Автореферат и диссертация по медицине (14.00.29) на тему:Морфологические и цитохимические особенности лимфоцитов при патологичсеских и физиологических состояниях



россппскпя /5клдеми9 йелпцннсш пп9к псесопзгшп ордена яеншм п ордена трудового красного зпйвепя

ГЕЙПТОПОГИЧЕСШ НА9ЧИНМ ЦЕНТ?

I

Па правах рдкопяси

ВАЗЛННА ШЙ ИВАНОВНА ЙОРбОЛОГЙЧНСНИЕ И 1шТ0Х!!ШЕШЕ ОСОБЕННОСТИ ПЙВЗЙЦНТОВ

при шологпчгшх н шпологпчесш состоанпах

14.00.29 - Геаатологид а перейппалпе крова

АВТОРЕФЕРАТ

дпссертацпя па сокскмше цчсиоА степаял кандидата ивдяцянскнх Падк

□ОСКОП - 1992

4'' ! .; А; О

" ' . V /¿х У

Работа выполнена в Центральном институте усовершенствования врачей

•

Научный руководитель:

доктор медицинских наук, профессор В.Т.Морозова.

Официальные оппоненты:

/ доктор медицинских наук, профессор Е.А.Соловьева ^ доктор медицинских наук, профессор Г.И.Козинец

Ведущее учреждение: Институт проблем онкологии АН Украины

Защита состоится '' '" г-' 1992 года

в_, часов на заседании специализированного совета Д 074.08.01

во Всесоюзном гематологическом научном центре /125167, Москва, Новозыковский проезд, 4-а/.

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ВГНЦ.

Автореферат разослан " ¿Г " /¿-/¿Ж*? 1992 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук

В.Д.Реук

;гртацу.Г| Актуальность Проблеяли. Защита организма от чужеродных аген-

" "" "" ..... 1" '/i '

тов осуществляется иммунной системой, основной функциональной и , морфологической единицей которой являются ишунокомпетентные клетки - лимфоциты / Н.В.Гользанд, 1980} Ю.Э.Виноградова, 1985; М.В.Робинсон й соавт., 1986 /.

I

Имцунная /лшлфондная/ система, включающая центральные и периферические органы, функционирует как единый механизм / А.НЛе- , рвдвев и соавт., 1980; К.П.Кашклн, З.О.Караев, 1984; Р.В.Петров, К.А.Лебедев, 1985 /. Следовательно, оценить функциональное состоять лийфоидной системы можно по состоянию отдельный её звеньев.

Критериями оценки функциональной активности лшлфоидной системы мэгут служить морфологиЧеокие параметры и показатели внутриклеточного метаболизма лим$оЦитов периферической крови.

Морфологические и цитохимические показатели, отражающие активность. лимфатических: клеток, были изучены в культурах с штогэ-' ном / Г.И.Козине« и соавт., 1982; ei ., 1977 А

Морфо-цитохишчвскив'изменения лимфоцитов /ä tfitt? сопоставгмы 'с таковыми при антигенной стимуляции ¿п . Однако в организме йа лим$оидаую систему, дополнительно воздействует ряд нервно-гормональных факторов, вызывающих усиление, ослабление либо.извращена иммунного ответа / З.А.Бутенко и соавт*, 1975; В.И,Гозал-ло, 19751 В.Д.Чеботарев, 1979 Д

В литература имеются немногочисленные сведения об изменении морфологических и цитохимических показателей лимфоцитов периферической крови человека при различных'физиологических и патологических состояниях, сопровождающихся иммунологической реактивностью /иммунизация, вирусные заболевания/ и иммунологической толерантностью /беременность,, опухолевый процессы/ лшфоидной спс-

темы / А.И.Зивенко, Г.Н.Ляшенко, 1980; И.И.Соколов, Ф.Ф.Репина, 1982; Т.Н.Соболева, 1983; И.Г.Белоконова и соавт., 1934; С.А.Сем-чонкова, 1988 е1л£,, 1985/.

Однако эта сведения нередко нооят противоречивый характер. Не проводилось сопоставления результатов комплексного исследования морфологических особенностей и изменения метаболизма лимфаФичеоких клеток для оценки функционального состояния лимфоццной системы.

На определены морфологические и цитохимические критерии функциональной активности лимфоцитов периферической крови с учетом их информативности и диагностической значимости.■

Ввдаление достоверных и информативных морфологических и цитохимических показателей функциональной активности лимфоцитов, как клеток, отражающих функциональной состояние иммунной системы, послужило основание!,1 для проведения наших исследований.

Цель работы -.оценка функциональной активности лимфоидной . система при некоторых патологических и физиологических процессах на основании комплексного исследования лимфоцитов периферической 'крови.

'"' !.'■■' В соответствии с целью исследования поставлены задачи: (}'.»- 1. Изучить морфологические параметры лимфоцитов периферичео-■'.. кой крови при лимфопролифэрахибкых заболеваниях /хронический лим-лфолейкоз/ ж ишунореактивных процессах /иммунизация.доноров, вирусные заболевания, беременность, новообразования/. .' ' 2. Изучить особенности метаболизма лимфатических клеток при патологических и физиологических процессах по изменению.их цитохимических показателей}'

3. Определить критерии функциональной активности лимфоидной систеш на основании проведенного исследования морфологических и

цитохимических показателей лимфоцитов периферической крови;

4. Определить информативность морфо-цитохимических показателей лимфоцитов и их диагностическую значимость при патологических и физиологических состояниях.;

5. Провести сопоставление результатов комплексного исследования лимфоцитов,периферической крови с учетом их диагностической значимости для оценки степени функциональной активности лимфоидной системы.

ручная новизна

- обнаружены особенности внутриклеточного метаболизма, свойственные лимфоцитам при хроническом лимфолейкозе / ХЛЛ / и иммуно-реактивных процессах,• сопрвовдащихся иммунологической активностью /иммунизация доноров, инфекционно-вирусные заболевания/ и иммунологической толерантностью /беременность, опухолевые процессы/;

- выявлены достоверные и информативные морфологические и цитохимические показатели, характеризующие функциональное состояние

'лимфоцитов при вышеперечисленных физиологических и патологических процессах;

- составлен перечень наиболее информативных, морфо-цитохимичеот ких показателей лимфовдтов периферической крови, имеющих значение для оценки функциональной активности лимфоидной системы.

Практическая цэннооть .

Практическая цэннооть работы заключается в установлении дяаг-' • ноотичеокой значимости морфологических и цитохимических лабораторных показателей, отражающих в совокупности функциональное состояние ликфзпнтов периферической крови.

Полученные данные позволили сформулировать практические рекомендации для клинико-диагностических лабораторий по морфо-цито-

химической оценке функциональной активности лимфатических клеток. Результаты исследования могут служить методологической основой для дальнейшего применения системного анализа в лабораторной практике лечебно-профилактических учреждений.

Вщрте щ ПРактШ

Метод оценки функционального состояния лимфоидной системы при различных патологических и физиологических процессах по изменению морфо-цитохшрческих показателей лимфоцитов периферической крови с 1991 года внедрен в практику клинико-диагностической лаборатории-Пензенской городской больницы # 6. Материалы диссертации используются в учебном.процессе на.кафедре клинической лабораторной диагностики Пензенского ГИУВа.

Дпробаиид работы

Основные положения диссертации изложены на:

- научно-практической конференции, посвященной памяти Н.Н.Бурденко, г.Пзнза / 1989 /;

- совместном заседании сотрудников кафедры клинической лабораторной диагностики ВДУв и .клинико-диагностической лаборатории б-цы шл.С.П.Боткина, г.Москва / 1991 /;

- заседании общества врачей-лаборантов, г.Москва / 1992 f,

Публикации. По тема диссертации опубликованы 4 печатные работы, 2 работы приняты в печать. • .

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 132 страницах машинописного текста, состоит из введения, 4-х глав, заключения, выводов и указателя литературы, в котором приводится 208 источников, из них 10Q отечественных, и 1138 иностранных автора. Содержит 20 таблиц и 31 рисунков.

мдщм и методы исстда.ш'л

Работа' основана На результатах попфологичоского и цитохимического исследования лимфоцитов периферической крови 183 человек, объединенных в группы: ! , ,

1 группа - доноры, иммунизированные антиотафилококковым анатоксином. Иммунизация проведена с целью получения лечебной антистафилококковой сыворотки. Всего 29 человек, у 19 из них кровь для исследования взята через 2,5 месяца от начала иммунизации, у 10 -через 6 месяцев;

2 группа - больные ияфекцгюншмя вирусными заболеваниями /всего 16 человек, из ни 12-е вирусным гепатитом А и 4 человека -

с вирусным гепатитом В/;

3 группа — беременные женщины на разных сроках беременности я родильница в раннем послеродовом периоде /26 человек/. В этой группе выявлено 3 подгруппы:

- срок беременности до 38 недель /12 человек/ ; - срок беременности 30-40 недель /14 человек/

- ранний послеродовый перчод /10 человек/

4 группа - больные хроническим лвм$олейкозом /всего 39 человек, 19 ив которых имеют начальную стадии заболевания, 20 - развернутую/^

5 группа - больные со. злокачественными новообразованиями различных. органов /всего 28 человек, у 9 диагностирован рак легкого, у 11 - рак молочной явлэзы и у остальных опухоли других органов и систем, кроме лем$оидяой/$

6 группа - больные с доброкачественными опухолями молочной явлезн /5 человек/.

Контрольную группу составили 30 практически здоровых чет о не-

ка /доноры крови/, из которых 14 мужчин и 16 - женщин.

В качества показателей (L циональной активности лим£овдной системы взяты: абсолютное число лимфоцитов й пяазмоцитов, морфо-

г

метрические параметры лимфатических клеток и их адер, количество клеток, содержащих кислую фосфатазу /КФ/ и кислую неопецифичеакую встеразу /КНЭ/ и активность этих ферментов на 100 лимфоцитов и 1 клетку, содержание ШК-положительного материала, а также активность нукяеолярного аппарата.

Морфологическое и цитохимическое исследование лимфоцитов осуществляли в окрашенных мазках периферической крови.

Морфологию лимфатических клеток оценивали при просмотре мазка по следующим параметрам: форма и структура ядер, размер и цвет цитоплазмы, наличие азурофильной зернистости в цитоплазме, дегенеративные изменения.

Морфометрию лимфоцитов и их ядер проводили с.помощью окуляр-■ микрометра. Измеряли два размера - продольный и поперечный /плечи А и В/ и расчитывали площадь По формуле: /« ¿rZ-A-i-i-/*

;•. V У каадох'о исследуемого подсчитывали 100.лимфатических клеток и 100 адер; определяли их средние размеры и вычисляли ядерно-клеточное соотношение.

Подсчитывали.количество крупных,, средних и маяких лимфоцитов.' Крупными считали клетки диаметром более 12 мкм; средними - от 8 до 12 мкм и меткими - диаметром менее 8 мкм.

Определяли также число лимфатических клеток о крупными /диаметром болеа 9 шм/, средними /от.7 до 9 мкм/ й мелкими/менее 7 мкм в диаметре/ ядрами.

i ■ В лимфограммэ каждого исследуемого подсчитывали процент боль-

пшх гранулосодержащих лимфоцитов /БГ1/ и. вычисляли абсолютное число этих клеток в единица объема крови,

; ШйК-положитальный материал в лимфоцитах выявляли методом jX^a/tut /1946/, Подсчитывали процент ИИК-половдт ельн ых клеток и содержание гликогена на 100 лимфоцитов и 1 клетку.

Цитохимическое исследование активности КФ проводили методом и ЛлгЛл /1962/. Активность КНЭ с ^-нафтклацетатом в качества субстрата определяли методом Д975/.

Цитохимическая активность, лизосомальнык ферментов оценивалась в уоловннх единицах о учетом количества гранул и интенсивности окрашивания конечного продукта реакции. Подсчитывали число фармент-псложительных клеток в процентах, а также активность ферментов на 100 лимфоцитов и 1 ферментсодериащую клетку. Кроме того, учитывали распределение конечного продукта в виде крупных, мелких гранул или диффузно.

Нукпеолярный аппарат /НА/ исследовали по методу в модификации И. А.Быковой /1973/. Подсчитывали количество ядрышек на 100 лимфоцитов и выводили нуклеолярннй коэффициент /НК/, т.е. число ядрыцек на 1 клетку. Определяли процентное содержание различных видов нуклеол /гомогенных, кольцевидных и точечных/.

Всего проведено 2745 исследований, из них морфометричеоких -1281 и цитохимических - 1464.

Была определена диагностическая значимость каздого морфологического и цитохимического показателя. Определение диагностической значимости проводилось на основании вычисленной с помощью ЭВМ информативности /С/. Показатель считался высокоинформативным, если его информативность была выше средней и условкоинформативннм при С ниже оредней в данной группе исоледуемых.

рвищАИ {тащздг Я

Морфо-штохишческая характеристик лимфоцитов в норме Морфологическое исследование лимфоцитов здоровых людей показало, что в периферической крови присутствуют лимфатические клетки разных размеров: крупные /«/>12 мкм/, средние f*t-8-12 мкм/ и мелкие /¿<Ъ мкм/. 7 здоровых людей число крупных лимфоцитов составляет от 2 до 26%, средних - от 71 до Э5% и мелких - от 0 до 13?. Известно, что антигенная стимуляция вызывает йласттрансформацюо лимфоцитов, происходит превращение мелких клеток с средние, а за- ' тем в крупные QutuJet 1977 /. Следовательно, изменение

соотношения крупных и мышпс лимфоцитов мохет олу&ить показателем степени функциональной активности лиц£овдной системы. В норме это соотношение составляет 1,8±0(91 для женщин и 3,4^0,84 для мукчин. Цитохимические показатели лимфоцитов здоровых людей были сопоставимы с таковыми, полученными другими исследователями / Г.Н. Стренева, А.В.Караулоз, 1976; Д.Ф.Глузман, 1978; И.А.Медведева,. 1983; Г.И.Козинец и соавт., 1982; В.Т.Морозова и соавт., 1987; • Ц.Ш.ГеликашЕшш и соавт,, 1988;, 1974\

, 1982 /. Можно отметить, что в норма лимфоциты ишит определенный уровень внутриклеточного метаболизма, отражающий, наряду с морфологическими показателями, степень их функциональной активности. 66£ всех лимфоцитов дают положительную реакцию на КФ и 38$ -на КНЭ с преимущественно крупногранудярной реакцией. ШЖ-положитель-ный материал обнаружен в 18$ лимфатических клеток. Количество ядрышек на 1 клетку /НК/ составило 1,12, из которых 3% имели гомо-геннул структуру.

Сравнительный анализ иэрфологических и цитохимических показателей лимфоцитов в мужской и женской подгруппах выявил более вы-.

• ' L

сокую функциональную активность лимфоцитов здоровых мужчин по сравнению со здоровыми женщинами, что, возможно, обусловлено из различным гормональным статусом.

Морфо-иитохимичеокая характеристика лимфоцитов при иммунизации

Исследование морфологических и цитохимических особенностей лимфоцитов периферической крови доноров, иммунизированных аятястафило-

I 1

кокковым анатоксином, показало увеличение абсолютного числа лимфатических и плазматических клеток 3 единице объема крови, средней 'площади лимфоцитов и иХ ядер за счет увеличения числа крупных и одновременного снижения числа мелких.клеток /Габл.1/. Такое перераспределение приводит к повышению соотношения крупных й мелких лимфоцитов в £.3 раза по сравнению с неилкунизярованными донорами /Рио. 1/.

Иммунизация вызывает увеличение количества лимфоцитов, содержащих КФ и КНЭ, а также повышение средней цитохимической активности этих энзимов на 1 ферментсодержащув клетку. В связи с этим активность КФ и КНЭ в единице объема крови значительно возрастает. Соот-ношенйе ферментдоложительных и ферментотрицательных лимфоцитов в этом случае тоже повышается /Табл.1/.

Снижение содержания !Ш1К-положитвльйого материала, зарегистрированное при иммунизации доноров, может быть связано с расходованием его в процессе выполнения клеткой 'специфических иммунных реакций.

В лимфоцитах." иммунизированных доноров отмечено повышение активности нуклеолярного аппарата^ которое проявлялось увеличением количества нуклеол на 100 лимфатических клеток и числа гомогенных ядрышек /Табл.1/.

Вышеперечисленные изменения морфологических и цитохимических показателей' функциональной активности лимфоцитов'дают право гово-

Морфо метрические я цитохимические показатели лиьфэиитов пврпфзри-ческой крови при иммунизация донорой и вйрусных заболеваниях /М*мД

Л ! Показ а т ель

Ш

а!:

1 группа!2 группа,

Вирусные заболёван.

1. Абсолютное число лимфоцитов х109/й

2. Средняя площадь лимфоцитов в мк«^.

3. Средняя площадь ядер лимфоцитов

в щи?

4; Ддерно-клеточное соотношение

5. Процент крупных !с1 > 12 мкм/ лимфоцитов'

6. Процент малках /»■/< 8 мкм/ лимфоцитов

7. Процент крупных /л>9 мкм/ ядер лимфоцитов

8. Процент мелких 7 мкм/ дцв]р

лимфоцитов ■ 9. Процент лимфоцитов,содержащих КФ

10* Активность КФ в усл.ея./100 кл.

11. Процент лт.фэ1Еиов,содержащих КНЭ

; 12* Активность КНЭ в уол*эд,/100 кл.

¿3. Процент лимфоцитов,содержащюс гли-т .. когея •

14. Содержание гликогена в уся.ед./ 100 «я.

15. Нуклеолярный коэффициент

16. Процент гомогенных ядрыпек

^ 1,702* ХП,577* Ч 1,99141 0,081 0,103.. 0,139

193,29± х*89,57* ЖТ95,30± * 1 1^332 .11?70 1,910 .

56;43* ХЫ,63* х!57,235± * 0^480 0|7Й1 .0,630

* о,ео5к* о,614* ю.йю* *. 0,0065 0,0065 . 0,0063

Цб,95** 14,00* |25>630*Х 2,359 2¡032 . 3;36

I 0,790* х*2,20* х Ц>ЗИ*х 0,269. 0^813 0.;430 .

$ 11,340^10,0* Ч19|250± х 1|163 -21137 2,11

4 0,68* х 1,022* ХЦ,125± х .0,237 0,212 0,540

180,941^ 68,50* |76,25* 1 . 1 ¿162 <439 . 1,46

*121,0*х 96,20* 1120,50* х " 51173 4)50

4,107

»46,58* г 2,039

165,68* Х 3^322

415,32* х . 1;357

40,30* $40,25* х 2,060 2,85

55.80* ^61,06* х 2;б78 4,10

19,40* ¿12,0* х

1,932 1,39

31,70* |16,69* х 3,691 2,15

Г 1,191* х 1,150* * 1,210* х 0,012 0,017 0,019

♦ 7,37** 14,82* 4112,80* х О»467 0,554 1^30

* ^ п-

показатаяк, достоверно отличающиеся от контрольных / Р*0,05 /. направленность изменения показателя /увеличение,уменьшений/

. -11 -

рить о том, что иммунизация активирует лимфоидную систему, С увеличением срока от начала иммунизации степень функциональной активности лимфоцитов уменьшается. Если в 1 группе иммунизированных доноров /срок от начаяа иммунизации - 2,5 месяца/ морфологические и датохишческие показатели имеют выраженные отличия от таковых у нвнммунизирьванных, то во 2 группе /срок - 6 месяцев/ эти показателя близ?® к контрольным /Табл.1/.

■ МорФо-пктохимцчеокая характеристика цтйоттоъ пси инФекни-

. Изменения морфо-цитохимических показателей, наблюдавшиеся при инфекционно-вирусных заболеваниях, аналогичны изменениям.при иммунизации с той же степенью выраженности /Табл.1/. В атом случае также увеличивается абсолютное число лимфатических и -плазматических клеток в единице объема крови,'размеры лимфоцитов и их ядер. Трансформация мелких лимфоцитов в крупные приводит к повышению их соотношения та 7,8 раз по сравнению с контрольной группой /РисД/. Увеличивается число ферментсодеркащих лимфоцитов преимущественно за счет клеток с малкогранулярной и диффузной реакцией, что свидетельствует о вовлечении в иммунный процесс В-клвточного звена / Ф.Г.ДжДейхоу, Д.Кваглино, 1983; Л. СпоеЛаЫ ШЗ^.Я&гяа-*'' 1989 /.

Повышается активность лиаосомалышх. ферментов на 1 л 100 л атлетических клеток, уменьшается содержание ШЙК-полахительного материала, происходит активация иуклеолярного аппарата.

Следовательно, вирусные' заболевания также сопровождаются повышением функциональной активности клеток лимфоидной системы.

Морфо-цитохимческая характеристика лимфоцитов при беремев-

№?<?тч и 8 шмм п9сд9р?««?еот л9рй9дэ

Изменения морфологических и цитохимических показателей лимфо-

6,3

7.8

. »»(.С

2,0

* к-

Б В Г Д

4Д

2,3

м

ш

н

щ ш.

к

1.3

Рис.1 Изменение- соотношения трудных и мелких лимфоцитов в исследуемых группах по сравнению с контрольной

А. - 1 группа иммунизированных доноров /срок 2,5 мес/ Б - 2 группа иимунизировакных доноров /срок 6 мес/ В - инфекционно-вирусные* заболевания Г - 1 группа беременных /срок до 38 недель/ Д - 2 группа беременных /срок 38-40 недель/ С - родильницы в послеродовом периоде Е - злокачественные новообразования ' К - доброкачественные опухоли молочной жалезы II - начальная, стадия хронического лимролайкоза Н - развернутая стадия хронического лимфолейкоза

6,3

цигов периферической крови при беременности неоднозначны /Табл.2/. Плод, являясь чужеродным для организма женщины, стимулирует иммунную систему. Однако существует рад нервно-гормональных механизмов, ¿локирующих нормальный иммунный ответ, уменьшающих активность лим-фоидной системы / Л.С.Волкова, 1970; П.И.Фогал, 1982; ¡¿я^., 1982 I.

В 1 груше беременных /при сррке беременности до 38 недель/ ыорфоматрические и цитохимические показатели лимфоцитов близки к . показателям здоровых небеременных женщин либо незначительно отли-

Морфо метрические и цитохимические показатели лимфоцитов периферической крови при беременности и в раннем послеродовом периода Д1*м/.

№ | Показатель

| Беременные_¡Послерод.

!1 группа!2 группа ! период_

1, Абсолютное число лимфоцитов х109/л

2, Средняя площадь лимфоцитов в мкм^

3, Средняя площадь ядер лимфоцитов в мкм2

4. Ядерно-клеточное соотношение

5. Процент крупных /Л> 12 мкм/ лимфоцитов

6. Процент мелких /</<8 мкм/ лимфоцитов ■ •

.7. Процент крупных /¿/>9 мкм/ ядер лимфоцитов

8. Процент малких Ы*Ч мкм/ ядер лимфоцитов

9. Процент лимфоцитов,содержащих КФ

10. Активность КФ в усл.ед./100 кл.

11. Процент лимфоцитов,содержащих КНЭ

12. Активность КНЭ в усл.ед./100 кл.

13. Процент лимфоцитов,содержащих гликоген ■

14. Содержание гликогена в уол.ед./ 100 кл.

15. Нуклеолярный коэффициент

16. Процент гомогенных ядрышек

1,458* 1,505* к 1 0^122 О!104 О

|87,215*Г|89,47* х 84 ' 1;31 1,7$ 2

♦53,36* Г»54,11* х 54 ' 0,47 ' 0^72 1

0,613* ¿0,606*х 0,011 0,0096

13,75* П6.36* х 2,175 1)Э8

I 2,0* 1 11,21- х 11 0^68 0*535 *0

8,50* 1,32

10,07*

1;аз

) 1,17* 0,48 х 1,1,36* 0,685 х |0 0 60* 45 X

62,92* 1,68 Г 78,0* 2^6 ^72 2 40* 25 X

82,75* 3,35 Г117,29*ХП07 6,095 2 30* 27 X

35,42* з;з7 40,79* 4*76 27 3 50* 49

53,33* 5,40 |62,79* х 37 5 30* 14

2,31 17,64* 2)25 18 2 47* 07

120,50* * з;з2 1 24,07* 3,03 29 3 21* 26

{1,170*х * 1,186* Х?1 '01019 0,020 0 209* х 019

15,53* 0,68 х »5,96* х»8 21* 66. X

548* 220

82* 41

03* 13

637* 011

10* 35

80* х

52

70* 65

х - показатели, .лооговерно отличающиеся от контрольных / Р<0,05 '/ f|- направленноп.ь изменения показателя /увеличение, уменьшение/.

• ~ц - ■

чаются /Табл.2/. Например, уменьшается количество мелких лимфоцитов, повышается активность нукл велярного аппарату. В предродовом периоде /при сроке 38-40 недель/ блокада дшлфоидной системы снимается / П.И.Фогел, 1980, 1982 Д вследствие Наго активность лимфатических клеток повышается. Правде всего, это проявляется в повышении размеров лимфоцитов и их ядер. Увеличивается число крупных с одновременным уменьшением .числа медких клеток, соотношение . их при э?ом возрастает в 7,5 раз го сравнению со здоровыми небере-менными'кенцинами и в 2,0 раза по сравнении с 1 группой беременных /Рис.1/. Повышается число фермантчеодвржащкх клеток, активность лизосомальных ферментов, увеличивается нуклсолярный коэффициент я количество гомогенных ядрышек. Эти изменения дарфо-цитохимических показателей свидетельствует о повышения функциональной активности лимфовднрй системы, что может быть расценено как. подготовка организма беременной женщины к родом. •

• Ранний, послеродовый период характеризуется достаточно высокой функциональной активностью по сравнению с контрольной группой, однако по оравненир о предродаша периодом морфо-щтохшическив показатели лимфоцитов периферической крови изменяются в сторону нормализации, т.е. уменьшаются средние размеры лимфатических клеток и их ядер, снижается соотношение крупных и мадких лимфоцитов, количество ферментноложительных клеток и активность лизосомальных ферментов /Табл.2/. Следовательно, прекращение воздействия чужеродного антигена, каковым является плод, приводит к восстановлению исходного состояния ламфовдной сиатемы. • •

МогДо-штохимичео^ая характеристика лимфоцитов прихрони-. . . / Ж> '

Функциональное состояние лимфоцитов при Щ определяется ак-

гивпостыэ клеток опухолевого клона, т.к. 8 периферической крови присутствуют п^еимуЩесгвеяйо эти клетки* В большинстве случаев это малоактивные долгожявущио лимфоциты» Однако .народу с! ниш, в перифе-. ричвской крови присутствуют высокоактивные йролиферируюидае лимфатические клетки, за счет Которых осущоствляется пополнение опухолевой масса / Ё.Б.13ладимйрская/Н.А'.Торубаровй, 1965 7. ..

Исследование морфо-цит'охимлческих показателей лимфоцитов при ХЛЛ выявило снижение относительного числа крупных лимфатических клеток с крупными ядрами й уваличейиэ числа мелких о узким ободком Цитоплазмы. Снижается соотношение крупных и мелких лимфоцитов, причем, тем ниже, чем больше величина опухолевой массы. В Начальной стадии это соотношение в 1,3 раза меньше контрольного, 19 разверну-1'Л - в 6,3 раза /Рис.1/. Следовательно, увеличение массы опухоли происходит преимущественно за счет майких узкоЦйтоплазменных лимфатических клеток.

Однако абсолютное количестве, крупных лимфоцитов в единице объема крови не снижается, а. увеличивается и зто увеличение также пра-порциональко абсолютному лимфоЦитозу.

При ХЛЛ уменьшается относительное число-лимфатических.клеток, содержащих КФ й КНЭ /Габл.З/. вследствие этого сникается активность лизосомалънюс фермейтов на 100 лкмфоцйтов, соответствующая данным дфугих исследователей / Г.Й.Коэинец и соавт., 1981; Т.Й*Соболева, 1983; В.Г.Пинчук'и ооавт., 1933} В.Т.Морозова и соавт., 1987;/ /¿> ¿¿■¡¿('¿л^'Я- •, 1976 /. Однако , нами не выявлено снижение цитохимической активности ферментов йа 1 клетку, что позволяет говорить о присутствий в периферической крови лимфатйчрсклх клеток с достаточно высокой ферментативной;активностью.

При пересчете на единицу объема крови .число фермёитсодержашх

Морфометричесхле и цитохимические показатели лимфоцитов периферической крови при хроническом лшл}олзйкозв / М*м /.

а Р--------------------- ---------- _ -^ | Показатель ! Начальная | стадия ! [развернутая ! ста2ия_

1. Абсолютное число лимфоцитов хЮ^/л Г 9,890* Х 1,2зе f 43,508* Х 10'92

2. Средняя площадь лимфоцитов в мк^ 1 79,434* Х 1,501 170,235* х 2,262 ■

3. Средняя площадь ядер лимфоцитов в мкм^ |53,23* х 0,62 51,281* 0,660 .

4. Ядерно-клеточное соотношение 1 0,671* Х 0,009 } 0,739* * 0,017

Б. Процент крупных /¿¿>12 ш'..м/ лимфоцитов 1 5,680* Х * 1,231 1 3,801* 1 0,90

6. Процент налган /г/<8 мкм/ лимфоцитов 1 2,840- * * 0,660 ♦ 8,951* Х 2,109

7. 8. Процент крупных /л >9 мкм/ да ер лимфоцитов Процент мелких мкм/ ядер лигфз-цитов нд61± х 1;обо / 1,053* х 0,411 |4,80± * 1,033 11,50* 1 0,653

9. Процент лимфоцитов, содержащих КФ | 57,0± х З|б81 .. 4,44,40* х 4;зю

10. Активность КФ.в усл.ед./100 кл. 81,053* • 7 >220 $.59,60* Х

11. Процент лимфоцитов, содержащих КНЗ 117,80- Х * 3,761 ¿ 8*710* Х 2,890

12. Активность КНЗ в усл.ед./100 кл. 125,60- Х + 5,821 Ц1.530* Х 3*702

13. 14. Процент лимфоцитов,содеряащих гликоген Содержание гликогена в усл.ед./100 кл. * 42,01* 1 4,469 ^65,742* Х 8,531 ^55Д72* Х 5,601 |87,653* х 11,869

15. Нуклеолярный коэффициент . ' 1,117* ■ • ' 0*017 - 1,094* 0,026

16. Процент гомогенных ядрышек f 7,955* * 0,749, *6,722* Х 1,096

1 - показатели, достоверно отличающиеся от контрольных / Р<0,05 / {I- направленность изменения показателя /увадичэние,уменьшение/.

клеток повышается. Следовательно, при МД наряду а увеличением количества ферментнегативных увеличивается количество фзрментпозитив-нкх лимфоцитов, но в меньшей степени.

Значительно возрастает при ХЛЛ кшс абсолютное, так и относительное число 1Ш1К-полож1 т елън их лимфоцитов' и содержание гликогена на 100 клеток. Однако содержание его в 1 клетке не уи-пичивавтея по сравнению с контрольной группой, т.о, накопления [BlK-положитель-ного материала в лимфоцитах не выявлено.- Возможно, увеличение количества гликогенсодзряащих клеток при ХШ связано с преобладанием в периферической крови малоактивных опухолевых В-лим^оцитов / Т.Н. Соболева, 1983; В.М.Чернов и с о авт., 1985 eáag., 1S73 /.

Исследование нуклеолярного аппарата при ХМ показало увеличение числа гомогенных ядрыдек без повкгаепця нуклеолярного коэффициента. По мнению Е.О.Морозовой и соавт, гомогенизация ядрышек в этих случаях обусловлена не усилением синтеза РНК, как это наблюдается при имчунореакйгоиых процзеоах, а нарушением перехода синтезированной РНК из ядрышек в цитоплазму.

Таким образом, при ХШ1 в периферической крови наш выялено два типа- опухолевых кйоток: 1/ небольших размеров с мелкими ядрами и узким ободком цитоплазмы, дающие отрицательную реакцию иа КФ и КНЭ и положительную на гликоген, расцененную как оубпопуляция малоактивных нэпролифэрнрующих клеток, я 2/ крупные шрокоцитоплазмашше фарментпозитивные, даьщие отрицательную или сяаооположительную реакцию на гликоген - субпопуляция активных прелл^эрлрующих лимфатических клеток опухолевого клона. Соотноиеш:- крушшх и мелких или ферментположительш1* и фвргдвнтотрицатвяьрнх л.гм&яттов свидетельствует о соотношены: о-гих двух типов.

- 18 -n

Морйо-питохнмическая характеристика ^имзЬоштов при алока-чес-рвенны^ и доброкачественных опухолях

Опухолевые заболевания различных органов и систем вызывают ответную иммуннув реакцию, Однако сала стой реакции, как показано многими исследователями / В.И.Говалло, 1975; А.А.Стаыбровская, И.Ц.Си-гаров, 1987; С.И.Зудикдва, ХЪЩ f. C.Teztnet, , 1974 /»

ниже обычной вследствие блокирующего воздействия гуморальных факторов опухоли. Наши исследования выявили, что морфомётрические и цитохимические показатели функциональной активности лимфоцитов периферической крови при злокачественных новообразованиях близки к показателям контрольной группы либо незначительно отличаются /Табл.4/. Оценка функционального состояния лимфатических клеток проводилась в группе в целой без выделения подгрупп по признаку локализации опухоли, наличия метастазов, проведенному лечении, т.к. при сравнительном анализе юрфо-цитохамических показателей лимфоцитов в этих под- :'. группах достоверных различий не выявлено.

Аналогичные результаты получены в группе женрн с доброкачественными опухолями молочной жалезы, что, по-видимому, отражает одинаковое функциональное состояние лилфовдной системы при этих патологических процессах.

В обеих группах наш выявлено уменьшение числа мелких лимфати- : ческих клеток, вследствие чего повышается соотношение крупных и мелких лимфоцитов в 2.3 раза по сравнению о контрольной группой /РисД/.

По мнению В.И.Говалло и соавт. /198?/ уменьшение количества "малых" лимфоцитов является специфическим для опухолевых заболеваний а . может использоваться для их ранней.диагностики. Однако, как показали наши исследования, такие же изменения наблюдаются и при других имму-нореактивных процессах и отражают, по-видимому, общуюреакщш лшф-.

Морфометрические и цитохимические показатата лш^оцитов периферической крови П£й доброкачественных и злокачественных опухолях / М*м /.

Т

[доброкачеств

Показатель

Злокачествен.

опухоли 1,363* 0,270 опухоли 1,226* 0,074

ш ' 84,192* 1,270

52,732* 0,782 153,541* х ' 0,401

* 0,654* * т 0,015 ^ 0,639* * 0,С064

61802* 2,101 10,392* .1,472

1 2,20* х ' 0,821 1 1,822* х 0,373

5,403* 0,974 5,543* 0|719

10,512* * 0,448 11,319* х 0,342

60,809* 3,972 65,211* 2,199

76,010* 5,527 85,138* 3,902

37,503* 4,458 35,679* 1,770

55,210* 51779 50,457* 2,453

16,201* 3,211 |22,389* х | 1,647

23,010* 3,143 32,138* 2,871

1,131* . оиш- . ' 1,081* 0,017

3,704± 0,678 ! 3,010± г 0,442

1. Абсолютное число яюяфоцитов х!о9/л

2. Средняя шюшйдь лимфоцитов в мкм^ Средняя площадь дцбр лимфоцитов в мкмГ2

4. Ядерно-клеточно9 соотношение

5. Процент крупных №> 12 мкм/ лимфоцитов

6. Процент мелких /^<8 мкм/ лимфоцйтов

7. Процент крупных /«>9 мкм/ ддер лимфоцитов

б. Процент мелких мкм/ едер ликфэ-цитов

9. Процент лимфоцитов, содержащих КФ

.10, Активность Ш в усл.ед. /100 кл.

11. Процент лтфцитов, содержащих КНЭ

12. Активность КНЭ в усл.вд./100 кй.-

13. Процент лимфоцитов, содержащих глико--гей .

14. Содержание гликогена в усл.ед./100 кл.

15. Нуйл'еолярный коэффициент

16. Процент гомогенных ядрышек

х

- Показатели, достоверно отличающиеся от контрольных / Р*0,05 /

- направленность . 'изменения показателя /увеличение,уменьшение/.

идной системы па любую антигенную стимуляцию. Следовательно, этот тест не является диагностическим для злокачественных новообразований.

Таким образом, отсутствие достоверны;: морфо-цитохимических по-каэататей лимфоцитов свидетельствует о невысокой функциональной активности лим^оздной системы при доброкачественных и злокачественных опухолях, что; возможно, объясняет особенности патогенеза опухолевого роста. .

Особое значение в развитии злокачественных новообразований придается, естеотвгннш киллерам //^К-клеткам /, способным без. предварительной сенсл''илизации лизировать опухолевые метки, а также некоторые вирусы и грибы / И.М.ГряаноВз я соавт,, ,

1983; 1983 /.

АЛ'С.Бугеш^) /1987/ доказана четкая корреляция «езду Л'К-клэками и большие гранулосодержащмп лк'-й.овдташ / ЕГЛ /, что дало возможность оценивать естественную резистентность организма о помощью простого и доступного теста.

Подсчет БГЛ показал снижение их процентного содержания во всех

у ■ '

исследуемых группах. Однако щщ пересчете на единицу объема крови :абсолютное число ЕГЛ /ЖК-клеток/ оказалось сниженным только при доброкачественный и алокачоственшс опухолях. При иммунизации доноров, вирусных заболеваниях, беременности абсолютное количество , ЕГЛ не уменьаоно по сравнен:® о контрольной группой, что дает право думать о: сохранности в эткх случачх естественной резистентности организма.

Исследование БГЛ при ХМ показало увеличение их числа в единице. объема крови. Однако это не свидетельствует о высокой противоопухолевой активности организма, т.к. по данным А.К.Бутенко /1985/ функциональная активность /УК-клеток при этой патологии значительно онижена, .

Информативность и диагностическая значимость лабораторных тестов Морфологические и цитохимические показатели лимфоцитов периферической крови имеют неодинаковую диагностическую значимость вследствие их различной информативности. С помощью ЭВМ была определена информативность каждого лабораторного теста, используемого для оценки функциональной активности лимфатических клеток.

Мы показали, что высокую информативность во всех исследуемых группах имеют такие морфо-цитохимические показатели, как количество лимфоцитов, содержащих КФ и КТО, активность этих ферментов на 100 лимфатических клеток, содержание ШИК-положительного материала, а также абсолютное число крупных лимфоцитов и их ядер, ядерно-клеточное соотношение, нуклеолярныД коэффициент. Остальные лабораторные показатели имеют нзньшую информативность и могут бить использованы для оценки функционального состояния лимфоцитов только в комплекса с высокоинформативными тестами.

Таким образом, морфологические и цитохимические показатели лимфатических клеток отражают их функциональное состояние и, следовательно, состояние лимфоидной системы в целом. Антигенная стимуляция вызывает активацию лимфоидной системы, которая проявляется изменением морфо-цитохимическнх показателей лимфоцитов. Степень активности, во-многом, зависит от силы антигенного стимула и нервно-гормонального влияния на иммунную систем,

Оценивая функциональную активность лимфоидной системы при различных физиологических и патологических процессах, можно отметить повышение ее при иммунизации доноров, инфекционно-вирусных заболеваниях, в предродовом периоде, В ранние сроки беременности, при доброкачественных и злокачественных опухолях активность лимфоидной системы либо не увеличивается по сравнению о контрольной группой,

. -22-

либо увеличивается незначительно,' что, очевидно, связана с блокирующим действием нервно-гормональных факторов организма. Функциональное состояние лимфоидной системы при ХМ определяется степеньк зрелости и активности клеток опухолевого клона.

выводу

1. Определены морфологические и цитохимические критерии функ-. циональной активности лтфоцитов периферической крови, к которым относятся: увеличение их абсолютного числа в единице объема крови, повышение размеров лимфатических клеток и ядер, а также соотношения крупных и мелких лиьфцитов, увеличение количества ферментсо-держащих клеток и активность ферментов в них, снижение содержания ШИК-положительного материала, повнщение нуклеолярного коэффициента и числа гомогенных ядрышек.

2. На основе информативности ввдалены наиболее диагностически значимые морфо-цитохимичесвсие показатели лимфоцитов, отражающие их функциональную активность. Высокоинформативными являются: число лимфоцитов, содержащих вислую фосфатазу и кислую неспецифическую зстэразу, активность этих ферментов, количество ЦИК-положительных клеток и содержание гликогена в них, средняя площадь лимфоцитов, едерно-клеоочное соотношение, число крупных лимфатических клеток, а также нукя велярный коэффициент.

3. Показана высокая отецень функциональной активности лимфоид-ной системы при иммунизации доноров и снижение ее по мере увеличения сроков от начала иммунизации.

4. Установлена высокая степень функциональной активности лкм-■фоидной системы при инфекцирнно-вирусных заболеваниях, обеспечивающая реализацию иммунного ответа на антигенную стимуляцию.

5. Выявлены изменения морфологических и. цитохимических пока-

зателей лимфоцитов периферической крови при беременности и в раннем послеродовом периоде^ До 38 недель беременности морфо-цитохи- ; мические показатели сведет альствуют об иммунологической толерантности Лимфовдной система к развиващемуся плоду. Повышение функциональной активности'лимфатических Клеток.в прёдродовый период /38-40 недель/ свидетельствует о подготовке организма женщины к родам. В послеродовом периоде функциональное состояние лимфоцитов . нормализуется.

6. Отсутствие достбверяых изменений морфологических и цитохимических показателей лимфоцитов периферической крови при доброкачественных и злокачественных опухолях различных органов указывает на их невысокую функциональную, активность. Этот факт, а также выявленное снижение числа больших грануло содержащих лимфоцитов уточняют особенности патогенеза опухолевого роста.

7. При хроническом лимфолейкозе функциональное состояние лим-фоидной системы определяется активностью лиглфатических клеток опухолевого клона и зависит от соотношения 2-х типов лимфоцитов: 1/ малоактивных т небольшого размера /диаметром менее 8 мкм/ с узким ободком цитоплазмы, даощих отрицательную реакции На кислую фосфата-зу и кислую дескецифичоокую эотсрочу и положительную на гликоген и 2/ высокоактивных - крупных /диаметром более 12 мкм/ широкоцятоплаз-менных фёрментположитальных клеток, дающих отрицательную или сяабо-полояитеяьную'реакцию на'гликоген.

- 24 - ;

СПИСОК РАБОТ. ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ;

1. Баулина Н.И. Морфометрия лимфоцитов при некоторых лигдфопролифе-ративных заболеваниях //Тезисы докл. научно-практич.конференции ЕГИУв, г.Пэнза, 1989, С. 92-93.

2. Баулина H.H. .Морозова В,Т. Некоторые показатели морфо-цатохими-чеоких исследований лимфоцитов при лим£опролиферативных заболеваниях /Дйтериалы симпозиума 'Тематологические и цитологические Исследования в клинической лабораторной диагностике", г»Ивантеевка, 1990, С. 4.

3. Баулина Н.И. Исследование функциональной активности лимфоцитов при беременности и в раннем послеродовом периоде //Тезисы докл. 4-го Всесоюзного съезда специалистов по клинической лабораторной диагностике, г.Москва, 1991, С. 17.

4. Баулина H.H., Морозова В.Т. Некоторые морфо-цитохимические показатели лимфоцитов доноров, иммунизированных.антистафилококко-

, вым анатоксином //Тезисы докл. 4-го-Всесоюзного съезда специалистов по клинической лабораторной диагностике, г.Москва, 1991,

. С. 18. •