Автореферат и диссертация по медицине (14.00.03) на тему:Патогенетическое обоснование использования иммунокорригирующей терапии в комплексном лечении сахарного диабета 1-го типа (экспериментально-клиническое исследование)

На правах рукописи

Новиков Владимир Иванович

ПАТОГЕНЕТИЧЕСКОЕ ОБОСНОВАНИЕ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ ИММУНОКОРРИГИРУЮЩЕЙ ТЕРАПИИ В КОМПЛЕКСНОМ ЛЕЧЕНИИ САХАРНОГО ДИАБЕТА 1 ТИПА (ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНО-КЛИНИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)

14.00.03 -эндокринология

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени доктора медицинских наук

Москва - 2004

Работа выполнена в Смоленской Государственной Медицинской Академии МЗ РФ.

Научные консультанты: Доктор медицинских наук, профессор Аметов Александр Сергеевич

Доктор медицинских наук, профессор Молотков Олег Владимирович

Официальные оппоненты: Доктор медицинских наук, профессор

Балаболкин Михаил Иванович

Доктор медицинских наук, профессор Мкртумян Ашот Мусаелович

Доктор медицинских наук, профессор Тишенина Раиса Степановна

Ведущие учреждения: Российский государственный медицинский университет

Защита диссертации состоится года на заседании диссертационного совета Д.208.071.05 при Российской Медицинской Академии последипломного образования по адресу: 123995, г. Москва, ул. Баррикадная, д. 2/1.

С диссертацией можно ознакомиться в фундаментальной библиотеке Российской Медицинской Академии последипломного образования МЗ РФ по адресу: 125 445, г. Москва, ул. Беломорская, д. 19.

Автореферат разослан

.. УЗ „ налом

. 2004 года.

Ученый секретарь диссертационного совета д.м.н. профессор

С.М.

Чудных

гооб-к 2Ш

ОБШДЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. В настоящее время сахарный диабет является одной из ведущих медико-социальных проблем современной медицины. Одной из наиболее тяжелых форм СД является сахарный диабет 1 типа. Начинаясь, как правило, в молодом возрасте, он становится причиной ранней инвалидизации и смертности за счет острых (диабетические комы) и хронических сосудистых и инфекционных осложнений, что приводит к существенному снижению (в среднем на 50%) продолжительности жизни. К этому следует добавить значительные экономические затраты на лечение и медико-социальную реабилитацию больных СД 1 типа (Аметов А.С., 2003, Балаболкин М.И., и соавт. 2002, Дедов И.И., 2003, Williams G., 2004).

Современные клинические подходы к лечению СД 1 типа основаны на принципах адекватной заместительной инсулинотерапии, диетотерапии, рациональной физической нагрузки, обучения и самоконтроля (Дедов И.И. 2003, J. Pipuc 1997, PJ. Lifebvre 1998). Вместе с тем, сформированная в настоящее время концепция СД 1 типа как органоспецифического аутоиммунного заболевания, а также данные о наличии гена, ответственного за процессы регенерации -клеток (reg-gene), о возможности их новообразования из клеток протокового эпителия, наличие феномена «ацино-инсулярной трансформации», ставит задачу разработки методов патогенетической терапии, направленной на блокаду (сдерживание) иммуно-метаболической агрессии против -клеток поджелудочной железы и предотвращения развития абсолютной инсулиновой недостаточности (Бала-болкин М.И., и соавт. 2002, Дедов И.И., и соавт. 2004). Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что процесс хронической иммуно-опосредованной деструкции (î-клеток поджелудочной железы длительно предшествует клинической манифестации СД 1 типа, наблюдаемой только после гибели 80-90% из всего пула инсулинопродуцирующих клеток. Эти данные свидетельствуют о необходимости начала патогенетической терапии, с учетом имеющейся в настоящее время возможности проведения скрининга (титр аутоантител, снижение 1-й фазы секреции инсулина), как минимум на стадии преддиабета. Вместе с тем, в повседневной клинической практике врачи-диабетологи, эндокринологи, терапевты сталкиваются в основном с манифестирующим СД 1 типа, когда остаются неразрушенными 10-20% 0-клеток поджелудочной железы (Балаболкин М.И., 2002, Дедов И.И., 2004, Atkinson M. 2001, Coher I.R. 2002).

Раннее применение средств патогенетической терапии в дебюте СД 1 типа имеет цель - максимально сохранить секрецию инсулина оставшимися неразрушенными ji-клетками с перспективой возможного повышения их функциональной активности. В связи с этим важно подчеркнуть, что наличие эндогенной (остаточной) секреции собственного инсулина, пусть

даже в минимальном количестве, способствует стабильному клиническому течению заболевания, меньшей дозе вводимого инсулина, и в дальнейшем предопределяет замедление развития поздних сосудистых осложнений (Дедов И.И., 2003, Williams G., 2004).

В связи с этим, в качестве перспективных патогенетических подходов к профилактике и лечению СД 1 типа рассматриваются антиоксидантная и иммунотерапия, включающая в себя иммуносупрессию и иммуномодуля-цию, поскольку именно активации процессов ПОЛ и аутоагрессии придают ведущую роль в разрушении бета-клеток поджелудочной железы (Ба-лаболкин М.И., и соавт. 2002, Доклад исследовательской группы ВОЗ., 1995).

Проведенные экспериментальные исследования показали положительный эффект превентивного применения таких антиоксидантов как токоферола и никотинамида, аминогуанидина и др. блокирующих индукцию СД 1 типа (Дедов И.И., 2003, Atkinson M., 2001, Coher I.R., 2002).

С учетом аутоиммунной концепции патогенеза СД 1 типа большие надежды на возможность блокады развития заболевания на доклинических стадиях возлагаются на иммунотерапию (поиск безопасных иммуносу-прессорных средств, раннее начало инсулинотерапии, стимуляция толерантности к антигенам р-клеток («вакцинация»), введение молекул - модуляторов апоптоза, антител с CD4, рецептору ИЛ-2 и т.д., линамид). В последние годы в литературе появились немногочисленные сообщения о возможности блокады развития СД 1 типа пептидами тимуса (5-я фракция тимозина, (Xi- и <Х7^гимозин, тимический сывороточный фактор) (Рахимова Г.Н., 2002, Yamanoutchi Т., 1994, Mizutani M., 1996, Seddon V., 1997).

Однако, следует особо подчеркнуть, что в Российской Федерации такого рода исследования пока не проводились.

Исследования последних лет свидетельствуют об особом значении в патогенезе СД 1 типа нарушений функционирования регуляторных (супрес-сорных) механизмов иммунной системы и дисфункции тимуса. Одной из причин дисфункции регуляторных Т-лимфоцитов может быть врожденное или приобретенное нарушение деятельности тимуса, как центрального органа иммунной системы. Считается, что нарушение функции вилочковой железы, и в частности снижение продукции гормонов, может быть одной из причин образования аутореактивных клонов Т-лимфоцитов, цитотокси-ческих по отношению к -клеткам поджелудочной железы (Балаболкин М.И., и соавт, 2002, Williams J., 2004).

Проведенные к настоящему времени экспериментальные и клинические исследования свидетельствуют о существенном уменьшении гормонопро-дуцирующей активности тимуса, о чем говорит снижение содержания в плазме крови тимического сывороточного фактора, а также его массы (атрофия), что наблюдается как на стадии преддиабета, так и в дебюте заболевания (Акмаев И.Г., 2002, Харченко В.П., и соавт, 1998).

В связи с этим отметим, что помимо иммунотропной тимические гормоны обладают широкоспектральной метаболической активностью, оказывая влияние на активность ферментов цикла Кребса, пентозофосфатного цикла, цитохромной системы, (р450 и т.д.); обмен ксенобиотиков, микроэлементов, гормональный статус, активность ферментов антиоксидантной защиты, Na-K-АТФазы, липидный обмен, обладают антиапоптозным эффектом, влияют на течение процессов физиологической и репаративной регенерации (за счет взаимодействия с гистоном Н1) (Кемилева 3., 1984, Караулов А.В., 1999, Williams J., 2004). Эти данные позволили высказать предположение о возможности их использования в лечении СД 1 типа (Потемкин В.В., и соавт., 1991, Соколов Е.И., 1998, Балаболкин М.И., 2002, Seddon V., 1997, Mizutani M., 1996).

Однако данное направление находится на начальном этапе исследования, многие аспекты действия пептидов тимуса на развитие различных стадий СД 1 типа не изучены.

Все сказанное явилось основанием для проведения данного экспериментально-клинического исследования по изучению эффективности пептидов тимуса в профилактике и лечении СД 1 типа.

Цель исследования - разработка и обоснование патогенетических подходов к профилактике и лечению сахарного диабета 1 типа, направленных на сохранение и повышение функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние пептидов тимуса на развитие экспериментального сахарного диабета.

2. Изучить влияние различных схем введения пептидов тимуса на динамику клинических, гормонально-метаболических показателей при развившемся экспериментальном сахарном диабете.

3. Изучить влияние пептидов тимуса на морфологические показатели в поджелудочной железе крыс при экспериментальном сахарном диабете.

4. Провести сравнительный анализ влияния раздельного и сочетанного применения пептидов тимуса и -токоферола на течение экспериментального сахарного диабета.

5. Изучить влияние пептидов тимуса на гормонально-метаболические показатели у интактных животных.

6. На основании проведенных исследований разработать оптимизированную схему иммунотерапии при экспериментальном сахарном диабете.

7. Провести анализ состояния клеточного и гуморального звеньев иммунитета и их взаимосвязь с гормонально-метаболическими показателями у больных с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа.

8. Изучить влияние пептидов тимуса на динамику иммунологических и гормонально-метаболических показателей у больных сахарным диабетом 1 типа.

9. Провести комплексную оценку влияния иммунотерапии на клиническое течение сахарного диабета 1 типа.

Научная новизна полученных результатов:

1. Впервые показано наличие у пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, протективного эффекта в развитии экспериментального аллок-сан- и стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета.

2. Впервые получены данные о терапевтическом эффекте Т-активина в лечении экспериментального сахарного диабета:

- повышение и длительное сохранение функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы;

- снижение активности процессов ПОЛ (антиоксидантное действие) в плазме крови;

- увеличение относительной массы тимуса (ТИ) и селезенки (СИ);

- морфологические данные, свидетельствующие о наличии восстановительных процессов в инсулинпродуцирующих структурах поджелудочной железы (новообразование бета-клеток и островков Лангерганса).

3. Впервые показано, что введение Т-активина больным с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа приводило к снижению количества лимфоцитов, экспрессирующих активационные антигены, повышению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы, сопровождалось антиоксидантным действием, в результате чего снижалась суточная доза вводимого инсулина, наблюдалась стабилизация клинического течения заболевания.

Основные положения выносимые на защиту:

Ь ^активин обладает протективным эффектом в развитии экспериментального сахарного диабета.

2. Введение Т-активина при развившемся экспериментальном сахарном диабете ведет к частичному восстановлению и длительному сохранению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы.

3. Введение Т-активина больным с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа ведет к снижению гиперэкспрессии на лимфоцитах активаци-онных антигенов, снижению активности процессов ПОЛ, повышению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы, снижению дозы вводимого инсулина, стабилизации клинического течения заболевания; и может быть рекомендовано в качестве патогенетической терапии в комплексном лечении впервые выявленного сахарного диабета 1 типа.

Практическая значимость полученных результатов.

Результаты проведенных экспериментальных исследований показали возможность профилактики развития сахарного диабета 1 типа путем применения пептидов тимуса (Т-активин) на доклинической стадии развития заболевания, что позволяет рекомендовать их к апробации в клинической практике.

Полученные экспериментально-клинические данные позволяют рекомендовать включение пептидов тимуса (Т-активина) в комплексную терапию впервые выявленного сахарного диабета 1 типа в качестве средства патогенетической терапии, направленной на нормализацию течения иммунологических процессов и коррекцию метаболических нарушений, с целью блокады (сдерживания) дальнейшей прогрессирующей гибели оставшихся неразрушенными в дебюте заболевания бета-клеток поджелудочной железы. Введение пептидов тимуса в поддерживающем режиме ведет не только к длительному сохранению, но и, что важно особо подчеркнуть, повышению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы, что свидетельствует о наличии восстановительных (репаративных) процессов в инсулинпродуцирующих структурах. При этом происходило существенное снижение суточной дозы экзогенно вводимого инсулина, что помимо медицинских аспектов имеет существенное экономическое значение.

Предложенный метод иммунотерапии сахарного диабета 1 типа позволяет существенно повысить эффективность проводимого лечения за счет стабилизации клинического течения заболевания, что является основой профилактики развития сосудистых, инфекционных и других осложнений заболевания, а также улучшить качество жизни пациентов.

Личный вклад соискателя.

Автор самостоятельно проводил экспериментальные исследования и клинический осмотр пациентов для научного исследования, активно участвовал в комплексном лабораторно-инструментальном обследовании больных, производил статистическую обработку полученных результатов. На основании полученных экспериментальных клинических данных автор предложил рациональный и экономически обоснованный метод включения иммунотерапии в комплексное лечение сахарного диабета I типа.

Внедрение результатов исследования в практику.

Практические рекомендации, вытекающие из полученных результатов, апробированы и внедрены в областной клинической больнице, где выполнялось настоящее исследование, областном диабетологическом центре и в поликлинических лечебных учреждениях Смоленской области. Материалы исследования включены в цикл лекций и практических занятий по патофизиологии, морфологии, иммунологии, эндокринологии и диабетологии для студентов 3-6 курсов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов, врачей факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов Смоленской государственной медицинской академии.

Апробация работы. Основные результаты исследований и положения диссертации доложены и обсуждены на межобластных (Смоленская, Брянская, Калужская, Тульская, Орловская, Калининградская) научно-практических конференциях врачей-эндокринологов, диабетологов, терапевтов (1991, 1999, 2002, 2003); на совместных заседаниях Смоленских от-

делений обществ патофизиологов, морфологов, биохимиков, фармакологов, биологов, иммунологов (1991, 1995, 2000, 2003); на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии» (Смоленск, 1994); на научно-практической конференции молодых ученых России, посвященной 50-летию АМН РФ (Москва, 1994); на XIII Европейском Диабетологическом конгрессе (Австрия, 1995); на Национальных научно-практических конференциях «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 1999, 2001); на Международной научно-практической конференции «Загрязнение окружающей среды и здоровье населения» (Смоленск, 1999); на II Всероссийском съезде эндокринологов (Челябинск, 1991), III Всероссийском съезде эндокринологов (Москва, 1996), I Российском диабетологическом конгрессе (Москва, 1998), IV Всероссийском конгрессе эндокринологов (Санкт-Петербург, 2001).

Публикации. По теме докторской диссертации опубликовано 44 печатных работы.

Структура и объем диссертации.

Работа состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка литературы. Работа изложена на 210 страницах, иллюстрирована 29 таблицами, и 44 диаграммами. Список литературы включает 185 отечественных, 222 зарубежных источников.

СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Материалы и методы исследования

Проведенные исследования включали в себя экспериментальный и клинический раздел по оценке эффективности пептидов тимуса (Т-активин) в профилактике и лечении сахарного диабета 1 типа.

Экспериментальная часть исследования.

Экспериментальная часть работы выполнена на 865 белых крысах обоего пола линии «Wistar», включающая в себя два раздела: протективный и лечебный эффекты Т-активина при сахарном диабете. В исследовании были использованы модели аллоксаниндуцированного и стрептозотоцинин-дуцированного сахарного диабета. Аллоксаниндуцированный сахарный диабет (АИСД) вызывали путем внутрибрюшинного введения крысам ал-локсана (производство «Реахим», г. Ереван) в дозе 15 мг на 100 г массы тела через 12 часов после последнего приема пищи (ji-цитолитическая модель сахарного диабета) (Баранов В.Г., 1983, Shatr; r E., 1991).

Для индукции стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета (СИСД) использовали методику «малых доз» (Like А.А. и соавт., 1978). Данная модель ведет к развитию иммуноопосредованной деструкции -

клеток поджелудочной железы. Для этого крысам внутрибрюшинно трехкратно вводили стрептозотоцин («SIGMA», США), разведенный в цитрат-ном буфере с рН 4,2 в дозе 30 мг/кг массы тела с интервалом в 1 день.

В экспериментах по изучению влияния Т-активина на развитие АИСД и СИСД животные перед началом опытов методом случайной выборки были разделены на 3 группы: 1-я группа получала подкожно 0,1 мл физиологического раствора 1 раз в сутки в течение 10 дней; 2-я группа крыс получала Т-активин в дозе 2 мкг на 1 кг массы тела 1 раз в сутки подкожно в течение 10 дней («опытная группа»); 3-я группа крыс - интактные животные.

В серии опытов по изучению влияния Т-активина на развитие АИСД введение аллоксана крысам производилось на 10-й день после предварительного введения физиологического раствора (контроль) или Т-активина (опыт). В серии опытов по изучению влияния Т-активина на развитие СИСД введение физиологического раствора или Т-активина начинали за 5 дней до 1-й инъекции стрептозотоцина.

После окончания введения аллоксана и стрептозотоцина у животных ежедневно определяли наличие глюкозы и кетоновых тел в моче и крови. Началом развития сахарного диабета считали день появления глюкозурии, а также гликемию натощак 6,7 ммоль/л и более после 12-часового голодания. В среднем развитие сахарного диабета было на 3-4 сутки после введения диабетогенных веществ. В эксперименты по изучению лечебного эффекта Т-активина включали животных со стойкой гипергликемией, наблюдаемой в течение в среднем 10 дней.

Определение концентрации глюкозы в цельной крови в хвостовой вене проводили глюкозооксидантным методом с использованием портативных глюкометров «Bayer», «Jhonson & Jhonson», определение глюкозы в моче с использованием тест-полосок «Glucophan», кетоновых тел в моче с использованием тест-полосок «Кетуртест». Для оценки эффективности проводимого лечения кроме определения глюкозы крови натощак проводили внутрибрюшинный глюкозотолерантный тест (ВБПТ) по следующей методике: после 12-часового голодания у животных определяли уровень глюкозы крови натощак. Затем внутрибрюшинно вводили глюкозу из расчета 1 г/кг массы тела с определением уровня гликемии через 60 и 120 минут после введения раствора глюкозы. Концентрация уровня инсулина в плазме крови определяли радиоиммунным методом с использованием стандартных наборов. Забой животных производили под легким эфирным наркозом.

В ходе исследования у животных измеряли динамику массы тела, а также при забое массу тимуса, селезенки и левой почки с дальнейшим расчетом показателей тимического индекса (ТИ) (отношение массы тимуса к массе почки) и селезеночного индекса (СИ) (отношение массы селезенки к массе почки).

В ходе экспериментов было проведено гистологическое исследование поджелудочной железы (ПЖ). После фиксации ПЖ в 15% растворе формальдегида парафиновые срезы окрашивали гематоксилином и эозином, альдегидфуксином.

Определение устойчивости эритроцитов к перекисному гемолизу проводили по методике Jager F.C., 1968 Определение содержания конечных продуктов ПОЛ - малонового диальдегида в плазме крови (МДА пл.) и эритроцитах (МДА эр.) проводили по модифицированному методу Гаври-лова В.Б. и соавторов. Определение суммарной активности показателей процессов ПОЛ в плазме крови проводили также методом активированной Fе2+Н2О2-хемилюминесценции на хемилюминометре фирмы «Диалог» с использованием специальной компьютерной программы «CL 3603» (Владимиров Ю.А. и соавт., 1976; Чукаев СА., 1993).

Клиническая часть исследования.

Объектом исследования в клиническом разделе исследования послужили 115 больных с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа средней степени тяжести. Из них было 54 мужчин и 36 женщин. Средний возраст больных составил 25,4+1,17 лет (15-35 лет). Стаж заболевания 4,04±0,4 месяца. Все больные в период обследования находились на интенсифицированной терапии генно-инженерным человеческим инсулином.

В ходе обследования у больных было проведено общеклиническое обследование, изучены гликемические показатели с расчетом среднесуточной гликемии (глюкозооксидантный метод), HbAlc (анализатор DCA-2000, «Байер», Германия), уровень базального и стимулированного (600 ккал, стандартный завтрак) С-пептида (радиоиммунологический метод с использованием стандартных наборов). Исследование состояния клеточного звена иммунитета проводилось методом непрямой иммунофлюоресцен-ции с использованием моноклональных антител («Сорбент», Москва) и методом розеткообразования с эритроцитами барана с проведением нагрузочных тестов с теофиллином; определение фагоцитарной активности ней-трофилов (ФИ) и фигоцитарное число (ФЧ), уровень иммуноглобулинов А, М, G методом радиальной иммунодиффузии проводилось по стандартизированной методике в лаборатории иммунодиагностики ЦНИЛ Смоленской медакадемии и Смоленском областном иммунодиагностическом центре.

После проведения комплексного обследования больные методом случайной выборки были разделены на 2 группы: 1-й группе больных к проводимой терапии был добавлен Т-активин (опытная группа), 2-й группа получала только общепринятую терапию (контроль). Динамика клинических, иммунологических и гормонально-метаболических показателей в ходе терапии определялась на 1-м, 3-м, 6-м и 12-м месяцах.

Статистический анализ. Статистическую обработку полученных данных проводили методом дисперсионного анализа с использованием t-крйтерия Стьюдента. При отсутствии подтверждения нормальности рас-

пределения выборок использовались непараметрические методы Колмогорова-Смирнова, Вилкоксона-Манна-Уитни, Пирсона.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

В результате проведенных экспериментальных исследований по изучению эффективности Т-активина в профилактике развития СД 1 типа получены следующие результаты (рис. 1,2).

Рис. 1 Частота развития СД при использовании "плацебо"+ аллоксана

Рис.2 Частота развития СД при использовании "плацебо"+ стрептозотоцина

Как следует из полученных данных у крыс, получавших на фоне введения «плацебо» аллоксан или стрептозотоцин СД развился в 82,7% и 80% случаев соответственно. Отсутствие развития заболевания на фоне введения «плацебо»+аллоксан было выявлено в 17,3% случаев, а «плаце-бо»+стрептозотоцин в 20%, что соответствует данным литературы о частоте развития СД при моделировании экспериментальной патологии.

У крыс с развившимся АИСД и СИСД на фоне выраженной гипергликемии, глюкозурии, кетонурии, гипоинсулинемии наблюдалось существенное повышение активности процессов ПОЛ (р<0,05). При этом было выявление существенное снижение ТИ и СИ по сравнению с интактными животными (р<0,05), что согласуется с данными литературы (Караулов А.В., 1999, Харченко В.П., 1998).

При морфологическом исследовании поджелудочной железы у этих животных выявлялась различной степени выраженности гидропическая дегенерация большей части р-клеток, особенно в центре островков Лангер-ганса, уменьшение их числа и размеров; лимфоцитарная инфильтрация (инсулит), распространяющаяся вокруг и внутри островков при СИСД. Следует отметить, что полученная нами морфологическая картина экспериментального СД у крыс соответствует морфологическим изменениям в поджелудочной железе у больных с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа.

У крыс, получавших на фоне введения Т-активина аллоксан (рис. 3), отсутствие развития СД наблюдалось в 72,7% случаев. У животных, получавших на фоне введения Т-активина стрептозотоцин (рис. 4) отсутствие

Рис.3 Частота развития СД при использовании "Т-активи-на"+аллоксана

Рис.4 Частота развития СД при использовании "Т-активи-на"+стрептозотоцина

развития СД наблюдалось в 74,2% случаев. При этом, у данных экспериментальных животных все изучаемые показатели (клинические, гормонально-метаболические, ТИ, СИ) существенно не отличались от соответствующих значений у интактных крыс (р>0,05) При гистологическом исследовании поджелудочной железы было выявлено, что распределение и размеры островков Лангерганса не отличались от таковых показателей у ин-тактных животных. Островки располагались преимущественно около внутридольковых протоков с сохранением их архитектоники, признаки воспаления отсутствовали. Обращало на себя внимание более частое, чем у интактных крыс, выявление одиночных гормонопродуцирующих Р-клеток.

Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют о выраженном протективном эффекте Т-активина в индукции аллокса-

2 2

нового и стрептозотоцинового сахарного диабета (%, =15,0, % =15,84, р=0,001).

Также следует отметить, что у крыс, получавших на фоне введения Т-активина аллоксан или стрептозотоцин, но с развившимся СД, были выявлены существенные отличия в изучаемых показателях по сравнению с группой животных с развившимся СД, получавших «плацебо». Так, несмотря на развитие экспериментального СД в обеих группах животных (Т-активин и «плацебо»), уровень гликемических нарушений, показатели активности процессов ПОЛ были существенно ниже, а содержание инсулина в плазме крови, ТИ и СИ были выше у крыс, превентивно получавших Т-активин, по сравнению с группой получавших «плацебо» (р<0,05) Эти данные еще раз подчеркивают наличие у Т-активина протективного (сдерживающего), пусть и не в полной мере, эффекта в развитии экспериментального СД. Аналогичные данные об эффективности пептидов тимуса

(тимический сывороточный фактор, тимозин) в профилактике развития экспериментального СД (вирусиндуцированного, аллоксан- и стрептозото-цининдуцированного СД, генетически детерминированного СД 1 типа) были получены зарубежными авторами (Abubakirova S.S., 1997).

Вместе с тем, наличие протективного эффекта пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, в развитии экспериментального СД в России получены впервые. При изучении эффективности терапии Т-активином развившегося экспериментального сахарного диабета были получены следующие результаты. При терапии Т-активином развившегося экспериментального АИСД и СИСД были выявлены существенные особенности в течении заболевания по сравнению с контролем в зависимости от схем введения препарата. При проведении 10-дневного курса Т-активина на двух моделях СД 1 типа (АИСД и СИСД) в обоих случаях происходило существенное снижение гликемических показателей, повышение секреторной активности ß-клеток поджелудочной железы, снижение показателей активности процессов ПОЛ, увеличение ТИ и СИ. Важно отметить, что при морфологическом исследовании у крыс, получавших Т-активин, на фоне пораженных ОЛ выявлялись признаки начала восстановительных процессов в островковой ткани поджелудочной железы (тенденция к увеличению средней площади островков Лангерганса, снижению числа встречаемости инфильтрации лимфоцитами ОЛ, появлению мелких, без признаков повреждения ОЛ, состоящих в основном из Р-клеток, рассеянных в межаци-нарной ткани с альдегид-фуксиновой зернистостью).

В контрольной группе крыс с АИСД и СИСД, получавших 10-дневный курс «плацебо», положительной гормонально-метаболической динамики выявлено не было (р>0,05). Сохранялись гипергликемия, гипоинсулине-мия, высокие показатели активности процессов ПОЛ, снижение ТИ и СИ. При морфологическом исследовании поджелудочной железы у этих групп животных выявлялись признаки прогрессирования процессов разрушения ОЛ и ß-клеток: нарастание частоты встречаемости инфильтрации лимфоцитами ОЛ и т.д. Морфологических признаков начала восстановительных процессов в поджелудочной железе у крыс контрольной группы выявлено не было.

Вместе с тем, следует отметить, что нормализации изучаемых показателей у крыс с АИСД и СИСД после проведения 10-дневного курса Т-активина по сравнению со здоровыми животными выявлено не было. Эти данные предопределили необходимость проведения наблюдения за течением заболевания после окончания курса терапии Т-активином.

При наблюдении за крысами с АИСД, имевшими положительную гормонально-метаболическую динамику после курса Т-активина, был выявлен «рецидив» заболевания (нарастали гипергликемия, гипоинсулинемия и т.д.). В связи с этим нами был проведен повторный 10-дневный курс Т-активина. Проведение повторного курса Т-активина крысам с АИСД вело

к «ремиссии» заболевания (снижению гипергликемии, увеличению содержания инсулина в плазме крови и т.д.).

Такое «волнообразное» течение АИСД на фоне введения Т-активина позволило высказать предположение о необходимости после проведения начального курса терапии Т-активином введения его в дальнейшем в поддерживающем режиме.

Проведенные исследования показали, что назначение крысам с АИСД и СИСД Т-активина в поддерживающем режиме оказывало стабилизирующее влияние (отсутствие рецидива) на течение заболевания.

Важно подчеркнуть, что при морфологическом исследовании поджелудочной железы у крыс с СИСД были выявлены признаки наличия выраженных восстановительных процессов (новообразование множества мелких островков и единичных однотипных, рассеянных в ацинарной ткани клеток с выраженной альдегид-фуксиновой зернистостью (Р-клеток), а также крупных ОЛ с хорошо развитой микроциркуляторной сетью).

В контрольной группе крыс с АИСД и СИСД, получавших в качестве поддерживающей терапии «плацебо», случаев ремиссии и стабильного течения заболевания выявлено не было. У этих животных сохранялись стойкая гипергликемия, глюкозурия, гипоинсулинемия, высокие показатели ПОЛ, снижение ТИ и СИ, высокая летальность. При морфологическом исследовании поджелудочной железы выявлялись признаки выраженных дистрофических изменений в ОЛ, нарастающая лимфоцитарная инфильтрация островков ткани, отсутствие признаков восстановительных процессов.

Однако, отмена введения Т-активина в поддерживающем режиме при СИСД вела уже к 10 суткам наблюдения к рецидиву заболевания: нарастание гипергликемии, инсулинопении и т.д. На основании этих данных можно предположить, что введение пептидов тимуса в поддерживающем режиме при СД 1 типа нужно проводить постоянно с целью стабилизации течения заболевания.

При обсуждении возможных механизмов протективного и лечебного действия Т-активина при экспериментальном сахарном диабете, по-видимому, следует исходить из механизмов диабетогенного влияния ал-локсана и стрептозотоцина.

Так, известно, что в основе диабетогенного действия аллоксана лежит его прямое острое цитолитическое действие, связанное в основном с инициацией в р-клетках поджелудочной железы процесса свободно-радикального окисления, приводящего к быстрой гибели (некрозу) инсу-линпродуцирующих клеток (Балаболкин М.И., и соавт., 2002, Дедов И.И., 2003).

Проведенные нами исследования также свидетельствуют о существенном повышении показателей активности процессов ПОЛ (МДА эритроци-

тов, МДА плазмы), а также мембранодеструкции (ПГЭ) у крыс с АИСД (р<0,05) (Бобарева JI.E., 1996, Williams J., 2004).

В клинической практике данный механизм деструкции Р-клеток поджелудочной железы может наблюдаться при воздействии острой вирусной (бактериальной) инфекции, ядохимикатов (вакор, пентамидин и т.д.), лекарственных препаратов (диазоксид и т.д.), остром панкреонекрозе и т.д. При этом у больных СД 1 типа также выявляется существенное повышение показателей активности процессов ПОЛ и снижение активности систем антиоксидантной защиты (Балаболкин М.И., 2002, Дедов И.И., 2003).

Следует отметить, что как при воздействии аллоксана, так и в клинических случаях из-за быстрого цитолиза р-клеток поджелудочной железы было выявлено отсутствие иммунологического компонента патогенеза заболевания (наличия антител к антигенам Р-клеток, активированных Т-лимфоцитов, инсулита и т.д.). Действительно, и в нашем экспериментальном исследовании на фоне выраженной гипергликемии, гипоинсулинемии, активации процессов ПОЛ, соответствующей клинической картины при морфологическом исследовании поджелудочной железы у крыс с АИСД наблюдались признаки деструкции -клеток с уменьшением числа и размера островков Лангерганса. При этом признаки иммунного воспаления (инсулит) отсутствовали.

Введение экспериментальным животным стрептозотоцина в субдиабе-тогенных дозах ведет первоначально к его интернализации в -клетки поджелудочной железы с повреждением ДНК и мембранных структур ин-сулинпродуцирующих клеток с инициацией в ответ на повреждение процессов ПОЛ. В ответ на повреждение происходит стимуляция патологической активности поли(АДФ-рибоз)-синтетазы, ответственной за репликацию ДНК, повышенной утилизации НАД+ с последующим истощением его запасов в клетке, что является причиной снижения синтеза протеинов, включая проинсулин. Одним из важных результатов модифицирующего действия свободных радикалов является изменение антигенной структуры -клеток поджелудочной железы с последующим развитием аутоиммунного процесса. Конечным результатом действия стрептозотоцина является первоначальное снижение синтеза инсулина, а в дальнейшем гибель -клеток. В литературе приводится аналогичная последовательность развития гибели -клеток и при вирусиндуцированном и при генетически детерминированном (крысы NOD, BB, db/db) СД 1 типа (Atkinson M, 2001, Coher I.R., 2002).

Проведенные нами исследования также свидетельствуют о существенном повышение активности процессов ПОЛ при моделировании СИСД. При гистологическом исследовании поджелудочной железы на фоне деструктивных процессов в -клетках выявлялась лимфоцитарная инфильтрация (инсулит) вокруг и внутри островков Лангерганса. Данная экспери-

ментальная модель по своим иммуно-метаболическим показателям наиболее приближена к основным звеньям патогенеза СД 1 типа, развивающегося у людей (Балаболкин М.И., и соавт., 2002, Williams J., 2004).

Таким образом, в инициации и в дальнейшем поддержании прогрессирующей деструкции -клеток поджелудочной железы существенную роль отводят активации процессов свободнорадикального окисления, возникающего в результате действия внешних или внутренних факторов окружающей среды (химические вещества, вирусы, пищевые факторы, цитоки-ны и т.д.) с последующим появлением «новых» модифицированных антигенов и иммунной атакой против инсулинпродуцирующих клеток. Повышенная чувствительность -клеток к повреждающему действию свободных радикалов предопределяется генетически детерминированной слабостью систем внутриклеточной антиоксидантной защиты (Дедов И.И., 2004).

Следует отметить, что свободные радикалы являются одним из факторов, коммитирующих апоптоз клеток. Логично предположить, что избыточное их количество при сниженной антиоксидантной защите может являться одним из тригтерных факторов «ускоренного апоптоза» (i-клеток поджелудочной железы, предшествующего аутоиммунной агрессии. В частности показано, что апоптоз -клеток предшествует лимфоцитарной инфильтрации островков Лангерганса (Williams J., 2004).

Образование и отсутствие элиминации (отрицательная селекция) ауто-реактивных клонов лимфоцитов, цитотоксических по отношению к -клеткам поджелудочной железы, рассматриваемый как феномен «ослабленного апоптоза», может быть обусловлен врожденным или приобретенным недостатком продукции гормонов тимуса. Причем, одной из причин ингибирования функциональной активности тимуса может являться активация под действием свободных радикалов процессов ПОЛ. При этом также установлено, что содержание Т-лимфоцитов и их регуляторных субпопуляций находится в обратной корреляционной зависимости от уровня активности процессов ПОЛ, что свидетельствует об иммуносупрессивном действии ПОЛ на иммунную систему, в основном на ее клеточное (Т-супрессорное) звено (Соколов Е.И., 1998, Караулов А.В., 1999).

Как ранее было сказано, проведенные к настоящему времени экспериментально-клинические исследования свидетельствуют о существенном снижении гормонпродуцирующей активности тимуса, а также его массы, наблюдаемом как на стадии преддиабета, так и в дебюте заболевания. Подтверждением тимической недостаточности могут служить полученные нами данные о существенном снижении ТИ и СИ у экспериментальных животных с АИСД и СИСД, что согласуется с данными литературы (Галенок ВА, и соавт., 1995, Харченко В.П., 1998).

Обнаруженный нами блокирующим активацию процессов ПОЛ эффект Т-активина, по-видимому, может служить объяснением одного из меха-

низмов его протективного действия. С учетом особенностей экспериментов (предварительное введение Т-активина интактным животным с дальнейшим введением стрептозотоцина или аллоксана) и полученных результатов, механизм защитного действия пептидов тимуса может быть связан с их мембраностабилизирующим (первично-метаболическим) эффектом на -клетки поджелудочной железы, с учетом имеющихся данных об их влиянии на фосфолипидный спектр крови и мембранных структур клеток, активность Na-K-АТФазы, ферментативную активность внутриклеточных систем антиоксидантной защиты (глютатион); и монооксигеназной системы (цитохром Р450 и т.д.), участвующих в метаболизме ксенобиотиков. Об этом, в частности, могут свидетельствовать полученные нами данные об отсутствии изменений в показателе ПГЭ у крыс, превентивно получавших Т-активин, и, как следствие, отсутствие в дальнейшем активации процессов ПОЛ. Подтверждением этому являются полученные данные об отсутствии повышения у этих животных содержания МДА в эритроцитах и МДА в плазме крови.

В этом плане также следует отметить недавно полученные данные о возможности прямой интернализации пептидов тимуса в р-клетки поджелудочной железы и, как следствие, блокады внутриклеточных модифицирующих эффектов повреждающих факторов (аллоксана, стрептозотоцина, вирусной инфекции) и, что важно отметить, наличие у гормонов тимуса антиапоптозного действия (Караулов А.В., 1999, Mizutani M., 1996).

Не исключено, что такого рода блокада инициации процессов ПОЛ, защищая -клетки, также предотвращает и выраженное изменение их антигенной структуры и, следовательно, развитие в дальнейшем аутоиммунного процесса. Причем можно полагать, что блокирование активации процессов свободно-радикального окисления в данном случае может носить защитный характер по отношению не только к -клеткам поджелудочной железы, но и к состоянию общей иммунологической реактивности.

Подтверждением этому могут служить полученные нами данные об отсутствии не только морфологических признаков повреждения -клеток поджелудочной железы, но и лимфоцитарная инфильтрация островков Лангерганса, а также отсутствие снижения массы тимуса (ТИ) и селезенки (СИ) при введении аллоксана или стрептозотоцина на фоне Т-активина.

Протективный эффект пептидов тимуса на модели генетически детерминированного СД 1 типа (db/db) связывают с их первично иммунотроп-ной активностью (нормализацией Т-супрессорного дефицита) и блокадой аутоагрессии против ß-клеток поджелудочной железы (Seddon V., 1997).

Аналогичным мембраностабилизирующим действием пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, по-видимому, можно объяснить один из его лечебных эффектов при терапии развившегося АИСД и СИСД. Об этом, в частности, могут свидетельствовать полученные нами данные о снижении ПГЭ у крыс с экспериментальным СД в динамике терапии Т-активином по

сравнению с контролем. В то же время снижение уровня содержания МДА в эритроцитах и МДА в плазме крови в динамике терапии СД 1 типа Т-активином позволяет высказать предположение о наличии у пептидов тимуса, входящих в его состав, антиоксидантной активности.

Для подтверждения полученных нами данных о наличии у пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, мембраностабилизирующей и ан-тиоксидантной активности нами были проведены серии экспериментов по изучению его влияния на состояние активности процессов ПОЛ, уровня гликемии и инсулина в плазме крови у интактных животных. Необходимость проведения данной серии экспериментов была связана с тем, что в динамике терапии Т-активином АИСД и СИСД на фоне снижения интенсивности процессов ПОЛ происходило увеличение уровня инсулина в плазме, снижение уровня гликемии, что само по себе могло вести к снижению интенсивности процессов свободно-радикального окисления, с учетом установленного факта прооксидантного эффекта гипергликемии.

Полученные нами данные свидетельствовали, что введение Т-активина интактным крысам, не влияя на уровень глюкозы и содержание инсулина в плазме крови, вело к достоверному (в среднем на 20%) снижению показателей ПГЭ, МДЭ эритроцитов, МДА плазмы, хемилюминесценции (р<0,05).

Существенное снижение показателей активности процессов ПОЛ при сочеташюй терапии Т-активином и токоферолом может свидетельствовать об их взаимопотенциирующем действии на системы антиоксидантной защиты, имеющем, по-видимому, различную биохимическую основу. Считается, что реализация антиоксидантного эффекта СХ-токоферола связана с образованием малоактивных, не способных поддерживать цепные реакции ПОЛ радикалов, увеличением плотности упаковки мембранных фосфоли-пидов, что делает их менее доступными процесса переокисления. Антиок-сидантный эффект пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, по-видимому, может быть обусловлен их влиянием на липидный обмен за счет снижения уровня холестерина, триглицеридов, НЭЖК крови, нормализации фосфолипидного спектра крови и мембранных структур клеток, повышения активности мембранной Ка+-К+-ЛТФазы, изменения активности ферментов монооксидантной системы (цитохром Р450 и т.д.) повышения содержания глутатиона и активности глутатион-8-трансферазы.

Однако данный лечебный эффект Т-активина «условно» может быть отнесен преимущественно к АИСД, где активация процессов ПОЛ является основным патогенетическим звеном, ведущим к прогрессирующей деструкции клеток поджелудочной железы. При СИСД, где ведущим звеном гибели р-клеток поджелудочной железы является их иммуноопосре-дованная деструкция, по-видимому, в лечебном действии Т-активина, кроме первично метаболического, существенное значение играет его иммуно-тропный эффект. Об этом, в частности, могут свидетельствовать данные об

эффективности пептидов тимуса ( -тимозины, тимический сывороточный фактор и т.д.) в терапии генетически детерминированного экспериментального сахарного диабета (крысы линии NOD, BB) и СД 1 типа у людей, связанной с их первично иммунотропной активностью (нормализация тимической сывороточной активности, Т-супрессорного дефицита; снижение уровня содержания активированных Т-лимфоцитов, ЦИК, про-воспалительных цитокинов ИЛ-1, ИЛ-2, ИЛ-12 и, что чрезвычайно важно отметить, повышение уровня противовоспалительных цитокинов ИЛ-4 и ИЛ-10 ) и блокадой аутоагресии против Р-клеток поджелудочной железы. По-видимому, такого рода сочетанное (мембраностабилизирующее, анти-оксидантное и иммунотропное) действие Т-активииа приводит к блокаде «иммуно-метаболической атаки» оставшихся неразрушенными р-клеток поджелудочной железы, нормализации иммунного гомеостаза и сохранению их функциональной активности при АИСД и СИСД.

Подтверждением этому служат полученные нами морфологические данные о существенно меньшем проценте встречаемости частоты инфильтрации лимфоцитами ОЛ, наличии крупных и мелких островков без признаков повреждения с сохраненной их архитектоникой у крыс с СИСД, получавших Т-активин, по сравнению с контролем, где продолжали нарастать дистрофические изменения и лимфоцитоплазмоцитоклеточная инфильтрация ОЛ.

В этом плане также следует отметить полученные нами данные о существенном повышении массы тимуса (ТИ) и селезенки (СИ) у крыс, получивших Т-активин, по сравнению с контролем, что косвенно может свидетельствовать о нормализации общей иммунологической реактивности.

Вместе с тем, при равнозначном ингибировании активности процессов ПОЛ существенного повышения функциональной активности клеток поджелудочной железы при монотерапии -токоферолом в отличии от терапии Т-активином не происходило. Эти данные могут свидетельствовать, что терапевтический эффект Т-активина связан не только с его мембрано-стабилизирующим и антиоксидантным действиями, но и установленной широкоспектральной метаболической активностью пептидов тимуса. В связи с этим следует отметить данные о снижении ферментативной активности цикла Кребса, пентозофосфатного цикла, изменении функциональной активности эндокринных желез, нарушениях процессов физиологической и особенно репаративной регенерации, выявленных при тимической недостаточности. Характерно, что введение тимических пептидов (тимо-зина, тимического сывороточного фактора, Т-активина, тималина и т.д.) приводило к нормализации этих показателей.

Мы полагаем, что повышение функциональной активности -клеток поджелудочной железы у крыс с АИСД и СИСД под влиянием Т-активина может быть следствием начинающихся восстановительных процессов в инсулинпродуцирующих клетках.

Подтверждением наличия восстановительных процессов в поджелудочной железе у крыс с СИСД, получавших Т-активин, являются полученные нами данные при морфологических исследованиях. Так, на фоне пораженных ОЛ выявлялись группы р-клеток, располагающихся в междольковой соединительной и ацинарной ткани; формирование множества мелких островков, состоящих из однотипных клеток с выраженной альдегид-фуксиновой зернистостью; наличие крупных (гиперплазированных) ОЛ без признаков повреждения и сохраненной архитектоникой, расположенных вблизи внутридольковых протоков.

У крыс контрольной группы (плацебо) была выявлена отрицательная морфологическая динамика: нарастали признаки дистрофических изменений в -клетках и ОЛ, лимфоцитоплазмоцитоклеточная инфильтрация. Признаки наличия восстановительных процессов островковых структур отсутствовали.

Следует отметить, что отмена терапии СИСД Т-активином в поддерживающем режиме вела к снижению функциональной активности р-клеток, нарастанию гипергликемии, что еще раз подтверждает роль тимических пептидов в регуляции восстановительных процессов в поджелудочной железе.

Таким образом, результаты проведенных исследований свидетельствуют о наличии у Т-активина протективного и лечебного эффекта при экспериментальном сахарном диабете. Полученные нами данные согласуются с данными литературы о возможной блокаде развития СД 1 типа пептидами тимуса (тимозин, тимический сывороточный фактор) (экспериментального СД). Следует подчеркнуть, что данные о наличии у Т-активина протектив-ного и лечебного эффекта при экспериментальном СД 1 типа получены нами впервые. В клинической практике также недавно подтверждена возможность блокады развития СД 1 типа пептидами тимуса (тимоген). Наличие лечебного эффекта у пептидов тимуса при развитии СД 1 типа у людей выявлено при использовании тимозина, тималина, тимогена, тимомодули-на (Абубакирова Ш.С., 1997, Рахимова Г.Н., 2002, Mizutani M., 1996).

Полученная положительная гормонально-метаболическая, морфологическая динамика при терапии Т-активином экспериментального сахарного диабета явилась обоснованием проведения по оценке эффективности пептидов тимуса в комплексном лечении больных с впервые выявленным СД 1 типа.

Проведенный нами анализ иммунологических показателей выявил существенную гетерогенность изменений в клеточном и гуморальном звеньях иммунитета у больных с впервые выявленным СД 1 типа. Так при изучении состояния иммунитета у больных СД 1 типа методом розетксобра-зования снижение относительного содержания Т-лимфоцитов (Е-РОК, %) было выявлено только в 5% случаев. В 95% случаев содержание Т-лимфоцитов не отличалось от нормы. В то же время в 86% случаев (рис. 5,

6) выявлялось повышение содержания ТФР-РОК (Т-хелперов) и в 91% случаев снижение содержания ТФЧ-РОК (Т-супрессоров). Данные изменения нашли свое отражение в увеличении соотношения ТФР-РОК/ТФЧ-РОК (ИРИ) в среднем в 3-4 раза по сравнению с нормой (р<0,05).

Рис.5Частота повышения Т-хелперов у больных с впервые выявленным СД 1 типа

Рис.6 Частота снижения Т-супрессоров у больных с впервые выявленным СД 1 типа

При изучении иммунологических показателей с использованием моно-клональных антител у всех больных СД 1 типа в дебюте заболевания существенных изменений в содержании общих Т-лимфоцитов (СБ3), естественных киллеров (СБ 16), Т-хелперов/индукторов (СБ4), Т-супрес-соров/цитотоксических (СБ8) лимфоцитов выявлено не было (р>0,05). Повышение содержания В-лимфоцитов (СБ20) было выявлено в 6% случаев.

Наиболее выраженные изменения в иммунном статусе у больных СД 1 типа были выявлены при изучении экспрессии на лимфоцитах активаци-онных антигенов (рис. 7-10). Так активированные В-лимфоциты (СБ23+) выявлялись в 15% случаев, активированные Т-лимфоциты (СБ71+) в 97% случаев, антиген-опосредующий апоптоз лимфоцитов (СБ95+, РЛ8/ЛРО-1) в 79% случаев, а гиперэкспрессия антигенов ЫЬЛ II класса (СБ БЯ+) на Ти В-лимфоцитах в 68% случаев.

При изучении состояния гуморального звена иммунитета у больных впервые выявленным СД 1 типа в 9% случаев выявлялось повышение содержания ^ О и в 4 % - ^ М. В то же время было выявлено снижение содержания в плазме крови ^ А и ^ М в 13% и 9% случаев соответственно нормативных показателей.

Рис 7 Частота выявления активированных В-лимфоцитов у больных с впервые выявленным СД 1 типа

□ СР95+ ■ норма

Рис 8 Частота выявления активированных Т-лимфоцитов у больных с впервые выявленным СД 1 типа

□ СО ОГи ■ норма

Рис.9 Частота выявления гипер- Рис.10 Частота выявления экспрессии РЛ8/ЛРО-1 у больных с гипер-экспрессии ЫЬЛ II класса у впервые выявленным СД 1 типа больных с впервые выявленным СД

1 типа

Обращает на себя внимание, что в 55% случаев (рис. 11) выявлялось повышение содержания в плазме крови ЦИК При изучении состояния факторов неспецифической защиты было выявлено снижение фагоцитарного индекса (ФИ) и фагоцитарного числа (ФЧ) лейкоцитов в 40% и 13% случаев соответственно (рис. 12, 13)

□ повышение ЦИК ■ норма

Рис.11 Частота повышения содержания ЦИК у больных впервые выявленным СД 1 типа

Рис.12 Частота снижения ФИ у Рис.13 Частота снижения ФЧ у больных впервые выявлен-ным СД больных впервые выявленным СД 1 типа 1 типа

Таким образом, приведенные данные свидетельствуют о том, что в дебюте СД 1 типа наиболее выраженные изменения в иммунном статусе выявлялись в частоте и выраженности экспрессии на лимфоцитах активаци-онных антигенов (СБ23+, СБ71+, СБ95+, СБ БК+), изменений в соотношении регуляторных субпопуляций Т-лимфоцитов, что свидетельствует о существенной роли клеточного звена иммунитета в патогенезе заболевания. Полученные нами данные согласуются с данными литературы и подтверждают гетерогенность иммунологических изменений при СД 1 типа, что может быть связано с особенностями генетического фона развития заболевания (ЫЬЛ-БК, Бр и т.д.), инициирующего заболевание фактора (вирусные инфекции, химические вещества, пищевые факторы и т.д.) и т.д.

При изучении гормонально-метаболического статуса у больных с впервые выявленным СД 1 типа выявлялось существенное снижение секреторной активности -клеток поджелудочной железы, различной степени выраженности гипергликемия, глюкозурия, кетонурия, активация процессов ПОЛ.

Проведенный нами анализ не выявил корреляционной зависимости между уровнем гликемических показателей, длительностью и сроками начала, дозами заместительной инсулинотерапии и частотой и выраженностью иммунологических нарушений. Эти данные свидетельствуют об отсутствии существенного влияния метаболических нарушений на активность иммунологических процессов при СД 1 типа и еще раз подтверждают необходимость разработки методов патогенетической терапии СД 1 типа, и в частности использования пептидов тимуса.

Полученные нами в ходе проведения иммунотерапии данные свидетельствуют о нормализующем влиянии пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, на иммунологические, гормонально-метаболические, клинические показатели у больных с впервые выявленным СД 1 типа.

Так, введение Т-активина во все сроки наблюдения не оказывало влияния на исходно неизмененные показатели в иммунном статусе (Е-РОК, CD3, CD4, CD8, CD19, CD20, CD16, ^ A, Ig M, Ig G), (р<0,05).

В то же время содержание в крови лимфоцитов, экспрессирующих ак-тивационные антигены (CD23+, CD71+, CD95+), снизилось уже после 10 инъекции Т-активина в среднем в 3-4 раза, а гиперэкспрессия HLA-CD DR+ - в среднем на 28% по сравнению с исходными значениями (рис. 14).

При этом на фоне нормализации иммунологических показателей происходило повышение уровня базального С-пептида в среднем на 37%, а стимулированного - в среднем в 2 раза, снижение уровня гликемических показателей в среднем на 33% и суточной дозы вводимого инсулина в среднем на 29% (р<0,05), что свидетельствует о начинающихся восстановительных процессах инсулинпродуцирующих клеток.

С023 СЭ71 С 095 СОРЯ

О Норма ■ До лечения ■ После лечения

Рис. 14. Влияние Т-активина на динамику иммунологических показателей (активиционных антигенов) у больных с впервые выявленным СД 1 типа.

* - р<0,05 по сравнению с исходными значениями

Выявленное снижение показателей суммарной активности процессов ПОЛ ^е2+-Н2О2-хемилюминесценции) в среднем на 22 % (р<0,05) может свидетельствовать о наличии у Т-активина антиоксидантного эффекта, что подтверждает наличие у пептидов тимуса метаболической активности, механизмы которой обсуждались ранее. Причем проведенные нами клинические исследования исключили влияние нормализации гликемических показателей на активность процессов ПОЛ и подтверждают полученные нами экспериментальные данные.

Таким образом, полученные клинические данные согласуются с проведенными нами экспериментальными исследованиями о положительном влиянии Т-активина на гормонально-метаболические показатели у больных с впервые выявленным СД 1 типа

Отсутствие же полной нормализации иммунологических показателей и экспериментальные данные о «рецидиве» заболевания предопределили не-

обходимость проведения после начального 10-дневного курса Т-активина введение его в поддерживающем режиме.

Введение Т-активина в поддерживающем режиме в наблюдаемый период приводило к уменьшению дисбаланса в соотношении ТФР-РОК/ТФЧ-РОК преимущественно за счет увеличения количества ТФЧ-РОК (Т-супрессоров) в среднем в 2-2,5 раза (р<0,05) и как следствие снижению уровня ИРИ в среднем в 3 раза (р<0,05) (рис. 15). Причем данная нормализация иммунологических показателей наступала в среднем только к 3-6 месяцу иммунотерапии.

Рис. 15 Изменение иммунорегуляторного индекса (ИРИ) у больных СД 1 типа под влиянием терапии Т-активином (опыт) и контрольной группы (не получавших Т-активин). В норме (заштрихованный прямоугольник ) ИРИ составляет 1,5-2,5.

* - р<0,05 по сравнению с контролем

Вместе с тем, в дальнейшем на 12 месяце иммунотерапии в поддерживающем режиме было выявлено снижение уровня ТФЧ-РОК по сравнению с соответствующим значением на 1, 3 и 6 месяцах терапии Т-активином (р<0,05), что привело к соответствующему увеличению ИРИ (р<0,05), хотя данные изменения были не так выражены, как в дебюте заболевания (р>0,05).

На основании этих данных можно предположить, что при длительном использовании иммунотропных средств развивается толерантность (десен-ситизация) иммунокомпетентных клеток к воздействию гормонов тимуса, или доза и/или режим терапии не позволяет поддерживать иммунологический гомеостаз в нормальных пределах.

Вместе с тем, при изучении других иммунологических показателей обращало на себя внимание нормализующее влияние Т-активина на содержание в плазме крови ЦИК, ФИ, ФЧ, ^ О, А, М. Эти данные, как нам представляется, заслуживают особого внимания в плане дальнейшей их

роли в развитии сосудистых и инфекционных осложнений, характерных для СД 1 типа. Таким образом, полученные нами данные согласуются с данными литературы о нормализующем влиянии пептидов тимуса (Т-активин, тималин, тимический сывороточный фактор, тимоген, тимомоду-лин, тимозин) на активность течения иммунологических процессов у больных СД 1 типа (Рахимова Г.Н., 2002, Seddon V., 1997).

В то же время у больных контрольной группы (стандартная терапия) положительной динамики в иммунологических показателях в указанные сроки наблюдения, по сравнению с опытной группой, выявлено не было (р>0,05) (рис. 15). В анализах выявлялось низкое содержание ТФЧ-РОК, что нашло свое отражение в существенном повышении соотношения ТФР-РОК/ТФЧ-РОК (ИРИ) в среднем в 2,5 раза по сравнению с группой получавших Т-активин. Эти данные еще раз подчеркивают отсутствие влияния заместительной инсулинотерапии на активность течения иммунологических процессов при СД 1 типа (Балаболкин М.И., и соавт., 2002).

При изучении гормонального статуса на 30 день терапии Т-активином в опытной группе было выявлено достоверное повышение уровня базально-го и стимулированного С-пептида в среднем в 2 и 4 раза соответственно, что свидетельствует о начале восстановительных процессов в инсулино-продуцирующих структурах (рис. 16, 17). При динамическом наблюдении за уровнем гликемии и клинической картиной фиксировались эпизоды гипогликемии, что потребовало снижения уровня вводимого инсулина в среднем в 2 раза по сравнению с исходными значениями (рис. 43, 44). Продолжение поддерживающей терапии Т-активином в дальнейшем вело и к более существенному повышению функциональной активности ß-клеток поджелудочной железы у больных опытной группы, снижению дозы вводимого инсулина в среднем в 2,5-4 раза (рис. 16, 17, 18) при хорошей компенсации углеводного обмена. Аналогичная динамика повышения функциональной активности -клеток поджелудочной железы была получена и в других исследованиях.

Рис. 16 Уровень базального С-пептида (нг/мл) в динамике терапии Т-активином (опыт) по сравнению с контрольной группой * - р<0,05 по сравнению с контролем

Рис. 17 Уровень стимулированного С-пептида (нг/мл) в динамике терапии Т-активином (опыт) по сравнению с контрольной группой * - р<0,05 по сравнению с контролем

Рис. 18 Дозы вводимого инсулина (Ед/кг в сутки) в динамике терапии Т-активином (опыт) по сравнению с контрольной группой

* - р<0,05 по сравнению с контролем

Как ранее было сказано, в иммунном статусе к 12 месяцу терапии Т-активином была выявлена незначительная отрицательная динамика в содержании ТФЧ-РОК с повышением ИРИ по сравнению с 1, 3 и 6 месяцами терапии. Вместе с тем, функциональная активность (З-клеток на 12 месяце терапии, несмотря на эти данные, оставалась на достаточно высоком уровне. Эти данные, по-видимому, также могут свидетельствовать о наличии у пептидов тимуса не только иммунотропной, но и прямой метаболической активности, результатом которой является стимуляция процессов репара-тивной регенерации р-клеток поджелудочной железы (Караулов А.В., 1999).

У больных контрольной группы на 30 сутки стандартной терапии было выявлено повышение уровня базального С-пептида (р<0,05) (рис. 42), тогда как повышения секреторной активности (З-клеток после приема стандартного завтрака выявлено не было (р>0,05) (рис. 17). Повышение ба-зальной секреции -клеток поджелудочной железы у данной группы боль-

ных, по-видимому, связано с нормализацией гликемических показателей (нейтрализация глюкозотоксичности). Отсутствие же прироста С-пептида после приема стандартного завтрака можно объяснить, по-видимому, двумя причинами: потерей чувствительности рецепторного аппарата р-клеток (глкжорецепторов) к физиологическому сигналу и как следствие снижением синтеза инсулина оставшимися неразрушенными -клетками поджелудочной железы вследствие их функциональной неполноценности.

В дальнейшем при динамическом наблюдении в течение 12 месяцев в контрольной группе больных СД 1 типа продолжала нарастать секреторная недостаточность р-клеток поджелудочной железы (рис. 16, 17). При этом компенсация СД достигалась существенно более высокими по сравнению с опытной группой больных (в среднем в 4 раза) дозами вводимого инсулина (рис. 18). Случаев первичной ремиссии в контрольной группе больных выявлено не было.

Следует также отметить различия в клиническом течении СД 1 типа у больных опытной и контрольной групп. У больных СД 1 типа, получавших Т-активин, выявлялась быстрая компенсация гликемических показателей в стационарных условиях и, что чрезвычайно важно отметить, стабильное течение заболевания в течение наблюдаемого периода. При этом не было зафиксировано побочных эффектов от проводимой терапии. Ни в одном из случаев не было выявлено эффектов гиперстимуляции иммунологических показателей, что еще раз подчеркивает чисто иммунокорригирующий эффект пептидов тимуса. У больных СД 1 типа контрольной группы компенсация СД занимала более длительный период, и течение заболевания было нестабильное, с частыми периодами декомпенсации.

Таким образом, результаты проведенного клинического исследования подтвердили полученные нами экспериментальные данные об эффективности пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, в комплексном лечении больных СД 1 типа.

Обобщая результаты проведенного нами экспериментально-клинического исследования, можно предположить, что повышение функциональной активности -клеток поджелудочной железы под влиянием Т-активина при экспериментальном и клиническом СД 1 типа является следствием начинающихся восстановительных процессов в инсулинпродуци-рующих клетках, принимая во внимание данные о наличии гена регенерации ^-клеток (гeg-gene), а также описанных феноменах «ацино-инсулярной трансформации», новообразовании Р-клеток в протоковом эпителии (Ба-лаболкин М.И., и соавт., 2002, Дедов И.И., 2004).

Принимая во внимание имеющиеся данные о наличии корреляционной связи между функциональной активностью тимуса, существенно сниженной как при экспериментальном, так и клиническом СД 1 типа, и -клетками поджелудочной железы, не исключено, что введение пептидов тимуса может являться своеобразным индуктором восстановительных

процессов инсулинпродуцирующих структур как на доклинической стадии, так и в дебюте заболевания, с учетом существенной роли иммунной системы в регуляции течения процессов и особенно репаративной регенерации, и в частности их взаимодействие с гистоном участвующим в регуляции активности генов, наличие в полипептидах тимуса факторов, обладающих ростостимулирующей клеточной активностью.

Таким образом, можно предположить, что как раз совокупность метаболических и иммунологических эффектов пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, и объясняет его протективный и лечебный эффекты при экспериментальном и клиническом сахарном диабете 1 типа.

ВЫВОДЫ.

1.Пептиды тимуса, входящие в состав Т-активина, блокируют индукцию экспериментального аллоксан- и стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета.

2.Введение Т-активина крысам с развившимся экспериментальным АИСД и СИСД приводило к снижению уровня гликемических показателей, повышению уровня инсулина в плазме крови, снижению показателей активности процессов ПОЛ («первичная ремиссия»), нормализации клинической картины, повышению массы тимуса.

3.Отмена введения Т-активина при АИСД и СИСД вела к «рецидиву» заболевания: нарастанию гипергликемии, инсулинопении, активации процессов ПОЛ.

4.Проведение повторного курса Т-активина крысам с «рецидивом» сахарного диабета приводило к нормализации гормонально-метаболических и клинических показателей («вторичная ремиссия»).

5.Введение Т-активина крысам с экспериментальным сахарным диабетом в поддерживающем режиме способствовало развитию ремиссии и стабилизации течения АИСД и СИСД.

6.Отмена введения Т-активина крысам с АИСД и СИСД в «поддерживающем» режиме вело к рецидиву заболевания.

7.При морфологическом анализе поджелудочной железы крыс с экспериментальным сахарным диабетом, получавших Т-активин, получены данные, свидетельствующие о наличии восстановительных процессов инсу-линпродуцирующих структур (увеличение площади микроциркуляторного русла, образование клеток и островков Лангерганса).

8.Т-активин в монотерапии экспериментального сахарного диабета обладает антиоксидантной активностью, сопоставимой с таковой у -токоферола. Сочетанная терапия Т-активином и -токоферолом ведет к более выраженному ингибированию процессов ПОЛ, чем при монотерапии. Монотерапия экспериментального сахарного диабета а-токоферолом не ведет к существенному повышению функциональной активности -клеток поджелудочной железы.

9.Введение Т-активина интактным крысам, не оказывая влияния на гли-кемические показатели и содержание инсулина в плазме крови, снижает интенсивность процессов ПОЛ, что может свидетельствовать о наличии у них прямой антиоксидантной активности.

10. С целью стабилизации течения экспериментального сахарного диабета, длительного сохранения и повышения функциональной активности р-клеток поджелудочной железы введение Т-активина необходимо проводить в постоянном (поддерживающем) режиме.

11. У больных с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа иммунологические изменения в крови носят гетерогенный характер. Наиболее выраженные изменения в иммунном статусе связаны с гиперэкспрессией на лимфоцитах активационных антигенов (СБ23+, СБ71+, СБ95+, СБ-БК+), снижению количества ТФЧ-РОК, повышению содержания ЦИК в плазме крови.

12. Введение Т-активина больным с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа вело к нормализации иммунологических показателей (снижению количества активированных лимфоцитов, ЦИК, повышению содержания ТФЧ-РОК, нормализации иммунорегуляторного индекса).

13. На фоне введения Т-активина происходило существенное повышение функциональной активности -клеток поджелудочной железы, снижение гликемических показателей, суточной дозы вводимого инсулина, нормализация активности процессов ПОЛ.

14. Введение Т-активина в поддерживающем режиме вело к стабилизации клинического течения заболевания (без эпизодов декомпенсации), длительному сохранению эндогенной секреции инсулина, улучшению качества жизни при полном отсутствии побочных эффектов от проводимой иммунотерапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С учетом полученных экспериментальных данных о наличии у пептидов тимуса протективного эффекта в индукции развития СД 1 типа рекомендуется использование Т-активина у пациентов на стадии преддиабе-та с целью профилактики развития у них СД 1 типа.

2. У больных в дебюте сахарного диабета I типа, для оценки степени активности иммунологических процессов и их динамики в ходе проводимой терапии, наиболее информативным является определение наличия экспрессии на лимфоцитах активационных антигенов (СБ23, СБ71, СБ95, СБНЬА-БК).

3. У больных с впервые выявленным СД 1 типа рекомендовано применение Т-активина в комбинации с интенсифицированной инсулинотерапи-ей, что позволяет снизить активность экспрессии на лимфоцитах актива-ционных антигенов, повысить функциональную активность клеток поджелудочной железы, снизить дозу вводимого инсулина и одновременно

улучшить компенсацию в большей степени, по сравнению со стандартной терапией.

4. Использование Т-активина в поддерживающем режиме позволяет длительно поддерживать стабильным иммунологический гомеостаз, сохранять остаточную секрецию ß-клеток поджелудочной железы, стабилизировать течения заболевания и повысить качество жизни пациентов по сравнению со стандартной терапией.

5. Использование Т-активина в комплексном лечении сахарного диабета I типа позволяет нормализировать не только иммунологический, но и метаболический гомеостаз и в частности процессы ПОЛ, что является одной из основ профилактики в развитии поздних осложнений сахарного диабета.

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

1. Новиков В.И., Молотков О.В. Исследование глюкокортикоидной функции надпочечников у больных сахарным диабетом с помощью малого дексаметазонового теста//Пробл. эндокринол. -1987. -№6. -С. 13-16.

2. Шостак В.А., Новиков В.И., Исаева С.А Функциональное состояние гипофиз-тириоидной системы у больных сахарным диабетом //Патогенез, клиника, диагностика, лечение и профилактика сахарного диабета: Сб. научных статей / Материалы III Всесоюзного съезда эндокринологов. -Ташкент, 1989. -С. 381.

3. Новиков В.И., Шостак ВА., Мешкова Р.Я., Исаева СА. Иммуно-гормональные взаимоотношения у больных с впервые выявленным СД 1 типа и их динамика под влиянием иммуномодулирующией терапии //Диагностика, лечение и профилактика сахарного диабета: Сб. научных статей / Материалы П Всероссийского съезда эндокринологов. -Челябинск, 1991.-С. 187.

4. Новиков В.И. Иммуномодулирующая терапия в комплексном лечении больных с впервые выявленным СД 1 типа //Новые методы в диагностике, лечении и реабилитации патологических состояний: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1994. -С. 95-96.

5. Новиков В.И. Использование Т-активина в качестве протектора развития аллоксан-индуцированного сахарного диабета //Новые методы в диагностике, лечении и реабилитации патологических состояний: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1994. -С. 96.

6. Новиков В.И, Шостак ВА., Макаренкова С.П., Свистелена Р.Е. Новые фармакотерапевтические подходы к патогенетической терапии СД 1 типа //Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1994. -С. 98-99.

7. Новиков В.И. Динамика иммуно-гормональных, метаболических и клинических показателей у больных с впервые выявленным СД 1 типа, под влиянием иммуномодулирующией терапии // Научная конференция моло-

дых ученых России, посвященная 50-летию Академии мед. наук: Сб. научных статей / РАМН. - М, 1994. -С. 362-363.

8. Новиков В.И., Шостак ВА, Макаренкова С.П., Свистелена Р.Е., Шпакова Л.М. Иммуно-гормональные, метаболические и клинические показатели у больных с впервые выявленным СД 1 типа и их динамика под влиянием иммунотерапии //Актуальные вопросы практической медицины: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1995. -С. 45-48.

9. Novikov V.I., Molotkov O.V. New dates on the possible reparative effect of immunomodulators in diabetes mellitus of type I /Яп: XIII internat. Donausymp. uber Diabetes mellitus. -Wien., 1995. -P. 413.

10. Новиков В.И., Шостак ВА, Подчеко А.П., Макаренкова СП. и др. Патогенетическое обоснование использования иммуномодулирующей терапии в комплексном лечении СД 1 типа //Актуальные проблемы эндокринологии: Сб. научных статей / Материалы III Всероссийского съезда эндокринологов. -М. -1996. -С 79-80.

П.Новиков В.И., Подчеко А.П. Динамика показателей перекисного окисления липидов при лечении Т-активином экспериментального сахарного диабета //Актуальные вопросы современной биологии и медицины: Сб. научных статей /СГМА. -Смоленск, 1996. -С 138-139.

12. Новиков В.И., Шостак В.А. Т-активин в комплексном лечении сахарного диабета 1-типа//Пробл. эндокринол., -1997. -С. 23-25.

13. Новиков В.И., Подчеко А.П. Новые подходы к патогенетической терапии инсулинзависимого сахарного диабета //Проблемы охраны здоровья населения: Сб. научных статей / Материалы научно-практической конференции. -Смоленск, 1997. -С 145-149.

14. Новиков В.И., Подчеко А.П. К вопросу о ремиссии инсулинзависи-мого сахарного диабета // Проблемы охраны здоровья населения: Сб. научных статей / Материалы научно-практической конференции. -Смоленск,

1997. -С 149-154.

15. Макаренкова С.П., Новиков В.И. Влияние гелей неонового лазерного излучения на иммунную систему у больных сахарным диабетом //Актуальные вопросы современной биологии и медицины: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1997. -С. 87.

16. Макаренкова СП., Новиков В.И., Шостак В А Секреция инсулина в процессе ТТГ у родственников больных сахарным диабетом //Актуальные вопросы современной биологии и медицины: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1997. -С. 87-88.

17. Подчеко А.П., Новиков В.И. Т-активин и альфа-токоферол в лечении экспериментального сахарного диабета //Актуальные вопросы современной биологии и медицины: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск,

1998. -№3.-С.55.

18. Новиков В.И., Подчеко А.П. Сравнительная эффективность влияния Т-активина и альфа-токоферола на процессы ПОЛ при СД 1 типа

//Актуальные вопросы современной биологии и медицины: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1998. -№3. -С. 55-56.

19. Молотков О.В., Халепо О.В., Новиков В.И., Макаренкова СП. и др. Оценка состояния микроциркуляции методом лазерной доплерофлюро-метрии в экспериментальной патологии //Применение лазерной доппле-ровской флоуметрии в медицинской практике: Сб. научных статей / Материалы II Всероссийского симпозиума. -М., 1998. -С. 71-72.

20. Новиков В.И., Подчеко А.П., Шостак В.А., Бабичев А.В. и др. Иммунотерапия СД 1 типа: иммунологические, гормонально-метаболические и клинические аспекты //Материалы I Всероссийского диабетологического конгресса. - М., 1998. -С. 234.

21. Макаренкова С.П., Новиков В.И., Милягина И.В. Низкоинтенсивное лазерное излучение в комплексной терапии сахарного диабета // Материалы I Всероссийского диабетологического конгресса. -М., 1998. -С. 202.

22. Новиков В.И., Подчеко А.П., Бабичев А.Н., Титарчук ОА Влияние Т-активина на течение экспериментального сахарного диабета //Вестник Смоленской медакадемии: Сб. Научных трудов / СГМА. -Смоленск, 1998. -С.95-98.

23. Новиков В.П., Подчеко А.П., Молотков О.В., Исаева С.А. Функциональное состояние бета-клеток поджелудочной железы у больных СД I типа и её динамика под влиянием иммунотерапии //Вестник Смоленской мед академии: Сб. Научных трудов / СГМА. -Смоленск, 1998. -С. 80-83.

24. Подчеко А.П., Новиков В.И., Переседская О.В. Сравнительная эффективность терапии экспериментального стрептозотоцининтдуцирован-ного сахарного диабета различными комбинациями никотинамида, токоферола и Т-активина //Вестник Смоленской медакадемии: Сб. Научных трудов / СГМА. -Смоленск, 1999. -С 38-40.

25. Новиков В.И., Подчеко А.П., Молотков О.В., Бабичев А.В. и др. Современные подходы к профилактике инсулинзависимого сахарного диабета //Вестник Смоленской медакадемии: Сб. Научных трудов / СГМА. -Смоленск, 1999.-С 41-43.

26. Новиков В.И., Подчеко А.П., Пересетская О.В., Исаева С.А. Оценка влияния комбинированного применения никотинамида, альфатокоферола и Т-активина на состояние процессов ПОЛ при экспериментальном сахарном диабете //Свободные радикалы и болезни человека: Сб. научных статей / Материалы национальной научно-практической конференции с межд. участием. -Смоленск, 1999. - С. 72-74.

27. Новиков В.И. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе сахарного диабета I типа //Свободные радикалы и болезни человека: Сб. научных статей / Материалы национальной научно-практической конференции с межд. участием. - Смоленск, 1999. -С. 195196.

28. Новиков В.И., Подчеко А.П., Пересетская О.А., Исаева С.А. Влияние пептидов тимуса на активность процессов ПОЛ при инсулинзависи-мом сахарном диабете (экспериментально-клиническое исследование) //Свободные радикалы и болезни человека: Сб. научных статей / Материалы национальной научно-практической конференции с межд. участием. -Смоленск, 1999. -С. 196-198.

29. Новиков В.И. Роль факторов окружающей среды в развитии сахарного диабета I типа //Загрязнение окружающей среды и здоровье населения: Сб. научных статей / Материалы международной научно-практической конференции. -Смоленск, 1999. -С. 42.

30. Новиков В.И. Современные подходы к первичной профилактике сахарного диабета 1 типа //Загрязнение окружающей среды и здоровье населения: Сб. научных статей / Материалы международной научно-практической конференции. -Смоленск, 1999. -С. 187.

31. Новиков В.И. Индукция пептидами тимуса первичной ремиссии сахарного диабета 1 типа //Загрязнение окружающей среды и здоровье населения: Сб. научных статей / Материалы международной научно-практической конференции. -Смоленск, 1999. -С. 188.

32. Новиков В.И. Характеристика состояния клеточного звена иммунитета у больных с впервые выявленным сахарным диабетом I типа //Вестник Смоленской медицинской академии: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 1999. -№4. -С. 31-32.

33. Новиков В.И. Индукция длительной ремиссии инсулинозависимого сахарного диабета: клинический случай / СГМА. -Смоленск, 1999. -8 С. -Деп. в ГЦНМБ 26.04.99. -№26212.

34. Новиков В.И., Молотков О.В., Подчеко А.П., Исаева С.А., Титарчук О.В. Влияние раздельного и сочетанного применения Т-активина и аль-фатокоферола на течение экспериментального сахарного диабета //Пробл. эндокринол. 1999. -№2. -С. 45 - 47.

35. Новиков В.И., Молотков О.В., Подчеко А.П., Бабичев А.В. Влияние пептидов тимуса на развитие стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета //Патологическая физиология и экспериментальная терапия. -1999. -№3. -С. 25-28.

36. Новиков В.И. Влияние Т-активина на показатели клеточного звена иммунитета у больных с впервые выявленным сахарным диабетом I типа //Сахарный диабет. -1999. -№4. -С. 19-20.

37. Новиков В.И., Молотков О.В., Подчеко А.П. Протективный эффект Т-активина при экспериментальном сахарном диабете //Сахарный диабет. -1999. -№2 (3). -С. 37-39.

38. Новиков В.И., Подчеко А.П., Молотков О.В., Федоров Г.Н. и др. Иммунотерапия - патогенетический подход в лечении сахарного диабета I типа //Вестник Смоленской медицинской академии: Сб. научных статей / СГМА. -Смоленск, 2000. -№1. -С. 24-25.

39. Макаренкова СП., Новиков В.И., Молотков О.В. Анализ состояния процессов микроциркуляции и их взаимосвязь с иммунологическими и гормонально-метаболическими показателями у больных сахарным диабетом //Применение лазерной доплеровской флоуметрии в медицинской практике: Сб. научных статей / Материалы III Российского симпозиума по лазерной допплеровской флоуметрии. -М., 2000. -С. 43 - 47.

40. Новиков В.И. Анализ состояния клеточного звена иммунитета и функциональной активности бета клеток поджелудочной железы у больных сахарным диабетом 1 типа в дебюте заболевания //Актуальные проблемы современной эндокринологии: Сб. научных статей / Материалы IV Всерос. конгресса эндокрин. СПб., 2001. -С. 153.

41. Новиков В.И. Анализ эффективности пептидов тимуса в профилактике развития экспериментального сахарного диабета //Актуальные проблемы современной эндокринологии: Сб. научных статей / Материалы IV Всерос. конгресса эндокрин. СПб., 2001. -С. 154.

42. Новиков В.И. Современные взгляды на патогенез сахарного диабета 1-го типа: роль окислительного стресса //Свободные радикалы, антиокси-данты и болезни человека: Сб. научных статей / Материалы национальной научно-практической конференции с межд. участием. -Смоленск, 2002. -С. 188-189.

43. Цепов С.М., Николаев А.И., Михеева Е.А., Новиков В.И. Особенности патогенеза воспалительных заболеваний парадонта и врачебной тактике при сахарном диабете //Пародонтология. -2002. -№3. -С 15-22.

44. Бочарова О.В., Новиков В.И., Хайкина Е.В. Раннее выявление нарушений гликемии. Эффективность скрининга и терапии //Человек и лекарство: Сб. научных статей / Материалы XI Всероссийского национального конгресса. -М., 2004. -С. 274-275.

Перечень принятых сокращений АИСД - аллоксаниндуцированный сахарный диабет

ВБПТ - внутрибрюшинный глюкозотолерантный тест

ИРИ - иммунорегуляторный индекс

МДА - малоновый диальдегид

ОЛ - островки Лангенгарса

ПГЭ - перекисный гемолиз эритроцитов

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПЖ - поджелудочная железа

СД - сахарный диабет

СИ - селезеночный индекс

СИСД - стрептозотоцининдуцированный сахарный диабет ТИ - тимический индекс ФИ - фагоцитарный индекс ФЧ - фагоцитарное число ЦИК - циркулирующие иммунные комплеквд^

Отпечатано на ФГУП ордена «Знак Почета» Смоленская областная типография им. В. И. Смирнова. .214000, г. Смоленск, проспект им. Ю. Гагарина, 2

»21899

РНБ Русский фонд

2005-4 21748

В настоящее время сахарный диабет является одной из ведущих медико-социальных проблем современной медицины.

Распространенность сахарного диабета в промышленно развитых странах составляет 5-6%, в России - 3% с неуклонной тенденцией к его увеличению. Каждые 10-15 лет число больных сахарным диабетом удваивается. По данным экспертов ВОЗ в 2000 году в мире насчитывалось более 160 млн. больных диабетом и примерно такое же количество людей имеет латентный и недиагностированный сахарный диабет. К 2010 году в мире будет более 230 млн. больных сахарным диабетом. [15, 17, 18, 56, 57, 129, 195]

Одной из наиболее тяжелых форм сахарного диабета является инсу-линзависимый сахарный диабет или сахарный диабет 1 типа. Распространенность сахарного диабета 1 типа в целом составляет 0,2-0,5%, а среди ближайших родственников лиц с этим заболеванием - 3-6%. На 1992 г. более 6 млн. людей в мире страдает сахарным диабетом 1 типа с дальнейшим неуклонным ростом заболеваемости, особенно в экономически развитых странах. В настоящее время заболеваемость сахарным диабетом 1 типа в Европе увеличилась в 2-3 раза по сравнению с 50-ми годами. Так, если в Российской Федерации в 1997 году было зарегистрировано 252 410 больных сахарным диабетом 1 типа, то по данным на 2000 год количество этих больных составило уже более 300 000 человек. [17, 18, 129, 222, 299] Эти данные еще раз свидетельствуют о неуклонном росте заболеваемости сахарным диабетом 1 типа.

Особая значимость сахарного диабета 1 типа состоит в том, что начинаясь, как правило, в молодом возрасте он становится причиной ранней инвалидизации и смертности за счет острых (диабетические комы) и хронических (ретино-, нефро-, нейропатии) сосудистых осложнений. Сахарный диабет 1 типа - одна из наиболее частых причин слепоты и смерти от уремии. Следует отметить, что продолжительность жизни больных при развитии патологии в детском возрасте составляет 50% от средней ожидаемой, причем, большинство детей с сахарным диабетом 1 типа в развивающихся странах погибают в течение 5 лет после постановки диагноза [55,57, 129, 198,237, 299].

Существенны так же экономические затраты на лечение и медико-социальную реабилитацию больных с сахарным диабетом 1 типа [58, 56, 129, 195, 222]. Следует также отметить недостаточно развитую в России, особенно в сельской местности, сеть диабетологической службы. Поэтому основную массу больных сахарным диабетом 1 типа ведут врачи-терапевты, что естественно снижает эффективность проводимого лечения.

Актуальность.

По современным представлениям сахарный диабет 1 типа рассматривается как органоспецифическое аутоиммунное заболевание, приводящее к гибели бета-клеток поджелудочной железы и развитию абсолютной инсулиновой недостаточности [13, 17, 202, 237, 384, 385]. Современные клинические подходы к лечению сахарного диабета 1 типа основаны на принципах адекватной заместительной инсулинотерапии, диетотерапии, рациональной физической нагрузки, самоконтроля и обучения пациентов [17, 18, 129, 202, 237].

Вместе с тем, инсулинотерапия не может в полной мере влиять на основные патогенетические звенья, ведущие к прогрессирующей деструкции бета-клеток поджелудочной железы (активация процессов ПОЛ, аутоиммунный процесс, и т.д.). Наблюдаемое в клинической практике в ранний период после начала инсулинотерапии «улучшение течения сахарного диабета» со снижением дозы вводимого инсулина («медовый месяц») связано, в первую очередь, с достижением компенсации метаболических нарушений и повышением функциональной активности оставшихся неразрушенными 10-20% бета-клеток поджелудочной железы. Это свидетельствует о наличии в организме компенсаторно-приспособительных механизмов, направленных на возмещение утраченных в ходе патологического процесса инсулинпродуцирующих клеток.

В связи с этим важно отметить недавно полученные данные о наличии гена регенерации бета-клеток (reg-gene), а так же установленных феноменах «ацино-инсулярной трансформации», новообразования инсулин-продуцирующих клеток в протоковом эпителии [191, 197, 205, 227, 277].

Однако, несмотря на адекватную инсулинотерапию, первичную «ремиссию» заболевания, в течение относительно короткого периода времени наступает тотальная деструкция бета-клеток, что еще раз подчеркивает чисто заместительный характер проводимой терапии [202, 237, 379, 381].

Сформированная в настоящее время концепция сахарного диабета 1 типа как органоспецифического аутоиммунного заболевания, а так же данные о возможности восстановления утраченных инсулинпродуцирующих клеток ставят задачу разработки методов патогенетической терапии, направленных на блокаду (сдерживание) иммуно-метаболической агрессии против бета-клеток поджелудочной железы и развития абсолютной инсу-линовой недостаточности [15, 17, 129, 189, 190, 202, 237, 379].

Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что процесс хронической иммуноопосредованной деструкции бета-клеток поджелудочной железы длительно предшествует клинической манифестации сахарного диабета 1 типа, наблюдаемой только после гибели 80-90% из всего пула инсулинпродуцирующих клеток [15, 17, 202, 203]. Эти данные говорят о необходимости начала патогенетической терапии, как минимум, на стадии преддиабета при еще сохраненном значительном количестве бета-клеток [189, 190, 202, 207, 237].

Вместе с тем, раннее применение методов патогенетической терапии при развитии сахарного диабета 1 типа предполагает максимально возможное сохранение, пусть в минимальном количестве, секреции инсулина оставшимися неразрушенными бета-клетками, с перспективой возможного повышения их функциональной активности. В этом плане важно отметить, что наличие эндогенной (остаточной) секреции инсулина у больных с сахарным диабетом 1 типа во многом определяет стабильное течение заболевания, замедление развития поздних сосудистых осложнений [18, 129, 202, 237].

На основании установленных к настоящему времени фактов о механизмах, участвующих в процессе деструкции бета-клеток поджелудочной железы, в качестве перспективных патогенетических методов профилактики и лечения сахарного диабета 1 типа рассматривается антиоксидантная и иммунотерапия, включающая в себя иммуносупрессию и иммуномодуля-цию, генотерапия [16, 17, 53, 129, 222, 385, 386]. Получены обнадеживающие экспериментально-клинические результаты при применении больших доз антиоксидантов (а-токоферола, аминогуанидина, селена, СОД и т.д), никотинамида, иммуносупрессантов (циклоспорина А, азатиоприна) в профилактике и лечении впервые выявленного сахарного диабета 1 типа [44, 45, 54, 146, 200, 225, 242, 264]. Применение этих препаратов ведет к ремиссии заболевания и длительному сохранению остаточной секреции бета-клеток поджелудочной железы.

В настоящее время проводятся Европейское и Канадское исследования по изучению эффективности никотинамида в качестве профилактического средства у лиц, имеющих диабетические предикторы (антитела к антигенам бета-клеток, инсулину, снижение 1-й фазы секреции инсулина).

В плане иммунотерапии сахарного диабета 1 типа рассматривается возможность снижение эффективности иммунной агрессии против бета-клеток поджелудочной железы путем раннего начала инсулинотерапии («обеспечение функционального покоя бета-клеток»); путем стимуляции толерантности к антигенам бета-клеток (пероральное введение антигенов); путем Т-клеточной вакцинации; использования так же селективной иммунотерапии (введение молекул-модуляторов апоптоза, антиидиотипических антител; aHraCD4 и т.д.), линамида, витамина Дз, цитокинов (ИЛ-4, 10, 13) [129, 189, 190, 208, 214, 223, 229].

В качестве методов генотерапии рассматриваются воздействие на экспрессию генов регенерации бета-клеток, транскрипционных факторов PDX-1, анти-апоптозных генов, воздействие на гены антиоксидантной системы бета-клеток (СОД, Мп СОД) и т.д. [189, 190, 202, 237, 254, 281] Однако это направление ещё находится в начальной стадии исследования.

Исследования последних лет свидетельствуют об особом значении в патогенезе сахарного диабета 1 типа нарушений функционирования регу-ляторных (супрессорных) механизмов иммунной системы и дисфункции тимуса. Одной из причин дисфункции регуляторных Т-лимфоцитов может быть врожденное или приобретенное нарушение деятельности тимуса, как центрального органа иммунной системы. Нарушение его функции, в частности снижение продукции гормонов, может быть одной из причин образования аутореактивных клонов Т-лимфоцитов, цитотоксических по отношению к бета-клеткам поджелудочной железы. Следует так же отметить, что помимо иммунотропной, тимические гормоны обладают широкоспектральной метаболической активностью, влияют на течение процессов физиологической и репаративной регенерации [9, 12, 21, 27, 31, 85, 157].

Эти результаты послужили основанием для начала исследований по оценке эффективности тимических пептидов в профилактике и патогенетической терапии сахарного диабета 1 типа. Предварительные немногочисленные исследования по использованию гормонов тимуса в профилактике и лечении сахарного диабета 1 типа дали обнадеживающие результаты [36, 37, 38, 47, 69, 86, 87, 160]. Хотя это направление еще находится на начальном этапе исследования, и многие аспекты действия гормонов тимуса на различных стадиях сахарного диабета 1 типа не изучены [186, 217, 228,235,251,332].

Именно поэтому, углубленному исследованию влияния гормонов тимуса на развитие и течение сахарного диабета 1 типа и посвящено данное экспериментально-клиническое исследование.

Цель работы - разработка и обоснование патогенетических подходов к профилактике и лечению сахарного диабета 1 типа, направленных на сохранение и повышение функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы.

Задачи исследования:

1. Изучить влияние пептидов тимуса на развитие экспериментального сахарного диабета.

2. Изучить влияние различных схем введения пептидов тимуса на динамику клинических, гормонально-метаболических показателей при развившемся экспериментальном сахарном диабете.

3. Изучить влияние пептидов тимуса на морфологические показатели в поджелудочной железе крыс при экспериментальном сахарном диабете.

4. Провести сравнительный анализ влияния раздельного и сочетанного применения пептидов тимуса и а-токоферола на течение экспериментального сахарного диабета.

5. Изучить влияние пептидов тимуса на гормонально-метаболические показатели у интактных животных.

6. На основании проведенных исследований разработать оптимизированную схему иммунотерапии при экспериментальном сахарном диабете.

7. Провести анализ состояния клеточного и гуморального звеньев иммунитета и их взаимосвязь с гормонально-метаболическими показателями у больных с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа.

8. Изучить влияние пептидов тимуса на динамику иммунологических и гормонально-метаболических показателей у больных сахарным диабетом 1 типа.

9. Провести комплексную оценку влияния иммунотерапии на клиническое течение сахарного диабета 1 типа.

Научная новизна

1. Впервые показано наличие у пептидов тимуса, входящих в состав Т-активина, протективного эффекта в развитии экспериментального ал-локсан- и стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета.

2. Впервые получены данные о терапевтическом эффекте Т-активина в лечении экспериментального сахарного диабета:

- повышение и длительное сохранение функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы;

- снижение активности процессов ПОЛ (антиоксидантное действие) в плазме крови;

- увеличение относительной массы тимуса (ТИ) и селезенки (СИ);

- морфологические данные, свидетельствующие о наличии восстановительных процессов в инсулинпродуцирующих структурах поджелудочной железы (новообразование бета-клеток и островков Лангерган-са).

3. Впервые показано, что введение Т-активина больным с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа приводило к снижению количества лимфоцитов, экспрессирующих активационные антигены, повышению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы, сопровождалось антиоксидантным действием, в результате чего снижалась суточная доза вводимого инсулина, наблюдалась стабилизация клинического течения заболевания.

Практическая ценность работы.

Результаты проведенных экспериментальных исследований показали возможность профилактики развития сахарного диабета 1 типа путем применения пептидов тимуса (Т-активин) на доклинической стадии развития заболевания, что позволяет рекомендовать их к апробации в клинической практике.

Полученные экспериментально-клинические данные позволяют рекомендовать включение пептидов тимуса (Т-активина) в комплексную терапию впервые выявленного сахарного диабета 1 типа в качестве средства патогенетической терапии, направленной на нормализацию течения иммунологических процессов и коррекцию метаболических нарушений, с целью блокады (сдерживания) дальнейшей прогрессирующей гибели оставшихся неразрушенными в дебюте заболевания бета-клеток поджелудочной железы. Введение пептидов тимуса в поддерживающем режиме ведет не только к длительному сохранению, но и, что важно особо подчеркнуть, повышению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы, что свидетельствует о наличии восстановительных (репаративных) процессов в инсулинпродуцирующих структурах. При этом происходило существенное снижение суточной дозы экзогенно вводимого инсулина, что помимо медицинских аспектов имеет существенное экономическое значение.

Предложенный метод иммунотерапии сахарного диабета 1 типа позволяет существенно повысить эффективность проводимого лечения за счет стабилизации клинического течения заболевания, что является основой профилактики развития сосудистых, инфекционных и других осложнений заболевания, а также улучшить качество жизни пациентов.

Внедрение результатов исследования в практику.

Материалы исследования включены в цикл лекций и практических занятий по патофизиологии, морфологии, иммунологии, эндокринологии и диабетологии для студентов 3-6 курсов лечебного, педиатрического и стоматологического факультетов, врачей факультета повышения квалификации и профессиональной переподготовки специалистов Смоленской государственной медицинской академии. Практические рекомендации, вытекающие из полученных результатов, апробированы и внедрены в областной клинической больнице, где выполнялось настоящее исследование, областном диабетологическом центре и в других лечебных учреждениях Смоленской области.

На защиту выносятся следующие положения:

1. Т-активин обладает протективным эффектом в развитии экспериментального сахарного диабета.

2. Введение Т-активина при развившемся экспериментальном сахарном диабете ведет к частичному восстановлению и длительному сохранению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы.

3. Введение Т-активина больным с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа ведет к снижению гиперэкспрессии на лимфоцитах актива-ционных антигенов, снижению активности процессов ПОЛ, повышению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы, снижению дозы вводимого инсулина, стабилизации клинического течения заболевания; и может быть рекомендовано в качестве патогенетической терапии в комплексном лечении впервые выявленного сахарного диабета 1 типа.

Апробация работы. Основные результаты исследований и положения диссертации доложены и обсуждены на:

1) межобластных (Смоленская, Брянская, Калужская, Тульская, Орловская, Калининградская) научно-практических конференциях врачей-эндокринологов, диабетологов, терапевтов (1991, 1999, 2002, 2003);

2) на совместных заседаниях Смоленских отделений обществ патофизиологов, морфологов, биохимиков, фармакологов, биологов, иммунологов (1991, 1995, 2000, 2003);

3) на Всероссийской научно-практической конференции «Актуальные вопросы экспериментальной и клинической фармакологии» (Смоленск, 1994);

4) на научно-практической конференции молодых ученых России, посвященной 50-летию АМН РФ (Москва, 1994);

5) на XIII Европейском Диабетологическом конгрессе (Австрия,

1995);

6) на Национальных научно-практических конференциях «Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни человека» (Смоленск, 1999, 2001);

7) на Международной научно-практической конференции «Загрязнение окружающей среды и здоровье населения» (Смоленск, 1999);

8) на II Всероссийском съезде эндокринологов (Челябинск, 1991), III Всероссийском съезде эндокринологов (Москва, 1996), I Российском диабетологическом конгрессе (Москва, 1998), IV Всероссийском конгрессе эндокринологов (Санкт-Петербург, 2001).

ВЫВОДЫ.

1. Пептиды тимуса, входящие в состав Т-активина, блокируют индукцию экспериментального аллоксан- и стрептозотоцининдуцированного сахарного диабета.

2. Введение Т-активина крысам с развившимся экспериментальным АИСД и СИСД приводило к снижению уровня гликемических показателей, повышению уровня инсулина в плазме крови, снижению показателей активности процессов ПОЛ, нормализации клинической картины, повышению массы тимуса.

3. Отмена введения Т-активина при АИСД и СИСД вела к «рецидиву» заболевания: нарастанию гипергликемии, инсулинопении, активации процессов ПОЛ.

4. Проведение повторного курса Т-активина крысам с «рецидивом» сахарного диабета приводило к нормализации гормонально-метаболических и клинических показателей, что свидетельствует о необходимости введиния пептидов тимуса в поддерживающем режиме с целью стабилизации течения заболевания.

5. Введение Т-активина крысам с экспериментальным сахарным диабетом в поддерживающем режиме способствовало развитию ремиссии и стабилизации течения АИСД и СИСД.

6. Отмена введения Т-активина крысам с АИСД и СИСД в «поддерживающем» режиме вело к рецидиву заболевания.

7. При морфологическом анализе поджелудочной железы крыс с экспериментальным сахарным диабетом, получавших Т-активин, получены данные, свидетельствующие о наличии восстановительных процессов инсулинпродуцирующих структур (новообразование Р-клеток и островков Лангерганса в поджелудочной железе).

8. Т-активин в монотерапии экспериментального сахарного диабета обладает антиоксидантной активностью, сопоставимой с таковой у а-токоферола. Сочетанная терапия Т-активином и а-токоферолом ведет к более выраженному ингибированию процессов ПОЛ, чем при монотерапии. Монотерапия экспериментального сахарного диабета а-токоферолом не ведет к существенному повышению функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы.

9. Введение Т-активина интактным крысам, не оказывая влияния на гликемические показатели и содержание инсулина в плазме крови, снижает интенсивность процессов ПОЛ, что может свидетельствовать о наличии у них прямой антиоксидантной активности.

10. С целью стабилизации течения экспериментального сахарного диабета, длительного сохранения и повышения функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы введение Т-активина необходимо проводить в постоянном (поддерживающем) режиме.

11. У больных с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа иммунологические изменения в крови носят гетерогенный характер. Наиболее выраженные изменения в иммунном статусе связаны с гиперэкспрессией на лимфоцитах активационных антигенов (CD23+, CD71+, CD95+, CD-DR+), снижению количества ТФЧ-РОК, повышению содержания ЦИК в плазме крови.

12. Введение Т-активина больным с впервые выявленным сахарным диабетом 1 типа вело к нормализации иммунологических показателей (снижению количества активированных лимфоцитов, ЦИК, повышению содержания ТФЧ-РОК, нормализации иммунорегуляторного индекса).

13. На фоне введения Т-активина происходило существенное повышение функциональной активности бета-клеток поджелудочной железы, снижение гликемических показателей, суточной дозы вводимого инсулина, нормализация активности процессов ПОЛ.

14. Введение Т-активина в поддерживающем режиме вело к стабилизации клинического течения заболевания (без эпизодов декомпенсации), длительному сохранению эндогенной секреции инсулина, улучшению качества жизни при полном отсутствии побочных эффектов от проводимой иммунотерапии.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. С учетом полученных экспериментальных данных о наличии у пептидов тимуса протективного эффекта в индукции развития СД 1 типа рекомендуется использование Т-активина у пациентов на стадии преддиабета с целью профилактики развития у них СД 1 типа.

2. У больных в дебюте сахарного диабета I типа, для оценки степени активности иммунологических процессов и их динамики в ходе проводимой терапии, наиболее информативным является определение наличия экспрессии на лимфоцитах активационных антигенов (CD23, CD71, CD95, CDHLA-DR).

3. У больных с впервые выявленным СД 1 типа рекомендовано применение Т-активина в комбинации с интенсифицированной инсулинотерапи-ей, что позволяет снизить активность экспрессии на лимфоцитах активационных антигенов, повысить функциональную активность Р-клеток поджелудочной железы, снизить дозу вводимого инсулина и одновременно улучшить компенсацию в большей степени, по сравнению со стандартной терапией.

4. Использование Т-активина в поддерживающем режиме позволяет длительно поддерживать стабильным иммунологический гомеостаз, сохранять остаточную секрецию Р-клеток поджелудочной железы, стабилизировать течения заболевания и повысить качество жизни пациентов по сравнению со стандартной терапией.

5. Использование Т-активина в комплексном лечении сахарного диабета I типа позволяет нормализировать не только иммунологический, но и метаболический гомеостаз и в частности процессы ПОЛ, что является одной из основ профилактики в развития поздних осложнений сахарного диабета.