Автореферат и диссертация по фармакологии (15.00.02) на тему:Фармакогностическое изучение котовника крупноцветкового (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) флоры Карачаево-Черкесской республики

ДИССЕРТАЦИЯ
Фармакогностическое изучение котовника крупноцветкового (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) флоры Карачаево-Черкесской республики - диссертация, тема по фармакологии
АВТОРЕФЕРАТ
Фармакогностическое изучение котовника крупноцветкового (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) флоры Карачаево-Черкесской республики - тема автореферата по фармакологии
Хачирова, Фатима Сеитовна Пятигорск 2009 г.
Ученая степень
кандидата фармацевтических наук
ВАК РФ
15.00.02
 
 

Автореферат диссертации по фармакологии на тему Фармакогностическое изучение котовника крупноцветкового (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) флоры Карачаево-Черкесской республики

□Ü348ST59

На правах рукописи

ХАЧИРОВА ФАТИМА СЕИТОВНА

ФАРМАКОГНОСГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОТОВШ1КА КРУ1ШОЦВЕТКОВОГО (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) ФЛОРЫ КАРАЧАЕВО-ЧЕРКЕССКОЙ РЕСПУБЛИКИ

15.00.02 - фармацевтическая химия, фармакогнозия

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени ^ О ЛЕН 2009 кандидата фармацевтических наук

Пятигорск - 2009

003488759

Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию»

Научный руководитель: доктор фармацевтических наук, профессор

Челомбитько Вячеслав Александрович Официальные оппоненты: доктор биологических наук, профессор

Мелик-Гусейнов Валерий Владимирович

кандидат фармацевтических наук, доцент Кичев Дмитрий Геннадьевич

Ведущая организация: ГОУ ВПО «Самарский государственный меди-

ТТЛ чппоиплупаийшпл и ллт/чпщлщг П'ПП 1ГП11ИЧ

""^ . «^ш|И1||ХЧ Ж, ъ^У'«11V*-*>*'■ ^Яииинии»

Защита состоится ^е/е^Х«^- 2009 года в У часов на заседании Диссертационного совета Д 208.069.01 при ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росз-драва» (357532, Ставропольский кран, Пятигорск, пр. Калинина, 11)

С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО «Пятигорская ГФА Росздрава».

Автореферат разослан ««£3 » к£>2009 г.

Ученый секретарь диссертационного совета,

профессор ' Е.В. Компанцева

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность проблемы. Одним из приоритетных направлений поиска новых растительных источников биологически активных веществ является изучение дикорастущих видов флоры России, запасы которых достаточно велики. Такой подход будет обеспечивать долгосрочную надежную сырьевую базу, позволит рационально использовать эти растительные ресурсы и даст возможность расширить ассортимент лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на их основе.

fi"* 1# 11Г-1 Ил »Лгг^иит.'пи ifuíltnmiofiini ппет гтпп/ч"1 илптт\' тгл^чл^плттпт tv

v> Viiub»u>im nvtv HII^IV^IUUUIII t J у ■ " lIWKVtVU 11UUULA JlvllU^V t UWtiliUtA

растений является арсенал средств народной медицины. С этой точки зрения, особый интерес представляют растения сем. Lamiaceac (яснотковые). Виды из известных родов Mentha, Salvia, Thymus , Melissa ,Leonurus, Scutellaria, Rosma-rinum, Hyssopus, Lavandula и др. уже давно прочно вошли в арсенал официального лекарственного растительного сырья не только в зарубежных странах, но и в России.

Одним из таких перспективных и недостаточно изученных растений является котовник крупноцветковый (Nepeta grandiflora Bieb.), который во флоре Карачаево-Черкесской Республики (КЧР) является самым распространенным видом в сем. яснотковых. У народов КЧР котовник крупноцветковый используется как отхаркивающее средство; траву в виде чая пьют как общеукрепляющее средство и при анемии.

Недостаточная фармакогностаческая и фармакологическая изученность этого интересного растения не позволяет до сих пор использовать его в научной медицине. В связи с этим, комплексное изучение сырья (травы) к. крупноцветкового является перспективным и актуальным.

Цель и задачи исследования. Целью нашей работы является фармаког-ностическое изучение сырья (травы) котовника крупноцветкового, выявление запасов сырья на территории КЧР, выявление возможности производства зке-

тракционных препаратов и изучение их фармакологического действия, а также стандартизация сырья и сухого экстракта на его основе.

Для достижения поставленной цели должны быть решены следующие задачи:

1. Выявить характерные места произрастания и определить запасы сырья котовника крупноцветкового на территории КЧР.

2. Изучить качественный и количественный состав основных групп биологически активных веществ (БАВ) травы котовника крупноцветкового.

3. Разработать методы нормирования подлинности (выявление характерных анатомо-диагностических признаков) и качества (содержания основных групп БАВ) сырья (травы) котовника крупноцветкового.

4. Обосновать технологию сухого экстракта и разработать нормы его качества.

5. Провести фармакологические исследования водного настоя и водно-спиртового экстракта котовника крупноцветкового.

6. Составить соответствующую нормативную документацию (НД) на траву котовника крупноцветкового и экстракт сухой.

Научная новизна. В результате экспедиционных обследований основных горных районов КЧР выявлены места произрастания и определены ориентировочные запасы сырья котовника крупноцветкового. Установлено, что объем возможных ежегодных заготовок на территории КЧР составляет около 12 т. воздушно-сухого сырья.

Методом ВЭЖХ в траве котовника к ру п но цв етков о го (экстрагент - спирт этиловый 70%) впервые идентифицированы и количественно определены 9 фенольных соединений: дигидрокверцетин, гиперозид, рутин, салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, дикумарин, кумарин. Установлено, что доминирующими соединениями в полифенольном комплексе являются кислота кофейная (24,16%) и кислота салициловая (22,66%).

Методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный химический состав эфирного масла котовника крупноцветкового. Иден-

тифицированы 38 соединений, среди которых доминирующими являются би-циклический монотерпен 1,8-цинеол (39,91%) и сесквитерпен кариофиллен-оксид (32,83%).

Впервые спектрофотометрическим методом установлено содержание флавоноидов в различных частях растения: наибольшее содержание обнаружено в листьях (до 0,217%), наименьшее - в корнях (0,024%); в траве содержание флавоноидов может достигать 0,165%.

Впервые методом колоночной жидкостной хроматографией изучен аминокислотный состав травы котовника крупноцветкового, который представлен

1 ^ 01»Ш1П1'Т1^ттпт01/!1' !'ЛТЛ«Г »V О /П1!Т>!П -гмалтлм» ТТТУГУ ттппттп«11«тт гг л* г

1ШШ1, но У

цин, лизин, фенилаланин, гистидин, аргинин) являются незаменимьши.

Впервые полуколичественным спектральным анализом изучен макро- и микроэлементный состав травы котовника крупноцветкового. В траве определено содержание 27 элементов. Из них эссенциальными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальными: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

Разработана стандартизация сырья (травы) котовника крупноцветкового, определяющая показатели подлинности и доброкачественности сырья.

Предложена оптимальная технология сухого экстракта (экстрагент -спирт этиловый 70%) из травы к. крупноцветкового и методы его стандартизации. Разработана методика спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин должно быть не менее 0,5%.

Фармакологический скрининг водного настоя травы (I) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (70% этанол, И) выявили антимикробную (I), ранозаживляющую (И) и противовоспалительную (II) виды активности.

Практическая значимость. Выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья - травы котовника крупноцветкового для получения БАВ, обладающих противомикробным, раиозаживляющим и противовоспалительным действием.

У водного настоя травы котовника крупноцветкового (10:200) выявлено антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus. У экстрактов (70% и 40% этанол) кроме отмеченного, выявлено также антимикробное действие и на спорообразующие микроорганизмы рода Bacillus.

Фармакологический скрининг в опытах на животных позволил установить, что сухие экстракты (70%, 40% этанол) в дозе 30 мг/кг проявляли рано-заживляющую и противовоспалительную активность.

Внедрение результатов исследования в практику. Подготовлены проекты ФСП «Котовника крупноцветкового трава цельная» и ФСП «Травы котовника крупноцветкового экстракт сухой» (подтверждены актами внедрения от 09.04.07), позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид лекарственного растительного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ, для расширения ассортимента и структуры выпускаемой продукции на ЗАО «Вифитех» (Россия).

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на 53-й, 54-й, 56-й, 57-й и 58-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1998, 1999, 2001, 2002, 2003 гг.), материалах Всероссийской научно-практической конференции «Химия в технологии и медицине» (Махачкала, 2002). По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА (номер государственной регистрации 01.200.112164) в рамках темы «Разработка лекарственных средств и их рациональное использование», согласно договору 016/146/050 между Министерством здравоохранения й социального развития РФ и Пятигорской ГФА.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения распространения котовника крупноцветкового на территории КЧР и определение его запасов и объема возможных ежегодных заготовок.

2. Результаты фитохимического изучения содержания основных биологически активных веществ в траве к. крупноцветкового.

3. Данные по изучению подлинности (анатомо-диагностические признаки сырья) и качества (содержание флавоноидов) травы котовника крупноцветкового.

4. Методики качественного и количественного состава сырья (травы) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (70% этанол).

5. Результаты доклинического изучения водного настоя (1:20) и сухого экстракта (70% этанол) из травы котовника крупноцветкового по выявлению антимикробного, ранозаживляющеш и противовоспалительного действия.

Объем и структура диссертации. Диссергациинная работа изложена на 110 страницах текста в компьютерном наборе, состоит из введения, обзора литературы и четырёх глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 224 источника, в том числе 36 иностранных; содержит 17 таблиц, 14 рисунков и приложение.

ОСНОВНОЕ СОДЕРЖАНИЕ РАБОТЫ

Морфолого-анатомическое изучение сырья котовника крупноцветкового

(Nepeta grandiflora)

Мезофилл листа на поперечном срезе дифференцирован на палисадный

и губчатый. Палисадный мезофилл состоит из одного слоя клеток, которые плотно прилегают друг к другу и вытянуты в вертикальном направлении. Губчатый мезофилл состоит из клеток округлой формы, рыхло расположенных в 34 слоя. На поперечном срезе лист имеет сильно выступающие с нижней стороны жилки. Центральная жилка значительно выделяется по размерам и имеег округлую форму. По строению она похожа на черешок. Проводящая система

жип1ги ппрптипрня пTTHUlLf nnrionuommi тлигпш (tyxin ----------r-M---—...............Г..............J ......... \r------ - ! ■

Условн. обознач.: 1 - волосок, 2 - эпидерма, 3 - паренхима, 4 - колленхима, 5 - ксилема, 6 - флоэма.

Рисунок 1 - Схема строения листа котовника круг.ноцветкоеого (поперечный срез)

При рассмотрении верхней эпидермы с поверхности листа обнаружены слегка извилистые клетки, имеющие почти прямые боковые стенки. Клетки нижней эпидермы, в отличие от клеток верхней эпидермы, имеют сильно извилистый характер стенки. Устьица расположены как на верхней, так и на нижней (больше) эпидерме и имеют диацитный тип устьичного аппарата. На верхней и нижней эпидерме встречаются три типа волосков: 1) двух-трех-клеточные с бородавчатой поверхностью, 2) мелкие, сосочковидные, 3) головчатые на одноклеточной ножке.

Вдоль жилок листа преимущественно располагаются многоклеточные волоски. Эфирномасличные железки округлой формы с четырьмя выделительными клетками. При действии реактивом Судан III капли эфирного масла, содержащиеся в железках, приобретали розовое окрашивание.

Таким образом, для листа к. крупноцветкового характерно наличие следующих характерных анатомо-диагностических признаков: диацитный тип расположения околоустьичных клеток, три тапа волосков - бородавчатые, сосочковидные и головчатые; эфирномасличные железки округлой формы с четырьмя выделительными клетками.

1 2 3 ■

3 — клетка эпидермы, 4 — устьице, 5 - желёзка, 6 - головчатый волосок.

Рисунок 2 - Строение верхней (А) и нижней (Б) эпидермы листа котовника крупноцветкового

Фотохимический анализ травы котовника крупноцветкового Изучение фенольных соединений Исследование фенольных соединений проводили методом ВЭЖХ на высокоэффективном жидкостном хроматографе фирмы "GILSTON", модель 305, Франция; инжектор ручной, модель RHEODYNE 7125 USA с последующей компьютерной обработкой результатов исследования с помощью программы Мультихром для "Windows". Всего было обнаружено 14 веществ, а идентифицировано 9 (табл. 1, рис. 3).

Таблица 1 — Фенольные соединения водно-спиртовых извлечений из травы котовника крупноцветкового, идентифицированные методом ВЭЖХ_

Группа Б АВ Идентифицированные вещества Содержание веществ в выделенной смеси, %

Флавоноиды Дигидрокверцетин 6,35

Гиперозид 2,77

Рутин 3,15

Фенолокислоты Кислота кофейная 24,16

Кислота феруловая 15,33

Кислота хлорогеновая 1,73

Кислота салициловая 22,66

Кумарины Дикумарин 0,83

Кумарин 1,74

Рисунок 3 - ВЭЖХфенольных соединений травы котовника крупноцветкового

Методом внутренней нормализации определено, что в выделенной сумме веществ, превалирует кофейная, кислота - 24,16 %. Содержание кислоты кофейной в траве котовника крупноцветкового составляет 1,02%.

Количественное определение флавоноидов в траве котовника крупноцветкового Для анализа содержания флавоноидов мы избрали методику спектрофо-

тометрического определения, основанную на реакции комплексообразования с алюминия хлоридом. Расчет производился по стандартному веществу, в качестве которого использовали СО рутина. Со всеми образцами проводили по шесть

определений, статистически обработанные результаты представлены в таблице 2.

Таблица 2 - Количественное содержание флавоноидов в различных органах

котовника крупноцветкового

Образец Содержание флавоноидов, % Метрологические характеристики

Яг

Корни 0,024±0,002 0,00078 8,3

Стебли 0,091±0,002 0,00080 2,2

Листья 0,217±0,003 0,00117 1,4

Соцветия 0,134±0,002 0,00078 1,5

Трава 0,165±0,003 0,00116 1,8

Аминокислотный состав травы котовника крупноцвгткового Качественный и количественный составы аминокислот котовника крупноцветкового определяли методом колоночной жидкостной хроматографии.

В результате исследования аминокислотного состава травы котовника крупноцветкового установлено наличие 15 аминокислот, девять из которых являются незаменимыми: валин, треонин, метионин, изолейцин, лейцин, лизин, фенилаланин, гистидин и аргинин.

Макро- и микроэлементный состав травы и корней котовника крупноцветкового В траве котовника крупноцветкового полу количественным спектральным

анализом определено содержание 27 элементов, в корнях - 32, которые можно подразделить на следующие группы (трава/корень, мг/кг соответственно в абсолютно-сухом сырье):

1) эссенциальные: Ре (13/66), Со (0.13/0.66), Ъп (0,2/0,39), Мп (0,79/2,62), Сг (0,03/0,08), Са (393/131), Мё (131/66), Мо (0,02/0,01;

2) условно-эссенциальные: В (0,8/1,3), V (0,013/0,13), (66/262), № (0,039/0,066);

3) биогенные: К (262/262), Иа (13/39);

4) токсичные: А! (79/131), Ва (2/1), РЬ (0,02/0,079);

5). потенциально-токсичные: Бп (0,004/0,007), Ag (0,00013/0,0026), Бг (0,655/0,393), Ъс (0,026/0,079), Т1 (2,6/5,2).

11

Содержание токсичных элементов в траве котовника не превышает ПДК, принятые в нашей стране для чая.

Изучение компонентного состава эфирного масла котовника крупноцветкового Содержание эфирного масла в воздушно-сухом сырье (трава) к. крупноцветкового, заготовленной в период цветения в Даутском ущелье КЧР, составило 0,18% (метод перегонки с водяным паром). Эфирное масло представляло собой подвижную жидкость желто-зеленого цвета со своеобразным запахом.

Методом газовой хромато-масс-спектроскопии на приборе HP 5973 Agul-lent technologies (США) в составе эфирного масла обнаружено 44 компонента, из которых идентифицировано 38 (табл. 3).

Таблица 3 - Качественный и количественный состав эфирного масла ко-

товника крупноцветкового

Название вещества Содержание, в % Название вещества Содержанием %

а-фелланарен 0,04 р-бурбонен 0,84

а—пинен 0,31 R—к-япипфиллен 1,34

камфен 0,04 а-гумулен 0,19

вербеной 0,05 0-ионон 0,37

сабинен 0,57 гермакреп 1,30

рИшнен 2,35 бициклогермакрен 0,32

камфен 0,22 Д-кадинен 0,23

р-цимен 0,33 изо-кариофиллен-оксид 2,98

1,8-цинеол 39,91 кариофиллеи-оксид 32,83

гамма-терпинек 0,12 нор-копанон 0,22

а-терпинолен 0,32 Гумулен-эпоксид 0,59

нор-иоион 0,53 нафталшшетанол 0,38

транс-пинокарвеол 1,07 эпиглобулол 0,76

вербенон 0,23 виддрол 0,47

пинокарвон 0,76 карифшиенол 1,99

4-терпиненол 0,62 пентадеканон 0,93

миртеналь 1,16 пентакозан 1,26

а-терпинеол 0,16 фитол 0,63

миртенол 0,56 * 1,49

а-кубебен 0,10 * 0,21

* 0,24 « 0,43

* 0,12 * 0,42

*- не идентифицированные вещества.

Летучие компоненты эфирного масла котовника крупноцвегкового представлены в основном соединениями терпенового ряда, среди которых преобла-

дают 1,8-цинеол (39,9%) и кариофшшен-оксид (32,83%), составляющие около 73% эфирного масла.

Разработка норм качества травы котовника крупноцветкового На основании проведенных фотохимических исследований нами были установлены нормы качества травы котовника крупноцветкового, представленные в таблице 4.

Таблица 4 — Показатели норм качества «Котовника крупноцветкового трава цельная»

Показатели Методы Нормы

Внешние признаки Визуальный, органолептиче-скин В соответствии с ФСП 42-

Микроскопия Микроскопический. В соответствии с ФСП 42-

Качественные реакции на флавоновды 1. Цианидиноиая реакция в спиртовой среде - 2 мл извлечения, 10-15 мг металлического магния при прибавлении 5-7 капель кислоты хлористоводородной кон- ЦС liip iipC ¡>2!П'0ы Оранжсво-красное окрашивание.

2. В спиртовой среде 1 мл полученного извлечения прибавляли 0,5 мл раствора аммония гидроксида Ярко-желтое окрашивание, при нагревании переходящее в оранжевое.

3. У- спектрофотометрия дифференциальная Максимум в области 405±4нм.

Влажность ГФ XI, вып.1, с.285 - 286. Не более 8%.

Зола общая ГФ XI, вып.2, с.24. Не более 6,5%.

Зола не растворимая в хлористовоя. к-те 10% ГФ XI, вып.2, с.25. Не более 1,5%.

Экстрактивные вещества (растворитель спирт этиловый 70 %) ГФ XI,, вып. 1, с.295. Не менее 15%.

Органические примеси ГФХ1, вып.1, с.276. Не более 3,0%.

Минеральные примеси ГФ XI, вып.1, с.276. Не более 1,0%.

Количественное определение суммы флавоновдов в пересчёте на рутин Дифференциальная спектрофотометрия Не менее 0,15%.

Микробиологическая чистота ГФ XI, вып.2, с. 194 - 195 и Изменение № 2 Категория 4А.

Упаковка ГФ XI, вып.2, с.381. В мешки тканевые не более 20 кг, в тюки не более 50 кг.

Маркировка ГФ XI, вып.2, с.384. ГОСТ 17768-80.

Транспортировка ГФХ1, вып.2, с.385. По ГОСТ 14192-77 и ГОСТ 17768-80.

Срок годности 2 года.-

Прогноз ресурсов травы котовника крупноцветкового в КЧР

Фитоценозы с участием котовника крупноцветкового довольно значительны и обнаружены нами в КЧР в следующих районах:

1. Кубанское ущелье: в окрестности поселка Учкулана, Хурзука и Даутское ущелье.

2. Зеленчукский район: верховье реки Уруп и Архыз.

3. Тебердинское ущелье: Тебердинский заповедник, Домбай (почти до ледника Алибек).

4. Карачаевский район: перевал Гумбаши и его окрестности.

Во всех 4 районах запас воздушно-сухого сырья в тоннах составляет: биологический - 60 т; эксплуатационный - 48 т. Объем возможных ежегодных заготовок - 12 т. Результаты определения площадей зарослей и запасов надземной части котовника крупноцветкового приведены в табл. 5.

Таблица 5 - Площади зарослей и запасы надземной части котовника крупноцветкового в обследованных районах Карачаево-Черкесской Республики

Географические пункты Категория зарослей Общая площадь, га Запас воздушно-сухого сырья, т Объем возможной ежегодной заготовки, т

биологический эксплуатационный

Бассейн р. Кубань Учкулан [ 37 5,50±0,22 4,4+0,12 1,1+0,18

Хузрук I 70 10,5+0,11 8,4+0,10 2,1+0,13

Ущелье р. Даут I 82 12,3+0,17 9,8±0,21 2,5+0,21

Эпчинский перевал III 33 4,9+0,38 3,9±0,32 0,98+0,35

Верховье р. Те-берды Домбай II 38 5,7+0,46 4,3+0,21 1,08±0,31

Перевал Гумбаши Верхняя и Нижняя Мара I 49 _7,3±0,49 5,9+0,37 1,48±0,41

Архыз II 93 13,9±0,24 11,2±0,51 2,8+0,16

Всего 402 60,1±0,30 47,9±0,26 12,04±0,25

Для определения скорости восстановления надземной фитомассы после ее срезки были проведены опыты на площадках размером 20-25 м2 в Даутском ущелье, в верховье реки Даут выше поселка Даут. Надземную часть срезали на высоте 10-12 см от поверхности почвы в фазу цветения. Эксперимент включал четыре варианта режима срезки: I - ежегодная срезка; II - один год «отдыха»

после срезки; III — два года «Отдыха» после срезки; IV - три года «отдыха» после срезки надземной массы.

Проведенные нами опыты по изучению влияния режима заготовки сырья на состояние зарослей котовника крупноцветкового показали, что ежегодное скашивание отрицательно влияло на восстановление растений: экземпляры котовника были угнетены и отставали в росте на 20-30 см по сравнению с контрольными. Урожайность воздушно-сухой надземной массы при ежегодной срезке (вариант 1) составлял 120 г с площади 20 м2. в других вариантах опыта с «отдыхом» один, два и три года наблюдалось постепенное улучшение состояния растений и повышение накопления их фитомассы. Урожайность воздушно-сухой надземной массы составляла 120 г, 200 г и 280 г соответственно с площади 20 м2, а на контрольной площадке 300 г.

Таким образом, из основании данных наблюдений экспериментально установлено, что урожайность травы к. крупноцветкового на контрольных участках (300 г) и в варианте опыта с трехлетним отдыхом (280 г) почти одинаковы. Тем не менее, мы рекомендуем увеличить продолжительность перерыва в эксплуатации зарослей еще на один год в целях гарантии надежного восстановления надземной фитомассы, т.е. заготовку сырья в одном и том же массиве проводить лишь по истечении четырех лет после предыдущей, соблюдая при этом строгую очередность эксплуатации массивов. Поэтому объем возможных ежегодных заготовок рассчитан нами в размере ~ 25% от эксплуатационного запаса сырья. Таким образом, объем возможной ежегодной заготовки сырья к. крупноцветкового в КЧР составляет примерно 12 тонн.

Разработка рациональной технологии сухого экстракта из травы котовника крупн(¡цветкового и его стандартизация Исследования по разработки технологии сухого экстракта проводили с учетом производственных условий отечественного производителя растительных препаратов [ЗАО «Вифитех», г. Москва]. В качестве экстрагента был выбран этиловый спирт, 70%, как оптимальный для извлечения фенольных соединений и комплекса веществ липофильного характера. Поскольку в условиях

промышленного производства сухие экстракты зачастую изготавливаются в ограниченных количествах, строго рассчитанных и достаточных дом получения серии лекарственной формы, для экстрагирования растительного сырья, применяют, как правило, различные схемы с замкнутыми циклами. На рис. 4 представлена схема технологии экстракта котовника крупноцветкового, сочетающая реперколяцию с дробной мацерацией.

Рисунок 4- Структура замкнутого цикла экстракции и схема производства сухого экстракта котовника: а,Ь, с—загрузки сырья; I—IV— ступени экстракции сырья; Э — «свежий» экстрагент ;1.1-1.4;2.1-2.4;3.1-3.4- сливы.

Как видно из рис. 4 первые извлечения от сырья объединяются, а последующие проходят постадийное насыщение. Каждая загрузка подвергается четырехкратной обработке, а весь процесс может осуществляться в двух реакторах. Упаривание и сгущение извлечения проходит под вакуумом (Р=0,8110'5 Па), сушка - в вакуум-сушильном шкафу при температуре 80 °С. Нормы качества и методики стандартизации сухого экстракта разработаны в соответствии с требованиями действующей нормативной документации.

Таблица 6-Динамит экстрагирования сырья (травы) котовника крупно__цветкового в замкнутом 3-х ступенчатом цикле _

Загрузка сырья, кг Содержание ЭВ исходное, г Номер слива ЭВ в сливе, г Извлечено ЭВ на стадии, г Всего ЭВ из загрузки, г % от исходного содержания

2 300 1.1. 120 120 261 87,0

1.2. 72 72

1.3. 43 43

1.4. 26 26

2 300 2.1. 170 100 260 86,7

2.2. 115 60

2.3. 85 50

2.4. 50 50

2 300 3.1. 1 1М 1IV 268 89,3

3.2. 170 85

3.3. 93 43

3.4. 30 30

6 900 789 87,7

Изучение динамики экстракционного процесса (таб. 5) показывает, что эффективность выбранного нами метода экстракции составляет 87,7%, т.е. он приемлем для промышленного производства сухих экстрактов.

Стандартизацию сухого экстракта котовника мы предлагаем проводить по содержанию флавоноидов, (методика дифференциальной спектрофотомет-рии). На рис. 5 представлены УФ-спектры растворов экстракта котовника крупноцветкового и стандартного образца рутина, по которому мы предлагаем проводить расчет суммы флавоноидов.

Рисунок 5 —Дифференциальные спектры поглощения комплексов флавоноидов с алюминия хлоридом: 1-раствор экстракта котовника

|-П1'Я и И Ч Л ,ТМ1!-,1Щ • 1_ ПЛЛНМЛП ГУ! П|;М//НЛ

V----1".....—-----' - ------г--' ->-------

Найдено, что в одном образце экстракта котовника крупноцветкового содержится сумма флавоноидов 0,53+0,02 (%). Относительная погрешность предложенной нами методики (3,8%) является приемлемой для анализа суммарных препаратов.

Относительная погрешность предложенной нами методики является приемлемой для анализа суммарных препаратов.

Для установления норм содержания флавоноидов мы приготовили и проанализировали ряд образцов сухого экстракта котовника. Таблица 7- Содержание флавоноидов в сухом экстракте котовника круп-

ПоКаЗаТсль КачСи 1 Ба Номер образца

1 2 3 4 5

Содержание флавоноидов, % 0,55 0,58 0,52 0,57 0,54

Содержание флавоноидов в абсолютно сухом экстракте котовника крупноцветкового в пересчете на СО рутина - более 0,5% (табл. 7).

В анализе сухого экстракта котовника крупноцветкового нами применена так называемая «сквозная» стандартизация, когда раствор, предназначенный для количественного определения, сначала испытывается по разделу «подлинность», т.е. в УФ-спектре раствора приготовленного для количественного определения должен бьггь максимум поглощения при длине волны 405+3 им. Подлинность также устанавливается по качественным реакциям на фенолы и тер-пеноиды.

Изучение антимикробного действия котовника крупноцветкового

Для определения антимикробной активности травы к. крупноцветкового готовили водный настой: 5,0 г измельченной травы заливали 100 мл воды очищенной и нагревали на водяной бане 15 минут. Настой охлаждали 30 минут, фильтровали, объем доводили до 100 мл (настой № 1). Для сравнения нами использовался водный настой листьев эвкалипта (настой № 2), приготовленный аналогично. Определение антимикробной активности водного настоя котовника ктшноцветкового ппонодилк методом ди^^^зии в агар (способ «колодцев»).

Таблица 8 - Сравнительное изучение антимикробной активности различных лекарственных форм из травы котовника крупноцветкового и листьев эвкалипта

Штаммы микроорганизмов Диаметр зоны задержки роста тест-культур микроорганизмов, мм

Водный настой котовника Водный настой эвкалипта Сухой экстракт (спирт, 70%) котовника Сухой экстракт (спирт, 40%) котовника

Staphylococcus aureus (209) 14 17 14 16

Staphylococcus aureus (Макаров) 12 16 12 13

Staphylococcus aureus (Type) 12 16 12 12

üuipiij'iuwuvvuj vpiuwiuauu Wood-46 14 15 ¡5 12

Escherichia coli 675 - - - -

Escherichia coli 055 - 15 - -

Shigeila flexneri 266 14 17 15 15

Bacillus subtilis L2 - - И 12

Bacillus antfiracoides - 96 - - 11 11

Bacillus anihracoides-1 - - 11 12

Результаты проведенных микробиологических исследований свидетельствуют, что водные настои котовника крупноцветкового (опыт) и эвкалипта (контроль) обладают сходным спектром антимикробного действия в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus. В то же время антибактериальное действие в отношении энтеробактерий более сильное у водного настоя эвкалипта, поскольку он угнетает рост Shigella flexneri 266. У экстракта котовника спиртового 70% и 40% выявлено выраженное антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообра-зующих микроорганизмов рода Bacillus. В отношении энтеробактерий: у исследуемых веществ, выделенных из котовника, не выявлено антимикробного действия в отношении Escherichia coli 675 (табл. 8).

Фармакологическое изучение экстрактов котовника крупноцветкового Учитывая литературные данные о фармакологической активности котовника крупноцветкового (применение для лечения гнойных ран, болезней ротовой полости, респираторных инфекций) была исследована: острая токсичность, ра-

нозаживляющая и противовоспалительная активность экстрактов, полученных из этого вида сырья.

Проведенные исследования позволили сделать вывод о том, что суммарные экстракты № 1 (экстрагент 70% спирт) и № 2 (экстрагент 40% спирт) при пероральном введении согласно табуляции классов токсичности, относятся к 3 классу опасности — веществам малоопасным.

В ходе проведенных экспериментов установлено, что эти сухие экстракты котовника крупноцветкового в дозе 30 мг/кг проявляют ранозаживляющую и противовоспалительную активность.

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. В результате проведенных экспедиционных исследований в 4-х основных регионах КЧР выявлены фитоценозы с участием котовника крупноцветкового. Определен объем возможных ежегодных заготовок сырья котовника крупноцветкового, который составил 12 тонн воздушно-сухого сырья.

2. Для сырья котовника крупноцветкового (трава) выявлены характерные ана-томо-диагностические признаки и установлены товароведческие показатели сырья: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной и экстрактивные вещества.

3. Проведено фитохимическое изучение основных групп биологически активных соединений травы котовника крупноцветкового:

- методом ВЭЖХ впервые идентифицировано 9 фенольных соединений: дигидрокверцетин, гиперозид, рутин, дикумарин, кумарин и кислоты: салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая.;

- спектрофотометрическим методом установлено содержание флавонои-дов в различных частях растения: корни - 0,024±0,002%, стебли -0,091±0,002%, листья - 0,217±0,003%, соцветия - 0,134±0,002%, надземная часть (трава) - 0,165±0,003%;

- методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный состав эфирного масла котовника крупноцветкового. В эфирном масле

идентифицировано 38 компонентов, из которых основными являются 1,8-цинеол (39,9%) и кариофшшен-оксид (32,83%), составляющие около 73% эфирного масла;

- методом колоночной жидкостной хроматографией был изучен качественный и количественный состав аминокислот. Установлено наличие 15 аминокислот, девять из которых являются незаменимыми - валин, треонин, метио-нин, изолейцин, лейцин, лизин, фенилаланин, гистидин и аргинин.

- полуколичественным спектральным анализом установлен макро- и микроэлементный состав травы и корня котовника крупноцветкового. Использованная методика позволила определить 27 элементов в траве и 32 в корнях. Из них эссенциальными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальнымими: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

4. Предложена технологическая схема промышленного производства сухого экстракта из травы котовника крупноцветкового на основе использования 70% спирта этилового с эффективностью извлечения экстрактивных веществ 87,7%. Разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавоноидов в сухом экстракте. Установлено, что содержание суммы фла-вовдидов в экстракте в пересчете на рутин должно быть не менее 0,5 %.

5. Установлено что настой травы котовника крупноцветкового обладает выраженным антимикробным действием в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и по своему действию не уступает аналогичному настою из листьев эвкалипта. Для настоя травы котовника крупноцветкового характерно угнетение роста Shigella sonnei. Для двух экстрактов травы котовника крупноцветкового (70% и 40% спирт) выявлено выраженное антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus.

6. В ходе проведенных фармакологических экспериментов на лабораторных животных установлено, что сухке экстракты (70% к 40% спирт зтиловыи.

травы котовника в дозе 30 мг/кг проявляют ранозаживляющую и противовоспалительную активность.

7. По результатам исследований разработана ФСП «Котовника крупноцветкового трава цельная» и ФСП «Травы котовника крупноцветкового экстракт сухой», позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид отечественного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ для расширения ассортимента и структуры выпускаемой ЗАО «Вифитех» (Россия) продукции.

Список опубликованных работ;

1. Аминокислотный и минеральный состав Nepeta grandiflora // Химия природных соединений. - 2007. - №3. - С. 303 (соавт. Челомбитько В.А.).

2. Анатомические особенности строения вегетативных органов котовника крупноцветкового /'/' Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы...- Пятигорск, 20ÚÍ. - С. 39-40.

3. Виды рода Nepeta L. во флоре Карачаево-Черкесской Республики // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы ... — Пятигорск: ПятГФА, 2001.— С. 42-43 (соавт, Челомбитько В.А., Байрамукова Ф.А.).

4. Изучение антимикробной активности травы котовника крупноцветкового (Nepeta grandiflora Bieb.) // Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции: материалы 62-й межрегион. конф. по фармации и фармакологии (62; 2007; Пятигорск). - Пятигорск: ПятГФА, 2007. - С. 529-530 (соавт. Челомбитько В.А., Клишина И.И.).

5. Компонентный состав эфирного масла надземной части Nepeta grandiflora Bieb. (сем. Lamiaceae) // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (58; 2003; Пятигорск): материалы...- Пятигорск, 2003. - С. 8889 (соавт. Челомбитько В.А.).

6. Котовник крупноцветковый - прогноз на использование // Регион, конф. по фармации, фармакологии й подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): материалы... — Пятигорск, 1998. — С. 30-31 (соавт. Койчуева A.C.).

7. Макро- и микроэлементы сырья котовника крупноцветкового // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): материалы...- Пятигорск, 2002. - С. 29-31 (соавт. Мануков А.Н.).

8. Пищевые растения семейства яснотковых // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск): материалы..Пятигорск, 1999. - С. 6-7 (соавт. Байрамукова Ф.А., Койчуева A.C., Челом-битько В.А.).

9. Технология и стандартизация сухого экстракта котовника крупноцветкового // Известия вузов. Сев.-Кавк. регион. Естественные науки. - 2007. - № 3. -С. 83-85 (соавт. Челомбитько В.А., Зилфикаров И.Н.).

10.Фармакогкостическое исследование котовника крупноцветкового // ^Симия в технологии и медицине: материалы Вссоос. науч. — пракг. кенф. — fviaxa4KS-ла, 2002. - С. 154-156 (соавт. Челомбитько В Л.).

ХАЧИРОВА ФАТИМА СЕИТОВНА

ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ КОТОВНИКА КРУПНОЦВЕТКОВОГО (НЕРЕТА СКЛТЧВИЪОКЛ В1ЕВ.) ФЛОРЫ КАРАЧАЕВО-ЧЕРКЕССКОЙ РЕСПУБЛИКИ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание учёной степени кандидата фармацевтических наук

Подписано к печати 23.11.2009 Формат бумаги 60x84 1/16 Бумага книжно-журнальная. Печать ротапринтная. Усл. печ. л. 1,0. Тираж 100 экз. Заказ №

Государственное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Пятигорская государственная фармацевтическая академия Федерального агентства по здравоохранению и социальном)' развитию» (357532, г. Пятигорск, пр. Калинина, 11).

 
 

Оглавление диссертации Хачирова, Фатима Сеитовна :: 2009 :: Пятигорск

Введение.

ГЛАВА 1 БОТАНИЧЕСКАЯ, БИОХИМИЧЕСКАЯ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ВИДОВ РОДА NEPETA (КОТОВНИК) СЕМ. LAMIACEAE (ЯСНОТКОВЫЕ).:.

1.1 Систематическое положение сем. Lamiaceae среди цветковых растений.

1.2 Современное состояние системы рода Nepeta и его положение в сем. Lamiaceae.

1.3 Распространение видов рода Nepeta в мировой флоре.

1.4 Культура некоторых видов рода Nepeta.

1.5 Получение новых гибридов котовника для селекции.

1.6 Химический состав видов рода Nepeta.

1.6.1 Содержание и состав эфирных масел видов рода Nepeta.

1.6.2 Содержание других биологически активных веществ в видах рода Nepeta (Котовник).

1.7 Использование видов рода Nepeta в народной и научной медицине.

1.7.1 Использование в народной медицине.

1.7.2 Использование в научной медицине.

1.8 Использование видов Nepeta в народном хозяйстве.

ВЫВОДЫ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 2 ФАРМАКОГНОСТИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТРАВЫ (СЫРЬЯ) КОТОВНИКА КРУПНОЦВЕТКОВОГО.

2.1 Морфолого-анатомическое изучение надземной части котовника крупноцветкового (Nepeta grandiflora).

2.1.1 Морфологическое изучение котовника крупноцветкового.

2.1.2 Анатомическое изучение вегетативных органов котовника крупноцветкового.

2.2 Фитохимический анализ травы котовника крупноцветкового.

2.2.1 Изучение качественного состава основных групп Б АВ1 сырья котовника крупноцветкового.:.

2.2.2 Изучение количественного состава основных групп БАВ сырья котовника крупноцветкового.

2.2.2.1 Количественное определение кислоты кофейной в траве котовника крупноцветкового.

2.2.2.2 Количественное определение флавоноидов в траве котовника крупноцветкового

2.2.2.3 Аминокислотный состав травы котовника крупноцветкового.

2.2.2.4 Макро- и микроэлементный состав травы и корней котовника крупноцветкового.

2.2.2.5 Изучение компонентного состава эфирного масла котовника крупног{веткового.

2.2.3 Определение числовых показателей травы котовника крупноцветкового.

2.3 Прогноз природных ресурсов травы котовника крупноцветкового в Карачаево-Черкесской Республике.

2.3.1.Выявление площадей зарослей и запаса котовника. выводы по главе:.

ГЛАВА 3 РАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ СУХОГО ЭКСТРАКТА ИЗ ТРАВЫ КОТОВНИКА КРУПНОЦВЕТКОВОГО И ЕГО СТАНДАРТИЗАЦИЯ.

3.1 Изложение технологического процесса.

3.2 Разработка методик стандартизации сухого экстракта котовника крупноцветкового.'.

3.3 Характеристика готового продукта.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.

ГЛАВА 4 ИЗУЧЕНИЕ АНТИМИКРОБНОГО ДЕЙСТВИЯ ВОДНОГО

НАСТОЯ И ЭКСТРАКТОВ КОТОВНИКА КРУПНОЦВЕТКОВОГО.

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ:.

ГЛАВА 5 ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИЗУЧЕНИЕ СУХИХ ЭКСТРАКТОВ КОТОВНИКА КРУПНОЦВЕТКОВОГО.

5.1 Материалы и методы исследования.

5.2 Изучение острой токсичности сухого экстракта травы котовника крупноцветкового.

5.3 Изучение ранозаживляющего действия экстракта котовника крупноцветкового.!.

5.4 Изучение противовоспалительной активности.:

ВЫВОДЫ ПО ГЛАВЕ.

 
 

Введение диссертации по теме "Фармацевтическая химия и фармакогнозия", Хачирова, Фатима Сеитовна, автореферат

Актуальность проблемы. Одним из приоритетных направлений поиска новых растительных источников биологически активных веществ является изучение малоизученных дикорастущих видов флоры России, запасы которых еще достаточно велики. Такой подход будет обеспечивать долгосрочную надежную сырьевую базу, позволит рационально использовать эти растительные ресурсы и даст возможность расширить ассортимент лекарственного растительного сырья и лекарственных средств на их основе.

Основным источником для поиска новых лекарственных растений является арсенал средств народной медицины. С этой точки зрения особый интерес представляют растения сем. Lamiaceae (яснотковые). Многие виды из известных родов Mentha, Salvia, Thymus, Melissa, Leonurus, Scutellaria, Rosmarinum, Hyssopus, Lavandula и др. уже давно прочно вошли в арсенал официального лекарственного растительного сырья не только во многих зарубежных странах, но и в России.

Одним из таких перспективных и недостаточно изученных растений является котовник крупноцветковый (Nepeta grandiflora Bieb.), который во флоре Карачаево-Черкесской Республики (КЧР) является самым распространенным видом в сем. яс-нотковых. У народов КЧР котовник крупноцветковый используют как отхаркивающее средство. Траву в виде чая пьют как общеукрепляющее средство и при анемии.

Недостаточная фармакогностическая и фармакологическая изученность этого л интересного растения не позволяет до сих пор использовать его в научной медицине. В связи с этим, комплексное изучение сырья (травы) к. крупноцветкового является перспективным и актуальным.

Цель и.задачи исследования.

Целью нашей работы является фармакогностическое изучение сырья (травы) котовника крупноцветкового, выявление запасов сырья- на территории КЧР; выявление возможности производства экстракционных препаратов и изучение их фармакологического действия, а также стандартизация сырья и сухих экстрактов на его основе. 4

Для достижения поставленной цели должны быть решены следующие задачи:

1. Выявить характерные места произрастания котовника крупноцветкового и определить его запасы сырья на территории Карачаево-Черкесской Республики.

2. Изучить качественный и количественный состав основных групп биологически активных веществ (БАВ) травы котовника крупноцветкового.

3. Разработать методы нормирования подлинности (выявление характерных анатомо-диагностических признаков) и качества (содержания основных групп БАВ) сырья (травы) котовника крупноцветкового.

4. Обосновать технологию сухого экстракта и разработать нормы его качества.

5. Провести фармакологические исследования водного настоя и водно-спиртового экстракта котовника крупноцветкового.

6. Составить соответствующую нормативную документацию (НД) на траву котовника крупноцветкового и экстракт сухой.

Научная новизна. В результате экспедиционных обследований основных горных районов КЧР выявлены места произрастания и определены ориентировочные запасы сырья котовника крупноцветкового. Установлено, что объем возможных ежегодных заготовок на территории КЧР составляет около 12 т. воздушно-сухого сырья.

Методом ВЭЖХ в траве котовника крупноцветкового (экстрагент - спирт этиловый 70%) впервые идентифицированы и количественно определены 9 фенольных соединений: дигидрокверцетин, гиперозид, рутин, салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая кислоты, дикумарин, кумарин. Установлено, что доминирующими соединениями в полифенольном комплексе являются^ кислота кофейная (24,16%) и кислота салициловая (22,66%).

Методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный химический состав эфирного масла котовника крупноцветкового. Идентифицированы 38 соединений, среди которых доминирующими являются бициклический монотерпен 1,8-цинеол (39,91%) и сесквитерпен кариофиллен-оксид (32,83%).

Впервые спектрофотометрическим методом установлено содержание флаво ноидов в различных частях растения: наибольшее содержание обнаружено в листьях до 0,217%), наименьшее — в корнях (0,024%); в траве содержание флавоноидов может достигать 0,165%.

Впервые методом колоночной жидкостной хроматографией изучен аминокислотный состав травы котовника крупноцветкового, который представлен 15 аминокислотами, из которых 9 (валин, треонин, метеонин, изолейцин, лейцин, лизин, фе-нилаланин, гистидин, аргинин) являются незаменимыми.

Впервые полуколичественным спектральным анализом изучен макро- и микроэлементный состав травы котовника крупноцветкового. В траве определено содержание 27 элементов. Из них эссенциальными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром,, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальными: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

Разработана стандартизация сырья (травы) котовника крупноцветкового, определяющая показатели подлинности и доброкачественности сырья.

Предложена оптимальная технология сухого экстракта (экстрагент — спирт этиловый 70%) из травы к. крупноцветкового и методы его стандартизации. Разработана методика спектрофотометрического количественного определения суммы флавоноидов в сухом экстракте. Содержание флавоноидов в пересчете на рутин t должно быть не менее 0,5%.

Фармакологический скрининг водного настоя травы (I) котовника крупноцветкового и сухого экстракта (спирт этиловый 70%, II) выявили антимикробную (I), ранозаживляющую (II) и противовоспалительную (II) виды активности.

Практическая значимость. Выявлена возможность использования нового вида отечественного сырья — травы котовника крупноцветкового для получения БАВ, обладающих противомикробным, ранозаживляющим и противовоспалительным действием.

У водного настоя травы котовника крупноцветкового (10:200) выявлено ан> тимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus. У экстрактов (спирт этиловый 70% и 40%) кроме отмеченного, выявлено также антимикробное действие и на спорообразующие микроорганизмы рода Bacillus.

Фармакологический скрининг в опытах на животных позволил установить, что сухие экстракты (спирт этиловый 70% и 40%) в дозе 30 мг/кг проявляли рано заживляющую и противовоспалительную активность.

Внедрение результатов исследования в практику. Подготовлены проекты

ФСП «Трава котовника крупноцветкового» и ФСП «Экстракт травы котовника крупноцветкового сухой» (подтверждено актами внедрения от 09.04.07), позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид лекарственного растительного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ, для расширения ассортимента и структуры выпускаемой продукции на ЗАО «Вифитех» (Россия).

Апробация и публикация результатов исследования. Основные положения диссертационной работы доложены на 53-й, 54-й, 56-й, 57-й и 58-й региональной конференции по фармации, фармакологии и подготовке кадров (Пятигорск, 1998, 1999, 2001, 2002, 2003 гг.), материалах Всероссийской научно-практической конференции «Химия в технологии и медицине» (Махачкала, 2002), материалах научно-практической конференции «Современные принципы и технологии разработки лекарственных средств» (Москва, 2006). По материалам диссертации опубликовано 10 печатных работ, из них 2 статьи в журналах, рекомендуемых ВАК.

Связь задач исследования с проблемным планом фармацевтических наук. Диссертационная, работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ГОУ ВПО Пятигорской ГФА (номер государственной регистрации 01.200.112164) в рамках темы «Разработка лекарственных средств и их рациональное использование», согласно договору 016/146/050 между Министерством здравоохранения и социального развития РФ и Пятигорской ГФА.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты изучения распространения котовника крупноцветкового на территории КЧР, определение его запасов и объема возможных ежегодных загото-> вок.

2. Результаты фотохимического изучения содержания основных биологически активных веществ в траве к. крупноцветкового.

3. Данные по изучению подлинности (анатомо-диагностические признаки сырья) и качества (содержание флавоноидов) травы котовника крупноцветкового.

4. Методики качественного и количественного состава сырья (травы) котовника крупноцветковогб и сухого экстракта (спирт этиловый 70%).

5. Результаты доклинического изучения водного настоя (1:20) и сухого экстракта (спирт этиловый 70%) из травы котовника крупноцветкового по выявлению антимйкробного, ранозаживляющего и противовоспалительного действия.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 110 страницах текста в компьютерном наборе, состоит из введения, обзора литературы, и четырёх глав экспериментальных исследований, общих выводов, списка литературы, включающего 224 источника, в том числе 36 на иностранном языке; содержит 17 таблиц, 14 рисунков и приложение.

 
 

Заключение диссертационного исследования на тему "Фармакогностическое изучение котовника крупноцветкового (NEPETA GRANDIFLORA BIEB.) флоры Карачаево-Черкесской республики"

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

1. 1. В результате проведенных экспедиционных исследований в 4-х основных регионах КЧР выявлены фитоценозы с участием котовника крупноцветкового. Определен объем возможных ежегодных заготовок сырья котовника крупноцветкового, который составил 12 тонн воздушно-сухого сырья.

2. Для сырья котовника крупноцветкового (трава) выявлены характерные анатомо-диагностические признаки и установлены товароведческие показатели сырья: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в 10% растворе кислоты хлористоводородной и экстрактивные вещества.

3. Проведено фитохимическое изучение основных групп биологически активных соединений травы котовника крупноцветкового:

- методом ВЭЖХ впервые идентифицировано 9 фенольных соединений: ди-гидрокверцетин, гиперозид, рутин, дикумарин, кумарин и кислоты: салициловая, хлорогеновая, кофейная, феруловая;

-„ спектрофотометрическим методом установлено содержание флавоноидов в различных частях растения: в корнях - 0,024±0,002%, стеблях - 0,091±0,002%, ли стьях - 0,217±0,003%, соцветиях - 0,134±0,002%, надземной части (траве) -0,165±0,003%;

- методом хромато-масс-спектрометрии впервые установлен компонентный состав эфирного масла котовника крупноцветкового. В эфирном масле идентифицировано 38 компонентов, из которых основными являются 1,8-цинеол (39,9%) и ка-риофиллен-оксид (32,83%), составляющие около 73% эфирного масла;

- методом колоночной жидкостной хроматографией был изучен качественный и количественный состав аминокислот. Установлено наличие 15 аминокислот, девять из которых являются незаменимыми - валин, треонин, метионин, изолейцин, лейцин, лизин, фенилаланин, гистидин и аргинин.

- полуколичественным спектральным анализом установлен макро- и микроэлементный состав травы и корня котовника крупноцветкового. Использованная методика позволила определить 27 элементов в траве и 32 в корнях. Из них эссенци-альными являются: железо, кобальт, медь, цинк, марганец, хром, кальций, магний, молибден; условно-эссенциальнымими: бор, ванадий, кремний, никель; биогенными: калий, натрий.

4. Предложена технологическая схема промышленного производства сухого экстракта из травы, котовника крупноцветкового на основе использования спирта этилового 70% с эффективностью извлечения экстрактивных веществ 87,7%. Разработана методика спектрофотометрического определения суммы флавонои-дов, в сухом экстракте. Установлено, что содержание суммы флавоноидов в экстракте в пересчете на рутин должно быть не менее 0,5%.

5. Установлено, что настой травы котовника крупноцветкового обладает выраженным антимикробным действием в отношении грамположительных кокков из рода

Staphylococcus и по своему действию не уступает аналогичному настою из листь ев эвкалипта. Для настоя травы котовника крупноцветкового характерно угнетение роста Shigella sonnei. Для двух экстрактов травы котовника крупноцветкового (спирт этиловый 70% и 40%) выявлено выраженное антимикробное действие в отношении грамположительных кокков из рода Staphylococcus и спорообразую-щих микроорганизмов рода Bacillus.

6. В ходе проведенных фармакологических экспериментов на лабораторных животных установлено, что сухие экстракты (спирт этиловый 70% и 40%) травы котовника крупноцветкового в дозе 30 мг/кг проявляют ранозаживляющую и противовоспалительную активность. t

7. По результатам исследований разработана ФСП «Котовника крупноцветкового трава цельная» и ФСП «Травы котовника крупноцветкового экстракт сухой», позволяющие использовать в дальнейшем траву котовника крупноцветкового как новый вид отечественного сырья и сухой экстракт как комплекс БАВ для расши-ренйя ассортимента и структуры выпускаемой ЗАО «Вифитех» (Россия) продукции.

 
 

Список использованной литературы по фармакологии, диссертация 2009 года, Хачирова, Фатима Сеитовна

1. Аббасов, P.M. Обследование эфиромасличных растений Лачинского и Кель-баджарского районов Азербайджанской ССР / P.M. Аббасов, Н.М. Исмаилов // Изв. АН АзССР. Сер. биол. и с.-х. наук. 1959. - № 3. - С. 9-17.

2. Авдеева, Е.В. Изучение некоторых фенольных и терпеноидных соединений, используемых в стандартизации лекарственных растений: автореф. дис. . канд. фармац. наук: 15.00.02/Е.В. Авдеева-М., 1997.-23 с.

3. Алания, М.Д. Предварительный анализ флоры Грузии на содержание гликози-дов, флавоноидов, сапонинов / М.Д. Алания // Биологически активные вещества флоры Грузии. Тбилиси, 1979. - С. 60-86.

4. Алиев, Р.К. Изучение сердечно-сосудистых средств из лекарственной флоры Азербайджана / Р.К. Алиев // Изучение и использование лекарственных растительных ресурсов СССР. Л.: Медицина, 1964. - С. 301-309.

5. Алимбаева, П.К. Дикорастущие лекарственные растения Киргизии / П.К. Алимбаева, A.B. Гончарова. Фрунзе, 1971. - 98 с.

6. Алчакова, З.М. Использование некоторых растений в традиционной медицине Карачаево-Черкесии / З.М. Алчакова, A.C. Койчуева // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): материалы. .- Пятигорск, 1998. С. 3-5.

7. Анненков, H.A. Ботанический словарь / H.A. Анненков СПб., 1878.- С. 646.

8. Антимикробные-вещества высших растений / В.Г. Дроботько и др. Киев:1. Наук. Думка, 1958. 336 с.

9. Антифунгальные свойства высших растений. Новосибирск: Наука, 1969.252 с.

10. П.Артюшенко, З.Т. Атлас по описательной морфологии высших растений: Плод / З.Т. Артюшенко Л.: Наука, 1986. - 392 с.

11. Барнаулов, О.Д. Фитотерапия больных легочным туберкулезом / О.Д. Барнау-лов СПб.: Весь, 1999. - 416 с.

12. Белова, Е.А. О культуре пустырника туркестанского и котовника лимонного / Е.А. Белова. Труды АН Каз.ССР. - 1954. - № 2. - С. 67-72.

13. Белоусова, Л.С. Редкие растения мира / Л.С. Белоусова, Л.В. Денисова. М.: Лесн. пром-ть, 1983.-344 с.

14. Биохимия фенольных соединений / под ред. Дж. Харборна. М.: Мир, 1968. -452 с.

15. Бодруг, М.В. Дикорастущие эфиромасличные растения Молдавии / М.В. Бод-руг. Кишинёв, 1981. - 142 с.

16. Борисова, H.A. Методические указания по учёту запасов и составлению карт распространения« лекарственных растений / H.A. Борисова. Л., 1961. — 42 с.

17. Буданцев, А.Л. Конспект рода Nepeta (Lamiaceae) / А.Л. Буданцев // Бот. журн. 1993. - Т. 78, вып. 1. - С. 91-105.

18. Велпетин новый природный гликозид из Nepeta velutina / Г.Г. Запесочная и др. // Химия природ, соединений. - 1991. - № 6. - С. 777-781.4

19. Воробьева, Ф.М. Флора Тебердинского заповедника (сосудистые растения) / Ф.М. Воробьева, В.Н Кононов // Тр. Теберд. заповедника. — Ставрополь:

20. Ставр. книж. изд-во, 1991. Вып. XIII. —137 с.

21. Выделение и анализ природных биологически активных веществ / Е.А. Краснов и др.. Томск: изд-во Том. мед. ин-та, 1987. — 184 с.

22. Галкин, М.А. О "находке Nepeta grandiflora Bieb. на территории Пятигорья / М.А. Галкин, П.М. Мотренко // Изв. Сев-Кавк. науч. центра высш. школы. — 1978. — № 1. С. 91.

23. Галушко, А.Н. Флора Северного Кавказа: Определитель / А.Н. Галушко. — Ростов-н/Д: Изд.Рост, ун-та, 1978. Т. 3. - 320 с.

24. Гатанова, В.И. К предварительному физико-химическому исследованию эфирного масла котовника крупноцветкового (Nepeta macrantha Fisch) / В.И. Гатанова, Л.А. Максанова // Успехи изучения лекарственных растений Сибири. Томск, 1979. - С. 37-38.

25. Гелла, Э.В. Полифенолы некоторых представителей семейства губоцветных / Э.В. Гелла, В.И Вавилов, И.П. Бешко // Симпоз. по фенольн. соединениям (2;1970; Алма-Ата): тез. докл. . Алма-Ата, 1970. - С. 22.

26. Георгиевский, В.П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгиевский, Н.Ф. Комиссаренко, С.Е. Дмитрук. Новосибирск: Наука, 1990.-336 с.

27. Глухов, М.М. Медоносные растения / М.М. Глухов. М.: Сельхозгиз, 1974. -298 с.

28. Горяев, М.И. Эфирные масла флоры СССР / М.И. Горяев. Алма-Ата: Изд-во АНКаз. ССР, 1952.-380 с.

29. Государственная фармакопея СССР: в 2 т. 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987-1989.-Т. 1,2.

30. Горст, Н. Материалы для исследований народных лекарственных растений Томской области / Н. Горст // Тр. Томск, о-ва естествоиспытателей и врачей. — 1894.-№4.-С. 340-386.

31. Гриффит, В. Витамины, травы, минералы и пищевые добавки: справочник : пер. с англ. / В. Гриффит. М.: ФАИР-ПРЕСС, 2000. - 1056 с.

32. Гроссгейм, A.A. Растительные богатства Кавказа / A.A. Гроссгейм. 2-е изд. т М.: Сов. Наука, 1952. - 632 с.

33. Губанов, И.А. Лекарственные и технические растения Афганистана / И.А. Губанов, Н.И. Либизов // Раст. ресурсы. 1970. - Т. 6, вып. 1. - С. 128 - 137.

34. Гублер, Е.В. Термические ожоги и ожоговая болезнь / Е.В. Гублер // Моделирование заболеваний. М., 1993. - С. 59-78.

35. Гурвич, H.Л. Изучение некоторых ценных клонов котовника закавказского и их семенного потомства / Н.Л. Гурвич, Ф.М. Мамедалиева, С.С. Мишурова // Изд. АН Аз.ССР. Сер. биол. наук. 1966. - № 2. - С. 31-33.

36. Гурвич, Н.Л. Опыт классификации эфиромасличных растений / Н.Л. Гурвич // Тр. БИН АН СССР. Сер. 5. 1960. - Вып. 6. - С. 7-126.

37. Гуськова, И.В. К изучению перспективных эфироносов Алтайской флоры / И.В. Гуськова // Растительные ресурсы Сибири, Урала и Дальнего Востока. -Новосибирск, 1965. С. 202-207.

38. Дадобоева, О. Словарь научных и местных названий лекарственных растений Северного Таджикистана / О. Дадобоева. Душанбе: Ирфон, 1972. - 132 с.

39. Делова, Г.В. Антибактериальные и антифунгальные свойства эфирных масел некоторых видов губоцветных / Г.В. Делова, И'.Н. Гуськова // Комплексное изучение полезных растений Сибири. Новосибирск, 1984. - С. 131-146.

40. Денисова, Г.А. Некоторые дикорастущие эфирномасличные растения острогов >

41. Ферганского хребта / Г.А. Денисова, К.И. Голубева // Тр. бот. ин-та им. В.Л. Комарова АН СССР. Сер. 5.: Растительное сырье. М.; Л., 1960. - Вып. 6. - С.217.225. >

42. Дикорастущие полезные растения России / отв. ред. А.Л. Буданцев, Е.Е. Леси-овская. СПб.: Изд-во СПХФА, 2001. - 663 с.

43. Ерёмина, Н.К. Основные дикорастущие полезные растения Таджикистана / Н.К. Ерёмина. Душанбе, 1983. - 148 с.

44. Жизнь растений / под ред. А.Л. Тахтаджяна. М.: Просвещение, 1981. — Т. 5, ч. 2.-512 с.

45. Ибрагимов, Ф.И. Основные лекарственные средства китайской медицины / Ф.И. Ибрагимов, B.C. Ибрагимова. М.: Медгиз, 1960. - 412 с.

46. Иванов, А.Л. Конспект флоры Ставрополья / А.Л. Иванов. Ставрополь: Изд-воСГУ, 2001. -Í21 с.

47. Иванова, Б.И. Интродукция в Молдавской ССР эфирномасличных и пряно-ароматических растений для винодельческой промышленности / Б.И. Иванова // Совещание по вопросам изучения и освоения растительных ресурсов СССР. -Новосибирск, 1968.-С. 166-167.

48. Идентификация и биологическая активность летучих органических веществ, выделяемых растениями и насекомыми / Е.А. Парамонов и др. // Химия природ. соединений. 2000. - № 6. - С. 466-467.

49. Иллюстрированный определитель растений Карельского перешейка / под ред. А.Л. Буданцева и Г.П. Яковлева. СПб.: Спец. лит: изд-во СПХФА, 2000. -478 с.

50. Интродукция лекарственных, ароматических и технических растений / под *ред. В,С. Соколова, Н.Ф. Сацыперова. М.; Л.: Наука, 1965. - 425 с.

51. Исследование триглицеридов растений сем. Lamiaceae методом ВЭЖХ / В.И: Дейнека и др. // Химия природ, соединений. 2004. - № 5. - С. 341 - 343.

52. Кадаев, Г.Н. Лекарственные растения Карачаево-Черкессии / Г.Н. Кадаев. —1. Черкесск. -1963.-288 с.

53. Камелин, Р.В. Флорогенетический анализ естественной флоры горной Средней Азии / Р.В. Камелин. Л.: Наука, 1973. - 356 с.

54. Капелев, О.И. Антимикробное действие эфирного масла котовника лимонного / О.И. Капелев, Н.М. Макарчук // Респ. конф. по мед. ботанике (1; 1984; Киев): тез. докл. Киев, 1984. - С. 165.

55. Каррыев, М.О. К химическому исследованию и применению некоторых эфироносов флоры Туркмении / М.О. Каррыев, М.В. Артемьева // Изв. АН ТССР. Сер. биол. наук. 1970. - № 4. - С. 20-24.

56. Каррыев, М.О. Фармакохимия некоторых эфирномасличных растений флоры

57. Туркмении / М.О. Каррыев. Ашхабад, 1973. - 153 с.

58. Клышев, Л.К. Флавоноиды растений / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.

59. Колалите, М.Р. Динамика ультраструктуры головчатых железистых волосков Nepeta cataría и Dracocephalum moldavica (Lamiaceae) в связи с синтезом гли-копротеинов / М.Р. Колалите // Бот. журн. 1994. — Т. 79, вып. 9. - С. 34-42.

60. Колалите, М.Р. Распределение эфиромасличных желёзок на листьях Nepeta cataría L. и Dracocephalum moldavica L. / М.Р. Колалите // Раст. ресурсы. —1994. Т. 30, вып. 1 - 2. - С. 120-125.

61. Компонентный состав эфирных масел некоторых видов рода Nepeta L., выращиваемых в Ленинградской обл. и их антимикробная активность / И.В. Троп-никова и др. // Раст. ресурсы. 1999. - Т. 35, вып. 3. - С. 1-10.

62. Кортиков, В.Н. Секреты целебных трав: Популярная энциклопедия / В.Н. Кортиков, A.B. Кортиков. Минск: Белмаркет, 1995. - Т. 1. — 544 с.

63. Крылова, И.Л. Методические указания по изучению запасов дикорастущих >лекарственных растений / И.Л. Крылова, А.И. Шретер. — М., 1971. 31 с.

64. Кубрак, М.Н. Л^ктоны эфирного масла Nepeta transcaucasica и N. sibirica / М.Н. Кубрак, Д.П. Попа // Химия природ, соединений. 1980. - № 3. - С. 421— 421.

65. Кубрак, М.Н. Наследование химических признаков в семенном потомстве котовника Мусина / М.Н. Кубрак, A.C. Мунтян // Основные направления научных исследований по интенсификации эфиромасличного производства. — Симферополь, 1985. Ч. 2. - С. 81-82.

66. Кудинов, М.А. Новые эфиромасличные растения в Белоруссии / М.А. Куди-нов, Л.В. Кухарева, B.C. Линник. Минск, 1984. - 60 с.

67. Культура котовника закавказского — перспективного конкурента розовой герани / Н.Л. Гурвич и др. // Тр. IV Межд. конгр. по эфирным маслам. -Тбилиси, 1968. Т. II. - С. 44-45.

68. Кутателадзе, Ш. Дикорастущие эфироносы Грузии / Ш. Кутателадзе, И. Ла-чашвили. Тбилиси: Сабчота Сакартвело, 1968. - 51 с.

69. Кучеров, Е.В. Медоносные растения Башкирии / Е.В. Кучеров, С.М. Сираева. -М., 1980.- 128 с.

70. Лавренов, В.К. Полная энциклопедия лекарственных растений / В.К. Лавре-нов, Г.В. Лавренова. СПб.; М.: Нева, Олма-Пресс, 1999. - Т. 1. - 736 с.

71. Левчук, А.П. Кровоостанавливающие и маточные средства / А.П. Левчук // Тр. науч. хим.-фармац. ин-та. 1927. - Вып. 15. - С.82.

72. Лекарственные растения^ Азербайджана / И.А. Дамиров и др.. Баку: Маа-риф, 1983.-320 с.

73. Лекарственные растения Киргизии и перспективы их использования / В.И.

74. Вандышева и др.. Фрунзе, 1977. - 66 с.

75. Лупу, К.Г. Котовник кошачий ценное эфирномасличное растение / К.Г. Лупу

76. Актуальные вопросы изучения и использования эфирномасличных растений и эфирных масел. Симферополь, 1980. - С. 110.

77. Лупу, К.Г. Рост, развитие и эфирномасличность котовника кошачьего в Молдавии / К.Г. Лупу, М.В. Бодруг // Новые пищевые и кормовые растения в народном хозяйстве. — Киев, 1981. — Ч. 1. — С. 32—33.

78. Маковкина, А.И. Котовник закавказский (Nepeta transcaucasica Grossh.) источник гераниола, цитронеллола и цитраля / А.И. Маковкина // Тр. IV Межд. конгр. по эфирным маслам. - Тбилиси, 1968. - Т. II. - С. 97-98.

79. Маковкина, А.И. Перспективное эфирномасличное растение котовник за*кавказский / А.И. Маковкина // Раст. ресурсы. 1965. - Т. 1, вып. 3. - С. 416419.

80. Максимов, О.Б. Полифенолы дальневосточных растений / О.Б. Максимов, Н.И. Кулеш, П.Г. Горовой. Владивосток: Дальнаука, 2002. - 332 с.

81. Максютина, Н.П. Методы выделения и исследования флавоноидных соединений / Н.П. Максютина, В.И. Литвиненко // Фенольные соединения и их физиологические функции. М., 1968. - С. 7-26.

82. Мамедалиева, Ф.М. Изучение некоторых особенностей ценных клонов Nepeta transcaucasica A. Grossh. / Ф.М. Мамедалиева // Уч. зап. Азер. гос. ун-та. Сер. биол. наук. 1965. - № 2. - С. 55-61.

83. Махлаюк, В.П. Лекарственные растения в народной медицине / В.П. Махлаюк. Саратов: Поволжск. книжное изд-во, 1993. - 544 с.

84. Мацку, Я. Атлас лекарственных растений / Я. Мацку, И. Крейча. Братислава: беда, 1981.-464 с.

85. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М.Д. Маппсовский. 14-е изд. перераб., испр. и доп.-М.: Новая волна, 2002. - Т. 1. - 540 с.

86. Машковский, М.Д. Лекарственные средства: в 2 т. / М.Д. Машковский. 14-е изд. пёрераб., испр. и доп.-М.: Новая волна, 2002. - Т. 2. - 608 с.4

87. Медведева, Л.И. Эфирномасличные растения Копет-Дага как пряноаромати-ческое сырьё для пищевой промышленности / Л.И. Медведева // Тр. Бот. ин-та

88. АН СССР. Сер. 5: Раст. сырье. М.; Л., 1960. - Вып. 6. - С. 127-216.

89. Ю1.Меницкий, Ю.Л. Конспект видов семейства Lamiaceae (Labiatae) флоры Кавказа / Ю.Л. Менйцкий // Бот. журн. 1992. - Т. 77, вып. 6. - С. 63-78.

90. Ю2.Мишурова, С.С. Изменчивость состава эфирного масла Nepeta transcaucasica Grossh. / С.С. Мишурова // Раст. ресурсы. 1982. - Т. 17, вып. 2. - С. 383-388.

91. ЮЗ.Мишурова, С.С. Изучение эфирных масел различных форм котовника закавказского в Азербайджане / С.С. Мишурова // Актуальные вопросы изучения и использования эфирномасличных растений и эфирных масел. Симферополь, 1980.-С. 240-241.

92. Мишурова, С.С. Морфобиологическая характеристика и компонентный состав эфирного масла Nepeta grandiflora / С.С. Мишурова, Т.А. Малиновская // Раст. ресурсы. 1989. - Т. 25, вып. 3. - С. 398-404.

93. Мишурова, С.С. Морфобиологическая характеристика и состав эфирного масла Nepeta cataría / С.С. Мишурова, Ш.Р. Мамедова // Изв. АН АзССР. Сер. биол. наук. 1989. - № 3. - С. 11-17.

94. Мишурова, С.С. .О монотерпеновой части эфирного масла Nepeta transcaucasica / С.С. Мишурова, А.Ш. Шихиев // Химия природ, соединений. 1977. - № 6. - С. 865-866.

95. Мишурова, С.С. Рост и развитие Nepeta mussinii Spreng., культивируемой на Апшеронском п-ове, и содержание в ней эфирного масла / С.С. Мишурова, Т.А. Малиновская // Раст. ресурсы. 1988. - Т. 24, вып. 4. - С. 584-591.

96. Мишурова, С.С. Содержание урсоловой кислоты в котовнике закавказском / С.С. Мишурова, С.В. Серкеров, Р:М. Аббасов // Раст. ресурсы. 1981. - Т. 17, вып. 2.-С. 237-38.

97. Ю9.Мнацаканян, B.Á. Иридоидные гликозиды / В.А. Мнацаканян. Ереван: Изд-во АН Арм. ССР, 1986. - 188 с.

98. ПО.Монтеверде, Н.А. Ботанический атлас: Описание и изображение растений русской флоры / Н.А. Монтеверде. Петроград: Издание А.Ф. Девриена, 1916. -396 с.А

99. Ш.Насудари, А.А. Материалы к фитохимическому исследованию котовника закавказского / А.А. Насудари, С.С. Мишурова // Изв. АН АзССР. Сер. биол. наук. 1971.-№ 4. - С. 12-14.

100. Никитин, А.А. Анатомический атлас полезных и некоторых ядовитых растений / А.А. Никитин, И.А. Панкова. JL: Наука, 1982. — 768 с.

101. Новицкая, Г.В. Изучение состава жирных, масел некоторых видов сем. губоцветных в связи с их систематическим положением / Г.В. Новицкая, В.И. Криштопа// Раст. ресурсы. 1971. - Т. 7, вып. 1. - С. 32-40.

102. И5.Панекина, Т.В. Масло семян Nepeta cataría / Т.В. Панекина, С.Д. Гусакова,

103. Пектины сем. Lamiaceae. / Е.П. Кухта и др. // Химия природ, соединений. -1982. Вып. 2. - С. 275-279.

104. Первых, JI.H. Флавоноиды Nepeta-velutina / JI.H. Первых, Г.Г. Запесочная, А.Н. Щавлинский // Химия природ, соединений. 1984. — Вып. 4. - С. 521-522.

105. Пищевые растения семейства яснотковых / Ф.А. Байрамукова и др. // Регион.конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (54; 1999; Пятигорск):материалы.Пятигорск, 1999. С. 6.

106. Поиск флавоноидных и иридоидных соединений в семействе губоцветных флоры Кавказа / Д.А. Пакалн и др. // Фармация. 1976. - Т. 25, № 5. - С. 3641.

107. Полезные растения Западной Сибири и перспективы их интродукции. —

108. Новосибирск: Наука, 1972. — 380 с.

109. Полезные растения Хакасии: Ресурсы и интродукция / Р.Я. Пленник и др..

110. Новосибирск: Наука, 1989. 272 с.

111. Полюдек-Фабини, Р. Органический анализ: пер. с нем. / Р. Полюдек-Фабини, Т. Бейрих. Л.: Химия, 1981. - 624 с.

112. Положий, A.B. Лекарственные и перспективные для медицины растения Хакасии / A.B. Положий. Томск, 1973. - 160 с.

113. Поляков, Д.К. Акарицидное и репеллентное действие растений природной флоры СССР и интродуцированных видов на иксодовых клещей / Д.К. Поляков, K.M. Хайдаров, А.И. Шретер // Раст. ресурсы. 1977. - Т. 13, вып. 2. - С. 267-275.

114. Пономарев, В.Д. Экстрагирование лекарственного растительного сырья / В.Д.

115. Пономарев. М., 1976. - 204 с.

116. Попа, Д.П. Качественный состав и количественное содержание терпеноидов в некоторых видах сем. губоцветных / Д.П. Попа, Л.А. Салей, Т.М. Оргиян // Раст. ресурсы. 1976. - Т. 12, вып. 2. - С. 247-252.

117. Попова, Т.П. Иридоиды в растениях семейства губоцветных: Современ. пробл. фармац. науки и. практики / Т.П. Попова, В.И. Литвиненко // Съезд фармацевтов Укр.ССР. (2; 1972; Киев): тез. докл. . Киев, 1972. - С. 692-695.

118. Пояркова, А.И. Новые род и вид губоцветных из трибы Nepeteae Benth. / А.И. Дояркова // Ботанические материалы Л., 1953. - Т. 15. - С. 273-281.

119. Пояркова, А.И. Флора СССР: Сем. губоцветные Labiatae Juss., Род Nepeta L. / А.И. Пояркова. - М.; Л., 1954. - Т. 20. - С. 286-437.

120. Предварительные итоги поисков сапонинсодержащих растений во флоре СССР / А.И. Шретер и др. // Раст. ресурсы. 1966. - Т. 2, вып. 1. - С. 3-3.

121. Предварительный анализ флоры Грузии на содержание гликозидов, флаво-ноидов, сапонинов / М.Д. Алания и др. // Биологически активные вещества флоры Грузии. Тбилиси, 1979. - С. 60-86.

122. Приёмы возделывания новой промышленной эфирномасличной культуры Ne>peta transcaucasica Grossh. / JI.А. Хилик и др. // Раст. ресурсы. 1976. - Т. 12, вып. 2.-С. 281-287.

123. Применение отечественных пряностей в рыбной промышленности / Т.И. Макарова и др. // Тр. Ботан. ин-та АН СССР: Сер. 5. Раст. сырьё. — М.; Л. -1960. Вып. 6. - С. 260-278.

124. Промышленная .технология лекарств / под ред. В.И. Чуешова. Харьков: МТК- КНИКА; НФАЦ, 2002. - Т. 1. - 559 с.

125. Прохорова, O.A. Душистые растения Алтая и их эфирные масла / O.A. Прохорова, И.М. Лебедев. Л., 1932. - 75 с.

126. Пряноароматические растения1 СССР и их использование в пищевой промышленности. М., 1963. - 431 с.

127. Пулатова, Т.П. Изучение кумариновых веществ в некоторых растениях семейства губоцветных, произрастающих в Узбекистане / Т.П. Пулатова // Мед. журн. Узбекистана. 1972. -№ 11. - С. 16-17.

128. Пулатова, Т.П. Предварительное химическое изучение некоторых растений из семейства губоцветных / Т.П. Пулатова // Фармация. 1968. - Вып. 1. — С. 69 -70.

129. Пулатова, Т.П. Фармакогностическое изучение представителей семейства яснотковых с целью получения лекарственных препаратов: автореф. дисд-рафармац. наук: 15.00.02 / Т.П. Пулатова. М., 1991. - 47 с.

130. Пулатова, Т.П. Фармакогностическое исследование котовника кошачьего /

131. Т.П. Пулатова // Вопросы фармакологии и фармации. Ташкент, 1979. - С. 61-62. .

132. Работягов, В.Д. Синтез новых гибридов котовника для селекции / Особенности акклиматизации многолетних интродуцентов, накапливающих биологически активные вещества / В.Д. Работягов, JI.A. Хлыпенко, Ю.В. Аксенов — Краснодар, 1995.-С. 192-196.

133. Растительные ресурсы России и сопредельных государств: ч. 1. — Семейства Lycopodiaceae Ephedraceae, ч. И. Доп. к 1-7-му т. - СПб.: Мир и семья — 95, 1996.-571 с.

134. Растительные ресурсы СССР: Цветковые растения, их химический состав, использование; сем. Hippuridaceae Lobeliaceae (Отв. ред. П.Д. Соколов). — СПб.: Наука, 1991. - 200 с.

135. Рахимова, И.В. Изучение антимикробных свойств некоторых растений сем. губоцветных / И.В. Рахимова, Т.П. Пулатова // Фитонциды: Результаты, перспективы и задачи исследований. Киев, 1972. - С. 94—96.

136. Рахманов, K.P. О видовом составе медоносно-перганосных растений Арслан-бобского массива Южной Киргизии / K.P. Рахманов, А .Я. Бутков, Г.Х. Хамидов//Раст.ресурсы.- 1971.-Т. 7,вып. 1.-С. 106-109.

137. Роллов, А.Х. Дикорастущие растения Кавказа, их распространение, свойства и применение / А.Х. Роллов. Тифлис, 1908. - 599 с.

138. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под ред. В.П. Фисенко. М., 2000. - С. 18-22.

139. Сагатов, С.С. Душица мелкоцветковая (Origanum tuthanthem Gontsch.) перспективное эфиромасличное растение / С.С. Сагатов, К.Х. Хаджиматов, Н. Рамазанова // Опыт культуры новых сырьевых растений. - Ташкент, 1973. -Вып. 1.-С. 182-185.

140. Самылина, И.А. Фармакогнозия. Атлас: учеб. пособие: в 2 т. М.: ГЭОТАР -Медиа, 2007. - Т. 1. - 192 е.; Т. 2. - 384 с.л

141. Сернов, Л.Н. Элементы экспериментальной фармакологии / JI.H. Сернов, В.В. Гацура. М., 2000. - 351 с.

142. Совершенствование анализа настоев и отваров, содержащих флавоноиды / 0.Г. Аносова и др. // Фармация. 1991. - Т. 40, № 1. - С. 30- 4.

143. Современная фитотерапия / под ред. В. Петкова. София: Медицина и физкультура, 1988. - 504 с.

144. Содержание биологически активных соединений в полезных растениях флоры

145. Туркмении / М.О. Каррыев и др. // Изв. АН ТССР: Сер. биол. наук. 1981.4. С. 54-56.

146. Состав триацилЛшцеролов семян некоторых представителей сем. Labiatae / T.B. Панекина и др. // Химия природ, соединений. 1979. - № 5. - С. 618625.

147. Список видов сем. Lamiaceae флоры Карачаево-Черкесской республики (КЧР) / Ф.А. Байрамукова и др. // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (55; 2000; Пятигорск): материалы. Пятигорск, 2000.1. С. 12-14.

148. Супрунов, Н.И. Эфирномасличные растения Дальнего Востока / Н.И. Супрунов, П.П. Горовой, Ю.А. Панков. -Новосибирск, 1972. 188 с.

149. Тахтаджян, A.JL*Система и филогения цветковых растений / A.JI. Тахтаджян.-М.; Л.: Наука, 1966. 612 с.

150. Тахтаджян, А.Л. Система магнолиофитов / А.Л. Тахтаджян. Л.: Наука, 1987.-439 с.

151. Ткабладзе, Ц.П. Биологическая оценка дубильных веществ и их содержание в некоторых танидоносных растениях Грузии / Ц.П. Ткабладзе. Тбилиси, 1961.-89 с.

152. Тропникова, ИВ. Компонентный состав эфирного масла Nepeta cataría L. var. citriodora Beck, и особенности его определения / И.В. Тропникова, И.Г. Зенкевич, А.Л. Буданцев // Раст. ресурсы. 1999. - Т. 35, вып. 2. - С. 64-69.

153. Тропникова, И.В. Содержание и состав эфирных масел видов» рода Nepeta L. / И.В. Тропникова, А.Л. Буданцев, И.Г. Зенкевич // Раст. ресурсы. 1998. - Т.34, вып. 4.-С. 84-103.

154. Тхэсон, Чхве. Лекарственные растения: пер. с корейск. / Чхве Тхэсон. М.:1. Медицина, 1987. 438 с.

155. Уткин, Л.А. Народные лекарственные растения Алтая и приалтайских степей /

156. Л.А. Уткин // Хим. фармац. пром-ть. 1932. - № 10. - С. 377-383.

157. Фармакогностическое изучение некоторых представителей семейства яснот-ковых / Э.В. Гелла и др. // Успехи в изучении природных и синтетических лекарственных средств. — Томск, 1982.— С. 17-18.

158. Фармакогностическое изучение травы котовника, произрастающего в Казахстане / А.Г. Мухаметгалиев и др. // Актуальные проблемы фармации. — Алма-Ата, 1991.-С. 80-82.

159. Фармацевтическая технология: учеб. пособие / под ред. В.И. Погорелова. —

160. Ростов-н/Д: Феникс, 2002. 544 с.

161. Федорович, А.Н. Перспективы исследования котовника закавказского для получения новых продуктов / А.Н. Федорович, А.А. Серкова // Актуальные вопросы изучения и использования эфирномасличных растений и эфирных масел. Симферополь, 1980. - С. 209-210.

162. Фотохимическое исследование растений рода шизонепета и лапчатка / В.А. Пешкова и др. //Всесоюз. съезд фармацевтов (3; 1980; Кишинев): тез. докл. — Кишинёв, 1980.-С. 192.

163. Фурст, Г.Г. Методы анатомо-гистохимического исследования растительных Хканей / Г.Г. Фурст. М.: Наука, 1986. - 392 с.

164. Халматов, Х.Х. Дикорастущие лекарственные растения района Пашта-Аты / Х.Х. Халматов // Тр. Ташк. фармац. ин-та. 1960. - Т. 2. - С. 15-22.

165. Химический анализ лекарственных растений: учеб. пособие для фарм. вузов / ЛадыгинаЕ.Я. и др.. -М.: Высш. шк., 1983. 176 с.

166. Хачиррва, Ф.С. Анатомические особенности строения вегетативных органов котовника крупноцветкового / Ф.С. Хачирова // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (56; 2001; Пятигорск): материалы.- Пятигорск, 2001. С. 39-40.

167. Хачирова, Ф.С. Котовник крупноцветковый прогноз на использование / Ф.С. Хачирова, A.C. Койчуева // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (53; 1998; Пятигорск): материалы. — Пятигорск, 1998. - С. 30-31.

168. Хачирова, Ф.С. Макро- и микроэлементы сырья котовника крупноцветкового / Ф.С. Хачирова, А.Н. Мануков // Регион, конф. по фармации, фармакологии и подготовке кадров (57; 2002; Пятигорск): материалы.— Пятигорск, 2002. С. 29-31.

169. Хачирова, Ф.С. Фармакогностическое исследование котовника крупноцветкового /Ф.С. Хачирова, В.А. Челомбитько // Химия в технологии и медицине: материалы Bcepóc. науч. практ. конф. - Махачкала, 2002. — С. 154 - 156.

170. Хроматография на бумаге / под ред. И.Н. Хайца, К. Мацека. М.: Изд-во иностр. лит., 1962. - С. 400—457.

171. Черепанов, С.К. Сосудистые растения; России и сопредельных государств (в пределах бывшего СССР) /С.К. Черепанов. СПб.: Мир и семья^ 1995. — 992 с;

172. Шарапов, Н.И. Жирномасличные растения СССР / Н.И. Шарапов // Растительное сырьё СССР: в 2 т. — Mí; Л., 1950. Т. 1. - С. 251-284;

173. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: учеб. пособие / под. ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. — СПб.: Спец. лит., 1999. 405 с.

174. Энциклопедия травяных чаев / А.Ю. Нестеровская и др.. М.: КРОН-ПРЕСС, 1997. - 592 с.

175. Эсау, К. Анатомия семенных растений / К. Эсау. М.: Мир, 1980. - 558 с.

176. Эфирномасличные растения Азербайджана / H.JI. Гурвич и др. // Тр. 4 Меж-дунар. конгр. по эфирным маслам. Тбилиси, 1968. - Т. II. - С. 40-44.I

177. Юнкявичене, Г.К. Биологические особенности котовника (Nepeta L.) в ботаническом саду АН Литовской ССР / Г.К. Юнкявичене, Г.А. Пужене // Актуальные вопросы изучения и использования эфиромасличных растений и эфирных масел. Симферополь, 1980. — С. 132.

178. Anatomske osobine organa i etarsko ulje vrste Nepeta nuda L. / S. Pavlovie et al. // Архив за фармащуу. 1985. - Vol. 35, № 5. - P. 227-232.

179. Arnason, T. Use of plants for food and medicine by native peoples of eastern Canada / T. Arnason, R.I. Hebda, T. Jons // Can. J. Bot. 1981. - Vol. 59, № 11. - p.2189-2325.t

180. Boissier, E. Flora Orientalis / E. Boissier. Genevae; Basilieae, 1879. - Vol. 4. — 1276 p.

181. Bourrel, C. Catnip (Nepeta cataria L.) essential oils: analysis of chemical constituents, bacteriostatic and fungistatic properties / C. Bourrel, F. Perineau // J. Ess. Oil Res.-1993.-Vol. 5, №5.-P. 159-167.

182. Briquet, J. Labiatae // J Briquet, A. Engler, K. Prantl. // Nat. Pflanzenfam. Leipzig.- 1895 1897. - Bd 4, № 3a. - S. 183-375.

183. Claus, E.P. Pharmacognosy / E.P. Claus, E. Varro, Jr. Tyler Philadelphia: Lea & Febiger, 1965. - 5*72 p.

184. Corpa, R.N. Glossary of Indian medicinal plants / R.N. Corpa, S.L. Nayar, I.C. Chorpa. New Delhi, 1956. - 329 p.

185. Exact nature of matatabilactone and the ternenes of Nepeta cataria / T. Sakan et al. // Tetrahedron Lett. 1965. - № 46. - P. 4097-^102.

186. Gebner, O. Die Gift und Arzneipflanzen von Mitteleuropa / O. Gebner. -Heidelberg, 1953. - 804 s.

187. Gurgen, A. Investigation on important Turkish essential oil / A. Gurgen // Ankara Yuksek Ziraat Enstitusu Dergisu. 1948. - Vol. 9. - P. 332-360.

188. Hedge, I.C. Nepeta L. / I.C. Hedge, G.M. Lamond, P.H. Davis // Flora of Turkey and the east aegean islands. 1982. - Vol. 7. - P. 264-289.

189. Hillson, C.J. Comparative studies of floral morphology of the Labiatae / C.J. Hillson >

190. Amer. J. Bot. 1959. - Vol. 46. - P. 451-^59.

191. Jager Zum, I. Zur Fragen der systematische Stellung der Hydrostachyaceae auf Grund ihrer Embryologie, Bluten und Infloreszeuzmorphologie / I. Jager - Zum // Öesterr. Bot. Z. - 1965. - Bd 112. - S. 621-639.

192. Jensen, S.R. Iridoid compounds, their occurence and systematic importance in the angiosperms / S.R. Jensen, B.J. Nielsen, R. Dahlgren // Bot. hotis. 1975. - Vol. 128.- P. 148-173.

193. Klan, Z. Drogy vsech lekopisu v prehledu / Z. Klan. Praha, 1948. - 78 s.

194. Kudrzycka-Bietosralska, F.W. Analiza porownawcza niektorych gatunkow Nepeta /

195. F.W. Kudrzycka-Bietosralska, D. Szaniawska-Dekundy // Ann. UMCS. D. 1976. -Vol. 31, №22.-P. 187-189.

196. Kudrzycka-Bietosralska, F.W. Wetepne badania' steroli i trojterpeno w zielu Nepeta nuda / F.W. Kudrzycka-Bietosralska, D. Szaniawska-Dekundy, W. Pikula // Ann. UMCS. D. 1976. - Vol. 31, № 22. - P. 175-180.

197. Moldenhawer, K. New oil plants / K. Moldenhawer // Przem. spoz. 1953. - Vol. 7. -P. 58-62.

198. Nepetanudoside, an iridoid glucoside with an unusual stereostructure from Nepeta nuda ssp. Albiflova / Y. Takeda et al. // J. Natur. Prod. 1995. - Vol. 58, № 8. -P. 1217-1221.

199. Regnier, F.E. Studies on the composition of the essential oils of three Nepeta species / F.E. Regnier, G.R. Waller, E.J. Eisenbraun // Phytochemistry. 1967. - Vol. 6, №9.-P. 1281-1289.

200. Reichinger, K.N. Nepeta L. / K.N. Reichinger // Flora Iranica. Graz., 1982. - № 150.-P. 108-216.4

201. Rugina, Rodica. Histo-anatomical research on some medicinal plants. V. Labiatae / Rodica Rugina, C. Torna // An. sti. Univ. Iasi. Sec. 2 a. 1995. - Vol. 41. - P. 1722.

202. Seshadri, T.R 7,4-o-dimethylscutellaren a newflavone and other minor compounds of Nepeta hindustana / T.R Seshadri, P. Shamma // Ind. J. Chem. 1973. -Vol. 11,4.-P. 338.

203. Structure and stereochemistry 4aP, 7a, 7a(3-nepetalactones from Nepeta mussini and its relationship to the 4aa, 7a, 7aa and 4aa, 7a, 7aP-nepetalactone from Nepeta cataria / E.J. Eisenbraun et al. // J. Org. Chem. 1980. - Vol 45, № 19. - P. 3811-3814.

204. Tagawa, M. 5 Epideoxyloganic acid from Nepeta cataria / M. Tagawa, F. Murai //

205. Plantamedica. 1983. - Vol. 47, № 2. -P. 109-111.222. tagawa, M. A new iridoid glucoside, nepetaglucosylester from Nepeta cataria / M.

206. Tagawa, F. Murai // Planta medica. 1980. - Vol. 39, № 2. - P. 144-147.

207. The essential oils of five Nepeta species / H.L. De Pooter et al. // Flavour Fragrance J. 1988. - Vol. 3, № 4. - P. 155-159.

208. Wu, C.Y. Nepeta L. / C.Y. Wu, Y.C. Huang // Flora Reipublicae Popularis Sinicae.-Peking, 1977. T. 65, № 2. - P. 270-314.