Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение чистеца крупноцветкового

Фармакогностическое изучение чистеца крупноцветкового - тема автореферата по фармакологии
АВТОРЕФЕРАТ
Фармакогностическое изучение чистеца крупноцветкового - диссертация, тема по фармакологии
ДИССЕРТАЦИЯ
Тамкович, Татьяна Витальевна Пятигорск 2008 г.
Ученая степень
кандидат фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение чистеца крупноцветкового

На правах рукописи

ТАМКОВИЧ ТАТЬЯНА ВИТАЛЬЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЧИСТЕЦА КРУПНОЦВЕТКОВОГО

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

0031648 10

Пятигорск - 2008

003164810

Работа выполнена в государственном образовательном учрежден высшего профессионального образования «Пятигорская государственн фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранен и социальному развитию»

Научный руководитель

Официальные оппоненты

Ведущая организация

доктор фармацевтических наук, профессор Челомбитько Вячеслав Александрович

доктор фармацевтических ьаук, профессор

Денисенко Олег Николаевич

ГОУ ВПО Пятигорская ГФА Росздрава

кандидат фармацевтических наук, доцент Кичев Дмитрий Геннадьевич ГОУ ВПО «Северо-Кавказский государстве ный технологический университет»

ГОУ ВПО «Курский государственный медицинский университет Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Защита состоится «13» марта 2008 г. в_часов на заседании Диссерта

онного совета Д 208 069 01 в ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава (357532, Пятигорск, пр Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО Пятигорско ГФА Росздрава (357532, г Пятигорск, пр. Калинина, 11)

Автореферат разослан «_»_2008 г

Ученый секрегаоь диссертационного совета /Я/^'

доктор фармацевтических наук, профессор Е В Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность темы Перед современной фармацевтической наукой стоит задача - увеличить поисковую работу по созданию новых эффективных растительных лекарственных препаратов В настоящее время в России, как и в большинстве других стран, большой процент взрослого населения страдает острой и хронической патологиями печени и желчевыводящих путей В связи со значительным распространением этих заболеваний, тяжестью их течения, наличием гепатотоксических свойств широко применяющихся синтетических препаратов, в настоящее время предпочтение отдается лекарственным средствам растительного происхождения

Отмеченная в последние годы тенденция к росту патологий желчевыводящих путей и постепенное истощение природных ресурсов традиционных желчегонных лекарственных растений (бессмертник песчаный, пижма обыкновенная, барбарис обыкновенный и др ) делают актуальным поиск новых сырьевых источников лекарственных средств для лечения заболеваний печени и желчевыводящих путей По литературным данным некоторые растения рода чистец (ч лекарственный - Stachys officinalis L., ч буквицецветный - S betonicaeflora Rupr и ч болотный - S palustris L ), сем яснотковые (Lamiaceae) в традиционной медицине многих стран, используются в качестве желчегонных средств и проявляют фармакологическую активность схожую с известным препаратом «Фламин» В конце 70-х годов на Украине из травы ч вздутого (S mflata Benth.) был предложен препарат «Стахихол», отнесенный к группе истинных холеретиков. Однако, из-за отсутствия достаточной сырьевой базы некоторых видов рода чистец и вследствие геополитических изменений, произошедших в последние годы, поиск новых растительных источников желчегонных средств продолжает оставаться актуальным

В этой связи наше внимание привлек интерес чистец крупноцветковый (Stachys macrantha С Koch), известный также как буквица крупноцветковая (Betónica macrantha С Koch) Наличие значительной надземной фитомассы по сравнению с другими випами чистепа и достаточная распространенность "а территории Северного Кавказа, прогнозируют перспективность его использования в качестве нового сы-

рья для получения лекарственных средств Однако, для внедрения в медицинску практику необходимы исследования по изучению химического состава его биолог чески активных соединений и разработке методов стандартизации сырья Поэто фармакогностическое изучение чистеца крупноцветкового является актуальной пр блемой для фармацевтической науки и практики Цель и задачи исследования Цель настоящего исследования - фармакогностическое изучение травы чис ца крупноцветкового, разработка нормативной документации на сырьё (трава), ка потенциального источника получения БАВ, обладающих желчегонным и против воспалительным действием.

Для досчижения поставленной, цели необходимо было решить следующие з

1. Выявить характерные места произрастания и определить ориентировочны запасы сырья чистеца крупноцветкового в некоторых регионах Северног Кавказа, в Ставропольском крае и в Карачаево-Черкесской Республике

2 Изучить возможность интродукции чистеца крупноцветкового в ботаническо саду Пятигорской ГФА

3 Провести фитохимическое изучение травы чистеца крупноцветкового (поли фенольных соединений, иридоидов, эфирного масла, полисахаридов, органи ческих кислот, аминокислот, макро- и микроэлементного состава).

4 Изучить оптимальные условия извлечения флавоноидов из травы чистеца крупноцветкового и разработать методику их количественного определения

5. Выявить анатомо-диагностические признаки сырья (травы) чистеца крупноцветкового

6 Провести стандартизацию травы чистеца крупноцветкового, разработать нормативную документацию на данный вид сырья

7 Провести фармакологические исследования экстракта чистеца крупноцветкового

Научная новизна исследования Впервые были определены места произрастания и ориентировочные ресурсы травы чистеца крупноцветкового на Северном Кавказе (в Предгорном районе Ставропольского края и в Карачаевском районе Карачаево-Черкесской Республики) В Ставропольском фае (Предгорный район) эксплуатационный запас травы чистеца крупноцветкового составил 4,07 т воздушно-сухого сырья, а в Карэтаевском районе Карачаево-Черкесской Республики - 3,52 т воздушно сухого сьрья

В результате проведенных фитохимических исследований установлено содержание в траве ч крупноцветкового основных групп биологически активных соединений. эфирное масло, флавоноиды, дубильные вещества, оксиюричные кислоты, 1$'марины, иридоиды, полисахариды, аминокислоты, ранее в литературе не описанные для этого вида.

Методом ВЭЖХ в сырье чистеца крупноцветною го впервые идентифицированы и количественно определены шесть фенольных соединений флавоноиды (ги-перозид, дигидрокверцетан и изосалипурпозид), фенолокислоты (галловая кислота), кумарины (дикумарин и умбеллиферон) Методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) в траве чистеца крупноцветкового идентифицированы иридоиды гарпагид, гарпагидацетаг, аюгозид и аюгол

Впфвые изучен фракционный состав полисахаридного комплекса травы чистеца кру пноцветкового Обнаружены водорастворимые полисахариды (0,78-0,83%), пектиновые вещества(036-0,55%), гемицеллюпоза А (3/30-3,21%), гемицеллюлозаБ (2,45-3^6%).

Охарактеризованы свободные органические кислоты, которые представлены винной,лимонной и аскорбиновой кислотами

Методом газовой хромато-масс-спектроснопии (ГЖХ-МС) изучен состав эфирного масла чистеца крупноцветкового. Впервые идентифицировали 56 соединений, преобладающими компонентами эфирного масла чистеца кру пноцветкового являются сесквитерпеноиды, из которых доминирующими являются - <;-кадинен, Ь-

■ MiT.nm.nt /и 1 Г с О ~ •_____п.____Г 1 Т1 п П ЛПГ 1 1 Г»М 11 ---^ ------ГП 1 1

каламсьсь, 1 гч.-^! 1п^-^-икьсишцикии и]дидек<1-

3,7-диен, диэпицедрен-1-оксид, т-кадинол, а -кадинол, оксид кариофиллена, цио-£-а-бисабол ена эпо ксид, 6,] 0,14-три мешл-2-пентад еканон

Найдены оптимальные условия анализа флавоноидов - качественного (методом ТСХ) и количественного (методом дифференциальной УФ-спектрофотометрии) в траве чисгеца крупноцветноюго Изучена динамика содержания флавоноидов различных органах травы в зависимости от фазы вегетации Установлено, что мак симапьное количество флавоноидов накапливается в листьях и в траве в период цв тения — начало плодоношения, в соцветиях - во время цветения

Установлен аминокислотный состав, который представлен 14 аминокисло ми, 8 из которых, являются незаменимыми метаонин, треонин, гистидин, аргини лейцин, валин, фенил аланин, изолейцин.

Впервые изучен макро- и микроэлементный состав травы чисгеца крупно цветкового,представленный 24 элементами, из которых доминирующими являютс калий, кальций, кремний, магний, фосфор и железо

Проведена стандартизация сырья чисгеца крупноцветно во го с учетом совр менных требований предъявляемых к подлинности и качеству лекарственного р тигельного сьрья

Впервые проведены фармакологические исследования и установлена желч тонная, противовоспалительная и ранозаживляющая активность экстракта трав чисгеца крупной веткою го

Практическая значимость

Выявлена возможность использования нового вида отечественного сьрь травы чисгеца крупноцветкового для получения биологически активных со един ний, включающих флавоноиды, ьу марины, дубилшые вещества, иридоиды, фенол кислоты, эфирные масла, полисахариды, органические кислоты, аминокислоты, о ладающие желчегонным, противовоспалительным и рано заживляющим действием Для травы чисгеца крупноцветко во го разработаны методики качественного количественного анализа флавоноидов, иридоидов, дубильных веществ, органич ских кислот, эфирного масла, аминокислот и др соединений с использованием годовБХ, ТСХ , ВЭЖХ, ГЖХ-МС, спектрофотометрии

На основании и микроскопических исследований травы чистеца крупноцвет-kd во го выявлена совокупность анато мо-диагностических признаков, nt> которым можно проводить идентификацию его сырья

В результате проведенных ресурсных исследований определена ориентировочная урожайность травы чистеца крупноцветно но го и выявлены два района, пригодные для промышленной заготовки сьрья этого видана Северном Кавказе Выявлена также возможность выращивания в условиях культуры чистеца крупноцветкоюго наКМВ

Внедрение результатов исследования По результатам исследования биологической активности сухого экстракта травы чистеца крупноцветыового получен акт внедрен и я ГОУ ВПО Пятигорской государственной фармацевтической академии Росздрава (акт о внедрении от 15 июня 2007 г) Сухой экстракт рекомендован для дальнейшего углубленного фармакологического исследования

Подготовлена ФСП «Чистеца крупноцветно во го трава» (подтверждена актом внедрения от 19 июня 2007 г.), принятая ЗАО «Вифитех» (Россия), позволяющая использовать в дальнейшем траву чистсца крупноцветкового как новый вид сьрья для получения лекарственных прел aparro в желчегонного и противовоспалительного действия

Основные положения, выносимые на защиту

1 Результаты изучения химического состава травы чистеца кругшоцветнового физико-химическими методами

2 Результаты качественного и количественного определения флавоноидов в траве чистеца крупноцветкоюго с помощью предложенных методик.

3 Результаты ресурооведческих исследований травы чистеца крупноцветкового натерритории Карачаево-Черкесской Республики и Ставропольского края

4 Результаты изучения фармакологической активности экстракта травы чистеца крупноцветю вого

5 Нормы качества, необходимые для стандартизации травы чистеца крупноцветно во го

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом нф'чн исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской государственной фармацевтам ской академии Росздрава(номер государственной регистрации 01200112164)

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на 60-й межреги нальной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтич ской продукции» (Пятигорск, 2005 г.) По материалам диссертации опубликовано 1 работ в том числе 2 статьи - в журналах, рекомендованных ВАК

Объем и структура диссертации

Работа изложена на 167 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзоралитературы, описания объектов и методовисспедования, 4 глав собственных исследований,общих выводов, списка цишруалой литературы, включающего 250 источник)в, из которых 54 иностранных авторов, и приложения. Диссертация иллюстрирован а 32 рисунками и 43 таблицами.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Объект исследования — трава чистеца крупноцветкового, заготовленная в р личных районах Северного Кавказа (Предгорный район Ставропольского края и ранаевский район Каранаево-Черкесской Республики)

1 Изучение биологически активных соединений, содержащихся в траве чистеца крупноцветкового В результате исследования качественного состава БАВ травы чистеца круп цветкового установлено присутствие в ней фенольньк и тритерпеновых соединен ир идо ид о в, эфирного масла, полисахаридов, органических кислот, макро- и микр эл ементо в, амино кислот.

Методом ВЭЖХ изучен качественный и количественный состав фенолшых единений чистеца крупноцветкового. Впервые идентифицированы галловая кисло ИЗО сап илу рПОЗИД, ди ку мйрИН, ДИГИДрО КБсрЦсТИН, ГИПфОЗИД,у мбеллиффон (рюС 1

Рисунок 1 - Спектр ВЭЖХ фенольных соединений водно-спиртового (спиртэтиловый 70%) извлечения нз травы чистеца крупноцветиэвого Методом внутренней нормализации выявлено, что вфенольном комплексе преобладают у мбеллиферон (12,48%), галловая шепота (11,74%) и гиперозид (822%). Из полученньк данных также следует, что в фенол шом комплексе содержится высокая концентрация не идентифицированного вещества (21,93%). Результаты анализа фенольных соединений представлены в таблице 1.

Таблица 1 - Фенольные соединения водно-спиртового извлечения из травы чистеца крупноцветкового,идентифицированные методомВЭЖХ

№ ' ¡аимснование вещества Содержание веществ в выделенной смеси, %

1 ке идентифицированное вещество 21,93

2 галловая к-та 11,74

3 ичосалипурпсиид 4,52

4 дикумарин 1,70

5 дигидрокверцетин 0,40

6 гиперозид 8,22

7 умбеллиферон 12,48

Количественное определение суммы флавоноидов в траве чисгеца крупноцвет-кового.проводили методомдифференциальной спектрофотометрии. Содержание су ммы флавоноидов в изучаемом объекте в пересчёте на гиперспид составило в среднем 1,10 %.

В различных органах травы чистеца крупноцветшвого изучена динамика наг коштения фиавоноидов(рис2).

- листья SN 1 -бутонизация 2-начало цветения

/ . " - Vpaea 3- цветение 4-начало плодоношения

— """ - - - , соцветия 5-плодоношение

У . '

.. -'

Рксукок2 - Содфжание флавоноидов в различных органах травы ч. фупноцветшвого в зависимости от фаз вегетации При сравнении содержания суммы флавоноидов в траве чистеца крупноц:

швого в разные фазы вегетации, установлено, что наибольшее содержание сумм?

флавоноидов наблюдается в фазу цветения - начало плодоношения в листьях и

траве. Максимал ьное накопление фиавоноидов для соцветий характерно в фазу и ве

тения. В стеблях растения обнаружено наимск ыпсс количество флавоноидов.

Содфжание тритерпеновых соединений определяли также в фазу цветения начато плодоношения. Спектрофотометрическим методом установлено, что тритер пеновые соединения составляют 036-039%. Органические кислоты определял! титр и метрическим методом в пересчете на яблочную кислоту. Общее содержани| составило i ,08-i /4% (таблЗ).

Содержание полисахаридов (4 £7-5,49%) в сьрье определяли - гравиметрически. Методом пфманганато метрического титрования определяли дубильные веще-, ства. Их количество составило 2,40-3,20%.

Эфирное масло из травы чистеца крупноцветна вою получали Пфегонюй с во дяным паром по методу 2 ГФ XI издания. Качественный состав эфирного масла и количественное содержание в нём отдельных компонентов установлен методом га зожидкостной хроматографии на хромато-масс-спектрометре АТ-5973 SMART Компонентный состав идентифицирован сравнением времен удфживания пиков исследуемых веществ с до сто верными образцами.

Количественное содержание компонентовопределено методом нормировки при компьютерной обработке данных. Преобладающими компонентами эфирного масла чистеца крупноцветкового являются сесквитфпеноиды. Масс-спектры и структур-

ные формулы некоторых из них представлены ниже. Всего в составе эфирного масла идентифицировано 56 соединений.

40 ПО 180 ?50 3?0 390 (герЕЬ) ГйрЬ!Ьа!гпе, 1Д3.4,4а.5.8,8а-она hydra-7.fr,в!!1у

д-кадинен

, I 107

40 110 180 250 320 390 (татйЬ) СагуорЬу11епе охйе

оксид кариофиллша

40 80 120 160 200 240 (герНЬ) МарЬ«Па!епе, 1^,3,446^ 1-.у{1го-1,&<11гпе{Ьу1-4Ч1-

Ь-капамен

'та 111

40 100 160 220 280 340 татйЬЦаи.-СасЛпо!

х- кадинол

40 70 100 130 160 190 220 250 ;татКЬ) а-СэЙ1П01

а-кадинол

56 к7 93

187 220

40 70 100 130 160 190 220 25( ;татПЬ) с|&г-а-аяЬо1епе ерохШе

цис-С- а-бисаболенаэпоксид

120 160 200 240

40 70 100 130 160 190 220

{тэ!п№) 12-ОхаЬгсус1о[91 0]йо<2есэ-3.7-(^епе, 1,5,5.8-1.6 (т а ¡п!|Ь) Оер1сейгопе-1-озог(е

1 ^^,8-тепрамегил-[1 Я-(1 Я,ЗЕ,7Е,11 &)]- диэпицедрен-1-оксид

12-оксабицикпо [9.1.0]додека-3,7-диен

В ходе анализа иридоидовдля их количественного определения было важно установить влияние экстрагента на их извлечение из сырья Для этого нами была про ведена сравнительная оценка экстр агентов, результаты которой прея ставлены в таб-лице2

Таблица 2 - Влияние растворителя на извлечение иридоидов из травы чистец крупноцветкового

Показатели Экстрагент

хлороформ сгашг этиловый 96% спирт этиловый 70% раствор натрия хлорида 25%

Содержание иридоидов, 0 13 0,29 1 12 0,73

Таким образом, установлено, что максимальное количество иридоидов из тра вы чистеца крупноцветкового извлекалось спиртом этиловым 70%

Результаты количественного определения БАВ в траве чистеца крупноцветно юге приведены в таблице 3

ТаблицаЗ - Биологически активные вещества травы чистеца *рупноцветкового

БАБ Количественное содержание БАВ в пересчёте на абсолютно сухое сырьё, % I

Ставропольский край Карачаево-Черкесская Республика 1

Дубильные вещества Хср=2,40, Ьхср=0,027,Дх=0,07,£=2,92 Хср=3,20,5хср=0,03,Дх=0,08,е=2,41

Флавоноиды ХчгМД», Ьхср=0,008,Дх=0,02,с=1,88 Хср=1,12,5>Хср=0,011 ,Дх=0,03,е=2,53

Хлорофилл Хср=1,61, 8x^=0,027, Лх-0,07, е=4,29 Хсв=1,99,8хсо=0,038,Дх=0,08, е=4,02

Гритерпеноиды Хср=0,36, 5x^=0,006, Дх=0,02, е=4,17 Хср=0,39, БхсИ),004,Дх=0,01 ,е-2,56

Аскорбиновая кислота ^=0,07, 8x^=0,001,Д\=0,003,е=4,22 Хср=0,05,8Хср=0,001, ДХ=0,002,Е=4,5 1

Эфирное масло Хср=0,10, 8x^=0,001,Дх=0,004,ё=4, 14 Хср=0,12,5хср=0,0008,Дх=0,002,е=1,71

Свободные органические кислоты Хф=1,08, 8x^=0,008, Дх=0,02, £=1,94 Хср=1,24, 8x^=0,011, Дх=0,03, е=2 26

Почисахариды ¡Хср-5,49, 5хср=0,09 Дх=0,23,8=4,19 Хср=4,97, 5\с„=0,08, Дх=0,21, е=4,15

Иридоиды ХсР=1,12, 8хср=0,011, Дх=0,03, е=2,50 Хср=1,08, 8хсР=0,009, Дх=0,02, е=2,14

В результате фитохимического исследования установлено, что основные БАВ данного растения следует считать дубилшые вещества - (2,40-3,20)%, флаво ноиды — (1,09-1,12) %, хлорофилл - (1,61-1 £9)%, свободные органические кислот - (] .9А-226)°/« иридоцды( 1,08-1,12) % и полисахариды - (4 07-5 49) % в пересчет« на абсолютно сухое сырье

Исследован макро- и микроалементный состав травы чистеца крупноцветкового Установлено, что изучаемый вид лекарственного растительного сырья, накапливает 24 макро- и мифоалемента Преобладающими элементами являются калий, натрий, кальций, магний, фосфор,железо, кремний

Определено содержание аминокислот в сырье (7,27 мг/100г) В исследуемом объекте преобладают аспарагиновая и глутаминовая кислоты Обнаружено 8 незаменимых аминокислот (метионин, треонин, гистидин, аргинин, лейцин, валин, фенил атанин, изолейцин)

Минеральные компоненты и аминокислоты, подчеркивают терапевтическую значимость сьрья ч. крупноцветно во го и позволяют его использовать для создания лекарственных средств,обладающих комплексным действием

2 Изучение фармакологической активности сухого экстракта чистеца крупноцветкового Учитывая сведения об использовании травы чистеца круп но цветкового в народной медицине, а также содержание в ней комплекса биологически активных соединений, следующим этапом наших исследований явилось изучение фармакологический активности БАВ данного растения Фармакологические исследования проводились на кафедре фармакологии ГОУ ВПО Пятигорской ГФА Росздрава под руководством проф ВЕ Погорелого

Объектом исследования явился сухой экстракт чистеца крупноцветкового, полученный методом биемзцерации, в качестве экстр агента использовали спирт этиловый 70% Оэдержание суммы флавоноидов в полученном экстракте в пересчете на гиперозид составило не менее5,4% Препаратом сравнения служил «Фламин» Наибольший интерес представляло изучение желчегонной активности экстракта чистсца крупноцветкового

Установлено, что ЬЭ^ экстракт чистеца крупноцветкового для самцов и самок крыс составила более 5000 мг/кг, что позволяет его отнести согласно классификации опасности веществ по степени воздействия на организм к1У классу (малотоксичные) со-

( ■ ■ 1 имнмии

Экспериментальными исследованиями было установлено, влияние экстракта чис-

теца крупноцветкового на желчевыделительную функцию нечени. Так, применение экс тракта ускоряло секрецию желчи через 1 ч после его введения в среднем на 46,1%, чере: 3 ч - на 162,7% по сравнению с показателями у крыс контрольной группы. Общее коли^ чество желчи, выделившейся за 3 часа у животных, которым вводили экстракт чистецг крупноцветкового, составило 1229Р ± 44,3 мг/100г, т.е. экстракт активирует желчевыде лительную функцию печени на 65,6%> (рис.3). Экстракт чисгсца крупноцветкового Такж' оказывает значительное влияние па показатель холестерина, снижая концентрацию дан ного компонента желчи до 21,0±1,7 мг%, в то Бремя как у животных контрольной 1руп1 пы данный показатель составил 34,5±3,6мг%. Таким образом, экспериментально уста новлено, что при введении экстракта чистеца крупноцветкового происходит выраженно; снижение концентрации ХОЛЙСГШИНЙ (на 39,1%) И I и |ЙКП!|ГНИГ ЙП) 1гп'А"/]ИИя ^КСЛЧНЫХ Ки[ слот (на 78,8%), в результате чего происходит повышение холато-холестеринового ко эффициента (на 187,3%).

желчные холестерин холато- Общее кол-во

кислоты холестериновый желчи1а?ч

коэффициент

Рисунок 3 - Влияние экстракта травы чистеца кру пноцветкового на желчевыдели-

тельную функцию печени

Примечание: обозначены достоверные сдвиги (р<0,05) по сравнению: * - с контрольными животными ;# - с животными, которым вводили фламин)

Поскольку хронические воспалительные заболевания печени, желчного пузу ря и желчных путей возникают при нарушении образования и выведения желчи сопровождаются воспалительными процессами и структурно-дегенеративными к

менениями, то следующим этапом нашей работы явилось определение противовоспалительной и рапозаживляющей активности. Установлено,что куроовое применение экстракта ч истец а крупноцветювого эффективно ограничивает экссудат вную (на443 %) и пролиферагивную (на 51,] %) фазы асептичесюго воспаления (относительно юнтроль-ной группы животных) и способствует увеличению прочности сращения раны более, чем в2 раза по сравнению с животными безлечения(рис.4).

Рисунок 4 - Противовоспалительное и ранозаживляющее действие экстракта ч истец а крупноцветкового (* - р<0,05 — обозначены достоверные сдвиги по сравнению с контрольными животными)

Таким образом,установпено, что экстракт чиетеца крупноцветююго обладает хо-леретическим, протаю воспалительным и рзюзаживпяющим действием.

3 Ресурсоведческие исследования травы чиетеца крупноцветкового СЬектр фармаюлогичесюй активности биологически активных соединений чиетеца крупноцветювого обуславливает возмоиность его применения в медицинсюй практике. Однаю, важнейшим условием использованиялюбого лекарственного растительного сырья, является наличиесьюьевой базы.

Определениеурожайносгги проводили на протяжении 2002-2005 гг. в отдельных це-нопопуляциях на территории: Предгорного района Сгавропольсюго края (3703±15,48 г/м2) и Карачаевсюго районаКарачаею-Черкессюй Республики (206,6*12,! 1 г./м2).

Были исследованы запасы травы чиетеца крупноцветкового в обследованных районах. Данные представлены таблице4.

Таблица4 — Площади зарослей и запасы надземной части чистеца крупноцветково в обследованных районах Северного Кавказа

Районы Площадь зарослей, га Запас воздушно-сухого сырья, т Объем возможной ежегодной заготовки,т

биологический эксплуатационный

Предгорный район 1,20 4,44 4,07 1,02

Карачаевский район 1,93 3,99 3,52 0,88

Итого 3,13 8,43 7,59 1,90

Анализ результатов ресурсоведческих исследований, погазывает; что общая пл щздь заросла! травы чистаца крупноцветювого составляет 3,13 га, а объем возможно ежегоднойтаготговки составляет-1 £0 т

Таким образом, на Северном Кавказе имеются достаточные для промышленн заготовки запасы фавы чистеца 1фупноцветювого

При изучении возможности культивирования диюрастущего сырья изучены периода в жизненном цикле чистеца крупноцветювого Данные представлены в те лице 5

Таблица 5 - Среднеарифметические зншения неюторых биоморфологичесю признаю в разновозрастных особей чистеца крупноцветювого

Возрастные группы Длина корн евища, см «а |||| ¡111 12 1» "3 §15 >8 р! - I? | | (О ^ Г"? и Количество придаточных корней на корн шшце и $ О м а« ГУ о Ц ^ Размер листьев розего«вого побега, см

| Длина пластинки Ширина пластики

Ювенильная 0,6 № 0.3 0,3 0,7 4,5 0,3 4,0 0,7 1,3

Имматурная и 1 7 1,0 0,4 1,1 10,7 0,6 11,1 4,9 3,0

I-1-1-1-1-1-

IV V VI VII УШ

' - образование ■ плодов

, - созреваяяе

- бутошгэацнз г

- цветенне - отмирание

Рисунок5 -Феноспектр чистеца крупноцветкового вусгсовиях культуры Таким образом, выявленная возможность выращивания в ¡ультуре травы чистеца ¡фупноцветиэвого позволяет при необходимости расширить возможности сырьевой базы этого вида лекарственного сьрья.

4 Стандартизация травы чистеца крупноцветкового Важным этапом стандартизации сьрья является определение его подлинности. В связи с этим нами были выявлены совоьупности анаагомо-диагносшческих признака в, позволяющие идентифицировать этот вид лекарственного растительного сырья.

1 -клетки эпидермиса с извилистыми стен ками, 2-простые волоски, 3-4-8-кпеточные железки, 4 — устьица с друмя онтпоустьичными клетками (дианитный тип) Рисунокб - Фрагмент строения листа с поверхности с нижней (А) и верхней (Б) стороны

Установлено, что форма стенок клеток верхней эпидермы листа извилистая ил слабо извилистая, устьиц не обнфужено. На эпидермисе встретаются простые одн клеточные и многоклеточные волосками Основания волосюв образованы розетю состоящей из 3-4 клеток. С нижней сторонылиста эпидерма представлена клетками извилистыми или сильно извилистыми стенками Устьичный аппаратдиацитного т па На эпидерме встречаются как простые одноклеточные, так и многоклеточные 1 лоски Эфиромаспичные железки расположены с нижней стороны листа округло формы с трудно различимыми, рааиалшо расположенными 4-8 выделительны, клетками

1оваро всяческие показатели травы ч истец а крупноцветювого определяли ф. маюпейными методами. Для анализа использовали 8 серий сырья, заготовленного Сгавропольсюм крае и Кардааево-Черкессюй Республике Нормы товароведчески показателей при вол сны в таблицеб.

Таблицаб — Нормы качества лекарш вен но го растительного сырья «Чистеца __крупноцветкового трава»_

Показатели качества Методы Нормы

Микросколия Микроскопический Простые одноклеточные и мной клеточные волоски, железки круг лые, 4-8-клеточные, диащггаы устьица

Качественные реакции 1 Реакция с раствором концентрированной хлористоводородной кислоты в присутствии порошка магния 2 Реакция с реактивом Трим-Хилла 3 ТСХ в системе растворителей хлороформ-метанол-вода (61 32 7) 1 Красно-коричневое окрашивание, флавоноиды 2 Красно-желтое окрашивание, иридоиды 3 Наличие пятна желтого цвета 1И=0,34 соответствующие ГСО ги-перозида

Влажность ГФ XI, вып 1, с 285-286 Не более 12%

Зола общая ГФ XI, вып 2, с 24 Не более 7%

Зола не растворимая в хлористоводородной кислоте 10% ГФ XI, вып 2, с 25 Не более 2,0%

Органические примеси ГФ XI вып 1, с 276 Не более 2,0%

Минеральные примеси ГФ XI, вып 1, с 276 Не более 1,0%

Кмгаичестиенное оппе леденив Дифференциальная епектро-фотометрия Сумма флавоноилов в пересчете на гиперозид не менее 0,8 %

При выборе действующей группы БАВ травы чистеца крупноцветювого руководствовались экспериментально получетными данными о фар маю логических свойствах травы чистеца крупноцветювого, в тч выявленным желчегонным эффектом, по активности сопоставимым с эффектом фламина (препарата сухого экстракта бессмертника песчаного), что позволило реюмендовать стандартизацию сырья проводить по сумме флавоноидов

Для юличественного определения суммы флавоноидов использовали метод дифференциальной спекфофотомеприи,основанный на реакции юмплекеообразова-ния флавоноидов с алюминия хлоридом Нами были подобраны оптимальные условия извн иения флавочоидовиз сьрья Дачные представлены в таблице7.

Таблица7 — Влияние условий экстрагирования на выход флавоноидов из травы чистеца крупноцветнового

Критерии экстракции Содержание флавоноидов в сырье, %

Эксграгент

30% спирт этиловый 0,53

50% спирт этиловый 0,75

70% спирт этиловый 1,12

95% спирт этиловый 0,96

Степень измельчения сырья (эксграгент спирт этиловый 70%)

1 мм 1,10

2мм 1,02

Змм 0,78

Время экстракции (эксграгент спирт этиловый 70%, степень измельчения сырья 1 мм)

15 мин 0,45

30 мин 0,93

45 мин 1,12

60 мин 1,12

Экспериментально полученные данные свидетельствуют, что максимальный выход флавоноидовобеспечивается при экстракции спиртом этиловым 70% Оптимальное время экстракции составляет 45 минут, с последующим наступлением равновесия, а степень измепгкения сьрья дол жна быть 1 чч.

зза.с 35С. 45й, 4ш"3.1

Дли на еолн*>1. А нм

Рисунок? - Дифференциальные спектры поглощения продуктов взаимодействия ГСО гипфизидаи флаюноидов травы чистеца крупноцветкоюго с атюминияхло

Ли(ЬшСЮснимальные спектоы комплексов с алюминия хпопитюм (Ьгтаноноидс

..... . — тг 1

чистеца крупноцветювого по положению максимумов свею по то щени я близки дифференциальному спектру ю.мттлекса гипфозида (X тах 402 нм) (рис.7), поэтов предложено расчет содержания су ммы флаюноидов проводить в пересчете на тип розид, преобладающий юмпонент в сумме флаюноидов (табл. 8).

Таблипа8- Количественное содержание флаюноидов в пересчете на гиперозт'

Район заготовки сырья Г X $ 5 * Р,% 1(Р,0 Д-т Е,%

Ставропольский край 5 1,09 0,00007 0,008 95 2,57 0,021 1,88

Карачаево - Черкесская Республика 5 1,12 0,0001 0,011 95 2,57 0,028 2,53

Былау становлена норма содфжания суммы флаюноидов в траве чистеца кру ноцветюволо в пересчете на гипфозид- не мен ее 0,8 %.

Таким образом, было устаношено, что данная методика позволяет достовф!' определить содфжаниеосновной гоуппы БАВ- флаюноидов.

Особенностью методики является воспроизводимость (относительная ошиб определения со ставил а не более 3,0%), эюномичностъ (не требует применения дог го стоящего сорбента) и относительная быстрота про ведения.

Полученные экспериментальные данные легли в основу проекта ФСП на лекарственное растительное сырье «Чистеца крупноцветкового трава»

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1 На основании проведенных комплексных исследований выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья - травы чистеца крупноцветкового для получения БАВ, обладающих желчегонным, противовоспалительным и ранозаживляющим действием

2. Ресурсные исследования, проведенные в Ставропольском крае (Предгорный район) и в Карачаево-Черкесской Республике (Карачаевский район) позволили выявить места произрастания и ориентировочные запасы чистеца крупноцветкового Объем возможных ежегодных заготовок составляет 1,9 т Общая площадь зарослей 3,13 га

3 Изучен химический состав травы чистеца крупноцветкоЕоге Установлено содержание флавоноидов (1,09 — 1,12%), конденсированных дубильных веществ (2,40 - 3,20%), тритерпеновых соединений (0,36 - 0,39%), кислоты аскорбиновой (0,05 - 0,07%), свободных органических кислот (1,08 - 1,24%), полисахаридов (4,97 - 5,49%); иридоидов (1,08-1,12%), хлорофилла (1,61-1,99%); эфирного масла (0,10-0,12%), 14 аминокислот (8 незаменимых), 24 макро- и микроэлемента

4 Методом газовой хромато-масс-спектрометрии впервые в эфирном масле чистеца крупноцветкового идентифицировано 56 компонентов основными из которых являются сесквитерпеноиды, из которых доминирующими являются - <;-кадинен, Ь-каламенен, 1,5,5,8-тетраметил-[1 Я-( Ш,ЗЕ,7Е, 11 Я)]-12-оксабицикло [9 1.0]додека-3,7-диен, диэпицедрен-1-оксид, т-кадинол, а — кадинол, оксид кариофиллена, цис-4- а-бисаболена эпоксид, 6,10,14-триметил-2-пентадеканон

5 Методом ВЭЖХ впервые выделены и идентифицированы в траве чисзеца крупноцветкового 6 фенольных соединений: флавоноиды (гиперозид, дигид-рокверцетин, изосалипурпозид), фенолокислоты (галловая кислота), кумарины (дикумарин, умбеллиферон)

6 Впервые изучен фракционный состав полисахаридного комплекса. Выявлен ВРПС (0,78-0,83%), ПВ (0,36-0,55%), ГЦА (3 00-3 21%), ГЦБ (2 45-3,26%)

7 Изучена динамика накопления флавоноидов в траве чистеца крупноцветков го в зависимости от фаз вегетации и органа растения В результате определ оптимальный период заготовки сырья, в котором наблюдается оптимальн содержание флавоноидов (не менее 0,8 %) фазу цветения - начало плодонош ния.

8 Проведена стандартизация сырья (травы) чистеца крупноцветкового Опред лены основные показатели подлинности и качества сырья: морфолог анатомические диагностические признаки листа и стебля, норма содержал флавоноидов в пересчете на гиперозид (не менее 0,8%) и товароведческие п> казатели

9 Проведены фармакологические исследования сухого экстракта чистеца кру ноцветкового Установлено, что L"D50 сухого экстракта составляет более 50 мг/кг, что позволяет его отнести к IV классу соединений

10 Установлена желчегонная активность. Сухой экстракт в дозе 200 мг/кг акл вирует желчевыделительную функцию печени на 65,6%. Выявлена против воспалительная и ранозажинляющая активность сухого экстракта чисте крупноцветкового

СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ

1 Основные диагностические признаки травы чистеца крупноцветкового Молодежь XXI века - будущее Российской науки тез докл 2-ой межрегион на)" практ. конф студентов, аспирантов и молодых ученых - Ростов-на-Дону, 2004 -140-141

2 Аминокислотный состав надземной части Stachys macrantha (чистеца кру ноцветкового) / Современные проблемы фармакологии и фармации тез докл В( рос науч-практ конф 18-19 мая 2005 г - Новосибирск, 2005. - С 342-344 (Coa В А Челомбитько)

3 Минеральный состав надземной части чистеца крупноцветкового (Stachys macrantha) / Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции сб науч тр /-Пятигорск Пятигорская ГФА, 2005 -Вып 60 -С 57-59

4 Оценка желчегонной активности экстракта чистеца крупноцветкового (Stachys macrantha) / Санкг-Пегербург-Гастро-2005 материалы 7-го Между-нар Славяно-Балтийского науч. форума - СПб • ООО "Гастро", 2005 - № 1-2 - С. М141-М142 (Соавт. JIM Макарова, В.А Челомбитько)

5 Противовоспалительная и регенерирующая активность сухого экстракта Stachys macrantha С Koch (чистеца крупноцветкового) / Человек и лекарство тез. докл 13 Рос науч конгр 3-7 апр 2006 г -М, 2006 - С.594. (Соавт JI М Макарова, В Б Погорелый, В А Челомбитько)

6. Изучение аминокислотного и микроэлементного состава надземной части Stachys macrantha (С Koch) Steam (чистеца крупноцветкового) / Химия, технология, медицина: материалы Междунар. конф., носвящ. 75-летию образования ВИЛАР -М, 2006 - Т XVII. - С. 284-288 (Соавт В А. Челомбитько)

7 Количественное определение флавоноидов в траве чистеца крупноцветкового (Stachys macrantha С Koch) / Достижения, проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики материалы регион, науч -практ конф с Междунар участием, посвящ 40-летию фармац факультета КГМУ - Курск: КГМУ, 2006 - С 318321 (Соавт В.А Челомбитько)

8 Основные биологически активные вещества травы чистеца крупноцветкового (Stachys macrantha) / Университетская наука Взгляд в будущее- сб науч тр КГМУ -Курск.КГМУ,2006.-Т.2 - Выл 71 -С 196-197

9 Компонентный состав эфирного масла Stachys macrantha (С. Koch) Srearn / Кубанский научный медицинский вестник. - 2006 -№10(91) - С 98-100

10 Желчегонная активность сухого экстракта из надземной части Stachys macrantha (Lamiaceae) / Растительные ресурсы - 2007 - Т 43 - Вып 1 - С 135-140 (Соавт J1 М Макарова, В Е Погорелый, В А Челомбитько)

ТАМКОВИЧ ТАТЬЯНА ВИТАЛЬЕВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ ЧИСТЕЦА КРУПНОЦВЕТКОВОГО

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати « т » 008 г Формат бумаги 60x84 1/6

Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ л 1,0 Тираж 100 экз Заказ №/670

ГОУ ВПО «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» 357532, г Пятигорск, пр Калинина, 11

 
 

Оглавление диссертации Тамкович, Татьяна Витальевна :: 2008 :: Пятигорск

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР.

1.1 Исторический очерк.

1.2 Ботаническая характеристика чистеца крупноцветкового.

121 Современное состояние исследований в области систематики рода чистец.

1.2.2 Морфология чистеца крупноцветкового.

1.2.3 Ареал. Места обитания. ^ Литературные данные по изучению и накоплению основных биологически активных веществ рода чистец.

1.3.1 Алкалоиды.

1.3.2 Эфирное масло и его компонентный состав.

1.3.3 Иридоиды.

1.3.4 Флавоноиды и фенолкарбоновые кислоты.

1.3.5 Другие биологически активные вещества. ^ Применение представителей рода чистец в медицине и народном хозяйстве.

ВЫВОДЫ ПО ЛИТЕРАТУРНОМУ ОБЗОРУ.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ГЛАВА II Объекты и методы исследования.

2.1 Объект исследования.

2.2 Методы исследования.

2.2.1 Химические реакции.

2.2.2 Хроматографические методы.

2.2.2.1 Методы бумажной и тонкослойной хроматографии.

2.2.2.2 Метод ВЭЖХ.

2.2.2.3 Метод хромато-масс-спектрометрии.

2.2.3 Спектральные методы.

2.2.3.1 Метод УФ-спекгрофотометрии.

2.2.3.2 Атомно-абсорбционная спектрография.

2.2.4 Методы количественного определения.

2.2.4.1 Титриметрические методы.

2.2.4.2 Гравиметрические методы.

2.2.5 Методы стандартизации сырья.

2.2.5.1 Методы морфолого-анатомического исследования.

2.2.5.2 Методы определения числовых показателей качества сырья.

2.2.5.3 Определение микробиологической чистоты сырья.

2.2.5.4 Определение содержания радионуклеидов.

2.2.5.5 Определение сроков хранения сырья.

2.2.6 Фармакологические методы исследования.

2.2.7 Статистическая обработка данных.

ГЛАВА III Качественное и количественное определение основных групп биологически активных веществ (БАВ) в траве чистеца крупноцветкового.

3.1 Качественные реакции. 2 Хроматографическое изучение БАВ травы чистеца крупноцветкового

3.2.1 Хроматографический анализ тритерпеновых соединений.

3.2.2 Хроматографический анализ иридоидов. - ~ Хоматографический анализ флавоноидов и оксикоричных кислот.

3.2.4 Хроматографический анализ органических кислот.

3.2.5 Хроматографический анализ моносахаридов.

3.2.6 Хроматографический анализ аминокислот.

3.2.7 Хроматографический анализ кумаринов.

3.2.8 Хроматографический анализ витамина К. ^ Количественное определение БАВ травы чистеца крупноцветкового.

3.3.1 Количественное определение дубильных веществ.

3.3.2 Количественное определение флавоноидов.

3.3.3 Количественное определение хлорофилла.

3.3.4 Количественное определение тритерпеноидов.

Количественное определение аскорбиновой кислоты и свободных органических кислот.

3.3.6 Количественное определение полисахаридов.

3.3.7 Количественное определение иридоидов.

3.3.8 Количественное определение полифенолов.

3.3.9 Количественное определение галловой кислоты.

3.3.10 Количественное определение белка. ^ 11 Изучение состава эфирного масла травы чистеца крупноцветкового.

3.3.12 Изучение аминокислот травы чистеца крупноцветкового.

3.3.13 Изучение макро- и микроэлементного состава.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.

ГЛАВА IV Фармакологические исследования биологически активного комплекса чистеца крупноцветкового.

4.1 Изучение острой токсичности. 2 Изучение желчегонной активности экстракта чистеца крупноцветкового ^ Оценка противовоспалительной и ранозаживляющей активности

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.

ГЛАВА V. 4 Определение запасов и интродукция травы чистеца крупноцветкового.

5.1 Ресурсоведческие исследования травы чистеца крупноцвет

5.1.1 Предварительные ресурсоведческие исследования.

5.1.2 Определение урожайности травы чистеца крупноцветково

5.1.3 Расчёт объёма возможных ежегодных заготовок.

5.2 Интродукционные исследования.

5.2.1 Место проведения работы и методики исследования.

5.2.2 Морфологическая характеристика семян травы чистеца крупноцветкового.

5.2.3 Изучение лабораторной всхожести семян чистеца крупноцветкового.

5.2.4 Определение всхожести семян при разных сроках хранения

5.2.5 Определение полевой всхожести.

5.3 Фенологические наблюдения.

5.4 Содержание флавоноидов в интродукционных образцах травы чистеца крупноцветкового.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.

ГЛАВА VI Стандартизация травы чистеца крупноцветкового

6.1 Морфолого-анатомическое исследование травы чистеца крупноцветкового.

6.1.1 Макроскопические признаки травы чистеца крупноцветкового.

6.1.2 Микроскопические признаки травы чистеца крупноцветкового.

6.2 Определение товароведческих показателей.

6.2.1 Определение влажности.

6.2.2 Определение содержания общей золы и золы, нерастворимой в растворе кислоты хлористоводородной 10 %.

6.2.3 Определение содержания примесей и измельченности.

6.3 Методы качественного анализа основных групп биологически активных веществ в траве чистеца крупноцветкового.

6.4 Метод количественного определения суммы флавоноидов в траве чистеца крупноцветкового.

6.5 Установление сроков годности травы чистеца крупноцветкового.

6.6 Определение микробиологической чистоты травы чистеца крупноцветкового.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.

 
 

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Тамкович, Татьяна Витальевна, автореферат

Актуальность темы Перед современной фармацевтической наукой стоит задача - увеличить поисковую работу по созданию новых эффективных растительных лекарственных препаратов. В настоящее время в России, как и в большинстве других стран, большой процент взрослого населения страдает острой и хронической патологиями печени и желчевыводящих путей. В' связи со значительным распространением этих заболеваний, тяжестью их течения, наличием гепато-токсических свойств широко применяющихся синтетических препаратов, в настоящее время предпочтение отдается лекарственным средствам растительного происхождения.

Отмеченная в последние годы тенденция к росту патологий желчевыводящих путей и постепенное истощение природных ресурсов традиционных желчегонных лекарственных растений (бессмертник песчаный, пижма обыкновенная, барбарис обыкновенный и др.) делают актуальным поиск новых сырьевых источников лекарственных средств для лечения заболеваний печени и желчевыводящих путей. По литературным данным некоторые растения рода чистец (ч. лекарственный - Stachys officinalis L., ч. буквицецветный - S. betonicaeflora Rupr. и ч. болотный - S. palustris L.), сем. яснотковые (Lami-асеае) в традиционной медицине многих стран, используются в качестве желчегонных средств и проявляют фармакологическую активность схожую с известным препаратом «Фламин». В конце 70-х годов на Украине из травы ч. вздутого (S. inflata Benth.) был предложен препарат «Стахихол», отнесенный к группе истинных холеретиков. Однако, из-за отсутствия достаточной сырьевой базы некоторых видов рода чистец и вследствие геополитических изменений, произошедших в последние годы, поиск новых растительных источников желчегонных средств продолжает оставаться актуальным.

В этой связи наше внимание привлек -чистец крупноцветковый (Stachys macrantha С. Koch), известный также как буквица крупноцветковая (Betonica macrantha С. Koch). Наличие значительной надземной фитомассы по сравнению с другими видами чистеца и достаточная распространенность на территории Северного Кавказа, прогнозируют перспективность его использования в качестве нового сырья для получения лекарственных средств. Однако, для внедрения в медицинскую практику необходимы исследования по изучению химического состава его биологически активных соединений и разработке методов стандартизации сырья. Поэтому фармакогностическое изучение чис-теца крупноцветкового является актуальной проблемой для фармацевтической науки и практики.

Цель и задачи исследования Цель настоящего исследования - фармакогностическое изучение травы чистеца крупноцветкового, разработка нормативной документации на сырьё (трава), как потенциального источника получения БАВ, обладающих желчегонным и противовоспалительным действием.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Выявить характерные места произрастания и определить ориентировочные запасы сырья чистеца крупноцветкового в некоторых регионах Северного Кавказа: в Ставропольском крае и в Карачаево-Черкесской Республике.

2. Изучить возможность интродукции чистеца крупноцветкового в ботаническом саду Пятигорской ГФА.

3. Провести фитохимическое изучение травы чистеца крупноцветкового (полифенольных соединений, иридоидов, эфирного масла, полисахаридов, органических кислот, аминокислот, макро- и микроэлементного состава).

4. Изучить оптимальные условия извлечения флавоноидов из травы чистеца крупноцветкового и разработать методику их количественного определения.

5. Изучить морфолого-анатомическое строение надземной части растения и выявить диагностические признаки травы чистеца крупноцветкового.

6. Провести стандартизацию травы чистеца крупноцветкового, разработать нормативную документацию на данный вид сырья.

7. Провести фармакологические исследования экстракта чистеца крупноцветкового.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертационная работа выполнена по плану научно-исследовательских работ Пятигорской государственной фармацевтической академии (номер государственной регистрации 01200112164) и соответствует проблеме «Фармация» Ученого совета МЗ РФ, секция № 38.

Научная новизна и теоретическая значимость работы Впервые были определены места произрастания и ориентировочные ресурсы травы чистеца крупноцветкового на Северном Кавказе (в Предгорном районе Ставропольского края и в Карачаевском районе Карачаево-Черкесской Республики). В Ставропольском крае (Предгорный район) эксплуатационный запас травы чистеца крупноцветкового составил 4,07 т воздушно-сухого сырья, а в Карачаевском районе Карачаево-Черкесской Республики - 3,52 т воздушно сухого сырья.

В результате проведенных фитохимических исследований установлено содержание в траве ч. крупноцветкового основных групп биологически активных соединений: эфирное масло, флавоноиды, дубильные вещества, окси-коричные кислоты, кумарины, иридоиды, полисахариды, аминокислоты, ранее в литературе не описанные для этого вида.

Методом ВЭЖХ в сырье чистеца крупноцветкового впервые идентифицированы и количественно определены шесть фенольных соединений: флавоноиды (гиперозид, дигидрокверцетин и изосалипурпозид), фенолокислоты (галловая кислота), кумарины (дикумарин и умбеллиферон). Методом тонкослойной хроматографии (ТСХ) в траве чистеца крупноцветкового идентифицированы иридоиды: гарпагид, гарпагидацетат, аюгозид и аюгол.

Впервые изучен фракционный состав полисахаридного комплекса травы чистеца крупноцветкового. Обнаружены: водорастворимые полисахариды (0,78-0,83%), пектиновые вещества (0,36-0,55%), гемицеллюлоза А (3,003,21%), гемицеллюлоза Б (2,45-3,26%).

Охарактеризованы свободные органические кислоты, которые представлены: винной, лимонной и аскорбиновой кислотами.

Методом газовой хромато-масс-спектроскопии (ГЖХ-МС) изучен состав эфирного масла чистеца крупноцветкового. Впервые идентифицировали 56 соединений, преобладающими компонентами эфирного масла чистеца крупноцветкового являются сесквитерпеноиды, из которых доминирующими являются - д-кадинен, Ь-каламенен, 1,5,5,8-тетраметил-[Ш-(Ш,ЗЕ,7Е,11К)]-12-оксабицикло [9.1.0]додека-3,7-диен, диэпицедрен-1-оксид, т-кадинол, а -кадинол, оксид кариофиллена, цис-£- а-бисаболена эпоксид, 6,10,14-триме-тил-2-пентадеканон.

Найдены оптимальные условия анализа флавоноидов - качественного (методом ТСХ) и количественного (методом дифференциальной УФ-спектро-фотометрии) в траве чистеца крупноцветкового. Изучена динамика накопления флавоноидов по органам растения в основные фазы его развития и в зависимости от фазы вегетации. Установлено, что максимальное количество флавоноидов накапливается в фазу цветения - начало плодоношения в листьях и траве; в соцветиях - в фазу цветения.

Установлен аминокислотный состав, который представлен 14 аминокислотами, 8 из которых являются незаменимыми: метионин, треонин, гисти-дин, аргинин, лейцин, валин, фенилаланин, изолейцин.

Впервые изучен макро- и микроэлементный состав травы чистеца крупноцветкового, представленный 24 элементами, из которых доминирующими являются: калий, кальций, кремний, магний, фосфор и железо.

Проведена стандартизация сырья чистеца крупноцветкового с учетом современных требований предъявляемых к подлинности и качеству лекарственного растительного сырья.

Впервые проведены фармакологические исследования и установлена желчегонная, противовоспалительная и ранозаживляющая активность экстракта травы чистеца крупноцветкового.

Практическая значимость

Выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья- травы чистеца крупноцветкового для получения биологически активных соединений, включающих флавоноиды, кумарины, дубильные вещества, ири-доиды, фенолокислоты, эфирные масла, полисахариды, органические кислоты, аминокислоты, обладающие желчегонным, противовоспалительным и ра-нозаживляющим действием.

Для травы чистеца крупноцветкового разработаны методики качественного и количественного анализа флавоноидов, иридоидов, дубильных веществ, органических кислот, эфирного масла, аминокислот и др. соединений с использованием методов БХ, ТСХ , ВЭЖХ, ГЖХ-МС, спектрофотометрии.

На основании макро- и микроскопических исследований установлена совокупность анатомо-диагностических признаков, по которым можно проводить идентификацию сырья. •

В результате проведенных ресурсных исследований определена ориентировочная урожайность травы чистеца крупноцветкового и выявлены два района, пригодные для промышленной заготовки сырья этого вида на Северном Кавказе. Выявлена также возможность выращивания в условиях культуры чистеца крупноцветкового на КМВ.

Внедрение результатов исследования

По результатам исследования биологической активности сухого экстракта травы чистеца крупноцветкового получен акт внедрения ГОУ ВПО Пятигорской государственной фармацевтической академии Росздрава (акт о внедрении от 15 июня 2007 г.). Сухой экстракт рекомендован для дальнейшего углубленного фармакологического исследования.

Подготовлена ФСП «Чистеца крупноцветкового трава» (подтверждена актом внедрения от 19 июня 2007 г.), принятая ЗАО «Вифитех» (Россия), позволяющая использовать в дальнейшем траву чистеца крупноцветкового как новый вид сырья для получения лекарственных препаратов желчегонного и противовоспалительного действия.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты изучения химического состава травы чистеца крупноцветкового физико-химическими методами.

2. Результаты качественного и количественного определения флавоноидов в траве чистеца крупноцветкового с помощью предложенных методик.

3. Результаты ресурсоведческих исследований травы чистеца крупноцветкового на территории Карачаево-Черкесской Республики и Ставропольского края.

4. Результаты изучения фармакологической активности экстракта травы чистеца крупноцветкового.

5. Нормы качества, необходимые для стандартизации травы чистеца крупноцветкового.

Апробация работы и публикации

Основные положения диссертационной работы доложены на 60-й межрегиональной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (Пятигорск, 2005 г.). По материалам диссертации опубликовано 10 работ.

Объём и структура диссертации

Работа изложена на 167 страницах машинописного текста, содержит 43 таблицы, 32 рисунка и 13 расчётных формул. Состоит из введения, обзора литературы, описания объектов и методов исследования, 4 глав собственных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 250 источников, в том числе 54 иностранных, и приложения.

Фармакологические исследования травы ч. крупноцветкового проводили под руководством профессора кафедры фармакологии, докторабиол. наук Погорелого В.Е. и ассистента кафедры фармакологии, к.ф.н. Макаровой Л.М., за что выражаем им глубокую благодарность и признательность.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение чистеца крупноцветкового"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. На основании проведенных комплексных исследований выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья - травы чи-стеца крупноцветкового для получения БАВ, обладающих желчегонным, противовоспалительным и ранозаживляющим действием.

2. Ресурсные исследования, проведенные в Ставропольском крае (Предгорный район) и в Карачаево-Черкесской Республике (Карачаевский район) позволили выявить места произрастания и ориентировочные запасы чистеца крупноцветкового. Объем возможных ежегодных заготовок составляет 1,9 т. Общая площадь зарослей 3,13 га.

3. Изучен химический состав травы чистеца крупноцветкового. Установлено содержание флавоноидов (1,09 - 1,12%), конденсированных дубильных веществ (2,40 - 3,20%); тритерпеновых соединений (0,36 -0,39%); кислоты аскорбиновой (0,05 - 0,07%); свободных органических кислот (1,08 - 1,24%), полисахаридов (4,97 - 5,49%); иридоидов (1,08-1,12%); хлорофилла (1,61-1,99%); эфирного масла (0,10-0,12%), 14 аминокислот (8 незаменимых), 24 макро- и микроэлемента.

4. Методом газовой хромато-масс-спектрометрии впервые в эфирном масле чистеца крупноцветкового идентифицировано 56 компонентов основными из которых являются сесквитерпеноиды, из которых доминирующими являются - д-кадинен, Ь-каламенен, 1,5,5,8-тетраметил-[1К-(1К,ЗЕ,7Е,1Ш)]-12-оксабицикло [9.1.0]додека-3,7-диен, диэпицед-рен-1-оксид, т-кадинол, а -кадинол, оксид кариофиллена, цис-£- а-биса-болена эпоксид, 6,10,14-триметил-2-пентадеканон.

5. Методом ВЭЖХ впервые выделены и идентифицированы в траве чистеца крупноцветкового 6 фенольных соединений: флавоноиды (гиперо-зид, дигидрокверцетин, изосалипурпозид), фенолокислоты (галловая кислота), кумарины (дикумарин, умбеллиферон).

6. Впервые изучен фракционный состав полисахаридного комплекса. Выявлены: ВРПС (0,78-0,83%), ПВ (0,36-0,55%), ГЦА (3.00-3.21%), ГЦБ (2.45-3,26%).

7. Изучена динамика накопления флавоноидов в траве чистеца крупноцветкового в зависимости от фаз вегетации и органа растения. В результате определен оптимальный период заготовки сырья, в котором наблюдается оптимальное содержание флавоноидов (не менее 0,8 %) фазу цветения - начало плодоношения.

8. Проведена стандартизация сырья (травы) чистеца крупноцветкового. Определены основные показатели подлинности и качества сырья: мор-фолого-анатомические диагностические признаки листа и стебля, норма содержания флавоноидов в пересчете на гиперозид (не менее 0,8%) и товароведческие показатели.

9. Проведены фармакологические исследования сухого экстракта чистеца крупноцветкового. Установлено, что ЬБ50 сухого экстракта составляет более 5000 мг/кг, что позволяет его отнести к IV классу соединений.

10. Установлена желчегонная активность. Сухой экстракт в дозе 200 мг/кг активирует желчевыделительную функцию печени на 65,6%. Выявлена противовоспалительная и ранозаживляющая активность сухого экстракта чистеца крупноцветкового.

 
 

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2008 года, Тамкович, Татьяна Витальевна

1. Адиходжаева, К.Б. Хроматоспектрофотометрический метод определения суммы фенолкарбоновых кислот в препарате танацин и соцветиях пижмы обыкновенной / К.Б. Адиходжаева // Хим.-фармац. журн. 1979.-Т.13,№5.-С. 113-116.

2. Алексеев, Б.Д. Медоносные растения внешнегорного Дагестана на примере Сергокалинского района / Б.Д. Алексеев, Т.А. Алиев // Раст. ресурсы. 1967. - Т.З, вып.2. - С.205-211.

3. Аронова, Б.Н. Фармакогностическое изучение чистеца буквицецветного и биологическая оценка его препаратов: дис. канд.фармац.наук: 15.00.02 / Б.Н. Аронова Фрунзе, 1968. - 168 с.

4. Аронова, Б.Н. Чистец буквицецветного (Буквица олиственная) сырье для приготовления галеновых препаратов / Б.Н. Аронова // Раст. ресурсы. - 1969. - Т. 5, вып. 3. - С. 422-433.

5. Ахмедов, Р.Б. Растения-друзья и недруги / Р.Б. Ахмедов Уфа: Лето, 2002.- 160 с.

6. Бюх1м1чна характеристика антибактершых речовин деяких рослин з родини губоцвггих / О.Я. Рашба и др. // М1кробюл. журн. 1954. -Т. 16, №2. - С.62-66.

7. Ю.Бакланова, Т.А. Исследование влияния экологических факторов на элементный состав и накопление фармакологически активных веществ растений рода валериана и пустырник: автореф. дис. .канд.фармац. наук: 15.00.02 / Т.А. Бакланова.-М., 1997 .- 20 с.

8. П.Барабой, В.А. Биологическое действие растительных фенольных соединений / В.А. Барабой. Киев: Наук, думка, 1976. - 162 с.

9. Барковский, В.Ф. Дифференциальный спектрофотометрический анализ / В.Ф. Барковский, В.И. Ганопольский. -М.: Химия, 1969. 168 с.

10. Беликов, В.В. Методы анализа флавоноидных соединений / В.В. Беликов, М.С. Шрайбер // Фармация. 1970. - №1. - С.68-72

11. Берко, Й.Н. Большой жизненный цикл буквицы лекарственной (Betónica officinalis L.) / Й.Н. Берко // Биологич. науки. 1980. - №1. -С.83-90.

12. Бернштейн, И.Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии: Изд. 2-е перераб. и доп. / И.Я. Бернштейн, А.Л.Каминский Л.: Химия, 1986. - 200 с.

13. Биологический энциклопедический словарь / под ред. М.С. Гилярова. -М.: Сов. энциклопедия, 1986. 831 с.

14. Блажей, А. Фенольные соединения растительного происхождения / А. Блажей, Л. Шутый. М.: Мир, 1977. - 239 с.

15. Богаевский, А.К. Оксикоричные кислоты Galium fagetorum и G. pseudomollugo / А.К. Богаевский, Л.И. Драник, М.И. Борисов // Химия природ.соединений. 1970. - №6. - С.755.

16. Введенский, А.И. Новый род семейства губоцветных / А.И. Введенский // Бот. матер. Гербария бот. ин-та им. В.Л. Комарова АН СССР. 1941. -Т.9, №2. - С.54-55.

17. Вершинин, Н.В. Фармакология и клиника сибирских растений с седативным и гипотензивным действием / Н.В. Вершинин, Д.Д. Яблоков // Новые лекарственные растения Сибири и их лечебные препараты. Томск, изд-во Зап.-Сиб. фил. АН СССР, 1946. -Вып.2. -С.10-16.

18. Восьмиязычный сельскохозяйственный словарь. М.: Колос, 1970. -1045 с.

19. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / под ред. Е.Е. Сироткиной. Томск: Изд-во Томского ун-та, 1987. - 184 с.

20. Галушко, А.И. Флора Северного Кавказа / А.И. Галушко Ростов-н / Д: Изд-во Рост.ун-та, 1980. - Т.З. - 328с.

21. Гацура, В.В. Методы первичного фармакологического исследования биологически активных веществ / В.В. Гацура. М.: Медицина, 1974. -141 с.

22. Гейссман, Т.А. Антоцианы, халконы, ауроны и родственные им пигменты / Т.А. Гейссман. М.: Иностр. лит.,1960. - 463 с.

23. Городиньска, В.Я. Сравнительные данные изучения гликозидных препаратов буквицы аптечной и крупноцветковой / В.Я. Городиньска, Т.В. Зинченко // Фармац. журн. 1963. -№6. - С.51-53.

24. Горяев, М.И. Эфирные масла флоры СССР / М.И. Горяев Алма-Ата: Изд-во АН КазССР, 1952. - 380с.

25. ГОСТ 18321-73 Качество продукции. Статистические методы управления. Правила отбора единиц продукции в выборку. М.: Изд-во стандартов, 1973. - 14 с.

26. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - Вып. 1.-334 с.

27. Государственная фармакопея СССР. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1989.-Вып.2.-397 с.

28. Государственный реестр лекарственных средств. Перечень уникальных номеров (индексов) лекарственных средств. Справ, материалы. М.,2000. 1202с.

29. Грау, Ю. Дикорастущие лекарственные растения: пер. с англ./Грау Ю., Юнг Р., Мюнкер Б. М.: Изд-во ACT, 2002. - 288 с.

30. Гребнёва, Н.Ю. Оценка качества корневищ с корнями Polemonium caeruleum L. по содержанию суммы сапонинов / Н.Ю. Гребнёва, Н.П. Харитонова, М.П. Блинова // Раст. ресурсы. 1995. - Т.31, вып. 3. -0.111-115.

31. Гроссгейм, A.A. Растительные ресурсы Кавказа / A.A. Гроссгейм -Баку: Изд-во АН АзССР, 1946. 671с.

32. Губанов, А.И. Лекарственные и технические растения Афганистана / И. А. Губанов, Н.И. Либизов // Раст. ресурсы. 1970. - Т.6, вып.1. - С. 128-137.

33. Дервиз-Соколова, Т.Г. Внутривидовая дифференциация в роде Stachys L. / Т.Г. Дервиз-Соколова // (5; 1976; Москва): материалы Моск.совещ. по филогении растений:- М., 1976. С. 42-43.

34. Дервиз-Соколова, Т.Г. Заметки о некоторых кавказских видах рода Stachys L. / Т.Г. Дервиз-Соколова // Новости систематики высших растений. Л., 1977. - Т. 14. - С. 193-200.

35. Деркач, А.И. Биологические активные вещества некоторых видов рода Stachys L. Флоры Украины / А.И. Деркач // Раст. ресурсы. 1998. Т. 34, вып. 1. - С. 57-61.

36. Дикорастущие полезные растения России / под. ред. А.Л. Буданцева, Е.Е. Лесиновская. СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. - 663 с.

37. Долгова, A.A. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии / A.A. Долгова, Е.Я. Ладыгина. М.: Медицина, 1977. - 256 с.

38. Дорогойченко, В.Н. Количественное определение востанавливающих моносахаров в водорастворимом полисахаридном комплексе / В.Н. Доройченко, В.Н. Чушенко // Фармация. 1988. - №4. - С.39-40.

39. Зенкевич, И.Г. Аналитические параметры компонентов эфирных масел для их хроматографической и хромато-масс-спектрометрической идентификации. Моно- и сесквитерпеновые углеводороды / И.Г. Зенкевич //Раст. ресурсы. 1996. - Т. 32, вып. 1-2. - С. 45 - 58.

40. Зефиров, Б.М. Stachys L. Чистец / Б.М. Зефиров // Флора Крыма. -1966. - 4.4, вып.2. - С. 140-155.

41. Изменение №3 от 19.06.2003 г. к статье ГФ XI издания «Методы микробиологического контроля лекарственных средств» // Фармация. -2003. № 3. - С. 3 - 4.

42. Ильма Деста Изучение процесса гидролиза сапонинов Aralia mandchurici / Ильма Деста, Э.Т. Оганесян, В.Д. Понамарёв // Химия природ, соединений. 1978. - №5. - С.590-592.

43. Информационное обеспечение для идентификации фенольных соединений растительного происхождения. Кумарины и фурокумарины / В.М. Косман и др. // Раст. ресурсы. 1997. - Т. 33, вып. 3. - С. 32 -36.

44. Иридоиды Stachys inflata и S. ibérica / Н.Ф.Комиссаренко и др. // Химия природ, соединений. 1979. - № 1. - С. 99-100.

45. Исследование душицы обыкновенной на содержание флавоноидов / В.М. Мирович и др. // Проблемы освоения лекарственных ресурсов Сибири и Дальнего востока: тез. докл. всесоюзн.конф. Новосибирск, 1983.-С. 135-136.

46. Исследование микроэлементного состава объектов растительного происхождения / Д.А. Муравьева и др. // Достижения современной фармацевтической науки и образования практическому здравоохранению: сб. науч. тр. - Пермь, 1997. - 224 с.

47. Камаев, И.Н. Малораспространенные овощные культуры на Ставрополье / И.Н. Камаев, А.Н. Камаева. Ставрополь: Кн. изд-во, 1992. - 144 с.

48. Капеллер, O.A. Stachys L. Чистец. / O.A. Капеллер // Флора Кавказа. -2-е изд., перераб. и доп. - Л.: Наука. Ленингр. отд-ние. - 1967. - С.367-380.

49. Капеллер, O.A. Род Stachys L. на Кавказе. / О.А.Капеллер. Тбилиси: АНГССР, 1961.-140 с.

50. Караев, А.И. Химический состав травы чистеца шерстистого, листьев мяты водяной и влияние их препаратов на сократительную способность матки / А.И. Караев, Р.К. Алиев, П.А. Юзбашинская // Дан. АзССР. -1955. -T.il, №3. С.187-194.

51. Каррер, П. Курс органической химии / П. Каррер Л.: Гос. науч.-тех. изд-во хим. лит., 1962. - 1204 с.

52. Катикова, О.Ю. Гепатопротекторное действие препаратов растительного происхождения / О.Ю. Катикова, А.Я. Костин, B.C. Тишкин // Эксперим. и клинич. фармакология. 2002. - Т.65, №1. -С.41-43.

53. Качественный состав и количественное содержание терпеноидов в некоторых видах семейства губоцветных / Д.П. Попа и др. // Раст. ресурсы. 1976. - Т. 12, вып. 2. - С.247-251.

54. Кинтя, П.К. Тритерпеноиды растений / П.К. Кинтя, Ю.М. Фадеев, Л.С. Алюкина- Кишинев: Штиинца, 1990. 151 с.

55. Кирхнер, Ю. Тонкослойная хроматография: пер. с англ; в 2 т. / Ю. Кирхнер М.: Химия, 1981. - Т. 1.- 616 е., Т.2 - 535 с.

56. Клышев, Л.Л. Флавоноиды растений. Распространение, физико-химические свойства, методы исследования. / Л.Л. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. Алма-Ата: Наука Каз.ССР., 1978. - 220 с.

57. Кнорринг, О.Э. Чистец Stachys L. / О.Э. Кнорринг // Флора СССР. -М.-Л., 1954. - Т.21. - С. 194-237.

58. Кобзарь, А. Я. Флавоноиды надземной части Betónica officinalis / А.Я. Кобзарь, Г.К. Никонов // Химия природ, соединений. 1986. - №5. -С.636-637.

59. Кобзарь, А.Я. Фармакогностическое изучение буквицы лекарственной: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / А.Я. Кобзарь. Львов, 1987.- 15 с.

60. Кобзарь, А.Я. Фитохимическое изучение Betónica officinalis. Выделение биологически активных веществ из надземной части растения / А.Я. Кобзарь // Химия природ, соединений. 1986. - № 2. - С. 239.

61. Кобзарь, А.Я. Фитохимическое изучение Betónica officinalis. Кислоты надземной части Betónica / А.Я. Кобзарь // Химия природ, соединений. 1986. - № 2. - С. 239-240.

62. Коева-Тодоровска, Й. Pontostachys нова секция за род Stachys L. / Й. Коева-Тодоровска // Фитология (НРБ). - 1978. - Т.10. - С. 33-40.

63. Количественное определение тритерпеновых сапонинов в пятикомпонентной композиции / Т.Г. Заркуа и др. // Современные аспекты изучения лекарственных растений: сб. науч. тр. / ВНИИФ. -М., 1995 -Т.34. С.177-180.

64. Комисаренко, Н.М. Флавоноиды и кумарины Dictamnus dasycarpus / Н.М. Комисаренко, И.Г. Левашова, Т.П. Надежина // Химия природ.соединений. 1976. - №6. - С.815.

65. Коновалова, О.А. Количественное определение суммы валеопотриатов в корневищах с корнями Valeriana officinalis / О.А. Коновалова и др. // Химия природ, соединений 1983. -№7. - С.832 - 833.

66. Кононков П.Ф. Повышение полевой всхожести семян овощных культур / П.Ф. Кононков, В.П. Губкин. М.: Россельхозиздат, 1986. - 85 с.

67. Копытько, Я.Ф. Исследование аминокислотного состава настоек гомеопатических матричных мяты перечной, мелиссы лекарственной, душицы обыкновенной, шалфея лекарственного / Я.Ф. Копытько, З.П. Костенникова, Е.А. Тимохина // Фармация. 1997. - №6. - С.31-34.

68. Кортиков, В.Н. Лекарственные растения / В.Н. Кортиков М., 1998. -С.692-694.

69. Косман, В.М. Информационное обеспечение для идентификации фенольных соединений растительного происхождения в обращено-фазовой ВЭЖХ / В.М. Косман, И.Г. Зенкевич // Раст.ресурсы. 1997. -Т.ЗЗ, вып.2. - С. 14-26.

70. Костюченко, О.И. 6-Оксифлавоны в растительном мире / О.И. Костюченко // Раст. ресурсы. 1977. - Т. 13, вып.2. - С.403-417.

71. Костюченко, О.И. Фармакогностическое изучение чистеца остисточашечкового Stachys atherocalyx С. Koch.: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / О.И. Костюченко. Л., 1986. - 23 с.

72. Костюченко, О.И. Фенолкарбоновые кислоты чистеца остисточашечкового / О.И. Костюченко // Фитохимическое изучение флоры БССР и биофармацевтические исследования лекарственных препаратов. Л., 1975. -С. 80-84.

73. Костюченко, О.И. Химический состав и фармакологические свойства видов Stachys L. / О.И. Костюченко // Раст. Ресурсы. 1983. - Т. 19, вып. 3.-С. 407-413.

74. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.К. Кочетков. М.: Наука, 1970. - 631 с.

75. Кочкаров, В.И. Фармакогностическое изучение некоторых представителей семейства яснотковых: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / В.И. Кочкаров. Пермь, 1997. - 19 с.

76. Краснов, Е.А. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов, Т.П. Березовская, Н.В. Алексюк. Томск, 1987. - 184 с.

77. Крестовская, Т.В. Новый подрод рода Stachys (Lamiaceae) /Т.В. Крестовская // Бот.журн. -2003. -Т.88, №2. С.94-97.

78. Крестовская, Т.В. Анатомическое строение перикарпия у представителей родов Stachys и Betónica (Lamiaceae) / Т.В. Крестовская, Г.М. Борисовская, Г.Н. Сердюк // Бот.журн. 2001. - Т.86, №5. - С.54-65.

79. Кузнецова, Г.А. Природные кумарины и фурокумарины / Г.А. Кузнецова. Л.: Наука, 1967. - 248 с.

80. Кьосев, П.А. Полный справочник лекарственных растений / П.А. Кьосев М.: ЭКСМО - Пресс, 2000. - 992с.

81. Лавренова, Г.В. Фитотерапия / Г.В. Лавренова СПб.: Динамит, Золотой век, Смио пресс, 1996. Т.2. - С.42-45.

82. Литвиненко, Б.1. Деяю питания xímü й таксономп родини губоцвгсих / Б. I. Литвиненко // Рослинш ресурси Украши, ix вивчения та рацюнальние використання. -Кшв: Наук, думка, 1973. С.128-135.

83. Литвиненко, В.И. Иридоиды Betónica foliosa / В.И. Литвиненко, Б.Н. Аронова // Химия природ, соединений. 1968. - № 5. - С. 319.

84. Литвиненко, В.И. Фенольные соединения Betónica foliosa / В.И. Литвиненко, Б.Н. Аронова // Химия природ.соединений. 1968. - №5. -С.319.

85. Литвиненко, М.М. Фитохимическое изучение иридоидов и флавоноидов некоторых представителей семейства мареновых.: дис. . канд.фармац.наук: 15.00.02 / М.М. Литвиненко Харьков, 1979. - 184с.

86. Лихачев, Б.С. Модернизация рулонного способа проращивания семян зерновых кулыур / Б.С. Лихачев // Селекция и семеноводство. 1989. -№1. - С. 45.

87. Ю2.Лукиенко, П.И. Сообщение 1. К фармакологии чистеца буквицецветного. Влияние чистеца буквицецветного на сократительную деятельность матки лабораторных животных / П.И. Лукиенко // Тр. Киргизе. Мед.инст., 1956. - №8. - С. 124.

88. ЮЗ.Лукманова, К. А. Аминокислотный и минеральный состав фитопрепарата люцерны / К.А. Лукманова, В.А. Рябчук, Н.Х. Салиханова // Фармация. 2000. - №1. - С.25-27.

89. Лурье, A.A. Хроматографические материалы (справочник) / A.A. Лурье. М.: Химия, 1978. - 434 с.

90. Максютина, Н.П. Флавоноиды / Н.П. Максютина // Растительные лекарственные средства Киев: Наука, 1985. - С.85-102.

91. Юб.Маслова, С.П. Рост и вегетативное размножение Stachys sieboldii MIQ., выращиваемого в республике Коми / С.П. Маслова, Т.К. Головко // Раст. ресурсы. 2000. - Т.36, вып. 4. - С. 31-39.

92. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. 14- е изд. перераб. и доп. / М.Д. Машковский. - М.: Новая волна, 2000. -2т.

93. Международный кодекс ботанической номенклатуры. Л.: Наука. Ленингр. отд-ние, 1980. - 283 с.

94. Ю9.Меницкий, ЮЛ. Конспект видов семейства Lamiaceae (Labiatae) флоры Кавказа / ЮЛ. Меницкий // Бот.журн. 1992. - №6. - С.63-78.

95. ПО.Методические рекомендации по санитарному контролю за содержанием радиоактивных веществ в объектах внешней среды. М.: Ремедиум, 1990.-34 с.

96. Ш.Методика определения запасов лекарственных растений. М., 1986. -50 с.

97. Методика исследования при интродукции лекарственных растений / Лекарственное растениеводство: обзорная информация. М., 1984. - № 3.-51 с.

98. ПЗ.Методы исследования углеводов: пер. с англ. / под ред. А.Я. Хорлина. М.: Мир, 1975.-445 с.

99. Миназова Г.И. Разработка и стандартизация многокомпонентного сбора «Гепафит»: автореф. дис. .канд. фармац. наук /Г.И. Миназова. -М., 1997. -24 с.

100. Мнацаканян, В.А. Иридоидные гликозиды / В.А. Мнацаканян. -Ереван: Изд- во АН Армянской ССР, 1986. 186 с.

101. Муравьёв, И.А. Технология лекарств: в 2 т. / И.А. Муравьев. Изд. 3-е перераб. и доп. - М.: Медицина, 1980. - Т.2. - 704 с.

102. П.Муравьёва, Д.А. Полисахариды цветков василька синего / Д.А. Муравьёва, В.Н. Чушенко, В.Н. Бубенчикова // Фармация. 1987. - №2.- С. 29-32.

103. Муравьёва, Д.А. Фармакогнозия: учебник / Д.А. Муравьёва, Г.П. Яковлев, И.А. Самылина -М.: Медицина, 2002.- 402 с.

104. Муравьева, Д.А. Сушка лекарственного сырья: учебно-методическое пособие по фармакогнозии для студентов и преподавателей фармац. вузов / Муравьева Д.А., Попова О.И. Пятигорск, 2001. - 63 с.

105. Николайчук, JI.B. Растительные целители / JI.B. Николайчук, Е.С.Козюк Минск: Ураджай, 1996. - 250 с.

106. Новицкая, Г.Н. Жирнокислотный состав масел семян некоторых видов сем. Labiatae в связи с их систематическим положением / Г.Н. Новицкая, В.И. Мальцева //Раст. ресурсы. 1967. - Т.З, вып.З. - С.438-442.

107. Новицкая, Г.Н. Изучение состава жирных кислот масел некоторых видов сем. губоцветных в связи с их систематическим положением / Г.Н. Новицкая, В.И. Криштопа//Раст. ресурсы. 1971. -Т.7, вып.1. -С.32-40.

108. Орлова, Е.А. Фитотерапия / Е.А. Орлова. М.: Терра - Книжный клуб, 2001.-558 с.

109. ОСТ 42-3-84. Лекарственные средства. Порядок установления сроков годности. М.: Изд-во стандартов, 1984. - 48 с.

110. ОФС 42-0011-03 Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье. Стронций-90, цезий-137. Отбор проб, анализ, оценка результатов. -М.: Изд-во стандартов, 2003. 15 с.

111. ОФС 42-0013-03 Правила приемки лекарственного растительногосырья и методы отбора проб. М.: Изд-во стандартов, 2003. - 21 с.

112. Паносян, А.Г. Строение пентациклического тритерпенового спирта из Centaurea squarrosa / А.Г. Паносян, В.А. Мнацаканян // Химия природ, соединений. 1977. - №1. - С.59-69.

113. Пасечник, И.Х Изучение холеретической активности препарата «Фластапиол» / И.Х. Пасечник, Н.П. Максютина, Т.В. Зинченко // Современные проблемы фармацевтической науки и практики: в 2 ч. -Киев, 1972. Ч. 2. - С.878-879.

114. Петченко, А.И. Физиология и патология сократительной способности матки / А.И. Петченко. Л.: Медгиз, 1948. - 412 с.

115. Поиски гепатопротекторов среди препаратов растительного происхождения / Ж.Н. Румянцева, Я.С. Гудивон // Раст.ресурсы. 1993. - вып. 1. - С. 25-27.

116. Пономарёв, В.Д. Спектры поглощения пентациклических тритерпеноидов в серной кислоте / В.Д. Пономарёв, Э.Т. Оганесян, В.Ф. Семенченко // Химия природ, соединений. 1971. - №2. - С. 147151.

117. Попа, Д.П. Строение ануалона / Д.П. Попа, Т.М. Ориян, Х.Ш. Харитов // Химия природ, соединений. 1974. - № 3. - С. 324-330.

118. Попа, Д.П. Строение стахисовой кислоты нового дитерпеноида кауранового ряда / Д.П. Попа, Г.С. Пасечник // Химия природ, соединений. - 1974. - № 4. - С. 447-451.

119. Попов, А.П. Лесные целебные растения. Для применения в народной лечебной практике / А.П. Попов. М.: Лес. пром-сть, 1973. - 180 с.

120. Попова, О.И. Содержание хлорофилла в Омеле белой (Viscum álbum L.) / О.И. Попова, Д.А. Муравьева // Фармация. 1990. - №6. - С.15-16.

121. Предварительная хемотаксономическая оценка кавказких видов рода чистец / А.Д. Пакалн и др. // Полезные растения природной флоры и использование их в народном хозяйстве. Киев, 1980. - С.82-85.

122. Применение месячных циклов специфического лечения прихронических формах церебрального токсоплазмоза в комбинации с препаратом стахирен / И.Б. Рудова, Т.В. Зинченко // Современные проблемы фармацевтической науки и практики. Киев, 1972. - С. 905906.

123. Природные комплексы флавоноидов и сапонинов. Сообщение 1. Некоторые аналитические аспекты создания препаратов на основе флавоноидов и сапонинов / Сампиев А.М и др. // Фармаком. 1998. -№6. - С.46-51.

124. Процесс экспертизы и регистрации лекарственных средств / Ж.И. Аладышева и др. // Вестн. науч. центра экспертизы средств мед. применения МЗ РФ. 2003. - №2. - С. 10-11

125. Пулатова, Т.П. Предварительное химическое изучение некоторых растений из семейства губоцветных / Т.П. Пулатова // Фармация 1968. - № 1. - С. 69-70.

126. Пулатова, Т.П. Фармакогностическое изучение представителей семейства яснотковых с целью получения лекарственных препаратов: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02 / Т.П. Пулатова. -М., 1991.-47 с.

127. Пулатова, Т.П. Химическое исследование травы чистеца буквицецветного / Т.П. Пулатова, Х.Х. Халматов, К. Галиева // Аптеч.дело. 1965. - № 3. - С. 27-31.

128. Рагулин, М.С. Уточнить методику определения лабораторной всхожести семян многолетних бобовых трав / М.С. Рагулин // Селекция и семеноводство. 1980. -№9. С. 41-42.

129. Разработка определения подлинности измельчённого лекарственного растительного сырья различных морфологических групп / В.А. Ермакова и др. // Современные аспекты изучения лекарственных растений: науч. тр. /НИИФ. -М., 1995. Т.34. - С.135-141.

130. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование. Семейства Шррипс1асеае ЬоЬеНасеае. - СПб.,1993.- 197 с.

131. Ресурсоведческие и фармакогностические исследования некоторых представителей флоры Северного Кавказа / Д.А. Муравьёва и др. // Ресурсоведческое и фармакогностическое изучение лекарственной флоры СССР / ВНИИ фармации. 1987. - Т.25. - С.40-50.

132. Рожнятовский, И.И. Пикульник, чистец и железница как ядовитые растения для лошадей / И.И. Рожнятовский // сб. тр. харьковск. вет. инта. 1958. - Т.23. - С.379-386.

133. Роллов, А.Х. Дикорастущие растения Кавказа, их распространение, свойства и применение / А.Х. Роллов Тифлис, 1908. - 599 с.

134. Савченко, В.Н. Фармакологическое изучение стахихола-препарата, полученного из чистеца вздутого: автореф. дис. . канд. фармац. наук / В.Н. Савченко. Киев, 1980. - 13 с.

135. Сампиев, A.M. Экспериментально-теоретическое обоснование технологии препаратов с сапонино-флавоноидными композициями при комплексной переработке растительного сырья: автореф. дис. . д-ра фармац. наук: 15.00.01/ A.M. Сампиев. Пятигорск, 1998. -47 с.

136. Самылина И.А. Проблемы стандартизации лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов / И.А. Самылина // Традиционная медицина и питание: Теоретические и практические аспекты: материалы 1 междунар. конгр. М., 1994. - С.361.

137. Санданов, Д.В. Биология прорастания семян Sophora flavescens Soland.,собранных в различных ценопопуляциях в Читинской области / Д.В.Санданов,Т.Г. Бухашеева // Раст. ресурсы. 2004. -Т. 40, вып. 1. - С. 39-47.

138. Санитарные правила и нормы Сан ПиН 2.3.2. 1778-01 Гигиенические требования к качеству и безопасности продовольственного сырья и пищевых продуктов. М.: Ремедиум, 2001. - 45 с.

139. Сараф A.C. Перспективы поиска и создания природных антиаллергических, противовоспалительных и иммунотропных средств

140. A.C. Сараф, B.A. Бандюкова // Хим.-фармац. пр-во: обзор, информ. -1994.-вып.4,-43 с.

141. Семена сельскохозяйственных культур. Сортовые и посевные качества. М. ¡Стандарт, 1991. - 4.1. - 419 с.

142. Семенова, JI.A. Лекарственные растения Восточной Сибири / Л.А. Семенова Иркутск, 1966. - С. 259-260.

143. Семенченко, В.Ф. Исследование природных тритерпеноидов в ряду лупана и ß-амирина и разработка на их основе новых лекарственных средств: автореф. дис. .д-ра фармац. наук: 15.00.01 / В.Ф. Семенченко. Пятигорск, 1993. - 34 с.

144. Современные методы исследования лекарственных растений // Науч. тр. / ВНИИ фармации. М., 1983. - Т.20. - 202 с.

145. Соколов, B.C. Алкалоидоносные растения СССР / B.C. Соколов М.: Изд-во АН СССР, 1952. - 380с.

146. Спектрофотометрическое определение суммы флавоноидов в сборе «Гепафит» / Г.И. Миназов и др. // Фармация. 1997. - №1. - С.27-28.

147. Стоянов, Н. Диви и полезни растения в България / Н. Стоянов, Б. Китанов София: БАН, 1960. - 481 с.

148. Строение стахисолона / Д.П. Попа и др. // Химия природ, соединений. 1972. - № 3. - С. 295-299.

149. Строение флавоноидных гликозидов из чистеца болотного / В.И. Глызин и др. // (3; 1975; Свердловск): материалы Всерос. съезд, фармацевтов. Свердловск, 1975. - С. 288-289.

150. Сухие экстракты из растений основа создания современных лекарственных форм / С.М. Николаев и др. // Физико-биохимические аспекты изучения лекарственных растений: материалы междунар. сов. -Новосибирск, 1998. - С. 142-143

151. Танцерева, И.Г. Эколого-фармакогностическое исследование некоторых лекарственных растений Кемеровской области: автореф. дис. . .канд. фармац. наук: 15.00.02 / И.Г. Танцерева. Томск, 2004.- 23с.

152. Тахтаджян, A.JI. Система и филогения цветковых растений / А.Л. Тахтаджян М.: Изд-во Наука АН СССР, 1966. - 440 с.

153. Тритерпеновые гликозиды Fatsia japónica // Химия природ, соединений. 2000. - №2. - С. 131-133.

154. Ужегов, Г.Н. Основные лекарственные растения: Краткая энциклопедия народной медицины / Г.Н. Ужегов М.: Изд-во ACT, 2001.-448 с.

155. Фенолкарбоновые кислоты Origanum vulgare / В.М. Мирович и др. // Химия природ, соединений. 1989. - №6.- С.850-851.

156. Флавоноиды Stachys inflata / Н.Ф. Комиссаренко и др. // Химия природ, соединений. 1978. - № 4. - С. 521.

157. Флавоноиды Stachys spectabilis / А.И. Деркач и др. // Химия природ, соединений. 1980. - № 2. - С. 172-174.

158. Флора СССР / под ред. Комарова. М-Л.: Изд-во АН СССР, 1958-1960. - Т.21. - С.200-237.

159. Фоканов, A.M. Совершенствование метода определения всхожести семян / А.М. Фоканов // Селекция и семеноводство. 1983. - №1. - С. 39-42.

160. Фоканов, A.M. Урожайные свойства семян с разной всхоестью / A.M. Фоканов, Н.Ф. Лоскутов // Селекция и семеноводство. 1980. - №7.-С. 37-40.

161. Хами Дулинна, Е.А. Качественный состав сапониновой фракции из надземной части Hedysarum alpinum L. / Е.А. Хами Дулинна, C.B. Зинченко, A.A. Семёнов // Раст. ресурсы. 2002. - Т.38, вып. 1. - С.78-82.

162. Характер превращения олеаноловой кислоты в кислой среде / A.A. Савина и др. // Химия природ, соединений. 1986. - №3. - С. 320-323.

163. Химический анализ лекарственных растений: Учеб.пособие для фарм. вузов / под ред. Н.И. Гринкевич, Л.Н. Сафронич М.:Высш. шк., 1983. -176 с.

164. Химическое и рентгеноструктурное исследование нового дитерпенового лакгона бетолида / В.В. Ткачев и др. // Химия природ, соединений. 1987. - № 6. - С. 811-817.

165. Хорошайлов, Н.Г. Энергия прорастания важный показатель качества семян / Н.Г. Хорошайлов // Селекция и семеноводство. - 1977. - 2. - С. 60-62.

166. Черепанов, С.К. Сосудистые растения России и сопредельных государств / С.К. Черепанов. СПб.: Мир и семья, 1995. - 990 с.

167. Шеремет, И.П. 2-фенилбензо-у-пироны чистеца однолетнего: автореф. дис. . .канд. фармац. наук: 02.00.03 / И.П. Шеремет. Харьков, 1973. -33 с.

168. Шеремет, И.П. 4-метоксискутеллярин из Stachys annua / И.П. Шеремет, Н.Ф. Комисаренко // Химия природ.соединений. 1971. -№3. - С.373.

169. Шеремет, И.П. Флавоноидные гликозиды Stachys annuae / И.П. Шеремет, Н.Ф. Комисаренко // Химия природ.соединений. 1971. - №5. - С.583-587.

170. Шеремет, И.П. Флавоноиды Stachys annua / И.П. Шеремет, Н.Ф. Комиссаренко // Химия природ, соединений. 1972. - № 5. - С. 646-647.

171. Шеремет, И.П. Флавоноиды чистеца однолетнего и их противовоспалительная активность / И.П. Шеремет, П.И. Безрук, Н.П. Дзюба // (4; 1984; Запорожье):тез. докл Съезд, фармацевтов Укр. ССР. -Запорожье, 1984.-С. 185.

172. Шифферс, Е.В. Растительность Северного Кавказа и его природные кормовые угодья / Е.В. Шифферс М.: АН СССР. - 1953. - 399 с.

173. Шретер, А.И. Лекарственная флора советского Дальнего Востока /

174. А.И. Шретер М.: Медицина, 1975. - 328 с.

175. Шталь, Э. Хроматография в тонких слоях: пер. с нем. / Э. Шталь М.: Мир, 1965. - 508 с.

176. Шумайлова, М.П. К фитохимическому изучению Stachys baicalensis Fisch, и Stachys palustris L. / М.П. Шумайлова // Лекарственные сырьевые ресурсы Иркутской области. Иркутск, 1971. - Вып. 6. - С. 50-56.

177. Шумайлова, М.П. К фитохимическому изучению чистецов байкальского и болотного / М.П. Шумайлова // Лекарственные сырьевые ресурсы Иркутской области. Иркутск, 1971.- Вып. 6. - С. 56-61.

178. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения:учеб. пособие / под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. СПб.: Спец. лит., 1999. - 407 с.

179. Adema, F. Iridoides glycosides of Species of Lamium and some Relative Genera / F. Adema //Acta Bot. Neerl. -1968. Vol. 17, № 5. - P. 423-430.

180. Bentham, G. Labiatae. In: A de Candolle. Progromees systematis naturalis Regni vegetabilis. P. 12. / G. Bentham - Parisiis, 1848. - P.462-497.

181. Boissier, E. Flora orientalis / E. Boissier Genevae; Basileae, 1879.1. Vol.4. 1276 p.

182. Boit, H.G. Ergebnisse der Alkaloid- Chemie bis 1960 / H.G. Boit. Berlin, 1961.- 1082 p.

183. Brattacharjee, R. Taxonomic studies in Stachys: l.New species and infra-specific taxa from Turkey / R. Brattacharjee // Notes Roy. Bot.Gard. : Edinb., 1974. Vol.33, №2. - P. 275-292.

184. Brattacharjee, R. Taxonomic studies in Stachys: 2. A new infrageneric classification of Stachys / R. Brattacharjee // Notes Roy. Bot.Gard. : Edinb., 1980. Vol.38, №1. - P. 65-96.

185. Briant, E.A. A note on the differentiation between flavonoid glycosides and their aglycones / E. A. Briant //J. Amer. Chem. Soc. -1950. Vol. 39, № 3. -P. 481.

186. Briescorn, G.H. Lamalbid, ein neues Iridoid aus Flores Lamii albi / G.R Briescorn, R. Aheborn //Tetrah. let -1973. Vol. 14, № 41. - P. 4037-4038.

187. Buczaki, S/ Best herbs / S. Buczacki. France, 1995. - P. 127.

188. Catalpol and methylkatapol: naturally occurring glucosides in Plantago and Buddlea species //R.B. Duff et al. // Biochem. J. 1965. - Vol. 96, №1. - P 1.

189. Chromatographic analysis of sugars applied to the characterisation of monofloral honey / J.F. Cotte, H.Casabianca, S. Chardon // Anal Bioanal Chem. 2004. - Vol. 380, № 4. - P.698-705.

190. Colonna, J.P, Repartition des depsides de l'acide quinique dans les pieces florales de quelques cafeiers: role suggéré de substances de reserve / J.P. Colonna // C.r. Acad. Sei. — D286. 1978. - № 17. - P. 1265-1267.

191. Cotapano, A.Z. Antioxidant effects of flavonoids / A.Z. Cotapano // Albergologi. 1997. - № 48 - P.39-44.

192. Daigle, DJ. High performance liquid chromatography of 34 selected flavonoids / DJ. Daigle, E.J. Concerton // J. Chromatography. 1982. - Vol. 240. - P. 202 - 250.

193. Davis, P.H. Materials for a flora of Turkey: XXXVII: Labiatae, Plumbaginaceae, Plantaginaceae / P.H. Davis // Notes Roy. Bot.Gard. : Edinb., 1980. Vol.38, №1. - P. 23-64.

194. Essential oil analysis and antimicrobial activity of eight Stachys species from Greece / H.D. Skaltsa et al. // Phytochemistry. 2003. - Vol.64. - P. 743-752.

195. Estersaponine aus Polemonium caeruleum L.: Vortr. Kurzfassung. Plenarvorth., und Poster 13. Wiss. Osterreich Pharmazeut. Ges., Wien, 2-4 Apr. 1997 / Reznicek G. et al. // Sei. pharm. 1997. - Vol.65, № 1-2. -P.57.

196. Fernandez A.M., Sarmiento M.N. Contribuction al conocimiento del género Stachys en la provincial de Tucumán con espécial refencia a su taxonomia. // Lilloa. 1973. - Vol. 33, №10. - P. 175-203.

197. Fikenscher, L.H. Sur les heterosides Iridoides du Genze Teucrium / L.H. Fikenscher, R.Hegnauer // Plantes med. Phytotherap. 1969. -Vol. 3, № 3. - P. 183-188.

198. Five new triterpene saponins, polygalasaponins XXVIII XXXII from the root of Poligala japónica Houtt / Zang Dongming et al. // Chem and Pharm Bull. - 1996. - Vol.44, № 4 - P.810-815.

199. Fraga, B.M. Natural sesguiterpenoids / B.M. Fraga // Natur. Prod. Repts. -1998.-Nl.-P. 75-92.

200. Gams, H. 1926-1927. Labiatae. Lippenblütter / H. Gams // Hegi G. Illustrierte Flora von MiHeleuropa. Berlin; Gamburg, 1975. - P. 22552548.

201. Gnarrigues, O. Contribution a 1'etude morphologique du genre Stachys L. au Maroc/ 0. Gnarrigues // Doc.Inst.Sci. - 1979. - №4. - P.96

202. Grant, H.G. Terpenoid chemistry. XXVII. Further iridoid constituents (DR.)- and (IS)T-acetoxymiodesert-3-ene from Myoporum deserty (Myoporaceae) / H.G. Grant, C.A. Russel-Maynard, M.D. Sutherland //Austral. J. Chem. 1985. - Vol. 38, №2. -P. 325-336.

203. Grunwald, Jorg. The European phytotherapeutics market: figures, tends, analyses / Jorg Grunwald, Kerstin Buttel // Drugs made Ger. 1996. -Vol.39, № 1.-P.6-11

204. Hanson, K.R. The biosynthesis of chlorogenic Acid and related conjugates of the hydrocinnamic acids / K.R. Hanson, M. Zucker // J. Biol. Chem, 1963. - Vol. 238, №3.-P. 1105-1115.

205. Harborne, J. Comparative biochemistry of the flavonoids / J. Harborne. -London; New York, 1967. - 383 p.

206. Harborne, J.B. Phenolyc; compounds / J.B. Harborne. Amsterdam et al., 1983. -B 404-433.

207. Hegnauer, R. Labiatae. In chemotaxonomie der Pflanzen. / R. Hegnauer.- Basel; Stuttgart, 1966. Bd.4.- P. 289-346.

208. Herrmann, K. Hydroxyzimtsaüren und Hydroxybenzoesauren enthalten de Naturstoffe in Phlanzen / K. Herrmann // Fortschritte Chem. organ. Naturstof.- Vien:-N.Y. -1978. Bd 35. - S. 73-132.

209. Hoppe H.A. Drogenkunde. Humburg: Gram; Gruyter, 1958. - 1231 p. 229.Iridoid and phenylpropanoid glycosides from Stachys macrantha / Ihsan

210. Qalis et al. // Phytochemistry. 1992. - Vol. 31, № 1.- P. 167-169.

211. Linnaeus, C. Systema naturae.- Lugduni Batavorum / C. Linnaeus Haak, 1735.-P.ll.

212. Madaus, G. Lehrbuch der biologischen Heilmittel / G. Madaus. Leipzig: Thieme, 1938. -Bd.3- 1855-2864 p.

213. Maly, E. Paper chromatography of the essential oils occurring in the Stachys //1. Chromatogr, 1985. Vol. 333, №1. - P.288-289.

214. Metkalfe, C.K. Anatomy of the Dicotiledons. / C.K. Metkalfe. Oxford, 1950. -P. 2.

215. Miller, G.L Protein determination for Lange number of seamless / G.L. Miller // Anal. Chem. -1959. Vol. 35, № 5. - P. 964 - 962

216. Micevski, K. Stachys iva Griseb. i Stachys horvaticii Micevski spec. nov. u flori Makedonije / K. Micevski // Acta bot. croat. 1966. - Vol. 28. - P. 449454.

217. Pierpoint, W.S. 0-quinones formed in plant extracts. Their reaction with amino acids and peptides / W.S. Pierpoint // Biochem. J. -1969. Vol. 112, № 5. - P. 609616.

218. Planta, A. Ueber einige stickstoffhaltige Bestandtheile der Wurzeknollen von Stachys tuberifera. /A. Planta // Berichte deutsch, ehem. Ges. 1890. -Bd.23. - P. 1699-1700.

219. Planta, A. Ueber Stachydrin / A. Planta, E. Schulze // Berichte deutsch, ehem. Ges. 1893. - Bd.26. - P. 939-942.

220. Rechinger, K.H. Labiateae novae ironical, series tertia / K.H. Rechinger // Plant Syst. And Evol. 1980. - Vol. 134, № 3-4. - P.287-292.

221. Rice-Evans, C.A. Structure antioxidant activity relations hips of flavonoids and phenolic acids / C.A. Rice-Evans, N.J Miller, G. Paganga // Free radical biology & medicine. - 1996. - Vol.20, № 7. - P.933-956.

222. Schuker, P. Natural antioxidants / P. Schuker // Food ingredients. Eur. -conf. progr. Paris, 8-10 oct. 1991.Paris, 1991. -P.285-287.

223. Sessa, DJ. Paper chromatographic detection of plant phenols with Antimony trichloride / DJ. Sessa, J.J. Rackis // J. Chromatogr.- 1966. Vol. 23, № 3. - P. 487490.

224. Shallenberger, R.S. Preparation of crystalline stachyose / R.S. Shallenberger // Chem. Ind. 1961. - P.415.

225. Terpenoid composition of some Canadian Labiatae / B.M. Lawrence et al. // Phytochemistry. 1972. - Vol.11, №8. - P. 2636-2638.

226. Thorns, H. Handbush der praktishen and wissenschaftlichen Pharmazie / H. Thorns. Berlin-Wien, 1931. - Bd. 5.-P. 1702.

227. Towers, G.H. Cell wall hydroxycinnamate ester as UV-A receptors in phototropic responces of higer plants a new hypothesis / G.H Towers, B. Abeysekera // Phytochem. -1984. Vol. 23, №5. -P. 951-952.

228. Trim, H.R. The preparation and properties of aucubin, asperuloside andsome related glycosides / H.R. Trim, R. Hill // Biochem. J. 1952. - Vol.50, № 3. - P. 310-319.

229. Wieffering, J.H. Aucubinartige Glucoside (Pseudoindicane) und Verwandte Heteroside als Systematische Merkmalle / J.H. Wieffering //Phytochem. 1966. - Bd 5, № 6. - P. 1053-1064.