменений при PC.

Практическое значение работы. Результаты исследований активности эндогенных фосфолипаз, переокисления мембранных липидов и нарушения физико-химических параметров тромбо-цитарных мембран могут быть использованы в качестве дополнительных критериев диагностики тяжести и прогноза при PC.

Апробация и публикации. Основные положения диссертации доложены на:

1) VIII Всероссийском съезде неврологов (Казань, 2001);

2) Тюменском областном обществе неврологов (Тюмень, 2003);

3) XII Всероссийской научно-практической конференции неврологов (Санкт-Петербург, 2003);

4) Проблемной комиссии «Современные технологии диагностики, лечения и профилактики внутренних болезней (эндокринология, неврология, дерматология, психиатрия, офтальмология — терапевтические аспекты) (Тюмень, 2004).

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследования внедрены в практическую деятельность Тюменской городской больницы восстановительного лечения, используются для чтения лекций в Тюменской государственной медицинской академии.

Структура и объем диссертации. Диссертация содержит 133 страницы печатного текста, 20 таблиц. Библиография — 372 источника, из них 182 отечественных и 190 иностранных авторов.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

В настоящей работе находились под наблюдением 62 больных с диагнозом PC: 45 женщин и 17 мужчин, в возрасте от 18 до 64 лет. Средний возраст обследованных 40,05 ± 10,57 лет.

В работе использованы: классификация диагностических критериев Шумахера, диагностическая шкала Позера [1983г].

Контрольную группу составили 20 практически здоровых доноров: 10 мужчин и 10 женщин аналогичного возраста.

Клинические наблюдения проводили на базе Тюменской городской больницы восстановительного лечения (2000 - 2003 гг.), а специальные методы исследования в проблемной лаборатории клинической биохимии ЦНИЛа Тюменской медицинской академии.

Специальные методы исследования

Тромбоциты для исследования выделяли методом, предложенным Чуриным К. В. с соавт. [1996].

Специальные методы исследования, представлены:

1. Изучением содержания продуктов свободнорадикального окисления липидов во взвеси тромбоцитов:

а) определение концентрации диеновых коньюгатов полиненасыщенных жирных кислот фосфолипидов [Стальная И. Д., 1977];

в) шиффовых оснований [Меерсон Ф. 3. с соавт. 1979].

2. Уровень антиоксидантной защиты оценивали на основании следующих исследований:

а) определение содержания альфа-токоферола — жирорастворимого антиоксиданта [Рудакова-Шилина Н. К. с соавт., 1982];

б) исследование активности супероксиддисмутазы — фермента антирадикальной защиты [Верболович В. П., Подгорная Л. М., 1987];

в) исследование активности каталазы — фермента антипере-кисной защиты [Дубинина Е. Е. с соавт., 1988; Karen M. е. а., 1986].

3. Определением содержания фосфолипидов во взвеси тромбоцитов унифицированным методом с помощью малахитового зеленого, и определение холестерина методом, основанным на реакции Златкиса [Меньшиков В. В. 1987].

4. Определением фосфолипазной активности тромбоцитов [Ту-жилин С. А., Самуэнья А. М., 1975].

5. Определением общего белка во взвеси тромбоцитов [Дэве-ни Э., Герсей Я., 1976].

Специальные исследования проведены у каждого больного однократно. Контрольная группа обследована также однократно.

Всего проведено 902 специальных исследования.

Полученные цифровые данные подвергнуты математической обработке на персональном компьютере «Pentium-2000» с помощью пакета статистической обработки данных «Armstat». Статистическая обработка производилась с использованием t критерия Стьюдента для парных и непарных величин. Достоверность различий средних показателей оценивали при 95% доверительном интервале. Корреляционный анализ проводили путем вычисления коэффициента корреляции. Значимость корреляции оценивали с помощью критерия Стьюдента. Достоверными считали различия при значении р < 0,05.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В соответствии с современными представлениями больные PC по форме заболевания были распределены на три клинические группы: с ремитирующей, вторично-прогредиентной и пер-вично-прогредиентной формами заболевания. Распределение больных PC в зависимости от возраста, пола и формы заболевания представлены в таблице 1.

Таблица 1

Распределение больных PC в зависимости от возраста, пола и формы заболевания

Воз- РРС ВПРС ППРС Всего

раст п= 23 п =26 п= 13 п=62

лет М Ж М Ж М Ж

до 30 2(0,032) 5(0,08) - 3(0,048) 1(0,016) 1(0,016) 12(0,194)

30-40 2(0,032) 7(0.113) 2(0,032) 3(0,048) 1(0,016) 1(0,016) 16(0,258)

40-50 2(0,032) 4(0,065) 1(0,016) 10(0,16) 3(0,048) 2(0,032) 22(0,355)

50и> - 1(0,016) 1(0,016) 6(0,097) 2(0,032) 2(0,032) 12(0,194)

Всего 6(0,097) 17(0,27) 4(0,065) 22(0,355) 7(0,113) 6(0,097) 62(1,0)

Примечание: В скобках в данной таблице представлена частота признака

Как видно из таблицы 1, наибольшая частота заболевания PC среди обследованных больных наблюдалась в возрасте от 40 до 50 лет (22 наблюдения, что составляет 35,5%) и от 30 до 40 лет (16 наблюдений — 25,8%). Среди форм заболевания преобладала вторично-прогредиентная (26 наблюдений — 41,94%).

В зависимости от стадии патологического процесса больные были разделены на две группы. В стадии обострения обследовано 42 (67,7%) больных, 20 (32,3%) больных находились в стадии ремиссии.

Среди обследованных преобладают больные с продолжительностью заболевания более 10 лет — 24 больных, что составляет 38,7%.

В клинической картине заболевания у обследованных нами больных рассеянным склерозом имели место субъективные расстройства (головная боль — у 22 (35,48%) больных, головокружение — у 12 (19,35%) больных, общая слабость и быстрая утомляемость — у б (9,68%) больных). Субъективная симптоматика преобладает у больных с наименее тяжелыми формами заболевания — ремитирующей и вторично-прогредиентной.

Таблица 2

Выраженность очаговой неврологической симптоматики при различных формах PC

Анализируемый показатель РРС п=23 ВПРС п=26 ППРС п=13 Итого п=62

п % п % п % п %

Пирамидная недостаточность 11 48,83 2 7,69 - - 13 20,97

Легкий паоез 8 34,78 6 23,08 - - 14 22,58

Умеренно выпаженный парез 2 8,7 15 57,69 8 61,54 25 40,32

Выраженный парез и паралич - - 3 11,54 5 38,46 8 12,9

Легкая мозжечковая атаксия 16 69,57 4 15,38 - - 20 32,26

Умеренная мозжечковая атаксия 3 13,04 17 65,38 5 38,46 25 40,32

Выраженная мозжечковая атаксия - - 4 15,38 7 53,85 11 17,74

Нарушение функций тазовых органов 10 43,48 18 69,23 9 69,23 37 59,68

Поражение ЧМН 9 39,13 17 65,38 10 79,92 36 58,06

Чувствительные расстро йства 8 34,78 9 34,61 5 38,46 22 35,48

Частичная атрофия зритель" ных нервов 3 13,04 9 34,61 6 46,15 18 29,03

Гиперкинезы - - 2 7,69 1 7,69 3 4,84

Анализ таблицы 2 показал, что очаговая неврологическая симптоматика в наших наблюдениях представлена в виде мозжечковой атаксии у 56 (90,32%) больных, парезов и параличей у 47 (75,81%) больных, нарушений функций тазовых органов у 37 (59,68%), поражения черепно-мозговых нервов у 36 (58,06%) больных, чувствительных нарушений у 22 (35,48%) больных, частичной атрофии зрительных нервов у 18 (28,03%) больных, пирамидной недостаточности у 13 (20,97%) больных, гиперкинезов у 3 (4,84%) больных. При этом мы констатировали, что эти изменения закономерно усугубляются

от минимальных при благоприятном РРС до максимальных при ППРС. Так поражение пирамидной системы в виде пирамидной недостаточности с наибольшим постоянством (47,8%) встречается у больных с РРС, достаточно редкий симптом (7,6%) при ВПРС и совсем не встречается при ППРС. Умеренно выраженные парезы в наибольшей степени характерны для ППРС (61,5%) и ВПРС (57,6%) и значительно менее характерны для РРС (8,7%). Наиболее тяжелые двигательные нарушения, вплоть до развития параличей, совсем не представлены в группе РРС, а в группе ППРС наблюдается более чем в 3 раза чаще, чем при ВПРС. Аналогичные закономерности выявлены нами и при анализе выраженности мозжечковой атаксии при различных формах PC. Кроме того, мы выявили, что наиболее характерным для ППРС является сочетание умеренно выраженных парезов с выраженной мозжечковой симптоматикой, в то время как легкая мозжечковая атаксия совершенно не характерна для этой группы больных. Нарушения функций тазовых органов, поражение черепно-мозговых нервов, частичная атрофия зрительных нервов также наиболее характерна для больных с ВПРС и ППРС. Что касается чувствительных расстройств, то в наших наблюдениях они встречаются примерно с одинаковой частотой при любой клинической форме PC: у 8 (34,78%) больных РРС, у 9 (34,61%) больных ВПРС и у 5 (38,46%) больных ППРС.

Таблица 3

Распределение больных по шкале инвалидизации Куртцке в зависимости от формы заболевания

Анализируемый показатель РРС 11=23 ВПРС п=26 ППРС п=13 Итого п=62

п % п % п % п %

1 балл 2 8,67 - - - - 2 3,23

'>5 балла 5 21,74 - - - - 5 8,06

2 балла 4 17,39 - - - - 4 6,45

2.5 балла 9 39,13 4 15,38 - - 13 20,97

3 балла 3 13,04 10 38,46 1 7,69 14 22,58

3.5 балла - - 9 34,62 - - 9 14,52

4 балла - - 1 3,85 8 61,54 9 14,52

4.5 балла - - - - - - - -

5 баллов - - - - 2 15,38 2 3,23

5.5 балла - - 1 3,85 - - 1 1,61

6 баллов - - - - 2 15,38 2 3,23

7 баллов - - 1 3,85 - - 1 1,61

Тяжесть клинических проявлений у обследованных нами больных PC оценена с помощью шкалы инвалидизации по Куртцке. Данные представлены в таблице 3.

Степень инвалидизации по шкале Куртцке у больных РРС в целом не превышает 3 баллов, при этом наибольшее количество больных этой группы (39,1%) имеют степень инвалидизации 2,5 балла. В группе больных ВПРС в 73% наблюдений степень инвалидизации по шкале .Куртцке констатирована в пределах 3-3,5 балла, в то время как инвалидизация 5 и более баллов выявлена лишь у 7,6% больных. Характерной особенностью группы больных ППРС является значительное накопление пациентов со степенью инва-лидизации по шкале Куртцке 4 балла (61,5%) и более (30,7%).

Наряду с анализом клинических данных обследование больных PC включало проведение МРТ. С помощью метода МРТ обследовано 60 больных, что составляет 96,8%. Выявлены различные по локализации и форме очаги гиперинтенсивные в Т2-взвешенных и гипоинтенсивные в Т1-взвешенных изображениях.

Мы выявили, что для всех клинических форм PC характерным является наличие множественных очагов в перивентрику-лярной области. Наличие множественных очагов в белом веществе больших полушарий наиболее характерно для больных ППРС (у 5 больных, что составляет 41,7%) и менее характерно для больных РРС (у 3 больных — 13%) и ВПРС (у 4 больных — 16%). В то же время наличие единичных очагов как лобно-височной, так и лобно-теменной локализации более характерно для группы больных РРС (у 4 больных — 17,4%). Множественные сливные очаги, множественные очаги в стволе и ножках мозга, атрофия червя мозжечка чаще встречаются у больных ППРС.

В целом наши наблюдения позволили установить, что клинические проявления PC соответствуют данным, представленным в литературе.

Клинические проявления PC взаимосвязаны с рядом механизмов, регламентирующих структурно-функциональную организацию клеточных мембран.

Состояние мембрано-дестабилизирующих процессов характеризуется различными критериями. Это, прежде всего, уровень функциональной активности эндогенных фосфолипаз, динамика накопления липоперекисей, а также характер и уровень изменений физико-химических параметров клеточных мембран.

Как следует из полученных результатов, у больных с PC имеет место статистически достоверное повышение активности фосфолипазы А2, а также продуктов ПОЛ — диеновых коньюга-тов (ДК) и шиффовых оснований (ШО) относительно значений тех же показателей у лиц контрольной группы.

Нами выявлено, что содержание липоперекисей в мембранах тромбоцитов статистически достоверно повышено у больных PC независимо от стадии заболевания, и в период клинической ремиссии эти показатели не приходят в соответствие с нормативными параметрами. Активность фосфолипазы А2 также статистически достоверно выше у больных PC по сравнению со здоровыми, при этом в период клинической ремиссии заболевания наблюдается даже более высокий уровень активности фосфолипазы чем в период обострения, что может быть косвенным свидетельством того, что активность фосфолипазы А2, не являясь ведущим фактором в механизмах срыва компенсации при данном заболевании, является дестабилизирующим механизмом и в период клинической ремиссии заболевания. Данные представлены в таблице 4.

Таблица 4

Показатели активности ФЛА2 и содержание продуктов ПОЛ в тромбоцитах больных PC в зависимости от стадии заболевания (М±т)

Анализируемые показатели Величу ны анализиоуемых показателей

У здоровых, п=20 У больных в стадии обострения. п=42 У больных в стадии ремиссии. п=20

Фосфолипаза Аз мкмоль/мг белка 0,33+0,03 1,65+0,1* 2,05+0,2 *, **

Диеновые коньюгаты нмоль/мг липилов 36,13+0,56 50,74+4,3* 52,7+0,4*

Шиффовы основания V е. фл/мг липилов 61,5+2,97 80,79+5,9* 80,9+7,8*

Примечание: р<0,05; * — р — достоверность статистических различий между показателями у здоровых и больных PC в зависимости от стадии заболевания; ** - р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC в стадии обострения и ремиссии.

Мы провели дифференцированный анализ состояния механизмов дестабилизации мембран тромбоцитов у больных с ремитирующей, вторично-прогредиентной и первично-прогредиентной формами PC. При всех формах PC активность фосфолипазы Аг и содержание продуктов перекисного окисления липидов в мембранах тромбоци-

тов многократно превосходят нормативные параметры. Активность фосфолипазы Аз достоверно выше у больных с более тяжелыми формами заболевания — ППРС и ВПРС, по сравнению с РРС. Отмечена явная тенденция повышения накопления липоперекисей (ДК и ШО) по мере утяжеления РС, однако статистически достоверная разница получена лишь в отношении шиффовых оснований, их уровень статистически достоверно выше у больных с ВПРС по сравнению с больными РРС. Данные представлены в таблице 5.

Таблица 5

Показатели активности ФЛА2 и содержание продуктов ПОЛ в тромбоцитах больных PC в зависимости от формы заболевания (М±ш)

Анализируемые показатели Величины анаш нзируемых показг целей

У здоровых п=20 У больных РРС п=23 У больных ВПРС п=26 У больных ППРС п=13

Фосфолипаза Аг мкмоль/мг белка 0,33+0,03 1,52+0,04* 1,98+0,1* *** 2,02+0,18* **

Диеновые коньюгаты нмоль/мг липидов 36,13+0,56 49,9+4,1* 56,06+4,8 * 54,88+4,9*

Шиффовы основания v-е.фл/мг липиаов 61,5+2,97 71,64+6,8* 93,01+8,8 * *** 77,17+6,8*

Примечание: р<0,05; * — р — достоверность статистических различий между показателями у здоровых и больных PC; ** — р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC с ППРС и РРС; *** . р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC с ВПРС и РРС.

Полученные нами результаты свидетельствуют о том, что активность эндогенных фосфолипаз и процессов ПОЛ значимы в патогенезе PC, причем определяющую роль изученные нами процессы имеют в реализации формы заболевания и в меньшей степени значимы в механизмах, определяющих экзацербацию процесса или ремиссию.

Одним из важнейших механизмов, регулирующих активность переокисления липидов и косвенно функциональную значимость эндогенных фосфолипаз, является состояние системы антиоксидантной защиты в организме больного. Анализ состояния отдельных звеньев системы антиоксидантной защиты — активность супероксиддисмутазы (СОД), катал азы и содержание

а-токоферола в тромбоцитах больных PC — позволил выявить ряд изменений в данной системе.

При анализе показателей системы антиоксидантной защиты в группе больных PC в целом в сравнении с показателями у здоровых выявлено статистически достоверное повышение активности каталазы и снижение содержания а-токоферола. Активность СОД в тромбоцитах больных PC имеет четкую тенденцию к повышению по сравнению с контрольной группой, однако статистически достоверной разницы мы не выявили.

Мы проанализировали состояние отдельных звеньев системы антиоксидантной защиты у больных в зависимости от стадии процесса и клинической формы заболевания (данные представлены в таблицах б и 7).

Как следует из показателей, представленных в таблице б, при обострении PC существенно не изменяется активность СОД, но статистически достоверно повышается активность каталазы. в тромбоцитах обследованных нами больных. В состоянии клинической ремиссии PC мы констатировали статистически достоверное повышение активности и СОД, и каталазы, причем активность СОД в период ремиссии заболевания статистически достоверно выше, чем в период обострения.

Таблица 6

Показатели активности ферментов антиоксидантной защиты и содержания а-токоферола в тромбоцитах больных PC в зависимости от стадии заболевания (М±т)

Анализируемые показатели Величины анализипуемых п оказателей

У здоровых, п=20 У больных в стадии обострения. п=42 У больных в стадии ремиссии. п=20

сод у-е. торм/мг белка 2,21+0,20 2,44+0,1 3,11+0,2* **

Каталаза мкмоль/мг белка 1,51+0,13 2,85+0,1* 3,02+0,21*

сгтокоферол нмоль/мл 3,75+0,28 2,22+0,2* 2,19+0,1*

Примечание: р<0,05; * — р — достоверность статистических различий между показателями у здоровых и больных PC; ** - р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC в стадии обострения и ремиссии.

Полученные результаты могут свидетельствовать о том, что система антиоксидантной защиты испытывает напряжение и при обострении, и при ремиссии PC и, вполне вероятно, что несостоятельность отдельных ее звеньев является одним из факторов в реализации патохимических процессов, лежащих в основе эк-зацербации заболевания. Это предположение подтверждается данными анализа-содержания эндогенного антиоксиданта сс-то-коферола в тромбоцитах больных PC: уровень а-токоферола в тромбоцитах больных PC стабильно низкий как при обострении, так и при ремиссии PC, что может быть результатом его активного потребления в условиях оксидантного стресса.

Состояние системы антиоксидантной защиты детерминирует в определенной степени форму PC (данные представлены в таблице 8).

Таблица 7

Показатели активности ферментов антиоксидантной защиты и содержания а-токоферола в тромбоцитах больных PC в зависимости от формы заболевания (М±т)

Анализируемые показатели Величины анализируемых показателей

У здоровых п=20 У больных РРС п=23 У больных ВПРС п=26 У больных ППРС п=13

сод у-е. торм/мг белка 2,21+0,20 2,98+0,2* *** 2,67+0,21** 1,94+0,1

Катал аза мкмоль/мг белка 1,51+0,13 2,66+0,1**** 2,61+0,2* ** 3,42+0,2*

атокоферол нмоль/мл 3,75+0,28 2,183+0,1* 2,27+0,1* 2,24+0,2*

Примечание: р<0,05; * — р — достоверность статистических различий между показателями у здоровых и больных PC; ** — р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC с первич-но-прогредиентной и вторично-прогредиентной формами заболевания; *** - р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC с первично-прогредиентной и ремитирующей формами заболевания.

Как следует из данных, представленных в таблице 7 активность СОД и каталазы повышена, а содержание а-токоферола снижено в тромбоцитах больных РРС по сравнению с контро-

лем. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при РРС система антиоксидантной защиты реагирует на повышение активности процессов ПОЛ и резерв этой активации, по-видимому, не исчерпан. У больных ВПРС также активность каталазы повышена, а содержание а-токоферола снижено, однако обращает внимание более низкий уровень активности СОД по сравнению с группой больных РРС (разница статистически недостоверна). Выявленная особенность динамики СОД в тромбоцитах больных РРС и ВПРС может быть свидетельством депрессии активности данного фермента при переходе ремитирующей формы заболевания в менее благоприятную вторично-прогредиент-ную, то есть имеет патогенетическое значение. При ППРС активность каталазы повышается, уровень а-токоферола снижается. На этом фоне депрессия активности СОД выглядит еще более убедительной: активность СОД ниже, чем в контрольной группе и во всех клинических группах. Интерпретировать полученные данные можно следующим образом: более высокая активность каталазы в тромбоцитах больных ППРС может быть свидетельством крайнего напряжения данного уровня системы антиоксидантной защиты в условиях оксидантного стресса, а более низкий уровень активности СОД может быть проявлением несостоятельности этого фермента.

В целом полученные результаты позволяют констатировать наличие изменений в системе антиоксидантной защиты при всех формах как в период ремиссии, так и в период обострения PC. Большая несостоятельность системы антиоксидантной защиты при наиболее неблагоприятной форме PC (ППРС) позволяет говорить о сопряженности этих изменений с тяжестью патологического процесса при данном заболевании. Таким образом, выявленные нами изменения вскрывают еще одно патогенетическое звено в системе реакций, обусловливающих в конечном итоге мембрано-дестабилизирующие изменения при PC.

Под воздействием процессов ПОЛ происходит модификация липидного бислоя клеточных мембран [Крылов В. И., 1987; Владимиров Ю. А., 1982, 1989; Галян С. Л., 1993; Бышевский А. III, 1994].

У больных PC наблюдаются значительные изменения в структуре липидной фазы тромбоцитарных мембран: мембрана обогащается холестерином на фоне значительного снижения содер-

жания фосфолипидов. При этом соотношение холестерин/фос-фолипиды изменяется (различия статистически достоверны). Кроме того, мы выявили статистически достоверное повышение содержания кальция в тромбоцитах больных PC по сравнению с контрольной группой.

Структура липидной фазы тромбоцитарных мембран и содержание кальция в тромбоцитах больных PC в зависимости от стадии. заболевания представлена в таблице 8.

Таблица 8

Структура липидной фазы тромбоцитарных мембран и содержание кальция в тромбоцитах больных PC в зависимости от стадии заболевания (М±т).

Анализируемые показатели Величины анализируемых п оказателей

У здоровых, п=20 У больных в стадии обострения. п=42 У больных в стадии ремис" сии. п=20

Общий холестерин мкмоль/мл 0,291+0,02 0,47+0,032* 0,443+0,03*

Общие фосфолипиды мкмоль/мл 0,184+0,016 0,07+0,005* 0,106+0,01* **'

Кальций мкмоль/мл 0,026+0,003 0,053+0,004* 0,052+0,004*

ХС/ФЛ 1,58 6,7 4,18

Примечание: р<0,05; * — р — достоверность статистических различий между показателями у здоровых и больных PC; ** — р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC в стадии обострения и ремиссии.

Анализ данных в таблице 8 позволил определить, что уровень холестерина в мембранах тромбоцитах не имеет существенных различий в зависимости от стадии заболевания, столь же стабильно повышение уровня внутриклеточного кальция. Однако уровень общих фосфолипидов при обострении PC статистически достоверно ниже, чем в период ремиссии. В итоге соотношение холестерин/фосфолипиды в значительно большей степени изменен в стадии обострения заболевания. Однако и в период ремиссии данный показатель не соответствует нормативным параметрам. Выявленные изменения позволяют сделать вывод о том, что мембранодестабилизирующие изменения сохраняются и в период ремиссии PC.

Мы провели исследование структуры липидной фазы тром-боцитарных мембран у больных PC в зависимости от формы заболевания. Данные представлены в таблице 9.

Таблица 9

Структура липидной фазы тромбоцитарных мембран и содержание кальция в тромбоцитах больных РС в зависимости от формы заболевания (М±т)

Анализируемые показатели Величины анализи г)уемых показателей

У здоровых п=20 У больных РРС п=23 У больных ВПРС п=26 У больных ППРС п=13

Общий холестерин мкмоль/мл 0,291+0,02 0,449+0,04* 0,487+0,04* 0,436+0,03*

Общие фосфолипиды мкмоль/мл 0,184+0,016 0,101+0,009* *** 0,086+0,006* ** 0,059+0,004*

Кальций мкмоль/мл 0,026+0,003 0,047+0,004* 0,057+0,004* 0,057+0,005*

ХС/ФЛ 1,58 4,45 5,66 7,39

Примечание: р<0,05; * — р — достоверность статистических различий между показателями у здоровых и больных PC; ** - р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC с первич-но-прогредиентной и вторично-прогредиентной формами заболевания; *** - р — достоверность статистических различий между показателями у больных PC с первично-прогредиентной и ремитирующей формами заболевания.

Уровень холестерина и кальция в мембранах тромбоцитов больных с различными клиническими формами PC существенно не отличается. Обеднение мембран тромбоцитов фосфолипида-ми в меньшей степени выражено при РРС, существеннее у больных ВПРС и наиболее значительные у больных ППРС. Соответственно соотношение холестерин/фосфолипиды закономерно увеличивается от минимальных значений у больных РРС до максимальных значений у больных ППРС.

В целом полученные результаты свидетельствуют о том, что наиболее значительные структурные изменения липидной фазы тромбоцитарных мембран наблюдаются у больных с наиболее тяжелым формами заболевания, что является свидетельством их патогенетической значимости.

Мы провели математический корреляционный анализ и установили положительную корреляционную зависимость между тяжестью клинических проявлений PC и содержанием в мембранах тромбоцитов ДК (гху = +0,487), ШО (гху =+0,721), а также активностью фосфолипазы А2 (гху =+0,597). Установлена отрицательная корреляционная зависимость между тяжестью клинических проявлений PC и содержанием в мембранах тромбоцитов альфа-токоферола(гху = - 0,6520) и фосфолипи-дов (гху = - 0,732) Приведенные коэффициенты корреляции достоверны (р < 0,001).

Проведенный нами корреляционный математический анализ свидетельствует о том, что выявленные изменения детерминированы тяжестью клинических проявлений PC, что является подтверждением их патогенетического значения.

Таким образом, в целом мы можем констатировать, что в патогенезе PC значительное место принадлежит активации ферментативного и свободно-радикального окисления липидов клеточных мембран в условиях несостоятельности или неполной состоятельности механизмов антиоксидантной защиты. Следствием этого являются значительные изменения структуры клеточных мембран и их функции. Изменения, выявленные на модели тромбоцитов, являются базовыми, коррелируют с тяжестью клинических проявлений PC, а значит во многом их определяют. Проведенные в настоящей работе комплексные клинико-биохимичес-кие исследования выявили новые звенья патогенеза PC на уровне структурно-функциональной организации клеточных мембран. Полученные данные позволили обосновать ряд клинических проявлений заболевания с позиции «мембранной патологии».

ВЫВОДЫ

1. Развитие рассеянного склероза сопровождается у больных значительным повышением в тромбоцитах активности эндогенных фосфолипаз и процессов переокисления мембранных липи-дов пропорционально тяжести клинических проявлений - степень активации значительнее при первично-прогредиентном рассеянном склерозе.

2. Различие степени активации фосфолипазного и перекис-ного окисления мембранных липидов в зависимости от тяжести

клинических проявлений рассеянного склероза указывает на их патогенетическое значение.

3. Наряду с признаками активации процессов перекисного окисления липидов при рассеянном склерозе в тромбоцитах больных выявляются изменения системы антиоксидантной защиты — повышение активности супероксиддисмутазы, каталазы и снижение содержания альфа-токоферола. Данные изменения коррелируют с тяжестью клинических проявлений заболевания.

4. При рассеянном склерозе выявлены структурные изменения липидной фазы мембран тромбоцитов в виде увеличения индекса холестерин/фосфолипиды за счет прироста концентрации, холестерина и снижения суммарного содержания фосфолипидов.

5. При рассеянном склерозе выявлено повышение содержания внутриклеточного кальция в тромбоцитах больных пропорционально тяжести клинической формы заболевания, что указывает на его патогенетическое значение.

6. При рассеянном склерозе существуют положительные корреляции между тяжестью клинических проявлений и активностью фосфолипазного и перекисного окисления мембранных ли-пидов и отрицательные — между тяжестью клинических проявлений и содержанием в мембранах тромбоцитов альфа-токоферола и фосфолипидов, что является доказательством патогенетической роли изученных процессов.

Практические рекомендации

. 1. Для контроля над состоянием процессов перекисного окисления липидов у больных рассеянным склерозом целесообразно определять в мембранах тромбоцитов содержание липоперекисей (ДК, ШО), концентрация которых является объективным критерием тяжести заболевания и имеет прогностическое значение.

2. Определение соотношения холестерин/фосфолипиды и кальция в тромбоцитах больных рассеянным склерозом может быть использовано для оценки степени дестабилизации клеточных мембран в организме, для обоснования применения мембра-но-стабилизирующей терапии, а также для контроля эффективности традиционных методов лечения.-

3. Определение концентрации в тромбоцитах альфа-токоферола и активности ферментов антиоксидантной защиты (СОД и

каталазы) может быть рекомендовано для решения вопроса о целесообразности коррекции процессов свободнорадикального окисления у больных рассеянным склерозом в процессе лечения

Список публикаций по теме диссертации

1. Быченко С. М. Активность перекисного окисления липидов и анти-оксидантной защиты при рассеянном склерозе. // Тюменский медицинский журнал, 2000. №3-4. С. 39. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л.).

2. Быченко С. М. Состояние липидной фазы мембран лимфоцитов у больных рассеянным склерозом. // Тюменский медицинский журнал, 2000. №3-4. С. 40-41 (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л.).

3. Быченко С. М. Активность супероксиддисмутазы при рассеянном склерозе. // VIII Всероссийский съезд неврологов: Тез. докл. Казань, 2001. С. 9192. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л., Кичерова О. А., Замятина Е. А.).

4. Быченко С. М. Алгоритм ведения больных рассеянным склерозом в Тюменской области. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2001. №4. С. 35. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л.).

5. Быченко С. М. Эпидемиология рассеянного склероза в г. Тюмени. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2001. №4. С. 36. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л., Гладышев Е. С).

6. Быченко С. М. Опыт применения копаксона при лечении больных рассеянным склерозом. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2002. №7-8. С. 33. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л., Киче-рова О. А., Замятина Е. А.).

7. Быченко С. М. Роль свободнорадикального окисления в патогенезе рассеянного склероза. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2002. № 7-8. С. 38-39. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л., Соколова А. А.).

8. Быченко С. М. Роль мембранно-дестабилизирующих механизмов в патогенезе рассеянного склероза. // Научный вестник Тюменской медицинской академии, 2003. № 5-6. С. 54-55. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л., Соколова А. А., Кичерова О. А., Замятина Е. А.).

9. Быченко С. М. Состояние фосфолипазного и свободнорадикального окисления липидов в тромбоцитах больных рассеянным склерозом. // Материалы XII Всероссийской конференции «Нейроиммунология» и научно-практической конференции неврологов. Нейроиммунология, ежеквартальный научно-практический рецензируемый журнал. С-Петербург, 2003. Т. I, № 2. С. 126-127. (соавт.: Рейхерт Л. И., Маркина О. Л., Замятина Е. А.).

Список сокращений

ВПРС — вторично прогрессирующий рассеянный склероз

ДК — диеновые конъюгаты

ОФЛ — общие фосфолипиды

ОХЛ — общий холестерин

ПОЛ — перекисное окисление липидов

ППРС — первично прогрессирующий рассеянный склероз

PC — рассеянный склероз

РРС — ремитирующий рассеянный склероз

СОД — супероксиддисмутаза

ФЛА2 — фосфолипаза Аз

ЧМН — черепно-мозговые нервы

ШО — шиффовы основания

Са — кальций внутриклеточный

ЛР 020405 от 14.05.97 Подписано в печать 4.03.2004. Тираж 100 экз. Объем 1,0 уч.-изд. л. Формат 60x84/16. Заказ 164.

Издательство Тюменского государственного университета 625000, г. Тюмень, ул. Семакова, 10.

0 - 4 873